Pregunta 1

Calor Húmedo.

La utilización del calor y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposición y la

temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acción del calor. El
calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de las membranas y/o
procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos.

El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas. Estos efectos se

deben principalmente a dos razones: 1) El agua es una especie química muy reactiva y muchas
estructuras biológicas son producidas por reacciones que eliminan agua y 2) El vapor de agua posee
un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado que el aire.

Ventajas del calor húmedo:

-Rápido calentamiento y penetración

-Destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo

-No deja residuos tóxicos

-Hay un bajo deterioro del material expuesto

-Económico

Desventajas:

-No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua

-Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos

Procedimientos:

a) Ebullición: Se requiere un recipiente con agua. Es la aplicación del calor mediante la ebullición
del agua a presión atmosférica (100 oC). Mediante este método se esterilizan inyectadoras, agujas e
instrumentos de cirugía menor. No es confiable en su totalidad este método por cuanto quedan las
esporas

b) Tyndalización: Esterilización por acción discontinua del vapor de agua a una temperatura de 100
oC en varias sesiones. Se basa en el principio de Tyndal. Las bacterias que resisten una sesión de
calefacción, hecha en determinadas condiciones, pueden ser destruidas cuando la misma operación
se repite con intervalos separados y en varias sesiones. Se efectúa por medio del autoclave de
Chamberland, dejando abierta la válvula de escape, o sea funcionando a la presión normal. Puede
también realizarse a temperaturas más bajas, 56º u 80º ocupara evitar la descomposición de las
sustancias a esterilizar, por las temperaturas elevadas.

c) Pasteurización: Es la aplicación de una temperatura inferior a 110 oC durante 30 minutos. La

aplicación del calor va seguida de un rápido enfriamiento. Se usa para prevenir las infecciones de
origen lácteo y retasar la descomposición de la leche, ya que las bacterias de la leche no forman
esporas (bacilo tuberculoso, salmonella, estreptococo y brucela)

d) Vapor a presión (autoclave): Se realiza la esterilización por el vapor de agua a presión. El modelo
más usado es el de Chamberland. Esteriliza a 120º a una atmósfera de presión (estas condiciones
pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos. El vapor a presión proporciona
temperaturas altas con penetración y humedad en abundancia que facilitan la coagulación de las
proteínas.

Equipo: Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metálica, que en la parte
inferior recibe calor por combustión de gas o por una resistencia eléctrica, esta se cierra en la parte
superior por una tapa de bronce. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manómetro, otro para el
escape de vapor en forma de robinete y el tercero, para una válvula de seguridad que funciona por
contrapeso o a resorte.

Funcionamiento: Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que
se disponen sobre una rejilla de metal. Se cierra asegurando la tapa, sin ajustar los bulones y se da
calor, dejando abierta la válvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la salida de
vapor en forma de chorro continuo y abundante.

1.2.- Calor Seco.

El calor seco produce desecación de la célula, es esto tóxicos por niveles elevados de electrolitos,
fusión de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los
microorganismos que están en contacto con éstos. La acción destructiva del calor sobre proteínas y
lípidos requiere mayor temperatura cuando el material está seco o la actividad de agua del medio es
baja.

Ventajas del calor seco:

-No es corrosivo para metales e instrumentos.

-Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no volátiles.

Desventajas:

-Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido a la baja penetración
del calor.

Entre los métodos que utilizan el calor seco como medio de esterilización se destacan:

a). Flameado: Consiste en la exposición directa del instrumento a una flama en forma directa por
poco tiempo con el mechero de Bunsen.

b). Incineración: Consiste en someter el material contaminado a altas temperaturas en hornos

especiales para reducirlo prácticamente a cenizas. Su fin es evitar el vertido de material de alto
riesgo en la basura.

c). Estufa (Horno Pasteur de aire caliente) Por medio de las estufas de doble cámara, el aire caliente
generado por una resistencia, circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cámaras,
a temperatura de 170º C para el instrumental metálico y a 140º C para el contenido de los tambores.
Se mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal, que al dilatarse por el calor,
cortan el circuito eléctrico.

1.3.- Radiaciones.

