Apoptosis

La apoptosis es una forma de muerte celular, que est regulada genticamente. La muerte celular programada es parte integral del desarrollo de los tejidos tanto de plantas como de animales pluricelulares ( metazoa). En animales, la forma de muerte celular programada ms corriente es la "apoptosis". Cuando una clula muere por apoptosis, empaqueta su contenido citoplasmtico, lo que evita que se pr oduzca la respuesta inflamatoria caracterstica de la muerte accidental o necrosis. En lugar de hincharse o reventar y por lo tanto, derramar su contenido intracelular daino enzimtico, hacia el espacio extracelular-, las clulas en proceso de apoptosis y sus ncleos se encogen, y con frecuencia se fragmentan conformando vesculas pequeas que contienen el material citoplasmtico. De esta manera, pueden ser eficientemente englobadas va fagocitosis y, consecuentemente, sus componentes son reutilizados por macrfagos o por clulas del tejido adyacente.
Va extrnseca

La va extrnseca o de los "receptores de muerte" establece conexiones con el espacio extracelular, recibiendo seales proapoptticas desde el exterior y de las clulas vecinas. Dos familias de receptores se han identificado con estas caractersticas: la protena Fas y el factor de necrosis tumoral (TNF). La protena transmembrana Fas en su porcin intracelular enlaza con un factor intermedio denominado FADD (factor associated death domain), nombre que slo seala que est comprometido con la zona de la molcula Fas que participa en la muerte celular, activando las caspasas -8 y -10. En cambio, si la parte interna de la molcula se asocia a otro factor llamado DaXX, se activan proten-kinasas que conducen al efecto contrario, es decir, estimulan el ciclo celular y la mitosis. Esta va Fas permanece inactiva hasta que se produce en su parte externa el enlace con un cofactor llamado ligando Fas, protena que acta como detonador que enciende una va en que slo las caspasas estn inactivas y el resto de la cadena est preparado para recibir el enlace exterior. Esta caracterstica permite actuar con gran rapidez sin necesidad de sintetizar otros factores. Algo similar sucede con el otro receptor de membrana TNF. Su porcin intracelular conecta con protenas como Tradd (TNF receptor associated death domain) y Raidd (receptor associated interleukine death domain) que activan caspasas "iniciadoras" de la apoptosis. Pero si se asocian a otro

complejo llamado Traf (TNF receptor associated factor) activan proten kinasas y estimulan la proliferacin celular, es decir, el efecto contrario.
Va intrnseca o mitocondrial

Otra va de induccin de apopt osis es la va llamada mitocondrial. Las protenas de la familia de Bcl-2 regulan la apoptosis ejerciendo su accin sobre la mitocondria. La activacin de protenas pro -apoptticas de la familia de Bcl-2 produce un poro en la membrana externa de las mitocondrias que permite la liberacin de numerosas protenas del espacio intermembrana; entre ellas, el citocromo c. El citocromo c, una vez en el citosol, a ctiva un complejo proteico llamado "apoptosoma", que activa directamente a la caspasa -9. Una vez que la caspasa-9 est activada, sta activa a las caspasas efectoras como la caspasa-3, lo que desencadena las ltimas fases de la apoptosis. Las protenas de la familia de Bcl-2 se agrupan en tres familias: la familia de las protenas antiapoptticas (Bcl-2, Bcl-Xl, Mcl-1 y otras); la familia de protenas proapoptticas de tipo "multidominio" (Bax y Bak) y las protenas proapoptticas de tipo "BH3-only" (Bid, Bim, Bad y otras). Las protenas tipo multidominio pueden producir poros por si solas en liposomas, lo que indica que probablemente son suficientes para formar el poro mitocondrial que permite la liberacin del citocromo c. Las protenas tipo BH3-only activan a estas protenas, y las antiapoptticas inhiben la formacin del poro. Estas protenas son los reguladores ms importantes del proceso de apoptosis. Adems de la salida de citocromo c desde la mitocondria, otra protena llamada SMAC/DIABLO, que es inhibidor de los inhibidores de caspasas (IAPS) sale de la misma. As se tiene una va en la que la caspasa efectora est libre de actuar (dado que sus inhibidores fueron neutralizados por SMAC/DIABLO). La va mitocondrial puede conectarse tambin con la v a de receptores de muerte, ya que una vez activada la caspasa -8 por dichos receptores, esta caspasa activa a la protena Bid, lo que provoca la apertura del poro mitocondrial y la activacin de la caspasa -9.
Funciones de la apoptosis Eliminacin de tejidos daados o infectados

