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Portabloque
Bloque de parafina
Fragmento de tejido
Cuchilla
Figura 1-1. Micrótomo para cortar los tejidos incluidos en parafina o en resina. El movimiento de la manivela (en la parte derecha de
la figura) hace que el bloque que contiene el fragmento de tejido suba y baje. A cada vuelta de la manivela, el bloque avanza una de-
terminada distancia (generalmente, 1-10 μm), de manera que al pasar por la cuchilla deja un corte de tejido. (Cortesía de Microm.)
Prisma
Lente
objetivo
Muestra
Platina
Condensador
Filtro de luz
C
Figura 1-3. Células de la cresta neural en cultivo estudiadas mediante
tres sistemas ópticos distintos. La preparación histológica no ha sido
teñida y en las tres imágenes fotográficas aparecen las mismas células;
se pueden utilizar las dos células pigmentadas para la orientación en
cada imagen. A) Microscopia óptica convencional. B) Microscopia de
contraste de fases. C) Microscopia de contraste de fases interferencial,
según Nomarski. Gran aumento. (Cortesía de S. Rogers.)
Lente Muestra
histológica
Detector
Obstáculo
con orificio
Plano
focalizado
Rastreo de la
Obstáculo iluminación
con orificio
Detector
Ánodo Cañón de
electrones
Lente condensadora
Bobina
eléctrica Columna
Lente objetivo
Ventana
de cristal
Lente intermedia
Lentes
protectoras
Placa fluorescente
Placa fotográfica
Figura 1-9. Esquema correspondiente a un microscopio de
Cámara CCD transmisión con sus componentes principales.
Ánodo Cañón de
electrones
Lente condensadora
Bobina eléctrica
Columna
Lente
Rastreador
Lente
Amplificador Detector de
de la señal electrones
Monitor Muestra
Células
disociadas
2 Núcleos
3
Mitocondrias
y lisosomas
Microsomas
Ribosomas
Membranas
de retículo
endoplasmático
Figura 1-14. La técnica de fraccionamiento celular permite el aislamiento de los componentes de la célula mediante centrifugación diferencial.
La columna de dibujos que aparece en la parte derecha de la figura muestra los orgánulos celulares obtenidos en el fondo de cada uno de
los tubos tras la centrifugación. La fuerza de centrifugación se expresa en unidades g, equivalentes a una unidad de la fuerza de gravedad.
1) Un fragmento de tejido que se ha troceado con una cuchilla de afeitar o con una tijera y después se disocia mediante un homogenizador o
mediante ultrasonidos. 2) El tejido disociado se mantiene en reposo durante aproximadamente 20 min para que precipiten los grumos que no
se han disociado así como las fibras de la matriz extracelular. 3) El sobrenadante se centrifuga a 1.000 g durante 20 min; los núcleos quedan
precipitados en el fondo del tubo. 4) El sobrenadante se centrifuga a 10.000 g durante 20 min; precipitan las mitocondrias y los lisosomas. 5) El
sobrenadante se centrífuga a 105.000 g durante unos 20 min; precipitan los microsomas. 6) El sobrenadante se trata con desoxicolato sódico antes
de la centrifugación; los microsomas se disocian y precipitan por separado como ribosomas y como membranas del retículo endoplasmático
rugoso. (Modificado y reproducido con autorización de Bloom W, Fawcett DW: A Textbook of Histology. 9.a ed. Saunders, 1968.)
2 Gel
3 Gel
Fuente de
energía
1 Gel
Gel
Placa de rayos X
Figura 1-22. Separación de las proteínas mediante electroforesis en gel. A) Aislamiento de las
proteínas. 1. Se obtienen mezclas de proteínas a partir de células y tejidos homogeneizados y se
tratan con un detergente (dodecil sulfato sódico) y con mercaptoetanol para separar las cadenas
y las subunidades de proteínas. 2. Las muestras se colocan la porción superior de una placa de
gel de poliacrilamida, que se somete a una corriente eléctrica continua. 3. Las proteínas presentan
migración a lo largo de un gel, según su tamaño y forma. Sobre el gel también se coloca una mezcla
Gel
de proteínas conocidas que sirve como patrón respecto a los pesos moleculares. B) Detección e
identificación de las proteínas. 1. Tinción. Las proteínas se tiñen y la intensidad de la tinción es
proporcional a su concentración. 2. Autorradiografía. Si algunas de las proteínas muestran radiac-
3 tividad, se pueden reconocer mediante autorradiografía. Para ello, se coloca una placa de rayos X
sobre el gel durante un cierto tiempo y después se revela. Las proteínas radiactivas se detectan
mediante la aparición de manchas oscuras en la placa de rayos X. 3. Inmunotransferencia. Las
proteínas pueden transferirse desde el gel a una membrana de nitrocelulosa. Esta membrana se
Membrana de incuba con un anticuerpo que reconoce las proteínas que pueden estar presentes en las muestras
nitrocelulosa tisulares.