PROTEIN;

Uji Kualitatif Indetifikasi, Uji Kelarutan dan Penentuan Titik Isoelektrik Protein

BAB I
PENDAHULUAN
Protein (protos yang berarti ”paling utama") adalah senyawa organik kompleks
yang mempuyai bobot molekul tinggi yang merupakan polimer dari monomer-monomer
asam amino yang dihubungkan satu sama lain dengan ikatan peptida. Peptida dan protein
merupakan polimer kondensasi asam amino dengan penghilangan unsur air dari gugus
amino dan gugus karboksil. Jika bobot molekul senyawa lebih kecil dari 6.000, biasanya
digolongkan sebagai polipeptida.
Proetin banyak terkandung di dalam makanan yang sering dikonsumsi oleh
manusia. Seperti pada tempe, tahu, ikan dan lain sebagainya. Secara umum, sumber dari
protein adalah dari sumber nabati dan hewani. Protein sangat penting bagi kehidupan
organisme pada umumnya, karena ia berfungsi untuk memperbaiki sel-sel tubuh yang
rusak dan suplai nutrisi yang dibutuhkan tubuh. Maka, penting bagi kita untuk
mengetahui tentang protein dan hal-hal yang berkaitan dengannya.
Oleh karena itu, kegiatan praktikum ini bertujuan untuk mengetahui adanya ikatan
peptida dari suatu protein, membuktikan adanya asam amino bebas dalam suatu protein,
membuktikan adanya asam amino yang berinti benzena, mengetahui kelarutan protein
terhadap suatu pelarut tertentu, dan mengetahui titik isoelektrik dari suatu protein secara
kualitatif.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
Buiret adalah senyawa dengan dua ikatan peptida yang terbentuk pada pemanasan
dua mulekul urea. Ion Cu2+ dari preaksi Biuret dalam suasana basa akan berekasi dengan
polipeptida atau ikatan-ikatn peptida yang menyusun protein membentuk senyawa
kompleks berwarna ungu atau violet. Reaksi ini positif terhadap dua buah ikatan peptida
atau lebih, tetapi negatif untuk asam amino bebas atau dipeptida.

1
Semua asam amino, atau peptida yang mengandung asam-α amino bebas akan bereaksi
dengan ninhidrin membentuk senyawa kompleks berwarna biru-ungu. Namun, prolin dan
hidroksiprolin menghasilkan senyawa berwarna kuning.
Protein mengandung asam amino berinti benzen, jika ditambahkan asam nitrat
pekat akan mengendap dengan endapan berwarna putih yang dapat berubah menjadi
kuning sewaktu dipanaskan. Senyawa nitro yang terbentuk dalam suasana basa akan
terionisasi dan warnanya akan berubah menjadi lebih tua atau jingga. Rekasi ini
didasarkan pada uji nitrasi inti benzena yang terdapat pada mulekul protein menjadi
senyawa intro yang berwarna kuning
Protein bersifat amfoter, yaitu dapat bereaksi dengan larutan asam dan basa. Daya
larut protein berbeda di dalam air, asam, dan basa; ada yang mudah larut dan ada yang
sukar larut. Namun, semua protein tidak larut dalam pelarut lemak seperti eter dan
kloroform. Apabila protein dipanaskan atau ditambah etanol absolut, maka protein akan
menggumpal (terkoagulasi). Hal ini disebabkan etanol menarik mantel air yang
melingkupi molekul-molkeul protein.
Kelarutan protein di dalam suatu cairan, sesungguhnya sangat dipengaruhi oleh
beberapa faktor antara lain, pH, suhu, kekuatan ionik dan konstanta dielektrik pelarutnya.
Protein seperti asam amino bebas memiliki titik isoelektrik yang berbeda-beda.
Titik Isoelektrik (TI) adalah daerah pH tertentu dimana protein tidak mempunyai selisih
muatan atau jumlah muatan positif dan negatifnya sama, sehingga tidak bergerak ketika
diletakkan dalam medan listrik. Pada pH isoelektrik (pI), suatu protein sangat mudah
diendapkan karena pada saat itu muatan listriknya nol.

