CICLO CELULAR ESTUDO DIRIGIDO O ciclo celular compreende uma seqncia complexa de eventos que garantem a transmisso correta,

, para as clulas filhas, de uma cpia completa do genoma. um processo que atinge todas as clulas somticas e engloba uma srie de passos coordenados ao longo do ciclo que procuram assegurar o correto crescimento e desenvolvimento do organismo. Nesses passos, protenas-chave associam-se e formam complexos ativos que conduzem o processo de duplicao e separao dos cromossomos. Essa regulao permite clula ser encaminhada progresso no ciclo, crescimento e multiplicao, diferenciao celular, ou a uma condio de latncia. Ocorrendo falhas nesses mecanismos regulatrios, a clula pode ser direcionada apoptose ou ocasionar o desenvolvimento tumoral.

RELEMBRANDO AS FASES DO CICLO

O ciclo celular composto por 4 fases: G1, S, G2 e a MITOSE propriamente dita. Durante o ciclo, fases de snteses de DNA (S) so separadas por fases (gaps) nas quais ocorre sntese de RNA e protenas, sendo que juntas essas trs fases compem a intrfase perodo no qual no ocorre diviso celular. Em G1, que corresponde ao intervalo (gap) entre a mitose e a duplicao do DNA, a clula sintetiza protenas necessrias para a fase seguinte e a massa celular aumenta para suportar a diviso celular. A fase S o estgio de sntese do DNA. Durante esse estgio, cada cromossomo, que em G1 era uma nica molcula de DNA, replica-se para se tornar um cromossomo bipartido, que consiste em duas cromtides-irms, cada uma contendo uma cpia idntica da molcula original linear de DNA. Em G2, a clula sintetiza protenas importantes para a organizao de sua cromatina e para a mitose, na qual ocorre a diviso do material gentico. A mitose constitui-se em um elaborado processo para garantir que cada uma das clulas-filhas receba um conjunto completo de informao gentica. Esse resultado obtido atravs de um mecanismo a segregao cromossmica que responsvel por distribuir uma cromtide, de cada cromossomo, para cada clula filha. O ciclo ao todo leva de 18 a 24 horas, sendo a mitose, a fase mais rpida; G1, a mais lenta (de 10 a 12 horas); S tem uma durao de 6 a 8 horas e G2 de 2 a 4 horas.
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H variaes na durao do ciclo de acordo com o tipo de clula, podendo ser bem mais rpido (algumas poucas horas) em clulas lbeis, at meses em outros tipos de clulas. Neurnios e hemcias no se dividem, pois so totalmente diferenciados, ficando permanentemente em uma etapa do ciclo conhecida como G0. G0 um estado quiescente no qual as clulas adultas maduras podem ficar por tempo indeterminado. Nesse estgio, as clulas permanecem metabolicamente ativas, mas no se dividem ou, ento, se dividem apenas quando estimuladas por sinais extracelulares, com a finalidade de renovao tecidual aps morte ou leso celular (como observa-se nos hepatcitos, que podem entrar em G0, mas aps dano ao rgo, eventualmente voltam a G1 e continuam o ciclo celular).

A REGULAO DO CICLO CELULAR O processo de regulao do ciclo celular efetuado, basicamente, pela ao de protenas-chave que controlam a seqncia especfica de eventos que caracterizam o ciclo. Essas protenas formam uma rede intra e extracelular complexa, que coordena no apenas a proliferao, mas tambm a quiescncia, a diferenciao e a morte celular. Essas protenas so reguladas, por sua vez, atravs de processos como fosforilao, desfosforilao, sntese e degradao. Alm disso, existem pontos de checagem que funcionam como pontos de controle de qualidade: caso haja dano ao material gentico, ativa-se uma cascata de sinais para bloquear a progresso do ciclo naquela clula, colocando em funcionamento a maquinaria de reparo do material gentico e/ou acionando a apoptose por meio de sensores, sinalizadores e efetores especficos. Esses pontos tambm so responsveis por permitir a finalizao correta dos passos de uma fase precedente, regulando a transio para a fase seguinte. A maior quantidade de pontos de checagem ocorre em clulas que esto em constante proliferao, porque, nesses casos, o risco de propagao de uma mutao deletria maior. Alteraes nesses pontos de checagem levam ao acmulo de mutaes e aberraes cromossmicas que, por sua vez, aumentam a probabilidade de malformaes e o desenvolvimento de doenas como o cncer. A progresso ordenada do ciclo celular depende de fatores positivos, que estimulam a continuidade do ciclo, e fatores negativos, capazes de parar o ciclo em um determinado estgio. 1. Controladores Positivos do Ciclo Celular: A) A progresso do ciclo depende de uma classe especial de enzimas do tipo quinase de serina/treonina, cuja subunidade cataltica conhecida como CDK (cyclin-depent kinase). So expressas durante todo o ciclo (constitucionais), mas na forma inativa. S so ativadas quando ocorre a ligao entre elas e subunidades regulatrias chamadas ciclinas. B) A ciclina tem um padro cclico de acmulo e degenerao, levando a uma variao peridica da sua concentrao durante o ciclo. So sintetizadas somente em fases especficas, conforme a exigncia (facultativas) e, portanto, destrudas aps a sua utilizao. Liga-se s CDKs para que possam exercer suas funes. As CDKs e as ciclinas ativadas levam progresso do ciclo celular, sendo os principais fatores positivos para a evoluo do ciclo. A ativao das CDKs-ciclinas depende da fosforilao desse complexo; j a inativao do complexo pode se dar pela degradao de ciclina, adio ou remoo de fosfato, e pela ligao de CKIs (ver
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abaixo). A inter-relao entre ativao e desativao da atividade de CDKs em vrias etapas do ciclo a chave para a progresso normal e para a regulao do ciclo celular, uma vez que cada fase oferece um ou mais pontos de controle especficos. A principal funo do complexo CDK-ciclina a fosforilao de vrias outras protenas em determinados estgios do ciclo. 2. Controladores Negativos do Ciclo Celular A) CKIs (cyclin kinase inhibitors). Atuam sobre uma variedade de complexos CDKciclinas controlando a atividade desses complexos. O mecanismo pelo qual as CKIs atuam dependente de sua concentrao e no est completamente entendido. Tem como principal funo bloquear a fosforilao de protenas pela quinase e parar o ciclo celular. Existem duas classes de CKIs: Famlia CIP/KIP (protena inibidora de quinase): incluem as protenas com um domnio N terminal inibidor, sendo as protenas p21, p27 e p57. So inespecficas (CKIs universais). Atuam evitando a ativao da quinase. Famlia INK4 (inibidor de CDK): tem ao seletiva sobre o complexo ciclina D/CDK 4,6, sendo as protenas p15, p16, p18 e p19. Ligam-se sobre a quinase protica, evitando a sua interao com a ciclina D, inibindo assim a ativao da quinase.

