.

El metabolismo de Xenobióticos
por los Organismos.
Reacciones de Fase I y de Fase II.

Teresa Donato
Centro de Investigación, Hospital La Fe

9 Xenobióticos y reacciones de biotransformación

9 Reacciones de Fase I
9 Reacciones de Fase II
9 Regulación del metabolismo de xenobióticos.
Influencia de factores exógenos y endógenos.
Inducción e inhibición.
9 Consecuencias clínicas.
9 Métodos de estudio del metabolismo de xenobióticos

1
 Xenobióticos
Xenobióticos

Xenobióticos:
Xenobióticos: Características
Características químicas
químicas
• cadenas alquílicas • anillos aromáticos • halógenos
saturadas, insaturadas

Lipofílicos

• atraviesan con facilidad las membranas biológicas

• son excretados a baja velocidad
• se acumulan en compartimentos hidrofóbicos

2
 Los
Los xenobióticos
xenobióticos en
en el
el organismo...
organismo...

acceden con relativa facilidad y son difícilmente

excretables

tienden a acumularse aumentado el riego de toxicidad

su eliminación requiere una transformación previa

en metabolitos más hidrosolubles y fácilmente
excretables

Las reacciones de biotransformación o

metabolización de xenobióticos...

...son los procesos enzimáticos a los que se ven

sometidos los xenobióticos en el organismo
tendentes, en general, a su eliminación y
neutralización

3
Reacciones
Reaccionesde
debiotransformación
biotransformación

FASE 1
Oxidaciones, reducciones o hidrólisis que
convierten los xenobióticos en metabolitos más
polares.

FASE 2
Conjugación de los xenobióticos, o sus
metabolitos, con moléculas endógenas polares.

Reacciones
Reaccionesde
debiotransformación
biotransformación

xenobiótico
Fase I
metabolito
polar
Fase II
conjugado

EXCRECIÓN

4
 Los
Los enzimas
enzimas de
de biotransformación...
biotransformación...

¾ metabolizan compuestos químicos diferentes

¾ tienen baja especificidad de sustrato

¾ son inducibles por xenobióticos

Fase
Fase II del
del metabolismo
metabolismo de
de xenobióticos
xenobióticos

Oxidación Citocromo P-450

Flavin monooxigenasa
Alcohol deshidrogenasa
Aldehido deshidrogenasa
Xantina oxidasa
Reducción Citocromo P-450
Hidrólisis Esterasas
Hidratación Epóxido hidratasa
Isomerización Isomerasas

5
 Metabolización
Metabolización de
de xenobióticos
xenobióticos

piel pulmón
reducción hidrólisis
intestino riñón
peroxidación

FMN-
oxidación

Hígado P450

Tejidos de metabolización Enzimas de fase I

Componentes
Componentesdel
Componentes delsitema
del sitema citocromo
sistema citocromo
citocromo P-450
P-450
P-450

NADPH
e-
Citocromo
e- P450
reductasa
FMN Fe
Citoplasma FAD Citocromo
P450 b5

Retículo endoplásmico

RH + O2 + NADPH+ H+ ROH + H2O + NADP+

6
 Reacciones
Reacciones de
de oxidación
oxidación

monooxigenasa
RH + NADPH + O2 + H+ ROH + NADP+ + H2O

oxidasa
NADPH + O2 + H+ NADP+ + H2O2

peroxidasa
RH + LOOH ROH + LOH

Mecanismo
Mecanismo de
de catálisis
catálisis

OH Substrato Substrato H
Fe3+

P450
OH Substrato Fe3+ Fe3+ Substrato H

P450 P450
e-

H Substrato FeO3+ Fe2+ Substrato H

P450 P450
H2O

H Substrato Substrato H O2

H+ FeOOH H+ e - Fe2+ O2
P450 P450

7
 Enzimas
Enzimas P450
P450 en
en el
el hombre
hombre

Familias
1 2 3 4 5 7 8 11 17 19 21 24 27

Subfamilias
3A4 21A2
3A5
1A1 1B1 3A7 4A11 4B1 4F2 11A1 11B1
1A2 3A43 4A20 4F3 11B2

