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Pipetas
Código (s) ECRI Denominación (es) ECRI
15-166 Pipetas
PIPETAS
1
La calibración debe ser realizada exclusivamente por personal capacitado, siguiendo estándares internacionales como
el BS ES ISO 8655-6:2002. Los instrumentos de trabajo deben estar debidamente calibrados por instituciones nacionales
o internacionales, responsables de verificar el cumplimiento de los estándares internacionales de medición.
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Las pipetas a pistón en general son de dos ti- Cada uno de los tipos mencionados –pipetas
pos: las de volumen fijo que dispensan un vo- de volumen fijo y pipetas de volumen varia-
lumen predeterminado de líquido, el cual es ble– puede ser subdividido en dos subtipos: A
conocido como volumen nominal [Vn], y las de y B. Las pipetas del subtipo A se denominan
volumen variable, las cuales permiten ajustar pipetas de desplazamiento por aire, debido a
el volumen a ser dispensado dentro de un que existe un volumen de aire entre la cabe-
rango determinado en las especificaciones de za del pistón y el líquido en el cilindro. (Ver
la pipeta. La variación en el volumen se logra pipeta Nº 1). A las pipetas del subtipo B se les
modificando la longitud de la carrera del pis- denomina pipetas de desplazamiento positi-
tón dentro del émbolo. En estas, el volumen vo o de desplazamiento directo, debido a
nominal es el límite superior del rango de vo- que el pistón se encuentra en contacto direc-
lumen de la pipeta, de acuerdo con las especi- to con el líquido. (Ver pipeta Nº 2). El esque-
ficaciones dadas por el fabricante. ma que se incluye a continuación permite di-
ferenciar los tipos de pipetas mencionados.
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Para utilizar una pipeta se requiere que el la- 1. Verificar que la pipeta se encuentra en po-
boratorio brinde unas condiciones adecuadas sición vertical, cuando se requiera aspirar
de comodidad, limpieza e iluminación. Las un líquido. La posición vertical garantiza
condiciones generales son las siguientes: que no se presente incertidumbre por va-
riaciones mínimas en la cabeza del líquido.
1. Verificar que la temperatura del ambiente
donde se utiliza sea estable, con un rango 2. Confirmar la recomendación que efectúa
de variación de ± 0,5 °C, que se encuentre el fabricante de la pipeta con relación a la
entre los 15 °C y los 30 °C, siendo óptima profundidad mínima de inmersión de la
una temperatura de 20 °C. punta de la pipeta, cuando se requiere as-
pirar líquidos. Las profundidades varían de
2. Confirmar que la humedad relativa del acuerdo con el tipo y capacidad de la pipe-
ambiente sea superior al 50 %. Las pipetas ta. Una guía general se muestra en la si-
y muestras o materiales con los que se tra- guiente tabla2:
baja deben estar estabilizados a las condi-
ciones del laboratorio, por lo que se reco-
mienda que se encuentren en el mismo Tabla de profundidad de inmersión de
con dos o tres horas de anticipación al mo- la punta de la pipeta según volumen
mento en que se realiza el trabajo.
Volumen de la pipeta Profundidad de la inmersión
3. Evitar trabajar con las pipetas bajo la in- (µl) (mm)
fluencia de la luz solar directa.
1-100 2-3
4. Utilizar los elementos de protección ade- 100-1 000 2-4
cuados, si se trabaja con materiales tóxicos 1 000-5 000 2-5
o que conlleven riesgo biológico.
2
Blues, J., Bayliss, D., Buckley, M., The calibration and use of piston pipette, UK, National Physical Laboratory, Teddington,
Middlesex, 2004, pág. 6. (www.npl.co.uk)
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4. Remover, después de llenar la pipeta, cual- del recipiente que varía entre los 30° y los
quier gota que se adhiera a la punta de la 45°, y estar ubicada entre 8 y 10 mm sobre
pipeta. El procedimiento que se sigue con- la superficie del líquido contenido.
siste en tocar, con la punta de la pipeta,
suavemente la pared del recipiente que
contiene el líquido aspirado. Podría reque- Método convencional de uso
rirse un material absorbente, teniendo cui-
dado de no tocar el orificio de la punta de Se describen a continuación las actividades ge-
la pipeta y tomando las precauciones del nerales requeridas para utilizar una pipeta me-
caso, si el material presenta algún tipo de cánica por desplazamiento de aire. El operador
contaminación. debe tener en cuenta las recomendaciones es-
pecíficas del fabricante, observación que tam-
5. Dispensar el líquido contenido en la pipe- bién debe acatarse cuando se utilicen pipetas
ta tocando con la punta de esta la pared controladas electrónicamente. El esquema que
del recipiente receptor. La punta de la pi- se incluye muestra la descripción de los proce-
peta debe formar un ángulo con la pared sos que se explican a continuación.
