FACULTAD DE INGENIERIA Y TECNOLOGIA INGENIERIA CIVIL EN BIOTECNOLOGIA MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL.

CRECIMIENTO DE SUPERFICIES

ALUMNOS: ALVARO CAPPONI PATRICIO NUEZ CASANOVA NICOLAS PEREZ ROBERTO RODRIGUEZ

CONCEPCION, 02 DE JULIO DE 2009

INTRODUCCION Se sabe que en el aire se encuentran una serie de partculas y asociadas a stas se encuentran grandes poblaciones de microorganismos, en general bacterias y esporas de hongos, los que pueden colonizar materiales, superficies y cualquier medio apto para desarrollarse. Se entiende por crecimiento microbiano el aumento del nmero de microorganismos a lo largo del tiempo. Prcticamente, todas las bacterias pueden desarrollarse sobre medios de cultivo artificiales, lquidos y slidos. El crecimiento sobre medios slidos, en superficie, da lugar a la formacin de conglomerados o colonias que se manifiestan macroscpicamente. Las colonias son conjuntos integrados por miles de microorganismos procedentes de una sola clula (unidad formadora de colonia, UFC) que qued implantada en un punto concreto de la superficie del medio. Cada especie da lugar a colonias con aspecto morfolgico diferente de otras especies, lo que ayuda a orientar su identificacin. La cintica de crecimiento, en medios slidos, se puede estudiar siguiendo la evolucin del nmero de clulas viables por unidad de superficie o por unidad de masa. La aglomeracin de microorganismos da origen a los biofilms microbianos, que se definen como comunidades de microorganismos que crecen adheridos a una superficie inerte o un tejido vivo y embebidos en una matriz extracelular que ellos mismos han sintetizado. Representan la forma habitual de crecimiento de las bacterias en la naturaleza y su presencia ejerce un enorme impacto en diversos aspectos de nuestra vida, como son, el tratamiento de aguas residuales, la corrosin de materiales, la contaminacin de alimentos durante su procesamiento en la industria alimentaria, el colapso de tuberas, las interacciones planta-microorganismo en la rizosfera, la formacin de la placa dental, el desarrollo de infecciones crnicas sobre tejido vivo (mastitis, otitis, neumona, infecciones urinarias, osteomielitis) o asociadas a implantes mdicos, entre otros. MODELO GENERAL DE FORMACION DE BIOPELICULAS MICROBIANAS Para que las biopelculas se desarrollen se requiere de una serie de pasos altamente regulados, donde influyen factores ambientales, biolgicos y fsicos. La gentica de formacin de estas biopelculas depende de cada microorganismo, sin embargo las fases de su desarrollo son conocidas por su similitud. Los modelamientos bsicos de biofilms estn basados en tres principios fundamentales: Debe ser considerado el tipo de mecanismo de transporte del nutriente al microorganismo. Esto es regulado especficamente por la transferencia de masa a medida que el substrato difunde sobre la biopelcula. De lo anterior, desde un punto de vista ingieneril es importante predecir la etapa limitante en la velocidad global del proceso para saber cual es el efecto de las condiciones de operacin y diseo.

Esto ultimo es en base a ya una vez controlada la velocidad global del proceso, esta pueda sea tendida a realizar una interaccin de primer orden entre el producto generado y el sustrato consumido. (ni la cintica de formacin de producto, ni la transferencia de masa limitan la velocidad del proceso ya que ambas interacciones a velocidades similares, es decir, relacin 1:1). Debe ir considerado a partir del consumo de sustrato la velocidad de crecimiento del biofilm. Esta es regulada especficamente por la cintica de Monod donde estn involucradas la velocidad mxima de crecimiento terica con respecto a su sustrato especfico y a su constante de afinidad Ks. Debe ir considerada tambin una prediccin del mecanismo de necrosis y prdida o contraccin de biofilm.

