UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA

FIT 5806 - BIOTECNOLOGIA

APOSTILA (v.6)

Rubens Onofre Nodari Doutor em Gentica (UCDavis-CA), Prof. Titular do Dep. de Fitotecnia, Centro de Cincias Agrrias, Universidade Federal de Santa Catarina, C. Postal 476, Florianpolis, SC, 88040-900, e-mail: nodari@mbox1.ufsc.br Miguel Pedro Guerra Doutor em Cincias (USP), Prof. Titular do Dep. de Fitotecnia, Centro de Cincias Agrrias, Universidade Federal de Santa Catarina, C. Postal 476, Florianpolis, SC, 88040-900, e-mail:guerra@cca.ufsc.br Valdir Marcos Stefenon Doutor em Cincias Florestais/Gentica (Uni-Gttingen-Alemanha), Pesquisador CNPq-PDJ no Dep. de Fitotecnia, Centro de Cincias Agrrias, Universidade Federal de Santa Catarina, e-mail: gene_mol@yahoo.com.br Florianpolis, Setembro de 2008

CONTEDO
PARTE 1 Princpios de Gentica Molecular 1-Introduo s macromolculas: protenas e cidos nucleicos 1.1-Protenas 1.2-cidos nucleicos 2-Replicao 3-Transcrio 4-Traduo 5-Mutao e reparo 6-Metilao 7-Regulao gnica PARTE 2 Marcadores genticos 1- Introduo 2-Marcadores morfolgicos 3-Marcadores protenas de sementes 4-Isoenzimas 5-RFLPs 6-Minissatlites 7-RAPDs 8-Microssatlites 9-AFLPs 10-SCARs 11-SNPs 12-Anlise comparativa 13-Aplicaes dos marcadores moleculares PARTE 3 Organismos Geneticamente Modificados 1-Introduo 2-Transformao de plantas 3-Diferenas entre os mtodos de melhoramento convencionais e biotecnolgicos 4-Oportunidades 5-Evoluo do cultivo de plantas transgnicas 6-Limitaes 7-Biossegurana Regulamentao 8-Determinao de risco 9-Anlise de Risco 10-Princpio da Precauo 11-Rotulagem 12-O caso da soja transgnica resistente ao herbicida gliofosate 10-Implicaes Scio-econmicas 11-Percepo pblica PARTE 4 Legislao Pertinente 1-Direitos de proteo e patentes 2-Lei de proteo das cultivares 3-Biodiversidade, Biotecnologia e Agricultura PARTE 5 Biotica 1-Introduo 2-Histrico 3-Situao na Europa e EUA 4-Situao no Brasil 5-Implicaes da clonagem de animais 6-Relevncia da biotica 7-A biotica leiga 8-As novas tecnologias espcie humana BIBLIOGRAFIA 5 5 7 15 17 18 19 21 21 23 23 24 26 27 29 31 32 33 35 36 37 37 42 42 46 48 50 54 54 60 61 73 74 75 76 77 81 82 84 88 88 88 89 89 90 92 92

APRESENTAO
Esta apostila rene contedos bsicos de biologia celular e molecular e suas decorrentes aplicaes biotecnolgicas e outras tcnicas de uso freqente, visando conhecer, conservar e melhorar a diversidade gentica existente. O objetivo desta apostila proporcionar ao estudante um conjunto de informaes bsicas e as principais aplicaes das biotecnologias. Este conjunto de informaes se constitui no ponto de partida para estudos mais aprofundados. A biotecnologia em seu sentido mais amplo compreende a manipulao de microorganismos, plantas e animais, objetivando a obteno de processos e produtos de interesse. Desta maneira, toda atividade que envolva a aplicao dos conhecimentos de fisiologia, bioqumica e gentica, considerada como tcnica biotecnolgica. Em seu senso mais restrito a biotecnologia compreende a associao de tcnicas mais sofisticadas de biologia molecular e celular, engenharia gentica e manipulaes celulares in vitro. Para o CNPq, biotecnologia pode ser conceituada como a utilizao de sistemas celulares para a obteno de produtos e desenvolvimento de processos. A FAO (1989) conceitua biotecnologia como a aplicao dos princpios cientficos e de engenharia para o processamento de materiais por agentes biolgicos proporcionando produtos ou servios. Fernandes (1987) conceitua como o uso das tcnicas de regenerao in vitro e do DNA recombinante. As primeiras atitudes do governo brasileiro em relao s biotecnologias tiveram inicio em meados da dcada de 1980, quando tanto o CNPq quanto o MCT iniciaram o apoio formao de recursos humanos. Atualmente, o volume de recursos, o nmero de bolsas e o nmero de pesquisadores que trabalham com as biotecnologias na rea agrcola e florestal atingem valores inferiores a 10% em relao s demais reas de C&T no pais. Contudo, cada vez maior o nmero de pessoas envolvidas com as biotecnologias, as quais passam a ser utilizadas nas diversas disciplinas da rea biolgica. No estado de So Paulo, a FAPESP, a agncia de fomento a pesquisa do estado de So Paulo, financiou um projeto para o sequenciamento da bactria Xyllela fastidiosa, o agente causador da doena denominada de amarelinho em citrus. Outros programas de pesquisa em biotecnologia de plantas esto em progresso em caf, cacau, soja, milho, trigo e outras espcies de importncia econmica. A clonagem de mamferos, obtidas em 1997, desencadeou uma discusso no s no seio da comunidade cientfica, mas tambm em toda a sociedade sobre as implicaes do poder das biotecnologias. Toma corpo ento a Biotica, que discute o modo de ser (tica) da vida. A biotica pergunta-se sobre a legitimidade dos projetos de efeitos biotecnolgicos. Vrios agrnomos esto desenvolvendo atividades na gerao de processos e produtos, utilizando estas tcnicas biotecnologias. O mercado tende a uma expanso nos prximos anos. Alm dos conhecimentos tcnicos necessrios ao desempenho profissional, o Engenheiro Agrnomo tem um importante papel na discusso das questes relacionadas com as biotecnologias com a sociedade. A liberao da soja transgnica em setembro de 1998, resistente ao herbicida glifosate, constitui-se num marco da agricultura e exige que os profissionais formados tenham o conhecimento tcnico e cientfico no s para o correto manuseio destes organismos como tambm para participar das decises a respeito das mesmas. Agradecemos aos estudantes de ps-graduaao, em particular as Dras. Adriana Cibele de Mesquita Dantas e a Karine Louise dos Santos e ao MSc. Douglas Steinmacher pelas contribuies a esta apostila. Os Autores

PARTE 1 PRINCPIOS DE GENTICA MOLECULAR

1-INTRODUO S MACROMOLCULAS: PROTENAS E CIDOS NUCLEICOS 1.1-Protenas
Protenas so cadeias de aminocidos (aa). A estrutura bsica composta de um esqueleto e de grupos laterais variveis (Figura 1). Uma srie repetida de ligaes peptdicas entre o carbono de um aa e o nitrognio de outro aa formam molculas grandes, as protenas (Figura 2). Devido a natureza da ligao peptdica, uma das extremidades da protena H2N (H3N+), denominada de N-terminal, e na outra extremidade encontra-se COOH (COO-), que chamada de carboxi-terminal. Existem cerca de 20 aa, cada um com sua forma e constituio qumica caracterstica. Dependendo da composio, as protenas podem ter carga positiva, neutra ou negativa. Os aa lisina, arginina e histidina contribuem com carga positiva (denominados de bsicos) enquanto que o cido asprtico e o cido glutmico so carregados negativamente (denominados de cidos). Os demais 15 aa so neutros com relao a carga eltrica. Destes, os polares so: serina, treonina, tirosina, triptofano, asparigina, glutamina e cistena. Os demais apresentam propriedades hidrofbicas (no polar): alanina, fenilalanina, glicina, isoleucina, leucina, metionina, prolina e valina. Tais propriedades (polaridade e a hidrofobia) tambm so incorporadas s protenas.

Figura 1: Estrutura geral de um aminocido mostrando suas estruturas fixas e o radical varivel, poro que diferencia os diferentes aminocidos Os tipos de aa includos e principalmente a sua sequncia determinam a conformao tridimensional e portanto, as propriedades de todas as protenas. O tamanho de uma protena pode variar de alguns poucos at 30.000 aa. Trinta ou 40 aa so suficientes para proporcionar uma conformao terciria.

Figura 2: oligopeptdeo formado por quatro aminocidos unidos por ligaes peptdicas (em vermelho). O primeiro aminocido (glicina, com o radical H) apresenta a extremida Nterminal, enquanto o ltimo aminocido (alanina, com o radical CH3) apresenta a extremidade carboxi-termina.

A estabilidade das protenas representa um equilbrio entre a sua sntese e a sua degradao. Existe um processo contnuo de reposio (turnover) que pode ser caracterizado quando se conhece a meia-vida das protenas, ou seja o tempo necessrio para a renovao da metade da sua concentrao. A meia-vida das protenas pode variar de minutos a mais de 20 horas e sua degradao catalisada por enzimas proteolticas. Exemplos: protenas com N-terminal arginina - 2 min; lisina, leucina e fenilalanina - 3 min; prolina - 7 min; tirosina e glutamina - 10 min. Na maioria das vezes as protenas para exercerem suas funes devem sofrer modificaes, como fosforilao, glicosilao ou metilao. No processo de fosforilao adicionado protena um grupo fosfato pelas kinases, tonando-se fosfoprotenas. A metilao ou acetilao consiste na incorporao de um metil ou acetil protena pelas metilases ou acetilases, respectivamente. A incorporao de carboidratos numa cadeia protica denomina-se glicosilao, origina as molculas denominadas de glicoprotenas. Enzima a denominao de uma protena quanto esta apresenta a habilidade de acelerar uma reao fazendo ou quebrando uma ligao (covalente) especfica. Para o exerccio desta funo, as protenas devem apresentar a conformao terciria ou quaternria. A conformao quaternria na realidade a agregao de duas ou mais subunidades, que nesta condio proporcionam a funo catalisadora uma protena enzima. Exemplo: Rubisco ou ribulose-1,5-bifosfato carboxilase/oxigenase se torna uma enzima quando oito sub-unidades se agrupam, quatro delas codificadas por genes nucleares e as outras quatro por genes do cloroplasto. A Rubisco responsvel pela incluso de CO2 numa cadeia de carbono (1 etapa no ciclo de Calvin). Tratando-se de enzimas, nem todos os aa participam da reao cataltica. Existe um stio ativo responsvel pela catlise. Este stio ativo ento um conjunto de aa denominado de motivo ou domain. A domain pode ser entendida como a unidade funcional de uma protena, uma regio relativamente independente da protena. Nas interaes com outras protenas ou cidos nucleicos apenas uma parte da protena, o motivo (ou domain), responsvel pela funo. Quando diferentes protenas desempenham funes semelhantes, constituem uma famlia de protenas. A mesma seqncia formadora de uma determinada domain pode se encontrada em vrias protenas de espcies diferentes. Aparentemente, durante a evoluo a domain se moveu dentro da sequncia linear de aminocidos sem perder sua funo e especificidade de ligao. Estas domains variam quanto ao nmero de aa: 18 no Colgeno, mais de 250 aa Fibrinognio. Freqentemente, as domains podem se repetir (at mais de 30) numa mesma protena, neste caso denominadas de motivo (motif) sendo que nem todas as repeties so exatamente idnticas. Estas duplicaes provavelmente so devido a existncia de elementos mveis ou transformao. As duplicaes tm provocado a elongao de muitas protenas. Estimativas admitem a existncia de mais de 50 mil tipos de protenas numa espcie eucariota. As primeiras tcnicas de separao de macromolculas, foram desenvolvidas na dcada de 40. Nesta poca foi desenvolvido os sistemas de cromatografia que permitem a separao das fraes polares das no polares com base na solubilidade das diferentes molculas. De acordo com este princpio, um solvente no polar move-se carregando solutos com ele. As substncias migram a diferentes distncias de acordo com a sua solubilidade no solvente. Atualmente existem uma dezena de diferentes tcnicas de cromatografia, que possibilitam inclusive a identificao de molculas presentes numa mistura. Nos anos 80 foi descoberto que algumas doenas (desordens degenerativas) poderiam ser causadas por agentes infecciosos formados apenas por protenas. Estas protenas foram denominadas de prons ('proteinaceous infections particles'). O pron uma forma alterada da protena PrP que normalmente est presente no crebro de vertebrados. Estas desordens degenerativas ocorrem com freqncia em animais e muito raro na espcie humana.

O sequenciamento de protenas uma tcnica, desenvolvida por (Sanger, 1950), com a finalidade de conhecer a seqncia dos aa numa protena. As implicaes desta descoberta so inmeras. A mais importante se relaciona com a sade humana, pois a tcnica permitiu a identificao de inmeras doenas. Mutaes ao nvel de DNA podem provocar a substituio de um aa por outro numa determinada posio da seqncia de uma protena e dependendo da posio a protena perde sua funo, causando ento uma doena. Outra conseqncia foi a possibilidade de inferncia da seqncia de bases ao nvel de DNA que codifica para as protenas sequenciadas. Isto permitiu o isolamento e a clonagem dos primeiros genes. Mais tarde, o prprio Sanger desenvolveu um mtodo de sequenciamento de DNA. Por esta contribuio cincia, Sanger foi agraciado com um segundo prmio Nobel.

1.2-CIDOS NUCLEICOS 1.2.1-cido desoxirribonucleico - DNA

As molculas de DNA tm estrutura em forma de dupla hlice, semelhante a de uma escada retorcida. Cada fita formada por uma seqncia de nucleotdeos (dNTP). Cada dNTP composto de uma base nitrogenada ligadas a uma molcula de acar (desoxirribose) e um grupo fosfato. As bases nitrogenadas ligadas a desoxirribose so quatro: adenina (A), citosina (C), guanina (G) e timina (T). Uma ligao fosfodister unindo o grupo fosfato de um dNTP e o acar desoxirribose de outro dNTP forma o esqueleto da fita (strand), como se fosse uma das laterais da escada. A outra fita (ou a outra lateral da escada) formada da mesma maneira, mas com orientao da ligao fosfodister contrria, o que impe a caracterstica de antiparalelismo as duas fitas. Cada fita tem uma orientao (5'-3') em funo da natureza da ligao fosfodister entre o carbono 3' e o 5' da desoxirribose, sendo que um nucleotdeo s pode ser includo na cadeia atravs da ligao do fosfato com o carbono 3'OH da desorribose. Por isto, a orientao da cadeia 5'-3', pois haver sempre o carbono 3' numa das extremidade da fita. Mais do que isto, estas duas fitas so complementares j que quando existir adenina de um lado, somente timina encontrada na mesma posio na outra fita. O mesmo acontece com citosina e guanina. So estes os dois nicos tipos complementao de bases nitrogenadas possveis no DNA. Como conseqncia o nmero de adeninas ser igual ao nmero de timinas num organismo. O mesmo vale para C e G. Entretanto a quantidade de purinas (A e G) caracterstica de cada espcie. Assim a proporo entre A e G de 0,7 em Bacillus, 1,56 no homem e 1,7 em Saccharomyces cereviseae. Isto conhecido como regra de Chargaff. Entre as bases nitrogenadas existem pontes de hidrognio, duas entre A e T e trs entre C e G. Tais pontes juntamente com outras foras, mantm as duas fitas unidas. Cada par de bases anlogo a um degrau desta escada. O DNA funciona como um modelo para a sntese de novas fitas de DNA. O DNA a molcula responsvel pelo armazenamento e perpetuao do cdigo gentico. Apesar da ocorrncia de 3 tipos de DNAs ('A', 'Z', 'B'), aparentemente desempenham a mesma funo. A prova definitiva de que o DNA a molcula repositrio do cdigo gentico foi obtida em 1952 por Hershey e Chase. Experimentalmente adicionou-se 32P numa colnia de bactrias infectadas por vrus, neste caso o fsforo radioativo foi incorporado no DNA, j que pouco ou quase nenhum fsforo encontrado nas protenas. Num experimento paralelo, foi feita a adio do istopo 35S, que pode marcar radioativamente as protenas, j que estas tm enxofre, mas no marca o DNA, pois este no contm enxofre. Como s o 32P foi detectado nas prognies dos vrus, conclui-se que o DNA passava de gerao a gerao. Na realidade, oito anos antes, outros trs cientistas (Avery, MacLead e McCarty) haviam postulado que o agente transformador (possivelmente o DNA) era destrudo pela desorribonuclease pancretica que por sua vez no afetava as protenas.

A quantidade de DNA pode variar de 103 a 1013 nucleotdeos. Esta quantidade de DNA por clula haplide denominada de valor C. So aproximadamente 3 bilhes de pares de bases no ncleo de cada clula humana. Entretanto podem ser apenas 5387 no vrus x174. A maioria das plantas tem uma quantidade de DNA que varia entre 109 a 1011. Nos mamferos existem de 109 a 1010 pares de bases; j alguns peixes ou anfbios podem ter at 1013 pares de bases. muito DNA para pouca funo (paradoxo do valor C). Enquanto nos procariotos praticamente quase todo o DNA carrega informaes necessrias para a sntese de protenas e RNAs, a maior parte da seqncia de bases dos eucariotos no codifica para produto algum. Assim apenas 3% (aproximadamente) do genoma humano formado por genes (estimados em mais de 50 mil) sendo que a funo do restante ainda no est suficientemente compreendida. A maior parte deste DNA sem funo conhecida composto por seqncias repetidas, de onde se originou o nome de DNA repetitivo (selfish, nos anos 80). Quando esticada, uma molcula de DNA de qualquer clula humana mediria 1,80 m e teria a espessura de um trilionsimo de um centmetro (1 micrmetro = 1 milsimo de milmetro). Uma clula humana no comportaria tal estrutura. Dentro de uma clula as molculas de DNA esto ligadas a protenas e so retorcidas ou enroladas (supercoil). Quando completamente compactadas so possveis de serem visualizadas no microscpio tico e recebem a denominao de cromossomos. A compactao pode alcanar um fator de 7000 vezes. Vrus e bactrias contm apenas um cromossomo. J os eucariotos (fungos, plantas, animais) tm dois ou mais cromossomos que em geral, variam de tamanhos.

Figura 3: Nucleotdeos formados com as pentoses ribose (formam RNAs) ou desoxiribose (forma DNA). A diferena entre as pentoses est realada em vermelho.

Figura 4: ligao entre dois desoxirribonucleotdeos (dNTPs), atravs de uma ligao fosfodister (em vermelho) entre o grupo fosfato de um dNTP e a pentose de outro dNTP. Os carbonos 5 e 3 esto realados em azul.

Genoma e gene A seqncia de pares de bases que formam o DNA pode ser chamada de genoma. A forma do genoma pode ser circular como nos vrus, bactrias, mitocndria, cloroplasto e plasmdeos ou linear como nos cromossomos dos organismos eucariotos e alguns procariotos. O genoma da maioria absoluta dos organismos de DNA. Poucos vrus so de RNA, como Influenza, HIV, TMV, poliomielite. A grande maioria tambm apresenta fita dupla. Exceo a alguns vrus como (x174, M13 e f1, cujos genomas so constitudos de apenas uma fita de DNA. As caractersticas de um indivduo como a cor dos olhos ou da pele so determinadas por um conjunto limitado de pares de bases contidas no DNA (ou no RNA, como j mencionado, trecho este, denominado de gene. O conceito de gene evoluiu tanto quanto a biologia. Uma das primeiras observaes sobre o tema foi feita por Leonardo da Vinci. Observando a cor dos filhos de mulheres brancas com homens pretos, ele sugeriu que a semente da me tinha o mesmo vigor que a do pai (Wallace, 1992). Mas foi Mendel em 1865 quem utilizou pela primeira vez a expresso fator para os componentes hereditrios parentais responsveis pelas caractersticas nas prognies. S mais tarde (1908), Johannsen sugeriu o termo gene para designar os fatores hereditrios. Por gene entende-se a unidade de herana. Contudo, os diferentes textos de gentica apresentam diferentes conceitos para gene. Segundo a maioria dos autores, o principal atributo do gene sua relao com a protena que codifica. Neste caso, define-se gene como sendo um segmento de DNA, que atravs da intermediao de uma molcula mensageira de RNA, responsvel pela especificao de uma cadeia peptdica (Wallace, 1992). Entretanto, outros geneticistas incluem, alm das protenas, os RNAs como produtos gnicos transcritos, mas no traduzidos. Neste caso, a definio de gene um segmento de DNA responsvel pela produo de um produto difusvel (Lewin, 1994). Como um significativo grupo de RNAs exerce funes outras que a de mensageiro, como por exemplo, a regulao gnica, o segundo conceito de gene mais realista. Por se tratar de uma seqncia de DNA, um gene pode ocorrer sob mais que uma alternativa ou alelo. Desta forma, basta uma alterao na seqncia de bases que cause uma mudana no produto, para que se configure uma alternativa (alelo) diferente. Para simplicidade, normalmente utiliza-se um modelo bsico de um gene com dois possveis alelos, j que a maioria dos seres vivos diplide, portanto, carregam dois alelos (um em cada cromossomo homlogo) para o mesmo gene. Mas na realidade, um gene pode ter muitas alternativas. Evidentemente que num indivduo diplide s ocorrem uma ou duas formas no mximo. Mas diferentes indivduos podem apresentar formas allicas diferentes uns dos outros. Um dos exemplos mais conhecido trata-se do tipo sanguneo, sendo que numa populao de indivduos podem ser encontrados quatro diferentes alelos. Sequenciamento de cidos nucleicos O sequenciamento consiste na identificao ordenada dos nucleotdeos que compem um fragmento de DNA ou RNA. Existem duas tcnicas que so utilizadas normalmente em laboratrios. Por outro lado, nos ltimos anos foram desenvolvidos equipamentos sequenciadores de alta velocidade e que esto sendo utilizados no sequenciamento de espcies procariotas (bactcias) e eucariotas (fungos, vegetais e animais, incluindo Homo sapiens). Conhecer a sequncia de bases dos genomas das espcies tem sido um dos objetivos dos bilogos. A sequncia completa de vrios vrus j conhecida h bastante tempo, devido ao fato do pequeno nmero de nucleotdeos participantes de seus genomas. Em 1995 foi finalizado o sequenciamento do genoma das duas primeiras bactrias pelo 'The Institute for Genomic Research' (TIGR http://www.tigr.org/tdb/): Haemophilus influenzae e Mycoplasma genitalium. A primeira delas, que causa a inflamao no ouvido, tem

aproximadamente 1,8 milho de pares de bases e aproximadamente 1700 genes. A segunda que tem apenas 570 genes est associada s infees reprodutivas. O sequenciamento do organismo deve contribuir para o desenvolvimento de vacinas ou outras estratgias de combate a doena causada por aquela bactria. Alm disso, o seqenciamento do Saccharomyces cerevisae, iniciado em 1989, foi concludo em junho de 1996, resultante de um projeto feito em parceria por um grupo de pesquisadores de vrios pases europeus. Esta levedura, alm de ser utilizada como modelo gentico para estudos em espcies eucariotas, utilizada na produo de bebidas fermentadas. O seqenciamento desta levedura um marco histrico, pois foi o primeiro organismo eucarioto a ter seus genes totalmente inventariados. Brevemente, sero conhecidas a maioria das seqncias de nucleotdeos de vrias espcies vegetais e animais de importncia econmica e cientfica. Tabela 1: Nmero de genes e tamanho do genoma de espcies parcial ou totalmente sequenciadas Espcie Mycoplasma genitalium Helicobacter pylori Haemophilus influenzae e Bacillus subtilis Escherichia coli Saccharomyces cerevisae Caenorhabditis elegans Arabidopsis thaliana Oryza sativa Sorghum bicolor Zea mays Homo sapiens Triticum aestivum Em milhes de pares de bases 0,58 1,67 1,83 4,20 4,639 12,50 100 150 430 760 2.000 3.000 16.000 Nmero de genes 482* 1.590* 1.740* 4.000* 4.307* 6.034* 13.100 20.000 30.000 30.000 30.000 100.000 30.000

*J sequenciados (Adaptado de Science 276:1960, 1997; Science 277:1432, 1997)

O primeiro projeto no Brasil nesta rea foi o sequenciamento da bactria Xyllela fastidiosa que causa uma doena no citrus chamada de amarelinho. O referido projeto foi iniciado em 1997 e tem um oramento de 14 milhes de dlares, financiado pela FAPESP, que a Fundao de Amparo a Pesquisa do Estado de So Paulo. O nmero de espcies j totalmente sequenciadas cresce ano a ano e vrias espcies vegetais e animais esto sendo sequenciadas, entre elas, arroz, milho, soja, boi e porco. Enquanto nos procariotos, a densidade mdia de genes de 1 gene a cada 1000 pb aproximadamente, nos eucariotos de 1 gene a cada 2000 pb nas leveduras, 1 gene em 5000 pb nos nematides e 1 gene a cada 4800 pb em Arabidopsis. A maior quantidade de DNA pode ser parcialmente explicada pelo fato de que, nos eucariotos a parte regulatria dos genes muito maior que nos procariotos. Alm disso, nos eucariotos existem sequncias repetidas, que so ausentes nos procariotos. Embora se saiba o nmero de genes dos organismos sequenciados, ainda no se conhece as funes de 40 a 60% dos genes, dependendo da espcie. O

conhecimento da sequncia de bases de um genoma permite aos bilogos o entendimento do funcionamento dos organismos, as funes dos genes, que tipo, tamanho, quantidade e caractersticas das protenas formadas. A maior parte das espcies de bactrias j sequenciadas causam doenas espcie humana. A razo principal para se conhecer sua sequncia relaciona-se com a possibilidade do seu controle, via desenvolvimento de vacinas ou outros medicamentos. As plantas so a base da vida na terra. Contudo, pouco se conhece de seu genoma. O genoma das angiospermas altamente varivel, mas ainda praticamente desconhecido. Desconhecemos tambm o nmero de espcies e o nmero de genes em cada espcie. Na verdade, ainda no conhecido o nmero de cromossomos de mais de 70% das espcies vegetais. O valor C de DNA s conhecido em 1% das espcies. Desta forma, o projeto genoma de fundamental importncia para o aprofundamento do conhecimento das plantas, domesticadas ou no. Muitos cientistas tm afirmado que o seqenciamento completo do genoma humano (estimado em trs bilhes de pares de bases) dever revolucionar a medicina e poder auxiliar na cura para as mais de 3000 doenas hereditrias que atingem a raa humana. Iniciado em 1985, o seqenciamento do genoma humano que rene cientistas e laboratrios dos Estados Unidos, Canad, Japo, Inglaterra, Frana, Rssia, Itlia, Austrlia e Brasil entre outros, foi completado antes da data prevista (2005). Quando pronto, o arquivo necessrio ao armazenamento das informaes se torna equivalente a 200 listas telefnicas com mil pginas cada uma. O GenBank (USA) e o DNA Database (Japo) j dispem de informaes de mapeamento e sequenciamento de mais de 2500 diferentes organismos. Mapas fsico e de ligao foram divulgados (com resoluo elevada) nos anos de 1993 e 1994 por cientistas franceses e americanos. Tais mapas facilitaro a clonagem de genes humanos, como aqueles envolvidos com as doenas, a obesidade, entre outras. Introns e exons Foi descoberto nos anos 70 a presena de seqncias presentes no DNA mas no no RNA mensageiro, produto da transcrio do DNA. Tais seqncias foram denominadas de introns (intervening sequences) e esto intercaladas com os exons (expressed sequences), que so as regies codificadoras dos genes. A remoo dos introns feita por enzimas e faz parte do processamento que sofre o pr-mRNA antes de sair do ncleo (Figura 5). A presena de introns ou sequncias intervenientes sugere uma maior oportunidade para recombinaes e maior acmulo de mutaes. Introns so comuns nos eucariotos e raramente encontrados nos procariotos. Quando o intron que faz o processamento, ele se regenera no final do processo. Neste caso, o intron seria uma enzima, proporcionando ao RNA a funo de catlise. Nas bactrias ainda no foram detectados introns. Uma das hipteses de que as bactrias perderam os introns durante a evoluo. Neste caso os introns teriam se originado no incio da vida. Outra hiptese admite que os introns surgiram com os eucariotos. Na realidade, ainda no se sabe exatamente como os introns surgiram, nem tampouco se apareceram logo no incio da vida ou surgiram mais recentemente. Embora tenham caractersticas similares, os introns so muito diversos quanto ao tamanho, processamento e funes. Certos introns, em especial os do chamado grupo I, comuns em genomas de organelas celulares (como a mitocndria) e em alguns genes do ncleo (como o rRNA), apresentam caractersticas especiais. Eles prprios realizam sua remoo do pr-mRNA (autocatlise) e ligam os exons, fenmeno denominado selfsplicing. Alguns introns desse grupo so elementos mveis (transposons), capazes de se transferir em cruzamentos genticos para alelos que no os continham, pelo processo denominado homing, iniciado com o corte do DNA por uma endonuclease, enzima codificada pelo prprio intron. Outros introns do grupo I codificam cofatores proticos, como as maturases. So poucos os casos conhecidos em que um mesmo produto desse tipo de intron realiza ambas as funes -- de endonuclease e de maturase.

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Figura 5: Representao esquemtica da estrutura de um gene eucarioto, contendo exons e introns. No rocesso de splicing do RNA, os introns so retirados, ao mesmo tempo que um cap e uma cauda de adeninas so adicionados ao mRNA.

J so conhecidos casos de transferncia de introns do grupo I entre indivduos da mesma espcie (transferncia vertical). Nesse caso, um intron passa de um alelo para outro que no o continha. Tambm j foi constatado que introns desse grupo presentes no genoma das mitocndrias podem passar de uma espcie para outra (transferncia horizontal, ou lateral), mas dentro do mesmo filo. A transferncia lateral, entre organismos que no se acasalam sexualmente, foi objeto de profundo estudo de Yangrae Cho e colaboradores, publicado em novembro de 1998. O estudo envolveu um intron do grupo I do genoma mitocondrial de plantas vasculares, bastante conhecido e localizado no gene cox1 da erva Peperomia polybotrya, que teria sido adquirido de um fungo, por transferncia lateral. Analisando o DNA de 335 plantas de diferentes gneros, os autores verificaram que esse intron est amplamente disseminado nos genes cox1 das angiospermas. O intron estudado est presente em 48 gneros diferentes, a partir de 32 eventos independentes de transferncia lateral. A concluso sobre as transferncias baseia-se em trs pontos principais: a presena constante do gene cox1 e espordica do intron, a incongruncia entre as filogenias (histrias evolucionrias) das espcies e dos introns e a co-converso (Co-converso quando parte das extremidades de um segmento de DNA 3 a 18 pb -, aps o processo de recombinao/reparo, convertida sequncia do DNA doador ou invasor. Assim, o DNA da espcie recipiente parcialmente degradado e uma nova sequncia sintetizada com base no molde do DNA da espcie doadora. Desta forma, a converso deixa um rastro, pois a sequncia original alterada.) das seqncias prximas do local de insero do intron. O primeiro ponto indica que o gene cox1 se disseminou com alta freqncia e manteve-se nas espcies que o receberam, enquanto o intron foi perdido na maioria dos casos. O segundo demonstra que a transferncia independe do grau de parentesco entre as diferentes plantas. E o ltimo -- a divergncia gentica das regies que flanqueiam a insero do intron -- revela que a transferncia se d via recombinao/reparo e catalisada por uma endonuclease. Esse processo, conhecido como homing, exatamente o que esse tipo de intron promove.