1. Colocar una punta nueva, ajustada a las recomendación que suministre el fabrican-
especificaciones de la pipeta, en el porta- te. Confirmar que la pipeta se encuentra
puntas de la pipeta. Evitar contaminar la en posición vertical. Este proceso corres-
punta con otras sustancias. Verificar que la ponde al mostrado en la posición 1B (pri-
misma queda bien ajustada. mera a la izquierda).
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el líquido. Verificar que el ángulo formado realizar rutinas específicas de los diversos mo-
entre la punta de la pipeta y la pared del ele- delos, de acuerdo con las instrucciones de los
mento receptor esté entre los 30° y los 45°. Si manuales suministrados por los fabricantes.
el recipiente receptor ya tiene algún nivel de
líquido, evitar que la punta de la pipeta que-
de sumergida en el mismo (posición 3A). Inspección
Frecuencia: Diaria
6. Dispensar el contenido de la pipeta presio-
nando el émbolo de forma suave pero firme, Las pipetas son dispositivos que requieren ins-
hasta el primer tope (posición 4B). Mantener pecciones frecuentes para detectar desgastes
en todo momento el contacto entre la punta anormales o daños y/o verificar que las mismas
de la pipeta y la pared del recipiente recep- se encuentran en buenas condiciones de funcio-
tor. Frotar la punta de la pipeta contra la pa- namiento. La inspección debe cubrir los siguien-
red de 8 a 10 mm, para asegurar que no que- tes aspectos:
de ninguna gota de líquido pegado a la pun-
ta de la pipeta. 1. Verificar la integridad y ajuste de los meca-
nismos. Los mismos deben poder moverse
7. Presionar el émbolo suavemente hasta que de forma suave. El pistón debe desplazar-
alcance el segundo tope en la carrera del pis- se suavemente.
tón (posición 5C). Esto expulsa cualquier frac-
ción de líquido que hubiera podido quedar 2. Confirmar que el portapuntas no presente
en la punta de la pipeta, al forzar el aire de distorsiones o marcas de desgaste, dado que
la cámara a través del orificio de la punta de es esencial para la exactitud de las medidas.
la pipeta. Mantener el émbolo presionado en Verificar el ajuste de las puntas.
el segundo tope, mientras se retira la pipeta
del recipiente receptor. Una vez retirada la 3. Colocar una punta y llenarla con agua desti-
pipeta, liberar suavemente el émbolo hasta lada. La pipeta no debe presentar ningún ti-
la posición límite superior. po de fuga.
3
Las pipetas que se pueden esterilizar con vapor disponen de una marca que permite identificarlas; el fabricante proporcio-
na los requerimientos de desensamble.
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sus componentes internos3. El desensamble Si los componentes interiores fueron conta-
consiste en liberar o desenroscar el cuerpo minados accidentalmente, todas las superfi-
central de la pipeta, siguiendo los procedi- cies deberán ser limpiadas con un detergen-
mientos indicados por los fabricantes. Para de- te y luego con agua destilada. Si los anillos o
sensamblar o ensamblar algunas pipetas, se sellos en O requieren ser cambiados, deberán
requiere utilizar un conjunto de herramientas ser sustituidos por repuestos de las mismas
–llaves– que normalmente proporcionan los características de los originales. Debe tenerse
fabricantes, junto con la pipeta en el momen- en cuenta que este tipo de sellos varía depen-
to de la venta. La pipeta solo debe ensamblar- diendo de la marca, tipo y modelo.
se de nuevo, cuando el ciclo de esterilización
haya terminado y la temperatura se haya esta- 3. Lubricar el émbolo y el pistón con grasa sili-
bilizado con la del ambiente. En ese momento conada especial4 para pipetas. La grasa men-
se verifica que los componentes se encuentren cionada ha sido especialmente desarrollada
secos y se procede al ensamble. Algunos fabri- para ser utilizada en las pipetas. Utilizar siem-
cantes recomiendan esterilizar la pipeta, utili- pre la recomendada por el fabricante. Retirar
zando una solución de isopropanol al 60 % y, cualquier exceso de lubricante con un papel
a continuación, lavar los componentes con absorbente.
agua destilada, secar y ensamblar.
4. Ensamblar siguiendo un proceso inverso al
3. Si una pipeta ha sido utilizada con sustancias utilizado para desensamblar.
peligrosas para la salud, es responsabilidad
del usuario asegurar que está completamen-
te descontaminada, antes de que la misma
sea utilizada en otros procedimientos o sea
retirada del laboratorio. Es conveniente dili-
genciar un reporte que indique su marca,
modelo, número de serie, sustancias con las
que trabajó y sustancias o procedimientos
con las que fue tratada o limpiada.
Mantenimiento
Frecuencia: Semestral
4
La grasa siliconada existe en diversas especificaciones. Por lo tanto, debe utilizarse la recomendada por el fabricante de las pipetas.
