CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA COMO UNA APROXIMACION

DIDACTICA DEL ANALISIS DE MEDICINAS A BASE DE COUMARINAS

Diego J. GÁLVEZ C.1, Jaime A. SÁNCHEZ E.2

1,2
Universidad del Tolima - Ibagué - Colombia
dijagacu@gmail.com
andres_jaime5@hotmail.com

RESUMEN

El nombre de coumarina proviene de la palabra coumarou que es una planta

conocida como haba tonca cuyo nombre científico es (Dipteryx odorata Willd,
Coumarouna odorata Aubl. Fam. Leguminosae/Fabaceae). Son metabolitos típicos

de plantas superiores, su núcleo es benzo-2-pirona o benzo-α-pirona También se

clasifican en derivados del fenilopropano y su esqueleto básico C6-C3 acido

hidroxicinamico, que representa el sistema de lactonas insaturadas; poseen un
sustituyente oxigenado en posición 7 ya sea hidroxilado como sucede en
umbeliferona, o combinado (metilo, azúcares, etc). Estas se derivan directamente
del ciclo del acido shikimico La propiedad física más importante de estos
compuestos es la fluorescencia generada con luz ultravioleta, propiedad
ampliamente usada para su detección. Estos compuestos presentan un amplio
rango de actividad biológica, como: acción anticoagulante y antibacterial del
dicumarol, la acción antibiótica de la novobiocina, y carcinogenicidad y la acción
fotosensibilizadora de furanocumarinas, se destaca, el uso de cumarinas como
saborizantes y en perfumería. Se clasifican en: Cumarinas simples y complejas.
Estas a su vez, se clasifican en Furanocumarinas y Piranocumarinas, estas
participan en el papel de protectores de la planta y con frecuencia son
resintetizadas en condiciones de estrés como las fitoalexinas. Estas son
sintetizadas por las plantas como respuesta a diversos factores bióticos y
abióticos. También tienen influencia en células vegetales provocando el
crecimiento de las plantas. Es difícil determinar criterios óptimos de la selección de
extractos con el fin de conocer sus propiedades físico-químicas, las cuales están
directamente relacionadas con la penetración de partículas disolventes en el
interior del material vegetal. Los métodos de extracción varían según las
propiedades y estructuras químicas (extracción Soxhlet, maceración, filtración,
extracción asistida por ultrasonidos). Por tal motivo se hace necesario un estudio
de la CCD en el cual se lleven a cabo técnicas de fácil identificación y aislamiento.

Palabras Claves: Cumarinas Simples y Complejas, Metabolitos Secundarios,

Actividad Biologica, Fitoquímica, aproximación didáctica.

INTRODUCCIÓN

Con el nombre de cumarinas se conoce a un grupo muy amplio de principios

activos fenólicos que se encuentran en plantas medicinales y tienen en común una
estructura química de 2H-1- benzopiran-2-ona, denominada cumarina. Sobre esta
estructura, que se origina biosintéticamente por lactonización del ácido cumarico
(2-hidroxi- Z-cinámico), se disponen sustituyentes de distinta naturaleza química lo
que da lugar a distintos tipos de cumarinas: sencillas y complejas. Prácticamente
todas las cumarinas, a excepción de la cumarina propiamente dicha, poseen un
sustituyente hidroxílico en posición 7, ya sea libre, como sucede en la
umbeliferona, o combinado (metilo, azúcares, etc.). Las cumarinas sencillas
pueden poseer además hidróxilos adicionales también libres o combinados.
Ejemplo de ellas son el esculetol del castaño de Indias con dos hidróxilos libres
sobre los carbonos C-5 y C-7 o el escopoletol presente en algunas Solanáceas
(belladona) que posee un hidroximetilo en C-5 y un hidróxilo libre en C-7. Es
frecuente, que sobre el anillo cumarínico básico, generalmente hidroxilado en C-7,
se sitúen sobre los carbonos 6 u 8 radicales isoprenílicos de 5, 10 o más
raramente de 15 átomos de carbono, que por su alta reactividad pueden originar
anillos adicionales de tipo furánico o piránico. A este grupo de cumarinas
isopreniladas se les conoce en conjunto como cumarinas complejas debido a la
gran variabilidad química de sus estructuras. Ejemplo de este tipo de principios
activos es la visnadina, piranocumarina con efectos vasodilatadores presente en
el Amni visnaga. Como grupo, su interés farmacológico no es muy grande, sin
embargo debemos mencionar sus efectos sobre el sistema vascular tanto en
territorio arterial como venoso y su utilidad en el tratamiento de algunas
alteraciones de la piel como por ejemplo la psoriasis debido a sus propiedades
fotosensibilizantes (M. W. Hajnos Thin layer chromatrography in phytochemistry.
chromatographic science series. Capitulo 15 Pag 366);

