INTRODUCCION

La conducta de las protenas: ENZIMAS

Historia:

CAPITULO 6
Biochemistry 6th Edition Campbell and Farrell

1700: estudios de la digestin de carnes mediante secreciones del estmago. 1800: convertir almidn en azcar mediante la saliva. 1810: comienzan estudios sobre fermentacin. 1850: Louis Pasteur concluy estudios sobre fermentacin de azcares en alcoholes por levadura y catalizado por fermentos.

INTRODUCCION

Clasificacin enzimtica

Historia:

1897: Buchner descubri que los extractos de levadura podan convertir el azcar en alcohol. Fermentacin se llevaba a cabo por la presencia de molculas. Khne llam las molculas enzimas. 1926: ureasa fue aislada y cristalizada. 1930: pepsina, tripsina, y otras enzimas digestivas fueron cristalizadas.

1. Oxidoreductasas: transferencia de electrones 2. Transferasas: transferencia de grupos 3. Hidrolasas: reacciones de hidrlisis 4. Liasas: adicin de grupos a dobles enlaces 5. Isomerasas: transferencia de grupos en la molcula 6. Ligasas: formacin de enlaces

Clasificacin enzimtica

AGENTES CATALITICOS

De acuerdo al nmero de la Comisin Enzimtica (Enzyme Commission number)

Primer #: tipo de reaccin catalizada. Segundo #: indica la subclase; dice el tipo de sustrato o el enlace que se rompe en forma mas precisa. Tercer #: indica la sub-subclase; nos dice el tipo de aceptador de electrones (oxidoreductasas) o el tipo de grupo que se remueve (liasas), etc. Cuarto #: indica el nmero de serie de la enzima en su sub-subclase.

Cambian la velocidad de una reaccin qumica. Aceleran la reaccin en ambas direcciones disminuyendo la energa de activacin. Funcionan en reacciones que pueden ocurrir sin su presencia (exergnica). Permanecen inalterados al final de la reaccin.

6.1 Las enzimas son agentes catalticos biolgicos efectivos

6.2 Diferencia entre aspectos cinticos y termodinmicos

CATALISIS ENZIMATICA

Energa libre estndar: Go

Funcin ms importante de las protenas. Todas las enzimas son protenas globulares excepto las riboenzimas. Aumentan la velocidad de una reaccin hasta por un factor de 1020 . Son altamente especficas. La accin enzimtica es regulada.

Se refiere a la diferencia entre la energa de los productos y la energa de los reactivos.

G = H - TS

Las enzimas no cambian el Go ni la constante de equilibrio.

Energa de activacin: cantidad de energa necesaria para convertir todas las molculas de un mol de sustancia reaccionando de su estado raso a su estado de transicin.

Las enzimas aumentan la velocidad de la reaccin disminuyendo la energa de activacin, pero no afectan los aspectos termodinmicos de las reacciones.

Catlisis enzimtica

Figura 6.1

La velocidad de una reaccin depende de la energa de activacin. La diferencia en energa entre el estado inicial y el estado final es dada por: G = RT l n K
eq

La termodinmica se refiere a la espontaneidad de una reaccin. Mientras que la cintica nos dice cun rpido ocurre la reaccin. Una reaccin espontnea no es una reaccin instantnea.

H2 O2

H2 O +

O2

Efecto de la temperatura
La temperatura puede afectar la velocidad de una reaccin.

6.3 Cintica de las enzimas

Orden de reaccin

La velocidad de una reaccin se mide por la velocidad de aparicin de los productos o por la velocidad de desaparicin de los reactivos.
A + B P
= [P] t

Describe la velocidad de la reaccin en trminos de la concentracin del reactivo o los reactivos. Se determina experimentalmente.

Primer orden

Velocidad = k [A] Depende de la concentracin de un solo reactivo. Velocidad = k [A][B] Depende de la concentracin de ambos reactivos. Velocidad = k La velocidad no depende de la concentracin.

Segundo orden

[A] [B] Rate = _ = _ t t

Rate = k[A] f[B]g

Cero orden

6.4 Enlace del sustrato a la enzima

A+ B C + D

Rate = k[A] 1[B]1

La reaccin es de primer orden con respecto A y a B, y de segundo orden la reaccin total.

La especificidad enzimtica puede variar. Pasos que ocurren durante la accin enzimtica:

Sustrato se enlaza a la enzima. Ocurren alteraciones qumicas que incluyen rompimiento y formacin de enlaces. La enzima libera el producto de la reaccin.

Teoras que explican la actividad enzimtica:

S es el sustrato: reactivo Centro activo: donde se enlaza el sustrato por interacciones no covalentes.

