Optimizao dos processos de produo de xaropes de glucose e dextrose monohidratada

Marta Pereira Pinto

Dissertao para obteno do Grau de Mestre em

Engenharia Biolgica

Jri
Presidente: Orientadores: Vogal: Professor Arsnio do Carmo Sales Mendes Fialho Engenheira Maria Leonor Tavares (COPAM) Professor Luis Joaquim Pina da Fonseca (IST) Professor Jos Antnio Leonardo dos Santos

Novembro 2009

AGRADECIMENTOS
No podia deixar de agradecer a todos os que, de algum modo, me ajudaram na realizao deste projecto. Ao Professor Lus Fonseca, pelo seu apoio, disponibilidade e encorajamento. A todos na COPAM, por me terem recebido de braos abertos. Em especial Engenheira Leonor Tavares pela oportunidade concedida, pelas palavras duras na hora certa e pelas palavras de conforto quando foram precisas. Obrigada por esta experincia to enriquecedora. Ao Engenheiro Edmundo Freitas por toda a ajuda prestada ao longo destes meses. Ao Engenheiro Jorge Vargas Moniz pela infinita pacincia, sabedoria e conhecimento proporcionados. A todos os membros do laboratrio pelo excelente ambiente de trabalho e por todo o auxlio prestado. Ao Marco Baeta e ao Filipe Cardoso pelos momentos descontrados, pelos almoos, pelas conversas animadas, pelo apoio incondicional, por me ajudarem a compreender como funciona este lado. Ao Filipe Sousa. Sem ti no teria sido to divertido. Obrigada pelas horas de partilha e desabafos, pela compreenso, mas acima de tudo, pela amizade. Slvia e Sofia, por serem as melhores amigas do mundo, por estarem sempre presentes em todos os momentos, nos bons e nos maus. Obrigada pelas gargalhadas e pelas lgrimas dos ltimos seis anos. Sara, por me compreender como ningum e por ter sempre a palavra certa na hora certa. Pelos longos emails trocados durante estes ltimos meses. Por se fazer presente apesar da longa distncia. Ins Vilalva por ser a mida mais doce que conheo, sempre pronta a ajudar. Ins Lopes por ter sempre uma palavra de apoio escondida na manga. Ana Lusa por ser a melhor companheira de casa que podia desejar. E uma grande, grande amiga. minha famlia, em especial aos meus pais, pelo esforo que fizeram ao longo de todos estes anos, por terem estado sempre ao meu lado, por nunca me deixarem baixar os braos e desistir. Esta vitria tambm vossa. pessoa mais importante da minha vida, o meu sobrinho David. Pela sua energia contagiante. Por ser o meu beb mesmo quando j no o . Por ser a minha alegria de viver. Ao Armindo, por ter sido o meu porto seguro durante todos estes anos. Sem as suas palavras de incentivo nunca teria conseguido chegar aqui. Obrigada a todos!

RESUMO
A contnua descoberta e seleco de novas enzimas para a indstria do amido apresenta-se como uma oportunidade de melhoria dos processos produtivos. A implementao de novas preparaes enzimticas disponveis comercialmente s possvel depois de uma validao rigorosa em termos tecnolgicos e econmicos, de modo a mostrar inequivocamente que estas novas enzimas trazem mais-valias ao processo produtivo e empresa. O primeiro objectivo do presente trabalho foi estudar a possibilidade de homologao de uma nova -amilase com vantagens tcnico-econmicas e ao mesmo tempo permitir que a empresa pudesse dispor de um fornecedor alternativo deste tipo de enzima. A enzima em teste mostrou possuir caractersticas adequadas sua utilizao quando aplicada no processo de liquefaco do amido, nomeadamente, capacidade de manter a sua actividade a baixas concentraes de clcio e baixos valores de pH. Depois de evidenciada a aplicabilidade da enzima no processo, efectuou-se uma anlise do impacto econmico da sua utilizao, tendo-se concludo que a utilizao da nova enzima no processo de liquefaco do amido permitiria um ganho total de 43%, face utilizao da enzima actual.

O segundo objectivo deste trabalho incidiu na optimizao do rendimento de cristalizao do processo de produo de dextrose monohidratada, atravs da optimizao das variveis do processo. Concluiu-se que seria possvel actuar ao nvel das caractersticas do xarope de alimentao cristalizao e do perfil de arrefecimento durante a cristalizao.

Palavras-chave: -amilase, liquefaco enzimtica, sacarificao, dextrose, cristalizao, granulometria.

ABSTRACT
The continuous discovery and selection of new enzymes for the starch industry is presented as an opportunity to improve production processes. The implementation of new commercially available enzymatic preparations is only possible after a meticulous technological and economic validation, to show unequivocally that these new enzymes bring more resources into the productive process and the company. The first goal of this study was the endorsement of a new -amylase with technical and economic advantages while providing the company with an alternative supplier of this type of enzyme. The enzyme in test proved to have suitable characteristics to use when applied in the process of starch liquefaction, namely, the ability to maintain its activity at low concentrations of calcium and low pH. After the results evidenced the applicability of the enzyme in the process, an analysis of the economic impact of its use was carried out, and it was found that the use of this new enzyme in the process of starch liquefaction allowed a total gain of 43% compared with the use of the current enzyme.

The second goal of this work layed on the yield optimization of the crystallization process of dextrose monohydrate, through the optimization of the process variables. It was concluded that it would be possible to adjust the characteristics of the feeding syrup of the crystalization and of the cooling profile throughout the crystallization.

Keywords: -amylase, enzymatic liquefaction, saccharification, dextrose, crystallization, crystal size

NDICE GERAL

1. 2.

APRESENTAO DA EMPRESA E DO PROCESSO DE PRODUO ........................................ 1 REVISO BIBLIOGRFICA ..................................................................................................... 3 2.1. O amido ....................................................................................................................... 3 2.1.1. Composio, Estrutura e Fontes de Amido .......................................................... 3 2.1.2. Propriedades do amido ........................................................................................ 4 2.2. A indstria amideira .................................................................................................... 6 2.2.1. O mercado mundial de amido ............................................................................. 6 2.2.2. Sectores de aplicao dos produtos amilceos ................................................... 6 2.2.3. Produo de xaropes de glucose a partir do milho ............................................. 7 2.2.3.1. A hidrlise enzimtica do amido ................................................................... 7 2.2.3.1.1. As enzimas amilolticas .......................................................................... 7 2.2.3.1.2. A liquefaco do amido........................................................................ 10 2.2.3.1.3. A sacarificao do amido ..................................................................... 10 2.2.3.2. O processo de produo de xaropes de glucose utilizado na COPAM ....... 11 2.2.4. Produo de dextrose a partir do milho ............................................................ 11 2.2.4.1. O processo de produo de dextrose monohidratada utilizado na COPAM..................................................................................................................... 12

3.