La acción de las radiaciones del tipo de radiación y el tiempo de exposición.

a). Radiaciones ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los ácidos
nucleicos, estructuras proteicas y lipídicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los
microorganismos, dando lugar a mutaciones en los microorganismos que los incapacitan
metabólicamente para producir una enzima esencial y sobreviniendo la muerte bacteriana. Las
radiaciones tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolábiles
(termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus
costos.

b). Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energía atómica. Este tipo
de esterilización se aplica a productos o materiales termolábiles y de gran importancia en el campo
industrial. Puede esterilizar antibióticos, vacunas, alimentos, etc.

c). Rayos X: Penetran bien, pero requieren mucha energía, son pocos operativos para su empleo
masivo, su uso es muy costoso, por lo tanto son muy poco usados con fines de esterilización

d). Rayos Ultravioletas: Afectan a las moléculas de DNA de los microorganismos. El ADN absorbe
una longitud de onda de 2600ª y libera energía ocasionado rearreglo de enlaces químicos son
escasamente penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilización en
quirófanos.

1.4.- Mecánicos.

a). Filtración: En la filtración se usan membranas filtrantes con poros de un tamaño determinado. El
tamaño del poro dependerá del uso al que se va a someter la muestra. Los filtros que se utilizan
pueden no retener virus o micoplasmas, estos últimos están en el límite de separación según el
diámetro de poro que se utilice.

La filtración se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolábiles. Su usa para esterilizar
aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftálmicas, soluciones intravenosas, drogas
diagnósticas, radiofármacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibióticos y
vitaminas. Este método es útil para identificar microorganismos en muestras de agua potable y otras
sustancias. También l aire puede ser sometido a una limpieza exhaustiva provocando su paso a
través de materiales capaces de retener los microorganismos y partículas en suspensión

Tipos de filtros:

1.- Filtros profundos o Filtros de profundidad: Consisten de un material fibroso o granular

prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la
retención de las partículas se produce por una combinación de absorción y de retención mecánica en
la matriz.

2.- Membranas filtrantes: Tienen una estructura continua, y la retención se debe principalmente al
tamaño de la partícula. Partículas más pequeñas al tamaño del poro quedan retenidas en la matriza
del filtro debido a efectos electrostáticos.

3.- Filtros de huella de nucleación (Nucleoporo): Son películas muy delgadas de policarbonato que
son perforadas por un tratamiento conjunto con radiación y sustancias químicas. Son filtros con
orificios muy regulares que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices,
evitando el paso de toda partícula con un tamaño mayor al del poro.

b). Sedimentación: Es un método por el cual los microorganismos son eliminados de depósitos
hídricos. Se fundamenta e el hecho de que la densidad de muchas bacterias es algo mayor de 1.0; en
consecuencia, se depositan en el fondo del recipiente que las contiene quedando el líquido
sobrenadamente no estéril del todo, pero su población microbiana disminuye notablemente. En el
laboratorio la sedimentación se acelera por centrifugación. Es utilizado este método para identificar
microorganismos en muestras de agua potable y otras sustancias.

2.- MÉTODOS QUÍMICOS.

Estos métodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos.

a). Oxido de etileno: Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrógenos lábiles como
los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc.
Es utilizado en la esterilización gaseosa, generalmente en la industria farmacéutica. Destruye todos
los microorganismos incluso virus; es un agente microbiano de amplio espectro, destruye la bacteria
en estado vegetativo, incluyendo al bacilo de la tuberculosis, las esporas y los virus. Sirve para
esterilizar material termosensibles como el descartable (goma, plástico, papel, etc.), equipos
electrónicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc. Es muy peligroso por ser altamente inflamable
y explosivo, y además cancerigeno.

-Otros:

b). Aldehídos: Son agentes alquilantes que actúan sobre las proteínas, provocando una modificación
irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimática. Estos compuestos destruyen las esporas.

c). Glutaraldehído: Consiste en preparar una solución alcalina al 2% y sumergir el material a

esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un enjuague de 10 minutos.
Este método tiene la ventaja de ser rápido y ser el único esterilizante efectivo frío. Puede esterilizar
plástico, goma, vidrio, metal, etc.
d) Formaldehído: Se utilizan las pastillas de paraformaldehido, las cuales pueden disponerse en el
fondo de una caja envueltas en gasa o algodón, que después pueden ser expuesta al calor para una
rápida esterilización (acción del gas formaldehído). También pueden ser usadas en Estufas de
Formol, que son cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se calienta hasta los 60° C
y pueden esterilizar materiales de látex, goma, plásticos, etc. Las pastillas de formalina a
temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.

e). Esterilización por gas-plasma de Peróxido de Hidrógeno: Es proceso de esterilización a baja

temperatura la cual consta en la transmisión de peróxido de hidrógeno en fase plasma (estado entre
líquido y gas), que ejerce la acción biocida.

Posee como ventajas:

No deja ningún residuo tóxico.

Se convierte en agua y oxígeno al final del proceso.

El material no precisa aireación.