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Os resultados geram vrias preocupaes. Entre as dvidas principais esto a causa da extraordinria invaso desse intron, os passos do processo de transferncia em nvel celular e o caminho evolutivo da disperso do intron do grupo I do gene cox1 entre as angiospermas. Entre as implicaes, a mais importante est ligada freqncia com que o DNA transferido de uma espcie a outra. A transmisso planta a planta requer acasalamento sexual ou a ajuda de vetores (vrus, bactrias, insetos e outros). A questo bastante atual, j que muitas plantas transgnicas esto sendo liberadas para cultivo. O trabalho de Cho e colegas demonstra claramente que a transferncia horizontal ocorre e mais freqente do que se imagina. Isso torna imperativo estudar o fluxo gnico entre plantas transgnicas e espcies afins, antes de sua liberao para cultivo, para testar a possibilidade de uma irradiao de genes, que podem ser desejveis em uma espcie mas completamente indesejveis em outras. A probabilidade desta irradiao aumenta com o aumento do cultivo destas plantas, principalmente no sistema de monocultura. Num dado momento, um mesmo gene poder estar presente em milhes de plantas, aumentando o risco da transferncia horizontal. 1.2.2-cido ribonucleico - RNA
Apesar de ser tambm um cido nucleco, o RNA tm muitas diferenas em relao ao DNA. Em primeiro lugar, todos os RNAs so formados por apenas uma fita. Entretanto, pode apresentar uma configurao denominada de secundria, quando ocorre o pareamento entre bases complementares. Ao invs de desoxirribose como no DNA, o acar do RNA uma ribose (uma oxidrila a mais em relao a desoxirribose do DNA). A terceira principal diferena a presena de uracil (U) ao invs de timina (T). Podem ocorrer pelo menos quatro tipos de RNA: mRNA (1-3%), rRNA (>90%), tRNA (1-2%) e sRNA (?%), denominados de mensageiro, ribossomal, transportador e small RNAs, respectivamente. Cada um deles desempenha funes especficas. Dentro do ltimo grupo, so includos um grande grupo de RNAs, muitos dos quais ainda sem funo conhecida. Outros esto envolvidos na regulao gnica. Alm das funes de mensageiro entre o DNA e os ribossomos, formador dos ribossomos, e transportador de aminocidos, os RNAs podem ainda desempenhar a funo de catlise e de regulao gnica. A funo de catlise (at ento exclusividade das protenas) foi descoberta na dcada passada e os RNAs que tm esta habilidade, as ribozimas, realizam a separao do RNA transcrito em vrias partes, fenmeno que se chama de splicing. O autoprocessamento do RNA no idntico catlise enzimtica executada pelas protenas. Numa reao enzimtica, a protena se envolve mas liberada intacta ao final do processo. No caso do autoprocessamento, o pr-RNA se processa a si prprio, sem a presena de enzimas, mas no se regenera no fim do processo. Portanto, o pr-RNA no uma enzima, mas tem a propriedade de catlise. Alm disso, foi verificado experimentalmente que o RNA tem a capacidade de retirar bases de um segmento de RNA e adicion-las em outro, demonstrando a capacidade de sintetizar algo semelhante a si prprio. mRNA Resultam da transcrio de um gene. So os RNA mensageiros (mRNA), aqueles que sero decodificados pelos ribossomos e contm informaes para a produo de uma protena. O tamanho dos mRNAs varivel, dependendo do nmero de bases contidas no gene transcrito. Como contm uma mensagem, diz-se que existe uma colinearidade entre as bases do mRNA e a sequncia de aminocidos da protena resultante de sua

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decodificao. O tempo de vida de um mRNA muito pequeno. Na maioria dos procariotos a meia vida de um mRNA no ultrapassa 2 minutos. J nos eucariotos, alguns mRNAs duram algumas horas. rRNA O RNA ribossomal (rRNA) tambm resultante da transcrio de genes de uma regio do DNA, neste caso denominada de rDNA. O produto da transcrio no decodificada, pois os prprios RNAs produzidos juntamente com protenas vo formar os ribossomos e executar a funo especfica, que a produo de protenas. Participam da formao do ribossomo de um procarioto trs rRNAs: o 5S rRNA com 120 nucleotdeos, o 16S rRNA com 1542 nucleotdeos e o 23S rRNA com 2904 nucleotdeos. Nos eucariotos, estes rRNAs so um pouco maiores e designados de o 5S rRNA, o 18S rRNA e o 28S rRNA. Entretanto, nem todos os eucariotos tm os rRNAs do mesmo tamanho. tRNA Denominada de adaptadores por Francis Crick, o tRNA (RNA transportador) um RNA que tem a funo especfica de transportar os aminocidos at o ribossomo durante a sntese de uma protena. So molculas relativamente pequenas, contendo de 73 a 93 nucleotdeos. Dos cidos nucleicos conhecidos, o tRNA o nico que apresenta algumas bases que no A, C, G e T. Numa clula existem pelo menos tantos tRNAs quanto so os aminocidos, e estes esto ligados ao tRNA na extremidade 3'OH. A estrutura tridimensional de um tRNA assemelha-se a uma folha de trevo, contendo numa das alas (loop ou hairpin) o anticodon, que uma seqncia de trs bases. Outros RNAs Existem outros RNAs, muitos deles transcritos e que permanecem no ncleo da clula sem funo aparente (hnRNA). Outros RNAs, de cadeia curta, chamados de snRNA, esto envolvidos na regulao gnica. Mais recentemente, descobriu-se que alguns RNAs podem se deslocar de suas clulas e desempenhar uma atividade em outra clula, provavelmente regulatria. Particularmente os RNAi ou RNA interferncia uma classe de RNAs que ao regulatria. Temos que escrever mais sobre os RNAs....

1.2.3-cido peptdeo nuclico (PNA)

Esta nova molcula, criada em 1991 em laboratrio, tm as quatro bases nitrogenadas do DNA ou RNA ligadas ao esqueleto de uma protena. Este novo composto sinttico alm de ser mais estvel nas clulas que o DNA e o RNA, se liga naturalmente a estes com uma intensidade 50 a 100 vezes mais forte que os prprios cidos nucleicos naturais o fazem entre si. Quando se liga ao DNA, forma uma estrutura de trs fitas. Isto permite o uso destas molculas na terapia gnica, pois pode provocar a indisponibilidade daquela regio genmica ser acessada por enzimas e protenas. Neste caso, poderia ser utilizado um PNA para se ligar a um gene defeituoso que, ento, deixaria de expressar uma protena defeituosa. Os PNAs podem procurar e se ligar a outra fita com seqncia complementar de bases, estratgia similar ao antisenso. O PNA construdo ligando-se cada base nitrogenada a um peptdeo ao invs de um acar e um grupo fosfato. Como a cadeia de peptdeos tem carga eltrica neutra, os PNAs apresentam uma grande capacidade de ligao, eliminando a repulso criada pela carga

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eltrica negativa devido a presena dos grupos fosfatos presentes no DNA e RNA. Alm disso, os PNAs podem atacar genes invadindo a dupla hlice, algo que DNA e RNA no conseguem. Mais ainda, a qumica de peptdeos simples e mais barata que sintetizar cidos nucleicos. Este produto da biotecnologia poder ser aplicado na sade humana. O principal argumento da utilizao dos PNAs em diagnstico decorre do fato da grande afinidade com o alvo; quanto maior a afinidade, maior a possibilidade de ligao com seqncias especficas e consequentemente, a sua marcao. Mas como a molcula artificial, ainda no se conhece ainda a sua toxicidade.

1.2.4-cidos nucleicos e a origem da vida

Como capaz de armazenar o cdigo gentico em alguns vrus, tem a funo cataltica e de regulao gnica, o RNA passou a ser admitido (hiptese) como a provvel molcula que poderia ter originado a vida a partir do 'caldo primitivo'. Esta teoria tem recebido contribuies cientficas por uma grande quantidade de cientistas do mundo inteiro. Duplicando RNAs semelhantes como os RNAs ribossomais e participando da produo das protenas, o RNA um forte candidato a ser a estrutura do primeiro ser vivo na face da Terra. A funo cataltica, entendida aqui como sendo a capacidade de quebrar e ligar outros RNAs, j foi comprovada. H tambm resultados de pesquisa que atribuem ao RNA a capacidade de editorao, um sistema simplificado do sistema de reparo do DNA. Os vrus que possuem RNA como material gentico necessitam da enzima transcriptase reversa para produzir DNA e ento se replicarem. Quando se provar que o RNA tem ou teve capacidade de autoduplicao, ser dado um passo importante favorvel a hiptese do 'Mundo do RNA'. Nenhuma outra molcula teria a capacidade e a versatilidade de desempenhar tantas funes como o RNA no 'caldo primitivo'. Outra hiptese considera uma molcula mais simples, precursora do RNA, composta de um cido nuclico ligado a peptdeos (denominada de PNA). Alguns cientistas no concordam com estas hipteses por considerarem que as molculas de RNA so muito complexas para ter tido origem no ambiente primitivo terrestre, onde s havia gua, gs carbnico, nitrognio e radiao ultravioleta. Alm disso, no 'caldo primitivo' deveriam existir substncias muitos txicas. Em contrapartida, admitem que sob as condies primitivas, a estrutura cristalogrfica dos minerais seria capaz de reduzir dixido de carbono para formar aldedos e a partir destes se formariam acares e molculas orgnicas essenciais. A transferncia de eltrons de uma molcula outra poderia ter contribudo para as transformaes metablicas. Recentemente, cientistas obtiveram molculas de RNA mais complexas quando utilizaram uma mistura de pequenas molculas de RNA sob condies de altas temperaturas, situao que deve ter ocorrido na poca do surgimento da vida. Outra possibilidade da origem da vida seria via metablitos secundrios. Tais metablitos, considerados secundrios no atual estgio evolutivo, teriam sido relevantes no perodo pr-bitico como integrantes do metabolismo primrio responsvel pela sntese dos cidos ncleicos e traduo e replicao. De qualquer forma, a hiptese de maior consenso a de que o RNA teria sido o primeiro material gentico sobre o qual a evoluo agiu, resultando numa quantidade enorme de formas de vida que se conhecem atualmente.

2-REPLICAO (Replication)
O DNA funciona como um modelo para a sntese de novas fitas de DNA de maneira semiconservativa, ou seja, cada uma das duas molculas filhas tem uma fita da molcula me e outra recm sintetizada. A replicao ocorre bidirecionalmente a partir de uma

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(procariotos) ou vrias (eucariotos) origens. A replicao precisa (alta fidelidade), ou seja, a maioria dos erros so corrigidos. Cabe a replicao o desafio maior de perpetuar, com alta fidelidade, um genoma e ao mesmo tempo permitir erros que originam a variabilidade necessria para a evoluo. A origem de replicao uma regio do DNA que contm uma seqncia de bases especfica. Nas bactrias s existe uma destas seqncias. A rigor, a replicao completa do cromossomo de uma bactria depende da iniciao nesta seqncia. Neste caso, dito que as bactrias tm apenas um replicon. Replicon a unidade de DNA no qual a replicao ocorre a partir de uma origem. J os eucariotos, por terem genomas bem maiores que as bactrias e mais de um cromossomo, tm vrias origens de replicao. Nas leveduras (ex: Saccharomyces cerevisiae) existem pelo menos umas 500 origens de replicao, denominadas de ARS (Autonomously Replicating Sequences); ou seja, 500 replicons. Na Drosophila melanogaster existem cerca de 3.500 replicons. J na Vicia faba estima-se a presena de pelo menos 35.000 replicons. As origens de replicao dos eucariotos so ativados em diferentes tempos durante o perodo de replicao do ciclo celular (fase S da mitose). Estas origens de replicao esto espaadas em mdia de 50 a 100 kb. A velocidade de replicao em Escherichia coli, a bactria residente no intestino de todas as pessoas, chega alcanar 50.000 bases por minuto. Nos eucariotos, o movimento do garfo de replicao pelo menos 10 vezes mais lento. Os vrus apresentam um modo de replicao especfico denominado de crculo rolando (rolling circle). Uma vez iniciada a replicao, o genoma circular vai sendo replicado indefinidamente. Posteriormente uma enzima produzida pelo prprio genoma viral, corta a longa cadeia produzida em partes iguais, cada uma contendo uma cpia do genoma do vrus, a ser subseqentemente encapsulada. Mais de 20 enzimas atuam diretamente no processo de replicao das bactrias. As principais protenas envolvidas e sua funo na replicao so apresentadas abaixo: toposisomerases - desenovelam o DNA helicases - separam as duas fitas Single strand binding proteins (SSB) - protegem o DNA na forma de fita simples Primase - adiciona os primers ou iniciadores DNA polimerase III - polimeriza, i.., adiciona os dNTP no sentido 5'-3' DNA polimerase I - substitui os iniciadores de RNA por bases do DNA; tambm tem a funo de reparo ligase - une os dNTP de dois fragmentos. Nos procariotos, alm destas duas polimerases, existe uma terceira, a DNA polimerase II, cuja funo ainda desconhecida. Das trs, somente a DNA Pol I apresenta a funo de edio ou seja, de correo dos possveis erros de replicao. A DNA Pol I formada por vrias sub-unidades. O agrupamento de algumas delas forma o que se conhece por fragmento Klenow, utilizado para replicao do DNA in vitro. Este fragmento no tem a habilidade de edio como a enzima completa, pode ser comprado de vrios fornecedores e usado em laboratrios. A DNA Pol III formada por sete sub-unidades ou polipetdeos. Nos eucariotos tambm existem trs polimerases. Duas delas atuam no ncleo, sendo que a DNA Pol teria a mesma funo que a DNA pol III dos procariotos. A DNA Pol teria a funo de reparo. A terceira polimerase (DNA Pol ) especfica para a replicao do genoma das mitocndrias.

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A replicao dos genomas dos retrovrus, que so codificados por RNA, feita pela transcritpase reversa (RT), o que pode produzir inmeros variantes. O conhecimento da natureza molecular destes vrus permite a criao de estratgias para combat-los. Molculas ribozimas de RNA foram engenheiradas e podem ser introduzidas nos hospedeiros para procurar e destruir o genoma do HIV, cortando-os em dois. O avano no conhecimento cientfico sobre a replicao foi de fundamental importncia no desenvolvimento da reao da polimerizao em cadeia (PCR), uma das tcnicas moleculares mais utilizadas no momento.

3-TRANSCRIO (Transcription)
Transcrio o processo pelo qual uma regio do DNA transcrita resultando num RNA. Existem dois grandes grupos de RNAs: (i) os RNA mensageiros (mRNA), aqueles que sero decodificados pelos ribossomos e contm informaes para a produo de uma protena e (ii) o outro grupo de RNAs, formado pela transcrio de determinadas regies genmicas e que permanecem como RNA para executar uma funo especfica. Entre eles esto o transportador (tRNA), o ribossomal (rRNA) que juntamente com protenas forma os ribossomos e outros RNAs (snRNA, hnRNA, etc.) com funo na regulao gnica ou desconhecida. A regio (segmento) do DNA transcrita a parte estrutural do gene. A transcrio nos procariotos feita pela RNA polimerase. Numa E. coli podem existir at 3.000 cpias dela. Esta enzima usa o DNA como molde e sintetiza uma cadeia de nucleotdeos de RNA complementar ao molde. Aparentemente no h conferncia do produto transcrito. Se no DNA esto A, C, G e T, vai aparecer no mRNA U, G, C e A, respectivamente. A exemplo da replicao, a transcrio ocorre na direo 5'-3'. Seis peptdeos ou sub-unidades fazem parte da RNA pol ('2). A rigor o fator tem a habilidade de reconhecer o promotor, que a regio 5', situada imediatamente anterior ao incio da parte codificadora (ou estrutural) do gene. Posteriormente, juntam-se ao fator s os demais peptdeos quando ento a RNA Pol inicia o processo de transcrio. Vrios fatores de transcrio (pequenos polipeptdeos), os TFs, atuam no incio, durante a elongao e no trmino da transcrio. O fator ( de fundamental importncia. Quando um vrus entra numa clula hospedeira, um fator ( do vrus transcrito e agora os outros cinco peptdeos da RNA Pol ficam a disposio do fator ( do vrus, que reconhece to somente os genes do vrus. Desta forma, em pouco tempo os vrus conseguem expressar seus genes no hospedeiro e se replicando a uma velocidade impressionante, atingem milhes de cpias. Afetam drasticamente o organismo hospedeiro porque tambm reprimem a produo de protenas deste. O promotor das bactrias formado por duas seqncias localizadas nas posies 10 e -35 (regio 5') da base codificante +1 do gene. Nestas regies, normalmente so encontradas as seqncias (consenso) TATAAT (denominada de TATA box ou Pribnow box) e TTGACA (CAAT box), respectivamente. Nos eucariotos, a regio regulatria dos genes bem mais complexa. Em alguns casos, podem ser encontrados vrios elementos que controlam ou afetam a transcrio. Entre eles esto o promotor, o enhancer e elementos como o GLE, o MRE, etc. Os enhancers so seqncias de DNA que esto muito distantes dos genes e so compostas de seqncias muitas vezes repetidas. Os elementos so sequncias de DNA, que so alvos de ligao para protenas especificas, que constituem o que se chama de fatores de transcrio (TF). Os fatores de transcrio podem aumentar dramaticamente a taxa de transcrio de um gene nos organismos eucariotos. Alm do promotor, outras regies podem acelerar a taxa de transcrio como os enhancers e os terminadores. Os terminadores so seqncias que a RNA Pol identifica como o fim da regio de DNA codificadora ou de um gene.

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Existem algumas diferenas entre eucariotos e procariotos com relao a transcrio. Em primeiro lugar existem trs RNA polimerases ao invs de uma. A RNA Pol I s transcreve o rDNA (sequncia de DNA que codifica o rRNA). A RNA pol II transcreve os genes que codificam para protenas, produzindo ento mRNAs. Os demais RNAs (tRNA, snRNA e a 5 S rRNA) so transcritos pelo RNA pol III. Nos procariotos, os ribossomos identificam os mRNAs porque estes apresentam uma seqncia denominada de ShineDalgarno que includa antes das bases codificadoras, complementar a uma regio do componente 16 S rRNA. Por sua vez os mRNAs dos eucariotos apresentam uma estrutura denominada de quepe (Cap) resultante de uma ligao 5'-5' entre duas guaninas ou entre G e A. Aps a transcrio, ao mRNA adicionado uma longa cauda de adeninas, o que se convencionou denominar de poli-A. Esta caracterstica dos eucariotos permite a separao dos mRNAs dos demais RNAs, o que normalmente pode ser feito em laboratrio. Nos procariotos, a cauda de adenina bem reduzida. Uma quarta diferena entre procariotos e eucariotos relaciona-se com o processamento do pr-mRNA nas clulas eucariotas. Nestas, aps a transcrio, so removidos os introns do pr-mRNA. S ento, este RNA se desloca para o citoplasma e recebe a denominao de mRNA.

4-TRADUO (Translation)
Traduo o processo de decodificao do mRNA nos ribossomos resultando na formao de um peptdeo. Na maioria dos casos as protenas so formadas por apenas um peptdeo. Para a produo de um peptdeo in vitro so necessrios o mRNA, os ribossomos, os tRNAs, os amino cidos, fatores da traduo e energia. Os ribossomos dos procariotos so formados por duas sub-unidades: a grande, chamada de 50 S, constituda por dois rRNAs, o 23 S rRNA e o 5 S rRNA, e por 34 protenas; a pequena, chamada de 30 S, constituda pela unidade 16 S rRNA e por 21 protenas. Dependendo da fase, uma bactria pode ter aproximadamente 5.000 ribossomos, o que representa 25% da massa celular. Os tRNAs so os RNAs transportadores, tambm chamados de adaptadores, que transportam os amino cidos do meio at os ribossomos para serem incorporados cadeia peptdica. Uma enzima, encarregada de carregar o amino cido especfico na extremidade 3'OH do tRNA, com base no seu anticodon. Existem mais de 20 tRNAs, pois na maioria dos casos, mais de um codon codifica para um mesmo amino cido. O processo de traduo (5'-3') inicia quando a sub-unidade pequena do ribossomo reconhece a seqncia lder do mRNA. Em seguida o primeiro codon (um conjunto de 3 bases) lido e geralmente codifica para metionina. Um tRNA traz o amino cido correspondente ao codon lido. Sucessivamente os codons vo sendo lidos e os amino cidos correspondentes incorporados ao peptdeo nascente pela enzima peptidil transferase. A velocidade da traduo chega a 40 amino cidos por segundo. Qualquer um dos codons de terminao UAG, UAA ou UGA, significa o fim do peptdeo, cuja interpretao feita pelos ribossomos. Nos procariotos, algumas mensagens so policistrnicas. Nos procariotos a traduo simultnea transcrio. Mais ainda, um mesmo mRNA pode ser traduzido por dezenas de ribossomos enfileirados, o que resulta num nmero elevado de cpias repetidas de uma protena a partir de uma nica molcula mensageira. O cdigo gentico est estruturado em codons (trincas), cada um com trs bases. A probabilidade de associar trs bases independentemente da ordem e natureza de 64. Trs codons so de terminao. Os outros 61 codificam os 20 amino cidos. Consequentemente, um mesmo amino cido pode ser codificado por mais de um codon. As principais caractersticas do cdigo gentico so:

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- estruturado em trinca de bases - no h sobreposio (uma base pertence a um e somente um codon) - universal (refora a teoria da origem nica da vida); somente poucas diferenas com o cdigo gentico das mitocndrias - degenerativo (mais de um codon codificam para um mesmo amino cido) - o primeiro codon (das protenas) AUG ou GUG - h diferena ou preferncia de uso de diferentes codons de um mesmo amino cido - a hiptese de Wobble permite a no ocorrncia dos 61 tRNAs. O conhecimento do funcionamento desta fbrica permitiu a compreenso da ao dos antibiticos e o desenvolvimento de remdios para vrias doenas. Geralmente os antibiticos se ligam ao rRNA ou s protenas dos ribossomos, impedindo ou a leitura do mRNA, ou o emparelhamento do tRNA com o ribossomo ou impedindo outra atividade nos ribossomos. Como os ribossomos dos procariotos so diferentes dos eucariotos, um antibitico pode afetar o funcionamento da sub-unidade pequena (30 S) de uma bactria, sem contudo interferir no ribossomo da clula eucariota hospedeira, cujas sub-unidades tem rRNAs de diferentes tamanhos e seqncia. Tabela 2. Cdigo gentico do RNA mensageiro. Primeira base U UUU - Phe U UUC - Phe UUA - Leu UUG - Leu CUU - Leu C CUC - Leu CUA - Leu CUG - Leu AUU - Ile A AUC - Ile AUA - Ile AUG - Met GUU - Val G GUC - Val GUA - Val GUG - Val C UCU - Ser UCC - Ser UCA - Ser UCG - Ser CCU - Pro CCC - Pro CCA - Pro CCG - Pro ACU - Thr ACC - Thr ACA - Thr ACG - Thr GCU - Ala GCC - Ala GCA - Ala GCG - Ala Segunda base A UAU - Tyr UAC - Tyr UAA Stop UAG - Stop CAU - His CAC - His CAA Gln CAG Gln AAU Asn AAC Asn AAA Lys AAG Lys GAU Asp GAC - Asp GAA Glu GAG Glu G UGU Cys UGC Cys UGA Stop UGG Trp CGU - Arg CGC - Arg CGA - Arg CGG - Arg AGU - Ser AGC - Ser AGA - Arg AGG - Arg GGU - Gly GGC - Gly GGA - Gly GGG - Gly U C A G U C A G U C A G U C A G Terceira base

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5-MUTAO E REPARO
Mutao uma modificao no DNA. Mutante o fentipo resultante da mutao. As mutaes so causadas por erros de replicao do DNA e alteraes do DNA por deleo, duplicao ou rearranjamentos causados por vrus, transposons, ao enzimtica ou processos fsicos e qumicos. A taxa mdia de mutao que ocorre naturalmente atinge 1x10-7. Agentes qumicos e fsicos (radiaes) so utilizados em laboratrio para aumentar esta taxa. Uma mutao dita silenciosa quando o codon alterado, mas no muda o amino cido codificado e consequentemente, a cadeia peptdica. Ela neutra quando, mesmo alterando o amino cido, a protena permanece com a mesma funo. Aqui surge o conceito de polimorfismo a nvel molecular: diferentes gentipos com o mesmo ou diferentes fentipos. A mutao com o efeito mais crtico aquela que provoca a insero ou remoo de uma base (frameship). Como conseqncia, todos os codons localizados aps a mutao ficam alterados, ou seja, a cadeia se torna diferente do padro anterior. Mutaes ocorrem naturalmente. As mutaes mais comuns so aquelas de ponto, onde apenas uma base alterada. Outras mutaes com profundas implicaes no fentipo so aquelas decorrentes de delees, adies, inverses e transposies. preciso salientar que o prprio DNA tem mecanismos de produzir mutaes em si mesmo, independentemente do ambiente. Um deles atravs dos elementos mveis existentes no genoma: os transposons. Transposons so seqncias de DNA que se movem (pulam) de um lugar para outro no genoma. A transposio deixa duplicadas as bases imediatamente prximas desta seqncia (entre 5 e 9), alm de causar interrupes de outros genes quando neles se inserirem. Outras vezes, o transposon se duplica e a nova cpia se insere num outro ponto do genoma. Apesar de no serem ainda bem conhecidos, sabe-se que em alguns casos os transposons carregam genes de resistncia a antibiticos. Como eles afetam a evoluo, devem ter outras funes celulares ainda no descobertas. Uma deles poderia ser o controle do estresse celular. No entanto, eles tm sido tratados como 'genes egostas' porque eles s conseguem se replicar quando dentro do cromossomo, garantindo a sua prpria permanncia no genoma. Nos procariotos, os vrus podem se integrar ao genoma do hospedeiro, podendo causar duplicaes ou delees. Ou seja, existem causas naturais de produo de mutaes, responsveis pela propulso da evoluo. O nmero de mutaes que ocorre num organismo relativamente muito grande. Entretanto, os seres vivos dispem de vrios sistemas de reparo, que corrigem a maioria dos erros ocorridos. Outros erros, quando no corrigidos, podem causar enormes problemas tanto na sobrevivncia como na reproduo do organismo. Neste caso atua a seleo natural, ou eliminado este indivduo ou fazendo com que ele deixe um menor nmero de descendentes. O acmulo de mutaes em diferentes populaes pode provocar, a longo prazo (prazo em termos de evoluo), a diminuio da freqncia de cruzamentos com o conseqente incio da especiao, processo que pode culminar com a origem de uma nova espcie. Ao nvel de laboratrio, os agentes qumicos mais utilizados para induzir mutaes so: etil metil sulfanato (EMS), cido nitroso, etil metano e alguns agrotxicos ou defensivos. A ao dos agentes qumicos normalmente produz alterao de uma base qualquer. Exemplo: substituio de A por T. Muitos vegetais contm substncias que causam mutaes na espcie humana. Ex: nas frutas e legumes so encontradas as psoralenas (o limo contm quantidades elevadas), que tambm dimerizam duas timinas, se ocorrem lado a lado. Entre os agentes fsicos, os mais usados so as radiaes (UV, gama, etc.). Os agentes fsicos geralmente causam quebras e rearranjos de cromossomos. Especificamente a radiao UV causa a dimerizao de duas timinas se estiverem lado a lado. Durante a replicao, a DNA Pol no consegue ler este dmero, o que provoca a insero de duas

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bases quaisquer no lugar das timinas, se no houver reparo. Muitos problemas de pele so causados pela radiao UV. por isto que existe tanta preocupao com a diminuio da camada de oznio, pois este atua como uma barreira aos raios UV. A mutagnese direcionada permite a alterao de uma ou mais bases de uma seqncia de DNA qualquer. Inicialmente a seqncia de interesse inserida num vetor, como o vrus M13 que de fita simples. Posteriormente feito um primer (iniciador) num sintetizador de oligonucleotdeos. Este primer complementar a um certo segmento da seqncia de interesse, mas contendo uma base diferente. Posteriormente, o restante da molcula duplicado. Resultado: a nova seqncia difere da original por uma base apenas. Esta seqncia pode ser avaliada in vitro ou in vivo. Pela tcnica da recombinao homloga, esta seqncia mutante pode substituir a seqncia normal de um organismo. Desta forma, avaliado o efeito de uma mutao in vivo. Foi desenvolvido por Ames, um teste para avaliar a capacidade mutagnica dos produtos qumicos utilizados, com base no tipo de mutao que os produtos provocam. Tais produtos qumicos so classificados quanto ao potencial de causar danos nas pessoas, dependendo do tipo de mutao e a freqncia que so causadas. Este teste associa a capacidade de ao mutagnica com a capacidade de causar cncer, pois estas duas esto estreitamente relacionadas. Outros tipos de testes tambm so utilizados para confirmar a periculosidade do produto. Com base nestes testes, a fabricao e a comercializao de muitos produtos qumicos j foram proibidas.

6-METILAO
Uma frao das citosinas no DNA de muitos organismos torna-se metilada (5mC) aps a replicao. Esta metilao no tem distribuio ao acaso. Algumas seqncias como as denominadas ilhas de CpG em animais, so raramente ou no metiladas. Enquanto algumas seqncias so metiladas em certas condies, como aquelas herdadas da me e no do pai, outras so sempre metiladas em todos os tecidos. Nas plantas e fungos as ilhas CpG so freqentemente metiladas pelas metilases, embora h evidncia de uma substancial quantidade delas no metiladas. Em fungos, a metilao atinge 1,5% das Citosinas e no ocorre somente de forma simtrica. Tanto o controle da metilao quanto sua funo nos eucariotos, ainda no so suficientemente compreendidos. A metilao tem sido correlacionada com reduo na atividade gnica, havendo evidncias de inibio da expresso de vrios genes. Em ratos, a reduo da metilao do DNA em 70%, resultante da mutao no gene metiltransferase do DNA, leva a morte os indivduos na embriognese. A hiptese levantada admite que as regies com bases metiladas dificilmente so transcritas. Neste caso, a morte dos ratos poderia ter sido provocada pela falta de protenas e/ou RNAs. A metilao tambm requerida para o comportamento normal dos cromossomos em Neurospora crassa. Sua necessidade foi comprovada, mas sua funo ainda no est totalmente esclarecida.

7-REGULAO GNICA
Na definio de Jacob e Monod (1961), gene uma seqncia de DNA que codifica para um produto difusvel. A regio regulatria do gene uma seqncia de DNA que no convertida em outra forma (como a regio codificadora) e que s funciona in situ. Alm disso, existem genes estruturais e genes reguladores de outros genes. O princpio bsico da regulao gnica a interao entre protenas regulatrias e certas regies (seqncias) do DNA. Assim, nos procariotos a regulao gnica chamada de negativa se um gene no se expressa caso o repressor, que uma protena, liga-se ao DNA na regio do promotor do gene (Figura 6). Para que o gene possa ser transcrito, h a

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necessidade de remover a protena repressora. Isto possvel, pela presena do indutor, para o qual a protena repressora tem muito mais afinidade que pela regio do DNA responsvel pela regulao do gene. O indutor ento tem um efeito inativador sobre o repressor. Este tipo de regulao gnica o mais comum nos genes de organismos procariotos. No controle dito positivo, o mais frequente nos eucariotos, o gene ativado pela presena de um ativador. Em outras palavras, no controle negativo, a interao protena-DNA desliga o gene, enquanto no controle positivo, a interao liga o gene. O controle negativo bastante comum nas bactrias, onde a maioria dos genes estaria ligada (on) at que os repressores os desligariam (off). J o sistema positivo mais comum nos eucariotos, onde os genes estariam desligados at que os ativadores os ligariam.

Figura 6: Modelo de funcionamento do operon lac em bactrias. O repressor impede a transcrio dos genes Z, Y e A, que ativada na presena de -galactosdio.

A rigor, existem cinco pontos de controle na regulao de um gene eucarioto: 1) na ativao de gene estrutural, 2) no incio da transcrio, 3) no processamento da transcrio, 4) no transporte para o citoplasma e 5) na traduo do mRNA. Na ativao de um gene estrutural, um gene regulado por uma seqncia no promotor e/ou no enhancer, as quais so reconhecidas por protenas especficas. Esta protena funciona como um fator de transcrio necessrio para o incio da transcrio atravs da RNA Pol. Protena ativa s disponvel sob condies quando o gene para ser expresso. In vitro possvel modular a regulao nos diversos pontos de controle. In vivo, a adio de determinados genes permitem o controle de um ou mais pontos de controle. Nos eucariotos ainda no se conhece profundamente a regulao gnica. Entretanto, vrios mecanismos j foram amplamente estudados. Em primeiro lugar, um grande nmero de genes so ativados em determinados tecidos e rgos e no em outros. Os genes denominados de Homeobox so os responsveis por este controle. J nas primeiras divises celulares do zigoto formado, os genes Homeobox se encarregam de marcar quais os genes que podero e quais os genes que no podero ser expressos num determinado tecido ou rgo. Outros genes dependem de um complexo sistema de eventos: sinal ambiental (temperatura, umidade, etc.) faz com que uma substncia seja produzida e/ou movida para as clulas. Este sinal qumico seria recebido por um receptor na clula, cujo complexo tem habilidade para penetrar no ncleo da clula e ativar um conjunto de genes de forma coordenada.

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PARTE 2 - MARCADORES GENTICOS

1-INTRODUO
Marcador gentico uma caracterstica que capaz de detectar diferenas entre dois ou mais indivduos ou organismos. Entre suas propriedades um marcador gentico deve: (i) ser capaz de diferenciar os progenitores e (ii) ser reproduzido com preciso na prognie. Do ponto de vista molecular, um marcador gentico (ou loco marcador) serve para identificar um local ou uma regio de um cromossomo. Um marcador gentico ideal deve apresentar uma srie de atributos: (i) alto nvel de polimorfismo (ii) estabilidade em diferentes ambientes (iii) detectar grande nmero de locos no ligados (iv) herana simples Entretanto, a simplicidade e os baixos custos do mtodo so fatores determinantes no uso de forma rotineira de um marcador molecular. Aqui ser apresentada uma descrio resumida dos principais tipos de marcadores genticos bem como suas principais aplicaes no melhoramento de plantas. Todo e qualquer fentipo molecular proveniente de um gene expresso, como no caso de isoenzimas , ou de um segmento especfico de DNA (correspondendo a regies expressas ou no do genoma) chamado de marcador molecular.

