UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARABA - UFPB CENTRO DE CINCIAS HUMANAS SOCIAIS E AGRRIAS - CCHSA BACHARELADO EM AGROINDSTRIA

ESPECTROFOTOMETRIA - ULTRAVIOLETA/VISVEL (UV/VIS)

Jos Itamar de Siqueira Lucena

Bananeiras - PB Maio / 2011

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Resumo

apresentado como exigncia da fsico - qumica do

Disciplina Anlise

Curso de Bacharelado em Agroindstria da Universidade Federal da Paraba.

Bananeiras PB Maio / 2011

Sumrio
1. INTRODUO ................................ ................................ ................................ .......................... 1 2. APLICAES DA TCNICA ................................ ................................ ................................ ... 2 3. TERMOS MAIS USADOS NA ESPECTROFOTOMETRIA ................................ ..................... 2 3.1. TERMOS TCNICOS e SIGNIFICADO ................................ ................................ ............. 2 4. A PREPARAO DE UM PADRO ESPECTROFOTOMTRICO ................................ ......... 4 4.1. PROCEDIMENTOS ................................ ................................ ................................ ............ 4 4.2. CONDIES DE ANLISE NO ESPECTROFOTMETRO DE DUPLO FEIXE: ........... .5 5. LEITURA DAS ABSORBNCIAS DOS PADRES............................................................. .......5 6. ANLISE QUANTITATIVA POR ADIO DE PADRO ................................ ...................... 5 7. CONSTRUO DA CURVA PELO EXCEL ................................ ................................ ............ 6 7.1. Exemplo de uma Sequncia da construo: ................................ ................................ .......... 6 8. CLCULO DA CONCENTRAO DO FOSFATO ................................ ................................ . 7 9. O ESPECTROGRAMA ................................ ................................ ................................ .............. 7 10. ESPECTRO ELETROMAGNTICO ................................ ................................ ....................... 8 11. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE FOSFATO NUMA AMOSTRA ................... 8 11.1. Clculo da concentrao do fosfato ................................ ................................ .................... 8 12. CONSTRUO DA CURVA DE CALIBRAO, MTODO DA ABSORTIVIDADE ......... 9 13. DETECTORES ................................ ................................ ................................ ......................... 9 14. CALIBRAO DO ESPECTROFOTMETRO UV/VIS ................................ ...................... 13 15. REFERENCIAS................................ ................................ ................................ ...................... 13

ESPECTROFOTOMETRIA - ULTRAVIOLETA/VISVEL (UV/VIS)

1. INTRODUO
Espectrofotometria UV-visvel uma tcnica analtica que permite determinar a concentrao de um composto em soluo. Baseia-se em que as molculas absorvem a radiao eletromagntica e, por sua vez que a quantidade de luz absorvida depende da forma ineal l concentrao. Para fazer este tipo de medida usa um espectrofotmetro, que podem ser selecionados de comprimento de onda luz que passa atravs de uma soluo e medir a quantidade de luz absorvida pela o mesmo. A espectrofotometria pode denominar-se, como um mtodo analtico espectrofotomtrico de absoro, na qual as espcies absorventes de uma amostra a serem analisadas, so colocadas num recipiente chamado de cubeta, e ao passar um feixe de radiao monocromtica atravs da dela, uma parte da energia radiante absorvida e a outra absorvida pelo meio. Esta energia medida expressa em % de transmitncia ou em absorbncia. A quantitativa regida pela Lei de Lambert-Beer, na qual estabelece a relao entre a concentrao e a quantidade de radiao absorvida por uma espcie qumica. A= log (I0/I) = log1/t = log100/%t = ai x ci x d. onde: A = log I0 /I A = log 1/T A = 100 /%T A = ai.ci.d A = absorbncia ou densidade tica; I0 = intensidade da radiao incidente; I = intensidade da radiao transmitida; ci = concentrao do componente i (g/l); d = espessura da clula (cm); ai = absortividade ou coeficiente de absoro ou coeficiente de extino do componente i; I / I0 = transmitncia (T);