MATERIAIS E MTODOS .................................................................................................... 13 3.1. Materiais.................................................................................................................... 13 3.1.1. Reagentes........................................................................................................... 13 3.1.2. Enzimas .............................................................................................................. 13 3.1.3. Equipamento e outros materiais ....................................................................... 13 3.2. Mtodos Analticos .................................................................................................... 14 3.2.1. Determinao da matria seca atravs do ndice de refraco ........................ 14 3.2.2. Determinao do Equivalente em Dextrose (DE) por osmmetria ................... 14 3.2.3. Determinao da composio em acares por HPLC....................................... 14

3.2.4. Determinao do pH .......................................................................................... 14 3.2.5. Realizao do teste de amido por reaco ao iodo ........................................... 14 3.2.6. Determinao do teor em clcio por titulao com EDTA ................................. 14 3.3. Mtodos experimentais ............................................................................................ 15 3.3.1. Ensaio industrial: liquefaco enzimtica com a enzima em teste.................... 15 3.3.2. Optimizao do rendimento de cristalizao da dextrose ................................ 15 4. RESULTADOS E DISCUSSO ............................................................................................... 16 4.1. Optimizao do processo de produo de xaropes de glucose ................................ 16 4.1.1. Levantamento das condies de processo ........................................................ 16 4.1.2. Correco dos parmetros do processo de produo utilizando a enzima actual ........................................................................................................................... 17 4.1.3. Ensaio indstrial com a enzima em teste .......................................................... 18 4.1.4. Anlise comparativa do efeito de vrios parmetros na liquefaco enzimtica. ........................................................................................................................... 19 4.1.4.1. Efeito da concentrao especfica de enzima ............................................. 19 4.1.4.2. Efeito da concentrao de clcio ................................................................ 19 4.1.4.3. Efeito do pH ................................................................................................ 19 4.1.4.4. Qualidade do produto final ......................................................................... 19 4.1.5. Anlise comparativa de custos .......................................................................... 20 4.2. Optimizao do processo de produo de dextrose ................................................. 21 4.2.1. Determinao do rendimento terico de cristalizao ..................................... 22 4.2.2. Determinao do rendimento real de cristalizao ........................................... 23 4.2.3. Anlise comparativa entre rendimento terico e rendimento real de cristalizao. ........................................................................................................................... 24 4.2.3.1. Variveis do processo que influenciam o rendimento de cristalizao ...... 24 4.2.3.2. Perdas de produto nas vrias operaes unitrias que influenciam o rendimento de cristalizao .................................................................................................. 24 4.2.4. Sugestes de aces futuras .............................................................................. 25 5. CONSIDERAES FINAIS .................................................................................................... 26

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ................................................................................................... 28 ANEXOS ....................................................................................................................................... 30 A. Tabela de valores de osmolalidades de referncia para o xarope aps liquefaco

(15DE) e aps sacarificao (H95) ..................................................................................................... 30 B. C. D. Folhas de especificao e segurana da enzima Liquozyme Supra ............................... 30 Folhas de especificao e segurana da enzima Clearflow AA ..................................... 30 Cromatogramas obtidos pela tcnica de HPLC aplicada s amostras de hidrolisado ... 30

NDICE DE TABELAS
Tabela 2.1. Amilases de origem microbiana. Fonte: Grael (1989) .......................................................... 8 Tabela 3.1. Reagentes utilizados nos diversos procedimentos experimentais. .................................... 13 Tabela 3.2. Alfa-amilases utilizadas no ensaio industrial para optimizao do processo de produo de xaropes de glucose. .......................................................................................................................... 13 Tabela 3.3. Equipamento utilizado nos diversos procedimentos experimentais. ................................ 13 Tabela 3.4. Condies operatrias da cromatografia para uma boa separao de picos. ................... 14 Tabela 3.5. Tempos de reteno tpicos de cada componente das amostras em anlise, para a coluna Aminex-87 C. ......................................................................................................................................... 14 Tabela 3.6. Resultados possveis aps realizao do teste de amido por reaco ao iodo. ................. 14 Tabela 4.1. Condies de especificao do processo de produo de xaropes de glucose por via dual enzimtica. ............................................................................................................................................ 16 Tabela 4.2. Condies de especificao indicadas pelo fornecedor para a utilizao da enzima actual. ............................................................................................................................................................... 16 Tabela 4.3. Ensaio de optimizao do processo de liquefaco enzimtica, utilizando a enzima actual. ............................................................................................................................................................... 17 Tabela 4.4. Condies ptimas de funcionamento do processo com a enzima actual. ....................... 17 Tabela 4.5. Condies de especificao indicadas pelo fornecedor para a utilizao da enzima em teste....................................................................................................................................................... 18 Tabela 4.6. Ensaio de optimizao do processo de liquefaco enzimtica, utilizando a enzima em teste....................................................................................................................................................... 18 Tabela 4.7. Condies ptimas de funcionamento do processo com a enzima em teste. ................... 18

Tabela 4.8. Seguimento do processo de sacarificao do xarope produzido durante o ensaio de optimizao da liquefaco enzimtica. Comparao de valores para o xarope produzido utilizando ambas as enzimas na liquefaco. ........................................................................................................ 19 Tabela 4.9. Comparao dos valores dos vrios parmetros do processo, depois da optimizao do mesmo, para cada uma das enzimas em estudo. ................................................................................. 20 Tabela 4.10. Condies de especificao do processo de produo de dextrose monohidratada. ..... 21 Tabela 4.11. Rendimento terico de cristalizao calculado para uma temperatura de cristalizao de 30C e um coeficiente de sobressaturao final de 1,05, variando a percentagem de matria seca e a percentagem de glucose do xarope de alimentao cristalizao. .................................................... 22 Tabela 4.12. Rendimento terico de cristalizao calculado para uma temperatura de cristalizao de 31C e e um coeficiente de sobressaturao final de 1,05, variando a percentagem de matria seca e a percentagem de glucose do xarope de alimentao cristalizao. ................................................. 22 Tabela 4.13. Caracterizao das correntes do processo de produo de dextrose monohidratada. As quantidades de cada componente nas correntes foram determinadas por balanos mssicos .......... 23

NDICE DE FIGURAS
Figura 1.1. Esquema do processo fabril da COPAM. As operaes unitrias foram removidas por questes de confidencialidade................................................................................................................ 2 Figura 2.1. Fotomicrografia de grnulos de amido de diferentes origens botnicas. (A) Amido de milho. (B) Amido de batata. Fonte: Davies, 2006. .................................................................................. 3 Figura 2.2. Projeco das diferentes ligaes entre as unidades de glucose, na amilose e na amilopectina. (A) Estrutura da amilose polmero linear composto por D-glucoses unidas por ligaes -1,4. (B) Estrutura da amilopectina polmero ramificado composto por D-glucoses unidas por ligaes -1,4 e -1,6. Adaptado de Dziedzic & Kearsley (1984). .................................................... 4 Figura 2.3. Fotomicrografia de grnulos de amido de milho, no gelatinizados, sob luz polarizada. Fonte: Rotkiewicz (2008). ........................................................................................................................ 5 Figura 2.4. Quota de aplicao dos produtos amilceos, nos diversos sectores industriais, no ano de 2008. Dados relativos Unio Europeia. Adaptado de AAF (2009). ....................................................... 7