Es un compuesto químico que posee el esqueleto de un anillo bencénico unido a

un solo oxígeno. Deriva de un fenilpropanoide al que se le delecionaron dos
carbonos de la cadena propánica. Es biosintetizada por las plantas por la vía del
ácido shikímico, a partir de fenilalanina.

OH Ac 2O, NaOAc OAc

+
CHO H
O O C C
H CO2H
O-acetilcumárico
Fig.1 Estructura de la reacción para la obtención del O-acetilcumárico

Las cumarinas se consideran todo un grupo de metabolitos fenólicos secundarios

de las plantas, que comparten la misma vía biosintética y esqueleto químico.

O O
Cumarina

O H3 C
O O O
O H3 C
Angelicina Xantiletina
Fig.2,3,4 Estructura de la Cumarinas y dos tipos de cumarinas (Izq. Furanocumarina, Centro
Cumarina, Der. Piranocumarina)
En plantas, se encuentran en los tegumentos de las semillas, frutos, flores, raíces,
hojas, y tallos, aunque la mayor concentración se encuentra en general en frutos y
flores. Originalmente la cumarina se aisló del Haba Tonka.

Foto.1 Haba Tonka (Odorata Willd, Coumarouna odorata Aubl)

Su rol en las plantas parece ser de defensa, dándole propiedades de rechazo a la

alimentación, antimicrobiana, captadora de radiación UV e inhibidora de la
germinación.

Foto. 2 y 3 Izq fruto fresco y Der. Semilla (Haba Tonka odorata Willd, Coumarouna odorata Aubl)

La mejor propiedad conocida de las cumarinas indirectamente demuestra su rol en

la defensa de las plantas. La ingesta de cumarinas de plantas como el trébol
puede causar hemorragias internas en mamíferos y el uso de compuestos
relacionados para tratar y prevenir la apoplejía.
En la familia de las cumarinas encontramos furanocumarinas lineales como el
psolareno, furanocumarinas angulares como la angelicina, piranocumarinas como
el seselin en inglés, y cumarinas pirona-sustituidas. (G. J. Arango. Introducción al
metabolismo secundario compuestos derivados del ácido shikimico, Universidad de
Antioquia Facultad de química farmacéutica Medellín, mayo de 2010)

METODO GENERAL PARA LA OBTENCION DE COUMARINAS

Los métodos clásicos de obtención de CUMARINAS procedentes de productos

vegetales
· Éter de petróleo-acetato de etilo (2:1), (gel de sílice G).
· Metanol-agua (8:2 ó 6:4), (policaprolacitamo).
· Tolueno-formato de etilo-acido fórmico (5:4:1), (gel de sílice G).

Fig.3 Método de obtención de cumarinas cristalizadas.

Es difícil determinar criterios óptimos de la selección de extraentes con el fin de

sus propiedades físico-químicas (densidad, tensión superficial, viscosidad), que
están directamente relacionados con la penetración de partículas de disolvente en
el interior del material vegetal. Debido a cumarinas se han diferenciado las
estructuras químicas y varias propiedades hidrofílicas e hidrofóbicas, en los
métodos de extracción clásica (extracción Soxhlet, maceración, filtración,
extracción asistida por ultrasonidos) con muchos solventes de polaridad creciente,
y la fuerza de elución se utiliza. Éter de petróleo, gasolina, n-pentano, n-hexano,
éter etílico, acetona, metanol, o sus mezclas son en su mayoría aplicados.

OTROS MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE EMPLEADOS EN EL AISLAMIENTO

DE LAS CUMARINAS
El aislamiento de cumarinas a partir de materias vegetales también se puede
observar por varias otras maneras. Uno de estos métodos se basa en el tipo de
lactona de la estructura de cumarina. Solución de alcohol o alcohol en agua de
KOH se bloquea el anillo de lactona en cumarinas (en baño de agua hirviendo) y el
ácido cumárico. Luego, después de acidación estos ácidos se ciclan de nuevo a
cumarinas y, a continuación las cumarinas se pueden extraer con éter de petróleo.
 Figura 4. Aislamiento de las cumarinas y metabolitos vegetales secundarios en general.