La apoptosis puede ocurrir, por ejemplo, cuando una clula se halla daada y no tiene posibilidades de ser reparada, o cuando ha sido infectada por un virus. La "decisin" de iniciar la apoptosis puede provenir de la clula misma, del tejido circundante o de una reaccin proveniente del sistema inmune. Cuando la capacidad de una clula para realizar la apoptos is se encuentra daada (por ejemplo, debido a una mutacin), o si el inicio de la apoptosis ha sido bloqueado (por un virus), la clula daada puede continuar dividindose sin mayor restriccin, resultando en un tumor que puede ser de carcter canceroso. Por ejemplo, como parte del "secuestro" del sistema gentico de la clula llevado a cabo por los virus del papiloma humano (VPH), un gen denominado E6 se expresa originando un producto que degrada la protena p53, vital para la ruta apopttica. Tambin condiciones de estrs como la falta de alimentos, as como el dao del ADN provocado por txicos o radiacin, pueden inducir a la clula a comenzar un proceso apopttico. Pero no toda la muerte celular ocurre por apoptosis; tambin existe la necrosis, una forma descontrolada de muerte celular. Una ejemplo sera la necrosis mediada por la enz ima nuclear, poliADP-ribosa polimerasa-1 (PARP-1), crucial en el mantenimiento de la integridad genmica. Un activacin masiva de dicha enzima puede vaciar la clula de nucletidos ricos en energa, provocando una cadena de transduccin de seales del ncleo a la mitocondria que iniciara la necrosis.
Desarrollo

Durante el desarrollo embrionario la apoptosis regula el crecimiento celular y tisular, desde la desaparicin de las membranas interdigitales para el desarrollo normal de los dedos hasta la apoptos is en el ojo para la correcta formacin del cristalino y los prpados pasando por multitud de procesos en estudio. En los animales que pasan por distintos estadios la apoptosis que regula el desarrollo controla adems el paso de un estado de crecimiento al siguiente (larva, ninfa, juvenil, adulto, etc.). En el caso de las ranas la apoptosis controla, durante la metamorfosis, la desaparicin de la aleta caudal de los renacuajos.
Homeostasis

En un organismo adulto, la cantidad de clulas que componen un rgano o tejido debe permanecer constante, dentro de ciertos lmites. Las clulas de la sangre y de piel, por ejemplo, son constantemente renovadas por sus respectivas clulas progenitoras. Por lo tanto, esta proliferacin de nuevas

clulas tiene que ser compensada por la muerte de otras clulas. A este proceso se le conoce como homeostasis, aunque algunos autores e investigadores han sugerido homeocinesis como un trmino ms preciso y elocuente. La homeostasis se logra cuando la relacin entre la mitosis y la muerte celular se encuentra en equilibrio. Si este equilibrio se rompe, pueden ocurrir dos cosas:
y y

Las clulas se dividen ms rpido de lo que mueren, desarrollando un tumor. Las clulas se dividen ms lentament e de lo que mueren, producindose un grave trastorno de prdida celular.

Ambos estados pueden ser fatales o potencialmente dainos.