2. APLICAES DA TCNICA
O espectro ultravioleta e visvel nos fornece informaes limitadas sobre as estruturas qumicas de uma substncia. Mas, por causa da sensibilidade destas tcnicas e do alto grau de prec iso e exatido em suas medidas, elas so empregadas extensivamente em determinaes quantitativas. As aplicaes da espectrofotometria so para determinao de compostos orgnicos e inorgnicos, resumindo: 1-) Anlise comparativa de substncias (problema e padro); 2-) Anlise de compostos orgnicos e inorgnicos que apresentam ligaes duplas e triplas, ligaes conjugadas , cromforos , complexos inorgnicos com metais de transio; 3-) Em compostos orgnicos que apresentam grupos carbonilas, dienos conjugados , aromtico, etc. A espectrofotometria UV//VIS se aplica a molculas orgnicas, ons inorgnicos ou complexos em dissoluo e molculas que apresentam conjugao. Esta tcnica pode ser usada em determinaes qualitativas e quantitativas. Esta tcnica muito usada em laboratrios de controle de qualidade, pesquisa e desenvolvimento de anlises clnicas e toxilgicas. Uma larga aplicao na indstria qumica nas anlises de guas: potvel, caldeiras, resfriamento e na preparao de gua desmineralizada, onde se determina principalmen ferro, te sulfatos, fosfatos, cor apha e outras.

3. TERMOS MAIS USADOS NA ESPECTROFOTOMETRIA

Para se trabalhar com espectrofotometria ou outra tcnica de anlise instrumental, necessrio que conheamos, pelo menos, os termos tcnicos mais empregados, pois nos ajudar no momento em que precisarmos da opinio de outro profissional, quando tivermos uma dvida ou problema.

3.1. TERMOS TCNICOS e SIGNIFICADO

ABSORBNCIA- o logaritmo na base 10 do recproco da transmitncia. tambm chamada de densidade tica. TRANSMITNCIA- a proporo da fora radiante transmitida por uma amostra pela fora radiante incidente sobre a amostra. A unidade de transmitncia a porcentagem. LEI DE LAMBERT-BEER- A absorbncia de uma amostra homognea contendo uma substncia absorvente, diretamente proporcional a concentrao. da substncia absorvente.

COMPRIMENTO DE ONDA- A distncia, medida atravs da linha de propagao, entre dois pontos que esto em fase sobre ondas adjacentes expressas pelas seguintes unidades: nm ou um. ABSORTIVIDADE MOLAR- o produto entre a absortividade 'a' e a massa molecular da substncia. FREQUNCIA- o nmero de ciclos por unidade de tempo. POSIO ESPECTRAL- o efeito comprimento de onda ou nmero de onda de um feixe monocromtico da energia radiante. ABSORTIVIDADE- A razo da absorbncia dividida pelo produto da concentrao de uma substncia (em gramas por litro g/l), e a amostra com caminho tico (em cm). NGSTRON- a unidade de comprimento igual 1 / 6438.4696 do nmero de onda ou a linha vermelha do Cd.Para finalidades prticas, ela considerada igual a 10E-8cm. ESPECTRO DE ABSORO- um grfico de absorbncia ou outra funo de absorbncia versus o comprimento de onda ou outra funo do comprimento de onda. SOLUO EM BRANCO- Soluo de referncia preparada contendo todos os reagentes e com igual diluio, usada para zerar o espectrofotmetro antes da leitura de uma amostra ou padro. LINHA DE BASE- Uma linha desenhada num espectro de absoro para representar um ponto de referncia estvel uma funo incidente de fora radiante sobre uma amostra num dado comprimento de onda ou frequncia. MICRMETRO- Unidade de comprimento (um) igual 10E-6 metros. CONCENTRAO- Quantidade da substncia contida numa quantidade de amostra. Em espectrofotometria de absoro usualmente expressa em gramas por litro (g/l). AMOSTRA PADRO- Um material de composio definida com semelhana qumica e material de natureza fsica, com o qual o analista espera ser ideal, e dos quais empregado para calibrao. NANMETRO- Unidade de comprimento igual milsima parte do micrmetro. aproximadamente, mais no exatamente, igual a 10 ngstrons ou 10-9 cm. BANDA DE ABSORO- Uma regio do espectro de absoro da qual a absorbncia atinge o mximo. RESOLUO- A ASTM define resoluo como o mnimo intervalo de comprimento de onda entre bandas de absoro estreitas que podem ser separadas pelo espectrofotmetro. LBE Largura da banda espectral- a medida da pureza espectral ou monocromaticidade. CROMFORO-Parte da molcula que absorve a radiao um determinado comprimento de onda.

