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UNIVERSIDAD INTERAMERICANA DE PUERTO RICO

Recinto de Bayamón
Departamento de Ciencias Naturales y Matemáticas

Determinación de cafeína en la tableta


comercial Vivarin mediante la técnica de
HPLC
I. Introducción

La cafeína se encuentra no sólo en el café, sino en algunos tés, en el


chocolate, en la nuez de kola y en otros alimentos derivados de ellos. La
cafeína fue aislada en 1820. Es el principal alcaloide de la Caffea planta típica
del café y del Cacahuati o cacao de cuyos granos se elabora el chocolate. Con
respecto al té suele haber una confusión porque en 1827, al ser aislado su
principio activo, recibió el nombre de teína. Años más tarde un análisis
molecular permitió descubrir que la teína era en realidad cafeína.

La cafeína se consume en múltiples alimentos y bebidas. En usos


terapéuticos puede administrarse en forma oral o en inyección intravenosa. Es
un estimulante del sistema nervioso central que actúa después de 5 minutos de
su ingestión aumentando la actividad cerebral y reduciendo la vigilia. La
cafeína se vende bajo diversas marcas comerciales (Cafeaspirin, Saridón)
recomendada para contrarrestar la fatiga, para tratar la migraña y alfunos otros
tipos de cefalea. En conjunción con analgésicos hace que éstos trabajen
mejor. Por su capacidad para estimular la respiración también es recomendad
en el tratamiento de la apnea en los recién nacidos y como antídoto para la
depresión respiratoria en sobredosis de heroína y otros psicoactivos opiáceos.

Para la determinación de la cafeína en la tableta Vivarin utilizaremos la


técnica de cromatografía líquida de alta eficiencia (con sus siglas en inglés,
HPLC). Técnica analítica de separación utilizada más ampliamente. Las
razones para ésto es que esta técnica posee una alta sensitividad, su fácil
adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas (exactitud), su idoneidad
para la separación de especies no volátiles y sobre todo su gran aplicabilidad a
sustancias que son de gran interés en la industria y muchos campos de la
ciencia. Algunos ejemplos de éstas sustancias de interés son: aminoácidos,
proteínas, ácidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, plaguicidas,
antibióticos y esteroides.

II. Objetivos
a. Separación cromatográfica del analito (cafeína) en la muestra comercial
Vivarin (desconocido) mediante la técnica de HPLC.
b. Análisis cualitativo basándose en el tiempo de retención de la muestra.
c. Análisis cuantitativo de cafeína mediante curva de calibración.
d. Aprender a manipular y utilizar un equipo de HPLC.

III. Procedimiento

a. Preparación de la fase móvil

1) Preparar una solución de metanol 50% y agua 50% a una


proporción de 1:1 utilizando un probeta. Preparar un litro de
solución.
2) Degasificar la fase móvil para evitar que formen burbujas que
afecten el flujo y la presión los cuales deben permanecer
constantes.

b. Preparación de la curva de calibración

1) Preparar 50mL una solución madre de cafeína (M.W. 194.14g/mol)


de 0.0025M.
2) Se disuelve un poco de la muestra con el disolvente de trabajo
(metanol) y se transfiere cuantitativamente a un matraz volumétrico
de 50mL.
3) Aforar la solución con metanol y homogenizarla.
4) Se tomarán alícuotas de diferentes volúmenes: 1.00mL, 2.00mL,
3.00mL, 5.00mL y 7.00mL utilizando pipetas volumétricas y
transferirlas cuantitativamente a matraces volumétricos de 10mL.
5) Aforar las soluciones con el disolvente de trabajo (metanol) y
homogenizarla.
6) Inyectara cada solución al equipo y recobrar el cromatograma. Se
inyectará tres veces.
7) Construir una curva de calibración con los datos obtenidos (tiempo
de retención, área de picos y altura de platos teóricos).

c. Preparación del desconocido

1) Pesar en la balanza analítica 1 tableta de Vivarin.


2) Pulverizar la tableta con un mortero.
3) Disolver el sólido con el disolvente de trabajo (metanol) y transferir
cuantitativamente a un matraz volumétrico de 50mL. Esta será su
solución madre del desconocido.
4) Aforar la solución con metanol y homogenizarla.
5) Filtrar la solución.
6) Llevarla al instrumento para inyectar la muestra y determinar si cae
en escala.
7) Si no cae en escala pues se realizarán las diluciones pertinentes.
Diluciones de 1mL en 25mL de solución.
8) Se inyectará para recobrar el cromatograma. Se inyectará tres
veces.
9) Se harán los cálculos necesarios para determinar la concentración
de cafeína del desconocido utilizando la ecuación para la regresión
lineal.