2
 BAB III
METODOLOGI
Metode yang digunakan pada kegiatan praktikum ini adalah menggunakan alat-alat,
bahan-bahan, dan prosedur-prosedur sebagai berikut :
A. Alat
a. Pipet tetes e. Penangas air
b. Tabung reaksi f. Alat permanas
c. Rak tabung reaksi g. Pengatur waktu
d. Penjepit tabung reaksi h. Pipet ukur

B. Bahan
a. Albumin 2 % k. Fenilanalina 2 %
b. Gelatin 2 % l. Larutan Kasein Netral
c. Kasein 0,5 % m. Buffer asetat pH : 3,8; 4,7; 5,0;
d. Pepton 0,5 % 5,3; 5,9
e. Glisin 2 % n. Akuadestilata
f. Pereaksi Ninhidrin 0.1 % o. Larutan HCl 10 %
g. Triptofan 2 % p. Larutan NaOH 40 %
h. Larutan HNO3 Pekat q. Alkohol 96 %
i. Larutan NaOH 10 % r. Kloroform
j. Larutan CuSO4 0.2 %

C. Prosedur
1. Uji Biuret
• Sediakan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering, lalu masing-masing diisi dengan
larutan Albumin, Kasein, Gelatin dan Glisin sebanyak 2 mL.
• Tambahkan pada setiap tabung 1 mL NaOH 10 % dan CuSO4 0.2 % sebanya 3
tetes.
• Campur dengan baik.
• Amati dan catat perubahan warna yang terjadi

3
2. Uji Ninhidrin
• Sediakan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering, lalu masing-masing diisi dengan
larutan Albumin, Kasein, Gelatin dan Glisin sebanyak 2 mL.
• Tambahkan pada setiap tabung 5 tetes pereaksi Ninhidrin
• Campur dengan baik, dan panaskan di penangas air hingga mendidih selama 5
menit.
• Amati dan catat perubahan warna yang terjadi
3. Uji Xantoprotein
• Sediakan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering, lalu masing-masing diisi dengan
larutan Albumin, Kasein, Gelatin dan Triptofan sebanyak 2 mL.
• Tambahkan pada setiap tabung 1 mL HNO3 pekat. Perhatikan adanya endpan
putih yang terbentuk
• Panaskan 1 menit sampai endapan larut kembali dan larutan berubah menjadi
berwarna kuning.
• Amati dan catat perubahan warna yang terjadi
• Reaksi adalah positif, jika pada bidang perbatasan (interface) antara protein dan
NaOH tebentuk warna jingga.
4. Uji Kelarutan Protein
• Sediakan 5 tabung reaksi yang bersih dan kering. Lalu masing-masing
diisi dengan akudestilata, HCl 10 %, NaOH 40 %, alkohol 96 %, dan kloroform
sebanyak 1 mL
• Tambahkan pada setiap tabung 2 mL albumin telur
• Kocoklah dengan kuat, kemudian amati sifat kelarutannya.
• Ulangi percobaan menggunakan gelatin
5. Uji Penentuan Titik Isoelektrik Protein
• Sediakan 5 tabung reaksi yang berisih dan kering, lalau masing-masing
diisi sengan larutan kasein netral sebanyak 1 mL.
• Tambahkan pada setiap tabung 1 mL buffer asetat masing-masing dari pH
3.8; 4.7; 5.0; 5.3; dan 5.9

4
 • Kocoklah campuran dengan baik, lalau catat derajat kekeruahnya setelah
0, 10, dan 30 menit.
• Perhatikan hasilnya, yaitu pada tabung beberapa bentuk endapan
maksimal
• Selanjutnya panaskan semua tabung di dalam penangas air.
• Amati hasilnya. Pembentukan endapan kekeruhan, palng cepat atau paling
banyak merupakan titik isoelektriknya.

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Uji Biuret

No. Zat Uji Hasil Uji Biuret Polipetida (+/-)

1 Albumin 2 % Berwarna Ungu +
2 Gelatin 2% Berwarna Violet +
3 Kasein 0.5% Berwarna Ungu +
4 Glisin 2% Berwarna Biru -
Polipeptida mempuyai perbedaan dengan protein. Polipeptida mempunyai residu
asam amino ≤ 100 dan dan bobot mulekul ≤ 6.000. Sedangkan, pada protein residu asam
amnionya ≥ 100 dan bobot mulekulnya ≥ 6.000. Pada praktikum ini, zat uji Glisin
menunjukkan hasil negatif dengan indikasi terbentuknya warna biru adalah karena tidak
adanya ikatan peptida. Glisin adalah salah satu asam amino esenial dengan rumus bangun
NH2—CH2CO2H. Sedangkan pada Albumin, Gelatin dan Kasein rumus bangunya lebih
kompleks dan mengikat dua atau lebih asam amino esensial , sehingga terbentuk ikatan
peptida.
Berikut gambaran proses pembantukan ikatan peptida :

NH2 NH2 Ikatan peptida

C=O C=O

NH2 NH
NH2 NH3 +

C=O C=O

NH2 NH2 5
 Jadi, ikatan peptida hanya terbentuk apabila ada dua atau lebih asam amino esensial
yang bereaksi.