2A6 2B6 2C8 2D6 2E1 2F1 2J2 2R1 2S1 2U1 2W1
2A7 2C9
2A13 2C10
2C18
2C19

Enzimas
Enzimas P450
P450 en
en el
el hombre
hombre

CYP3A4 CYP1A2 CYP1A2

CYP3A4 CYP2A6
CYP2A6
CYP2B6 CYPC9
CYP2C19
CYP2Cs
CYP2E1 CYP2D6 CYP2E1 CYP2D6

Abundancia relativa Metabolismo

en hígado de fármacos

8
 Enzimas
Enzimas de
de Fase
Fase II
II

Enzima Sustrato endógeno

UDP-glucuroniltransferasa UDP-glucurónico
UDP-glucosiltransferasa UDP-glucosa
Sulfotransferasa 3-Fosfoadenosin-5-fosfosulfato
Acetiltransferasa Acetil-coenzima A
Metiltransferasa S-adenosilmetionina (SAME)

Glutation S-transferasa Glutation

N-aciltransferasa Aminoácidos (gly, gln)

Conjugación
Conjugación con
con glucurónico
glucurónico
COOH O
COOH
O NH O
OR
R-OH +
OH N OH
HO O-P-O-P-O-CH2 O HO
O UDP
OH OH OH OH

OH OH

R-OH + UDP-glucurónico R-O-glucurónico + UDP

R-COOH + UDP-glucurónico R-COO-glucurónico + UDP
R-NH2 + UDP-glucurónico R-NH-glucurónico + UDP
R-SH + UDP-glucurónico R-S-glucurónico + UDP

9
 Conjugación
Conjugación con
con sulfato
sulfato

SO42- + ATP adenosin-5-fosfosulfato (APS) + PPi

APS + ATP 3-fosfoadenosin-5-fosfosulfato (PAPS) +ADP

R-OH + PAPS R-O-SO3H + PAP

R-N-H + PAPS R-N-SO3H + PAP

R’ R’

Enzimas
Enzimas de
de Fase
Fase II
II

Enzima Sustrato endógeno

UDP-glucuroniltransferasa UDP-glucurónico
UDP-glucosiltransferasa UDP-glucosa
Sulfotransferasa 3-Fosfoadenosin-5-fosfosultafo
Acetiltransferasa Acetil-coenzima A
Metiltransferasa S-adenosilmetionina (SAME)

Glutation S-transferasa Glutation

N-aciltransferasa Aminoácidos (gly, gln)

10
 Conjugación
Conjugación con
con glutation
glutation

O X NO2
-C-C- X-CR- NO2-R- C=C
epóxidos haloalcanos nitroalcanos alquenos compuestos halo
o nitroaromáticos

γ-Glu-Cys(SH)-Gly + xenobiótico γ-Glu-Cys(S)-Gly

xenobiótico

Conjugados
Conjugados con
con glutation:
glutation: eliminación
eliminación
X X X

S Glu S Gly S
Glu-Cys-Gly Cys-Gly Cys-NH2
Conjugado Acetil-CoA
con glutation
CoA
X

EXCRECIÓN
S
Cys-NH-CO-CH3
Ácido mercaptúrico

11
 Sustratos
Sustratos endógenos
endógenos

Citocromo P-450 Ac. grasos, esteroides, esteroles,

hormonas tiroideas, leucotrienos,
prostaglandinas, vitamina D
Reductasas Esteroides
Oxidasas Xantina, neurotransmisores

UDP-glucuroniltransferasa Esteroides, bilirrubina, catecolaminas

Sulfotransferasa Esteroides, carbohidratos
Acetiltransferasa Serotonina
Metiltransferasa Aminas biógenas
Glutation S-transferasa Esteroides, leucotrienos
N-aciltransferasa Ac. biliares

9 Xenobióticos y reacciones de biotransformación

9 Reacciones de Fase I
9 Reacciones de Fase II
9 Regulación del metabolismo de xenobióticos.
Influencia de factores exógenos y endógenos.
Inducción e inhibición.
9 Consecuencias clínicas.
9 Métodos de estudio del metabolismo de xenobióticos

12
 Variabilidad
Variabilidad interindividual
interindividual del
del P450
P450
CYP3A4 ACTIVITY
(pmol/mg x min) 4000

3000

2000

1000

0
1 17 25 8 7 26 5 10 4 9 2 16 21 19 23 18 31 3 20 14 27 24 28 29 30

LIVER DONOR
800
CYP2D6 ACTIVITY
(pmol/mg x min)

600

400

200

0
31 29 25 24 2 16 19 18 21 5 17 10 23 28 8 27 20 26 9 4 14 30 3 7 1

LIVER DONOR

Regulación
Regulación del
del metabolismo
metabolismo de
de fármacos
fármacos

Factores ambientales
fármacos, tabaco, alcohol,
polución, agentes químicos, dieta

