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文章消息:
※文章歷史記錄:2009 年 8 月 1 日被認證
2009 年 11 月 12 日再修訂被認證
2009 年 12 月 8 日被一般所公認
※關鍵詞:Heat treatments_熱處理
Disinfestation_消滅病媒
Anthurium andraeanum_火鶴花
Stem cuttings_插穗
Radopholus similis_穿孔線蟲
摘要:
檢測熱水和熱空氣處理對驅除危害天南星科植物─火鶴花插穗的白葉枯病菌Xanthomonas
similis,以及它們的作用生存能力的插穗。
熱水,其發芽率和未經處理的對照組相比更高或相同。
的對照組,而從全熱風處理期間容忍度低的扦插品種‘Tropic Fire’紀錄到較低的發芽率相比,未經處
理的對照組,花的質量參數,包括平均花苞大小、莖的直徑和從經熱風處理過的插條上採收的花朵數
目,相等或高於未經處理的培育種。
於 50℃熱水 24 分鐘可以達到驅除插穗火鶴花幹白葉枯病和穴居線蟲而不喪失發芽率或花的質量。
1.簡介
從發病的花卉組織培養出有效地扦插,更符合成本地繁殖天南星科植物─火鶴花。插條看起來似乎是健
康的,但是,實際上可能已感染病原體或感染隱匿著的害蟲。
自從目前登記的農藥中沒有有效可控制火鶴花上的病蟲害時,該穴居線蟲和白葉枯病便成為火鶴花產
業特別關注的病蟲害。
穴居線蟲─穿孔線蟲,是一種體內洄游寄生蟲終其一生寄宿在根皮層而且已發現它會感染火鶴花植物
的莖(王等人,1999 年;曾等人,2004 年)
透過使用植物組織培養技術產生經過認證的無病原體、改變文化習俗和嚴格的衛生措施,這種疾病一
Xa pv. dieffenbachiae,但是,並沒有從田間被根除而且仍然存在於無症狀的植株上(福井等人
基於經濟因素,莖扦插繁殖技術仍是可取的,因此,需要有效的除蟲處理,以防止白葉枯病再發生,
可能不可挽回的削弱了火鶴花產業。
熱的應用是一個有前途的滅蟲處理,可確保火鶴花的扦插中沒有穴居線蟲和白葉枯病。
用水、空氣或蒸氣的熱處理已使用多年,可有效的驅除植物繁殖材料上各種植物害蟲和病原體。
生線蟲(Chitwood 等人 1941 年; Birchfield, 1954 年; Birchfield and Van Pelt, 1958 年; Lear and
以熱水處理(50℃,10-15 分鐘)連續澆灌根和花盆的媒介或浸漬裸根植株成功地消除觀音棕竹、孔
雀椰子和火鶴花中的穴居線蟲(Tsang 等人 2003、2004 年)
沒有紀錄說使用熱去控制火鶴花細菌性葉枯病。
植物材料─尤其是種子,經熱空氣或熱水處理後主要是擺脫黃單胞菌和假單胞菌(Grondeau and
Samson 1994 年)
殖材料的最小傷害。
目前擔心病原體轉移的可能性,如火鶴花細菌性葉枯病,乾淨的插穗在大量的植物材料中進行熱水處
理而受到感染。
將確認死亡的病原體置於持續相同熱度的熱水處理或使用非飽和熱空氣代替水可以消除所有擔憂的交
叉污染。
此研究的目的是評估使用非飽和熱空氣和熱水去驅除火鶴花插穗上的穿孔線蟲和黃單胞菌屬葉枯病菌
的可行性。
其目標為:
(1)確定時間和溫度的機制對火鶴花細菌性葉枯病的殺傷力。
(2)確定選定的時間和溫度的組合對火鶴花插穗生存效果和之後的花卉質量和產量。
(3)驗證熱處理抵抗受感染的火鶴花插穗中的穿孔線蟲的功效。
2.材料和方法
2.1 測定火鶴花細菌性葉枯病的熱致死曲線
Manoa,Hilo,HI 的分校,提供的從原先感病火鶴花中分離培養的火鶴花細菌性葉枯病菌,並維持在 28
℃的 LB 洋菜平板培養基。
Eppendorf 公司)
50℃,這是控制穿孔線蟲的風險承擔範圍內的建議。
材料的蟲害的效果。
另外四管裝滿蒸餾水被用來監測在熱處理過程中細菌懸浮液的溫度變化。
塑料材料立即自我封閉周圍穿刺點的探測器以防止洩漏或進入管中。
司)
中。
兩條裝有熱電偶溫度探針監測的管沉浸一樣久的時間,並留在熱水箱整整 15 分鐘。
對於熱空氣處理, 12 個含有火鶴花細菌性葉枯病懸浮液的離心管連同兩個裝有熱電偶探針的離心管
10、15 和 20 分鐘,隨後進行定時到這一點。