4. A PREPARAO DE UM PADRO ESPECTROFOTOMTRICO

Para se trabalhar com espectrofotometria, utilizando um mtodo quantitativo, necessrio que faamos uma calibrao com padres cujas concentraes de componentes sejam prximas as da amostra que iremos analisar. A preparao de um padro espectrofotomtrico no tarefa difcil de realizar, porm, necessrio que antes da preparao, conheamos algumas propriedades dos componentes que faro parte deste bem como, para definir a sua composio, a origem da amostra que ser analisada. As purezas de todos os reagentes devero ser conhecidas. Todos os solventes empregados devero ser de grau espectrofotomtrico e a gua destilada ou a mais pura possvel. Abaixo voc encontra um procedimento de determinao de determinao de fosfato em guas de caldeira . As leituras de absorbncia so ilustrativas.

4.1. PROCEDIMENTOS
Para se preparar de um padro espectrofotomtrico necessitamos realizar os seguintes passos: 1) selecionar os reagentes que faro parte do padro com suas respectivas purezas conhecidas; 2) selecionar os materiais e equipamentos que sero usados: seringas, balana analtica, papel absorvente,e o recipiente onde ser preparado o padro (frasco). Todo o material utilizado dever ser limpo com detergentes ou com soluo sulfocrmica, para que todo material orgnico seja eliminado e, aps a lavagem, secar em estufa a 100 C POR 1 hora. 3) Com base na provvel concentrao dos componentes da amostra, preparar uma soluo padro de trabalho, que servir para a preparao dos padres da curva de calibrao. Este procedimento facilita a preparao dos padres, que necessitar apenas de diluies. A soluo padro de estoque, dever ser preparada pesando-se, 0,7165g de di-hidrognio fosfato de potssio ( KH2PO4 ), previamente seco entre 110-115 C durante uma hora, e resfriado no dessecador por 20 minutos. Dissolver com gua destilada, transferir par balo volumtrico de 100 ml e completar o volume. 1ml desta soluo corresponde a 0,5 mg de PO4. Armazenar esta soluo em frasco de polietileno. Diluir a 25 ml da soluo padro de estoque,em um balo volumtrico de 250 ml em gua destilada.Esta ser a soluo de trabalho na qual 1mml corresponde a 0,05 mg de PO4. A cubeta dever ser lavada com a soluo para leitura. Pelo menos trs lavagens.

4.2. CONDIES DE ANLISE NO ESPECTROFOTMETRO DE DUPLO FEIXE:

Comprimento de onda= 420 nm; Cubeta de 1 cm; Fenda=1nm.

5. LEITURA DAS ABSORBNCIAS DOS PADRES

Aps o ajuste do equipamento, para as condies acima citadas, preparar os padres para a leitura. Adicionar em cada balo de padro e num balo que ser o branco, 10 ml de soluo de vanadomolibdato de amnio completando em seguida, o volume com gua destilada. Homogeneizar as solues. Esperar 20 minutos para o desenvolvimento da cor. Medir a absorbncia de cada padro, zerando o aparelho com a soluo em branco, tomando a mesma como referncia. Traar um grfico lanando em ordenadas os valores correspondentes s absorbncias e nas abscissas os valores das concentraes individuais dos padres do fosfato.