Factores genéticos Factores endógenos

Polimorfismos Edad, sexo
Factores multigénicos Estados hormonales
Errores congénitos Tratamientos terapéuticos
Enfermedades hepáticas
Otras enfermedades
FENOTIPO INDIVIDUAL

13
 Regulación
Regulación del
del P450
P450

succinil Co-A + glicina

Gen-CYP POLIMORFISMOS
Polimorfismos
ALA sintetasa
Inductores
INDUCTORES químicos
QUÍMICOS
ácido d-aminolevulínico Señales inflamatorias
ALA deshidratasa Hormonas
mRNA Dieta, etc.
porfobilinógeno
PBG desaminasa

Porfirias Citocromo P450

Co++, Pb++ apoproteína

protoporfirina IX
Fe Ferroquelatasa

HEMO CYP Inhibidores

INHIBIDORES

Inductores
Inductores del
del citocromo
citocromo P450
P450

CYP Inductor modelo Otros inductores

1A2 3-Metilcolantreno Hidrocarburos
aromáticos policíclicos
2B6 Fenobarbital Pesticidas
2E1 Etanol Isoniazida, disolventes
(acetona, benceno)
3A4 Dexametasona Glucocorticoides
Rifamipicina Antibióticos macrólidos
4A Acido clofíbrico Proliferadores de
peroxisomas (fibrato)

14
 Mecanismos
Mecanismos de
de inducción
inducción

Metilcolantreno (CYP1A)
Fenobarbital (CYP2B)
Glucocorticoides (CYP3A)
Ac. clofíbrico (CYP4A)
hemo

Transcripción Traducción

Estabilización
de mRNA Estabilización
de proteína

Etanol (2E1)
TAO (3A)

Inducción
Inducción aa nivel
nivel transcripcional
transcripcional

Inductor Receptor nuclear CYP

Hidrocarburos AhR 1A
aromáticos
Fenobarbital CAR 2B6

Glucocorticoides PXR 3A4

Proliferadores PPAR 4A1

de peroxisomas

15
 Receptores
Receptores nucleares
nucleares
Fenobarbital Ac. clofíbrico Glucocorticoides HAP
(CYP2B) (CYP4A) (CYP3A) (CYP1A)
+ + + +
- +

PPAR
+

PXR

Hsp90
CAR

CAR

AhR
AhR
-
+ +

Hsp90
PPAR

RXR

RXR
+

PXR
+
CAR

RXR

AhR
Arnt
Promotor del CYP

Inhibición
Inhibición de
de la
la biotransformación
biotransformación

Inhibición de la Reducción del Destrucción

síntesis
de enzimas nivel de enzimas del enzima

Menor metabolización

Inhibición Menor actividad Formación de

competitiva o complejos
no competitiva del enzima inactivos

16
 Inhibidores
Inhibidores de
de enzimas
enzimas P450
P450
Inhibición competitiva Inhibición por unión covalente

I I S S
S S I S S
I I I
I S
S S I Unión
S covalente
S S
Degradación
S del enzima

Inhibición por sustratos suicidas S

S
I I
S I I
S
S S
Intermediario reactivo

Factores
Factores que
que regulan
regulan el
el P450
P450

Endógenos
especie
polimorfismo
sexo
edad
hormonas
patologías

nutrientes
Exógenos xenobióticos

17
 Metabolización
Metabolización de
de hexobarbital
hexobarbital

400
Tiempo (minutos)

350
tiempo de sueño
300
vida media
250
200
150
100
50
0
ratón rata perro hombre

Oxifenbutazona
Oxifenbutazona

100
niveles plasmáticos

hombre
10
perro

1
1 6 11 16 21 26
horas

18
 Conjugación
Conjugación de
de fenol
fenol

120
% de excreción total

100
glucurónido
80
sulfato
60

40

20

0
gato hombre rata conejo cerdo

Enzimas
Enzimas P450
P450 en
en hombre
hombre vs
vs rata
rata

CYP1A CYP1A
CYP3A CYP2A CYP2A
CYP3A
CYP2B CYP2B

CYP2C
CYP2E CYP2D
CYP2C

HOMBRE RATA

19
 Enzimas
Enzimas P450
P450 en
en diferentes
diferentes especies
especies

CYPs Hombre Rata Ratón Conejo Perro

1A 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2

2A 6,7,13 1,2,3 4,5,12 10,11 ?
2B 6,7 1-3,8,12 9,10,13 4,5 11
2C 8,9,18,19 6,7,11-13 9,10 1-5,14-16 21
2D 6 1-5,18 9-12 ? ?
2E 1 1 1 1,2 1
3A 3-5,7 1,2,9,18 11,13,16 6 ?