2-MARCADORES MORFOLGICOS
At os meados da dcada de 60, os marcadores utilizados em estudos de gentica e melhoramento eram controlados por genes associados a caracteres morfolgicos, Em geral, caractersticas fenotpicas de variao discreta so utilizadas como marcadores morfolgicos desde os tempos de Mendel, como fentipos de fcil identificao visual (Ex.: nanismo, deficincia cloroftica, cor de ptala ou morfologia foliar). Um nmero varivel de marcadores morfolgicos existe para as diferentes espcies de plantas, contudo insuficientes para mapeamento gentico ou outras aplicaes. Alm disso, esses marcadores freqentemente so afetados pela ao gnica de dominncia, efeito ambiental, pleiotropia e epistasia. O reduzido nmero e a natureza dos marcadores morfolgicos restringiram os estudos dos caracteres quantitativos (QTs) s espcies onde havia sido alcanada uma caracterizao gentica substancial. Sax (1923) verificou em feijo que as diferenas nas mdias do peso de gros estavam associadas a cor das sementes. Foi a primeira tentativa de caracterizao individual dos locos (QTL) envolvidos na expresso de um carter quantitativo (QT) com auxlio de marcadores morfolgicos. Marcadores morfolgicos apresentam a desvantagem de serem somente identificados em sua maioria, na planta inteira ou adulta.

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3-MARCADOR DE PROTENAS DE SEMENTES

As protenas das sementes podem ser classificadas de acordo com a sua solubilidade em quatro diferentes grupos. Numerosos mtodos tm sido utilizados in vitro para caracterizar as protenas de sementes. Polipeptdeos variantes que apresentam distintos pesos moleculares podem ser separados em gel de poliacrilamida atravs do processo de eletroforese (ver Quadro 1). A eletroforese de duas dimenses (SDS-PAGE) tem habilidade de separar protenas pelo ponto isoeltrico (carga) e pelo peso molecular (tamanho). Diferentes variantes aparecem como distintas bandas num gel. Embora o nmero de variantes de uma protena (polimorfismo) seja relativamente alto, o nmero de protenas de sementes que podem ser analisados baixo. Apesar da base gentica complexa (normalmente so famlias de genes) a interpretao relativamente simples (Observar foto abaixo, Guimares et al. 2002).

Figura 2: Perfil eletrofortico de protenas extradas pelo calor em sementes de cafeeiros nos estgios de desenvolvimento verde (A), verde-cana (B) e cereja (C), com diferentes tratamentos de secagem.

QUADRO 1: ELETROFORESE O termo eletroforese foi criado por Michaelis em 1909, para descrever migrao de colides sob a influncia de um campo eltrico. Seu princpio simples: molculas de carga negativa migram para o plo positivo, e molculas com carga positiva migram para o plo negativo. A eletroforese visa a separao de molculas em funo de suas cargas eltricas, de seus pesos moleculares e de suas conformaes, em suportes porosos (gis) e solues - tampes (estabilizam o pH do meio e permitem o fluxo de corrente eltrica). Ou seja, na prtica a eletroforese consiste da extrao de amostras, seja de protenas, RNA ou DNA obtido de um tecido e da migrao destas num gel (amido, agarose, acrilamida) submetido a uma corrente eltrica contnua. O sentido e a velocidade de migrao so determinados pelo tamanho e carga das protenas. Por exemplo, quanto maior a carga eltrica de uma protena, mais rpido a sua migrao no gel em direo ao eletrodo de carga contrria, como observado na figura 1. A passagem de corrente eltrica atravs de uma soluo-tampo segue a Lei de Ohm: V = R. I onde, V = voltagem
R= resistncia I = amperagem

A eletroforese pode ser conduzida ora sob voltagem, ora sob amperagem (corrente) ou, ento, wattagem (potncia) constantes reguladas pela fonte eltrica. bom observar que para cada tipo de marcador a ser utilizado diferencia grandemente na corrente eltrica a ser utilizada. A eletroforese pode ser desenvolvida em suportes como papel-filtro, slica gel, membranas de acetato de celulose e gis de agarose, de amido ou de poliacrilamida. Para enzimas, gis de amido e poliacrilamida oferecem melhor separao do que outros suportes. Para marcadores DNA os mais utilizados so gis de agarose e poliacrilamida.

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Quadro 1: Continuao

Figura 1: Princpios gerais do sistema de eletroforese.

Figura 2: Exemplos de aparatos de eletroforese. A) Cuba de eletroforese horizontal submersa para gel de agarose. B) Cuba de eletroforese vertical para gel de acrilamida.

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4-ISOENZIMAS
Na dcada de 1960, um novo tipo de marcador gentico foi desenvolvido: as isoenzimas, ento denominados de marcadores bioqumicos. Isoenzimas foram definidas como diferentes formas moleculares (variantes) de uma mesma enzima, apresentando funo idntica ou similar, presente num mesmo indivduo (Markert & Moller, 1959). o resultado da presena de mais de um gene codificando cada uma das enzimas. As vantagens sobre os marcadores morfolgicos so a insensibilidade pleiotropria e epistasia, alm de sua natureza co-dominante (possibilita a identificao de indivduos homozigotos e heterozigotos). Desde a sua resoluo pelos mtodos histoqumicos, a principal aplicao das isoenzimas nos estudos de diversidade gentica e evoluo,o que tm sido extremamente importantes para as investigaes sobre variao intraespecfica, gentica de populaes, tambm na evoluo e mapeamento gentico, j realizadas em centenas de espcies. Apesar de estar sendo utilizada em vrios programas de melhoramento, o reduzido nmero de sistemas enzimticos polimrficos impe limitaes variveis dependendo do objetivo do estudo ou atividade. Comumente muitas enzimas existem em mltiplas formas moleculares, mas apresentando a mesma especificidade. O princpio bsico da tcnica reside no uso de eletroforese em gel de amido ou poliacrilamida e na visualizao do produto enzimtico por mtodos histoqumicos (Hunter e Market, 1957). As distintas bandas observadas no gel, representam diferentes formas moleculares que apresentam diferentes propriedades de mobilidade eletrofortica. Subsequentemente, a posio de uma enzima no gel de amido pode ser verificada pela sua atividade que detectada por um sistema de revelao colorimtrica. Este sistema inclui reagentes especficos para revelar uma determinada enzima. A conseqncia o aparecimento de uma ou mais bandas no gel. Portanto, as distintas formas de uma mesma enzima, as isoenzimas, codificadas por diferentes alelos, podem ser detectadas em diferentes regies do gel, caso apresentem diferentes mobilidades eletroforticas. Com esta tcnica o estudo da variabilidade gentica de populaes de uma dada espcie ser baseada na variao observada nas isoenzimas. Cada banda revelada no gel se constitui num marcador gentico, j que por marcador gentico entende-se a constituio genotpica de um loco num determinado indivduo. As isoenzimas comearam a ser utilizadas como marcadores genticos somente a partir de 1966 (Lewontin & Hubby, 1966).

4.1-Vantagens das isoenzimas em relao aos marcadores morfolgicos:

a) determinao genotpica dos locos em qualquer parte da planta, b) ocorrncia de um nmero razovel de alelos, c) ausncia de efeitos deletrios associados com alelos isoenzmicos, d) herana Mendeliana simples com codominncia entre alelos na maioria dos locos, e) ausncia de efeitos epistticos, pleiotrpicos e ambientais.

4.2-Aplicabilidade das isoenzimas:

A propriedade mais expressiva a base gentica simples envolvida na expresso destas enzimas (Soltis & Soltis, 1989), o que torna a identificao de polimorfismos rpida e simples (Brewer, 1970). A maioria das enzimas j reveladas em gel de amido tem mais de uma isoenzima. Como conseqncia, uma grande quantidade de sistemas isoenzimticos so potencialmente informativos.

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A eletroforese de enzimas tem proporcionado dados teis na abordagem de questes importantes em sistemtica e evoluo de plantas (Crawford, 1989; Doebley, 1989). Do ponto de vista da variao intraespecfica, as isoenzimas tm contribudo para o estudo da organizao da variabilidade gentica e a identificao de raas (Singh et al., 1991a; 1991b). Alm da caracterizao da diversidade gentica de populaes naturais e gentipos cultivados, as isoenzimas tm sido utilizadas com bastante freqncia em outros estudos. Ligao gentica entre sistemas enzimticos ou destes com outros locos tem aumentado a resoluo de mapas genticos em vrias espcies como Capsicum annuum, Cicer arientinum, Lens culinaris, Phaseolus acutifolius e Pisum sativum (Tanksley, 1984; Gauer & Slinkard, 1990; Havey & Muehlbauer, 1989; Garvin et al., 1989; Weeden, 1985). As isoenzimas tambm tm sido utilizadas na identificao de genes que controlam caracteres quantitativos em feijo, milho, soja e tomate (Koenig & Gepts, 1989; Graef, 1989; Kahler & Wehrhahn, 1986; Tanksley et al., 1982; Weller et al., 1988).

4.3-Base gentica dos marcadores isoenzimticos

A premissa bsica de se utilizar dados enzimticos que diferenas na mobilidade de isoenzimas em um campo eltrico so resultantes de diferenas nas seqncias de DNA que codificam tais enzimas. Assim, se os padres de bandas de dois indivduos diferem, assume-se que estas diferenas possuem base gentica e sejam herdveis. O controle gentico de isoenzimas ocorre atravs de vrios genes, que podem ser alelos de um mesmo loco, ou estar situados em diferentes locos. Isoenzimas codificadas por genes allicos so tambm chamados de aloenzimas. A expresso das isoenzimas co-dominante, isto , em um indivduo diplide ambos os alelos de um loco so expresso e visualizados, ou seja, discrimina o heterozigoto do homozigoto.

5-RFLPs (Restriction Fragment Length Polymorphism)

As variaes nos nucleotdeos do DNA devido mutao, deleo, insero e inverso, podem ser detectadas se ocorrerem num stio de corte das enzimas de restrio. Se o DNA de plantas diferindo num ou vrios desses nucleotdeos forem expostos a essas enzimas, fragmentos de diferentes tamanhos, portanto polimrficos, so gerados e podem ser identificados e clonados. Tais fragmentos so denominados de RFLPs ('Restriction Fragment Length Polymorphims'; polimrfismo no comprimento de fragmentos restrio) e foram desenvolvidos por Botstein et al. (1980). Os polimorfismos de comprimento de fragmentos de restrio ou polimorfismo de tamanho de fragmento so locos no DNA que podem ser identificados e mapeados. Os RFLPs tm sido suficientemente numerosos na maioria dos cruzamentos e tm permitido uma cobertura adequada do genoma, proporcionando a construo de densos mapas genticos de ligao, que possibilitam a realizao de anlises genticas e moleculares e vrias aplicaes no melhoramento de plantas, como clonagem de genes e mapeamento de QTLs (Nodari et al., 1993). O elevado custo e o tempo necessrio na gerao destes marcadores restringem drasticamente seu uso de forma freqente, principalmente em pases como o Brasil. A obteno de RFLPs envolve vrias etapas. Em primeiro lugar preciso extrair e purificar o DNA de um indivduo. Aps, este DNA deve ser digerido (cortado) por enzimas de restrio (ER) que so capazes de reconhecer um pequena seqncia de pares de bases (pb) e ento cortar o DNA neste stio de reconhecimento ou clivagem. Entretanto, a maioria das plantas contm mais de um bilho de pb. Como conseqncia, a digesto do DNA de uma planta com apenas uma ER produz milhares de fragmentos que variam em comprimento de acordo com a distribuio dos stios de clivagem. Tal quantidade impossibilita a anlise de todos de uma s vez.

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A terceira etapa do processo consiste em separar esta mistura de fragmentos de diferentes comprimentos pela eletroforese em gel de agarose. A migrao dos fragmentos de DNA num gel dependente do seu tamanho, migrando mais rapidamente, os menores. Subseqentemente, os fragmentos de DNA na condio de fita simples (aps tratamento com hidrxido de sdio), so transferidos para uma membrana de nylon ou celulose (carregada positivamente), tcnica que denominada de Southern blot, e que proporciona um suporte slido para o DNA que passa a ser imobilizado neste suporte. Agora possvel analisar individualmente cada um destes fragmentos. A prxima etapa do RFLP a hibridizao do DNA destas plantas j imobilizados em membranas com uma sonda radioativa de DNA (que pode ser um fragmento de DNA da prpria planta, um clone) complementar ao fragmento de interesse. Para que haja hibridizao, h a necessidade que pelo menos parte da sonda seja complementar ao fragmento de interesse. Existem outras alternativas de marcao de sondas que no a radioativa. A ltima etapa, a autoradiografia, consiste da exposio da membrana hibridizada com a sonda radioativa a um filme de Raio X, que queimado somente onde houve as hibridizaes. A sonda sendo radioativa, emite radiao que pode ser detectada por filmes de Raio X. J que a sonda s hibridiza com fragmentos complementares, a preciso elevadssima. Portanto, as cpias nicas (genes) normalmente aparecem uma vez s no genoma, e, portanto apenas uma banda pode ser detectada nos indivduos homozigotos. Assim, a associao enzima de restrio e sonda identificam um loco RFLP, que tem herana mendeliana. Admitindo-se que duas plantas diferem em um stio de reconhecimento, apresentaro fragmentos de diferentes comprimentos, com relao a uma sonda complementar. Tais fragmentos localizam-se em diferentes posies na membrana. Consequentemente apresentaro bandas ocupando diferentes posies no filme, indicando a existncia do polimorfismo ao nvel de DNA, portanto genotpico. Os fragmentos de diferentes tamanhos so denominados de alelos, e apresentam herana mendeliana. A principal caracterstica da tcnica do RFLP a sua habilidade em detectar tais diferenas. As seqncias genmicas de duas plantas de uma mesma espcie so muito parecidas. Entretanto, as plantas sofrem freqentes alteraes ao nvel de DNA: mutaes simples, rearranjamentos e recombinao; as quais podem ocasionalmente alterar a seqncia ou substituir bases nitrogenadas em um ou mais stios de reconhecimento de uma determinada ER. Numa populao, estas variaes podem ocorrer numa planta e no em outra. Tais diferenas (que normalmente so denominadas de variao gentica) produzem fragmentos de DNA de diferentes tamanhos (polimorfismo de comprimento de fragmento) quando o DNA exposto a estas enzimas. Para o desenvolvimento das sondas, o DNA de uma planta precisa ser digerido por uma ER ou quebrado mecanicamente e os fragmentos inseridos em um vetor (geralmente plasmdeo), uma espcie de carregador. Este plasmdeo recombinante pode ser amplificado ilimitadamente, aps sua incluso numa bactria ou mesmo in vitro. A denominao de sonda ocorre quando uma certa quantidade amplificada deste DNA marcada com radioistopos, ou ligada a reagentes que posteriormente podem ser coloridos, portanto identificveis. As sondas desta forma so utilizadas para detectar seqncias complementares a elas. Os RFLPs mais informativos so aqueles cuja seqncia ocorre somente uma vez no genoma, denominados de cpia nica. Desta forma, os RFLPs so especficos. Como as isoenzimas, os RFLPs nucleares exibem codominncia. Pleiotropia e epistasia que afetam a resoluo dos marcadores morfolgicos, no tm o menor efeito sobre os RFLPs. Alm disso, os RFLPs apresentam alta estabilidade. O DNA a ser analisado pode ser extrado de qualquer parte da planta. Outra caracterstica fundamental a de que a herdabilidade deste tipo de marcadores virtualmente 1. Isto possibilita a realizao da seleo indireta, cuja

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teoria foi desenvolvida h bastante tempo, mas sua implementao no existiu por falta de marcadores com as caractersticas dos RFLPs. Por sua segura informao genotpica e ocorrncia em grande nmero, estes marcadores possibilitam o desenvolvimento de mapas genticos de ligao altamente saturados. Estes so a ferramenta bsica para estudos de gentica, evoluo e melhoramento de plantas.

6-MINISSATLITES
Os minissatlites ou locos VNTR ('Variable Number of Tandem Repeats') so regies dispersas no genoma que contm um nmero varivel de seqncias repetidas e enfileiradas (tandem) de DNA que tm um ncleo comum de 10 a 15 pares de bases (Jeffreys et al., 1985). Podem ser analisados tanto atravs de RFLPs ou PCR (reao em cadeia da polimerase, Quadro 2). Muitos dos minissatlites so altamente polimrficos, produzindo um grande nmero de bandas. Por estarem espalhadas por todo o genoma e apresentarem um nmero varivel de repeties em diferentes indivduos em relao a uma mesma regio cromossmica (loco), os minissatlites simultaneamente proporcionam um conjunto de marcadores genticos que se constitui no que tem sido denominado de impresses digitais de DNA, conseqentemente, indivduo-especficos.

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QUADRO 2: A REAO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) Esta reao foi concebida em 1983 por Kary Mullis (Prmio Nobel em 1993), publicada em 1985, mas utilizada de forma rotineira a partir de 1988 (Saiki et al., 1988). Esse mtodo tem a habilidade de amplificar um fragmento de DNA, normalmente de at 4000pb, mas em condies especiais de at 30 kb). Para amplificar, o primer (ou iniciador) utilizado, que um oligonucleotdeo de aproximadamente 10 nucleotdeos, precisa anelar com seqncias complementares e invertidas com relao s duas fitas que foram previamente separadas pelo aumento da temperatura (92-94C). O anelamento entre os primers e as seqncias complementares efetuado a uma temperatura de 35 a 50C. Uma Taq DNA polimerase estende (ou sintetiza) as cadeias originadas pelos primers, cuja temperatura tima de catlise de 72C. Existem mquinas programveis de PCR, os termocicladores, capazes de modificar a temperatura rapidamente. Na realidade cada ciclo da PCR composto de trs etapas: a separao das fitas (92-94C), o anelamento do primers com o DNA (35 a 50C) e a extenso ou polimerizao da cadeia (72C). Os tempos utilizados em cada fase so aproximadamente de 1 min, 1 min e 2 min, respectivamente. A rigor, uma vez atingida as temperaturas de cada fase, so necessrios poucos segundos para que a reao ocorra. E as mquinas de PCR tm a capacidade de alterar a temperatura de forma rpida e repetir o ciclo tantas vezes quantas ordenadas. O nmero de fragmentos amplificados duplica a cada ciclo. Sucessivos ciclos de separao, anelamento e de sntese produzem milhes de fragmentos virtualmente idnticos, em apenas algumas horas. Os produtos da PCR podem ser facilmente visualizados num gel de agarose. Esta visualizao possvel com auxlio do brometo de etila, que quando presente no gel se interpe entre as duas fitas do DNA e se torna avermelhado com absoro da luz ultravioleta. A tcnica da PCR tem dezenas de aplicaes. A amplificao de fragmento(s) a partir de primers arbitrrios (sequncia de bases completamente casualizadas) foi denominada de RAPD. Em plantas, os RAPDs tm facilitado a realizao de estudos em gentica e melhoramento, at ento, considerados inexequveis com as tcnicas tradicionais. Uma diferena entre duas plantas ao nvel de DNA que ocorra na regio de anelamento do primer identificada pela ausncia da referida banda em uma delas e presena da banda na outra. No caso de indivduos heterozigotos, estes produzem as mesmas bandas que os homozigotos. De fato, os marcadores RAPDs so dominantes. Combinando DNA de plantas segregantes com uma grande quantidade de sondas, possvel a identificao de dezenas, centenas e mesmo milhares de RFLPs e/ou RAPDs. Quanto mais prximas as diferenas no DNA, maior ser o grau de cosegregao entre elas. A anlise da segregao destes alelos permite o estabelecimento da relao da ordem e da distncia entre eles nos cromossomos, o que pode ser visualizado num mapa gentico de ligao.

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Quadro 2: continuao Na rea da sade, a tcnica da PCR est sendo utilizada intensamente (Vosberg, 1989). Uma das aplicaes na diagnose de doenas causada por vrus como Hepatite, AIDS, etc. Nestes casos, utilizam-se os primers que anelam a regies especficas do DNA do vrus causador da doena. Portanto, primers com sequncia conhecida e pr-estabelecida. Se houver amplificao de uma banda a partir do DNA de uma pessoa, porque existe DNA do vrus nas clulas humanas. Este diagnstico, rpido e confivel, j est sendo feito em vrias cidades brasileiras. Existe um esforo integrado entre a Secretaria da Sade e a UFSC no desenvolvimento deste sistema aqui em Florianpolis. O mais fascinante, entretanto, a amplificao de DNA de espcies extintas fossilizadas ou conservadas na forma de mmia, o que denominado de DNA ancestral (ancient DNA). Atualmente possvel amplificar segmentos de DNA extrado de ossos e outros tecidos macios, o que tem permitido conhecer seqncias de DNA de vrios mamferos fsseis. Outra maneira de conhecer o DNA dos fsseis ou espcies extintas seria a de decodificar o DNA extrado de insetos sugadores, embebidos em amber a milhes de anos atrs. Amber a designao dada resina solidificada de rvores antigas e tem a capacidade de proteo contra gua e o ar. Tais insetos podem carregar nas estruturas que usam para sugar ou no aparelho digestivo, o sangue de animais. Estas descobertas auxiliaram a realizao do filme Jurassic Park. Em maio de 1995, do interior de uma abelha envolta de amber e que teria vivido h 20-25 milhes de anos atrs, foi isolada uma bactria que est se reproduzindo normalmente e de cujo DNA, foram amplificados vrios fragmentos via PCR. A sequncia destes fragmentos mostrou grande similaridade com o DNA da bactria Bacillus.

7-RAPDs (Randomly Amplified Polymorphic DNA)

Na dcada de 80, surgiu um novo tipo de marcador molecular denominado de RAPDs ('Randomly Amplified Polymorphic DNA'; DNA polimrfico amplificado ao acaso; Welsh & McClelland, 1990; Williams et al., 1990). O uso da reao da polimerizao em cadeia (PCR) proporciona a amplificao de um segmento de DNA, delimitado por dois iniciadores (ou primers), comumente com 10 pares de bases, que so complementares a dois stios de nucleotdeos: um em cada fita do DNA, posicionados inversamente a uma distncia geralmente no superior a 4kb. Os produtos resultantes da amplificao podem ser visualizados como bandas em gis de agarose ou poliacrilamida. Diferenas ao nvel do DNA so inferidas pela presena ou ausncia de um determinado fragmento amplificado (banda no gel). Em relao aos RFLPs, os RAPDs so mais baratos, requerem pouco tempo e no necessitam de radioistopos. Nos ltimos anos, alguns mapas desenvolvidos com RFLPs e isoenzimas, se tornaram altamente saturados com RAPDs, como em soja, tomate, milho, feijo, ervilha, amendoim, Arabidopsis e em muitas outras espcies domesticadas ou no. Outros mapas foram desenvolvidos somente com marcadores RAPDs.

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Figura 3: Padro de bandas polimrficas (indicadas por setas) e monomrficas de marcador RAPD em Araucaria angustifolia. As bandas so separadas em gel de agarose e visualizadas sob luz ultra-violeta aps colorao com brometo de etdeo. (Fonte: Stefenon et al., 2004).

O princpio dos RAPDs est igualmente baseado na identificao de diferenas ao nvel do DNA. Entretanto a metodologia totalmente diferente daquela dos RFLPs e minissatlites e se baseia na PCR. Uma desvantagem dos RAPDs sua natureza dominante (incapacidade de discriminar entre homozigotos e heterozigotos). As bandas observadas no gel aps a eletroforese so codificadas como presentes ou ausentes em cada indivduo.

8-MICROSSATLITES
Entre as diversas seqncias repetidas em tandem, algumas so simples, formadas por um ou poucos nucleotdeos. Tais repeties curtas em tandem so denominadas de microssatlites. Microssatlites, tambm chamados STR ('Short Tandem Repeat'), SSRP ('Simple Sequence Repeat Polymorphisms') ou STMS ('Sequence Tagged Microsatellite Sites') so sequncias repetidas de um, dois, trs ou quatro nucleotdeos e que esto espalhadas pelo genoma de um indivduo. So altamente polimrficos em plantas, animais e microorganismos. Em plantas seria mais fcil utilizar microssatlites GA (ou CT) e GT (ou CA), pois os AT, embora freqentes, causam problemas. Assim, cada regio genmica que contenha um determinado nmero de repeties de uma destas sequncias constitui-se num loco gentico, altamente varivel entre indivduos e multiallico, portanto, altamente informativo (Ferreira e Grattapaglia, 1995). Comparativamente aos RFLPs, os microssatlites proporcionam 3 a 4 vezes mais polimorfismo ou informao. Entretanto, para o uso rotineiro dos microssatlites, h a necessidade de primeiro amplificar uma regio, posteriormente sequenci-la e em terceiro lugar, sintetizar os iniciadores especficos para cada loco. Uma vez feito isto, o loco marcador pode ser utilizado indefinidamente naquela espcie. Desta forma, existe um custo elevado e trabalho no incio, mas o custo subsequente baixo e a simplicidade a posteriori, muito grande. O mapeamento gentico e a caracterizao varietal para fins de proteo e de germoplasma para fins de conservao de vrias espcies est sendo feito com o uso dos marcadores microssatlites. Seu uso est associado principalmente caracterizao varietal para fins de proteo e de conservao germoplasma. O alto polimosfismo e a natureza co-dominante dos marcadores microssatlites permitem sua utilizao em estudos de gentica populacional e evoluo de espcies selvagens, como na caracterizao de estrutura gentica intra-populacional (Stefenon et al., 2008a) e reconstruo da histria demogrfica (Stefenon et al., 2008b) do pinheiro brasileiro.

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Figura 4: Esquema geral da amplificao e visualizao de marcadores microssatlites.

9-AFLPs (Amplified Fragment Length Polymorphism)

Os polimorfismos de comprimento de fragmentos amplificados (AFLPs; Zabeau, 1993) resultante do uso combinado de enzimas de restrio e da reao da polimerizao em cadeia. Suas principais caractersticas so a alta especificidade e resoluo e poder de amostragem. Nos protocolos dos AFLPs constam pelo menos sete etapas importantes: 1) digesto do DNA, 2) ligao dos adaptadores, 3) primeira amplificao, 4) segunda amplificao, 5) preparo do gel, 6) a corrida do gel e 7) o processamento do gel. O DNA e digerido por duas enzimas de restrio, uma que corta stios de seis pares de base (geralmente a EcoRI) e a outra que corta seqncias de 4 pares de bases (geralmente a MseI). Este processo de clivagem gera milhes de fragmentos de distintos tamanhos. O DNA utilizado deve ser de alta qualidade. De preferncia utilizar um protocolo ou etapa que inclua fenol. A qualidade do DNA a base de todo o processo. O processo de ligao dos adaptadores envolve o uso de ligases que permite que os fragmentos de DNA que foram cortados se liguem a pequenos oligonucleotdeos de DNA de seqncia conhecida. Subseqentemente feita a primeira amplificao, que consiste na amplificao dos fragmentos agora ligados aos adaptadores atravs da reao da polimerizao em cadeia com o uso de iniciadores, complementares aos adaptadores com uma extra base a mais na extremidade 3. Isto importante, pois somente 25% dos fragmentos sero amplificados (aqueles com a base complementar ao nucleotdeo final da extremidade 3 do iniciador), caso contrrio todos os fragmentos cortados seriam amplificados e a resoluo no gel seria virtualmente impossvel. Neste ponto do protocolo importante verificar se a reao foi bem feita. Para tanto deve-se rodar um gel com parte da reao de amplificao. Dependendo do resultado se continua ou no o processo. A segunda amplificao feita com uma pequena amostra da primeira amplificao. Neste caso so utilizados iniciadores que so compostos de todas as bases dos primers da primeira amplificao, mais duas a trs bases na extremidade 3, dependendo do nvel de polimorfismo da espcie ou da populao. Caso isto no seja conhecido, h a necessidade de experimentar diferentes combinaes de iniciadores. Para

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os laboratrios que usam radioistopos, neste quarto passo tambm feita simultaneamente a marcao radioativa dos produtos da PCR, para posterior deteco em filme de raio X. Na realidade se marca s um dos iniciadores porque o sinal suficiente para deteco. O preparo do gel (geralmente de poli-acrilamida) uma etapa delicada. A completa limpeza do material, o tipo de molduras, a maneira de colocar as solues nos moldes, etc., afetam a qualidade do gel. Qualquer defeito no gel pode causar a perda de reao completa. Existem diferentes aparatos para corrida. Nos diferentes laboratrios, h diferentes equipamentos. Todos com suas vantagens e desvantagens. A corrida do gel envolve o carregamento e a corrida propriamente dita. O carregamento das amostras um passo crucial. Os cuidados vo desde a limpeza das cavidades no gel, o uso adequado das pipetas, a preciso na liberao das amostras e o acompanhamento na fase inicial da corrida. Como o gel submetido a alta voltagem, h a necessidade de acompanhar a temperatura que no pode ultrapassar a 55C, sob pena de desnaturar o sistema. A fase final consiste no processamento do gel. Existem basicamente trs formas de visualizao das bandas. A primeira delas com nitrato de prata. A segunda envolve a utilizao de radioistopos e a terceira utiliza terminaes coloridas. De maneira geral, a maioria dos laboratrios usa o fsforo y-33P radioativo, por vrios motivos. Em primeiro lugar, a nitidez dos gis bastante alta com radioatividade. Em segundo lugar, o filme um documento importante. O uso dos radioistopos gamas como o 33P possibilita o seu manuseio sem grandes riscos para as pessoas, uma vez que este tipo de radiao no vai alm de alguns centmetros. Outra vantagem deste radioistopo que a sua meia vida maior que a do 32P. A principal desvantagem que o aparecimento de sinal no filme requer um tempo maior que os outros istopos. Entretanto, j existem cmaras intensificadoras de sinal, mas cujo preo muito alto. A outra maneira consiste na utilizao de kits comerciais com terminadores coloridos (dyes) e utilizar sequenciadores automticos. Desta forma, evita-se a radioatividade. A ltima forma de visualizar as bandas atravs da colorao do gel de poli-acrilamida com nitrato de prata. Entre as principais vantagens esto a ausncia de radioatividade e o baixo custo. Entretanto, a resoluo no to boa quanto os outros dois mtodos. Empresas qumicas j esto anunciando o desenvolvimento de dyes para a utilizao direta em gis. Desta forma, por colorimetria ser possvel visualizar bandas, no futuro, diretamente no gel sem qualquer outro tratamento. Contudo, no sabe-se ainda o preo que custaro tais kits. A reao de digesto do DNA permite a obteno de fragmentos grandes, pequenos e uma combinao de grandes de pequenos, respectivamente. Com isto, um grande nmero de fragmentos podem ser amplificados e resolvidos num s gel. Desta forma, esta estratgia permite que sejam analisadas num nico gel o maior nmero de marcadores comparativamente s outras metodologias. Embora robusto e de alta reproducibilidade, os marcadores AFLPs so dominantes no se distinguindo heterozigotos de um dos homozigotos. As principais restries deste grupo de marcadores referem-se a necessidade do uso de radioistopos, da alta qualidade do DNA e da proteo por patente desta tecnologia. Marcadores AFLP tm sido utilizados na construo de mapas genticos, estudos de filogenia (Stefenon et al., 2006), gentica populacional (Stefenon et al., 2007) e identificao de variao somaclonal em clones de plantas micropropagadas (Steinmacher et al., 2007).

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Figura 5: Etapas da gerao de marcadores AFLP.

10-SCARs (Sequence characterized amplified RAPD)

As etapas principais no desenvolvimento de um SCAR so: 1) identificao de um iniciador que confere polimorfismo a dois bulks de DNA com fentipos contrastantes, 2) o isolamento e a clonagem do fragmento amplificado em um vetor (plasmideo), 3) sequenciamento do fragmento isolado, 4) desenho dos iniciadores de tamanho maior que os decmeros e 5) o teste final (Paran e Michelmore, 1993). Para a identificao de um iniciador que confere polimorfismo a dois bulks contrastantes, necessrio a extrao de DNA de plantas da gerao F2. Posteriormente, estas plantas F2 ou a sua prognie (F2:3) so testadas com relao a uma caracterstica, resistncia a uma raa de uma doena por exemplo. Desta forma, as plantas F2 so agrupadas em duas classes fenotpicas ou alternativamente se for utilizado as plantas F2:3 em trs classes fenotpicas. Misturando-se quantidades equimolares de DNA de seis plantas de mesmo fentipo (ex: resistncia), pode-se dizer que os seis gentipos tm uma seqncia de DNA em comum, que em relao ao gene que confere o referido fentipo e talvez um conjunto adicional de pares de bases. Da mesma forma se constri o outro bulk, com base no fentipo contrastante (susceptibilidade). Desta forma, os dois bulks s so diferentes, genotipicamente com relao a caracterstica analisada. Testando iniciadores que amplificam seqncias arbitrrias de DNA, por pura chance, possvel encontrar iniciadores de 10 pares de bases (decmeros) capazes de amplificar o DNA de um bulk e no o do outro. Quando se testa este iniciador em todos os DNAs das demais plantas F2 e a seqncia realmente est ligada, ou seja quando todas (ou a maioria) das plantas

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resistentes apresentam a banda e todas ou uma minoria das plantas susceptveis no apresentam a banda, conclui-se que o segmento amplificado est ligado ao gene de interesse. Pela quantidade de recombinao entre o local do anelamento do iniciador e o fentipo das plantas pode-se estimar a distncia entre o marcador e o gene de interesse. O Ideal que o marcador deve estar o mais prximo possvel do gene, para que possa ser utilizado como critrio de seleo. O segundo passo o isolamento e a clonagem do fragmento amplificado em um vetor, geralmente um plasmdeo. Posteriormente, os plasmdeos contendo os fragmentos de DNA desejados so utilizados para transformar bactrias. Das colnias transformadas preciso separar as que contm o fragmento daquelas que no contm o fragmento de DNA desejado. Posteriormente deve se crescer as colnias selecionadas e extrair o DNA do plasmdeo. Como o DNA vai para sequenciamento, h a necessidade de alta pureza. Existem vrios mtodos e kits comerciais disponveis para clonar este fragmento. O melhor seria a purificao com cloreto de csio, mas o mtodo trabalhoso. Aps a obteno do DNA plasmidial, deve verificar se os plamdios contm o fragmento desejado. Ento digerese com uma enzima de restrio capaz de cortar o plamdio em stios que flanqueiam o inserto. Corre-se um gel e verificam-se quais os plamdios com insertos. O terceiro passo o sequenciamento do fragmento isolado. O sequenciamento necessrio para se conhecer a seqncia do fragmento, ou seja, as bases que esto entre os iniciadores. De posse da seqncia, se desenham os iniciadores (quarto passo) com comprimento varivel entre 16 e 24 pares de bases. A idia de um iniciador mais comprido surgiu de clculos feitos sobre o comprimento mnimo de um iniciador capaz de amplificar uma seqncia nica num genoma da maioria das plantas. Desta forma, espera-se a presena de uma nica banda com o uso dos referidos iniciadores. Existem critrios que so levados em considerao no desenho de iniciadores: a incluso do decmero que originou a banda, uma percentagem mnima de 50% de C e G, tamanho mnimo que proporciona uma temperatura de anelamento maior que 56 C, a terminao em C ou G e a possibilidade de formao de estrutura secundria (hairpin ou loopback). Existem programas de computador que auxiliam a tomada de deciso, j que proporcionam valiosas informaes comparativas a respeito de diferentes iniciadores que so gerados quando fornecido ao programa uma determinada seqncia de bases. Finalmente, de posse nos iniciadores, se fazem os testes incluindo-se tanto os bulks como tambm um certo nmero de amostras da populao F2 e de outras plantas da mesma espcie.