B) Sistema ubiquitina de degradao de protena: atua na degradao das ciclinas, permitindo a transio de fases do ciclo. Normalmente, promove a protelise por meio da adio de cadeias de ubiquitina s molculas de ciclina, que so ento degradas pelo proteossomo. Eventos mutacionais provocam a perda do sinal para degradao, levando estabilizao e expresso contnua das ciclinas. C) Fosfatases Especficas: Fazem a remoo do fosfato essencial para a ativao do complexo CDK-ciclina ou a adio de mais um fosfato tambm bloqueando a atividade da quinase. Para que o ciclo celular seja iniciado, deve ocorrer a ligao de um fator de crescimento a um receptor especfico na membrana plasmtica, no citoplasma ou no ncleo, ativando uma cascata de ativao de protenas transdutoras de sinal, que enviam o sinal at o ncleo. Na ausncia de fatores mitognicos, as clulas so incapazes de ultrapassar o ponto de restrio em G1 e tornam-se quiescentes. Qualquer mutao nos genes que codificam esses fatores de crescimento pode resultar em protenas alteradas e no desenvolvimento de algumas neoplasias humanas bem relacionadas a mutaes em genes especficos. Dentre os principais fatores de crescimento celular esto os fatores de crescimento derivados de plaquetas (PDGF), fatores de crescimento epidrmico (EGF), fator de crescimento vascular endotelial (VEGF), fator de crescimento fibroblstico (FGF) e insulina.

FASE G1 Aps o estmulo de fatores mitognicos, ocorre elevao dos nveis de ciclina D com formao do complexo envolvendo as quinases CDK4 e CDK6. A protena pRb (protena do retinoblastoma) controla negativamente o ciclo nesta etapa. Ela ocorre em uma forma desfosforilada durante os dois primeiros teros da fase G1, antes que o ponto de restrio seja atingido. Enquanto pRB permanecer
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desfosforilada, ela restringe o crescimento celular bloqueando a progresso da clula e evitando que ela ultrapasse o ponto de restrio da fase G1 para a fase S. No incio do ciclo, a pRB est ligada a um fator, o E2F, o que permite que ela no seja fosforilada, evitando assim a continuao do ciclo. Conforme o ciclo avana e a clula progride rumo transio G1/S, a pRb fosforilada pela CDK4 e 6, liberando o fator E2F. O E2F atua como fator de transcrio, estimulando a transcrio de genes envolvidos na progresso do ciclo celular, entre eles o da ciclina E, alm de genes requeridos para a sntese de nucleotdeos e de DNA polimerase. Alm disso, estimula o prprio E2F, em um sistema de retroalimentao positiva. A pRb mantida fosforilada nas fases S, G2 e durante a mitose. Apenas aps a mitose, quando os nveis de CDKciclina ficam muito reduzidos, ela volta ao seu estado ativo desfosforilada.