Regulacin del sistema inmunitario

Ciertas clulas del sistema inmunitario, los linfocitos B y linfocitos T, son sofisticados agentes de la respuesta defensiva del organismo frente a infecciones as como clulas propias que hayan adquir ido o desarrollado algn tipo de malignidad. Para llevar a cabo su trabajo, las clulas B y T deben tener la habilidad de discriminar lo propio de lo extrao y lo sano de lo enfermo, gracias a la especialidad de sus receptores. De hecho, los linfocitos T citotxicos pueden ser activados por fragmentos de protenas expresadas inapropiadamente (derivadas, por ejemplo, de una mutacin maligna) o por antgenos extraos producidos como consecuencia de una infeccin intracelular. Despus de activarse tienen la capacidad de migrar, proliferar y reconocer las clulas afectadas, induciendo una respuesta de muerte celular programada. Los receptores de las clulas B y T inmaduras no se generan por procesos de una elevada precisin, sino por procesos aleatorios de elevada capacidad para generar variabilidad. Esto significa que muchas de estas clulas inmaduras pueden no ser efectivas (porque su receptor no sea capaz de unir ningn antgeno conocido) o ser peligrosas para el propio organismo porque sus receptores sean capaces de reconocer con elevada afinidad antgenos propios. Si estas clulas fuesen liberadas sin otros procesamientos, muchas podran volverse autorreactivas y atacar clulas sanas. El mecanismo por el que el sistema inmune regula este proceso es la eliminacin tanto de los no efectivos como los potencialmente autorreactivos mediante apoptosis.

Como se ha descrito en los anteriores apartados, todos los tejidos dependen de una continua recepcin de seales de supervivencia. En el caso de las clulas T, mientras se desarrollan y maduran en el timo, las seales de supervivencia dependen de su capacidad para reconocer antgenos extraos. Aquellas que no superan esta prueba, alrededor de un 97 % de las clulas T producidas, son eliminadas por apoptosis. Las supervivientes son testadas a su vez frente a antgenos propios, y aquellas que reconocen estos antgenos con elevada afinidad son eliminadas de la misma manera. Por lo tanto, el desarrollo de un sistema inmune maduro y efectivo depende de una serie de reguladores positivos y negativos de las vas de apoptosis.
Patologas vinculadas con la apoptosis

La apoptosis es una funcin biolgica de gran relevancia en la patogenia de varias enfermedades estudiadas hasta el momento. Podemos destacar el cncer, malformaciones, trastornos metablicos, neuropatas, lesiones miocrdicas y trastornos del sistema inmunitario. 1. Enfermedades asociadas a inhibicin de apoptosis 1. Cncer: linfoma no Hodgkin folicular (Bcl-2 +), carcinoma (p53 +), tumores hormono-dependientes 2. Enfermedades autoinmunitarias: lupus eritematoso sistmico, glomerulonefritis autoinmunitaria 3. Infecciones virales: Herpesvirus, Poxvirus, Adenovirus 2. Enfermedades asociadas a aumento de apoptosis 1. Sida 2. Enfermedades neurodegenerativas: enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrfica, retinitis pigmentosa, degeneracin cerebelosa 3. Sndromes mielodisplsicos (MDS): anemia aplstica 4. Dao isqumico: infarto de miocardio, apopleja, dao por reperfusin, dao heptico por alcoholismo Organelos involucrados en la muerte celular apopttica 1. Mitocondria El dios romano Jano (en latn Janus) era un dios que tena dos caras mirando hacia ambos lados de su perfil, siendo el dios de las puertas, los comienzos y los finales. Una funcin similar tiene la mitocondria, mantiene lavida celular a travs de la produccin de ATP y desencadena la muerte al liberar protenas del espacio intermembrana,