從熱水或熱空氣中移出後,立即將細菌懸浮液浸泡在室溫(25℃)的水冷卻約 5 分鐘,以模擬處理後
搬運插條。
為了停止殘留在插條上的餘溫繼續加熱,後處理冷卻是必要的,以減少熱傷害作為害蟲的致死溫度也
接近植物的熱耐受性的限制。
細菌的存活率。
對於這兩種熱水和熱空氣試驗中,檢查包括三管被送到熱處理現場的火鶴花細菌性葉枯病懸浮液,而
未經熱處理的與熱處理樣品會送回實驗室。
2.2 熱空氣對在火鶴花插穗中的穿孔線蟲的功效
的地中,收集火鶴花‘Marian Seefurth’品種的插穗十二根,並隨機分為四組。
一組被送往分析(ADSC,CTAHR,Honolulu, HI 夏威夷大學)確認穿孔線蟲的感染,另一組作為
一個未經處理的對照組,其餘兩組以下列之一的熱風治療方法處理:加熱至中心溫度達到 50 ℃,或
增加 10 分鐘(50℃+10 分鐘)。
經熱處理後,所有的插穗,包括對照組,立即浸在持續流動的室溫水(25℃)冷卻約 5 分鐘。
插穗被分散在不同的塑料托盤(43×43×5 cm),覆蓋著一層水苔,放在溫室工作台上,每天用微
噴灌系統澆水,並觀察直到芽出現(約一個月)。
然後收集插穗並霧室中檢測穿孔線蟲(Barker,1985)。
由於沒有足夠的插穗可以使用所以沒有進行熱水的效能試驗,但是,熱水處理中對穿孔線蟲的熱致死
2.3 火鶴花插穗的耐熱性研究
者(Hilo, HI)對其熱處理的耐性進行評估。
氣處理。
和'Leilani'的插穗一起處理。
行加熱直到中心溫度到達所需溫度,然後在特定的時間內保持該溫度。
熱電偶探測器(Omega 工程公司,Stamford,CT)是縱向插入到代表性的插穗中心,在這熱水和熱
Stamford, CT)
直到溫度監測的插穗核心溫度到達 50℃。
在±0.2℃內。
用 50℃的水細霧噴灑充滿垂直氣流的空間內將相對濕度維持在理想水平。
節噴霧頻率。
的房間的中間木製架上。
每個托盤放 1 個裝有熱電偶探測器的插穗,如前面所述的處理過程中監測其中心溫度。
經過熱水或熱空氣處理後,插穗立即浸在連續流動的室溫水(25℃)冷卻約 5 分鐘。
插穗(每盤 10 條)在塑料托盤(43×43×5cm)上攤開,覆蓋著一層水苔,放在溫室工作台上,每
天用微噴灌系統澆水,並觀察芽產生和成長。
包裝袋內,當發展成花時在溫室工作台上放在相同光照條件下以例行方式照料。
七個月後,植物開始開花,紀錄其花苞大小、莖的長度和直徑 9 個月。
2.4. 設計統整
完全隨機設計的方法用於檢測不同處理間的變異數分析。
發芽率的反正弦值的變換用於在分析前的正確常態。
3.結果與討論
3.1.熱的挑戰於火鶴花細菌性葉枯病,以測定熱致死曲線
火鶴花細菌性葉枯病在體外培養受到高溫不同時間不同溫度組合的存活率,細菌種群數量下降使用回
積電鍍約為 5×10-6。
在48℃經過 20分鐘,倖存者仍然存在;回歸分析表明,100%的死亡率至少有必要曝光24分鐘。在熱循
環儀中的細菌懸浮液從25℃上升達到目標溫度50℃約為9秒。
經過商業規模的加熱設施的處理後,火鶴花細菌性葉枯病的懸浮液在熱水和熱空氣,分別需要 3 分鐘、
25 分鐘到達到目標溫度 50℃
當菌落總數約 5*106時,菌懸液達到50℃後,接觸到熱水的時間超過12分鐘或熱空氣的時間超過10分
鐘,沒有菌落出現(Table 1), 這是一致的體外存活率。
根據這項研究的結果,浸泡在熱水中15分鐘,在50℃能可靠的防止可能發生的水傳播交叉污染從Xa
pv.dieffenbachiae感染至批量扦插處理的健康火鶴花。為了在體外試驗處理,明顯的觀察到48 C和
50℃之間殺滅時間的差異,一個設計良好的熱水系統與精確的溫度控制是必需的。再整個水的質量中
充足的循環以維持一個統一的溫度分佈,變化低於+-0.2℃是關鍵。治療和設備必須要規範操作,確
保安全性,防止可能從被感染的扦插的傳播,因為只有比較少量接種會引起疫情。
3.2. 熱空氣對抗火鶴花穿孔線蟲的功效於火鶴花插穗
追回未經檢查的植株住有火鶴花穿孔線蟲,確認的繁殖的材料感染穴居線蟲,並會是一個潛在的污染
來源於新領域的播種。
沒有倖存者,然而,被追回莖扦插暴露在50℃熱空氣(直到植株核心達到目標溫度),證實了這一特
這時間溫度組合也應該對潛在火鶴花白葉枯病致病菌是致命的,根據呈現在
莖組織的火鶴花細菌性葉枯病體外培養死亡率數據。(Fig. 1).