11-SNPs (Single Nucleotide Polymorphism)

Diferenas em um nico nucleotdeo em um ponto particular do genoma so chamadas polimorfismo de simples nucleotdeo (single nucleotide polymorphism ou SNP). Esse tipo de polimorfismo ocorre aproximadamente uma vez a cada 1000 bases no genoma humano. SNPs so detectados principalmente atravs do sequenciamento de fragmentos de DNA. Nas quatro seqncias hipotticas abaixo existem dois SNPs, um na seqncia 3 e outro na seqncia 4. SEQNCIA CONCENSO: SEQNCIA 2: SEQNCIA 3: SEQNCIA 4: A C T T T G A C C A A A T T G A C T T T G A C C A A A T T G A C T T T G A C C C A A T T G A C T T T G A G C A A A T T G

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12-ANLISE COMPARATIVA
A escolha do marcador a ser utilizado depende de diversos fatores, como o tipo de estudo, as facilidades laboratoriais e os custos envolvidos. As caractersticas mais importantes a serem considerandas quando se comparam marcadores para um determinado estudo so a capacidade multiplex (nmero de locos aplificados em uma nica reao), o nmero de alelos por locos) e a proporo de locos polimrficos (Figura 6). A natureza dominante ou co-dominante do marcador tambm crucial para alguns estudos (Tabela 3).

Figura 6: Comparao de tcnicas de marcadores moleculares quanto ao contedo informativo. Foram considerados trs componentes que influenciam o contedo informativo mdio de cada tcnica: o nmero de locos amostrados por ensaio (capacidade multiplex): o nmero de alelos identificados por loco e a proporo de locos polimrficos observados em cada ensaio (SAT = minissatlite)

13-APLICAES DOS MARCADORES MOLECULARES

Especificamente no melhoramento de plantas os marcadores moleculares tm muitas aplicaes. Em primeiro lugar, o desenvolvimento de mapas de ligao, altamente saturados com marcadores. Estes mapas servem de base para o mapeamento de outras caractersticas de importncia agronmica, principalmente as de natureza quantitativa e governadas por muitos genes. Desta forma possvel verificar as associaes (ligaes genticas) entre os marcadores moleculares e os genes que afetam um carter quantitativo. Quando isto est estabelecido, o critrio de seleo agora pode ser um ou vrios marcadores (bandas) e no mais o fentipo, j que selecionando-se um marcador, teoricamente seleciona-se os genes prximos a este. Assim possvel se fazer uma seleo genotpica ao invs de seleo fenotpica, que muito menos eficiente. A seleo indireta faz sentido mesmo para um carter qualitativo, quando este muito caro ou difcil para ser avaliado, como o caso de resistncia a nematides ou produo de uma determinada protena ou substncia de interesse industrial ou farmacolgico.

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Os marcadores moleculares ainda tm outras utilidades como a identificao de germoplasma, a identificao de variedades, o controle de qualidade na produo de sementes hbridas, a caracterizao gentica de populaes, o monitoramento nos retrocruzamentos e auxlio na identificao e clonagem de genes, entre outras. * Construo de mapas genticos - Em primeiro lugar o grande volume de marcadores disponveis possibilita o desenvolvimento de densos mapas de ligao, uma ferramenta tanto para pesquisa bsica quanto aplicada. Os marcadores de DNA segregam em propores mendelianas e no interferem na segregao de outros genes. Quando em grande quantidade segregando num cruzamento, possvel a construo de um mapa gentico de ligao, cuja densidade depende da quantidade de marcadores. Mapas genticos de alta densidade eram praticamente utopia numa fase anterior ao desenvolvimento desses marcadores. Nos ltimos anos foram construdos mapas genticos de ligao das principais espcies vegetais cultivadas, de animais domesticados e de espcies utilizadas como modelo em laboratrio. Alm de mapas, os marcadores facilitam o mapeamento de genes especficos. cDNA uma molcula de DNA sintetizada a partir do mRNA. Portanto, o cDNA seria um gene (DNA) sem os introns. Quando o cDNA obtido de um mRNA de um gene conhecido, sabese a funo deste cDNA. O gene patatin foi mapeado numa extremidade do cromossomo 8 tanto em batata quanto em tomate (Ganal et al., 1991). Alm disso, uma outra regio contendo apenas a parte regulatria desse mesmo gene, foi localizada no cromossomo 3. Em tomate, as duas formas da enzima SOD, citoslica e cloroplstica, foram mapeadas nos cromossomos 1 e 11 respectivamente (Perl-Treves et al., 1990). * Caracterizao da variabilidade gentica - Entre 1966 e 1984 (18 anos) a eletroforese foi utilizada em mais de 1000 espcies, para estudos de gentica e evoluo. De maneira geral, foram avaliados em mdia de 23 locos em mais de 200 indivduos. Uma vez caracterizado o germoplasma disponvel, o melhorista pode escolher genotipicamente os progenitores para um cruzamento tanto com o objetivo de maximizar a segregao de genes de importncia agronmica como restringir esta segregao a poucos genes. Alm da escolha dos progenitores, ser possvel identificar os recombinantes desejados. * Monitoramento - Monitorar a recuperao do genoma do pai doador nos retrocruzamentos (intra e interespecficos) atravs de marcadores especficos pode diminuir o tempo e a quantidade de trabalho necessrios para a introgresso de um ou poucos genes. A avaliao genotpica atravs de marcadores moleculares de 120 linhagens BCF6 de tomate, provenientes do cruzamento entre L. pennellii e L. esculentum e retrocruzadas para o L. esculentum, foi verificado que 21 delas cobrem 95% do genoma da espcie L. pennellii. * "Fingerprinting" - Fingerprinting ou a caracterizao gentica de um gentipo outra aplicao dos marcadores moleculares. Isoladamente os mini ou microssatlites ou em conjunto com outros marcadores moleculares, podem ser utilizados para caracterizar e distinguir uma variedade de outra. Para a diferenciao varietal trs requisitos bsicos so essenciais: 1) distino - diferentes gentipos devem apresentar distintos padres de bandas; 2) uniformidade - o mesmo padro de bandas deve ser obtido se o procedimento for repetido e 3) estabilidade - o padro de bandas no se altera mesmo que o gentipo for cultivado em diferentes ambientes. Dependendo da legislao brasileira de proteo s cultivares e regras de patenteamento a ser definida, as impresses digitais de DNA ('fingerprinting') podero ter grande utilidade. * Mapeamento de QTLs - A maioria das caractersticas relacionadas com os processos de crescimento em plantas dependem da expresso de muitos genes. Historicamente, a biometria possibilitava a anlise em massa desses genes, sem a caracterizao da contribuio individual de cada um dos componentes do sistema. Com o advento dos mapas genticos de ligao, altamente saturados, foram criadas as condies

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para o estudo individualizado dos QTL (Quantitative Trait Loci), pois tais mapas proporcionam marcadores moleculares em todas as regies do genomas, em alguns casos espaados apenas de menos de 2 cM. Neste caso, a prognie oriunda do cruzamento entre plantas que diferem para um QT (Quantitative trait), so agrupadas com base num marcador molecular e ento estimada a mdia e varincia da caracterstica fenotpica das plantas de cada classe. Uma diferena significativa entre as mdias das classes, indica a relao entre o marcador e a caracterstica, mais especificamente, uma ligao entre o marcador de DNA e um dos alelos que afeta este carter. Vrios QTL relacionados com as caractersticas do fruto em tomate (Paterson et a., 1988, 1991) e com as interaes entre bactria e feijo comum (Nodari et al., 1993). No primeiro caso, foram identificados seis QTL afetando o tamanho do fruto e explicando 58% da variao fenotpica do carter. Alguns desses QTLs demonstraram efeito sobre o carter em dois ou mais ambientes e outros em apenas um s ambiente. Cinco QTLs associados com a tolerncia a baixo teor de fsforo foram identificados em milho com auxlio de um mapa de RFLP (Reiter et al., 1991). Todos os cinco QTLs apresentaram efeitos apenas aditivos. Entretanto, uma interao entre dois QTLs foi significativa. Alelos que contribuem para a tolerncia foram detectados em ambos os progenitores. O mapeamento de QTLs proporciona a identificao no s de alelos envolvidos na expresso do carter, mas o que mais importante, as possveis interaes entre os QTLs, proporcionado ao melhorista informaes que podem ser teis na escolha dos progenitores para a realizao dos cruzamentos. Proporciona ainda condies para o desenvolvimento de estoques genticos com diferentes composies genticas. Tais combinaes permitiro a comprovao dos efeitos individuais dos QTLs, anteriormente estimados. Existem programas que permitem determinar as distncias genticas entre marcadores como o caso do Linkage-1 (Suiter et al., 1983) e outros que facilitam a construo de mapas como o MAPMAKER (Lander et al., 1987). * Seleo assistida por marcadores (MAS) - A prtica da seleo indireta para caracteres de baixa herdabilidade poder ser intensamente explorada desde que os genes de interesse estejam fortemente ligados a marcadores moleculares. A seleo indireta e genotpica (marcador molecular como critrio de seleo), possibilita ainda a seleo de alelos com efeitos positivos provenientes dos dois ou mais progenitores envolvidos na gerao da populao segregante (Lande e Thompson, 1990). A ligao entre o alelo Aps1 da fosfatase cida e o gene Mi (distncia de 1cM) que codifica a resistncia ao nematide, tem possibilitado a seleo de plantas de tomate resistentes em populaes segregantes atravs da eletroforese desde 1974, quando foi iniciado por Charles Rick. O alelo Aps1 que est ligado do gene Mi que causa resistncia ao nematide em L. esculentum foi transferido do L. peruvianum atravs do sistema por retrocruzamento (mais de 30 retrocruzamentos para o L. esculentum). Um segundo exemplo relaciona-se com a incorporao de trs genes de resistncia ferrugem em feijo realizada por James Kelly, da Universidade de Michigan, utilizando marcadores RAPDs, altamente ligados aos 3 principais genes de resistncia (Kelly e Miklas, 1996). O procedimento 'Bulked Segregant Analysis' (Michelmore et al., 1991) em conjugao com a PCR uma alternativa eficiente de mapear genes especficos e selecionar indiretamente gentipos desejados. * Clonagem de genes - Em stimo lugar, os marcadores auxiliam na clonagem e transferncia de genes de interesse agronmico. Entre os mais freqentemente citados encontram-se os genes de resistncia a pragas e doenas. Entretanto, outros genes podem causar profundo impacto nos produtos finais das plantas. Trata-se dos genes que podem

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proporcionar s plantas o uso de rotas metablicas alternativas, resultando em produtos novos ou modificados, em muitos casos de alto valor econmico. Os genes j caracterizados pela gentica clssica, tm seu fentipo conhecido, mas normalmente seu produto desconhecido. Um marcador de DNA que est prximo de um desses genes, pode ser o ponto de partida para o sua identificao e clonagem. Uma das alternativas pela tcnica denominada de 'caminhar no cromossomo (chromosome walking). Esta tcnica compreende o isolamento de vrios clones com sobreposio parcial. O marcador de DNA utilizado inicialmente como sonda para identificar um desses clones. Pela sub-diviso desse clone identificado, possvel a identificao de um segundo clone, adjacente ao primeiro, e similar a este na regio de sobreposio. Este segundo clone ento utilizado como sonda para identificar um terceiro clone e assim por diante. Esta 'caminhada' pode eventualmente atingir o gene de interesse, que estaria contido num dos clones. Recentemente, vrios genes foram isolados com auxlio deste 'caminhar no cromossomo'. Entretanto esta tcnica difcil, cara e demorada. Ainda apresenta alguns problemas como seqncias repetidas de DNA que podem estar em um grande nmero de clones, impossibilitando a 'caminhada' na direo exata do gene de interesse. O outro problema, refere-se a grande distncia entre um marcador e o gene de interesse. Recentes avanos como a possibilidade de clonar fragmentos de grande tamanho (YAC; Yeast Artificial Chromosome) e de separar grandes molculas de DNA (PFGE; Pulse Field Gel Electrophoresis) facilitaro a clonagem de um gene a partir de um marcador molecular * Estudos de crescimento e desenvolvimento das plantas - O crescimento e o desenvolvimento das plantas esto sob o controle de muitos genes. Vrios desses genes j foram identificados, inicialmente atravs da gentica clssica e mais recentemente com auxlio da gentica molecular (Young, 1993). Exemplos: fitocromo e genes que afetam o padro de cor das plantas. O gene Phs responsvel pela produo da faseolina como a principal protena de reserva das sementes de feijo foi mapeado com auxlio de marcadores moleculares (Nodari et al., 1993). O gene nts (nodulao tolerante ao nitrato) foi mapeado com auxlio de marcadores moleculares numa populao F2 (10cM). * Modificaes na organizao do genoma - Existem amplas evidncias do surgimento de variantes durante a regenerao a partir de cultura de tecidos. Variao somaclonal que ocorre ao nvel do DNA, tanto nos stios de reconhecimento de uma enzima de restrio ou na regio de anelamento de um primer podem ser detectadas via RFLP, AFLP ou RAPD, respectivamente. Variao no nmero de cpias tambm pode ser detectadas pela intensidade de hibridizao, via RFLP. Os RFLPs tambm tm potencial para detectar variao fenotpica decorrente de alteraes no padro de metilao, j verificado em milho (Phillips et al., 1991). Variao somaclonal em milho foi atribuda a variao ocorrida ao nvel do DNA (Brown et al., 1991). Alm disso, os marcadores moleculares so extremamente teis na diagnose de doenas, sexo, oncogenes, etc. Neste caso, os marcadores com base na PCR so os mais adequados, considerando-se rapidez, distino, custos e praticidade.

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Tabela 3 - Anlise comparativa entre os marcadores moleculares Protenas Atributos Isoenzimas de sementes RFLPs Nvel de Polimorfismo baixo alto baixo-alto Estabilidade moderada alta alta ambiental Nmero de locos moderado (<50) baixo (<10) alto Expresso gentica co-dominate co-dominante co-dominante Nmero de alelos por 2-5 multiallico multiallico loco Distribuio no regies de cpia regies de cpia vrias genoma nica nica Acessibilidade muito alta muito alta mdia tecnolgica Aplicabilidade no rpido, rpido, lento, melhoramento baixo custo baixo custo custo mdio Identificao de gentipos Avaliao de germoplasma Mapeamento gentico Mapeamento de regies especficas Mapeamento comparativo Gentica de Autgamas Gentica de Algamas Anlise Filogentica baixa mdia baixa baixa baixa baixa mdia mdia baixa baixa muito baixa inadequado inadequado baixa baixa baixa alta alta alta mdia muito alta mdia mdia muito alta

RAPDs baixo-alto alta alto dominante 2 ao acaso muito alta rpido, baixo custo muito alta alta alta muito alta baixa alta alta mdia

Microssatlites muito alto alta alto co-dominante multiallico ao acaso muito baixa lento, custo alto muito alta alta muito alta mdia alta muito alta muito alta alta

AFLPs muito alto alta alto dominante 2 ao acaso mdia rpido, custo baixo muito alta muito alta alta muito alta baixa muito alta muito alta mdia

Adaptado de Gepts (1993) e Ferreira & Grattapaglia (1995).

PARTE 3 - ORGANISMOS GENETICAMENTE MODIFICADOS

1. INTRODUO
Organismos transgnicos (ou Organismos Geneticamente Modificados - OGM) so organismos (plantas, animais ou microrganismos) que tm inserido em seu genoma, uma sequncia de DNA manipulado em laboratrio por tcnicas moleculares ou biotecnolgicas. O DNA inserido pode ser da mesma ou de outra espcie. Tais tcnicas, desenvolvidas nos ltimos 20 anos, possibilitam o corte e a ligao de fragmentos de DNA de uma forma altamente precisa. Particularmente, seqncias de DNA (genes) podem ser removidas de um organismo, ligadas a seqncias regulatrias e inseridas em outros organismos. A fonte destes genes pode ser qualquer organismo vivo (microorganismo, planta, animal) e o organismo recipiente, nesse caso especfico, uma variedade de uma espcie de planta cultivada. As plantas, animais e microrganismos transgnicos possibilitam tanto (i) estudar questes biolgicas fundamentais a nvel molecular como tambm (ii) materializar aplicaes da biologia celular e molecular, como por exemplo o controle biolgico atravs de endotoxinas modificadas ou a produo de vacinas comestveis. A expresso engenharia gentica surgiu em 1973 quando molculas DNA de diferentes espcies foram recombinadas in vitro. Basicamente, trata-se do uso de dois grupos de enzimas: as de restrio (do tipo II) que so capazes de reconhecer uma pequena seqncia de pares de bases e ento cortar o DNA neste stio de reconhecimento ou de corte e as ligases, que so enzimas capazes de ligar dois fragmentos de DNA. O primeiro plasmdeo in vitro (Cohen et al, 1973) foi construdo a partir do corte de DNA com enzimas de restrio e a cola de fragmentos especficos com as ligases. Surge ento o que convencionou denominar de tecnologia do DNA recombinante ou engenharia gentica. uma tentativa de se fazer in vitro o que ocorre na natureza: a recombinao de fragmentos de DNA. Contudo, na natureza dificilmente DNA de uma espcie pode ser cortado e ligado ao DNA de outra espcie. A introduo de uma molcula de DNA recombinante numa planta se constitui na transformao de plantas. Para tal, utiliza-se de um vetor para que a construo gentica feita em laboratrio seja inserida no genoma da planta. As tcnicas de engenharia gentica possibilitam a transferncia de genes por via no sexual.

2. TRANSFORMAO DE PLANTAS
A transformao de plantas consiste na introduo de um fragmento de cido nuclico em um genoma. Existem duas estratgias para transformar plantas: direta e indireta. A estratgia indireta aquela que utiliza um vetor como a Agrobacterium tumefaciens (o mtodo mais usado para a obteno de plantas transgnicas) ou A. rhizogenes como veculo de entrega do DNA planta. Mtodos qumicos e fsicos possibilitam a transformao direta de genomas. Dentre eles destacam-se: biobalstica (ou acelerao de partculas), eletroporao, microinjeo e mtodos qumicos (como polietilenoglicol) e fsicos. Agrobacterium tumefaciens - Pertencente ao grupo das bactrias gram-negativas, tipo bacilo aerbico, A. tumefaciens causa em algumas plantas uma doena chamada de galhada-coroa, uma espcie de tumor. Este tumor causado por genes bacterianos, que naturalmente so transferidos pela bactria e inseridos no genoma nuclear da planta hospedeira. O segmento de DNA transferido planta denominado de T-DNA, que faz parte do plasmideo bacteriano, chamado de plamdeo Ti (tamanho varivel de 120 a 250 kb). O processo de transferncia ocorre aps a infeco, que tem inicio aps a liberao de determinados compostos pela planta. Imediatamente vrios genes da regio vir do plasmideo so expressos, os causadores da virulncia, O T-DNA transferido est contido entre duas

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sequncias terminais de 25 pares de bases, denominadas de extremidades esquerda e direita. A extremidade direita imprescindvel para a transferncia. As demais sequncias que naturalmente so transferidas s plantas no so necessrias ao processo em si de transferncia. Desta forma, um plasmideo pode ser engenheirado, com a substituio de todas as bases, exceo quelas que compem as extremidades, por genes de interesse. Assim, a A. tumefaciens se encarrega de transferir e inserir no genoma nuclear das plantas uma construo quimrica contendo genes de interesse. O mtodo bastante eficiente, entretanto, esta bactria no consegue infectar um grande nmero de espcies vegetais, o que limita bastante seu uso, como no caso das monocotiledoneas em geral. A primeira planta transformada com Agrobacterium tumafasciens foi em 1983 e s 11 anos mais tarde, a primeira variedade transgnica foi liberada para cultivo, o tomate longa vida (Flavr Savr). A similaridade entre os mtodos diretos de transformao de plantas consiste na capacidade de romper a parece celular e do envelope nuclear. Estes mtodos so mais adequados do que os indiretos para transformao de plen, embrio e meristemas (Brasileiro e Dusi, 1999). Sero descritos, agora, brevemente alguns mtodos. Biobalistica ou acelerao de partculas - um mtodo que utiliza microprojteis em alta velocidade envoltos por DNA, com objetivo de superar a parede celular pela fora, na esperana que algumas molculas de DNA atinjam o ncleo e se integrem ao genoma nuclear. Os microprojteis so constitudos principalmente de partculas esfricas de ouro ou tungstnio, de 1 mm de dimetro. O DNA adere facilmente e fortemente a estas partculas, pois tais metais so carregados positivamente. Geralmente os equipamentos utilizam o gs hlio, eletricidade ou propulso a ar e alta presso na acelerao das partculas. Esta estratgia empregada em plantas que normalmente no conseguem ser infectadas por A. tumefaciens. Por utilizar a fora bruta para penetrar no ncleo da clula, esta estratgia pode a rigor ser utilizada em qualquer tecido e planta. A obteno de uma planta transformada depende da regenerao de uma clula transformada. Eletroporao - Mtodo que consiste em submeter protoplastos misturaddos com DNA a uma descarga eltrica controlada opor um curto espao de tempo. Esta descarga cria poros na membrana nuclear, facilitando a entrada de DNA no ncleo. Nesta soluo de protoplastos, que clulas sem a parece celular (ncleos com citoplasma) tambm esto presentes plasmdeos contendo genes de interesse. Com a criao de poros pela descarga eltrica, um ou mais plasmdeos podem penetrar no ncleo e se integrarem no genoma da clula. A obteno de uma planta transformada tambm depende da regenerao de uma clula transformada. Qumicos Existem vrias substncias qumicas que facilitam a entrada no ncleo de construes quimricas bem como a sua integrao no genoma de clulas de plantas. O polietilenoglicol (PEG), um poliction, um dos mais utilizados, mas de baixa eficcia. O PEG tambm utilizado conjuntamente com outras estratgias. Polivinil lcool (PVA) tambm utilizado. Lipossomas Neste mtodo o DNA envolto pelos lipossomas, que so vesculas fosfolipdicas, que so misturadas com protoplastos previamente tratados com PEG. De eficncia muito baixo, pouco utilizado. Microinjeo - Tubos microcapilares (microsseringas) so utilizados para injetar o DNA no ncleo das clulas, sem causar danos severos. Este mtodo mais comum em animais. O uso de agulhas permite ultrapassar a parede celular e tambm o envelope nuclear. Outros mtodos incluem o uso de fibras (de Silicon Carbide) ou laser, para perfurar a parece celular. Neste processo, so misturados os plasmideos contendo os genes de interesse com fibras de silicon carbide e as clulas a serem transformadas. Sob agitao, as fibras de silicon carbide conseguem abrir poros nas clulas vegetais, o que permite a entrada de DNA. Alternativamente, microrraios laser podem perfurar a parede celular. Tambm a embebio de uma soluo de DNA com sementes e tubo polnico podem levar a transformao de clulas. 42

2.1-CONCEITO DE OGM OU TRANSGNICO

A transformao gentica de plantas consiste na insero no seu genoma de uma ou mais seqncias, geralmente isoladas de mais de uma espcie, especialmente arranjadas, de forma a garantir a expresso gnica de um ou mais genes de interesse. Neste contexto, o prefixo trans era plenamente justificado, pois exprimia a idia de alm de, neste caso, significando o rompimento da barreira da espcie. Com o estabelecimento de normas gerais de biossegurana que se comeou a utilizar a expresso Organismo Geneticamente Modificado - OGM. Em tese, a expresso Organismo Geneticamente Modificado causa certa confuso, porque alguns cientistas dizem que todos os organismos so geneticamente modificados. Entretanto a Lei de Biossegruana no Brasil,define claramente o que so OGMs. Quando se utiliza a transgenia, uma nova sequncia gnica introduzida, geralmente geralmente no nativa daquela espcie. Em muitos casos, a sequncia inserida formada por partes de diferentes genes de diferentes espcies ou sequncias semi-sintticas. O conjunto destas seqncias chamada de quimera. Assim, a Soja RR transgnica resistente ao Round-up, herbicida base de glifosato, contm material gentico de pelo menos quatro diferentesorganismos: promotor do vrus-do-mosaico-da-couve-flor (CaMV), peptdeo sinal da petnia, gene EPSPS da Agrobacterium CP4 e a sequncia 3 (NOS) da Agrobacterium tumefasciens. Do ponto de vista legal, no Brasil, OGM o organismo cujo material gentico (ADN/ARN) tenha sido modificado por qualquer tcnica de engenharia gentica. A Lei 8.974, de 5/01/95, definiu ainda engenharia gentica como a atividade de manipulao de molculas ADN/ARN recombinantes. Pela legislao brasileira, ento, qualquer planta que tenha seqncia(s) de DNA ou RNA engenheiradas (neste texto ADN e DNA sero utilizados como sinnimos, assim como ARN e RNA), deve ser considerada OGM, e est, portanto, submetida aos efeitos da referida lei, mesmo porque ela regulamenta os produtos obtidos pelo processo do DNA recombinante. No presente trabalho, OGM ser utilizado como sinnimo de transgnico, embora no haja concordncia absoluta a respeito desta sinonmia. Desta forma, pode-se definir plantas transgnicas (ou OGM) como plantas que tm inserido em seu genoma, uma ou mais seqncias de DNA manipulado em laboratrio por tcnicas de DNA recombinante ou engenharia gentica. Alternativamente, plantas transgnicas poderiam ser definidas como organismos que tiveram seu material gentico alterado por mtodos que no aqueles naturais, considerando-se como mtodos naturais em plantas o acasalamento sexual e a recombinao gentica. A induo mutagnese era at ento outra maneira utilizada pelo homem para alterar geneticamente uma planta. Neste caso, o gentipo do indivduo alterado tambm diretamente in vivo. Um exemplo disto a exposio de sementes a agentes qumicos, como o metil sulfonato, ou fsicos, como raios de cobalto ou X, na esperana que alguma modificao ocorra no gentipo previamente escolhido. No sentido conceitual de modificao in vivo, a transgenia equivaleria mutagnese, pois tambm provoca uma alterao gentica num gentipo previamente escolhido. Tambm h similaridade entre ambas quanto aleatoriedade no loco onde ocorrer a modificao, o que impossibilita, com o que se conhece hoje, antecipar o que vai acontecer. Contudo, existem vrias diferenas entre ambas. O processo, e em muitos casos, a natureza da alterao deste dois mtodos so diferentes. Enquanto na mutagnese as modificaes podem ser de substituio de uma base por outra, deleo ou duplicao de uma ou mais bases e rearranjos diversos, na transgenia as seqncias introduzidas so, em tese, previamente conhecidas e sero adicionadas, no todo ou em parte, ao genoma previamente escolhido. Esta diferena crucial, pois na tecnologia est embutida a possibilidade da aplicao de leis de propriedade industrial que permite o patenteamento das seqncias engenheiradas,

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bem como do processo de transgenia. Esta possibilidade baseia-se naquilo que adicionado, uma vez que conhecido, engenheirado e patenteado. O mesmo no ocorreu com a tcnica da mutagnese de plantas, embora uma cultivar desenvolvida com esta estratgia possa ser protegida por leis de proteo intelectual. Mutaes proporcionaram, alm de um prmio Nobel, concedido a Henry Muller, um defensor do determinismo gentico, avanos no conhecimento gentico das espcies e algumas variedades para cultivo. A mutagnese stio-dirigida, embora permitindo alterar uma seqncia, feita in vitro e no in vivo, como a transgenia. Alm disso, a mutagnese stio-dirigida limitada em termos de nmero de bases alteradas, comparativamente transgenia. Recentemente, uma outra tcnica desenvolvida para terapia gentica na espcie humana, a quimeroplastia, foi adaptada para plantas (Beetham et al., 1999; Zhu et al., 1999). Ela possibilita a substituio ou a adio de uma base, em uma seqncia conhecida. Neste caso a diferena em relao transgenia clssica a utilizao de oligonucleotdeos quimricos. Seu alcance, contudo, menor, restringindo-se a alterar ou adicionar uma ou poucas bases. Com o objetivo de confundir a opinio pblica, freqentemente dito por cientistas que o homem vem produzindo transgnicos h milnios com a seleo artificial de plantas. Como possvel perceber pela definio de OGM, ou transgnico, os agricultores que domesticaram as plantas cultivadas ou os melhoristas no conseguiram alterar um gentipo in vivo. Selecionavam sim, as novas combinaes (prognies), oriundas da recombinao gentica da gerao anterior. preciso no esquecer que o processo evolutivo composto de foras que criam ou amplificam a variabilidade gentica e outras que afetam o destino desta variao, como bem destacou Charles Darwin, em sua obra A origem das espcies (1859). O efeito conjunto das mutaes, aqui includas todas as modificaes de DNA em condies naturais, e das recombinaes entre mutantes, promove o surgimento de uma ampla gama de associaes allicas (Allard, 1960; Fehr, 1987), cujo destino ento dependente das diversas foras evolutivas como seleo, migrao e deriva. Os primeiros agricultores selecionaram estas novas associaes allicas que melhor se adaptavam a sua maneira de cultivar em cada situao. Assim, no cabe aqui falar de transgenia, mas sim de processo evolutivo.

2.2-GENES MARCADORES E GENES REPRTERES PARA SELEO

Os genes marcadores so utilizados para possibilitar a discriminao entre clulas transformadas e no transformadas, e conseqentemente a seleo das primeiras. Tais genes so introduzidos para facilitar o trabalho de identificao das mesmas, pois so uma minoria em relao ao total de clulas submetidas a transformao. Os genes marcadores so geralmente genes de resistncia a antibiticos. Assim, no momento da regenerao das plantas a partir de uma clula, a adio de antibitico ao meio, permitir apenas o crescimento daquelas clulas transformadas que expresses a referida protena. Os genes marcadores (e suas respectivas protenas) mais utilizados so: gene neo, isolado do transposon Tn5 de Escherichia coli, codifica para neomicina fosfotransferase (NPTII), que confere resistncia a kanamicina, e o gene hpt, tambm isolado de Escherichia coli, codifica para higromicina fosfotransferase (HPT). Genes de resistncia a herbicidas tambm esto sendo utilizados; Dentre eles destacam-se: gene bar, isolado de Streptomyces hygroscopicus, codifica para fosfinotricina acetiltransferase (PAT) que induz a resistncia a herbicidas a base de fosfinotricina; gene aroA, isolado de Salmonella typhimurium, que induz a resistncia a herbicidas a base de glifosato e o gene csr1, que induz a resistncia a herbicidas a base de imidazolidonas e sulfonilureas. Genes reprteres codificam para protenas que so facilmente detectveis. Dentre os genes reportes, os mais utilizados so: gene uidA, extrado de Escherichia coli, codifica para a glucuronidase (GUS), detectada por mtodos histoqumicos; gene gfp, extrado da medusa 44

Aequorea victoria, codifica par a protena fluorescente verde (GFP); gene luc, isolado do vagalume Photinus pyralis, codifica para a luciferase.