tales como citocromo-c, Smac/Diablo (Smac: second mitochondrial activator of caspases: DIABLO: direct IAP binding protein with low pI) u Omi (Htr2), al citosol. Las dos ltimas compiten con las caspasas, para unirse a las protenas inhibidoras de la apoptosis (IAP), ya que ella une caspasas y las marca para su posterior ubiquitinacin. El citocromo c participa en la formacin del Apoptosoma, que junto a la molcula adaptadora Apaf-1, resultan en el reclutamiento y activacin de la caspasa 9, requiriendo para esto dATP o ATP. Posteriormente la caspasa 9 activa las procaspasas 3 y 7, siendo estas caspasas efectoras las responsables del clivaje de varias protenas que llevan a la morfologa y bioqumica de la apoptosis. Lo interesante proviene de los estudios realizados sobre la regulacin de la liberacin del citocromo-c. La membrana interna mitocondrial presenta mltiples complejos enzimticos (cadena transportadora de electrones, la ATP sintetasa) y protenas transportadoras, como el traslocador de nucletidos de adenina (ANT, del ingls adenine nucleotide translocator). Adems posee unas invaginaciones denominadas crestas, donde se encuentra secuestrado y unido al fosfolpido de membran a cardiolipina, el 85% del citocromo -c, el cual es utilizado

por el complejo IV en la produccin de energa. Por el contrario, la membrana externa carece de crestas mitocondriales, y en condiciones fisiolgicas, es permeable al paso de iones y de metabolit os con pesos moleculares inferiores a 6.000 Da, a travs del canal aninico dependiente de voltaje (VDAC, del ingls voltage dependent anion channel). El poro de permeabilidad transitoria mitocondrial (PPTM) es un complejo multiproteico, aun no totalmente dilucidado tanto en estructura como funcion, que se forma en las zonas de unin entre las membranas interna y externa de la mitocondria. En l participan protenas de localizacin citoplasmtica (hexocinasa), de la membrana externa (VDAC), de la membrana interna (ANT) y de la matriz mitocondrial (ciclofilina D) (9-11). EL mecanismo propuesto consiste en que cierto estimulo (sobrecarga de calcio o dao por radicales libres) produce una remodelacin del cuello de la cresta mitocondrial, que pasa de medir aproximadamente 20 nm a 60 nm, con lo que el citocromo c, que previamente se ha disociado de cardiolipina mediante oxidacin por ROS, puede acceder a la membrana externa, atravesndola va formacin de megacanales formados por combinacin de Bid, Bax y cardiolipina o por ruptura de la membrana externa si el volumen de la matriz se expande excesivamente (por apertura del PPTM o cierre deVDAC) (12,13). (Figura 1) Interesantemente, mitocondrias aisladas de ratones doble knock-out para ciclofilina-d, son resistentes al dao por isquemia-reperfusin, pero no a los estmulos apoptticos Esto nuevamente nos da evidencias de que existe cierta regulacin en el proceso necrtico (14). Ciertos autores proponen que la apertura masiva produce necrosis,

mientras que la apertura de una subpoblacin apoptosis. Todava quedan puntos por definir, como lo indican recientes publicaciones sobre el tema, pero el objetivo de esta revisin es dar una visin ms general, bastando lo ya delineado. 2. Lisosomas La liberacin de las protenas lisosomales se produce por permeabilizacin de la membrana lisosomal, la que puede ser causada por ROS o por acumulacin del detergente lisosomotrpico esfingosina (15). Un permeabilidad parcial se produce en la apoptosis, mientras que un quiebre masivo provoca necrosis. Las cistein proteasas catepsinas B y L y la aspatico proteasa catepsina D son las proteasas lisosomales mas abundantes y se ha reportado que pueden actuar activando caspasas o una va independiente de estas. Otros han reportando que su accin seria mas indirecta, gatillando la disfuncin mitocondrial y liberacin de las protenas proapoptticas (16). Adems Catepsina D puede activar a Bax, llevando a la liberacin de AIF de la mitocondria (17,18). 3. Retculo Endoplasmtico El retculo endoplasmtico (RE) es un importante sensor de estrs celular que puede detener la sntesis proteica y el metabolismo para reestablecer la homeostasis celular