Convergiendo ecuaciones y sealando sus condiciones de borde, estas constituirn el modelo completo para la modelacin de un biofilm. Una carencia importante de esta modelacin consiste en la misma evolucin del biofilm, ya que puede ser que su crecimiento se aleja de las condiciones establecidas anteriormente de linealidad. Es por esto que se debe adicionar a los criterios anteriores el ultimo que corresponde al modelamiento de una ecuacin para la evolucin del biofilm, que tambin facilita un sistema donde el numero de incgnitas es igual al numero de ecuaciones. Estos a travs de mtodos numricos o sistemas computacionales complejos pueden llegar a ser predecidos. Para realizar este tipo de relaciones se consideran como suposiciones principales: *La densidad del biofilm ser constante y ser as tambin una biopelcula homognea *Existir una carencia de inhibicin por sustrato *Existe un crecimiento regular de la biomasa al momento de formar la biopelcula y al detenerse su crecimiento *Los microbios no son capaces de perforar y penetrar la superficie *Los balances pueden o no realizarse en estado estacionario INFLUENCIA DE LA AGITACION, PH Y TEMPERATURA EN EL DESARROLLO DEL BIOFILM Dependiendo de la modelacin del transporte del sustrato a las clulas se conocer si la reaccin es dominada por la transferencia de masa o por la reaccin qumica de formacin de producto. Lo anterior se da a conocer en base a que la reaccin ms lenta en suceder ser la velocidad limitante de la formacin de la biopelcula y ser esta la velocidad que deber ser arreglada en base a posibles agitaciones del medio lquido o mediante alzas o disminuciones de pH y temperatura.

Si la reaccin es controlada por la transferencia de masa (TDM) para elevar esta difusin a una relacin de orden uno se puede agitar el medio liquido del cultivo y en cambio si la reaccin es controlada por la formacin de producto, para elevar esta velocidad se pueden cambiar las condiciones de pH y temperatura. EJEMPLO DE MODELAMIENTO: modelo ideal de crecimiento de hongos en una placa de agar
a

Este esquema representa el organizado modelo de crecimiento de biopelculas en la placa de agar por parte de los hongos. Este modelo fue planteado por Pirt y se hizo en base a algunas de las suposiciones anteriores ms las siguientes: El crecimiento exponencial depender solamente de la constante perifrica de crecimiento (w) El rea de corte del microorganismo (a) es rectangular

dm = mg El modelo general corresponde a: dt Donde m: biomasa h: la altura especfica de la biopelcula mg: biomasa contenida en w u: velocidad de crecimiento donde: mg = 2 r a
2 y m = r a

De lo anterior: r: radio de la colonia : densidad de la biomasa. De lo anterior reemplazando trminos, integrando con respecto a r y definiendo el rea de corte como a = wh, adems de la consideracin de la transferencia de masa en el proceso la correlacin segn el autor se expresa como: K r = w = k1 ( s0)1/2 Kr: coeficiente de crecimiento radial s0: concentracin inicial de sustrato k1: constante metablica particular para cada microorganismo.

MODELAMIENTO DE UN BIOFILM Considerando la formacin de una biopelcula de espesor L y de rea de transferencia de difusin A, un balance de masa en torno a un volumen diferencial de espesor dz es igual a: Acumulacin = flujo de entrada flujo salida consumo + produccin

Matemticamente lo dicho anteriormente:

Considerando estado estacionario

Donde Deff es el transporte molecular por conveccin por poros. Esto fue modelado definiendo las condiciones de borde siguientes:

Ante las condiciones de borde en z = L la resistencia a la transferencia de masa (TDM) es nula en el seno del fluido y en z = 0 (dc/dz=0), no hay flujo en la biopelcula. La densidad de flujo es cero a medida que la concentracin de sustrato difunde en la biopelcula (este va reaccionando). Ahora definiendo que:

Tenemos:

Donde podemos definir el modulo de Thiele, que corresponde a la velocidad de reaccin de primer orden dividida por una velocidad de difusin como:

Y considerando el espesor L constante y conocido se tiene:

Reemplazando :

Donde:

APLICACIONES DE MODELAMIENTOS DE COLONIAS EN SUPERFICIES SLIDAS El modelamiento del crecimiento de colonias en superficies slidas tiene una gran aplicacin en diferentes reas como en la minera por medio de la Biolixiviacin, en la produccin de reactores de lecho empacado o en la purificacin de aguas mediante equipos llamados biodiscos. Los biodiscos (rotating biological contactors RBC) son plantas depuradoras compactas en las cuales se realiza un proceso biolgico aerbico utilizado para el tratamiento secundario de lquidos residuales urbanos o industriales, especialmente los de alto contenido de materia orgnica (DBO) donde los microorganismos se adhieren a la superficie de discos rotarios de material plstico, inerte, que actan como soporte. El dispositivo consiste en un conjunto de discos plsticos, unidos a un eje horizontal que les imprime movimiento giratorio, facilitando con esto el contacto de los microorganismos adheridos a los discos (biopelcula), con aire y el agua residual a tratar con lo cual los microorganismos logran estabilizan la materia orgnica, al procesarlo como alimento para su ciclo vital. El tratamiento biolgico de lquidos residuales consiste principalmente en la estabilizacin de la materia orgnica por accin de los microorganismos que se alimentan de la misma, transformndola en productos ms oxidados y por lo tanto ms estables. Los microorganismos de la biopelcula adheridos al soporte, toman principalmente el oxgeno de la atmsfera, para la respiracin y se alimentan de materia orgnica contenida en el lquido residual, la cual difunde a travs de la biopelcula por diversos mecanismos.