5
Despiece basado en el Maintenance and Service Manual for Genex Mechanical Pipettes, Single Channel, Variable models, Rev. 2 /
121199.
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Los equipos a utilizar en la calibración de la pipeta deben estar certificados por un laboratorio de calibración acreditado.
7
El procedimiento presentado es una guía general. Para detalles completos, consultar estándares como el BS ES ISO 8655-
6:2002.
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7. Llenar la pipeta con agua del recipiente de 2. Convertir cada valor de masa a volumen a 20 °C,
almacenamiento y dispensarla en el reci- dividiendo la masa para la densidad del agua
piente de pesado. Expulsar la totalidad del ajustada a la mencionada temperatura.
agua. (Tal y como se ha descrito en el nume-
ral 7 del Método convencional de uso). El Mi
Vi =
trabajo se realiza de la misma forma que se D
utiliza la pipeta de forma cotidiana.
3. Calcular el volumen promedio de los volúme-
8. Registrar el nuevo peso detectado por la balanza. nes calculados en el numeral 2. (Suma de los
volúmenes, dividido para el número de
9. Repetir los pasos 7 y 8 por nueve (9) veces muestras). Aplicar los ajustes por fenómenos
adicionales, registrando al final de cada ciclo tales como el empuje del aire sobre la masa
el peso que registra la balanza. –flotación–. Para esto se multiplica cada ma-
sa por un factor de corrección [Z].
10. Registrar la temperatura del líquido en el re-
cipiente de pesado, al final del décimo ciclo X = ∑ Vi n x Z
y medir el tiempo transcurrido desde el inicio
de las mediciones.
4. Calcular la desviación estándar de la muestra.
11. Evaluar si la evaporación ha sido significa- 1 n
8
Los valores de Z dependen de la temperatura y la presión para el agua destilada. Deben consultarse en publicacio-
nes especializadas como el Estándar BS EN ISO 8655-6:2002, Anexo A.
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DEFINICIONES BÁSICAS Por otra parte, la masa inercial se entiende
como la resistencia a cambiar el estado de
Coeficiente de variación [CV]. Parámetro movimiento, cuando se le aplica una fuerza a
estadístico que representa la fracción de la un objeto. (Un objeto, con una masa inercial
desviación típica con respecto a la media. pequeña, cambia su estado de movimiento
con mayor facilidad que uno que tenga una
Densidad. Relación que existe entre la masa de mayor masa inercial, cuando se les aplica una
un cuerpo y el volumen que el mismo ocupa. La misma fuerza).
densidad promedio de un objeto es igual a su
masa total dividida por su volumen total. Se Microgramo [µg]. Unidad de peso que equi-
identifica mediante la letra griega Ro [ρ]. En el vale a 1 x 10-6 gramos (g).
Sistema Internacional de Unidades, la densidad
se mide en kilogramos por metro cúbico [kg/m3]. Miligramo [mg]. Unidad de peso que equi-
vale a 1 x 10-3 gramos (g).
Desviación estándar [S]. Parámetro esta-
dístico que se utiliza para determinar el error Microlitro [µl]. Unidad de capacidad que
global de una muestra. equivale a 1 x 10-6 litros (l). Un (1) µl de agua
pesa exactamente un (1) mg y tiene un volu-
Error (de una medida). Diferencia que se men de 1 mm3.
presenta entre el valor medido y el valor
correcto. Mililitro [ml]. Unidad de capacidad que
equivale a 1 x 10-3 litros (l). Un (1) ml de agua
Exactitud. Concepto relacionado con los pesa exactamente 1 g y tiene un volumen de
errores que presentan las medidas. Se dice 1 cm3.
que un instrumento es exacto cuando los va-
lores de un grupo de mediciones se acercan Precisión. Concepto relacionado con los
bastante al valor real. errores que presentan las medidas. Se dice
que un instrumento o método es preciso
Masa. Propiedad física de los cuerpos relacio- cuando en ensayos independientes, al repetir
nada con la cantidad de materia que estos una medida, se obtienen resultados similares.
contienen. En física hay dos cantidades a las
que se denomina masa. La masa gravitacional Rango. Diferencia entre el máximo y el míni-
que es una medida de la forma en que un mo valor que lee o mide un instrumento.
cuerpo interactúa con el campo gravitacio-
nal. (Si la masa del cuerpo es pequeña, el Volumen. Cantidad de espacio físico que
cuerpo experimenta una fuerza menor que la ocupa la masa. Se calcula dividiendo la masa
que experimentara si su masa fuera mayor). por la densidad promedio.
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Bibliografía
Blues, J., Bayliss, D., Buckley, M., The calibration and use of piston pipettes, National Physi-
cal Laboratory, Teddington, Middlesex, UK, 2004. (www.npl.co.uk)
Digital pipette, Guide to Justor 100 series pipettes, Nichiryo Co., LTD.
Maintenance and Service Manual for Genex Mechanical Pipettes, Rev. 2/121199.
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