Figura 2.5. Diagrama do processo de produo de xaropes de glucose, por via dual-enzimtica, implementado na COPAM. .................................................................................................................... 11 Figura 2.6. Curva de solubilidade da dextrose monohidratada. Adaptado de Blanchard (1992). ........ 12 Figura 2.7. Diagrama do processo de produo de dextrose monohidratada implementado na COPAM. ................................................................................................................................................. 12 Figura 3.1. Indicao do local de recolha das amostras analisadas no diagrama de produo de xaropes de glucose, por via dual-enzimtica, implementado na COPAM. ........................................... 14 Figura 4.1. Representao grfica do pH do leite de amido entrada do processo de liquefaco, ao longo dos meses em estudo. ................................................................................................................. 16 Figura 4.2. Representao grfica da concentrao de clcio do 15 DE sada dos reactores tubulares do processo de liquefaco, ao longo dos meses em estudo. .............................................................. 16 Figura 4.3. Representao grfica da percentagem de matria seca do 15 DE sada dos reactores tubulares do processo de liquefaco, ao longo dos meses em estudo. .............................................. 16 Figura 4.4. Representao grfica do Equivalente em Dextrose (DE) do xarope 15 DE sada dos reactores tubulares do processo de liquefaco, ao longo dos meses em estudo............................... 16 Figura 4.5. Representao grfica dos consumos especficos de enzima utilizada na liquefaco, para os meses em estudo. ............................................................................................................................. 16 Figura 4.6. Representao grfica do pH do xarope entrada do processo de sacarificao, ao longo dos meses em estudo. ........................................................................................................................... 16 Figura 4.7. Representao grfica da percentagem de matria seca do Hidrolisado 95 aps sacarificao, ao longo dos meses em estudo. ..................................................................................... 16 Figura 4.8. Representao grfica do Equivalente em Dextrose (DE) do Hidrolisado 95 aps sacarificao, ao longo dos meses em estudo. ..................................................................................... 16 Figura 4.9. Representao grfica da composio em acares do hidrolisado 95, obtida por HPLC, para os vrios meses em estudo. .......................................................................................................... 17 Figura 4.10. Anlise do efeito da concentrao especfica de enzima necessria obteno de determinados valores de DE. ................................................................................................................ 19 Figura 4.11. Anlise comparativa do efeito da concentrao de clcio na liquefaco enzimtica do amido..................................................................................................................................................... 19

Figura 4.12. Ensaio laboratorial para determinar a dosagem de soluo de carbonato de sdio necessria ao ajuste de pH para as condies ptimas de funcionamento de cada enzima. .............. 20 Figura 4.13. Ensaio laboratorial para determinar a dosagem de soluo de cido clordrico necessria ao ajuste de pH para as condies ptimas de funcionamento da sacarificao................................. 20 Figura 4.14. Diagrama representativo do processo de produo de dextrose monohidratada. .......... 23

CAPTULO 1 1. APRESENTAO DA EMPRESA E DO PROCESSO DE PRODUO

A presente Dissertao de Mestrado resulta da realizao de um estgio inserido no plano de Desenvolvimento de uma empresa produtora de amido e seus derivados, a COPAM Companhia Portuguesa de Amidos, S.A. Os ensaios necessrios ao presente estudo foram realizados escala industrial nas instalaes fabris da COPAM e todo o suporte experimental decorreu no Laboratrio de Controlo de Qualidade, recorrendo a mtodos e tcnicas experimentais implementadas nesta empresa.

A COPAM uma empresa privada com sede em S. Joo da Talha, concelho de Loures, fundada em 1937. Esta empresa produz e comercializa produtos amilceos, utilizando como matria-prima o milho. Os principais produtos fabricados so o amido nativo, os xaropes de glucose, os xaropes de glucose-frutose e a dextrose monohidratada. Do processo de produo obtm-se ainda, como subprodutos, o corn gluten feed, o corn gluten meal, o grmen, a gua de macerao concentrada e o milho partido. Os produtos amilceos so comercializados para serem utilizados como matrias-primas em indstrias alimentares, indstrias de raes animais, indstrias farmacuticas e ainda em indstrias de papel. A fbrica labora em regime contnuo e todos os processos tecnolgicos utilizados nas diversas linhas produtivas so equivalentes aos adoptados por outras fbricas similares a nvel internacional. Actualmente, a COPAM a nica empresa nacional produtora de amido e seus derivados e constitui-se como uma referncia nesta rea, apesar da crescente concorrncia dum mercado sem fronteiras.

Na Figura 1.1 apresenta-se um esquema do processo fabril. O milho amarelo dentado a matria-prima utilizada nesta empresa e, numa primeira fase do processo, sofre um tratamento de moagem hmida para separao dos diversos componentes. O leite de amido, assim obtido, ento enviado para diversas linhas produtivas podendo originar amido nativo, xaropes de glucose, xaropes de glucose-frutose e dextrose.

Milho amarelo dentado

Limpeza

Milho partido

Macerao

gua de Macerao

Pr-moagem

Desidratao

Secagem

Grmen de Milho

Moagem

Desidratao

Secagem

Fibra
(Corn gluten feed)

Desidratao

Secagem

Glten
(Corn gluten meal)

LEITE DE AMIDO

Hidrlise cida

Liquefaco e Hidrlise enzimtica

Centrifugao Secagem

Purificao Concentrao

Sacarificao

Purificao

Xaropes de Glucose

Amido Nativo

HIDROLIZADO

Pr-concentrao Isomerizao Purificao Concentrao

Concentrao Cristalizao Centrifugao Secagem

Xaropes de Glucose-Frutose

Dextrose

Figura 1.1. Esquema do processo fabril da COPAM. As operaes unitrias foram removidas por questes de confidencialidade.