舷梯時間為插穗的核心溫度,在炎熱的氣室約30分鐘從 48上升到50℃ 。
體外試驗分析的數據表明,在48℃至少有24分鐘是用來殺死細菌。
由於無法獲得合適的樣本,沒有對受火鶴花細菌性葉枯病感染的插穗進行驗證測試。
3.3.火鶴花插穗的耐熱性研究
火鶴花變異係數'瑪麗安 Seefurth','萊拉尼'和'簡夫人的存活率和發芽率良好的容忍幾乎所有熱水和熱
看來在熱處理刺激芽休眠或是發芽比起未經處理的插條,其他三個品種有較成熟的木質的莖,特別是
在'簡夫人’(P<0.01)。
熱帶火'在熱水更寬容性(P<0.01),其發芽率相當於或高於未經處理的插條,在熱空氣,從而減少
了存活率和發芽率“(<30%)遠低於未經處理的插條。
保持較高的溫度於處理的所需時間,
這可以解釋生存率和發芽率,為何比未經處理的"熱帶火"插條還少。
熱空氣處理的協定可能要進行調整,以根據品種、莖成熟度和大小對插條的載荷均勻處理,以便最大
限度地減少熱傷害。
基於療效、植物耐熱性和多樣性,熱水可以作為一種,定植前,對於火鶴花插穗對抗火鶴花穿孔線蟲
和火鶴花細菌性葉枯病的有效除害處理。
在 50℃水浸泡 24 分鐘會超出兩個生物體的熱致死點,植物材料無不利影響。
在熱水中需要的接觸時間比較短,加上扦插處理提高發芽率,使這種治療方法適用於商業應用。
3.4 熱處理對火鶴花花產量和質量的影響
在夏威夷,紅掌的種植,主要用於切花生產。
心形佛焰苞的審美特質,包括顏色,大小和形狀,切花瓶插壽命,對種植者和消費者是很重要的。
一般來說,沒有檢出花卉生產在熱處理或未經處理的插條之間的差別(表 4)。
分析顯示花卉高品質的數據,但是, 熱處理往往會影響花莖長,並在較小的程度對花卉收穫,影響
佛焰苞的尺寸和數量。
“熱帶火“的插條暴露在熱空氣任何長度的時間經歷高死亡率;但是,該品種對所有熱水處理更能容忍,
0.01)的佛焰苞,並沒有對花莖的長度造成有害影響。
“夫人簡“能良好的容忍熱水和熱空氣處理,相較於未經處理的插條有較長花莖和類似的莖粗、佛焰苞
尺寸和鮮花的收穫數量,
'Leilani'and'瑪麗安 Seefurth'也耐受熱水和熱空氣處理,相對於未經處理的插條,具有類似莖粗、佛焰
苞的尺寸和數量的花卉收穫;
莖長度較未經處理的插條短。
從所有熱處理插條生產的火鶴花莖的長度,但是佛焰苞的平均大小符合夏威夷等級最低標準的 2.5 倍,
(夏威夷農業部,2002)。
靈活性,並允許花朵的貯藏過程中定期修剪莖頂,以延長瓶插壽命。
4.結論
非飽和的熱空氣(50℃,相對濕度 60%)和熱水(50℃)的調查作為潛在的治療方法,用於火鶴花
插穗去除穴居線蟲(火鶴花穿孔線蟲)和白葉枯病(火鶴花細菌性葉枯病)。
用商業規模的現場設備進行熱處理,取得了類似的效果。
火鶴花插條與熱空氣接觸,直至其核心溫度達到 50℃後,火鶴花穿孔線蟲被消滅。
高存活率和增強萌芽的觀察中,四個火鶴花品種插穗各進行評估後,在熱水(50℃)中浸泡,最多為
24 分鐘。
只有火鶴花品種'熱帶火'無法容忍任何熱空氣處理的時間長度,並在接觸插條表現出很高的死亡率
(大於 70%)
來自熱處理插條的花卉生產,相近或大於那些未經處理的插穗。
處理 倖存數量(cfua)
5 min tntc
10 min 1.0×106
12 min 0
15 min 0
菌落形成單位,平均 3 個重複。
不勝枚舉
圖 2.在現場設備加熱過程中的挑戰,細菌懸浮液的溫度上升
浸在 50℃熱水
表2
火鶴花插穗在對 R. similis 熱空氣處理功效。
a
:cv. Marian Seefurth, n=3.品種瑪麗安 Seefurth n=3
表3
熱處理後六個星期,火鶴花插穗繁殖的生存能力(圖案)。
**:Values within columns followed by different letters are significantly different, P≦ 0.01.
**:值在列,其次不同字母有顯著差異,P≦0.01。
a
:HA=Hot Air, HW=Hot Water, n =20 stem cuttings/treatment. (20 插穗/處理)
diameter 直徑
表4
收穫來自暴露在熱空氣或熱水的植物莖扦插種植,熱處理對火鶴花花的尺寸的影響