(19). Incluso puede desencadenar apoptosis si el dao es muy intenso, inicindose como respue sta a protenas no plegadas o va liberacin de calcio en el citoplasma. Hetz y cols(20) mostraron que la acumulacin de protenas mal plegadas en el retculo endoplasmtico gatillara la respuesta adaptativa al estrs denominada respuesta aprotenas no plegadas (UPR unfolded protein response), la cual es mediada por una protena quinasa transmembrana y endoribonucleasa, la protena del RE IRE1a. La activacin de (IRE1a) requiere de Bax y Bak. Este hecho permite conectar fsicamente a los miembros de la va apopttica y de la UPR. Tambin es posible la activacin de la caspasa 12 posiblemente por va de la translocacin de Bim, un miembro de la familia BCL-2, al interior del RE (21). Adems, el estrs del RE puede inducir permeabilizacin de la mitocondria y entonces activar la va clsica, as como otras vas de muerte mitocondrial. Los miembros de la familia BCL-2 y el calcio citoplasmtico orquestan esta respuesta cruzada entre la mitocondria y el RE (22). Adems, el influjo intracelular de calcio causad o por el estrs sobre el RE, un organelo que actua como un deposito de calcio en la clula, induce la activacin de una familia de protenas citoslicas, las calpanas (calcium activated neutral proteases), las cuales se encuentran inactivas

en el citoplasma (23). Las calpanas actan rio abajo en la activacin de caspasas y son inhibidas por calpastatina, el cual a su vez es inactivado, al ser procesado por calpana o caspasas activas. Bax y otros de su tipo aun no bien identificados, estn involucrados en la asociacin entre calpanas y el sistema proteoltico de las caspasas. La manera en que se relacionan aun se desconoce (24). Adems se ha reportado que la cascada calpanacalpastatina puede inducir la liberacin de la catepsina lisosomal con la consiguiente muerte celular (23).

Fases de la apoptosis La evolucin de la apoptosis presenta tres fases que se pueden calificar como (a) la fase pre -mitocondrial o de induccin; (b) la fase de dao mitocondrial efectivo (fase efectora) y (c) la fase post-mitocondrial, degradativa o de lisis celular27, 28. La primera fase involucra a la membrana plasmtica y sus adyacencias. La segunda fase involucra a las membranas, la matriz mitocondrial. La tercera fase involucra a todas las estructuras celulares incluyendo al ncleo celular y termina con la citolisis. La Figura 1 ilustra sobre el desarrollo de la apoptosis y la funcin de los diferentes factores que la inducen y/o la

regulan. Durante la primera fase las clulas reciben diferentes estmulos apoptognicos extracelulares. Entre esos estmulos se cuentan: mutgenos53, drogas citotxicas54, 55, especies reactivas del oxgeno (EROS)56, 60, anoxia, glucocorticoides61, inmunoglobulinas, radiaciones ionizantes62, 63 y la hipertermia. Los glucocorticoides y las inmunoglobulinas actan sobre receptores especficos, a saber, GC y FAS (Figura 1). FAS (APO-1 o CD 95)9, 64, 65 es una protena de la membrana plasmtica designificativa importancia funcional que reacciona a anticuerpos anti-FAS formando complejos apoptognicos. FAS es un ejemplo de receptor apoptognico. La accin de FAS se ejerce por medio de radicales libres del oxgeno, por ejemplo, en monocitos64, pero en clulas tumorales el superxido inhibe la funcin de FAS65. Otro factor apoptognico importante es la ceramida, un producto de hidrlisis de los esfingolpidos6668. La ceramida liga al receptor FAS y libera un mensajero, posiblemente un ganglisido que acta sobre las mitocondrias. Durante esta fase de la apoptosis, las caspasas activadas actan sobre l as membranas mitocondriales, en particular sobre el poro mitocondrial de permeabilidad transitoria (PMPT)27, 28, 69 tambin llamado canal megamitocondrial (Figura 1, el poro). Durante la segunda fase de la apoptosis (fase