El ciclo de esterilización dura entre 54 y 75 minutos.

Desventajas:

No se pueden esterilizar objetos que contengan celulosa, algodón, líquidos, humedad, madera o
instrumental con lúmenes largos y estrechos.

Es el método de esterilización más caro de entre los descritos.

3.
4. La diferencia entre los procesos de esterilizacion, desinfeccion y asepsia. Ejemplos
Esterilización: eliminación de toda forma de vida, incluídas las esporas.
Desinfección: proceso de destruir los agentes infecciosos.
Antisepsia: operaciones o técnicas encaminadas a crear un ambiente que impida el desarrollo de los
microorganismos e incluso pueda matarlos.
Asepsia: técnicas empleadas para impedir el acceso de microorganismos al campo de trabajo.
Tanto la esterilización como la desinfección son métodos para el control o eliminación de
microorganismos, tanto en investigación como industria y sanidad. .- Con la Esterilización se
consigue eliminar toda forma microbiana. .- La Desinfección consigue eliminar sólo las formas
vegetativas. No supone eliminación de formas de resistencia. .- La Antisepsia es un tipo de
desinfección que se da sobre tejidos vivos. El efecto de un agente antimicrobiano puede ser:
Germicida si muere el microorganismo de forma irreversible. Microbiostático si se detiene el
crecimiento de los microorganismos. Es reversible, cuando se elimina el agente el microorganismo
sigue creciendo. Muerte de microorganismos es la pérdida irreversible de la capacidad de
reproducción.

5. Metodos de control de Esterilidadm en que consisten metodos fisicos y quimicos y

Biologicos, Ejemplo de cada uno de ellos.
 6. Para que son utilizadas las asas bacteriologicas. Tipos de asas que hay y para que se utilizan
cada una de ellas. Cuidados que deben tenerse a la hora de su manejo. Menciones equipos
nuevos para esterilizar
El asa bacteriológica es un instrumento de laboratorio tipo pinza que consta de una base que puede
estar hecha de platino, acero, aluminio y un filamento que puede ser de nicromo, tungsteno o
platino que termina o en aro o en punta.
Se emplea para transportar o arrastrar o trasvasar inóculos (pequeño volumen que contiene
microorganismos en suspensión) desde la solución de trabajo también llamada “solución madre” al
medio de cultivo (sólido o líquido) o de un medio a otro (resiembra). También sirve para la
realización de frotis.
La cantidad de inóculo que se trasvasa viene determinado por el diámetro del aro final del
filamento, que se encuentra calibrado y normalmente oscila entre 0,1 y 0,01 ml.

7. Describir como se lleva a cabo la envoltura de material ha esterilizar

8. Menc ionar en que consiste las pruebas de sterilidad y control de los distintos materiales
utiizados en el laboraorio de Microbiologia y en que consisten dichas pruebas

Prueba de esterilidad I
Medios de cultivo y soluciones
La prueba de esterilidad tiene fundamento en la detección de formas viables de microorganismos,
en medios de cultivo adecuados para el crecimiento de bacterias, hongos y levaduras que se
encuentran como contaminantes en productos estériles.

Recomendaciones especiales para la prueba de esterilidad

Para evitar una contaminación accidental la prueba debe llevarse a cabo en condiciones asépticas
por lo que periódicamente se realizará el control ambiental de las áreas de trabajo, así como del
equipo y material empleados. Los envases de las muestras deben desinfectarse previamente a su
análisis. A los productos envasados al vació, se les debe introducir aire filtrado a través de algodón
estéril. Si el producto tiene diluyente o algún aplicador anexo, también debe cumplir la prueba de
esterilidad. Se debe llevar a cabo una prueba en blanco como testigo, paralela a los análisis de las
muestras.

Pruebas de esterilidad en medios de cultivo y soluciones

Prepararlos medios de cultivo a partir de medios deshidratados comerciales o preparados en base a
sus formulaciones. Ajustar el pH con soluciones 1N de hidróxido de sodio ó 1N de ácido clorhídrico
para que después de esterilizar en autoclave se obtenga el valor indicado en cada caso. Esterilizar a
121°C durante 15 minutos.

Medio A. Medio fluido de cioglicolato

Mezclar los ingredientes hasta que estén completamente disueltos en agua, calentar si es necesario.
Ajustar el pH, calentar nuevamente sin hervir y filtrar a través de papel filtro humedecido. Añadir la
solución de resarsurina de sodio y envasar en tubos adecuados. Esterilizar. El medio presenta
coloración rosa superficial por la oxidación del mismo, la cual no debe rebasar la tercera parte del
volumen total; si la coloración es mayor, se puede calentar una vez en baño de agua hasta que la
coloración desaparezca. Usarse cuando la coloración se reestablezca a la décima parte del volumen
total del medio.

