PRCTICAS DE FISIOLOGA VEGETAL Metabolismo secundario: Determinacin cualitativa de taninos y antraquinonas en distintas especies vegetales.

1. Introduccin El metabolismo secundario vegetal es una fuente importante de principios activos de medicamentos y de otros productos qumicos valiosos (esencias, colorantes, insecticidas o aditivos nutritivos). Derivan biosintticamente de los primarios y el precursor tambin es utilizado en muchos casos para la biosntesis de compuestos primarios (cidos grasos, protenas, etc.). Los dos tipos de metabolitos estn interconectados. La formacin del metabolito secundario no es vital para el vegetal, aunque cumplen misiones de naturaleza muy diversa. P. ej., muchos metabolitos estn implicados ecolgicamente en la relacin planta-organismo, como los pigmentos de las flores, que atraen a los insectos polinizadores, o los compuestos que inhiben el crecimiento de otros organismos (sustancias alelopticas), o que protegen a la planta productora de infecciones (fitoalexinas) o de los depredadores (disuasorios nutritivos). Otros metabolitos secundarios tienen misiones fisiolgicas. Uno de los grupos ms importantes de metabolitos secundarios son los fenoles dentro de los cuales se encuentran los taninos y las antraquinonas. La biosntesis de sustancias fenlicas se realiza por 2 rutas metablicas esenciales: la del cido siqumico y la de polictidos. El trmino tanino se emple por vez primera en 1796 para denominar ciertas sustancias presentes en extractos vegetales, capaces de combinarse con protenas de la piel animal, evitando la putrefaccin y convirtindola en cuero. La mayora de los taninos verdaderos tienen pesos moleculares de 1.000 a 5.000 aproximadamente. Se suelen establecer dos grandes grupos: Los taninos hidrolizables y los taninos condensados. Con respecto a las antraquinonas se trata de sustancias fenlicas de tipo hetersido, presentes en algunas drogas purgantes, como las hojas de sen (Cassia angustifolia) o las de olivo (Olea europaea). Suelen ser compuestos de color rojoanaranjado, solubles en agua caliente o alcohol diluido. El ensayo de Borntrger suele emplearse para su deteccin. Los procedimientos de determinacin que se van a llevar a cabo son sencillos, rpidos, sensibles, econmicos y de uso generalizado en estudios cualitativos.

2. Material necesario: Eter etlico HCl al 35 % y del 10% NaOH acuosa al 10% Formaldehdo Cl3Fe diluido al 5% Mecheros y vasos de precipitado de 1 l Agitador Vortex Pinzas de madera Granatario Tubos de ensayo (16) Tubos de cultivo (4) H2O destilada Material vegetal: a) Hojas de sen (Cassia angustifolia) b) Hojas de olivo (Olea europaea) c) Hojas de t verde (Tea sinensis) d) Hojas de yedra (Hedera helix) 3. Metodologa 3.1. Antraquinonas: En un tubo de ensayo se introducen 0,5 g de muestra vegetal, 5 ml de ter etlico y unas gotas de HCl al 35 %. Se agita vigorosamente durante unos minutos y posteriormente se filtra. Al filtrado obtenido se aade un volumen igual de agua destilada. Hacer dos alcuotas una vez diluido el filtrado. Sobre una de las alcuotas, se aaden unas gotas de disolucin acuosa de NaOH al 10 % y agitaremos suavemente. Esperar un minuto. La existencia de antraquinonas se verifica por aparicin de un color rojo-cereza en la interfase, e incluso en la fase acuosa, que indica la obtencin aislada de la genina, que en medio bsico se separa del azcar. Al acidificar de nuevo el medio con unas gotas de HCl acuoso al 10 % desaparece esta coloracin. 3.2. Taninos 2 g de planta se introducen en un tubo grueso (de cultivo) con 20 ml de agua. Calentar al bao mara durante cinco minutos y filtrar. Diluir de nuevo con igual volumen de agua destilada. Posteriormente haremos cuatro alcuotas donde se ensayarn los siguientes experimentos: a) Sabor astringente. Probar la muestra. Los taninos poseen un sabor amargo. b) Solucin de Cl3Fe diluido: A partir del reactivo diluido al 5% diluir aun ms con agua hasta que la solucin tenga un color ligeramente amarillo. Aadir

gota a gota a la solucin problema hasta ver el cambio de color o precipitacin. c) A otra porcin del extracto tnico se aaden 3 4 gotas de HCl concentrado y alrededor de 1 ml de solucin de formaldehdo. Hervir durante unos minutos. Los taninos catquicos precipitan en caliente, pudiendo variar el color del precipitado. La cuarta fraccin sirve como muestra comparativa para observar los cambios de coloracin

4. Resultados Anotar los resultados obtenidos para cada una de las especies vegetales y cada uno de los ensayos en la tabla. Como se trata de ensayos cualitativos pondremos en la determinacin de la presencia o ausencia un mtodo de numeracin que oscila entre 0 y 3. El 0 indica ausencia total, el 1 denota una ligera presencia, el 2 presencia media y el 3 una notable presencia de taninos o antraquinonas en la muestra. Para plasmar estos resultados en el papel, una vez realizados todos los ensayos, se eligen las muestras en las que se observa una considerable presencia y se les atribuye el nmero 3. Comparando con las mismas, puede hacerse la clasificacin de las dems muestras ensayadas. Presencia de taninos Ensayo de Borntrger Sabor Solucin Solucin de (Antraquinonas) astringente de Cl3Fe formaldehdo

Especie vegetal Tea sinensis Cassia angustifolia Olea europaea Hedera helix

5. Bibliografa Bruneton, J. (1991). Elementos de Fitoqumica y de Farmacognosia. Ed. Acribia. Zaragoza. Dominguez, J. A. (1973). Mtodos de Investigacin Fitoqumica. Limusa, Mxico. Trease, G. E., Evans, W. Ch. (1996). Pharmacognosy. 14 Edicin. Edit Interamericana. Mxico. Wagner, S. & Bladt, S. (1996). Plant Drug analysis. A Thin Layer Chromatography Atlas. 2 ed. Springer, New York.