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Introduction
CHAP V : Les plantes transgéniques
1973 - Identification du plasmide Ti dans la bactérie Agrobacterium tumefaciens. Ce
plasmide permet d'accueillir le gène porteur d'un caractère recherché, qu'il est en
mesure d'introduire dans le génome d'une plante
1983 - Première plante transgénique (tabac)
Premier transfert de gène opérationnel réalisé chez un végétal, obtenu simultanément
par les équipes de Monsanto et Agrigenetics (USA).
L'équipe de Jeff Schell et Marc Van Montagu à Gand obtient des tabacs transgéniques
résistant à un antibiotique
1985 - Première plante transgénique résistante à un insecte
1987 - Première plante transgénique tolérante à un herbicide total
1988 - Première plante "pharmacienne"
Première céréale transgénique (maïs)
1994 - Premier légume transgénique commercialisé (aux États-Unis).
l'Administration des produits pharmaceutiques et alimentaires (FDA) autorise la mise sur
le marché d'une tomate transgénique. Dénommée FlavSavr, cette tomate se conserve
plus longtemps et a plus de goût que les tomates ordinaires.
1997 - Premier tabac producteur d'hémoglobine
France : première autorisation de la culture transgénique : maïs résistant à la pyrale.
1999 : 40 millions d’hectares de plantes transgéniques dans le monde.
2002 : 58,7 millions d’ha de plantes transgéniques cultivées dans le monde.
CHAP V : Les plantes transgéniques
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
1) Description de la bactérie
CHAP V : Les plantes transgéniques
Agrobacterium tumesfaciens
CHAP V : Les plantes transgéniques
Galle du collet ou
crown gall
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CHAP V : Les plantes transgéniques
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
1) Description de la bactérie
2) Le matériel génétique de la bactérie
a) La découverte du support génétique
CHAP V : Les plantes transgéniques
Agrobacterium
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
1) Description de la bactérie
2) Le matériel génétique de la bactérie
a) La découverte du support génétique
b) Relation entre le plasmide et la galle du collet
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
1) Description de la bactérie
2) Le matériel génétique de la bactérie
a) La découverte du support génétique
b) Relation entre le plasmide et la galle du collet
c) Structure du plasmide Ti
CHAP V : Les plantes transgéniques
Région T-DNA
Région de
virulence (Vir)
Plasmide Ti en
microscopie
électronique
Plasmide Ti
Région spécifique à la
bactérie : origine de
réplication…
CHAP V : Les plantes transgéniques
Région T-DNA
Région de
virulence (Vir)
T-DNA
Cytokine
Opine
Auxine
Bordure
Bordure
droite
gauche
Le plasmide Ti
Opc :
catabolisme
des opines
Région Vir
Origine de
réplication
Plasmide Ti
CHAP V : Les plantes transgéniques
Région T DNA
INDOLEACETAMIDE
HYDROGENASE
La région du T-DNA
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
1) Description de la bactérie
2) Le matériel génétique de la bactérie
3) L’infection de la plante
a) Stratégie de la bactérie
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
1) Description de la bactérie
2) Le matériel génétique de la bactérie
3) L’infection de la plante
a) Stratégie de la bactérie
b) Les étapes de l’infection
CHAP V : Les plantes transgéniques
Le brin de T-DNA est pris en charge par des protéines VirE. Une
protéine VirD se fixe à l’extrémité de l’ADN
CHAP V : Les plantes transgéniques
Région T-DNA
ADN génomique
Région de virulence
de la plante
(Vir)
Plasmide Ti
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
1) Les contraintes lors de la transformation de la
plante
CHAP V : Les plantes transgéniques
Suspension de cellules
végétales Call
Formation de call (amas
de cellules
indifférenciées)
Développement d’une
plante
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
1) Les contraintes lors de la transformation de la
plante
2) Les modifications du plasmide Ti
CHAP V : Les plantes transgéniques
CHAP V : Les plantes transgéniques
Des gènes "marqueurs" sont associés au transgène, afin de permettre la mise en évidence des
tissus végétaux dans lesquels ce transgène a été introduit. Ces gènes marqueurs peuvent
conférer à la plante la résistance à un facteur de sélection (par exemple la résistance aux
antibiotiques), ou lui apporter une caractéristique facilement identifiable dans une expérience de
laboratoire. L'utilisation de gènes marqueurs permet d'identifier le tissu dans lequel le transgène