Medio B. Medio fluido de tioglicolato con polisorbato 80

Preparar el medio como lo realiza para el medio A adicionar por cada litro de medio 50mL de
polisorbato 80. Esterilizar.

Medio C. Medio Fluido de tioglicolato con penicilanasa

Preparar el medio como se indica en el medio A. A cada tubo de medio estéril adicionar suficiente
penicilinasa estéril para inactivar la penicilina presenten la muestra.

Medio D. Medio fluido de tioglicolato con polisorbato 80 adicionado de

penicilinasa
Preparar el medio como indica medio B. A cada tubo con medio estéril, adicionar suficiente
penicilinasa para inactivar la penicilina presente en la muestra.

Medio E. Caldo soya tripticaseína

Disolver los ingredientes en 500mL de agua, calentando suavemente hasta que la disolución sea
completa y llevar ala aforo a 1000mL. Ajustar el pH, filtrar y envasar en tubos adecuados.
Esterilizar.

Medio F. Caldo soya tripticaseína con polisorbato 80

Preparar el medio como se indica en el medio E. Adicionar 5 ml de polisorbato 80 por cada litro de
medio.

Medio G. Caldo soya tripticaseína con penicilinasa

Preparar el medio como se indica en Medio E. Adicionar la cantidad suficiente de penicilinasa para
inactivar la penicilina presente en la muestra.
Medio H. Caldo soya tripticaseína con polisorbato 80 adicionado de penicilinasa.
Preparar el medio como se indica en medio F. A cada tubo con medio estéril adicionar suficiente
penicilinasa estéril para inactivar la penicilina presente en la muestra.

Solución I. Solución al 1% de peptona

Disolver un gramo de digerido péptico de tejido animal en 1000mL de agua destilada, filtrar y
ajustar el pH a 7.1±0.2, Distribuir en envases conteniendo 100mL cada uno y esterilizar.

Solución II. Solución al 1% de peptona con polisorbato 80

Preparar la solución como se indica en I. Agregar 1mL de polisorbato 80 por cada litro de solución.
Envasar y esterilizar.

Solución III. Solución al 0.85% de cloruro de sodio

Disolver 8.5g de cloruro de sodio en agua destilada y llevar al aforo a 1000mL; distribuir en
envases conteniendo 100mL cada uno y esterilizar.
Solución IV. Solución de peptona y extracto de carne con polisorbato 80
Disolver los ingredientes en agua destilada, llevar al aforo a 1000mL, ajustar el pH, envasar y
esterilizar.

Solución V. Solución de penicilinasa

Preparar la solución de penicilinasa y valorarla en unidades Levy. Esterilizar la solución de
penicilinasa por filtración a través de membrana.

Solución VI. Meristato de isopropilo

Utilizar meristato de isopropilo esterilizado por filtración a través de membrana con pH del extracto
acuoso de 5.5 o mayor. Determinar el pH del extracto acuoso y envasar en frascos estériles.
Como se puede observar es crítico que los medios estén estériles, lo que se hace mediante
esterilización por calor húmedo en la mayoría de los casos, razón por la cual la autoclave debe estar
funcionando correctamente, en ICLAB contamos con personal calificado y apto para realizar
pruebas de calibración, ajuste y validación de esterilización por éste método.

TIRAS CORTAS PARA GAS Y VAPOR

Determinan con mayor precisión el procedimiento de
esterilización. Son colocadas en cajas quirúrgicas, pa-
quetes y envases a esterilizar. Controlan los procesos
mediante reacciones físico químicas a diferencia de
las otras del mercado que solo determinan calor.
Estas cambian en presencia de temperatura y tiempo
requerido. Les permite a los cirujanos e instrumentistas
evaluar si el material utilizado fue sometido a los proce-
sos de esterilización.
PRUEBA DE BOWIE & DICK Y MINI B&D
• B&D esta diseñada como prueba diaria para verificar
el funcionamiento de los esterilizadores para gas y
vapor, verifican la penetración de vapor, funcionamiento
de vacío y calidad de vacío del autoclave.
• Mini B&D es una prueba extrema que determinan
errores en temperatura, penetración de vapor, tiempo
insuficiente, fugas, extracción de aire, gases no
condensables, vapor súper calentado, vapor húmedo.
Estas pruebas deben realizarse por lo menos una vez
a la semana en los esterilizadores a vapor.