efectora), se producen cambios significativos en la funcin de las membranas mitocondriales, que se traducen en un incremento de la permeabilidad de las mismas. Se produce la apertura del poro de permeabilidad transitoria (PMPT)69. Estos efectos facilitan la salida de iones calcio de la matriz mitocondrial al citosol69,72, el colapso del potencial DY de la membrana mitocondrial29 -35, el aumento en la produccin de radicales libres del oxgeno en la misma45-50, lo mismo que la deplecin del GSH (glutatin reducido), del ATP y del ADP en la matriz mitocondrial73. Como resultado de esos efectos, se produce el aumento del volumen mitocondrial (swelling) que culmina en el estallido de la mitocondria (Figura 2). Durante la segunda fase, las clulas son programadas irreversiblemente para morir. La decisin entre muerte y vida, depende de la informacin suministrada por protooncogenes y genes onco-supresores (Figura 1). La accin especfica de esos factores se ver oportunamente. En esta fase se produce la activacin de las caspasas y los citados cambios en el voltaje y el potencial redox. En la tercera fase de la apoptosis, la salida de los factores apoptognicos mitocondriales, liberados al citosol, sumados a los generados en el mismo citosol promueven la destruccin de las protenas, del ADN, de l

ARN y de las membranas celulares consumando as la muerte celular. Algunas protenas liberadas tienen capacidad para activar caspasas y nucleasas citoslicas. En primer trmino, el citocromo c que junto con el factor Apaf-1, ATP y caspasa-9 forma el proteosoma (Figura 1). El citocromo c activa a la caspasa -3, que a su vez activa la endonucleasa nuclear. En segundo trmino, las mitocondrias apoptticas liberan una protena activa denominada AIP, que tambin activa las endonucleasas independientemente del c itocromo c. Por ltimo, las protenas mitocondriales intermembrana incluyen una ADNasa especfica que degrada la doble hlice del ADN28. Durante esta ltima fase, aparecen las caractersticas morfolgicas y bioqumicas de la apoptosis, a saber, condensacin de la cromatina, la fragmentacin del ADN, la degradacin masiva de protenas esenciales, nucleolisis y finalmente citolisis. Un comentario especial merece el efecto de la apertura incontrolada del PMPT para el desarrollo de la tercera fase de la apoptosis, en relacin con la entrada y salida de iones Ca2+ de las mitocondrias69 -72. Los iones Ca2+ son los reguladores ms potentes de la funcin del PMPT y tambin activadores efectivos de caspasas. Esosiones son captados rpidamente por un transportador unidireccional de la membrana mitocondrial interna y

desde la matriz mitocondrial actan sobre el PMPT regulando la apertura del mismo. Las concentraciones de Ca2+ menores de 10 M facilitan la accin de otros reguladores. Como la superficie de la membrana externa es mucho menor que el de la membrana interna, debido a la existencia de crestas en esta ltima, la apertura del PMPT origina el estallido de las membranas mitocondriales con liberacin de las protenas solubles presentes en el espacio intermembran a y en la matriz mitocondrial. Los efectos descriptos en las Figuras 1 y 2 constituyen una versin elemental de la apoptosis y su mecanismo. Las interacciones entre los distintos factores moleculares y enzimticos que intervienen en ese complejo proceso se sugieren por las flechas indicadoras. Las interacciones posibles superan lo descripto y constituyen temas de investigacin de gran actualidad.

Apoptosis y caspasas Las caspasas80-92 son proteasas dependientes de tioles (residuos de cistena), caracteriza das por su especificidad para hidrolizar pptidos y protenas en la vecindad de residuos asprticos. Su especificidad cataltica ha originado el trmino caspasa en el que la c representa al residuo cistena de la enzima y aspasa representa