a été introduit et qui a permis de régénérer des plantes entières, permettant ainsi de réduire les
coûts de production et la quantité de travail nécessaires
Les zones bleues démontrent que le gène 'marqueur' introduit (transgène), s'exprime dans des
embryons de riz
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
1) Les contraintes lors de la transformation de la
plante
2) Les modifications du plasmide Ti
3) La transformation du végétal
CHAP V : Les plantes transgéniques
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
1) Les contraintes lors de la transformation de la
plante
2) Les modifications du plasmide Ti
3) La transformation du végétal
4) Les nouvelles stratégies
a) La technique par recombinaison
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
1) Les contraintes lors de la transformation de la
plante
2) Les modifications du plasmide Ti
3) La transformation du végétal
4) Les nouvelles stratégies
a) La technique par recombinaison
b) Technique du vecteur binaire
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Système binaire
CHAP V : Les plantes transgéniques
SYSTEME BINAIRE
Région T-DNA
Responsable du transfert du T-
DNA localisé sur le petit Origine de Origine de Gène de
plasmide réplication réplication chez résistance à
chez E. coli Agrobacterium un
antibiotique
Multiplication
Marqueur de du plasmide Multiplication du Sélection des
transformation Cassette de chez Coli plasmide chez bactéries
de plante clonage Agrobacterium transformées
par le plasmide
Sélection de la
plante Permet d’insérer le
transformée gène dans la région T-
par le T-DNA DNA
Système binaire
CHAP V : Les plantes transgéniques
Bordure droite
Bordure gauche
ADN-T
Système binaire
CHAP V : Les plantes transgéniques
RégionVir
Utilisation
de la
nopaline
Plasmide Ti
désarmé
Origine de
réplication
Système binaire
CHAP V : Les plantes transgéniques
Système binaire
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
III. Les autres techniques de transformation de plantes
1) Les vecteurs viraux
CHAP V : Les plantes transgéniques
Les caulimovirus sont des virus phytopathogènes transmis de plante à plante par les
aphides (pucerons) selon un mode non circulant, en utilisant la stratégie "facteur d'aide à
la transmission", FAT. Les virions ne sont pas ingérés par l'insecte, mais restent fixés à la
cuticule qui recouvre les pièces buccales et l'appareil digestif antérieur. La liaison virus-
vecteur est assurée par une ou plusieurs protéines virales n'appartenant pas à la capside
du virion.
Le virus de la mosaïque du chou-fleur (CaMV), est le plus connu des caulimovirus
Les geminivirus
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
III. Les autres techniques de transformation de plantes
1) Les vecteurs viraux
2) La voie des protoplastes
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
III. Les autres techniques de transformation de plantes
1) Les vecteurs viraux
2) La voie des protoplastes
3) La biolistique
CHAP V : Les plantes transgéniques
Transformation des
cellules végétales des
explants
Plantes transgéniques
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
III. Les autres techniques de transformation de plantes
IV. Importance de la transgénèse végétale
1) Les domaines d’applications de la transgénèse
végétale
a) Dans le domaine agronomique
CHAP V : Les plantes transgéniques
La pyrale
La pyrale est actuellement l'insecte nuisible au maïs le plus
fréquemment rencontré.
A l'état adulte, la pyrale du maïs est un papillon de 25 mm d'envergure
qui dépose généralement sa ponte à la face intérieure des feuilles
encore rassemblées en cornet.
La durée d'incubation des oeufs varie de 5 à 15 jours suivant la
température ambiante.
Après leur éclosion, les chenilles "vagabondent" sur la plante en
cherchant à entrer à l'intérieur du cornet. Elles s'alimentent alors du
limbe des jeunes feuilles encore repliées, ce qui provoque des
perforations régulières symétriques par rapport à la nervure médiane.
La présence des larves de pyrale provoque l'échaudage des épis du
fait de l'affaiblissement de la plante et des difficultés de circulation de
la sève : il en résulte des difficultés de récolte, des pertes de temps et
des chutes d'épis. Par ailleurs, les orifices de pénétration favorisent le
développement d'agents pathogènes responsables de pourritures.
La pyrale en France est responsable de pertes de rendement de l'ordre
de 3 à 7% /ha, même avec un traitement chimique.