CAPTULO 2 2. REVISO BIBLIOGRFICA

2.1. O AMIDO
2.1.1. COMPOSIO, ESTRUTURA E FONTES DE AMIDO
O amido a principal substncia de reserva nas plantas superiores e fornece de 70 a 80% das calorias consumidas pelo homem. Existem diversas fontes de amido, sendo o milho a mais comum em todo o mundo (Schenck & Hebeda, 1992). As fontes comerciais de amido mais importantes so os gros de cereais, os gros de leguminosas e as razes tuberosas. As cinco principais espcies consideradas mundialmente como fontes comerciais de amido so o milho, o trigo, o arroz, a batata e a mandioca. O armazenamento de amido sob a forma de grnulos um processo conveniente para a planta uma vez que uma fonte insolvel de energia, a qual pode ser gradualmente utilizada atravs da aco de enzimas, sem aumentar a presso osmtica. Os depsitos de amido podem ser temporrios ou permanentes. Como forma de armazenar temporariamente os produtos da fotossntese, o amido produzido em grande quantidade nas folhas dos vegetais. Por outro lado, como reserva permanente de hidratos de carbono para as plantas, o amido armazenado em rgos de reserva, tais como as sementes, a medula, os raios medulares e o crtex de caules e razes. O tamanho e a forma dos grnulos so especficos de cada espcie de planta e podem servir de meio de identificao microscpica da origem botnica do amido (cf. Figura 2.1). (Bueno, 2006)

Figura 2.1. Fotomicrografia de grnulos de amido de diferentes origens botnicas. (A) Amido de milho. (B) Amido de batata. Fonte: Davies, 2006.

O amido puro um p branco, sem sabor e inodoro, insolvel em gua e lcool. Consiste numa mistura de dois polissacridos estruturalmente diferentes: a amilose e a amilopectina. A amilose (cf. Figura 2.2 A) uma molcula linear composta por unidades de D-glucose ligadas uniformemente por pontes glicosdicas -1,4, que conferem forma helicoidal molcula. Tal como a amilose, a amilopectina (cf. Figura 2.2 B) constituda por unidades de glucose unidas por ligaes 1,4, diferindo desta por apresentar ligaes -1,6 que constituem pontos de ramificao. Devido a essas diferenas estruturais, a amilose mais hidrossolvel que a amilopectina, e essa caracterstica pode ser usada para separar esses dois componentes. A mesma caracterstica constitui um factor importante para explicar a aco de enzimas sobre o amido e a sua aplicao em processos industriais (cf. subcaptulo 2.2.3.1.1). (Dziedzic & Kearsley, 1984; Schenck & Hebeda, 1992)

Figura 2.2. Projeco das diferentes ligaes entre as unidades de glucose, na amilose e na amilopectina. (A) Estrutura da amilose polmero linear composto por D-glucoses unidas por ligaes -1,4. (B) Estrutura da amilopectina polmero ramificado composto por D-glucoses unidas por ligaes -1,4 e -1,6. Adaptado de Dziedzic & Kearsley (1984).

2.1.2. PROPRIEDADES DO AMIDO

O amido tem sido considerado um produto de grande potencial no s para alimentao humana e animal, mas tambm para a indstria. Contudo, importa ressalvar que a explorao deste potencial depende do conhecimento das suas propriedades quanto estrutura, forma, cor, absoro de gua, solubilidade, dilatao e viscosidade. As propriedades do amido envolvem as suas caractersticas fsicas, qumicas e funcionais, estando muitas delas associadas entre si. Actualmente, diversas pesquisas sobre a relao existente entre a estrutura molecular do amido e as suas propriedades fsico-qumicas sugerem que diversas caractersticas estruturais, como o teor de amilose, a distribuio de comprimento das cadeias de

amilopectina e o grau de cristalinidade do grnulo, poderiam estar estreitamente relacionadas com os processos de gelatinizao e retrogradao (Denardin & Silva, 2008). A solubilidade do amido uma propriedade de extrema importncia no contexto deste trabalho, na medida em que as enzimas em estudo no actuam sobre o amido slido, mas sim sobre o amido gelatinizado. Assim, importante referir que o amido, quando adicionado a gua fria e mantido sob agitao, forma uma suspenso de aspecto leitoso, separando-se aps repouso. Embora se tenha verificado que uma pequena fraco se torna solvel quando agitado em gua, tido como praticamente insolvel. O aquecimento de suspenses de amido em excesso de gua causa uma transio irreversvel denominada gelatinizao, cuja principal caracterstica o aumento da condutividade e da viscosidade, pela diminuio ou mesmo perda de birrefringncia (perda da cruz de malta), observada usando microscopia de luz polarizada (cf. Figura 2.3) e pelo desaparecimento da cristalinidade evidenciada pela difraco de raios X (Garcia et al., 1997).

Figura 2.3. Fotomicrografia de grnulos de amido de milho, no gelatinizados, sob luz polarizada. Fonte: Rotkiewicz (2008).

Todas estas alteraes ocorrem numa gama de temperaturas relativamente pequena e so formadas pastas das suspenses de amido. A gelatinizao causada pelo enfraquecimento da rede intermicelar, pela quebra das ligaes de hidrognio e pela ligao de molculas de gua de modo a libertar os grupos hidroxilo, causando a desintegrao total da estrutura do grnulo.

A retrogradao o processo que ocorre quando as molculas de amido gelatinizadas se comeam a reassociar, favorecendo uma estrutura mais ordenada. O nome retrogradao dado porque o amido volta sua condio de insolubilidade em gua fria. A retrogradao tem origem na tendncia das molculas, ou de grupos de molculas, de amido dissolvido, se unirem umas s outras atravs de pontes de hidrognio, formando novamente partculas de maior dimenso, numa tentativa de cristalizao de molculas grandes e pesadas que, por essa razo, precipitam (Atwell et al., 1998). A retrogradao um fenmeno complexo e varia de acordo com diversos factores, como a temperatura, o pH, a fonte de amido e a presena de outros componentes (lpidos, electrlitos e acares) (Denardin & Silva, 2008).

2.2. A INDSTRIA AMIDEIRA

A indstria amideira extrai amido de diversas fontes e processa-o numa grande variedade de produtos, como o caso dos amidos nativos, xaropes de glucose, xaropes de glucose-frutose (vulgo isoglucoses) e dextrose (anidra ou monohidratada). Dos processos de produo obtm-se, ainda, diversos sub-produtos, como por exemplo, o corn gluten feed, o corn gluten meal ou o grmen, cuja valorizao representa uma forma de reduzir custos de produo.

2.2.1. O MERCADO MUNDIAL DE AMIDO

O mercado mundial de amido est dividido em cinco matrias-primas: milho, trigo, arroz, batata e mandioca. O milho a mais significativa, sendo utilizado em 75% da produo mundial de amido. a principal fonte de amido nos Estados Unidos, sendo responsvel por cerca de 90% da produo de amido do pas. No que diz respeito Unio Europeia, o milho responsvel por cerca de 46% da produo de amido. No Brasil, o sector de produo de amido de milho responsvel por 70% da produo total de amido, sendo os restantes 30% predominantemente provenientes de mandioca. De acordo com a Association des Amidonniers et Fculiers, a indstria do amido na Unio Europeia processa cerca de 21,6 milhes de toneladas de matrias-primas e produz mais de 9,0 milhes de toneladas de amido e seus derivados.

2.2.2. SECTORES DE APLICAO DOS PRODUTOS AMILCEOS

Os produtos amilceos so utilizados como matrias-primas principalmente nas indstrias alimentares, indstrias de raes animais, indstrias farmacuticas e ainda em indstrias de papel. Segundo a Association des Amidonniers et Fculiers, o consumo de amido e seus derivados nos mercados da Unio Europeia atingiu os 8,7 milhes de toneladas em 2008 (AAF, 2009).