residuos asprticos de la protena sustrato82,84. Por su estructura y actividad proteoltica especfica, se conocen por lo menos 10 caspasas que se ordenan por los nmeros correspondientes, caspasa-1, caspasa-2, caspasa-3, etc. Las caspasas actan en las mitocondri as, en el citosol y en el ncleo celular e incluyen los grupos siguientes82, 84: (a) mediadores de la inflamacin (caspasa-1, -4 y -5); (b) efectores de la apoptosis (caspasa-3, -7 y -2); (c) activadoras de caspasas apoptognicas (caspasas-6, -8, -9 y -10). Todas las caspasas tienen en su sitio activo una secuencia pentapeptdica QACXG (o sea Glu-Ala-Cys-X-Gly; X puede ser Arg, Glu o Gly). En la clula se sintetizan como pro-enzimas inactivas (procaspasas) que se pueden activar por autocatlisis. La actividad proteoltica depende del estado redox69 y del balance pro -oxidante/antioxidante86, 87 en la clula. Algunas caspasas son reguladas por el receptor FAS89, 92, por el citocromo c y por el factor inductor de la apoptosis AIF que pasan de las mitocondrias al citosol27 como consecuencia del dao mitocondrial inducido por la apoptosis. La actividad proteoltica de las caspasas est limitada por la naturaleza de las protenas sustrato82 -85. As el sustrato, PARP (poli-(ADP-ribosa)polimerasa), es

hidrolizado por la caspasa-3 en dos fragmentos, uno de los cuales contiene el extremo N-terminal y liga el ADN, mientras que el otro fragmento contiene el extremo Cterminal que ejerce la actividad cataltica. Otra protena sustrato atacada por las caspasas es la protena quinasa ADN-dependiente, una enzima que interviene en la reparacin de la doble-hlice del ADN. Durante la apoptosis esa protena-quinasa es degradada por la caspasa -5 pero no por las caspasas-1, -4 y -6. Su degradacin produce una disminucin significativa de la aptitud celular para reparar ADN lo que suprime una funcin homeosttica esencial y facilita la degradacin de la cromatina del ncleo. Otro sustrato es la laminina, una protena importante de la membrana del ncleo. La caspasa -6 parece ser la responsable de su degradacin cuya cintica es ms lenta que la de las otras protenas hidrolizadas por caspasas. Los oncogenes activan a las caspasas88. As, extractos de clulas transformadas por el oncogn adenovirus EA, (extractos transformados) activan la apoptosis, efecto que no se observa con los extractos testigos no-transformados. La actividad oncogn -dependiente de los extractos transformados, se debe a la accin del factor APAF-1, activo sobre la caspasa-9, lo que indica que esa caspasa es el iniciador de la actividad

apopttica. La caspasa -3 activa selectivamente al receptor89-92 a FAS, la familia de receptores del factor de necrosis tumoral89. La actividad de las caspasas diferencia la apoptosis de la necrosis celular85. La activacin de la caspasa-3 por el calcio activa la apoptosis nuclear y correlaciona los movimientos del calcio72 con el desarrollo pleno de la apoptosis. Las mitocondrias pueden liberar por lo menos dos factores fundamentales en la apoptosis: (1) el AIF que es capaz de activar a la caspasa 3, y a endonucleasas; (2) el citocromo c, que con dATP, el factor Apaf-3 y la caspasa 9, constituye el apoptosoma (Figura 1). Como resultado de esa conjuncin de factores, se activa la caspasa-3 que cliva y activa el factor de fragmentacin del ADN (DFF), un activador de endonucleasas que actan sobre el ADN nuclear. Por su parte, el citocromo c activa las caspasas en su forma holo, con el grupo hemo unido, aunque parece ser que esa estructura ms su funcin como aceptor de electrones son esenciales para la actividad sobre las caspasas. Parecera muy factible que la activacin primaria de las caspasas no es suficiente para disparar la cascada apopttica y que la liberacin de factores apoptognicos mitocondriales liberados por las caspas as es requerida para llevar a cabo el proceso apopttico. Las caspasas

actan como ejecutantes principales de la apoptosis inducida por drogas90 mientras que en la apoptosis iniciada por los receptores apoptognicos activados, las caspasas forman, adems, una parte integral del mecanismo que conduce a la muerte celular.

Tcnicas de apoptosis