CHAP V : Les plantes transgéniques
Les toxines produites par Bacillus thuringiensis sont appelées protéines Cry ou d-endotoxine. A
retenir :
• Chaque toxine possède un spectre d’insecte cibles spécifiques
• Une bactérie peut produire une à cinq toxines différentes
• Des souches différentes peuvent produire les mêmes types de toxine
• Les souches de même sérotype flagellaire peuvent produire des toxines différentes
• Les gènes codant pour ces toxines sont localisés le plus souvent sur des plasmides de grande taille.
Ces plasmides sont conjugatifs. Le gène codant pour la synthèse de la toxine peut donc être transféré
dans d’autres souche de Bt. De plus, on a constaté que certains de ces gènes étaient intégrés dans le
génome de la bactérie par suite d’évènements de transposition.
• Ces endotoxines sont des protoxines : elles doivent être activées dans le tube digestif de l’insecte
par des protéases.
CHAP V : Les plantes transgéniques
δ Endotoxine
Pro-toxine
Récepteur Perforation
Spore
Toxine activée
Le maïs 176 (société Novartis) résistant à la pyrale (insecte ravageur). C'est celui-ci qui a été cultivé en
France sur 1 965 hectares en 1998
Le maïs MON 810 (société Monsanto) résistant à la pyrale et à la sésamie (2 insectes ravageurs)
Augmentation du rendement
Dans la mesure où un important accroissement des surfaces cultivées en riz demeure peu probable, puisqu'au mieux les
surfaces vont plutôt diminuer du fait de l'urbanisation et de l'industrialisation, de nouvelles stratégies de création de
variétés de riz à plus fort rendement en grain sont considérées comme de la plus grande importance par l'Institut
International de Recherche sur le Riz (IRRI). Par ailleurs, les programmes mondiaux de recherche sur le riz suggèrent
que l’on s’approche des limites d'accroissement du rendement par des méthodes conventionnelles, et montrent que tous
les efforts visant à un accroissement de la productivité par sélection classique se heurtent à de sérieuses difficultés.
Le rendement en grains est la résultante de deux processus: la photosynthèse, qui produit les hydrates de carbone, et le
partage des allocations qui détermine la quantité d'hydrates de carbone emmagasinés dans le grain.
Les principales approches utilisées pour pallier à ces difficultés sont les suivantes:
• Modification du niveau des hormones endogènes (auxines et cytokinines, connues pour jouer un rôle
déterminant dans le remplissage du grain chez les céréales), en introduisant par la technique Agrobactérium des gènes
codant pour les enzymes qui contrôlent la biosynthèse de ces hormones. Le développement du grain est associé à des
flux successifs d'hormones : une vague de cytokinine provoque un accroissement rapide du nombre de cellules du jeune
grain et une vague d'auxine entraîne une accumulation massive d'hydrates de carbone et de protéines.
• Retarder le vieillissement (la sénescence) des feuilles, en introduisant des gènes codant des protéines de
la voie de biosynthèse des cytokinines, afin d'augmenter la teneur en hormones dans les feuilles à un stade où
ordinairement elles commencent à flétrir. Ainsi, en prolongeant la durée de production d'hydrates de carbone
dans les feuilles par photosynthèse, on accroît la quantité de ces molécules accumulées dans le grain.
CHAP V : Les plantes transgéniques
« Parmi les gènes introduits dans le maïs transgénique de Novartis, autorisé à la culture en France,
se trouve un gène de résistance à un antibiotique commun, l'ampicilline. Ce gène est un marqueur,
c'est-à-dire qu'il permet d'identifier les plantes ayant intégré les gènes d'intérêt (de synthèse de la
toxine Bt dans le cas du maïs). Ce gène n'a ensuite plus aucune fonction, mais Novartis n'a pas
jugé utile de l'extraire des plantes transgéniques. Les études menées par l'OMS (Organisation
Mondiale de la Santé) sur les antibiotiques montrent que ceux-ci deviennent de moins en moins
efficaces, les bactéries qui y sont soumises devenant insensibles au bout d'un certain temps. De
nombreux scientifiques craignent que la dissémination de gènes de résistance aux antibiotiques à
partir des plantes génétiquement manipulées n'accélère ce processus entraînant l'apparition de
bactéries pathogènes contre lesquels les antibiotiques seraient impuissants » Michael Curti et
Luca Willig
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
III. Les autres techniques de transformation de plantes
IV. Importance de la transgénèse végétale
1) Les domaines d’applications de la transgénèse
végétale
a) Dans le domaine agronomique
b) Dans le domaine alimentaire
CHAP V : Les plantes transgéniques
La tomate traditionnelle
La tomate de Flavr Savr doit être moissonnée
mûrit sur le plant- ayant tandis qu'elle est encore
pour résultat une plus verte et ferme de sorte
grande saveur. Elle est qu'elle ne soit pas écrasée
modifiée de sorte sur le chemin au
qu'elle reste ferme supermarché.