A protena p53 parte dos mecanismos de checkpoint da clula. Quando ocorrem mutaes no DNA, ela interage com o ciclo celular na tentativa de identificar eventuais erros e permitir que estes sejam reparados. um fator de transcrio que bloqueia o ciclo celular e impede a progresso para a fase S ou promove a morte celular. Entre seus efetores est a p21, capaz de inibir as CDKs responsveis pela entrada na fase S. A produo aumentada de p21 vai bloquear a atividade de quinase do complexo ciclina/Cdk; este, por sua vez, no vai fosforilar pRb, que no vai liberar o fator E2F e o ciclo vai parar. Esta interrupo no ciclo tem por finalidade permitir que o dano no DNA seja corrigido para que a clula continue sua diviso, ou ento que a clula seja encaminhada apoptose, caso o dano seja deletrio e no sujeito a correes. Um outro controlador que atua ao trmino de G1 a CKI p27, que vai bloquear a atividade de quinase do complexo ciclinaE/Cdk2, causando tambm uma parada no ciclo celular.

FASE S A entrada na fase S, vindo de G1, e a progresso de S para G2 dependem tambm do funcionamento dos complexos CDK-ciclina. Em G1 tardio, enquanto a expresso da ciclina E aumenta, estimulada pelo fator de transcrio E2F, os nveis de ciclina D so reduzidos por causa da diminuio da oferta de fatores de crescimento. Conseqentemente, reduzida a concentrao dos complexos CDK4,6-ciclina D e aumentam os nveis de CDK2-ciclina E, cuja ativao promove a entrada da clula na fase S. Os mecanismos exatos envolvidos nesta etapa, entretanto, no soa ainda compreendidos. Na transio G1/S, a ciclina A comea a ser sintetizada, e os complexos CDK2ciclina A mostram importante funo imediatamente antes da sntese de DNA, fosforilando protenas especficas envolvidas com as origens de replicao do DNA. As origens de replicao so regies na fita de DNA que possuem caractersticas incomuns, como seqncias consenso de nucleotdeos repetidos, que so reconhecidas por um complexo enzimtico e atuam como stio de ligao para essas enzimas, iniciando o processo de replicao do DNA. Estas protenas especficas so conhecidas como fatores licenciadores, os quais ligam-se a determinados pontos da molcula de DNA, permitindo a deselicoidizao da estrutura dupla-fita, a fim de que seja replicada. Os fatores licenciadores acumulam-se durante G1, atuam em S, e so destrudos em G2 para impedir nova replicao antes da mitose. Como so vrias as origens de replicao (ou seja, a duplicao do material gentico ocorre em vrios locais simultaneamente), so igualmente importantes nesta fase os pontos de
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metilao. Eles sinalizam que determinada seqncia da molcula j replicou, impedindo excesso de material duplicado. Um outro componente o complexo mittico CDK2-ciclina B ou Fator Promotor da Mitose (MPF). Ele permanece inativo durante toda a fase S e protege a clula de uma diviso antes que ela esteja totalmente pronta para isto.

FASE G2 Nesta fase, inicia-se a condensao da cromatina e a formao de estruturas bem definidas para que a clula possa progredir para a mitose. A principal quinase desta fase a CDK1, que forma complexos tanto com a ciclina B quanto com a ciclina A. A CDK1 ativa-se quando fosforilada, depois que isto ocorre, ela fosforila importantes substratos que sero cruciais na mitose. Alm disso, a CDK1 contribui para a regulao do complexo promotor de anfase. A p53 atua nesse ponto de checagem inibindo o complexo CDK1-ciclina A. Para a clula progredir para a mitose necessria a sbita ativao do complexo CDK2-ciclina B (ou MPF) pela desfosforilao, que ocorre na transio G2/M e resulta na fosforilao de muitas protenas necessrias mitose. Esse complexo essencial para a entrada e a sada da fase M. Durante G2 e antes da entrada na fase M, CDK2 liga-se ciclina B, formando um complexo que fosforilado, permanecendo inativo. Quando esse complexo , por fim, desfosforilado, ocorre sua ativao, e a mitose comea.

Relembrando o checkpoint Quando no h ligao dos microtbulos aos cinetcoros correspondentes ou quando no h tenso adequada na ligao, os cinetcoros produzem continuadamente um sinal que ativa o mecanismo de checkpoint. A sinalizao bioqumica culmina em interaes moleculares entre MAD, BUB e o APC, atrasando a segregao cromossmica.
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MAD e BUB inativam o APC atravs de ligao direta ao Cdc20. O complexo MAD2/BUB1/Cdc20 que formado constitui o complexo de checkpoint mittico e impede o funcionamento do APC, retardando o incio da anfase at que todos os cinetcoros estejam adequadamente ligados aos microtbulos.

CONSIDERAES FINAIS Apesar do enorme conhecimento que tem sido gerado nos ltimos anos acerca dos mecanismos que conduzem uma clula duplicao e segregao de seu material gentico para as clulas-filhas, ainda h muitas questes a serem respondidas. O cncer se caracteriza pela proliferao descontrolada a partir de mutaes em genes que controlam o ciclo celular. Alteraes afetando a funo de elementos reguladores como p16 (melanomas, linfomas, cncer de pulmo, pncreas, etc), ciclina D (cncer de mama, de prstata, estmago, etc.), p53 (mama, ossos, colo, etc.) e pRB (principalmente o retinoblastoma, alm de sarcoma e outros) so apenas alguns dos exemplos conhecidos da inter-relao entre cncer e regulao do ciclo celular.

Monitores: ngela Schutz Paschoal Diego Alex Oss