Factores
Factores que
que regulan
regulan el
el P450
P450

especie
polimorfismo
sexo
edad
hormonas
patologías

nutrientes
xenobióticos

20
 Efectos
Efectos del
del etanol
etanol sobre
sobre el
el P450
P450

exposición
aguda cirrosis

inhibición
inhibición

exposición inducción
crónica

9 Xenobióticos y reacciones de biotransformación

9 Reacciones de Fase I
9 Reacciones de Fase II
9 Regulación del metabolismo de xenobióticos.
Influencia de factores exógenos y endógenos.
Inducción e inhibición.
9 Consecuencias clínicas.
9 Métodos de estudio del metabolismo de xenobióticos.

21
Variabilidad
Variabilidad metabólica:
metabólica: consecuencias
consecuencias

¾ Farmacocinéticas: biodisponibilidad
vida media

¾ Farmacodinámicas: ineficacia terapéutica

respuesta exagerada

¾ Efectos adversos

¾ Aparición de metabolitos tóxicos

Variabilidad
Variabilidad metabólica:
metabólica: consecuencias
consecuencias

Efecto tóxico Efecto terapéutico Sin efecto

terapéutico

CYP CYP CYP

LENTO NORMAL RAPIDO

22
 Paracetamol:
PARACETAMOL activación/destoxificación
Paracetamol: activación/destoxificación
NHCOCH3 NHCOCH3 NHCOCH3
Activación Activación
+ macromoléculas
CYP2E1 Nucleófilos
OH CYP3A4 O Macromoléculas O
Detoxificación CYP1A2
Fase II Fase II

NHCOCH3 NHCOCH3
TOXICIDAD

S-glutation
Glucurónido OH
o sulfato

EXCRECIÓN

Activación
Activación de
de pre-carcinógenos
pre-carcinógenos
ACTIVACIÓN DE PRE-CARCINÓGENOS

CYP epóxido hidrolasa

O OH
OH
Benzo[a]pireno Benzo[a]pireno-7,8-epóxido Benzo[a]pireno-7,8-diol

CYP

O
Benzo[a]pireno-7,8-diol-9,10-epóxido
OH
OH

23
 Interacciones
Interacciones fármaco-fármaco
fármaco-fármaco de
de
origen
origen metabólico
metabólico

¾ Competición por el mismo enzima

¾ Inhibición enzimática

¾ Inducción de enzimas

Fármacos
Fármacos metabolizados
metabolizados por
por el
el CYP3A4
CYP3A4

Antidepresivos: Antibió
Antibióticos: Antihipertensivos:
Antihipertensivos Quinioterá
Quinioterápicos:
picos:
amitriptilina azitromicina amlodipina busulfan
imipramina claritromicina diltiazem ciclofosfamida
nofozodona clindamicina felodipinA doxorubicina
sertralina dapsona losartan etopósido
eritromicina nircadipina isofosfamida
Anconvulsivantes:
Anconvulsivantes:
rifampicina nifedipina paclitaxel
carbamacepina
clonazepam tamoxifen
Anti-
Anti-VIH: Psicotró
Psicotrópicos:
etoxisumida tenipoxide
indinavir alprazolam
zonisamida vinblastina
ritonavir benzfetamina vincristina
saquinavir clozapina
Analgé
Analgésicos-
sicos-anesté
anestésicos:
alfentailina Antifú
Antifúngicos:
ngicos: diazepam Inmunosupresores:
Inmunosupresores:
etilmorfina ketokonazol midazolam ciclosporina
fentanil itraconazol zolpiden rapamicina
lidocaina miconazol triazolam tacrolimus

24
 Fármacos
Fármacos metabolizados
metabolizados por
por el
el CYP3A4
CYP3A4

Antiarrítmicos: Antihistamínicos: Otros fármacos: Sustratos endógenos:

amiodarona astemizol alpidem androstenediona
digoxina ebastina dextrometorfano cortisol
propafenona loratidina etinilestradiol dehidroepiandrosterona
quinidina mizolastina haloperidol estradiol
verapamil terfenadina metadona progesterona
Antiulcerosos: lovastatina testosterona
Antiinflamatorios: ondansetron
lasoprazol aceteminofeno salmeterol
omeprazol meloxicam simvastatina
Opiáceos: teofilina
codeína terguride
morifina warfarina