après récolte.
La tomate traditionnelle
est pulvérisée avec
l'éthylène après
l'expédition pour induire
la maturation.
CHAP V : Les plantes transgéniques
Amélioration de la qualité de l’huile de Colza
L'introduction de gènes de désaturases dans les plantes oléagineuses permet d'augmenter la proportion
d'acides gras insaturés, particulièrement recherchés en alimentation humaine pour diminuer les risques
cardio-vasculaires
• L’introduction d’une copie antisens du gène de la ∆9 désaturase dans le colza permet l’hybridation de
l’ARN messager sens de l’enzyme avec l’ARNm antisens codé par le gène introduit artificiellement.
L’expression du gène natif est ainsi inhibée et l’huile produite sera enrichie en acide stéarique (35% au lieu
de 1%).
• La production d’acide gamma linolénique a été obtenue chez le colza par introduction du gène codant
pour la ∆6 désaturase de la bourrache.
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
III. Les autres techniques de transformation de plantes
IV. Importance de la transgénèse végétale
1) Les domaines d’applications de la transgénèse
végétale
a) Dans le domaine agronomique
b) Dans le domaine alimentaire
c) Dans le domaine industriel
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
III. Les autres techniques de transformation de plantes
IV. Importance de la transgénèse végétale
1) Les domaines d’applications de la transgénèse
végétale
a) Dans le domaine agronomique
b) Dans le domaine alimentaire
c) Dans le domaine industriel
d) Dans le domaine de la santé
CHAP V : Les plantes transgéniques
La pomme de terre vaccin
Afin de lutter contre les maladies virales, il est courant de produire des antigènes de surface du virus par
des levures modifiées ce qui permet d’obtenir des quantités suffisantes pour élaborer un vaccin (exemple
contre l’hépatite B qui infecte actuellement deux milliards de personnes dans le monde). Malheureusement,
le système enzymatique des levures catalysant les modifications post-traductionnelles ne permettent pas
une production de l’antigène sous sa forme native (il est nécessaire de compléter la maturation de la
protéine par des réactions chimiques).
Les plantes possèdent deux gros avantages :
- Un arsenal enzymatique permettant toutes les modifications post traductionnelles
- Une consommation orale du vaccin directement via la plante
On a donc modifiées génétiquement des plants afin que les Ag de surface de l’hépatite B soient
exprimés à la surface de la pomme de terre. Des souris ayant consommés périodiquement cet OGM
ont développé une réponse immunitaire anti-virus hépatite B.
L'immunisation orale semble résulter de l'activation des tissus lymphoïdes dans l'intestin. Lors de ces
administrations orales, des adjuvants sont souvent ajoutés afin de réduire la dégradation des protéines
d'intérêt. Dans le cas de la pomme de terre, il semble que le tubercule puisse servir à l'avenir d'adjuvant
puisqu'il contient des inhibiteurs de protéinases
CHAP V : Les plantes transgéniques
Introduction
I. Étude physiologique et génétique d’Agrobacterium
II. Utilisation d’Agrobacterium en génie génétique
III. Les autres techniques de transformation de plantes
IV. Importance de la transgénèse végétale
1) Les domaines d’applications de la transgénèse
végétale
2) Le marché des OGM
CHAP V : Les plantes transgéniques
CHAP V : Les plantes transgéniques
Caractère qualité < 0,04 < 0,1 < 0,1 < 0,1
Résistance aux insectes et tolérance aux herbicides 0 < 0,1 0,3 2,8
Carte OGM
1998
CHAP V : Les plantes transgéniques
Carte OGM
1999
CHAP V : Les plantes transgéniques
Carte OGM
2000
CHAP V : Les plantes transgéniques