A Figura 2.4 representa os diversos sectores de aplicao dos produtos amilceos e respectiva quota.

Sectores de Aplicao dos Produtos Amilceos

Sectores de aplicao em 2008 em termos de consumo em toneladas
Aplicaes alimentares: 60% Aplicaes no alimentares: 40%

Outros produtos no alimentares, 4% Papel, 28%

Alimentos processados, 29%

Produtos qumicos/ farmacuticos, 6% Raes animais, 1% Confeitaria e bebidas, 32%

Figura 2.4. Quota de aplicao dos produtos amilceos, nos diversos sectores industriais, no ano de 2008. Dados relativos Unio Europeia. Adaptado de AAF (2009).

2.2.3. PRODUO DE XAROPES DE GLUCOSE A PARTIR DO MILHO

Os xaropes de glucose so o produto da hidrlise do amido. Este pode ser hidrolisado por via qumica (atravs de tratamento com cidos, temperatura, presso), por via enzimtica, ou ainda por uma conjugao dos dois processos.

2.2.3.1. A HIDRLISE ENZIMTICA DO AMIDO 2.2.3.1.1. AS ENZIMAS AMILOLTICAS

As enzimas utilizadas no processo de hidrlise do amido so conhecidas por enzimas amilolticas ou amilases e podem ser classificadas pelo mecanismo de aco ou pela aco em si. Se tivermos em considerao o mecanismo de aco, classificam-se em: Endo enzimas: -amilase, pululanase, enzimas ciclizantes (CGTase) que quebram ao acaso as ligaes glicosdicas no interior da molcula;

 Exo-enzimas: -amilase, amiloglucosidase, que hidrolisam a molcula a partir de uma extremidade no redutora. Por outro lado, se considerarmos as enzimas utilizadas no processo de hidrlise quanto aco, as mesmas classificam-se em: Amiloglucosidase: uma enzima que hidrolisa as ligaes -1,4 o amido a partir de uma extremidade no redutora. -amilase: uma enzima que catalisa especificamente a hidrlise das ligaes -1,4 do amido a partir de uma extremidade no redutora, produzindo maioritariamente maltose, acar composto por duas unidades de glucose. -amilase: uma enzima que catalisa especificamente e ao acaso a hidrlise das ligaes 1,4 do amido, mas no consegue hidrolisar as ligaes -1,6. Esta enzima considerada uma enzima liquidificante porque reduz drasticamente a viscosidade de pastas de amido; Pululanases: so enzimas que hidrolisam apenas as ligaes -1,6 do amido. Ciclizantes ou CGTases: so endoenzimas capazes de, simultaneamente, cortar dextrinas de 7, 8 e 9 molculas de glucose e promover a sua ciclizao para formar ciclodextrinas. Grael (1989) As enzimas podem ser de origem vegetal, animal ou microbiana. Esta ltima representa a maior fonte de enzimas comerciais e, como tal, tem sido objecto de muitas pesquisas cientficas e tecnolgicas, tanto no aspecto da optimizao do processo de produo, como no aperfeioamento gentico de microrganismos utilizados na sua produo. Na Tabela 2.1 apresenta-se um resumo da classificao das amilases.
Tabela 2.1. Amilases de origem microbiana. Fonte: Grael (1989)
Sub-Diviso Enzimas -amilases Exoamilases Amiloglucosidases Hidrolisam as ligaes -1,4 do amido a partir de uma extremidade no redutora formando glucose Actividade Hidrolisam as ligaes -1,4 do amido a partir de uma extremidade no redutora, produzindo apenas maltose. Microrganismos Produtores B. subtilis B. amyloliquefaciens B. liqueniformis A. niger A. awamori A. orysae B. cereus B. megaterium B. polymyxa A. niger A. awamori A. orysae B. cereus B. macerans B. amiloliquefaciens B. macerans

-amilases Endoamilases Pululanases Enzimas ciclizantes

Hidrolisam especificamente e ao acaso as ligaes -1,4 do amido formando glucose, maltose, maltotriose e outros polissacridos.

Hidrolisam as ligaes -1,6 do amido Hidrolisam o amido formando compostos cclicos de Dglucose

As -amilases, enzimas sobre as quais incide este estudo, precisam de certas condies especficas para que possam ser utilizadas com o mximo desempenho. A actividade enzimtica condicionada por diversos factores como a temperatura, o pH, a concentrao de substrato, a concentrao da prpria enzima, a presena de activadores e a presena de inibidores. As enzimas so activas num determinado intervalo de temperatura, apresentando actividade mxima temperatura ptima. Acima da temperatura ptima a actividade enzimtica diminui rapidamente e para temperaturas elevadas a enzima sofre desnaturao, com consequente perda irreversvel de actividade biolgica. Por sua vez, baixas temperaturas causam a inibio da actividade da enzima mas no as destroem e, consequentemente, a actividade retomada quando aumenta a temperatura. As enzimas tm tambm um pH ptimo de actuao, acima e abaixo do qual a sua actividade diminui e acaba por cessar. O pH do meio influencia a conformao do centro activo da enzima e, consequentemente, a sua interaco com o substrato. Valores extremos deste parmetro induzem a desnaturao da enzima, perdendo irreversivelmente a sua actividade. Relativamente concentrao de substrato, existe uma concentrao ptima no que diz respeito actividade da enzima. Ao aumento da concentrao da enzima, corresponde um aumento da velocidade da reaco desde que haja substrato disponvel e se mantenham as condies de temperatura e pH dentro do intervalo ptimo de funcionamento da enzima. A presena de inibidores outro parmetro que condiciona a actividade enzimtica, diminuindo-a. Os efeitos dependem do tipo de inibio (irreversvel, reversvel competitiva, reversvel no competitiva). Por sua vez, a presena de activadores, como o caso dos ies clcio, necessria para manter a estabilidade da estrutura secundria e terciria da enzima (Fischer & Stein, 1960). Apesar de existir um valor ptimo de cada um destes parmetros, necessrio ter em conta o compromisso entre actividade e estabilidade enzimtica. A estabilidade enzimtica , ento, a capacidade que uma enzima tem de manter a sua actividade cataltica sob diferentes condies de reaco ao longo do tempo. Deste modo, as condies de processo ideais ao uso de determinada enzima, no so mais do que compromissos entre os diversos factores, da que a correcta definio dos intervalos das variveis de processo represente uma fase crtica para o bom funcionamento do mesmo. (Blanchard, 1992)

2.2.3.1.2.