Hay muchas desventajas del método descrito ya que las cumarinas son sustancias
inestables y son susceptibles a los ácidos y bases, que pueden destruir su
estructura epóxido y enlaces éster en las cadenas laterales.

Los otros dos métodos de aislamiento de cumarinas de las plantas son: (1) la
sublimación y la destilación de fraccionamiento en alto vacío y (2) la cristalización
de los disolventes orgánicos la más segura es la destilación con vapor de agua,
pero este método conduce al aislamiento de cumarinas y sustancias de lastre,
tales como aceites de éter, que puede hacer apenas difícil la separación de
cumarinas. (H.Wagner, S.Bladt. Plant drug analysis. a thin layer chromatography
atlas. Segunda edición. (2001).

Los métodos de aislamiento de cumarinas de las plantas son: la sublimación y la

destilación de fraccionamiento en alto vacío y la cristalización de los disolventes
orgánicos la más segura es la destilación con vapor de agua, pero este método
conduce al aislamiento de cumarinas y sustancias de lastre, tales como aceites de
éter, que puede hacer apenas difícil la separación de cumarinas.

Foto. 4. Placa Cromatográfica de Cumarinas

En la cromatografía para Cumarinas se utiliza el extracto E. Utilizando placas de
sílica gel GF 254 (2 cm de ancho x 10 cm de largo), como fase estacionaria y
como fase móvil, Cloroformo : acetona (9:1).

La siembra se realiza en la forma de banda. La propiedad física más usual para

reconocer una cumarina es la fluorescencia que ellas desarrollan ala luz UV (365
nm), la que es ampliamente utilizada para su detección en la cromatografía en
capa fina.

CAMARA ULTRAVIOLETA COLOR DE LAS MANCHAS

Luz normal Amarillo y Verde

365 nm Amarillo, Celeste y Verde

254 nm Verde y Celeste

Tabla. 1.Color de las Manchas en la Placa Cromatográfica de Cumarinas

En los resultados existe una concentración moderada de cumarinas a longitud de

onda 365 nm. se observan manchas de color celeste que confirma la presencia de
este metabolito.

CONCLUSIONES

Las cumarinas tienen diferentes aplicaciones farmacológicas, entre las principales

se destaca la de anticoagulante.

Se obtienen también moléculas de agua y etanol que se forman dentro de la

reacción para llegar a la cumarina, la desventaja de este método es que también
se puede obtener como resultado cromonas.

En la síntesis se tuvo como intermediario un éster cúmirico que se utiliza para

unirse posteriormente con el resorcinol y formar la molécula deseada. La
recristalización con etanol se realizó para poder eliminar impurezas insolubles en
caliente. El producto como tal tiene un aspecto cristalino de color amarillo muy
pálido y con un punto de fusión de 185.

BIBLIOGRAFÍA

M. W. Hajnos (Medical University of Lublin. Lublin, Poland), J. Sherma (Lafayette

College Easton, Pennsylvania, U.S.A), T. Kowalska (University of Silesia Katowice,
Poland). THIN LAYER CHROMATROGRAPHY IN PHYTOCHEMISTRY.
CHROMATOGRAPHIC SCIENCE SERIES. VOLUMEN 99 (2001). CRC Press
Taylor & Francis Group.

R.M Acheson. QUIMICA HETEROCICLICA Publicaciones Cultural. 1ª edición.

México (1981). p.p 361-363

Y.I. GUTIERREZ, M.M. MARTINEZ, G. del B. NOEL y J.L. MAYORAL.

EVALUACIÓN FARMACOGNÓSTICA Y FITOQUÍMICA PRELIMINAR DE
PHYLLANTHUS ORBICULARIS HBK Revista Cubana Farmacognosia 2000;
34(1):56-62 Instituto de Farmacia y Alimentos UNIVERSIDAD DE LA HABANA

H.Wagner, S.Bladt. PLANT DRUG ANALYSIS. A THIN LAYER

CHROMATOGRAPHY ATLAS. Segunda edición. Editorial Springer (2001).

G. J. ARANGO. INTRODUCCIÓN AL METABOLISMO SECUNDARIO

COMPUESTOS DERIVADOS DEL ÁCIDO SHIKIMICO. UNIVERSIDAD DE
ANTIOQUIA, Facultad de Química Farmacéutica Medellín, mayo de 2010