3-DIFERENAS ENTRE OS MTODOS DE MELHORAMENTO CONVENCIONAIS E BIOTECNOLGICOS

Os agricultores, assim como os melhoristas, utilizam os princpios da diversidade gentica quando fazem cruzamentos, e da segregao quando selecionam plantas ou animais considerados superiores. O melhoramento gentico pode ser considerado uma forma de biotecnologia, empregada h milnios para diversos propsitos, incluindo a introduo novas variedades de plantas no ambiente. De fato, o melhoramento envolve a manipulao gentica, mas no envolve as tcnicas da engenharia gentica conforme ficaram conhecidas desde 1973. Por meio dos mtodos de melhoramento, agora tambm chamados de convencionais, tradicionais ou clssicos, novas combinaes genticas so geradas por meio de cruzamentos sexuais entre plantas que apresentam as caractersticas consideradas como desejadas. Cruzamentos so feitos entre plantas da mesma espcie e, ocasionalmente, quando a variao gentica desejada no existe dentro da espcie, alelos ou genes so transferidos ou substitudos de outras espcies do mesmo gnero. Juntamente com os genes desejados, outros segmentos de DNA do gentipo doador, podem tambm ser transferidos ou substitudos e podem expressar caractersticas indesejveis. Desta forma, a amplitude do estoque gentico (gene-pool) para o melhoramento determinada pela compatibilidade sexual de uma espcie e espcies aparentadas. Tcnicas radicais como resgate de embrio e o cultivo de embries tm contribudo para aumentar o gene-pool, mas de forma muito limitada. Quando se utilizam mtodos de melhoramento, os cruzamentos sexuais possibilitam a substituio de alelos via recombinao homloga e no a adio de uma quimera como na transgenia. Das metodologias utilizadas pelo melhoramento de plantas, a introgresso de genes, feita por retrocruzamentos sucessivos do F1 para o gentipo recorrente, a que mais se assemelha transgenia, em termos de obteno de uma nova associao allica. Contudo, existem muitas diferenas entre ambas, que esto explicitadas na Tabela 4. Na transgenia, seqncias de DNA (genes) podem ser removidas de um organismo, modificadas ou no, ligadas a outras seqncias, incluindo as regulatrias, e inseridas em outros organismos. A fonte destes genes pode ser qualquer organismo vivo (microorganismo, planta, animal) ou vrus. Uma das principais implicaes da transgenia o rompimento da barreira sexual. Desta forma, a transformao gentica possibilita uma alternativa de introduo de genes em plantas. A rigor, isto implica que, teoricamente, qualquer gene, natural ou sinttico, pode ser introduzido numa espcie vegetal. Assim, o pool gnico de uma espcie se torna extraordinariamente grande. As oportunidades para o melhoramento aumentam drasticamente, pois alm dos recombinantes produzidos naturalmente pela meiose, possvel obter recombinantes no convencionais. Desta forma, problemas de difcil soluo ou mesmo a expresso de caractersticas em outros organismos poderiam ser adequadamente resolvidos. Tabela 4. Comparao entre o mtodo do retrocruzamento e a transgenia. Retrocruzamento Transgenia Objetivo Alterar ou introduzir uma Alterar ou introduzir uma caracterstica caracterstica Natureza Substituio de alelos Introduo de seqncias novas (quimera) 45

Tempo Tecnologia Pool gnico Custo Resultados Efeitos adversos

3 a 6 anos Simples Limitado Baixo Previsveis Limitados Raros Ex: alelos indesejveis

Distribuio dos benefcios

Instituies pblicas e privadas, pequenos agricultores, consumidores.

Varivel Sofisticada Ilimitado Elevado Imprevisveis Ilimitados Freqentes Ex.: genes marcadores, promotores e outras seqncias filogeneticamente bem distintas; efeitos pleiotrpicos Grandes empresas, grandes agricultores, melhoristas

Neste cenrio, e considerando-se o ponto de vista cientfico, duas limitaes restringem o uso de genes via transgenia: a criatividade e o julgamento inadequado do valor de um gene, desde que h disponibilidade de tecnologias de isolamento e transformao de uma dada espcie. Esta ltima limitao refere-se a situaes em que o pesquisador no consegue perceber ou no tem informaes sobre a utilidade de um gene num programa de melhoramento de uma espcie. Alm dessas limitaes, j esto sendo adicionadas outras, como: a real necessidade de um determinado OGM (comparao com outras alternativas) e a magnitude das implicaes que ele possa apresentar se cultivado e ou consumido em larga escala. A transgenia introduz novos genes exticos e cria recombinaes no naturais cujas localizaes no genoma do organismo so imprevisveis, ou seja, a tecnologia ainda no permite o controle do local da insero. Isto pode resultar em efeitos imprevisveis no metabolismo, fisiologia e bioqumica do organismo receptor. O relatrio do Governo da Noruega, divulgado em 1999, denominado Too early maybe too late: ecological risks associated with the use of naked DNA as a biological tool for research, production and therapy, concluiu que qualquer OGM deve sofrer avaliao de impacto ambiental antes de ser liberado. Este relatrio refuta a idia de que a transgenia em plantas similar ao melhoramento gentico convencional (Traavik, 1999). O desenvolvimento de OGMs pode ser denominado de Tecnologia? Tradicionalmente uma tecnologia est associada com (i) previsibilidade, (ii) controle e (iii) reproducibilidade. Contudo, o atual estgio das tecnologias utilizadas na obteno de OGMs podem ser caracterizadas como (i) sem previsibilidade; (ii) sem controle dos stios alvos; (iii) sem controle do destino do transgene ou partes dele; (iv) sem controle nas mudanas de expresso gnica; (v) sem controle dos transgenes no ecossistema e (vi) de difcil reproducibilidade. Ou seja, ainda no existe tecnologia disponvel para a insero da construo quimrica num loco especfico do genoma da espcie recipiente. Um exemplo disto o fato de que duas sequncias de DNA (72 e 250 pb) derivadas da transformao original foram inesperadamente encontradas na Soja RR (The Scientist 14[15]:20, Jul. 24, 2000) Elas esto separadas do transgene que condiciona a resistncia ao herbicida Roundup. "Isto demonstra que a modificao gentica inerentemente imprevisvel. que seqncias. Tampouco os resultados das transformaes so previsveis, sendo que algumas do o resultado esperado, outras no. Tambm no possvel controlar a expresso gnica do gene inserido. Um exemplo disco que diferentes variedades de milho com o mesmo gene de Bt produzem diferentes quantidades de toxina nos diferentes rgos estudados e comparados. Outro aspecto importante que no se consegue controlar o transgene inserido, uma vez que ele pode se disseminar para outras espcies e causar poluio gentica, e como tal enormes e

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irreparveis danos. Exemplo disto foi a contaminao de vrias plantaes de milho nos Estados Unidos provocada pelo cultivo de uma variedade transgnica, StarLink, que causou enormes prejuzos aos agricultores, aos consumidores e empresa.

4-OPORTUNIDADES
PLANTAS Como aproximadamente 90% das calorias provem de plantas, no reino vegetal que existe um grande potencial de oportunidades para as diversas biotecnologias, incluindo-se a transgenia, especialmente na produo de alimentos e energia. Contudo, na rea da sade so esperados investimentos financeiros elevados e o desenvolvimento de muitos produtos, muitos deles, de aplicao praticamente pessoal. O aumento da resistncia de plantas a pragas e molstias pela ao de produtos naturais com auxlio da engenharia gentica a oportunidade importante. A maioria dos genes inseridos em plantas inclui aqueles que conferem resistncia a insetos, fungos, vrus e herbicidas. Outros genes controlando o teor de protenas e leos em plantas esto sendo utilizados. A partir de 1994, foram identificados, clonados e sequenciados vrios genes de resistncia a doenas. O conhecimento pleno destes genes possibilitar um melhor entendimento de como ocorrem as reaes de resistncia ou susceptibilidade de plantas fungos, bactrias e vrus, bem como desenhar estratgias apropriadas de melhoramento e seleo de plantas resistentes. Oportunidades agrcolas incluem ainda genes que conferem tolerncia a estresses climticos (altas temperaturas e seca) e de solo (baixos teores de nutrientes e altos teores de elementos txicos). Embora, no se saiba ao certo o mecanismo de tolerncia, novas abordagens para a manipulao gentica visando a tolerncia aos estresses esto sendo desenvolvidas. Caractersticas relacionadas a reproduo das plantas tambm esto sendo alvo de modificao. Assim, genes engenheirados de macho esterilidade para obteno de hbridos ou de genes responsveis pela apomixia esto sendo introduzidos em plantas com o objetivo de controlar a reproduo das mesmas. Uma segunda rea de grande atividade da engenharia gentica relacionada com o aumento do valor de certas espcies agrcolas pode ser alcanado atravs de modificaes genticas que alteram a quantidade ou composio de compostos de reservas no proticos, os quais podem substituir inclusive certos produtos derivados do petrleo. O valor de muitas plantas de importncia econmica determinado pela presena de compostos cuja concentrao no ultrapassa 1% do peso seco, como o caso dos compostos usados como medicinais, pesticidas, fragrncias, corantes e aromatizantes. Na medida em que os genes envolvidos na expresso destes compostos se tornam disponveis, novas oportunidades surgem para aumentar ou modificar a produo destes compostos. Alm disso, estima-se que mais de cem mil metablitos secundrios so produzidos pelas plantas; entretanto, geralmente em baixas quantidades. A manipulao de genes de enzimas que catalisam os principais passos da rota de produo ou dos fatores de transcrio, podem aumentar a produo destes metablitos e tornar exequvel o cultivo de plantas transgnicas com tal finalidade. Agora existe a possibilidade de introduzir genes que modificam enzimas para produzir amidos modificados. Vrios genes envolvidos na biosntese de amilose e amilopectina foram clonados. Genes antisenso que reduzem a produo de amilose em batata foram clonados, sugerindo que a produo deste composto manipulvel. As plantas tambm podero se tornar fbricas de produtos ou substncias, j que, na maioria dos pases, a produo de uma substncia em cultura de clulas ou em determinados microrganimos tem inmeras restries. Exemplo disto so os testes em andamento para a 47

produo de produtos como o hormnio do crescimento humano em milho, vacinas, anticoagulantes entre outros. Mas neste caso, o benefcio no chega ao agricultor. Embora o uso de biofrmacos (frmacos produzidos biologicamente) um fenmeno recente, diversas protenas teraputicas tm recebido ampla aceitao e esto sendo rotineiramente utilizadas. Exemplos incluem eritropoietina, calcitonina e -1 antitripsina. Mais recentemente, alguns destes frmacos esto sendo produzidos por plantas transformadas, como o caso de as hirudina (Parmenter et al., 1996). Hirudina um poderoso anticoagulante do sangue que produzido pela sanguessuga Hirudo medicinalis, que agora pode ser extrado de sementes destas plantas transgnicas. A produo do antigeno de superfcie do vrus da Hepatite B (HBsAg) foi obtida em plantas e vacinas orais esto sendo utilizadas em testes clnicos com humanos desde 1997 contra uma linhagem de E. coli enterotoxigenica. Vacinas orais so apropriadas para proteo contra patgenos que infectam as superfcies mucosas, particularmente contra bactrias e vrus causadores de diarrias (Mason et al., 1992). Vacinas comestveis produzidas por plantas, advogam alguns cientistas, um sistema bastante apelativo, pois apresenta inmeras vantagens sobre as formas convencionais: armazenamento em condies menos sofisticadas, simplicidade de aplicao, custos reduzidos, fcil produo e diminuio dos riscos de transmisso de outras doenas com equipamentos e materiais contaminados. Contudo, uma questo ainda pendente a segurana e a eficincia destas vacinas produzidas por plantas. Outra preocupao relacionase com a quantidade da fruta ou alimento a ser ingerido, bem como o controle da produo dos mesmos. Embora o assunto complexo e polmico, vrios laboratrios em muitos pases esto desenvolvendo este tipo de vacinas utilizando estratgias diferentes. Uma outra aplicao relacionada com a manipulao dos metablitos secundrios a produo de polmeros biodegradveis. Tais polmeros so na realidade uma mistura de amido e polietileno. Quando o amido o maior componente, temos os plsticos complexos, j em comercializao como Novon e Fertec. (Novon - 80% amido mais etileno-acetato de vinil ou co-polmero etileno-cido acrlico; Fertec - 50% amido e polmeros). Os filmes so resultantes de misturas com baixos teores de amido. Do ponto de vista alimentar, novas promessas esto sendo anunciadas. So as chamadas segunda e terceira ondas, cujas aplicaes da engenharia gentica esto relacionadas com o aumento da qualidade dos produtos alimentcios. Como exemplo menciona-se que esto sendo desenvolvidos OGMs com alto teor de aminocidos, protenas ou alta qualidade do leo e plantas que produzem altas quantidades de vitaminas, como experimentalmente j obtido em cenoura e arroz. Tais alimentos so chamados de nutracuticos. ANIMAIS A primeira leva de animais transgnicos foi destinada a produzir substncias para uso na sade humana ou para fornecer rgos para transplante, tambm para a espcie humana. Dentre as protenas humanas produzidas em animais transgnicos destaca-se o fator de coagulao, necessrio no tratamento da hemofilia, a eritropoietina, que utilizada para estimular a medula ssea quando deprimida por outras drogas e a alfa-1 antitripsina, utilizada no tratamento de enfisema pulmonar. Peixes transgnicos j esto prestes a chegar mesa do consumidor americano. A liberao de salmo transgnico depende apenas da aprovao da FDA, a agncia que regula a entrada de alimentos e medicamentos no mercado americano. Quando isto acontecer, ser a primeira vez que um animal transgnico estar disponvel para consumo humano. A diferena entre os salmes naturais e os transgnicos que nestes foi inserido um gene que acelera seu crescimento, isolado de outro peixe, a lampria. Os genes introduzidos estimulam a produo contnua de hormnios de crescimento.

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Alm disso, os animais transformados com genes humanos destinados produo de rgos para xenotransplantes, como o caso de sunos, esto sendo alvo de inmeras discusses, no s do ponto de vista tico, mas tambm biolgico. Em relao a sade humana, os riscos dos xenotransplantes esto basicamente centralizados na disseminao de vrus ou outras entidades (micoplasmas e partculas infecciosas) que tambm podem causar doenas ou injrias sade humana. Do ponto de vista tico e religioso, pertinente uma discusso mais ampla com os diversos segmentos da sociedade, uma vez que este assunto extremamente polmico. Mais recentemente, galinhas transgnicas foram desenvolvidas para render mais carne como o caso da Terminator Chicken da empresa AviGenics. A mesma empresa engenheirou galinhas com genes humanos para produzir medicamentos. Em ambas, a empresa inseriu tambm uma seqncia de DNA que considera segredo e que possibilita ser detectada, visando a rastreabilidade para fins comerciais, ou seja, impedir que algum use as galinhas sem pagar pela tecnologia. Animais de outras espcies tambm j foram modificados via transgenia como vacas, ovelhas e ratos. MICRORGANISMOS Com relao aos microorganismos (especialmente bactrias e fungos) existe grande potencial para obteno de produtos industrializados, como por exemplo para a medicina humana, pois podem ser produzidos aminocidos e vitaminas nestes microrganismos. Bactrias geneticamente transformadas podem ser usadas para produzir muitas proteinas importantes, hormnios de crescimento humano (hGH), interferons e vacinas (como contra a Hepatite B) para imunizao contra viroses. O uso dos microorganismos tambm se estende para a fermentao Lctea e alcolica e a degradao de poluentes. O primeiro produto comercial decorrente do uso da tecnologia do DNA Recombinante foi a insulina, comercializada a partir de 1982 nos Estados Unidos, justamente a partir de uma microorganismo transgnico. O gene humano responsvel pela insulina foi isolado na espcie humana e introduzido na bactria Escherichia coli, que passou a produzir e excretar este produto. Aps a purificao, a insulina produzida em laboratrio passou a substituir a insulina extrada de pncreas de animais, uma vez que proporciona menos riscos aos diabticos, que dependem deste medicamento. No Brasil, a insulina tambm j vem sendo produzida com microrganismos transgnicos. Cabe destacar que o produto no transgnico, uma vez que a expresso do prprio gene humano, mas somente o organismo que o produz. Outro aspecto importante, que estes produtos destinados sade humana oriundos de microrganismos transgnicos passam pelos mesmos testes que passam os medicamentos convencionais. Sendo assim, a expectativa de que estes produtos apresentam mais riscos relacionados a contaminaes do que propriamente decorrentes do uso per se da tecnologia do DNA Recombinante. TERAPIA GENTICA Na espcie humana, a terapia gnica se constitui numa das reas de maior pesquisa. Trata-se de uma estratgia que visa disseminar no corpo humano ou num rgo especfico, um gene normal para que o mesmo possa expressar seu produto adequadamente, naqueles casos onde um ser humano portador de defeito gentico. Os elementos que auxiliam o transporte e expresso destes genes so previamente modificados in vitro de forma a garantir sua inocuidade como elementos transportadores de sequncias gnicas. Mesmo dos retrovrus, modificados in vitro para carrear genes codificadores de protenas de amplo interesse mdico, como a expresso de adenosina deaminase - ADA, cuja ausncia impede a maturao dos linfcitos e, conseqentemente, leva ausncia de qualquer resposta imunolgica, espera-se no causarem doenas nos pacientes que esto recebendo este tipo de vrus transgnico como carreador de um gene de interesse. 49

Vrias experincias resultaram em mortes de pacientes ou de aparecimento de doenas como a leucemia, aps o tratamento com terapia gentica.

5-EVOLUO DO CULTIVO DAS PLANTAS TRANSGNICAS

Nos Estados Unidos os testes de campo iniciaram em 1987 e o primeiro cultivo comercial s ocorreu em 1994 com a liberao do tomate FLAVR SAVR, que apresenta a caracterstica de retardar a maturao. A insero do gene da poligalacturonase (do prprio tomate) no sentido anti-senso retarda a o acumulo desta enzima em quantidades suficientes para a degradao das paredes celulares, causando um atraso na maturao. No h uma estatstica oficial da rea cultivada com transgnicos no mundo. Assim, utiliza-se dados de uma organizao mantidas pelas empresas interessadas. A rea plantada com plantas transgnicas saltou de pouco mais de 1,7 milhes de hectares em 1996 para 43 milhes de hectares em 2000 (Tabela 5). Embora o nmero de pases que plantaram transgnicos no ano de 2000 era 12, os trs pases responsveis por 98% da produo mundial de gros transgnicos so os Estados Unidos, a Argentina e o Canad (Tabela 5). Portanto, o cultivo destas variedades ainda um fenmeno restrito. Extra oficialmente sabe-se que na China existem dezenas de cultivares transgnicas em cultivo, carregando diferentes caractersticas. Contudo, as cifras oficiais so desconhecidas. As estimativas para o ano de 1999 eram de que soja, milho, algodo e canola eram responsveis por 58%, 12%, 12% e 7% to total da rea plantada com transgnicos no mundo todo. Comparativamente a rea plantada com no transgnicos, os transgnicos de soja, milho, algodo e canola representavam 34%, 7%, 16% e 11%, respectivamente. O total mundial em termos de rea plantada neste ano de 2000 com estas 4 espcies atingiu 273 milhes de hectares (72 de soja, 140 de milho, 34 de algodo e 25 de canola). Desta forma, a rea total com transgnicos (43 milhes de ha) equivale a 16% da rea total plantada com estas espcies. Com exceo da soja transgnica, que j alcanou um tero da rea total, as demais variedades transgnicas de outras espcies ainda so plantadas em baixa proporo. Do total da rea plantada em 1999, estimou-se que as variedades das empresas Monsanto, Aventis, Syngenta, Basf e DuPont contriburam com 80%, 7%, 5%, 5%, e 3%, respectivamente. Tabela 5. Principais pases produtores de plantas transgnicas.
rea (milhes de ha)/Ano Pas USA Argentina Canad Austrlia Mxico Espanha Frana frica do Sul Portugal Ucrnia Romnia China Total
Fonte: ISAAA

1966 1,7

1997 8,1 1,4 1,3 0,1 < 0,1 ? 11,0

1998 20,5 4,3 2,8 0,1 < 0,1 < 0,1 < 0,1 < 0,1 ? 27,8

1999 28,7 (72%) 6,7 (17%) 4,0 (10%) 0,1 < 0,1 < 0,1 < 0,1 0,1 < 0,1 < 0,1 < 0,1 0,3 39,9

2000 30,0 (70%) 9,0 (21%) 3,0 (7%) 0,1

0,1

? 1,7

43,0

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Estima-se que a safra de 2007 alcanou 8% da rea cultivada no planeta. Mas, 176 pases do mundo (92%) no cultivam transgnicos. Apenas quatro paises (Estados Unidos, Canad, Argentina e Brasil) so responsveis por aproximadamente 90% da produo mundial de OGMs. E apenas quatro espcies (soja, milho, algodo e canola) so aproximadamente 99% das colheitas transgnicas. Dentre as caractersticas introduzidas nestas variedades mais cultivadas destacam-se resistncia a herbicidas, resistncia a insetos ou ambas (Tabela 6). Projetos de alterao na composio nutricional esto em andamento. Um exemplo disto o arroz dourado, assim chamado porque foi introduzido numa variedade de arroz um gene que dever produzir vitamina A. A produo em grandes quantidades da pr-vitamina A no arroz ainda no est garantida, razo pela qual, uma pessoa deveria ingerir quantidades elevadas de arroz (estimativas riam de de 1,9 a 4,3 kg/dia) para satisfazer as necessidades dirias deste componente alimentar.

Tabela 6: Principais caractersticas introduzidas 1998 Caracterstica Resistncia herbicidas Resistncia insetos Resistncia herbicidas/insetos Qualidade Total (ha)
Fonte: ISAAA

2000 Percentagem da rea 73 22 5 <1 43,0

Milhes de h (%) 17,3 (63) 10,0 (36) <0,3 (<1) <0,3 (<1) 27,5

Este quadro no se alterou muito nos ltimos anos, pois os dois principais genes so os de resistncia a herbicidas ou de produo de toxinas mortais a insetos. Estas cifras sugerem que a tecnologia no se alastrou como se esperava, nem tampouco alcanou a maioria dos paises ou das espcies. Na Europa existe uma grande controvrsia a respeito de plantas transgnicas que tambm apresentam genes de resistncia a antibiticos esto sendo proibidas para cultivo. A rigor, desde 2004, nenhuma nova variedade transgnica pode aprovada para plantio ou consumo se contm genes de resistncia a antibiticos. E o Brasil ? No Brasil existe a Soja Roundup Ready (Soja RR), da Monsanto, liberada pela CTNBio (setembro de 1998), registrada no o Ministrio da Agricultura e Abastecimento (junho de 1999), mas com cultivo e consumo suspenso por deciso judicial at que sejam feitos os estudos de impacto ambiental e relatrio de impactos no meio ambiente (EIARIMA) e cumpridas outras exigncias como elaborao de normas de fiscalizao e rotulagem. Posteriormente, por meio de Medidas Provisrias o Governo decidiu e o Congresso aprovou a colheita da safra ilegal de 2002/2003 e o plantio e colheita da safra 2003/2004. Por fim, a nova Lei de Biossegurana ( Lei n 11.105, de 24 de maro de 2005) incluiu artigos que aprovaram o cultivo e o consumo da Soja RR. Mesmo assim, o processo judicial no est concludo.

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 possvel que na safra 2008/2009 o cultivo com soja RR alcance os 50%. Contudo no h cifras oficiais a este respeito. Os testes com plantas transgnicas no Brasil ultrapassavam a casa dos 900 (em meados de 2001), sendo que aproximadamente a metade como lavouras demonstrativas. Os demais so relacionados a testes de performance agronmica, valor de cultivo e uso, de transferncia de transgenes de uma variedade para outra, mas poucos para avaliar os impactos ambientais. Nos anos de 1997 a 2000 foram liberados 50, 360, 344 e 99 experimentos, respectivamente. Com exceo de 1998, nos demais anos os experimentos estavam concentrados no Sudeste e Centro-oeste. Um agravante que se apresentou neste processo que at 1999 grandes reas experimentais estavam em mos de agricultores inexperientes no trato com plantas transgnicas. E estas lavouras no podem, a rigor, ser consideradas planejadas. Como s existem normas com respeito s experimentaes planejadas, estas delegadas iniciativa privada ficam margem de qualquer fiscalizao. De 1997 a fevereiro de 2001 foram realizados experimentos em 12 estados do pas. Os experimentos esto concentrados da seguinte forma: Gois, 386,98 ha, Minas Gerais, 153,13 ha; So Paulo, 138,85 ha; Paran, 86,63 ha; Rio Grande do Sul, 37,17ha; Mato Grosso, 28,18 ha; Distrito Federal, 6,45 ha; Mato Grosso do Sul, 1,2 ha; Bahia, 0,681 ha; Santa Catarina, 0,604 ha; Piau, 0,008; Roraima, 0,005 ha. De 1997 a 2001, a rea de lavoura transgnica atingiu 882,2 ha. Atualmente centenas de testes so feitos em diferentes estados da federao com diferentes OGMs. Variedades transgnicas de poucas espcies tm sido utilizadas na experimentao no Brasil. Elas se restringem s lavouras de algodo, cana-de-acar, fumo, batata, arroz, eucalipto, mamo, milho e soja. As empresas notadamente esto apostando em trs espcies: milho, soja e algodo, mas de fato concentram-se em duas: milho e soja. Estas

lavouras tiveram suas reas experimentais aumentadas desde 1997

De um total de 904 experimentos, o Grupo Monsanto detinha 678 e as outras empresas 226. Isso representava na poca 75% dos experimentos, contra 25% das outras organizaes. A maioria dos testes estavam concentrados em torno de plantas resistentes herbicidas e no desenvolvimento de plantas bioinseticidas. Outra deciso judicial proibiu o plantio pelo perodo de 3 anos, mesmo que experimental, de plantas biocidas, ou seja, aquelas que produzem substncias agrotxicas ou afim agrotxicas, conforme explicitado na sentena Judicial, cuja parte final :
Ante o exposto DEFIRO A LIMINAR com fundamento no art. 12, da Lei n. 7.347/85 para determinar que se suspendam todas as autorizaes para cultivo de quaisquer sementes geneticamente modificadas com caractersticas de agrotxicos ou afins em que os interessados no detenham o Registro Especial Temporrio RET, bem ainda, para que no sejam expedidas novas autorizaes sem a observncia desse requisito. Dever a CTNBio abster-se de emitir qualquer concluso sobre a biossegurana de cultivares que receberam o gene de resistncia a insetos transportado da bactria BACILLUS THURINGIENSIS, sob pena de multa diria de R$ 10.000,00 (dez mil reais). Oficie-se ao IBAMA para que proceda fiscalizao dos locais onde efetuada a manipulao desses organismos, atendendo-se as determinaes desta deciso. (CHARLES RENAUD FRAZO DE MORAES, Juiz Federal Substituto da 14 Vara-DF, Braslia, 27 de abril de 2001). Atualmente, a nica restrio legal que existe de transgnicos que contenham tecnologias genticas de restrio de uso, tambm denominadas de GURTs. Alguns tipos de GURTs so conhecidos como Terminator pelo fato que as plantas produzem os gros com o

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embrio defeituoso. Isto impede a sua germinao e, assim, o agricultor obrigado a comprar sementes, que so patenteadas, todos os anos. Alm da soja RR, a CTNBio aprovou em 2005 o Algodo Bollgard (evento 531), que contm o gene Cry1Ab, de Bacillus thuringiensis. Neste ano de 2008, o CNBS decidiu no dar provimento aos recursos do IBAMA e da ANVISA contra a deciso da CTNBio de liberar os milhos transgnicos: Evento T25 ou milho LL 25, da Bayer, contendo uma verso sinttica do gene pat isolado de Streptomyces viridochromogenes, raa T 494, que codifica para a sntese da enzima fosfinotricina N acetiltransferase (PAT), enzima esta que catalisa a converso de L-fosfinotricina, inativando o ingrediente ativo Glufosinato de Amnio e, deste modo, conferindo planta a resistncia ao referido herbicida. Evento MON 810 ou milho Yeldgard da Monsanto, que contm o gene cry1Ab, proveniente de Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, que codifica a protena Cry1Ab com efeito txico sobre os insetos da ordem Lepidoptera lagarta-do-cartucho, lagartada-espiga e lagarta-do-colmo; Evento Bt 11 da Syngenta, contendo os genes (i) cryIA(b) que expressa uma forma truncada da toxina; (ii) o gene pat que codifica a enzima fosfinotricina-N-acetil transferase que confere resistncia ao herbicida glufosinato de amnia (L-Fosfinotricina, PPT - Phosphinothricin), obtido da bactria de solo Streptomyces viridochromogenes.

Adicionalmente a CTNBio continua liberando outros OGMs. 6-LIMITAES Uma das principais limitaes da modificao de plantas a dificuldade de identificar e isolar genes teis. A maioria dos genes inseridos em plantas proveniente de bactrias e vrus porque o reduzido genoma desses organismos facilita a identificao e clonagem de genes. Intensivos estudos em vrios laboratrios esto sendo feitos em Arabidopsis thaliana, que hoje se constitui no organismo experimental para isolamento e clonagem de genes de plantas. Aproximadamente 50% da seqncia genmica desta planta j conhecida e em breve ser concludo o sequenciamento da espcie. Estimativas indicam a existncia de 21 a 25 mil genes. Da parte j sequenciada, no se conhece a funo de mais da metade dos genes. Desta forma, o conhecimento da regulao gnica do referido gene fundamental neste caso. O desenvolvimento de densos mapas de ligao gentica e o sequenciamento de parte do genoma de outras plantas cultivadas facilitar a identificao e isolamento de importantes genes. Outro fator limitante a necessidade de obteno de uma planta adulta a partir de uma clula transformada. A regenerao no ocorre em todas as espcies. Nestes casos, a transformao feita em tecidos cotiledonares. Embora existem muitos mtodos de transformao de plantas, algumas espcies so bastante recalcitrantes. Em geral, pode-se transformar a maioria das dicotiledneas com Agrobacterium tumefasciens. O mesmo no se pode dizer das monocotiledneas. Para este grupo de plantas utiliza-se um dos mtodos diretos. Contudo, para cada espcie ou tecido a ser transformado, h a necessidade de testes sobre o mtodo e o protocolo de regenerao das clulas ou tecidos transformados. Embora h preciso no isolamento do gene, no h possibilidade de controlar a integrao do inserto no genoma. O local da insero da construo quimrica pode ser qualquer ponto do cromossomo. Como consequncia, poder ocorrer a interrupo da expresso gnica de um gene da planta se o inserto se integrar no referido loco. Ou ainda, a insero do gene transferido poder ocorrer numa regio rica em heterocromatina, onde a 53

expresso gnicapoder ser reduzida ou insignificante. Alm disso, uma vez inserido, a nova sequncia poder ser alvo de metilao e a consequente inativao em termos de transcrio. Outras vezes, o gene pode ser silenciado ou ocorrer a interferncia de outro gene ou insero (Brasileiro e Dusi, 1999). Como o nmero de cpias inseridas varivel, muitas plantas so descartadas por possurem um nmero elevado de cpias. Nenhum mtodo controlvel a ponto de possibilitar apenas uma insero. Existem vrios casos, onde o gene isolado de uma espcie no se expressa adequadamente em outra, em geral devido a diferena na preferncia de uso de codons pelas diferentes espcies. Neste caso feita uma modificao feita em alguns codons do gene que foi isolado de uma planta nativa da frica (Thaumatococus danielli) sem alterao do produto final. Tem-se ento, os genes semi-sintticos. Este gene que codifica a protena denominada de 'taumatina', cuja intensidade adocicante cerca de 3000 vezes superior a sacarose (peso/peso), aps modificado, foi introduzido em leveduras para que a protena seja produzida em larga escala. Na planta, a referida protena s produzida nas flores e em pequena quantidade. O uso de genes semi-sintticos cada vez mais freqente. Um outro exemplo o uso de um gene do Bt (-endotoxina) que foi sintetizado in vitro a partir do molde natural e que proporciona resistncia a lagarta Heliotis em milho. Testes com plantas transgnicas (com estes genes, parcialmente sintetizados in vitro) j foram concludos e variedades comerciais j esto sendo cultivadas em vrios pases (inclusive na Amrica do Sul).