Llave y cerradura: especfica; un sustrato y una enzima. Adaptacin inducida: menos especfica, el centro activo se ajusta al sustrato que interviene.

E + S

ES enzyme-substrate compl ex

Formacin del producto

6.6 Michaelis-Menten

Estado raso (steady state):

Velocidad de formacin = Velocidad de desaparicin El modelo de Michaelis-Menten presenta la formacin del complejo enzima-sustrato. La concentracin del complejo es baja, pero permanece constante durante la reaccin. El sustrato se convierte en producto. E+S ES E + P

Ecuacin Michaelis-Menten

Para una reaccin catalizada

E + S k1 k-1 ES k2 P

Cintica de una enzima

Cuando se alcanza el steady state, la concentracin de enzima libre es dada por:
[E] = [E]T - [ES]

rate of formati on of ES = k 1 [E][S] rate of breakdown of ES = k

-1 [ES]

+ k 2[ES]

Steady state:

k1[E][S] = k-1[ES] + k 2[ES]

Sustituyendo la concentracin de enzima libre y todas las constantes de velocidad se obtiene el valor de Km (Constante de Michaelis).
([E]T - [ES]) [S] [ES] = k-1 + k2 k1 = KM

Cintica de una enzima

Cintica de una enzima

Podemos resolver para la concentracin del complejo enzimasustrato.

[ES] = [E]T [S] KM + [S]

En la fase inicial la formacin de producto depende de la velocidad de rompimiento de ES.

Vinit = k 2 [ES] = k 2[E]T [S] KM + [S]

[E]T [S] - [ES][S] = KM [ES] [E]T [S] - [ES][S] = KM [ES] [E]T [S] = [ES](K M + [S])

Si la concentracin de S es muy alta, la enzima se satura con sustrato: [ES] = [E]T

Vinit = V max = k 2[E]T

Cintica de una enzima

Substituyendo k2[E]T = Vmax en la ecuacin:
V=

Ecuacin Michaelis-Menten

Cuando [S] = Km
= Vmax [S] [S] + [S] = Vmax 2

Vmax [S] KM + [S]

Vinit =

Vmax [S] KM + [S]

Mi chaelis-Menten equati on

Cintica de las enzimas

Ecuacion de Lineweaver-Burk
V= Vmax [S] KM + [S] (an equati on for a hyperbola)

Ecuacin Michaelis-Menten

KM es igual a la concentracin de sustrato cuando 50% de los centros activos de la enzima estn ocupados. Tambin representa cun fuerte la enzima se enlaza al sustrato. VMAX est relacionado con el turnover number Es muy difcil determinar Vmax experimentalmente.

1 V 1 V

KM + [S] Vmax [S] KM Vmax [S]

1 V y = =

KM Vmax [S]

[S] Vmax [S]

1 Vmax
1 [S] x + + 1 Vmax b

Se transforma la ecuacin de la hiprbola en una ecuacin lineal.

KM Vmax m

Turnover number

Constante cataltica equivale al turnover number. Kcat = turnover number: numero de moles de sustrato que reaccionan para formar un producto por mole de enzima por unidad de tiempo. La razn de kcat/Km representa una medida de la eficiencia cataltica.

6.7 Inhibicion enzimtica

Inhibidores

Reversibles

Competitivo: Compite con el sustrato por el centro activo. Se parecen al sustrato. No competitivo: el inhibidor no compite con el sustrato. Inhibidor tiene un punto diferente de enlace. Puede enlazar la E o el complejo ES. E + I EI + S EIS o E + S ES + I EIS De incompetencia: el inhibidor se enlaza directamente al complejo enzima-sustrato y no a la enzima libre. E + S ES + I ---> EIS (no reaccin). Inhibicin mixta: similar al no competitivo. El enlace del inhibidor no afecta el enlace del sustrato.

Inhibidor competitivo

EI

E + S

ES

Inhibidor no-competitivo
+S -S +I EI +S -S -I +I

E -I

ES

E + P

ESI

Inhibidor de incompetencia

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Inhibidores mixtos

Presencia de inhibidores

Similares a inhibidores no competitivos pero enlazar el inhibidor afecta el enlace del S y vice-versa.

Inhibidores

Irreversibles: se combina con o destruye un grupo funcional necesario para la actividad enzimtica. Se forma un enlace covalente.

Ejemplo: Inhibidores de acetilcolinesterasa. Interfiere con la secuencia del impulso nervioso. Diisopropylphosphofluoridate, tabun y sarin (nerve gases) Parathion and malathion

Ejemplo:

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