Inhibidores/inductores
Inhibidores/inductores de
de relevancia
relevancia clínica
clínica

CYP Inhibidores Inductores

2D6 Antiarrítmicos: quinidina, amiodarona
Antidepresivos: fluoxetina, sertralina
paroxetina
3A4 Antifúngicos: ketokonazol, fluconazol Antituberculosos: rifampin,
itraconazol, miconazol rifampicina, rifabutin
Antibióticos macrólidos: eritromicina, Anticonvulsivantes: fenitoina,
claritromicina, troleandromicina fenobarbital, carbamapecina
Inhibidores proteasa VIH: ritonavir, Glucocorticoides:
indinavir, amprenavir dexametasona
Antidepresivos: fluvoxamina,
fluoxetina, nefodazona Hierba de San Juan
Antiarrítmicos: amiodarona

25
9 Xenobióticos y reacciones de biotransformación
9 Reacciones de Fase I
9 Reacciones de Fase II
9 Regulación del metabolismo de xenobióticos.
Influencia de factores exógenos y endógenos.
Inducción e inhibición.
9 Consecuencias clínicas.
9 Métodos de estudio del metabolismo de xenobióticos.

Estudios
Estudios de
de metabolización
metabolización de
de fármacos
fármacos

¾ Parámetros cinéticos: velocidad y grado de metabolización

grupos de población (polimorfismos,
edad, sexo)
¾ Patrón de metabolitos: metabolitos mayoritarios, tóxicos, etc
diferencias interespecie

¾ Interacciones: inhibición del metabolismo

inducción de enzimas

¾ Estudios mecanísticos: identificación de enzimas implicados

estructura-función
estudios de regulación

26
 Modelos
Modelos para
para estudios
estudios de
de metabolismo
metabolismo

¾ Ensayos clínicos

¾ Estudios in vivo

¾ Estudios in vitro

¾ Simulación por ordenador

Evaluación
Evaluación de
de la
la capacidad
capacidad metabolizadora
metabolizadora

¾ Métodos directos: Monitorización del fármaco

(patologías, fármacos con índice
terapéutico bajo)
¾ Métodos indirectos: Fármacos modelo que evalúan
la capacidad metabolizadora
(inducción, polimorfismos)
“Cóctel” de sustratos modelo

Análisis de metabolitos en orina

Medida del aclaramiento plasmático
Tests respiratorios

27
 Tests 14
Tests respiratorios:
respiratorios: 14C-aminopirina
C-aminopirina

14CH
3 H
CH3 -N CH3 CH3 -N CH3
N CYP + H14CHO
N
NAD+
N CH3 N CH3
NADH

H14COOH

14CO
14C-aminopirina 2

Aire expirado

Fenotipación
Fenotipación de
de actividades
actividades P450
P450
Relación metabólica (sustrato/producto) o velocidad de
eliminación de fármacos modelo.
CYP Sustrato Reacción Tipo de muestra Otros
1A2 Cafeína N-Desmetilación Orina, test respiratorio Teofilina

2A6 Cumarina 7-Hidroxilación Orina Fenacetinas

2B6 Bupropion Hidroxilación Orina

2C9 Tolbutamida Metilhidroxilación Orina Naproxeno
Diclofenac 4’-hidroxilación Orina, sangre Ibuprofeno
Fenitoína 4’-hidroxilación Sangre Diazepam
2C19 S-Mefenitoína 4’-hidroxilación Orina Imipramina
Omeprazol
2D6 Debrisoquina 4-hidroxilación Orina Codeína
Dexatrometorfano O-Desmetilación Orina
2E1 Clorzoxazona 6-Hidroxilación Orina, sangre
3A4 Midazolam 1’-Hidroxilación Orina, sangre Alfentanil
Eritromicina N-Desmetilación Test respiratorio Lidocaine
Nifedipina Oxidación Sangre Triazolam
6β-hidroxicortisol Metabolito endógeno Sangre

28
 Cóctel
Cóctel de
de substratos
substratos

CYP Pittsburg GW Cooperstown Zhu Karolinska

1A2 cafeina cafeina cafeina cafeina cafeina

2C9 diclofenac losartan losartan

2C19 mefenitoina mefenitoina omeprazol mefenitoina omeprazol

2D6 debrisoquina debrisoquina debrisoquina metoprolol debrisoquina

2E1 clorzoxazona clorzoxazona clorzoxazona

3A4 dapsona midazolam quinina midazolam quinina

29