7-BIOSSEGURANA - REGULAMENTAO
Biossegurana, na viso da FAO, significa o uso sadio e sustentvel em termos de meio ambiente de produtos biotecnolgicos e aplicaes para a sade humana, biodiversidade e sustentabilidade ambiental, como suporte ao aumento da segurana alimentar global. Desta forma, normas adequadas de biossegurana, anlise de riscos de produtos biotecnolgicos, mecanismos e instrumentos de monitoramento e rastreabilidade so necessrios para assegurar que no haver danos sade humana e efeitos danosos ao meio ambiente. Normas de biossegurana j tm sido utilizadas desde 1975 para experimentos confinados. No incio, estas normas foram feitas pelos prprios cientistas e seguidas voluntariamente. Posteriormente, com o a comercializao de produtos e processos, os paises comearam a fazer suas leis ou normas relacionadas a liberao comercial de produtos transgnicos. Em outubro de 1991 a 'European Community' emitiu um documento, o qual inclui os procedimentos para o manuseio dos testes e liberao de organismos transgnicos. Cada Estado membro foi obrigado a estabelecer sua regulamentao (ou legislao) em harmonia com as diretrizes emitidas pela EEC. Em 1999, a Unio Europia decidiu rever as diretrizes de liberao de transgnicos. Contudo, vrios pases j decretaram ou esto em fase de adotar uma moratria comercial, at que novos estudos sobre biossegurana dos produtos transgnicos indiquem riscos aceitveis para a sade humana e ao meio ambiente. Como resultado disto, no houve nenhuma nova liberao para plantio comercial desde junho de 1999. Contudo, as presses das grandes empresas comeam a surtir efeitos e j h indcios de que o processo de liberao de novas variedades transgnicas seja retomado, embora, a contrariedade dos Ministros de Meio Ambiente. Em 14/02/2001 as novas diretrizes sobre a liberao de OGMs no ambiente (Reviso da diretiva 90/220/EEC) foram aprovadas pelo European Parliament. Os principais aspectos so mencionados a seguir:

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 Genes marcadores eliminao dos genes de resistncia a antibiticos: at final de 2004 para fins comerciais; at 2008 para fins de pesquisa; Responsabilidade ambiental Legislao sobre responsabilidade ambiental ainda em 2001, cobrindo danos resultantes de OGMs; Efeitos interativos de longo prazo entre o ambiente e os OGMs devem ser levados em conta na anlise de risco antes da liberao; Exceo para aos frmacos; Experimentos devem ser registrados e detalhes dos mesmos tornados pblicos; Aprovao por tempo limitado Primeira aprovao por 10 anos no mximo; Rotulagem e rastreabilidade Regras gerais para OGMs; Comisso vai propor regras sobre legislao da rastreabilidade e rotulagem de OGMs e derivados. A nova Diretiva inclui ainda: monitoramento obrigatrio aps o OGM ir para o comrcio; consulta obrigatria a Comits Cientficos relevantes; consulta pblica obrigatria em relao s liberaes experimentais e comerciais; aplicao do princpio da precauo na implementao da Diretiva; oportunidade para consultar Comits de tica sobre assuntos de natureza geral; instituio de um novo procedimento inter-institutional de acordo com a deciso do 1999/468/EC. O Brasil j tinha uma legislao de biossegurana desde 1995. A lei que trata do assunto, Lei n 8.974 (DOU de 6/1/95), foi votada pelo Congresso Nacional em dezembro de 1994 e sancionada pelo Presidente da Republica em 05 de janeiro de 1995. A lei estabelecia normas de segurana e mecanismos de fiscalizao no uso das tcnicas de engenharia gentica na construo, cultivo, manipulao, transporte, comercializao, consumo, liberao e descarte de Organismos Geneticamente Modificados (OGMs), visando proteger a vida e a sade do homem, dos animais e das plantas, bem como o meio ambiente. O aspecto mais relevante da lei brasileira diz respeito que o que est sob regulamentao o produto oriundo da engenharia gentica, ou seja, a lei regulamente o produto se oriundo de um processo especfico. Em 28/12/2000 entre as mais de 70 Medidas Provisrias baixadas pelo Presidente, a MP 2137 (DOU de 29/12/2000) acresceu e alterou dispositivos da Lei n 8.974. A mais importante foi a criao da CTNBio vetada cinco anos antes. Esta medida resolveu uma critica do judicirio que considerou a CTNBio virtual, j que no tinha sido criada legalmente at ento, sendo seus atos passveis de nulidade. Em 2005, foi aprovada a nova Lei de Biossegurana, a Lei n 11.105, de 24 de maro de 2005. Regulamenta os incisos II, IV e V do 1 do art. 225 da Constituio Federal, estabelece normas de segurana e mecanismos de fiscalizao de atividades que envolvam organismos geneticamente modificados OGM e seus derivados, cria o Conselho Nacional de Biossegurana CNBS, reestrutura a Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana CTNBio, dispe sobre a Poltica Nacional de Biossegurana PNB, revoga a Lei n 8.974, de 5 de janeiro de 1995, e a Medida Provisria n 2.191-9, de 23 de agosto de 2001, e os arts. 5, 6, 7, 8, 9, 10 e 16 da Lei n 10.814, de 15 de dezembro de 2003, e d outras providncias. O fato mais relevante foi a incluso do Principio da Precauo na lei: Artigo 1 - Esta Lei estabelece normas de segurana e mecanismos de fiscalizao sobre a construo, o cultivo, a produo, a manipulao, o transporte, a transferncia, a importao, a exportao, o armazenamento, a pesquisa, a comercializao, o consumo, a liberao no meio ambiente e o descarte de organismos geneticamente modificados OGM e seus derivados, tendo como 55

diretrizes o estmulo ao avano cientfico na rea de biossegurana e biotecnologia, a proteo vida e sade humana, animal e vegetal, e a observncia do princpio da precauo para a proteo do meio ambiente. A lei traz ainda artigos sobre definies, proibio, composio e atributos do Conselho Nacional de Biossegurana (CNBS) e da Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio), alm das atribuies dos rgos e entidades de registro e fiscalizao. Outra importante incluso foi o principio da publicidade. Na gesto das informaes de biossegurana, h que ser observada a transparncia. Da mesma forma, a Legislao, atos administrativos; processos em andamento; decises da CTNBio, do CNBS e dos rgos de registro e fiscalizao; atas das reunies e outras informaes consideradas no sigilosas, bem como os votos fundamentados de cada membro devero ser tornados pblicos. Poucos pases da Amrica do Sul tm legislao referente aos testes e a comercializao de produtos oriundos da engenharia gentica. Na Argentina no existe uma lei de Biossegurana semelhante a do Brasil. Apenas um decreto. No Paraguai, s recentemente houve uma portaria do governo criando uma comisso de biossegurana que tem tambm representantes da universidade e de organizaes no governamentais. Em um de seus primeiros atos, a Comisso de Biossegurana no autorizou a introduo da Soja RR da Monsanto no Paraguai. Nos Estados Unidos tambm no existe uma lei especfica. Basicamente as leis j existentes foram emendadas para tratarem tambm dos produtos transgnicos. Como neste pas, o processo no considerado relevante, importa o produto apenas. Se um produto transgnico considerado equivalente a um no transgnico, os testes exigidos so de comum acordo entre as agencias governamentais e as empresas, estando os consumidores totalmente fora das decises. Naquele pas, nos primeiros anos, foram concedidos (em mdia) autorizaes para 98,7 % do total de solicitaes feitas. Destas, 87% eram de empresas e 13% de instituies oficiais e universidades. O sistema aps anlise desregulamenta o produto. O processo de concesso de autorizao baseado no fentipo da planta, na segurana ambiental, utilizao do produto e risco do produto. Uma pergunta frequente tem sido: a liberao destas plantas nos EUA foi precedida por testes rigorosos e anlises rigorosas das agncias americanas Food and Drug Administration - FDA, Environmental Protection Agency - EPA e United States Department of Agriculture - USDA? As plantas transgnicas, aprovadas para o cultivo comercial nos Estados Unidos, tiveram sua liberao baseada no princpio da equivalncia substancial. Assim, a soja RR foi considerada equivalente a sua antecedente natural, a soja convencional, porque no difere dela nos aspectos cor, textura, teor de leo, composio e teor de aminocidos essenciais e de nenhuma outra qualidade bioqumica. Desta forma, no foram submetidas rotulagem pela agncia americana encarregada de sua liberao, a FDA. Este conceito de equivalncia substancial tem sido alvo de crticas, entre outras, porque a falta de critrios mais rigorosos pode ser til indstria, mas inaceitvel do ponto de vista do consumidor e da sade pblica (Millstone et al., 1999). H dificuldades prticas no conceito de equivalncia entre plantas engenheiradas e naturais, ou obtidas por tcnicas convencionais de melhoramento gentico. Equivalncia significa dispor de igual valor ou outro atributo, normalmente expresso em unidades ou parmetros: um grama do produto Y equivale a X calorias. Equivalncia se refere sempre a quantidade ou algo mensurvel a que corresponde um sentido tecnicamente comparvel (Momma, 1999). A rigor, em termos de genoma, elas no so equivalentes nem iguais. S seriam iguais se uma fosse originria da outra por multiplicao vegetativa ou micropropagao. A construo gentica inserida na planta contm elementos bastante distintos daqueles naturais encontrados nas plantas, que proporcionam novos produtos gnicos e que podem desencadear efeitos pleiotrpicos substanciais, para que sejam considerados desprezveis.

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Por este critrio, a vaca louca seria equivalente, em termos de segurana, a vaca sadia, j que a diferena entre ambas apenas da conformao espacial de uma proreina. Uma das criticas se originou da anlise da documentao que foi utilizada pela FDA para considerar a Soja RR substancialmente equivalente a soja convencional. Segundo Barbara Keeler que fez a anlise, existem diferenas significativas entre soja no transgnica e Soja RR: em 3 dos seis macronutrientes; em um cido graxo; 29% menos de choline; mais (27%) de inibidor de tripsina, um potente alergnico. Para chegar a concluso de que ambas variedades eram equivalentes, no foram aplicados testes estatsticos nas comparaes. Alm disso, em um dos 3 experimentos feitos em Porto Rico foi omitido da publicao no Journal of Nutrition, mas os dados foram submetidos ao FDA. Estes revelaram que a Soja RR apresentou menor nvel de protena e de fenilalanina; o inibidor de tripsina foi 18% maior nas tortas tostadas a base de Soja RR que nos controles e as lectinas apareceram em dobro. Neste caso, por esta anlise a soja convencional e a Soja RR no seriam equivalentes. Esta estratgia baseada na equivalncia substancial foi introduzida na dcada passada para evitar que as indstrias tivessem custos maiores com testes de longa durao, como na rea farmacolgica. Quando se utiliza a equivalncia substancial, nenhum teste requerido para excluir a presena de toxinas prejudiciais, carcinognicas e mutagnicas. Este critrio da equivalncia substancial equivocado, carece de base cientfica e deveria ser abandonado em favor de testes biolgicos, toxicolgicos e imunolgicos mais aprofundados e eficazes (Guerra e Nodari, 1999). Com base nesta equivalncia, o FDA exige apenas testes de curta durao com animais e testes bioqumicos para avaliar, entre outros, a alergenicidade. Esta insuficincia de dados, que no consegue subsidiar cientificamente a anlise da segurana alimentar, est sendo questionada no s pela populao em geral, mas tambm por grande parte da comunidade cientfica e agora (outubro de 2000) pelos governos, como o caso da Itlia. Como o transgene , na verdade, uma nova caracterstica em geral desconhecida introduzida num genoma cultivado que vem sendo lapidado pelas selees natural e artificial, ainda no h experincia acumulada, nem conhecimento suficiente para tratar adequadamente este assunto. Contudo, a comunidade cientfica e os agricultores j tm experincia acumulada com os agroqumicos ou agrotxicos que foram liberados, aps a Segunda Guerra Mundial para uso, sem a realizao de testes adequados de biossegurana. S posteriormente, parte dos efeitos nefastos causados por eles se tornaria conhecido. Foi preciso a morte e a dor de inmeras pessoas contaminadas para que as restries de uso aumentassem. At hoje no houve reparao alguma por partes das empresas fabricantes destes produtos s vitimas intoxicadas ou mortas (Nodari e Guerra, 2001). Na verdade as empresas biotecnolgicas americanas querendo segurana sobre o retorno de seus investimentos nas reas farmacuticas e agrcola exerceram forte presso sobre o governo para restringir o rigor regulatrio das agncias regulatrias americanas. A deciso do uso da equivalncia substancial foi tomada para evitar os testes toxicolgicos e de impacto ambiental de longa durao e de amplo espectro, que tornariam excessivo o custo de desenvolvimento destes produtos. Esta estratgia possibilitou que os transgnicos fossem aprovados de forma mais rpida e barata: 1/3 do tempo e 1/7 a 1/6 do custo, comparativamente aos frmacos. A equivalncia substancial utilizada tambm pelo Canad e Argentina. Nestes pases a rotulagem no obrigatria. Nos Estados Unidos proibida (ver o caso da rotulagem do leite de cava produzido em vacas alimentadas com hormnio transgnico). A rigor, nenhum dos processos de solicitao de liberaes comerciais japrovadas pela CTNBio continha os estudos de avaliao de risco sade humana ou ao meio ambiente, razo pela qual ANVISA e IBAMA impetraram recurso junto ao CBNS contra a deciso da CTNBio. Nem mesmo os princpios e a metodologia estabelecidos no Anexo III do protocolo de Cartagena sobre Biossegurana tm sido seguido. De um lado as empresas no fazem os 57

estudos recomendados, de outro lado a CTNBio no exige. Assim, nem a comunidade cientifica dispe de informaes tcnico-cientficas a respeito dos riscos. Isto contribui para um debate na sociedade, vazio de informaes cientficas e tcnicas. Protocolo Internacional de Biossegurana A Conveno sobre a Diversidade Biolgica CDB - estabeleceu nos itens 3 e 4 do artigo 19 que: (3.) As Partes devem examinar a necessidade e as modalidades de um protocolo que estabelea procedimentos adequados, inclusive, em especial, a concordncia prvia fundamentada, no que respeita a transferncia, manipulao e utilizao seguras de todo organismo vivo modificado pela biotecnologia, que possa ter efeito negativo para a conservao e utilizao sustentvel da diversidade biolgica; e (4.) Cada Parte Contratante deve proporcionar, diretamente ou por solicitao, a qualquer pessoa fsica ou jurdica sob sua jurisdio provedora dos organismos a que se refere o 3 acima, Parte Contratante em que esses organismos devam ser introduzidos, todas as Informaes disponveis sobre a utilizao e as normas de segurana exigidas por essa Parte Contratante para a manipulao desses organismos, bem como todas as Informaes disponveis sobre os potenciais efeitos negativos desses organismos especficos. Nas vrias rodadas realizadas para negociar o referido Protocolo Internacional de Biossegurana, duas posies, praticamente antagnicas se firmaram. De um lado estavam os Estados Unidos e os demais pases do Grupo de Miami (Argentina, Austrlia, Canad, Chile e Uruguai) e de outro lado, os demais pases. Os primeiros (i) queriam exportar commodities geneticamente modificadas (OGMs e seus derivados) como alimentos, frmacos e rao para animais sem solicitar permisso aos pases importadores e (ii) tornar o protocolo um instrumento legal independente ou ligado a organizao mundial do comrcio (OMC). Os demais pases queriam (i) anlise de impacto scio-econmico inserido na anlise de impacto ambiental a ser realizada previamente a liberao comercial; (ii) que o protocolo contenha instrumentos de compensao em caso de acidentes de transporte com OGMs e (iii) que o protocolo no deveria conflitar com outros acordos internacionais atualmente existentes. Alguns pases, como os da frica, querem ainda que o protocolo assegure compensao financeira em caso de impactos negativos na sade humana ou danos ao ambiente. Finalmente, na rodada realizada em janeiro de 2000, na cidade de Montreal, o referido Protocolo foi acordado. Os dois principais pontos so: (i) o princpio da precauo deve ser adotado em caso de dvida ou falta de conhecimento cientfico e (ii) os produtos transgnicos devem ser rotulados (art. 18a). O referido protocolo tem cerca de 40 artigos e trata basicamente da movimentao de transgnicos entre pases, com atribuio de responsabilidades em caso de danos. Garante ainda, que o pas importador recuse o produto caso no esteja acompanhado de estudo de risco adequado. Um terceiro aspecto, explicitado no artigo 15 e anexo II, impe que a anlise de risco seja conduzida cientificamente pelo exportador. Na ausncia desta anlise, os importadores podem se negar a receber os produtos. J foram realizadas quatro reunies anuais (denominadas de MOP), nas quais foram tomadas decises consensuadas sobre vrios temas, sendo o mais polmico os requisitos em termos de informao sobre o OGM que deve acompanhar o documento fiscal nos carregamentos de OGM em movimentos transfronteirios. At o final de 2007, 143 pases haviam assinado o Protocolo Internacional, incluindo o Brasil. Mas no ratificaram o Protocolo, Estados Unidos e Argentina, por exemplo. Situao em Santa Catarina No nosso Estado, existem duas leis promulgadas pela Assemblia Legislativa, que foram vetadas pelo governador, mas o veto derrubado pelos parlamentares. A primeira a Lei

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Promulgada N 11.403, de 10/05/2000, que dispe sobre pesquisas, testes, experincias ou atividades nas reas de Biotecnologia e Engenharia Gentica e adota outras providncias. Seu Art. 1 diz As empresas nacionais ou estrangeiras, que desenvolverem no Estado de Santa Catarina pesquisas, testes, experincias e outras atividades nas reas da biotecnologia e engenharia gentica, envolvendo Organismos Geneticamente Modificados (OGMs), bem como os produtos advindos desta tecnologia, devero notificar o Poder Executivo na forma disposta nesta Lei. J o Art. 3 probe a comercializao em todo o Estado de Santa Catarina dos produtos advindos da tecnologia. A segunda a Lei Promulgada 11.643, de 4/06/2000, que cria o Conselho Tcnico Catarinense de Biossegurana CTCBio e adota outras providncias. Seu Art. 1 diz: Fica criado o Conselho Tcnico Catarinense de Biossegurana CTCBio , rgo normativojurisdicional, consultivo e de assessoramento vinculado diretamente ao Poder Executivo, com a finalidade de deliberar sobre matria relacionada a sua rea de competncia. Ambas as leis embora vigentes ainda no foram implementadas at esta data (junho/2001). Paralelamente e com apoio da Assemblia Legislativa, foi criado o Forum dos Transgnicos, do qual participam vrias instituies pblicas e ONGs como as Comisses de Sade e Meio Ambiente, Direitos Humanos e do Consumidor, Agricultura e Tecnologia e Cooperativismo da AL, rgos da Secretarias de Estado da Sade (Vigilncia Sanitria) e da Agricultura (EPAGRI, CIDASC, PROCOM-SC), Ministrio Pblico, OAB, AMC, UFSC, CEPAGRO, ACATS (Associao Catarinense de Supermercados), Associao Cvica 21/SC, Comit de Defesa do Consumidor Organizado (DECONOR), CUT, Federao dos Trabalhadores na Agricultura Familiar (FETRAF/SUL), Federao dos Trabalhadores na Agricultura (FETAESC), Sindicato dos Engenheiros Agrnomos (SEAGRO), Federao das Associaes de Apicultores (FAAS/SC) e Federao Catarinense das Associaes dos Municpios (FECAM). Umas das aes deste Forum foi a obteno de uma acordo negociado entre o Ministrio Pblico e empresas que cujos produtos so suspeitos de conter ingredientes transgnicos. Nestes casos, as empresas custeiam as anlises laboratoriais que sero realizadas por laboratrios pblicos. De outro lado, os supermercados iniciaram um processo de conhecer no s a legislao mas tambm a opinio dos consumidores.

8-DETERMINAAO DE RISCO

Apesar da Legislao Brasileira de Biossegurana ter sido promulgada desde 1995 e da CTNBio ter sido implantada em 1996 e re-implantada em 2005, a operacionalizao da fiscalizao dos produtos transgnicos nas Unidade da Federao tem enfrentado vrias dificuldades. A fiscalizao tanto de experimentos quanto de rea plantada clandestina no est sendo feita a contento. At abril de 1999, apenas 5% dos experimentos haviam sido fiscalizados. A situao no mudou muito depois disso. Com o objetivo de levantar os principais problemas e entraves que tm dificultado o cumprimento da legislao de biossegurana na rea de competncia do Ministrio da Agricultura e contribuir para a soluo dos problemas da fiscalizao, a Diviso de Controle do Trnsito e Quarentena Vegetal DTQ/CPP, em 23/11/00, encaminhou o fax n 150/2000Circular para todas as DDA e SEDAG das DFA. Quatorze Unidades da Federao (AM, BA, CE, DF, GO, RR, RS, SC, TO, PA, PR, MG, MS, MT) responderam no prazo estipulado e, com base nessas respostas, o presente documento foi elaborado (por Paccelli M. Zahler). Os problemas enfrentados pela fiscalizao federal agropecuria dos transgnicos podem ser divididos em trs tipos: pessoal, operacionais e legislativos. 1) Problemas de pessoal: falta de tcnicos em nmero suficiente para realizar as fiscalizaes; falta de treinamento em biossegurana; falta de uma Comisso de Biossegurana no Ministrio da Agricultura, de modo que as posies defendidas sejam posies institucionais.

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2) Problemas operacionais: falta de um manual de procedimentos de fiscalizao de transgnicos; desconhecimento do contedo dos processos submetidos CTNBio; falta de recursos financeiros para a intensificao das fiscalizaes; falta de mtodos de amostragem e de kits para a deteco das modificaes genticas; falta de laboratrios credenciados para a anlise de transgnicos; falta de um Plano Operativo especfico nas reas de defesa e produo das DFA destinado ao cumprimento da legislao de biossegurana; falta de informao; inexistncia de encontros e reunies entre membros da CTNBio e o corpo tcnico das DFA; falta de recursos financeiros para o pagamento de anlises. 3) Problemas legislativos: falta de Instruo Normativa regulamentando a importao de transgnicos destinados ao consumo humano e animal; falta de instncias de julgamento e de valores de multa para as infraes cometidas com transgnicos; dificuldade no cumprimento das decises da CTNBio; falta de clareza em alguns pontos da legislao de biossegurana, dificultando a classificao dos organismos geneticamente modificados quanto ao grupo de risco ao qual pertencem; Os problemas no s pelo lado do governo. As empresas tambm contribuem para tornar os problemas ainda mais graves conforme dois exemplos ilustrativos. O primeiro deles referese s inmeras irregularidades apontadas no Relatrio de viagem de fiscalizao de 33 ensaios com OGMs no RS feito pelo Eng Agr Jos de Ribamar Costa Jnior-DFA/RS. Dentre elas cabem destaque para: 6 processos onde os croquis no permitiram a localizao dos ensaios; 2 ensaios destrudos e no comunicados a CTNBio pela Empresa; 2 ensaios onde os OGMs estavam em risco de escape descontrolado. Em 31/05/2001, a Folha do Paran publica uma notcia dando conta de que o Ministrio Pblico Federal estaria investigando denncia de plantio de soja transgnica em escala comercial no Paran. As reas apontadas com soja transgnica esto em Ponta Grossa, de propriedade da multinacional Monsanto, e em Cascavel, de propriedade da Cooperativa Central de Pesquisa (Codetec), rgo de pesquisa das cooperativas de produo agrcola. A denncia que tanto a Monsanto como a Codetec, que tinham permisso para plantar a soja transgnica, em carter experimental, extrapolaram no plantio. A Monsanto tinha uma autorizao para produzir um hectare de soja transgnica em seus campos experimentais de Ponta Grossa e plantou aproximadamente 25 hectares. J a Codetec que tinha permisso para plantar 1,5 hectare em Cascavel, tambm em carter experimental, plantou 97 hectares. Alm da interdio da rea, foram apreendidas 340 toneladas de sementes da Codetec e outras 853 sacas da Monsanto. Esses produtos tambm se encontram disposio da Justia e as empresas flagradas esto como fiel depositrias. O presidente da Codetec, Irineo da Costa Rodrigues, disse que a cooperativa vai se defender na Justia porque toda a rea plantada com soja transgnica estava sob a superviso do Ministrio da Agricultura e que nada estava escondido. Ele disse que para efeito de pesquisa necessrio plantar uma rea maior, at para a Codetec se preparar para o mercado, caso a liberao do plantio de soja transgncia saia ainda este ano. "Se o plantio for liberado, as cooperativas precisam ter o material para plantio", argumentou. O Art. 13. da Lei 8974 dizia que constituem crimes: V - a liberao ou o descarte no meio ambiente de OGM em desacordo com as normas estabelecidas pela CTNBio e constantes na regulamentao desta Lei. Pena - recluso de um a trs anos. Pergunta: algum ir para a cadeia se esta denncia for comprovada??

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Tanto a Lei 8974 quanto a nova MP no deixam dvida de quem a responsabilidade pela fiscalizao. o O Art. 7 da MP 2131 dizia que Caber aos rgos de fiscalizao do Ministrio da Sade, do Ministrio da Agricultura e do Abastecimento e do Ministrio do Meio Ambiente, no campo das respectivas competncias, observado o parecer tcnico prvio conclusivo da CTNBio e os mecanismos estabelecidos na regulamentao desta Lei: ... II - a fiscalizao e o monitoramento das atividades e projetos relacionados a OGM; ... X - a expedio de autorizao temporria de experimento de campo com OGM. Na poca vigncia da lei anterior, no houve a aplicao de infraes ou d eoutras penalidades. Mesmo com a nova lei em 2005, pouco ou nada mudou. Fatos comprovados por jornalistas e mesmo pela fiscalizao comprovaram a existncia de algodo e milho transgnicos antes de terem sido liberados no pas. Assim, a fiscalizao praticamente ineficiente para proteger o pas de cultivos ilegais e de contaminao por transgenes.

As Biotecnologias tm sido utilizadas por milnios para diversos propsitos, incluindo as fermentaes para produo de alimentos e bebidas e a seleo de novas variedades de plantas ou animais. Na ltima metade do sculo passado, novas biotecnologias foram desenvolvidas, dentre as quais merecem destaque a micropropagao, a fuso de protoplastos, os marcadores moleculares, a clonagem de animais, DNA recombinante e a transgenia. Conseqentemente, a preciso e o poder de manipulao dos organismos vivos aumentou consideravelmente com o avano da gentica molecular. De todas elas, o que causa maior apreenso a transgenia, no em si pela tecnologia, mas pelas implicaes que seus produtos podem apresentar sade humana e ao meio ambiente. Se um transgnico diferente de uma variedade comum e o gene nele inserido pode apresentar um determinado risco, h a necessidade da avaliao do risco, tanto para a sade humana como para o meio ambiente. A razo disto est no fato de que os genes transferidos de fora do gene-pool de uma espcie, produzem produtos com os quais temos pouca ou nenhuma experincia. No se conhecem as implicaes que podem ser provocadas pela introduo desses genes em plantas. Desta forma, h um consenso entre os pesquisadores que a sociedade precisa desenvolver regras para o desenvolvimento, testes e comrcio de OGMs. Estes aspectos constituem um grande desafio, pois at o advento dos OGMs nenhuma nova cultivar passava por testes de biossegurana. Embora a engenharia gentica transfira somente seqncias curtas de DNA, comparativamente ao genoma de uma variedade, o fentipo resultante, que inclui a caracterstica transgnica, possivelmente acompanhado de mudanas nas caractersticas e pode produzir um organismo novo em termos de relaes ecolgicas (Wolfenbarger e Phifer, 2000). Segundo estes autores, os ecossistemas so complexos e nem todo o risco associado com a liberao de um OGM pode ser identificado e considerado. Os testes a serem realizados, os protocolos mais apropriados, os termos de referncia, os instrumentos mais adequados ainda so pouco conhecidos e esto sendo discutidos e desenvolvidos. Risco pode ser definido como uma medida dos efeitos de uma ocorrncia em termos de sua probabilidade e da magnitude de suas conseqncias. Em seu texto-depoimento (1999) ao Parlamento Ingls, o Prof. Dr. Chris Glidon, da University of Wales, definiu avaliao de risco (risk assessment) como sendo o processo com base cientfica que consiste na identificao e caracterizao dos perigos, da avaliao da exposio e da caracterizao dos efeitos dos riscos. Por perigo entende-se a propriedade de uma substncia ou processo que

9-ANLISE DE RISCO

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cause dano. Ou seja, dano a materializao do perigo. Ento, se o potencial de dano elevado, mesmo uma baixa probabilidade pode significar um risco inaceitvel. A avaliao de segurana deve ser baseada nos riscos potenciais impostos pelo produto obtido (Fontes et al., 1996). Assim, a avaliao deve levar em considerao as caractersticas do doador, do recipiente, ou quando apropriado, do organismo parental. Devem ainda ser avaliadas as caractersticas e a utilizao pretendida do OGM, incluindo a escala e a freqncia das introdues e consideraes ambientais e de sade. O manejo dos riscos deve levar em conta as alternativas decorrentes da avaliao de riscos e, se necessrio, a seleo e implementao de opes de controle apropriadas, incluindo normas regulatrias. Os danos podem ser diretos ou indiretos, intencionais ou involuntrios, imediatos ou no. Segundo o Dr. Chris Glidon, espera-se, ao final do processo, eliminar ou reduzir o risco que possa causar um dano de fato. A diretriz maior a de que o produto deve ser seguro e sadio para a espcie humana e para o meio ambiente. Portanto, o impacto de um transgene no ambiente e na sade humana deve ser criteriosamente avaliado (Glidon, 1999). Pode-se tambm definer Risco como sendo a medida dos efeitos (injrias, ambientais, econmicos) de uma ocorrncia em termos de probabilidade e da magnitude de suas conseqncias. Neste caso, um OGM poderia ser POTENCIALMENTE PERIGOSO, em razo de apresentar, como propriedade, uma substncia ou processo que causa dano (injria ou perda). Assim, DANO seria a manifestao de uma substncia ou processo perigoso. Tais danos podem se Diretos ou Indiretos, Imediato ou Longo prazo, Naturais ou Tecnolgicos e Intencionais ou Imprevisveis. Em tese, os riscos no esto relacionados ao que os cientistas sabem, mas ao que eles no sabem (Caruso, 2006). Ou seja, riscos esto associados a incertezas. Neste mesmo sentido no contexto da incerteza que viceja a esperana, o juzo e a valorao da subjetividade, capaz de concretizar o inusitado, segundo Lieber e Romano-Lieber (2003). J em 1989, pelo menos 15 anos antes da liberaao no meio amniente da primeira planta transgenica, o tomate Flavr Svr, Tiedje et al. (1989) anteciparam os sete principais riscos ambientais: criao de novas pragas e plantas daninhas; um aumento das pragas j existentes por meio da recombinao gnica entre a planta transgnica e outras espcies filogeneticamente relacionadas; a produo de substncias que so ou poderiam ser txicas a organismos no-alvos; o efeito disruptivo em comunidades biticas e o desperdcio de valiosos recursos genticos, seguido de contaminao de espcies nativas com caractersticas originadas de parentes distantes ou de espcies no relacionadas e efeitos adversos em processos dos ecossistemas; origem de substncias secundrias txicas aps a degradao incompleta de qumicos perigosos; efeito adverso nos processos ecolgicos; extravagncia de recursos biolgicos valorosos. Praticamente todos os efeitos adversos previstos ocorreram com os OGMs liberados. Portanto, no correto dizer que os mesmo so imprevistos, pois os efeitos adversos ou os danos foram alertados por parte da prpria comunidade cientifica. Riscos sade humana A maioria das plantas transgnicas desta primeira gerao de OGMs contm genes de resistncia a antibiticos, cuja funo possibilitar a seleo das clulas transformadas. O que os genes de resistncia a antibiticos tem a ver com a sade humana? Nos ltimos 20 anos, mais de 30 novas doenas ocorreram na espcie humana (AIDS, ebola e hepatites, entre outras). Alm disso, houve o ressurgimento de doenas como a tuberculose, malria, clera e difteria com muito mais agressividade por parte dos microrganismos patognicos. 62

Paralelamente, houve um decrscimo na eficincia dos antibiticos. Nos anos 40, um antibitico tinha uma vida til de 15 anos. Nos anos 80, a vida til passou para cinco anos, ou seja, trs vezes menos. Os estudos comprovam de que tanto a recombinao como a transferncia horizontal entre bactrias acelerara a disseminao de regies genmicas destes organismos causadores de doenas, bem como a disseminao de genes de resistncia a antibiticos (Ho et al., 1998). bem conhecido o exemplo da estreptomicina em sunos. Aps um ano de aplicao aos animais (1983), genes de resistncia a estreptomicina estavam presentes nos plasmdeos de bactrias que viviam na garganta e estmago dos sunos. Um ano mais tarde, bactrias humanas dos familiares que lidavam com estes animais tambm apresentaram resistncia a estreptomicina. Esta uma prova inequvoca de transferncia lateral de genes entre bactrias. Em 1990, este antibitico foi retirado de circulao. Embora a frequncia de transformao e, consequentemente, a transferncia horizontal em bactrias extremamente baixa, os genes de resistncia a antibiticos inseridos em plantas transgnicas, podero ser transferidos para bactrias humanas, o que se constitui num risco a ser considerado. Tem sido sugerido o desenvolvimento de OGMs sem genes de resistncia a antibiticos para evitar os riscos acima mencionados. Cabe ento o aperfeioamento do sistema de seleo tanto via desenvolvimento de outras formas de seleo ou utilizao de outros genes. Um segundo tipo de risco relaciona-se com as reaes adversas dos alimentos OGMs ingeridos, que podem ser agrupadas em duas categorias: alergnicos e intolerantes. Neste grupo esto os alimentos que causam hipersensibilidade ou alergia. No segundo grupo esto as alteraes fisiolgicas, como reaes metablicas anormais, toxicidade, reaes farmacolgicas e idiossincrticas (Finardi, 1999). Ento faz sentido saber se uma nova variedade transgnica intensifica ou no a alergia. No caso da Soja RR, os testes realizados no foram suficientes para discriminar as possveis variaes nas 16 protenas alergnicas desta espcie. Os testes revelaram que houve um aumento (26,7%) do inibidor de tripsina, tambm alergnico e antinutricional (Padgette et al., 1996), alm de uma maior reatividade de uma banda relativa a uma protena alergnica. Segundo a anlise feita por uma pesquisadora independente, Barbara Keeler, a documentao que a empresa forneceu a FDA demonstra que em um dos experimentos tambm o teor de lectina, que alergnico, produzido pela Soja RR foi maior (o dobro) que na convencional. O desafio neste caso sabe quais os tipos de ensaios que fornecem os dados mais inequvocos sobre alergenicidade. Existe ainda uma srie de outros riscos sade humana que devem ser analisados com protocolos adequados. Um deles o efeito txico que um alimento transgnico pode causar sade humana. Riscos ao meio ambiente A avaliao de risco ambiental a avaliao sistemtica dos riscos associados sade e segurana humana e ambiental. Os procedimentos devem incluir a identificao dos perigos e a estimativa de suas magnitudes e freqncias de ocorrncia, bem como das alternativas ao OGM. Como os riscos associados a uma variedade transgnica dependem das interaes complexas decorrentes da modificao gentica, da histria natural dos organismos envolvidos e das propriedades do ecossistema no qual o OGM liberado (Peterson et al., 2000; Wolfenbarger e Phifer, 2000), estes procedimentos devem ser aplicados em escala ampla, em termos espaciais e sociais (ver Figura 1). O conhecimento dos riscos tambm indispensvel porque possibilita a elaborao de planos de seu gerenciamento. O manejo dos riscos um processo que envolve a anlise das alternativas decorrentes dos resultados alcanados com a avaliao destes. Quando requerido, o manejo seleciona e implementa opes apropriadas de controle, incluindo normas reguladoras (Glidon, 1999). Assim, o manejo de riscos deve tambm fazer parte do estudo de impacto ambiental para fins de licenciamento de atividades com plantas transgnicas. Na ausncia de efeitos pleiotrpicos, os efeitos diretos do transgene numa planta seriam razoavelmente previsveis. Quando os bilogos moleculares dizem que foram feitos 63

estudos e no foram detectados efeitos adversos, eles normalmente esto se referindo primeira das vrias clulas possveis de serem analisadas (Figura 7). Existem tambm estudos de parcela (segunda clula da Figura 7), associados predominantemente performance agronmica do OGM, e que, a rigor, no podem ser tomados como estudos de impactos e riscos ambientais. No h estudos cientficos relacionados a todas as clulas relevantes desta matriz. Existem sim, relatos cientficos de estudos isolados com algumas espcies e que sero apresentados mais adiante.