Figura 1: Descripcin el ciclo vital del biofilm en tres pasos: (1) Establecimiento, (2) Crecimiento de colonias, (3) Fenmeno de pulular y separacin en grupos o dispersin de sembradores. (Stoodley y Dirckx, 2003) Las principales ventajas del sistema de biodisco son su eficiente remocin de DBO, acompaado de un bajo impacto ambiental por ausencia de gases,

olores y ruidos, adems de la facilidad en el control del proceso y la reduccin de los costos de operacin por el bajo consumo de energa necesaria para el funcionamiento del equipo debido al sistema de biopelcula fija adherida Se han realizado diferentes modelos matemticos, que simulan el proceso de tratamiento de las aguas residuales mediante el sistema RBC, en distintas condiciones ambientales y operacionales, los cuales han sido expresados mediante ecuaciones algebraicas y/o diferenciales que permiten conocer el desarrollo de la biopelculas en los biodiscos del equipo. Uno de los modelamientos matemticos mas actuales es el realizado para el proceso de biopelcula en biodiscos el cual consiste en un modelo de estado estable para la remocin de sustrato carbonoso soluble en biodiscos (sistemas RBC), en el cual incluyo la influencia de la velocidad de rotacin de los discos en la eficacia del tratamiento (Di Palma et al 2003) Para el desarrollo del modelamiento el cual permite conocer la forma, velocidad y produccin de biomasa adherida a los biodiscos se debi realizar una serie de hiptesis entre las que se encuentra: Es un modelo de estado estable donde se desprecia cualquier forma de remocin donde no intervengan los microorganismos. Se supone mezcla completa del equipo Se calcula el valor de la concentracin de biomasa (X a) activa adherida por unidad de rea, para las condiciones ptimas de oxigenacin. Se desarrollaron dos expresiones distintas dependiendo de que la seccin del disco a la que se adhiere la biomasa est aireada (fuera del tanque), o sumergida dentro del tanque (en contacto con las aguas residuales). Se supuso que en la fase de aireacin el nico limitante del crecimiento microbiano es el sustrato, en tanto que en la fase sumergida son limitantes tanto el sustrato como el oxgeno. Se utiliz una expresin del tipo Monod para la limitacin del crecimiento de la biomasa, Se calculo , tasa de crecimiento especifico de biomasa adherida, como el promedio entre fase de aireacin y sumergida respectivamente. La dependencia del modelo respecto de la velocidad de rotacin de los discos se da por el coeficiente de transferencia de oxgeno (Kc). Esta serie de hiptesis nombradas anteriormente permitieron a los investigadores obtener la siguiente ecuacin

Donde:
So=Concentracin de sustrato carbonoso soluble afluente. Se= Concentracin de sustrato carbonoso soluble efluente. V=Volumen total del reactor. Q= Caudal del efluente. umax= Mxima tasa de crecimiento especifico de biomasa adherida. Ya= Coeficiente de produccin especifico de biomasa adherida. Ab= Superficie total de discos.

Xa=Concentracin especifica de biomasa activa adherida.

= D
CONCLUSION Para modelar el crecimiento de microorganismos en superficies slidas, se debe tener en cuenta que todas las formas de crecimiento tienen un principio biolgico comn, pero que se ven afectadas segn diversas variables como la transferencia de masa, sustratos y elementos presentes, configuracin geomtrica de la superficie, modelos estadsticos de probabilidad, entre otras. Estas variables son particulares para cada microorganismo y contemplan tanto la significancia como la dependencia de las variables entre s. Es por esta razn, que algunas ecuaciones modeladas en forma terica solo podrn ser resueltas en aproximacin por mtodos numricos para encontrar la diferencia que posean con los datos obtenidos experimentalmente. La utilizacin de diversos sustratos por parte de microorganismos presentes en superficies slidas ha abierto las puertas a aplicaciones de mucha utilidad en el campo de la biotecnologa en la cual destacan la biolixiviacin de minerales y la biofiltracin de sustancias de inters. BIBLIOGRAFIA 1.- Pirt SJ. Principles of microbe and cell cultivation. Blackwell scientific, Oxford, 1975. 2.- DI PALMA, L.; MERLI, C.; PARIS M.; PETRUCCI, E. (2003) A steady-state model for the evaluation of disk rotational speed influence on RBC kinetic: model presentation. Bioresource Technology,January 2003, Vol. 86, no 2, pp 193-200(8). 3.- http://www.dim.uchile.cl/~cconca/Workshop%20ICDB%2014-15:VI:2007/re %F1aca%2014-15:junio:2007/biofilm_model.pdf 4.- http://www2.ing.puc.cl/~sochid/archivos/Posters/CGarcia-postersochid.pdf