B. Uji Ninhidrin

No. Zat Uji Hasil Uji Ninhidrin Asam amino bebas (+/-)
1 Albumin 2 % Berwarna Ungu +
2 Gelatin 2% Berwarna Ungu +
3 Kasein 0.5% Bening -
Berwarna Merah
4 Pepton 2% -
Muda
5 Fenilanalina Berwarna Ungu +

Asam amino bebas adalah asam amino dimana gugus aminonya tidak terikat.
Pada praktikum di atas, albumin, gelatin, dan fenilanalina membentuk warna ungu kaena
dapat bereaksi dengan Ninhidrin. Hal ini menandakan ketiga zat uji tersebut mempunyai
gugus asam amino bebas.
Sebaliknya, pada kasein dan pepton tidak diperoleh indikasi terbentuk atau
adanya asam amino bebas, karena reaksi dengan ninhidrin tidak berwarna sampai
membentuk warna merah muda. Semakin banyak ninhidrin pada zat uji yang dapat
bereaksi, semakin pekat warnanya. Hal ini juga mendasari bahwa uji Ninhidrin dapat
digunakan untuk menentukan asam amino secara kuantitatif.

6
 C. Uji Xantoprotein

Hasil Uji Asam amino berinti

No. Zat Uji
Xantoprotein benzena (+/-)
1 Albumin 2 % Lapisan Jingga +
2 Gelatin 2% Bening -

3 Kasein 0.5% Lapisan Merah -

Lapisan Kuning
4 Triptofan 2% +
Jingga

Ada sebagian peptida dan protein yang mempunyai gugus asam amino berinti
benzena. Seperti fenilanalina, tirosin, albumin, riptofan dan lain sebagainya. Pada
praktikum di atas, hasil positif pada zat uji albumin dan triptofan mengindikasikan
keduanya terdapat inti benzena, yaitu dengan indikasi terbentuknya lapisan jingga atau
kuning jingga.
Sedangkan, pada kasein dan gelatin menghasilkan lapisan merah dan bening
mengindikasikan negatif. Berikut contoh struktur bangun protein yang berinti benzena :

—CH2CHCO2OH
│
NH2
Feinilanalina
D. Uji Kelarutan Protein

Alkohol
No. Zat Uji Akuadestilata HCl 10 % NaOH 40 % Kloroform
96 %
1 Albumin Larut Larut Tidak Larut Larut Tidak
Larut
2 Gelatin Larut Larut Tidak Larut Larut Tidak
Larut

7
 Protein mempunyai kemampuan untuk larut pada beberapa zat pelarut, karena pada
dasarnya ia bersifat amfoter. Pada praktikum di atas, protein (albumin dan gelatin) tidak
larut hanya pada NaOH 40 % dan kloroform. Karena, keduanya adalah pelarut lemak.

E. UJI Penentuan Titik Isoelektrik Protein

No. Tabung pH Pengamatan Endapan, sedikit atau banyak

0; Endapan 10; Endapan 30; Endapan
1 3.8
Banyak Banyak Banyak
0; Endapan 10; Endapan 30; Endapan
2 4.7
Sedikit Sedikit Sedikit
3 5.0 0; Tidak Ada 10; Tidak Ada 30; Tidak Ada
4 5.3 0; Tidak Ada 10; Tidak Ada 30; Tidak Ada
5 5.9 0; Tidak Ada 10; Tidak Ada 30; Tidak Ada
Setelah dipanaskanm, hasilnya sama dengan hasil semula.

Pada praktikum di atas, semaikn kecil pH buffer asetatnya, semakin banyak

endapannya. Karena pH yang kecil dan benyak membantuk endapan berarti selisih
muatan listriknya antara yang positif dan negatif sama. Sehingga, tidak dapat bergerak
dan membantuk endapan atau warna keruh. Jadi, pada pH 3,8 dan 4,7 sebagai dua pH
terkecil dapat membentuk endapan, karena terbentuk muatan negatif dan positif yang
sama.

8
 BAB V
KESIMPULAN

• Albumin, Gelatin, Kasein positif Polipetida. Sedangkan, Glisin negatif.

• Pada Albumin, Geltain, Fenilanalin, terdapat asam amino bebas. Sedangkan
Kasein dan Pepton tidak.
• Pada Albumin dan Triptofan inti asam aminonya berupa benzena. Sedangkan
Gelatin dan Kasein tidak.
• Protein (Albumin dan Gelatin) larut pada akuadestilata, HCl 10 %, dan alkohol 96
%. Dan tidak larut pada NaOH 40 % dan kloroform.
• Semakin kecil pH Buffer asetat pada uji Isoelektrik, semakin banyak endapan
yang terbentuk.

BAB VI
DAFTAR PUSTAKA

Jalip, I.S. 2008. Penuntun Praktikum Kimia Organik. Laboratorium Kimia

Fakultas Biologi Universitas Nasional. Jakarta.
Robinson, Trevor. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Penerbit ITB.
Bandung