A LIQUEFACO DO AMIDO

A liquefaco do amido a combinao de dois processos: a completa gelatinizao do polmero de amido, de modo a possibilitar a aco da -amilase, seguida da dextrinizao at um determinado grau que previna a retrogradao em passos posteriores do processo. O xarope resultante da liquefaco pode ser considerado um produto final ou um produto intermdio, sendo, neste ltimo caso, enviado para a etapa de sacarificao (Schenck & Hebeda, 1992). O controlo do processo de liquefaco deve ser efectuado por medies das variveis de processo, nomeadamente, temperatura, pH, concentrao de clcio e percentagem de matria seca, bem como por um acompanhamento do grau de hidrlise atravs de medies de Equivalente em Dextrose (DE) do hidrolisado obtido e a capacidade que este tem para desenvolver colorao azul quando em contacto com iodo ( o chamado teste de amido). O grau de hidrlise obtido nesta etapa tem uma grande influncia na composio dos produtos obtidos pela subsequente sacarificao.

2.2.3.1.3.

A SACARIFICAO DO AMIDO

A sacarificao a segunda etapa da hidrlise enzimtica do amido, na qual os oligossacridos provenientes da liquefaco so hidrolisados de uma forma mais completa para originar um xarope com uma elevada proporo de acares de baixo peso molecular. A sacarificao pode produzir uma vasta gama de xaropes com diferentes composies, dependente do grau de hidrlise medido em DE. DE representa o Equivalente em Dextrose e uma medida do nmero de extremidades redutoras dos produtos de hidrlise do amido. O nmero de extremidades redutoras transmite uma ideia da polimerizao da molcula de amido e, portanto, quanto maior o valor de DE, maior o efeito de hidrlise A enzima utilizada nesta fase do processo uma amiloglucosidase que, como foi referido no subcaptulo 2.2.3.1.1, hidrolisa apenas as ligaes -1,4 do amido. As ligaes -1,6 constituem cerca de 4 5% das ligaes totais no amido. Deste modo, se se usarem apenas -amiloglucosidases na sacarificao do amido, apenas se consegue obter um xarope com 95 96 DE. Para aumentar o teor em glucose do hidrolisado necessrio usar uma combinao entre -amiloglucosidases e pululanases, enzimas que hidrolisam as ligaes -1,6. O controlo do processo de sacarificao deve ser realizado por medies das variveis de processo, nomeadamente, temperatura, pH e percentagem de matria seca, e por um acompanhamento do grau de converso atravs de medies de equivalente em dextrose e da composio de acares do xarope obtido, bem como realizao de testes de amido.

10

2.2.3.2. O PROCESSO DE PRODUO DE XAROPES DE GLUCOSE UTILIZADO NA COPAM

CONFIDENCIAL

Figura 2.5. Diagrama do processo de produo de xaropes de glucose, por via dual-enzimtica, implementado na COPAM.

2.2.4. PRODUO DE DEXTROSE A PARTIR DO MILHO

A dextrose um monossacrido disponvel em duas formas: monohidrato com 8.5 por cento de gua de cristalizao e anidro que, como o nome indica, no contm humidade livre (Josly, 1964). Quando a dextrose o produto final desejado, as condies de hidrlise do amido devem ser ajustadas para dar um contedo mximo de D-Glucose no hidrolisado, de modo a maximizar o rendimento de cristalizao. Para produo de dextrose monohidratada, o hidrolisado proveniente da sacarificao, depois de purificado e descolorado, concentrado num evaporador de filme descendente at se obter cerca de 75% de matria seca e, de seguida, arrefecido e enviado aos cristalizadores, nos quais foi deixada uma quantidade prvia de cristais para servir de ncleo de cristalizao. A cristalizao da forma hidratada geralmente conduzida na gama de temperaturas 30-50 C, pelo perodo de 3-5 dias, podendo ser realizada em batch ou em contnuo (Blanchard, 1992). A matria seca, o contedo em D-Glucose e a temperatura do hidrolisado devem ser cuidadosamente controladas de modo a garantir que a sobressaturao, fora motriz da cristalizao, se mantm dentro da gama ptima (Schenck, 1992). importante definir a taxa de arrefecimento de maneira a que a sobressaturao permanea praticamente constante durante o perodo de arrefecimento (Mersmann, c1995). Os cristalizadores de dextrose monohidratada so tanques cilndricos horizontais equipados com agitador e camisas de arrefecimento, nas quais circula gua, para induzir o crescimento dos cristais. O processo de cristalizao por arrefecimento pode ser utilizado quando a solubilidade da substncia a ser cristalizada aumenta com a temperatura, o que, de facto, acontece no caso da DGlucose (cf. Figura 2.6)

11

Solubilidade (g dextrose/g gua)

Solubilidade da dextrose monohidratada

4,0 3,0 2,0 1,0 0,0 15 25 35 45 55

Temperatura (C)

Figura 2.6. Curva de solubilidade da dextrose monohidratada. Adaptado de Blanchard (1992).

A massa resultante dos cristalizadores tem o nome de massecuite e enviada para uma centrfuga de cesto perfurado com tela filtrante para separar os cristais das guas-mes de cristalizao, s quais se d o nome de hidrol. Utiliza-se gua quente desmineralizada para lavar os cristais e a quantidade de gua dever ser optimizada para remover o hidrol sem, no entanto, dissolver excessivamente os cristais (Schenck, 1992). O hidrol pode ser concentrado e recirculado a um novo ciclo de cristalizao, de modo a aumentar o rendimento de cristalizao (Hui, 1992). A humidade e a temperatura do produto final devem ser rigorosamente controladas. Assim, os cristais provenientes da centrfuga, cuja humidade ronda os 12-14 %, so enviados a um secador de leito fluidizado at que apresentem uma humidade abaixo da quantidade estequeomtrica do monohidrato (8,5%) de modo a remover toda a humidade livre. Deve ter-se em ateno que a secagem do produto a temperaturas elevadas consegue retirar alguma gua de hidratao e converter parcialmente os cristais forma anidra. O mesmo acontece se o produto for armazenado a elevadas temperaturas. Para o evitar, os cristais, depois de secos, so arrefecidos a uma temperatura inferior a 30C. (Schenck, 1992)

2.2.4.1. O PROCESSO DE PRODUO DE DEXTROSE MONOHIDRATADA UTILIZADO NA COPAM

CONFIDENCIAL

Figura 2.7. Diagrama do processo de produo de dextrose monohidratada implementado na COPAM.

12

CAPTULO 3 3. MATERIAIS E MTODOS

CONFIDENCIAL
3.1. MATERIAIS
3.1.1. REAGENTES
Tabela 3.1. Reagentes utilizados nos diversos procedimentos experimentais.

3.1.2. ENZIMAS
Tabela 3.2. Alfa-amilases utilizadas no ensaio industrial para optimizao do processo de produo de xaropes de glucose.

3.1.3. EQUIPAMENTO E OUTROS MATERIAIS

Tabela 3.3. Equipamento utilizado nos diversos procedimentos experimentais.