CRECIMIENTO DE SUPERFICIES RESUMEN Prcticamente, todas las bacterias pueden desarrollarse sobre medios de cultivo artificiales, lquidos y slidos. En el crecimiento sobre medios slidos, en superficie, se da lugar a la formacin de conglomerados o colonias que se manifiestan macroscpicamente. La aglomeracin de microorganismos da origen a los biofilms microbianos. Estos representan la forma habitual de crecimiento de las bacterias en la naturaleza y su presencia ejerce un enorme impacto en diversos aspectos de nuestra vida, como son, el tratamiento de aguas residuales, corrosin de materiales, entre otros. Para que las biopelculas se desarrollen se requiere de una serie de pasos altamente regulados, donde influyen factores ambientales, biolgicos y fsicos. La gentica de formacin de estas biopelculas depende de cada microorganismo, sin embargo las fases de su desarrollo son conocidas por su similitud. Para un modelamientos bsico de biofilms deben ser considerados estos 3 aspectos fundamentales: Debe ser considerado el tipo de mecanismo de transporte del nutriente al microorganismo. Esto es regulado especficamente por la transferencia de masa a medida que el substrato difunde sobre la biopelcula. De acuerdo a esto una forma de acelerar la difusin se puede dar gracias a alzas o disminuciones de pH, temperatura o tras la aplicacin de una agitacin. Debe ir considerado a partir del consumo de sustrato la velocidad de crecimiento del biofilm. Esta es regulada especficamente por la cintica de Monod. Debe ir considerada tambin una prediccin del mecanismo de necrosis y prdida o contraccin de biofilm.

Para la modelacin son usados mtodos numricos o sistemas computacionales complejos y para realizar este tipo de relaciones matemticas se consideran como suposiciones principales: *La densidad del biofilm debe ser constante y ser as tambin una biopelcula homognea

*No existir una inhibicin por sustrato *Existe un crecimiento regular de la biomasa al momento de formar la biopelcula y al detenerse tambin su crecimiento *Los microbios no son capaces de perforar y penetrar la superficie *Los balances pueden o no realizarse en estado estacionario

MODELAMIENTO DE UN BIOFILM Partiendo de un balance de transferencia de masa considerando la formacin de una biopelcula de espesor L y rea de difusin A en torno a un volumen diferencial de espesor dz la: Acumulacin = flujo de entrada flujo salida consumo + produccin

Donde trabajando en estado estacionario y definiendo las condiciones de borde: donde en z = L la resistencia a la transferencia de masa es nula en el seno del fluido y en z = 0 (dc/dz=0), no hay flujo en la biopelcula. La densidad de flujo es cero a medida que la concentracin de sustrato difunde en la biopelcula y definiendo a se llega a:

Que tambin puede ser expresado como:

Donde especficamente define la velocidad limitante del proceso. Si es mayor a uno es un control difusional o en su caso contrario un control cintico si es menor a 1. Con respecto a este tipo de modelamiento este puede seguir modificndose hasta determinar el orden de la reaccin de formacin de la biopelcula (si es orden uno o cero) as como tambin determinar el punto critico donde se acabara el sustrato. En el anterior modelamiento no fue considerada la transferencia de masa interna y externa de forma simultanea, donde para llevar a una condicin mas real este modelamiento solo se deben modificar sus condiciones de borde, por lo que el modelamiento anterior resulta ser aceptable. APLICACIN

Una aplicacin es la propuesta por (DI PALMA, et al 2003) en el tratamiento de lquidos residuales urbanos o industriales, especialmente los de alto contenido de materia orgnica a travs de los biodiscos. El dispositivo consiste en un conjunto de discos plsticos, unidos a un eje horizontal que les imprime movimiento giratorio en donde los microorganismos se adhieren a la superficie de discos rotarios de material plstico, inerte, que actan como soporte. El modelamiento del biofilm fue realizado por modelos matemticos que simulan el proceso de tratamiento de las aguas residuales mediante el sistema de accin del biodiscos. A partir de algunas supociones como las ya nombradas anteriormente se llega finalmente a una expresin caracterstica que definir el patrn de formacin de biopelculas en el disco RBC.