Figura 7. Efeitos diretos e indiretos de variedades transgnicas (OGM) e as interaes complexas que fazem parte da avaliao de risco ambiental (Adaptado de Peterson et al., 2000). A complexidade da avaliao decorrente do fato de que os riscos e os benefcios associados a uma cultura especfica mudam e tornam-se mais difceis de serem avaliados na medida que a rea de cultivo aumenta e outros aspectos so considerados. Impactos indiretos nos ecossistemas so muito mais difceis de investigar, monitorar e, portanto, predizer (Peterson et al., 2000). Segundo estes autores, esta uma das origens da controvrsia estabelecida entre os ambientalistas e os bilogos moleculares. Enquanto os primeiros referem-se aos impactos sociais e nos ecossistemas, os ltimos fazem meno aos testes feitos com uma ou poucas plantas em laboratrio ou em casa de vegetao. A complexidade tambm decorrente do fato de que inmeros trabalhos cientficos demonstraram que o padro de variao fenotpica, sua base gentica e a seleo natural sobre eles variam em diferentes condies ambientais (Susuki et al., 1986; Ackerly et al., 2000). O problema da biologia que, em contraste com outros ramos do mundo fsico, nos quais poucas grandes foras dominam os fenmenos, o organismo vivo resultante de um grande nmero de caminhos fracos causais determinantes, fazendo com que seja extremamente difcil proporcionar explanaes completas (Lewontin, 2000). Em seu recente texto, o autor afirma ainda que um organismo vivo num momento qualquer de sua vida a conseqncia nica da histria do desenvolvimento que resulta de interaes e determinaes de foras internas e externas. Devido aos contextos histricos, polticos e econmicos da biotecnologia seria apropriado questionar o que vem sendo praticado em termos de avaliao de risco. As agncias regulatrias no tm utilizado critrios ecologicamente compreensveis para avaliar os riscos de organismos transgnicos (Peterson et al., 2000). Uma reviso dos pedidos de liberao para a comercializao de OGM na Comunidade Europia revelou claramente que a avaliao de risco ambiental no foi feita ou interpretada adequadamente pelos Estados Membros (Glidon, 1999). A recomendao de bastidores destes experimentos de campo sugere que est sendo aplicado o ditado popular no olhe, no encontre. Tampouco esta avaliao de riscos e dos impactos ambientais foi adequadamente feita no Brasil com os OGMs cuja liberao para cultivo foi solicitada por empresas a CTNBio. Entre os riscos ambientais, a poluio gentica, por meio da transferncia vertical e da transferncia horizontal, a ameaa considerada mais importante. Em decorrncia disto, espcies que adquirirem certos transgenes podero alterar seu valor adaptativo e, 64

conseqentemente, a dinmica de suas populaes e de outras espcies as quais interagem estar desafiada. Contudo, outros riscos so possveis como efeitos danosos em espcies no-alvo (aves, minhocas, peixes, entre outros), contaminao de solo e gua, cujas dimenses tambm so impossveis de prever antes dos estudos a serem realizados (Nodari e Guerra, 2000a). Do ponto de vista agrcola, a transferncia de genes pode provocar o surgimento de plantas daninhas e pragas resistentes, bem como variantes genticos, cujas caractersticas no se pode antecipar. Alm disso, a agrodiversidade, que a diversidade gentica em cultivo mantida pelos agricultores, poder ser afetada. Transferncia vertical Refere-se ao acasalamento sexual entre indivduos sexualmente compatveis, geralmente da mesma espcie e, raramente, de espcies afins. O acasalamento uma via para o fluxo gnico, entre plantas da mesma espcie, como entre plantas de diferentes espcies. Assim, de longa data tm sido observados cruzamentos entre indivduos de populaes em estado incipiente de especiao ou de espcies aparentadas. Exemplos disso so os cruzamentos entre o arroz cultivado e o arroz perene, milho e teosinto, um de seus possveis ancestrais (Doebley, 1990), beterraba cultivada e beterraba no domesticada e entre espcies cultivadas e inos do gnero das abboras (Wilson, 1990). Os impactos ecolgicos da transferncia de plen, um mecanismo reprodutivo pelo qual a introgresso pode ocorrer, dependem da capacidade dos hbridos em sobreviver e reproduzir. Taxas de sobrevivncia ou de reproduo indicam a oportunidade da introgresso de transgenes em populaes naturais, dependendo do fluxo gnico subseqente e da presso de seleo (Wolfenbarger e Phifer, 2000). Estes autores relataram 11 casos de formao de hbridos entre variedades transgnicas e plantas aparentadas e/ou daninhas. Para se tornar uma ameaa, como uma planta invasiva, os hbridos precisam ser viveis e competitivos, alm de frteis quando dependem da reproduo sexual para propagao. Com base no se conhece hoje, nem todos os hbridos vo atingir a ltima fase. Os poucos estudos associados introgresso de transgenes e suas conseqncias ecolgicas em populaes naturais ainda no permitem fazer previses confiveis. Contudo, a experincia anterior com plantas de lavoura sugere que os efeitos negativos so possveis. Para doze das treze espcies de maior importncia econmica mundial, a hibridizao com parentes selvagens contribuiu para a evoluo de algumas espcies de ervas daninhas. Em alguns casos, os elevados nveis de introgresso a partir de parentes cultivados ou introduzidos eliminaram a diversidade gentica e contriburam para sua extino (Ellstrand et al., 1999). Quando so viveis e havendo fertilidade, mesmo baixa, a sobrevivncia dos hbridos interespecficos se torna possvel, e estes podem cruzar com plantas de qualquer uma das duas espcies parentais. Caracteriza-se, ento, o processo de introgresso de genes de uma espcie para outra. No caso do cruzamento entre canola transgnica e a mostarda silvestre, o nmero de sementes da segunda gerao do hbrido foi dez vezes maior do que o F1. Algumas plantas descendentes do cruzamento produziram 10 mil sementes e o gene de resistncia ao herbicida ainda permanecia numa grande quantidade de plantas. Isto demonstra que a transferncia de genes que condicionam resistncia a herbicidas pode ocorrer com maior intensidade e facilidade do que se imaginava antes desta descoberta (Chvre et al., 1998). Uma vez dentro de populaes silvestres, os transgenes podero tornar estas plantas mais invasivas e, portanto, potencialmente perigosas para a agricultura ou a biodiversidade (Fontes et al., 1996). Mas tambm pode ocorrer, segundo as autoras, que a presena do transgene diminua a adaptao natural, o que tornaria a populao vulnervel extino. No caso de transferncia de outras caractersticas para outras espcies afins, praticamente nada pode ser antecipado, devido ausncia de dados. Contudo, se o valor adaptativo de um hbrido interespecfico for aumentado com a presena deste gene transferido, factvel que tal gene se mantenha via introgresso.

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O nmero dce contaminaes de variedades crioulas ou mesmo convencionais por transgenes aumenta todo o ano. Um conjunto de organizaes da sociedade civil vem acompanhando e registrando estas contaminaes (http://www.gmcontaminationregister.org). Entre 1997 e 2006 ocorreram 107 contaminaes genticas; 24 cultivos ilegais e 8 efeitos colaterais agrcolas negativos. Destes 144 casos comprovados, envolveram 44 pases, sendo a media de 14,2 ao ano. O mais espantoso que 35% ocorreram com milho, que um alimento nobre! Diante disso comearam as preocupaes com a coexistncia. A coexistncia, segundo a Diretiva 556/03/ECC, significa a possibilidade efetiva, para os agricultores, de escolherem entre o modo de produo convencional ou biolgico, ou ainda a produo de culturas GM, no respeito das obrigaes legais em matria de rotulagem ou de normas de pureza. A rigor, impossivel ocorrer a coexistncia sem contaminao. A CTNBio baixou a Resoluao Normativa n 4, de 16 de agosto de 2007 e publicada no DOU, n 163 de 23/08/2007, p.19. Nela esta estabelecido que Para permitir a coexistncia, a distncia entre uma lavoura comercial de milho geneticamente modificado e outra de milho no geneticamente modificado, localizada em rea vizinha, deve ser igual ou superior a 100 (cem) metros ou, alternativamente, 20 (vinte) metros, desde que acrescida de bordadura com, no mnimo, 10 (dez) fileiras de plantas de milho convencional de porte e ciclo vegetativo similar ao milho geneticamente modificado (art. 2). Ironicamente ou intrigantemente, no mesmo dia a CTNBio aprovou o evento MON810, milho transgenico, por meio do Parecer Tcnico n 1.100/2007, de 16 de agosto de 2007. Nele, est escrito que Comparando-se as concentraes a 1 m da cultura fonte sob ventos baixos a moderados estimou-se que, aproximadamente, 2% de plen so anotados a 60 m, 1,1% a 200 m e 0,75-0,5% a 500 m de distncia. Ou seja, a RN n 4 totalmente ineficiente para garantir a coexistncia sem contaminaao caso o que est contido no prprio parecer da CTNBio, o pollen do milho deve se disseminar pelo menos a 500 m de distncia. Tambm a transgenia ainda pode afetar o processo reprodutivo em plantas. Um aumento da taxa de fecundao cruzada foi verificado em Arabidopsis thaliana. Bergelson et al. (1998) constataram um aumento de 20 vezes na freqncia de fecundao cruzada em plantas transgnicas comparativamente s plantas no-transgnicas. Tabela 8. Exemplos selecionados de transferncia de genes de resistncia a herbicida de plantas transgnicas para suas plantas daninhas.
Cultura Canola Trigo Sorgo Beterraba Agrostis stolonifera Planta daninha Mostarda silvestre Aegilops cylindrica Johnson grass Beterraba no domesticada A. canina, A. capillaris, A. castellana, A. Gigantea e A. Pallens. Herbicida Basta Round-up Round-up Round-up Round-up Autor Chvre et al., 1998 Steven et al.,1998 Arriola e Ellstrand, 1998 New Scientist, 21/10/2000 Wipff e Fricker, 2000

As plantas daninhas resistentes a herbicidas tambm podem se originar pela presso de seleo sobre os recombinantes cada vez mais tolerantes, gerados naturalmente, ao herbicida aplicado. Dentre as mais de 100 plantas resistentes a herbicidas, trs delas so plantas daninhas resistentes a formulaes comerciais base de glifosato: poaia-branca (Richardia brasiliensis), trapoeraba (Commelina virginica) e erva-quente (Spermacoce latifolia) (CTNBio, 1998). A prpria soja RR se tornou uma planta invasora, porque os gros que ficam na susperficie do solo aps a colheita germinam e so resistentes ao glifosato.Isto est obrigando 66

os agricultores a utilziar outros herbicidas igualmente ou mais txiucos que o glufosato. O fato de empresas produtoras do herbicida 2,4-D terem solicitado registro para uso deste produto visando p controle da soja RR como planta invasoa a demonstrao do fato. Transferncia horizontal ou lateral (TH) Quando existe transferncia de genes entre espcies filogeneticamente diferentes, na ausncia do acasalamento sexual, configura-se a transferncia lateral ou transferncia horizontal. Neste caso, o material gentico transmitido de uma espcie para outra, provavelmente com auxlio de vetores (plasmdios, transposons e vrus). Elementos similares a transposons so veculos para cortar e ligar DNA genmico de um organismo noutro. Vrus tambm poderiam ser responsveis pela transmisso de genes entre eucariotos. Na verdade, os mecanismos de transferncia lateral so pouco estudados e, portanto, praticamente desconhecidos. Diversos casos de absoro de DNA por parte de clulas eucariotas foram tambm registrados (Tappeser et al., 1999). Num deles, foi demonstrado que o DNA fornecido na alimentao de ratos no s no era totalmente destrudo no trato gastrointestinal, mas tambm poderia alcanar a corrente sangnea e temporariamente ser detectado nos leuccitos ou clulas do fgado. Outros exemplos de deteco de DNA de eucariotos em bactrias e animais, como DNA de milho transgnico em bactrias de intestino de abelhas ou DNA de milho transgnico em vrios rgos de galinhas, esto sendo noticiados pela imprensa, mas necessitam aparecer em publicaes cientficas ou serem validados cientificamente. A transferncia horizontal bem mais conhecida em bactrias, sendo os eventos menos comuns em animais e no homem comparativamente a plantas e microrganismos. A filogenia de plantas indica que a TH de genes est envolvida no processo evolutivo. A fuso endosimbitica a mitocndria e o cloroplasto fundidos com a clula nucleada em plantas seria um caso especfico de TH. Os genes citocromo c e gapdhA (gliceraldeido-3fosfato-desidrogenase) devem ter sido transferidos de microrganismos para plantas (Syvanen, 1994). A transfernciade material gentico de Agrobacterium tumefasciens para plantas tambm um exemplo bem ilustrativo. A edio de 21/05/99 da revista Science (1999) inclui inmeros exemplos de transferncia horizontal de genes. Assim, genes humanos j foram detectados em Mycobacterium tuberculosis, a bactria que causa a tuberculose. Experimentalmente, Nielsen et al. (2000) verificaram que o DNA de beterraba transgnica pode ser transferido para Acinetobacter sp. Strain BD413, uma bactria de solo. Neste caso, a TH ocorreu de um extrato celular para plasmdeos de bactrias. Casos de transferncia via recombinao homloga so mais freqentes do que se imaginava (Nielsen et al., 1998). Um outro estudo recente demonstrou tambm que a promiscuidade na transferncia de DNA entre plantas maior que se suspeitava. O intron do grupo I do genoma mitocondrial de plantas vasculares, que est localizado no gene coxl da espcie Peperomia polybotrya, teria sido adquirido por transferncia horizontal (ou lateral) de um fungo. Analisando o DNA de 335 plantas de diferentes gneros, Cho et al. (1998) verificaram que este intron est amplamente disperso nos genes cox1 das angiospermas. O referido intron est presente em 48 gneros diferentes, a partir de 32 eventos independentes de transferncia horizontal. Esta constatao revela a grande freqncia das trocas de material gentico na natureza e traz preocupaes, em especial quanto possvel interao entre plantas transgnicas e outros vegetais. Uma pergunta comumente feita relaciona-se com as conseqncias da introduo em plantas de genes (intactos ou modificados) originados de vrus patognicos. Trocas de material gentico tambm podem ocorrer entre plantas e vrus. A primeira evidncia experimental sobre a recombinao entre uma planta transgnica contendo genes virais e um vrus foi obtida por Greene e Allison, em 1994, embora este tipo de recombinao j fosse conhecido desde os anos 80. A introduo de genes que codificam a capa protica originada de vrus patognicos, ou outras seqncias virais, utilizada para conferir s plantas resistncia aos prprios vrus doadores. difcil estabelecer as conseqncias, caso este gene seja transferido para outras plantas. Contudo, um vrus poder infectar um planta 67

transgnica que tem a protena do encapsulamento de outro vrus. Neste caso ocorrer uma transencapsidao, cujas conseqncias so totalmente desconhecidas. Recentemente tambm, um estudo com arroz transgnico, conduzido no John Innes Institute, da Inglaterra, corroborou a evidncia de que o promotor do vrus do mosaico-dacouve-flor (CaMV), que tambm est presente na maioria das plantas transgnicas e nas suas prognies, um stio de alta freqncia de recombinao gnica. Recombinao gnica a troca de material gentico entre duas molculas de DNA, altamente similares geneticamente, que pode resultar numa terceira molcula diferente das duas parentais, e, portanto, um variante. O mais intrigante, entretanto, que os autores verificaram que a maioria dos eventos era do tipo de recombinao ilegtima ou no-homloga e no requeriam uma similaridade substancial na seqncia de bases. Tais eventos podiam ocorrer mesmo na ausncia de genes virais (Kohli et al., 1999). Alm disso, a seqncia de bases do promotor do CaMV, usado em vrias plantas transgnicas, como a soja e o milho, similar a regies de vrus patognicos espcie humana. Desta forma, no se pode descartar a possibilidade de recombinaes entre o transgene e outros vrus, resultando em novas combinaes genticas, cujas propriedades no so conhecidas, mas que necessitam ser estudadas antes do cultivo em larga escala de plantas que contm estas seqncias. A priori, no se pode descartar, ento, que a inseroinsero de seqncias virais em plantas poder tornar os vrus mais promscuos e com isto provocar mais doenas em plantas. Embora no se conhea a magnitude da contribuio da engenharia gentica para a transferncia horizontal, possvel levantar a hiptese de que o cultivo em larga escala de plantas transgnicas deve favorecer a TH. Geralmente, as plantas transgnicas contm elementos mediadores da transformao in vitro, ou parte deles, e tambm da TH, como plasmdeos, transposons e vrus. Os vetores utilizados para a obteno de plantas transgnicas freqentemente apresentam na construo quimrica origem de replicao, seqncias de transferncia, promotores fortes e genes de resistncia a antibiticos. Todos estes elementos facilitam a recombinao e a transferncia de genes. Plasmdeos e vrus quimricos esto sujeitos a instabilidades estruturais, o que facilita tambm a recombinao (Ho et al., 1998). Na natureza, a poluio com metais pesados pode se constituir em fator benfico para a transferncia de genes. Como parte das seqncias introduzidas so homlogas a muitos procariotos, a transferncia de material gentico para eles via recombinao factvel. Dependendo das seqncias introduzidas na planta transgnica, haver uma maior ou menor probabilidade de favorecimento para a TH. Outro aspecto importante est relacionado com a freqncia de ocorrncia da TH. -17 Embora, algumas estimativas sejam baixas, como 2x10 , o nmero de cpias em cultivo poder ser muito alto. O fato de que uma planta pode conter mais de dois trilhes de clulas, e um hectare de soja mais de 300 mil plantas, permite supor a probabilidade da existncia de mais de 1,2 x 10 de cpias por hectare, de um transgene. Considerando o cultivo em pelo menos cinco milhes de hectares, no difcil concluir que uma ou mais recombinaes podem de fato ocorrer, mesmo porque, a probabilidade de sua ocorrncia, embora baixa, finita, ou seja, tem um valor que influenciado por vrios fatores. De crucial importncia tambm o efeito individual de cada transgene. Na tecnologia denominada de terminator, os embries contidos nas sementes a serem colhidas pelos agricultores so defeituosos. Um dos componentes do sistema a enzima recombinase, a qual tem o potencial de misturar genomas. Esta foi a concluso a que chegaram Schmidt e colegas (2000). A recombinase Cre parte do stio especfico de recombinao Cre/lox, originalmente isolado do bacterifago P1. Cre catalisa a recombinao entre dois stios lox, retirando qualquer pedao de DNA entre ambos. Estes stios 'ilegtimos' freqentemente carregam pouca similaridade em relao ao elemento lox. No h dados sobre o reconhecimento ilegtimo em animais e plantas. Segundo os autores, altos nveis de expresso de Cre nas espermtides de ratos transgnicos heterozigotos levam a 100% de esterilidade em machos, mesmo na ausncia dos stios lox. A esterilidade seria causada pela quebra e reunio de DNA em stios inapropriados. Embries fertilizados por estes espermas
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no passam do estgio de quatro clulas. Estes resultados indicam que Cre tem conseqncias patolgicas em animais concluram os autores. So duas, ento, as principais implicaes da TH. A primeira refere-se maior probabilidade de transferncia horizontal de genes a partir de plantas transgnicas comparativamente s variedades tradicionais. A segunda refere-se ao fato de que os genes com potencial de disseminao podem dar vantagem seletiva aos organismos receptores, o que poder alterar dramaticamente a dinmica das populaes e a paisagem. Como ainda no possvel determinar a probabilidade de um evento de TH ocorrer, bem como suas conseqncias, torna-se praticamente impossvel fazer qualquer previso realstica na ausncia de novos estudos. Transferncia horizontal em bactrias Estudos comprovaram que a recombinao e a transferncia horizontal entre bactrias aceleram a disseminao de regies genmicas destes organismos causadores de doenas, bem como a disseminao de genes de resistncia a antibiticos (Ho et al., 1998). bem conhecido o exemplo da estreptomicina em sunos. Aps um ano de aplicao deste antibitico em animais (1983), genes de resistncia estreptomicina estavam presentes em bactrias que viviam na garganta e estmago dos sunos. Um ano mais tarde, bactrias humanas dos familiares que lidavam com estes animais tambm apresentaram resistncia estreptomicina. Esta uma prova inequvoca de transferncia lateral de genes entre bactrias. Em 1990, este antibitico foi praticamente retirado de circulao porque j no era mais efetivo. A maioria das plantas transgnicas desta primeira gerao de OGMs contm genes de resistncia a antibiticos, cuja funo possibilitar a seleo das clulas transformadas. Embora a freqncia de transformao e, conseqentemente, a transferncia horizontal em bactrias seja extremamente baixa, os genes de resistncia a antibiticos inseridos em plantas transgnicas podero ser transferidos para bactrias humanas, o que se constitui num risco a ser considerado. A relao entre os genes de resistncia a antibiticos e a sade humana est no fato de que nos ltimos 20 anos, mais de 30 novas doenas ocorreram na espcie humana (AIDS, ebola e hepatites, entre outras). Alm disso, houve o ressurgimento de doenas como a tuberculose, a malria, a clera e a difteria com muito mais agressividade por parte dos microrganismos patognicos. Paralelamente, houve um decrscimo na eficincia dos antibiticos. Nos anos 40, um antibitico tinha uma vida til de 15 anos. Nos anos 80, a vida til passou para cinco anos, ou seja, trs vezes menos (Ho et al., 1998). A transferncia horizontal de material gentico entre diferentes bactrias relativamente comum. Sendo assim, o desenvolvimento de OGMs sem genes de resistncia a antibiticos pode evitar os riscos acima mencionados. Ameaas diretas aos componentes da biodiversidade As ameaas aos componentes da biodiversidade so mltiplas, pois, em um ecossistema devem ser considerados no somente os organismos vivos, mas tambm os processos ecolgicos. Um trabalho que causou grande impacto na comunidade cientfica avaliou o efeito do plen de milho transgnico em lagartas da borboleta monarca (Danaus plexippus). A taxa de mortalidade destas lagartas atingiu 44% quando se adicionaram ao seu alimento natural folhas de Asclepias curassavica, plen de uma variedade de milho transgnico, que contm um gene de Bacillus thuringiensis (Bt) que codifica para uma toxina, que txica a vrios insetos. Entretanto, todas as lagartas que receberam plen de milho no-transgnico ou nenhum plen, sobreviveram (Losey et al., 1999). O trabalho recebeu crticas metodolgicas, porm, um ano depois, resultados semelhantes foram obtidos em experimentos no campo. Neste caso, o plen das variedades de milho transgnicas KnockOut (evento 176) e YieldGard (Bt 11), ambos da Novartis Seeds, tambm provocou mortalidade (Hansen Jesse e Olbrycki, 2001). Tambm se conhece pouco sobre as possveis alteraes na associao entre plantas e fungos micorrzicos. O primeiro estudo sobre os exudatos na rizosfera de plantas transgnicas foi publicado recentemente (Saxena et al., 1999). Nesse trabalho observou-se 69

que as toxinas inseticidas Bt podem permanecer ativas no solo, onde se ligam a argila e cidos hmicos. Mesmo ligadas a estes componentes do solo, as toxinas mantm suas propriedades inseticidas e so protegidas contra a degradao por microrganismos porque esto ligadas s partculas do solo, onde podem persistir por pelo menos 234 dias. Quais so as implicaes destes fatos? Uma reviso recente feita por Wolfenbarger e Phifer (2000) assinala nove estudos focalizados no perigo de variedades transgnicas sobre organismos no alvo, incluindo os j mencionados. Em um tero deles, nenhum efeito negativo foi observado nas caractersticas avaliadas. Os resultados revelaram que as variedades transgnicas causaram maior mortalidade e diminuram a viabilidade de ovos e a longevidade dos adultos de insetos no alvos, alm de diminuir a diversidade bacteriana na rizosfera. Como conseqncia, a taxa de decomposio dos restos culturais e dos nveis de carbono e nitrognio poder diminuir e afetar a fertilidade do solo. Assim, a produtividade dos cultivos poder decrescer em face da diminuio da diversidade dos microrganismos de solo. Um dos aspectos relevantes na atualidade a preservao da identidade do produto como requisito de qualidade. No se trata apenas de segregao, mas de manter a identidade de um produto desde sua origem at o consumo. Contudo, na agricultura, esta preservao de identidade est longe de ser atingida. Nem a segregao simples pode ser garantida, mesmo por pases como Estados Unidos. ilustrativo o caso do milho transgnico StarLink (da Aventis CropScience) um tipo de Bt que contm o gene Cry9C, aprovado pela Environmental Protection Agency (EPA) para alimentao animal mas no para consumo humano. Este milho contm uma protena (Cry9C) que pode causar reaes alrgicas em humanos, uma vez que ela no foi quebrada imediatamente nos testes de digesto. Tanto gros quanto subprodutos foram misturados com gros no-transgnicos, conforme anlise de produtos alimentcios de consumo humano. Alm disso, houve tambm a contaminao de colheitas que deveriam ser no-transgnicas devido disseminao do plen. No s o cultivo de variedades melhoradas no-transgnicas, mas a agrodiversidade, que pode ser definida como a diversidade de espcies agrcolas, composta de variedades crioulas mantidas pelos agricultores, tambm pode ser ameaada pelo cultivo dos transgnicos. Na anlise dos riscos est sendo ignorada uma realidade fundamental: o plen de milho pode ser carregado pelo vento at 9,6 km. Segundo o professor Walter Fehr, melhorista da Iowa State University, "no somente o que voc faz. tambm o que seu vizinho faz", ressaltando que agricultura vizinhana, quando se trata de identificao, segregao e rotulagem de cultivos transgnicos. Com esta mobilidade do plen, uma simples lavoura de transgnicos pode contaminar vrias outras no-transgnicas, numa rea relativamente grande. Como decorrncia, separar os agricultores em duas classes, uma que produz transgnicos e outra que no os cultiva, no ajuda muito (Washington Bureau, 01/10/2000). Este alerta corroborado por vrios episdios de contaminao de lavouras de milho com plen de milho transgnico. Alguns destes casos esto sendo analisados pela justia americana. Em diversos municpios do Sul do Brasil, esto sendo organizadas anualmente Feiras de Sementes. Na segunda edio de uma delas, realizada em 15 de julho de 2000 em Porto Unio (PR), 49 representantes de comunidades situadas em 13 municpios expuseram amostras de 41 variedades crioulas de milho e 46 de feijo, para citar apenas duas das 51 espcies identificadas na referida feira. Surpreendentemente, formas de teosinte tambm so mantidas pelos agricultores daquela regio. Assim como esta, uma ampla diversidade de espcies e formas dentro de espcies exposta ano a ano nestas feiras de sementes. Ensaios com variedades crioulas feitas por tcnicos da Emater/RS, em David Canabarro, revelaram que seu potencial chegou a mais de seis toneladas por hectare (Dados no publicados). Alm do rendimento, estas variedades crioulas contm uma ampla gama de caractersticas, com alta variabilidade gentica, estando continuamente submetidas ao processo evolutivo e gerando, anualmente, novas recombinaes. Esta agrodiversidade deve ser considerada nas avaliaes de riscos ambientais. O mnimo que se pode fazer informar

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aos agricultores o que poder acontecer com seus materiais, caso transgnicos sejam cultivados nas proximidades e levar em considerao a opinio deles. Nas regies de ocorrncia natural de alta diversidade gentica de uma espcie ou espcies afins, como o caso de algodo ou amendoim no Brasil, o cultivo de plantas transgnicas destas espcies merece anlise mais rigorosa. No Mxico, por exemplo, ainda no foi liberado o cultivo comercial de milho transgnico, devido existncia de extensas reas com populaes ancestrais e parentes silvestres da espcie. O Brasil ainda bero de vrias espcies cultivadas ou apresenta regies com alta variabilidade gentica nas populaes crioulas ainda em cultivo, situao esta que requer muita cautela. Como avaliar adequadamente este tipo de risco sem dvida um grande desafio. A determinao de riscos de plantas transgnicas que contm inseticidas complexa. No se conhece ainda profundamente o efeito destas sobre insetos ou outros organismos benficos. Tampouco, os poucos estudos sobre pssaros ou outros animais que se alimentam de insetos que se alimentam de plantas transgnicas no proporcionam um conhecimento amplo do assunto. Riscos socioeconmicos, com nfase na agricultura Dentre eles, os mais relevantes seriam o aumento da populao de pragas e microrganismos resistentes e/ou patognicos, o aumento ou promoo de plantas daninhas resistentes a herbicidas, a contaminao de variedades crioulas mantidas pelos agricultores, a contaminao de produtos naturais como o mel, a diminuio da diversidade em cultivo com o aumento da vulnerabilidade gentica, a dependncia dos agricultores a poucas empresas produtoras de sementes, produtividade e os preos ainda indefinidos. Um fato inquestionvel: os insetos que hoje so susceptveis ao Bt, no futuro, sero resistentes ao Bt. Resta saber em quanto tempo. Se houver uma grande rea plantada com variedades transgnicas resistentes a um inseto, somente os resistentes sobrevivero, gerando prognies recombinantes, que eventualmente apresentaro maior nvel de resistncia toxina. Aps vrios ciclos de recombinao, devero aparecer insetos resistentes ao gene Bt. No caso de esta resistncia ser condicionada por genes dominantes, a velocidade do aumento da freqncia dos alelos de resistncia extraordinariamente maior, comparativamente quela observada para alelos recessivos (Figura 8; Crow, 1986). Com isto, cria-se uma superpraga, como j ocorreu com o uso de agrotxicos. O fato de que a resistncia da lagarta European corn borer (Ostrinia nubitalis) s formulaes comerciais de Bt (ex: Dipel) seja controlada por um gene parcialmente dominante (Huang et al., 1999) indica que o sistema de refgio s ser efetivo por poucos anos, porque a maioria da prognie dos insetos ser resistente toxina e, portanto, atacar as variedades Bt. O que de fato acontecer com a freqncia dos insetos resistentes, alvos e no-alvos, nas condies brasileiras, difcil de prever.

Figura 8. Evoluo da freqncia de um alelo de resistncia (p) quando recessivo (h=1), dominante (h=0) ou quando existe co-dominncia. (h=1/2). Para esta simulao, o indivduo deve estar sob presso de seleo e o coeficiente de seleo deve ser igual a 1, ou seja, no caso de insetos susceptveis, eles morrem aps se alimentarem de tecidos de uma planta que contm a 71 toxina de Bt por exemplo. Para aquelas pragas cujos genes de resistncia s toxinas so recessivos, o aumento da freqncia ocorrer lentamente. O contrrio ocorrer com aquelas pragas que carregam genes dominantes para a resistncia (Adaptado de Crow, 1986).