13

CONFIDENCIAL
3.2. MTODOS ANALTICOS
Neste subcaptulo descrever-se-o os procedimentos laboratoriais adoptados. Cada um dos mtodos analticos descritos foi utilizado para analisar amostras de xaropes aps liquefaco e aps sacarificao. Para aplicar cada um dos mtodos indicados necessrio comear por filtrar a amostra em papel de filtro para reter os resduos proteicos.

Figura 3.1. Indicao do local de recolha das amostras analisadas no diagrama de produo de xaropes de glucose, por via dual-enzimtica, implementado na COPAM.

3.2.1. DETERMINAO DA MATRIA SECA ATRAVS DO NDICE DE REFRACO 3.2.2. DETERMINAO DO EQUIVALENTE EM DEXTROSE (DE) POR OSMMETRIA 3.2.3. DETERMINAO DA COMPOSIO EM ACARES POR HPLC

Tabela 3.4. Condies operatrias da cromatografia para uma boa separao de picos.

Tabela 3.5. Tempos de reteno tpicos de cada componente das amostras em anlise, para a coluna Aminex87 C.

3.2.4. DETERMINAO DO PH 3.2.5. REALIZAO DO TESTE DE AMIDO POR REACO AO IODO

Tabela 3.6. Resultados possveis aps realizao do teste de amido por reaco ao iodo.

3.2.6. DETERMINAO DO TEOR EM CLCIO POR TITULAO COM EDTA

14

CONFIDENCIAL
3.3. MTODOS EXPERIMENTAIS
3.3.1. ENSAIO INDUSTRIAL: LIQUEFACO ENZIMTICA COM A ENZIMA EM TESTE 3.3.2. OPTIMIZAO DO RENDIMENTO DE CRISTALIZAO DA DEXTROSE

15

CAPTULO 4 4. RESULTADOS E DISCUSSO

CONFIDENCIAL
4.1. OPTIMIZAO DO PROCESSO DE PRODUO DE XAROPES DE GLUCOSE
4.1.1. LEVANTAMENTO DAS CONDIES DE PROCESSO
Tabela 4.1. Condies de especificao do processo de produo de xaropes de glucose por via dual enzimtica. Tabela 4.2. Condies de especificao indicadas pelo fornecedor para a utilizao da enzima actual.

Figura 4.1. Representao grfica do pH do leite de amido entrada do processo de liquefaco, ao longo dos meses em estudo.

Figura 4.2. Representao grfica da concentrao de clcio do 15 DE sada dos reactores tubulares do processo de liquefaco, ao longo dos meses em estudo.

Figura 4.3. Representao grfica da percentagem de matria seca do 15 DE sada dos reactores tubulares do processo de liquefaco, ao longo dos meses em estudo.

Figura 4.4. Representao grfica do Equivalente em Dextrose (DE) do xarope 15 DE sada dos reactores tubulares do processo de liquefaco, ao longo dos meses em estudo. Figura 4.5. Representao grfica dos consumos especficos de enzima utilizada na liquefaco, para os meses em estudo. Figura 4.6. Representao grfica do pH do xarope entrada do processo de sacarificao, ao longo dos meses em estudo.

Figura 4.7. Representao grfica da percentagem de matria seca do Hidrolisado 95 aps sacarificao, ao longo dos meses em estudo.

Figura 4.8. Representao grfica do Equivalente em Dextrose (DE) do Hidrolisado 95 aps sacarificao, ao longo dos meses em estudo.

16

CONFIDENCIAL
Figura 4.9. Representao grfica da composio em acares do hidrolisado 95, obtida por HPLC, para os vrios meses em estudo.

4.1.2. CORRECO DOS PARMETROS DO PROCESSO DE PRODUO UTILIZANDO A ENZIMA ACTUAL

Tabela 4.3. Ensaio de optimizao do processo de liquefaco enzimtica, utilizando a enzima actual.

Tabela 4.4. Condies ptimas de funcionamento do processo com a enzima actual.

17

CONFIDENCIAL
4.1.3. ENSAIO INDSTRIAL COM A ENZIMA EM TESTE
Tabela 4.5. Condies de especificao indicadas pelo fornecedor para a utilizao da enzima em teste.

Tabela 4.6. Ensaio de optimizao do processo de liquefaco enzimtica, utilizando a enzima em teste.

Tabela 4.7. Condies ptimas de funcionamento do processo com a enzima em teste.

18

CONFIDENCIAL
4.1.4. ANLISE COMPARATIVA DO EFEITO DE VRIOS PARMETROS NA LIQUEFACO ENZIMTICA 4.1.4.1. EFEITO DA CONCENTRAO ESPECFICA DE ENZIMA
Figura 4.10. Anlise do efeito da concentrao especfica de enzima necessria obteno de determinados valores de DE.

4.1.4.2. EFEITO DA CONCENTRAO DE CLCIO

Figura 4.11. Anlise comparativa do efeito da concentrao de clcio na liquefaco enzimtica do amido.

4.1.4.3. EFEITO DO PH 4.1.4.4. QUALIDADE DO PRODUTO FINAL

Tabela 4.8. Seguimento do processo de sacarificao do xarope produzido durante o ensaio de optimizao da liquefaco enzimtica. Comparao de valores para o xarope produzido utilizando ambas as enzimas na liquefaco.

19

CONFIDENCIAL
4.1.5. ANLISE COMPARATIVA DE CUSTOS
Tabela 4.9. Comparao dos valores dos vrios parmetros do processo, depois da optimizao do mesmo, para cada uma das enzimas em estudo.

Figura 4.12. Ensaio laboratorial para determinar a dosagem de soluo de carbonato de sdio necessria ao ajuste de pH para as condies ptimas de funcionamento de cada enzima.

Figura 4.13. Ensaio laboratorial para determinar a dosagem de soluo de cido clordrico necessria ao ajuste de pH para as condies ptimas de funcionamento da sacarificao.

20

CONFIDENCIAL
4.2. OPTIMIZAO DO PROCESSO DE PRODUO DE DEXTROSE
Tabela 4.10. Condies de especificao do processo de produo de dextrose monohidratada.

21

CONFIDENCIAL
4.2.1. DETERMINAO DO RENDIMENTO TERICO DE CRISTALIZAO
Tabela 4.11. Rendimento terico de cristalizao calculado para uma temperatura de cristalizao de 30C e um coeficiente de sobressaturao final de 1,05, variando a percentagem de matria seca e a percentagem de glucose do xarope de alimentao cristalizao.

Tabela 4.12. Rendimento terico de cristalizao calculado para uma temperatura de cristalizao de 31C e e um coeficiente de sobressaturao final de 1,05, variando a percentagem de matria seca e a percentagem de glucose do xarope de alimentao cristalizao.

22

CONFIDENCIAL
4.2.2. DETERMINAO DO RENDIMENTO REAL DE CRISTALIZAO
Figura 4.14. Diagrama representativo do processo de produo de dextrose monohidratada.