6. ANLISE QUANTITATIVA POR ADIO DE PADRO

A Determinao da concentrao de uma substncia atravs da adio de padres, consiste em elaborar padres a partir da prpria amostra, seguindo as seguintes etapas: 1) obter o espectro da substncia j conhecida; 2) medir a absorbncia da banda do espectro, escolhida referente ao que se deseja quantificar ; 3) preparar os padres, adicionando-se quantidades conhecidas da substncia pura; 4) fazer a leitura de cada padro, e atravs dos espectros obtidos, medir a absorbncia de cada um. Anotar os valores; 5) traar um grfico de ABS em funo da quantidade de substncia adicionada; 6) extrapolar a curva obtida at a interseco com o eixo X, encontrando-se o valor da substncia na amostra; Traar um grfico lanando em ordenadas os valores correspondentes s absorbncias e nas abscissas os valores das concentraes individuais dos padres. Veja um exemplo abaixo.

7. CONSTRUO DA CURVA PELO EXCEL

7.1. Exemplo de uma Sequncia da construo:
1) digitar em duas colunas paralelas os valores das concentraes e das respectivas abso rbncias dos padres. 2) com a utilizao do mouse, selecionar todos as colunas da tabela elaborada;

3) clicar no cone de construo de grficos no EXCEL; 4) selecionar o tipo disperso, o primeiro subtipo que compara pares de valores e clic com o ar mouse em avanar duas vezes. 5) digitar em ttulo do grfico : CURVA DE FOSFATO EM GUAS 6) digitar em eixo dos valores(x): CONCENTRAO(ppm). 7) digitar em eixo dos valores (y): ABSORBNCIA, e em seguida clicar em avanar, em seguida clicar com o mouse em concluir.

8) expandir a rea do grfico ,para uma melhor visualizao, atravs do arraste do mouse. 9) com a ajuda do mouse, clicar num dos pontos da curva no grfico.Todos os pontos da curva ficaro amarelos. 10) clicar em grfico na barra superior e na janela que abre, clicar em adicionar linhas de tendncia. Na tela que abre, selecionar a opo linear. 11) clicar na tela adicionar linhas de tendncia, em opes. Marque os campos: definir interseo =0, exibir equao no grfico e exibir valor de R-quadrado no grfico. Clicar em OK. Para um melhor destaque dos valores de Y e R2, marque a rea destes e clicar em cor do preenchimento (selecione a sua cor) na barra superior do EXCEL. 12) Calcular a concentrao do Fe na amostra.

8. CLCULO DA CONCENTRAO DO FOSFATO

Abaixo encontramos o clculo para determinar a concentrao de fosfato de uma amostra desconhecida , a partir da absortividade do fosfato , utilizando uma cubeta de 1cm .Veja abaixo a frmula de clculo da concentrao de fosfato. A concentrao do fosfato da amostra com relao a uma leitura de absorbncia igual a 0,258 ppm FOSFATO = ABSORBNCIA * 66,667 ppm Fe = 0,258 *66,667= 17,20 ppm ou mg/l.

9. O ESPECTROGRAMA
O grfico gerado durante uma anlise espectrofotomtrica, resultada num grfico de transmitncia ou absorbncia, que est relacionado com a concentrao da espcie absorvente.

10. ESPECTRO ELETROMAGNTICO

Representa as diferentes regies de bandas e natureza das alteraes provocadas pela radiao correspondente. A luz visvel representa apenas uma banda muito estreita do espectro eletromagntico e considera-se que esta est compreendida entre 380 e 780 nm (3800 e 7800 ngstron). A luz ultravioleta corresponde regio do espectro entre 210 e 380 nm (2100 e3800 ngstron). Na regio do ultravioleta e do visvel ocorrem as transies atmicas ou moleculares: eltrons de valncia e excitao eletrnica.

11. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE FOSFATO NUMA AMOSTRA

Os procedimentos para a anlise da amostra so os seguintes: 1- Filtrar 10 ml da amostra para um balo volumtrico de 50 ml; 2- adicionar 10 ml da soluo de vanadomolibdato de amnio; 3- agitar para homogenizar a amostra, completar o volume at a marca com gua destilada, aguardar 20 minutos para o desenvolvimento da cor; 4- fazer a leitura da amostra, nas mesmas condies que foram feita a leitura dos padres. Uma soluo em branco dever ser preparada para zerar o equipamento, antes da leitura da amostra.

11.1. Clculo da concentrao do fosfato

Abaixo encontramos o clculo para determinar a concentrao de fosfato de uma amostra desconhecida , a partir da absortividade do fosfato , utilizando uma cubeta de 1cm .Veja abaixo a frmula de clculo da concentrao de fosfato. A concentrao do fosfato da amostra com relao a uma leitura de absorbncia igual a 0,258. Concentrao (mg/l) ou ppm = absorbncia / absortividade; Concentrao (mg/l) ou ppm = 0.258 / 0,015; Concentrao (mg/l) ou ppm = 17,2.

12. CONSTRUO DA CURVA DE CALIBRAO, MTODO DA ABSORTIVIDADE

A forma mais simples, de se construir a curva de calibrao, calcular a absortividade da espcie qumica a cada concentrao, e no final tira-se a mdia destes. A absortividade, neste caso calculada dividindo-se cada valor individual de concentrao pela sua respectiva absorbncia seguindo a frmula: Absortividade=absorbncia / concentrao X d. Onde: d= espessura da clula igual a 1 cm.

13. DETECTORES
Os detectores so os responsveis pela deteco dos componentes de uma amostra. Eles medem e indicam a intensidade de luz que passa atravs da cubeta. So os transdutores que convertem energia radiante em sinal eltrico. A escolha do comprimento de onda importante, pois, e depende do material a ser analisado. A fonte de radiao (lmpada) ser selecionada de acordo com o poder de absoro da substncia a ser determinada, que compe a amostra. As principais caractersticas dos detectores que devem ser consideradas so as seguintes: seletividade, sensibilidade, resposta, rudo/quantidade mnima detectvel e linearidade. Os detectores de radiao usados para operar na regio do ultravioleta e visvel so os seguintes: clulas voltaicas: a energia radiante gera uma f.e.m na interface de um semicondutor e um metal. clulas fotoeltricas: a energia radiante provoca a emisso de eltrons a a partir de uma superfcie slida. tubos fotomultiplicadores: So clulas fotomultiplicadoras de mltiplos estgios. Elas so muito usadas.

14. CALIBRAO DO ESPECTROFOTMETRO UV/VIS

A calibrao do comprimento de onda dos espectrofotmetros na regio do ultravioleta e visvel realizada com a utilizao do arco de quartzo-mercrio e um filtro de vidro de xido de holmium, comumente usados como padro.

15. REFERENCIAS
Photographic Chemistry 2076-302 Laboratory: 5 Spectrophotometry and Beer's Law. Disponvel em: http://www.rit.edu/~bekpph/Chemistry/5_Spectrophotometry.html. Acesso em: 27/05/2011. Color and Vision. Disponvel em: http://www.glenbrook.k12.il.us/gbssci/phys/Class/light/u12l2c. html. Acesso em: 27/05/2011. Spectrophotometry. Disponvel em: http://fig.cox.miami.edu/~ddiresta/bil256/Lab1.htm. Acesso em: 27/05/2011. Visible Light Waves. Disponvel em: http://imagers.gsfc.nasa.gov/ems/visible.html. Acesso em: 27/05/2011.