Tabela 4.13. Caracterizao das correntes do processo de produo de dextrose monohidratada. As quantidades de cada
componente nas correntes foram determinadas por balanos mssicos

23

CONFIDENCIAL
4.2.3. ANLISE COMPARATIVA ENTRE RENDIMENTO TERICO E RENDIMENTO REAL DE CRISTALIZAO 4.2.3.1. VARIVEIS DO PROCESSO QUE INFLUENCIAM O RENDIMENTO DE CRISTALIZAO 4.2.3.2. PERDAS
DE PRODUTO NAS VRIAS OPERAES UNITRIAS QUE INFLUENCIAM O RENDIMENTO DE

CRISTALIZAO

24

CONFIDENCIAL
4.2.4. SUGESTES DE ACES FUTURAS

25

CAPTULO 5 5. CONSIDERAES FINAIS

CONFIDENCIAL

26

CONFIDENCIAL

27

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

AAF (2009). Association des Amidonniers et Fculiers. Website: http://www.aaceu.org/index.html. Acesso em 22 Outubro 2009. Alvarez, H. (1997). Caracterizao das enzimas e preparados enzimticos. Botucatu: Centro de Razes e Amido Tropicais, Universidade Estadual Paulista. P. 125. (Ministrio de Cincia e Tecnologia Relatrio de actividade ao Programa Recursos Humanos e Apoio a Empresas). Alvarez, H. (1997). Panorama da produo e uso dos hidrolisados no Brasil.. Botucatu: Centro de Razes e Amido Tropicais, Universidade Estadual Paulista. P. 35. (Boletim Tcnico). Atwell, W. A.; Hood, L. F.; Lineback, D. R.; Vanians-Marston, E.; Zobel, H. F. (1998) The terminology and methodology associated with basic starch phenomena. Cereal foods world, 33, pp. 306-311. Blanchard, P. H. (1992). Technology of Corn Wet Milling and Associated Processes. Elsevier Applied Science Publishers. Bueno, M. (2006) Homepage oficial do Prof. Marco Iniold Bueno e Silva. Website: http://www.marcobueno.net. Acesso em 1 Junho 2009. Davis, C. (2006). Homepage de C. Davies. Website: http://cdavies.wordpress.com/. Acesso em 30 Julho 2009. Denardin, C. C.; Silva, L. P (2008). Estrutura dos grnulos de amido e sua relao com propriedades fsico-qumicas. Revista Cincia Rural, Santa Maria. Disponvel em http://www.scielo.br Dziedzic, S. Z.; Kearsley, M. W. (1984). Glucose Syrups: Science and Technology. Elsevier Applied Science Publishers. Londres. Fischer, E.H.; Stein, E.A. (1960). Alpha amylase. In: The Enzymes. Vol. 4. Academic Press, New York. pp 313-343. Garcia, V.; Colonna, P.; Bouchet, B.; Gallant, D. J. (1997). Structural changes of cassava starch granules after heating at intermediate water contents. Starch/Strke, v. 49, n. 5, pp. 171-179. Grael, E. T.; Menezes, T. J. B. (1989). Produo de -amilase:caractersticas morfofisiolgicas de . Amyloliquefaciens visando melhoramento gentico. Colet. Inst. Tecnol. Aliment., v. 19, n. 1, pp. 70-76. Hui, Y. H. (1992). Encyclopedia of food science and technology. New York, vol. 4, pp. 2490 2504. Josly, M. A. (1964). Food processing operations: their managements, machines, materials and methods. Westport, Connecticut, pp. 63-78.

28

Kameda, E. (2008) Apresentao sobre actividade e estabilidade enzimtica. Disponvel em: http://www.eq.ufrj.br/biose/nukleo/aulas/Enzimol%20Grad/enz_aula_06.pdf Lajolo, F.M.; Menezes, E.W.(2006). Carbohidratos en alimentos regionales Iberoamericanos. Universidade de So Paulo, p. 648. Lang, Y-D; Cervantes, A.M.; Biegler, L.T. (1999) Dynamic optimization of a batch cooling crystallization process, Ind. Eng. Chem. Res., 38 (4), pp. 1469-1477. Lang, Y-D; Cervantes, A.M.; Biegler, L.T. (1999) Dynamic optimization of a batch cooling crystallization process. Ind. Eng. Chem. Res., 38 (4), pp. 1469-1477. Linden, G.; Lorient, D. (1997). Bioqumica agroindustrial revelacin alimentar de la produccin agrcola. Zaragoza: Acribia. Cap. 11, p. 283-293. Mersmann, A. (c1995). Crystallization technology handbook. Mercel Dekker, Inc. New York. Pombeiro, A.J.L. (1991). Tcnicas e Operaes Unitrias em Qumica Laboratorial. Fundao Calouste Gulbenkian 2 Ed., Lisboa. Pombeiro, A.J.L.O. (1991). Tcnicas e Operaes Unitrias Em Qumica Laboratorial, 2 ed. Fundao Calouste Gulbenkian, Lisboa. Qian, Ru-ying; Botsaris, G. D. (1997). A New Mechanism for Nuclei Formation in Suspension Crystallizers: the Role of Interparticle Forces. Chemical Eng. Science, Vol 52, No 20, pp. 3429-3440. Rotkiewicz, P. (2008). Droplet: Microscopy of the Protozoa. Website: http://www.dropletmicroscopy.org. Acesso em 17 Junho 2009. Schenck, F. W.; Hebeda, R. E. (1992). Starch Hydrolysis Products: Worldwide Technology, Production, and Applications.VCH Publishers, Inc. New York Singh, N.; Singh, J.; Kaur, L.; Sodhi, N.; Gill, B. (2003). Morphological, thermal and rheological properties of starches from different botanical sources. Food Chemistry, 81, pp. 219-231. Tester, R. F.; Karkalas, J.; Qi, X. (2004). Starch composition, fine structure and architecture. Journal of Cereal Sciences, 39, pp. 151-165. Vincken, J.P.; Jacobsen, E.; Visser, R.G.E. (1997). Modification of potato starch polymers in planta. In: Van Doren, H. A:; Van Swaaij, A.C.P.M. (Eds.) Starch 96 the book. The Hague: Carbohydrate Research Foundation, pp. 89-96.

29

ANEXOS

A.

TABELA DE VALORES DE OSMOLALIDADES DE REFERNCIA PARA O XAROPE APS LIQUEFACO (15DE) E

APS SACARIFICAO (H95)

CONFIDENCIAL
B. FOLHAS DE ESPECIFICAO E SEGURANA DA ENZIMA LIQUOZYME SUPRA

CONFIDENCIAL
C. FOLHAS DE ESPECIFICAO E SEGURANA DA ENZIMA CLEARFLOW AA

CONFIDENCIAL
D. CROMATOGRAMAS OBTIDOS PELA TCNICA DE HPLC APLICADA S AMOSTRAS DE HIDROLISADO

CONFIDENCIAL

30