O sistema de refgio apregoado como uma prtica de manejo, que retardaria o aumento na freqncia de insetos resistentes, consiste no cultivo de uma pequena faixa com variedades susceptveis, o que permitiria o acasalamento entre insetos susceptveis e resistentes. Uma das premissas para que o sistema seja duradouro, que a resistncia dos insetos toxina Bt deve ser recessiva. Em caso contrrio, rapidamente os alelos de resistncia sero prevalentes. Com o aumento rpido da freqncia de insetos resistentes ao Bt, o uso atual de formulaes comerciais base de Bt em lavouras orgnicas fica comprometido, como tambm a produo de produtos com este tipo de inseticida, considerado muito menos txico que os demais. O aumento dos custos de produo j uma realidade em vrios pases. Na China, por exemplo, a estratgia de refgio para algodo Bt transgnico no foi empregada pelos agricultores. Como resultado, as pragas secundrias se tornaram importantes e o custo com inseticidas aumentou a tal ponto de que a rentabilidade das tecnologias convencional ou transgnica se equivalem cinco anos aps sua implementao (Wang et al., 2006). O aumento do uso dos agrotxicos nos cultivos transgnicos foi decorrente da alterao do status de algumas pragas que eram secundrias e passaram a ser primrias e predominantes. Sobre a rpida evoluo de pragas secundrias tornarem-se primrias na China, a empresa atribui o fato inexistncia de um programa de manejo de insetos. Segundo o mesmo artigo, em certas regies da China, o custo com inseticidas em lavouras de algodo Bollgard aumentou a tal ponto que a rentabilidade das tecnologias convencional ou transgnica se equivaleram cinco anos aps sua implementao. A soja RR tambm est perdendo a competitividade no Brasil. Pela primeira vez, os produtores de soja convencional tiveram mais rentabilidade do que os de soja transgnica. A Confederao Nacional da Agricultura (CNA) revelou que, este ano, a comercializao da saca de soja convencional dever render ao produtor R$ 0,27 a mais do que a da convencional no Mato Grosso. A explicao para a inverso o aumento de 46,2% no preo do glifosato, principal herbicida utilizado na cultura. No Brasil, a Monsanto praticamente a nica empresa a comercializar o glifosato, com cerca de 90% do mercado. De acordo com a CNA, na Argentina, o produto custa entre US$ 2 e US$ 2,50 o litro, mas no Brasil, embora comercializado pela mesma empresa, chega a US$ 5 o litro. Por isso, os produtores preferem import-lo. Apesar do aumento do custo, vamos insistir na produo do transgnico. No podemos perder este mercado, porque h oportunidades para os dois produtos - disse Fbio de S Meirelles, da CNA. Com o aumento do preo, o custo de produo ficou extremamente alto - disse Meirelles. O preo do litro do glifosato no Mato Grosso passou de de R$ 8 para R$ 11,63 o litro na safra 2007/2008, o que gerou uma acrscimo de 23% nas despesas em lavouras transgnicas e de 14,3% nas convencionais. O resultado foi um aumento de 7,5% no custo operacional da soja geneticamente modificada e de 3,8% no da convencional. (Cludia Dianni Viviane Monteiro - Jornal do Brasil 19/12/2007) A transgenia tambm pode levar ao aumento de pragas de solo. Na cultivar transgnica de algodoeiro, Paymaster 1560 BG, resistente ao glifosato, observou-se um aumento na susceptibilidade ao nematide-das-galhas (Meloidogyne incognita Kofoid e White), quando comparado com o parental no-transgnico Paymaster 1560 (Colyer et al., 2000). Embora um nmero limitado de cultivares tenha sido avaliado, os dados demonstram diferenas na susceptibilidade ao nematide das galhas entre algumas cultivares transgnicas e seus parentais no-transgnicos. O resultado deste trabalho tambm indica a necessidade de estudos sobre a reao de plantas transgnicas s pragas e doenas antes da liberao para cultivo. A dinmica das populaes de microrganismos de solo tambm poder ser afetada pelo cultivo de plantas transgnicas. O uso de glifosato combinado ou no com outros herbicidas nas doses recomendadas sobre o cultivo de Soja RR apresentou maior incidncia 72

de fusarium nas razes uma semana aps a aplicao, comparativamente soja notransgnica que no recebeu (Kremer et al, 2000). Os testes que foram realizados no campo no perodo 1997-2000 revelaram que a freqncia de fusarium nas razes aumentou de 0,5 a 5 vezes entre a segunda e a quarta semana aps a aplicao dos herbicidas. O fusarium causa a sndrome da morte repentina (SDS) em soja. O artigo More "Funny" Honey, publicado no FOEE Biotech Mailout, aborda aquesto da perda de status do mel como alimento sadio e natural, como resultado da poluio causada pelos OGM. Anlises efetuadas no mel indicaram a presena de plen de canola transgnica tolerante a um herbicida. Este mel, coletado na Inglaterra em 1999 e analisado no Austrian Federal Laboratory em Vienna revelou a presena de DNA do gene de resistncia ao mesmo herbicida. Os apicultores do Canad tambm esto tendo problemas com a comercailizao do mel, pois anlises feitas na Europa detectaram contaminao com plen de canola de variedades transgnicas. Agora, diante das novas normas da Europa, os apicultores se sentem sem o menor poder de reao e os preos do mel (contaminado) despencaram. Ainda so desconhecidos outros efeitos dos transgnicos sobre as abelhas, pois isto depender das protenas codificadas pelos genes engenheirados. Contudo, dentre os trabalhos efetuados em abelhas com inibidores de proteases, cabe destacar um que demonstrou seus efeitos adversos quando abelhas foram alimentadas com acar contendo os referidos inibidores (Pham-Delgue M.-H., 1997). Este inibidores podero se converter em estratgias de resistncia a insetos, como j foi demonstrado em canola. Neste caso o efeito sobre abelhas poder ser grande. Entretanto, ainda no est clara a associao entre a concentrao dos inibidores e a magnitude dos efeitos. O autor verificou ainda que plen de canola e soja transgnicas encurtou o ciclo de vida e alterou comportamentos associados ao olfato e habilidade de apreender de abelhas melferas. Os resultados dos primeiros experimentos sobre os efeitos da incluso de derivados de OGM na rao animal feitos por pesquisadores independentes comeam a ser analisados. Segundo o jornal britnico The Guardian, de 04/11/2000, os pesquisadores Steve Kestin e Toby Knowles, da University of Bristol, verificaram que a mortalidade de frangos alimentados com milho transgnico foi praticamente o dobro (7,14%) comparativamente mortalidade de frangos tratados com milho convencional (3,57%). Os cientistas questionaram ainda os mtodos e concluses dos estudos da Aventis submetidos para anlise das autoridades britnicas visando liberao do milho transgnico. Contudo, estes resultados ainda devem ser validados cientificamente, pois este tipo de experimento deve ser efetuado para diferentes combinaes de nutrientes, raas e condies climticas. Em resumo, s ameaa a diversidade biolgica decorre da liberao de um OGM devido as propriedades do transgene ou de sua transferncia e expresso em outras espcies. A adio de um novo gentipo numa comunidade de plantas pode proporcionar vrios efeitos indesejveis: deslocamento ou eliminao de espcies no domesticadas, exposio de espcies a novos patgenos ou agentes txicos, poluio do pool gnico, eroso da diversidade gentica e interrupo da reciclagem de nutrientes e energia. As alternativas s plantas transgnicas - As principais demandas dos mais de seis milhes de pequenos agricultores familiares no Brasil, os quais, historicamente, ainda produzem a maior parte dos alimentos que chega mesa dos consumidores, no esto associadas necessidade das plantas transgnicas, mas, sim, necessidade de uma poltica agrcola e agrria que vise sustentabilidade e rentabilidade de suas atividades. Assim, a necessidade e a urgncia das plantas transgnicas para a agricultura brasileira uma falsa questo. importante mencionar que as plantas transgnicas desenvolvidas at o presente momento no atendem s necessidades da pequena propriedade familiar, ainda preponderante no pas. As evidncias cientficas da utilizao de plantas transgnicas com caractersticas de resistncias a herbicidas (por exemplo, RR) ou portadoras de biocidas (por exemplo, Bt) na produo de commodities agrcolas nas grandes propriedades revelam o aumento na freqncia de plantas invasoras e insetos resistentes aos transgenes, implicando a vida curta dessas tecnologias. Isto gerar demandas de novas tecnologias (variedades transgnicas e/ou agrotxicos), o que aumentar o grau de dependncia dos agricultores. A

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avaliao de risco deve necessariamente conter informaes sobre outras alternativas que poderiam ser utilizadas, bem como um comparativo entre os riscos das diversas solues. Assim, preciso avaliar simultaneamente alternativas sustentveis do ponto de vista agrcola e ambiental. Uma delas seria a agrodiversidade, termo empregado para definir a diversidade gentica (intra-especfica) e a diversidade de espcies (interespecfica) em cultivo nas propriedades agrcolas. Recentemente, pesquisadores chineses demonstraram que a heterogeneidade das culturas uma alternativa possvel vulnerabilidade das monoculturas s doenas. Observou-se que variedades de arroz susceptveis doena bruzone, cultivadas em mistura com variedades resistentes a esta doena, apresentaram 89% de acrscimo na produtividade e uma reduo de 94% de severidade dessa molstia comparativamente monocultura (Zhu et al., 2000). O sucesso dessa tcnica, que a simples mistura de diferentes variedades, foi to significativo que, no segundo ano, no foi necessria a aplicao de fungicidas. Os resultados mostraram que a diversificao intra-especfica das culturas proporciona um ambiente adequado para o controle de doenas que pode ser efetivo em grandes reas, podendo contribuir para a sustentabilidade da produo agrcola. O pas que detm a maior diversidade de espcies vegetais certamente deve ter um nmero de espcies comestveis e agricultveis capaz de proporcionar diferentes dietas balanceadas para as diferentes populaes, respeitando-se sua cultura e suas necessidades. Vitamina A ou caroteno, por exemplo, so encontrados em dezenas de espcies comestveis. O fato que as plantas transgnicas esto sendo consideradas como a nica maneira de aumentar a competitividade. Mas anlises comparativas com outras matrizes de produo agrcola ainda no foram feitas. A Pertinncia dos Estudos de Impacto Ambiental Embora a matria seja complexa, h o entendimento de que estes estudos so necessrios conforme determinam o artigo 225 da Constituio Federal, a Lei Ambiental e a Resoluo 237/97 do Conama, o que no teria sido observado pela Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana - CTNBio - no caso do pedido de liberao da Soja RR em 1998. Utilizando as competncias inclusas no art. 2 do Decreto 1.752, que diz no item XIV exigir como documento adicional, se entender necessrio, Estudo de Impacto Ambiental (EIA) e respectivo Relatrio de Impacto no Meio Ambiente (RIMA) de projetos e aplicao que envolvam a liberao de OGM no meio ambiente, alm das exigncias especficas para o nvel de risco aplicvel, a CNTBio decidiu pela sua no exigncia. Com base no artigo 225 da Constituio Federal, a sentena judicial exarada pelo Juiz Antonio Prudente exige o Estudo de Impacto Ambiental -EIA - acompanhado do Relatrio de Impacto no Meio Ambiente - RIMA - como condio indispensvel para o plantio em escala comercial da Soja RR. No bastasse isto, a Conveno sobre a Diversidade Biolgica - CDB - estabeleceu no Art. 14 que trata da Avaliao de Impacto e Minimizao de Impactos Negativos, que cada Parte Contratante, na medida do possvel e conforme o caso, deve estabelecer procedimentos relacionados com a avaliao de impacto ambiental de projetos que possam ter sensveis efeitos negativos na diversidade biolgica, a fim de evitar ou minimizar tais efeitos e, conforme o caso, permitir a participao pblica nesses procedimentos. Uma srie de perguntas relacionadas com as conseqncias da introduo em plantas de genes originados de outros organismos, incluindo os patognicos (como genes de vrus ou parte deles) ainda permanece sem resposta. Um dos desafios, ento, o estabelecimento de um conjunto mnimo de protocolos e termos de referncia que devero nortear os testes para a obteno de informaes adequadas durante a realizao da avaliao de riscos. Assim, a avaliao de riscos deve fazer parte do estudo de impacto ambiental de uma planta transgnica, como parte imprescindvel do pedido de licenciamento ambiental para atividades com OGMs.

10-PRINCIPIO DA PRECAUAO
importante ter em mente que a engenharia gentica opera com base na manipulao do DNA de organismos vivos. Esta interveno ocorre em mbito muito mais complexo do que 74

qualquer outra tecnologia j anteriormente aplicada. Esta tecnologia aplicada em um nvel de funcionamento da natureza a respeito do qual nossa base de conhecimento cientfico ainda insuficiente (Griffiths, 1999). Embora tenha havido avanos no conhecimento cientfico sobre os riscos associados ao cultivo de plantas transgnicas, o desenvolvimento da tecnologia de OGM ainda se baseia em processos do tipo tentativa e erro, portanto, imprecisos e pouco cientficos. Assim, os cientistas tm poucas condies de prever o comportamento do novo gene no organismo hospedeiro, sendo inadequado caracterizar-se a transgenia como science-based technology. Em suma, a engenharia gentica encontra-se em seu estgio bsico de pesquisa e cincia, sendo ainda prematura a liberao comercial de plantas transgnicas (Guerra e Nodari, 1999). Desta forma, assume importncia a adoo do Princpio da Precauo, estabelecido em acordos internacionais, como um princpio tico que afirma que a responsabilidade pelas futuras geraes e pelo meio ambiente deve ser combinada com as necessidades antropocntricas do presente. Adotado no prembulo da CDB-, o Princpio da Precauo destaca que quando exista ameaa de sensvel reduo ou perda de diversidade biolgica, a falta de plena certeza cientfica no deve ser usada como razo para postergar medidas para evitar ou minimizar essa ameaa. Assim, a adoo do Princpio da Precauo, se constitui em alternativa concreta a ser adotada diante de tantas incertezas cientficas. Desta associao respeitosa e funcional do homem com a natureza, surgem as aes antecipatrias para proteger a sade das pessoas e dos ecossistemas. Este princpio deve guiar as atividades humanas, mas incorpora outros atributos, como justia, equidade, respeito, senso comum e preveno (Raffensperger e Tikner, 1999). Tambm, este princpio admite que a adoo de cautela poderia evitar conseqncias danosas que, eventualmente, um OGM possa apresentar como resultado de sua liberao apressada ao meio ambiente. As avaliaes, ainda iniciais, dos impactos ambientais potenciais, podem permitir uma deciso balanceada entre os possveis benefcios e a extenso e irreversibilidade dos danos e riscos. importante que a toxicidade ambiental relativa seja incorporada na anlise das mudanas de padres de uso e quantidade de pesticidas, e que os impactos das culturas tolerantes a herbicidas na conservao do solo sejam quantificados. Por outro lado, devem ser tomadas medidas que possam prevenir a transferncia de genes para populaes selvagens, bem como reduzir a evoluo da resistncia aos transgenes. Como concluem Wolfenbarger e Phifer (2000), tanto os riscos quanto os benefcios dos OGM podem variar temporal e espacialmente e devem ser analisados caso a caso. A elucidao destes riscos e benefcios dos OGM envolve a necessidade de estudos comparativos com outros sistemas e prticas agrcolas, tais como a agricultura orgnica. Nossa capacidade de predizer os impactos ecolgicos de espcies introduzidas, incluindo OGM, imprecisa e os dados empregados para avaliar impactos ecolgicos potenciais apresentam limitaes. Esta inabilidade de predizer acuradamente as conseqncias ecolgicas, especialmente no longo prazo, aumentam a incerteza associada avaliao de riscos, exigindo modificaes nas estratgias de manejo destes riscos. O intrigante neste momento de crise no uso das biotecnologias ditas modernas que muitos dos riscos potenciais previamente anunciados esto de fato ocorrendo. Em 1989, Tiedje e colegas, e Pimentel e colegas mencionaram que os principais riscos potenciais dos OGM ao meio ambiente seriam: criao de novas pragas e plantas daninhas e um aumento das pragas j existentes por meio da recombinao gnica entre a planta transgnica e outras espcies filogeneticamente relacionadas; a produo de substncias que so ou poderiam ser txicas a organismos no-alvos; o efeito disruptivo em comunidades biticas e o desperdcio de valiosos recursos genticos, seguido de contaminao de espcies nativas com caractersticas originadas de parentes distantes ou de espcies no relacionadas e efeitos adversos em processos dos ecossistemas e origem de substncias secundrias txicas aps a degradao incompleta de qumicos perigosos. Trabalhos publicados confirmaram os dois primeiros. Quanto aos dois ltimos h a necessidade de estudos. O Principio da Precauao est estabelecido no artigo 1 da nova lei de biossegerurana. Portanto obrigao de todos os brasileiros observarem.

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11. ROTULAGEM
A rotulagem dos alimentos est prevista no Cdigo de Defesa do Consumidor (Lei n 8.078, de 11/09/90 art. 6 III e art. 8 Trata-se ento de uma norma, que garante ao , ). cidado ser informado sobre um produto, o que lhe permite o direito de escolha. Alm disso, a rotulagem permite a rastreabilidade, pois em casos de efeitos na sade humana, os produtos rotulados seriam facilmente identificados e recolhidos. No Brasil, a fiscalizao sobre a rotulagem est a cargo da Vigilncia Sanitria. Contudo, a deciso e mesmo o contedo e outras caractersticas do rtulo, est no mbito do Ministrio da Justia. O Decreto n 4.680, de 24 de abril de 2003, regulamenta o direito informao, assegurado pela Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1990, quanto aos alimentos e ingredientes alimentares destinados ao consumo humano ou animal que contenham ou sejam produzidos a partir de organismos geneticamente modificados, sem prejuzo do cumprimento das demais normas aplicveis. Na comercializao de alimentos e ingredientes alimentares destinados ao consumo humano ou animal que contenham ou sejam produzidos a partir de organismos geneticamente modificados, com presena acima do limite de um por cento do produto, o consumidor dever ser informado da natureza transgnica desse produto. Tanto nos produtos embalados como nos vendidos a granel ou in natura , o rtulo da embalagem ou do recipiente em que esto contidos dever constar, em destaque, no painel principal e em conjunto com o smbolo a ser definido mediante ato do Ministrio da Justia, uma das seguintes expresses, dependendo do caso: "(nome do produto) transgnico", "contm (nome do ingrediente ou ingredientes) transgnico(s)" ou "produto produzido a partir de (nome do produto) transgnico". O consumidor dever ser informado sobre a espcie doadora do gene no local reservado para a identificao dos ingredientes. A informao tambm dever constar do documento fiscal, de modo que essa formao acompanhe o produto ou ingrediente em todas as etapas da cadeia produtiva. A rotulagem consitui-se em: NECESSIDADE DE SABER - A rotulagem plena um requisito fundamental e imprescindvel para se estabelecer uma efetiva vigilncia dos alimentos contendo OGMs e seus derivados. DIREITO DE SABER Direito previsto no Cdigo de Defesa do Consumidor. O tipo de gene inserido, os aspectos religiosos e os valores culturais e pessoais devem ser considerados. CONVENINCIA DE SABER um requisito que considera o quantitativo de ADN e de protena recombinante no produto final (Ex: acima de 1%). Em termos de sade pblica, tudo tem que ser rotulado, no importa quanto tem dentro da embalagem. A nvel internacional, existe um Grupo de Trabalho de Rotulagem que foi encarregado de preparar uma verso preliminar a ser discutida na reunio do Codex Alimentarius. Tomando-se em considerao o que houve na Conferncia de Partes da CDB, pode ser que ainda no ano de 2000, a reunio do Codex tambm aprove as normas internacionais de rotulagem dos alimentos transgnicos ou que contenham ingredientes de OGMs.

12. O CASO DA SOJA TRANSGNICA RESISTENTE AO HERBICIDA ROUNDUP

O pedido de desregulamentao de soja transgnica que a Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio) analisou, merece uma reflexo profunda por parte da sociedade brasileira. Com a liberao para plantios comerciais da Soja RR (Roundup Ready), todas as variedades contendo o gene cp4 epsps, que condiciona resistncia ao herbicida glifosate, estaro livres para registro, uso, ensaios, plantios, transporte, armazenamento, comercializao, consumo, importao, liberao e descarte. O glifosate, princpio ativo do herbicida Roundup, controla plantas daninhas atravs de seu efeito inibitrio sobre a enzima 5-enolpiruvato-chiquimato-3-fostato-sintase (EPSPS). Esta enzima catalisa uma reao na cadeia de biossntese dos amino cidos aromticos (como 76

fenilalanina, triptofano e tirosina) em plantas e microrganismos. Esta cadeia est ausente em animais, peixes e aves. Existem vrias questes no processo de liberao sem informaes ou com informaes incompletas ou no inequvocas Assim, no informado no referido processo: 1) o nome completo da espcie doadora do gene cp4 epsps, 2) a sequncia de nucleotdeos da construo quimrica presente nas linhagens transgnicas, 3) os possveis efeitos pleiotrpicos da construo quimrica inserida, 4) a toxicidade para a espcie humana, 5) o efeito da aplicao do glifosate na planta, 6) o cultivo do cultivo desta soja transgnica mais glifosato na diversidade biolgica do ambiente e 7) os riscos de transferncia horizontal de genes. Tais informaes so exigidas pelas Instrues Normativas da prpria CTNBio. Tambm no informado no processo sobre o efeito do transgene no processo de fixao simbitica do nitrognio intermediado pelo Rhizobium. Tampouco no h informao sobre o impacto do cultivo destas variedades transgnicas na microbiota dos solos brasileiros. Outras questes tcnicas foram formuladas a CTNBio por vrias organizaes civis brasileiras aguardam respostas. Mas o mais grave relaciona-se com a qualidade dos poucos dados apresentados. Assim, os poucos testes so de curta durao e insuficientes. Por exemplo: no h uma anlise profunda sobre alergenicidade ou reaes imunolgicas. Alm disso, os resultados apresentados a CTNBio so oriundos da Soja RR sem a aplicao do Roundup. O que ocorre com o Rloundup ou seu efeito na alimentao humana via gros com resduos do referido herbicida ainda so desconhecidos. Alm disso, trabalhos cientficos publicados indicam que os produtos comerciais a base de glifosato se acumulam no solo, so prejudiciais a peixes e a ratos. Tais trabalhos demonstraram ainda que o referido herbicida prejudicial a minhocas e insetos, alm de causar problemas reprodutivos em ratos. Na verdade, o processo no informa sobre a degradao do herbicida nos diferentes solos e regies brasileiras onde esta espcie cultivada. Um fato grave que omitido no processo trata-se das reaes txicas que o herbicida poderia causar na espcie humana, sendo que na Califrnia, a terceira causa mais frequente de reaes txicas. A questo saber se estas novas variedades intensificam ou no a alergia, uma vez que trs protenas associadas a reao alrgica j foram identificadas em outros gentipos de soja. Contudo, o efeito mais drstico na sade humana a forte associao entre a exposio prolongada a este agrotxico e um aumento de risco de um cncer do tipo linfoma non-Hodgkin (Hardell e Eriksson, 1999). Roundup tambm inibe a sntese de esterides atravs da interrupo da expresso da protena StAR (Walsh et al., 2000), causando distrbios reprodutivos em mamferos. O fato de que estas plantas transgnicas foram aprovadas nos Estados Unidos no significa que elas no impem riscos. Ao contrrio, pois naquele pas adotado o princpio da equivalncia substancial. Anlises em rgos internos, caractersticas reprodutivas ou testes com a espcie humana no foram realizados. Portanto, os dados so insuficientes do ponto de vista cientfico, para subsidiar a anlise da segurana ambiental e alimentar. Em havendo poucos dados, no h o que afirmar em relao aos riscos. O que de fato ocorreu foi que a CTNBio tomou a ausncia de evidncias como a evidncia da ausncia de riscos. E isto tem sido considerado um equvoco muito grande.

12. IMPLICAES SCIO-ECONMICAS

O desenvolvimento de um OGM tem um custo elevado o que significa dizer que um pequeno nmero de empresas, que dispe de capital e tecnologia, est conseguindo produzir plantas ou animais transgnicos, para serem cultivados ou criados em escala mundial. No caso de plantas nos Estados Unidos, as variedades transgnicas fazem parte de um pacote, pois se uma variedade de soja resistente a um herbicida, o agricultor obrigado, por fora de contrato, a usar o herbicida produzido pela mesma empresa. Desta forma, a dominao tecnolgica levar aos pases perifricos a uma dependncia na produo de alimentos, o que de fato uma questo de segurana nacional. O alto retorno econmico, devido ao efeito de escala, proporcionar um novo salto destas empresas, com as quais dificilmente as empresas nacionais ou mesmo instituies 77

podero competir. No se descarta a hiptese de que a maioria dos programas de melhoramento no pas ou sero absorvidos pelas grandes empresas multinacionais ou fecharo. Do ponto de vista comercial, j existem fatos concretos relacionados aos transgnicos. Assim, grandes cadeias de supermercados na Europa (Ex: ASDA na Inglaterra e Carrefour na Frana) esto banindo de suas prateleiras produtos transgnicos ou produtos feitos com materiais transgnicos. Recentemente, a Austrlia, que ainda no cultiva canola transgnica, teve uma encomenda especial a maior exatamente por no ser transgnica. Algumas cooperativas brasileiras esto tentando estabelecer comrcio com pases Europeus e Japo para garantir o envio de soja no transgnica, j que estes pases assim a preferem. Embora j existam indcios fortes de algum prmio a ser pago a maior por organismos no transgnicos (varivel de 5 a 20%, para a safra de soja de 2000), ainda cedo para prever o que acontecer no futuro. Das liberaes para cultivo comercial, alguns produtos transgnicos esto com problemas de comercializao. O tomate FLAVR SAVR, o primeiro transgnico a ser cultivado em larga escala, foi retirado de mercado no hemisfrio norte em 1999, face ao sabor inferior (gosto de verde, mesmo quando maduro) ao no transgnico, a problemas de processamento e desinteresse pelo consumidor. A safra de milho Bt americana est sem comercializao garantida, uma vez que vrios compradores de porte significativo (como cervejarias japonesas, empresas processadoras de alimentos, etc) no querem utilizar os transgnicos em seus produtos, o que est causando a reduo no preo do milho Bt transg6enico. A contaminao de milhos Bt ou no transgnicos com o Starlink tambm gerou cancelamentos de compra de milho americano, principalmente por pases asiticos. Segundo estimativas da associao de produtores americanos de milho, a safra de milho Bt transgnico do ano 2000 foi inferior a de 1999. A soja transgnica tambm enfrenta resistncia por parte dos consumidores. Este fato levou a empresas compradoras de gros a exigirem a segregao das sementes e um prmio a soja no transgnica. A liberaao da soja RR est prejudicando quem nda ter a ver com isso: os produtores orgnicos. Abaixo est o relato de um entre centenas de casos j comprovados. Dedicado ao cultivo de produtos orgnicos, sem agrotxicos e com sementes naturais, por mais de 30 anos, o agricultor Max Enro Dockhorn, de 73 anos, desistiu, no ano passado, da lavoura de soja que mantinha em uma rea de 70 ha no municpio gacho de Trs Passos. "Na safra de 2005 para 2006 perdi metade da minha produo orgnica. No momento de vender, testes identificaram protena transgnica na minha soja", conta Dockhorn, desapontado com os meses de dedicao lavoura. Alm da perda de valor, que superava os 10 reais por saca, ele teve de pagar royalties por ter sido acusado de usar sementes transgnicas. ...bastou que, ao redor de minha propriedade, outros produtores usassem sementes transgnicas para haver a contaminao". Os riscos da omisso, Revista Carta Capital, p.22-29, 18/07/2007

11-PERCEPO PBLICA
Embora est ocorrendo um aumento da discusso na sociedade, a questo das plantas e animais transgnicos quase que desconhecido da maioria da populao brasileira. Tambm para a maioria das pessoas que tm um diploma de ensino superior, estes tpicos so indecifrveis. preciso ento desenvolver aes junto a populao no sentido de desconstruir esta novidade. Para tal, a mdia bem como os cientistas tm um papel preponderante, se engajados num processo educativo, sem paixes ou crenas. H a necessidade do envolvimento de pessoas que tm conhecimento sobre o assunto de participarem sem preconceitos ou interesses alm daquele de desconstruir este assunto complexo. Inmeras ONGs esto envolvidas na discusso desta questo. Dias globais de ao contra a Biotecnologia foram organizados. Contudo, nem tudo o que dito ou escrito tem base 78

cientfica ou tcnica. Um posicionamento pessoal com base em crenas pode levar o processo ao descrdito. Vrios pases realizaram pesquisas de opinio publica. Existem diferenas bastante expressivas entre as populaes de diferentes pases com relao a aceitabilidade de produtos transgnicos. Enquanto na ustria, Luxemburgo e mesmo Inglaterra a maioria da populao rejeita, os japoneses manifestam-se favorveis ao consumo destes produtos. Mas querem que o produto seja sadio e seguro. Em 1998, a Sua realizou um plebiscito para decidir se o pas deveria banir ou no os produtos transgnicos em seu territrio. Entre os votantes, um tero optou pela banio. A rigor, na maioria dos pases europeus, a rejeio aos alimentos transgncos superior a 80%. A questo da transgenia causa profunda perplexidade nas pessoas por vrios motivos. Em primeiro lugar, a passagem da doena da vaca louca do alimento para as vacas e destas para as pessoas ocorreu de fato, embora cientistas e polticos afirmaram que isto no iria ocorrer. Um outro aspecto que a tcnica muito poderosa e isto assusta as pessoas. O homem pode reprogramar o cdigo gentico e as pessoas no tm idia das consequ6encias disto. Um outro aspecto est relacionado com o tipo de produtos. Os primeiros transgenes diminuem a qualidade dos alimentos. Os consumidores querem algo melhor. As pessoas reagem de maneira diferente. A maioria boicota as compras. Outras praticam atos de sabotagem nas reas cultivadas com variedades transgnicas. Tanto na Irlanda quanto na Inglaterra, dezenas de propriedades tiveram suas lavouras destrudas ou altamente danificadas por grupos contrrios a biotecnologia. No Brasil, os debates pblicos sobre a transgenia e suas conseqncias desde 1998 vm possibilitando o conhecimento da questo pela sociedade. Mas o fato que, a maioria da populao ainda no est suficientemente informada, nem mesmo tem conhecimento suficiente para entender e opinar a respeito de plantas transgnicas. Da a responsabilidade inadivel do poder pblico, das universidades e dos tcnicos de prestar este tipo de servio populao brasileira. Os consumidores brasileiros, na sua grande maioria, tambm no querem consumir alimentos transgnicos conforme pesquisas efetuadas neste ms de julho de 2000 pelos jornais O Globo (72%), Correio Brasiliense (70%) e Gazeta Mercantil (60%). O International Rice Research Institute (IRRI), que co-patrocina o arroz dourado (transgnico para produzir vitamina A), fez uma pesquisa de opinio pblica agora em 2001 perguntando: voc comeria arroz que foi geneticamente modificado? Dos 1815 entrevistados, 76,97% responderam que no. TICA E TRANSGENTICA Na maior parte dos casos de liberao de plantas transgnicas predominou o interesse comercial destas grandes empresas. Isto pode ser comprovado pelas investidas frequentes do governo americano junto aos pases europeus e Japo. Para citar apenas um exemplo, os EUA atacaram a Comisso Europia que havia decidido pela rotulagem dos produtos transgnicos, em junho de 1997, argumentando que isto contrariava o livre comrcio. Na poca Dan Glickman, Secretrio da Agricultura, disse que os Estados Unidos no tolerariam a segregao de produtos geneticamente modificados dos tradicionais. A resposta americana pode ser exemplificada pela atitude da companhia Monsanto que misturou os gros transgnicos com no transgnicos, obrigando os europeus a comprarem apenas o bulk com a mistura. Mais recentemente, devido s restries no comrcio de alguns produtos transgnicos, algumas empresas americanas esto decididas a segregar e rotular os produtos. Este fato demonstra que a sociedade tem a fora necessria para intervir no processo de apropriao

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do conhecimento e sua utilizao comercial. O consumidor se tornou um componente extremamente importante no processo de liberao comercial destes produtos. Em junho de 1999, Ministros do Meio Ambiente dos pases Europeus, decidiram que cada estado membro poderia solicitar estudos adicionais para a liberao de plantas transgnicas. Isto na prtica se constitui numa moratria branca, pois dependendo do estudo, vrios anos sero necessrios para a obteno de dados. De fato, j so praticamente dois anos sem nenhuma nova aprovao de alimento transgnico no Europa. Um dos impactos menos discutidos no mbito da transgenia em plantas refere-se dependncia tecnolgica dos agricultores ao grande complexo industrial-gentico, expresso utilizada por Berlan e Lewontin (1999) para designar as grandes empresas transnacionais do setor biotecnolgico, que nos ltimos 20 anos passaram a atuar de forma agressiva na apropriao dos recursos genticos. Em seu artigo publicado no Le Monde Diplomatique (janeiro de 1999), os referidos autores apresentam e discutem quatro argumentos sobre a apropriao dos recursos genticos vegetais por parte deste complexo gentico-industrial, cuja sntese pode ser assim descrita: 1) A riqueza das variedades agrcolas foi criada por agricultores de todo o mundo, em especial aqueles do terceiro mundo. A domesticao e a seleo feita por agricultores por milhares de anos gerou uma herana biolgica que beneficiou as naes industrializadas. A agricultura norte-americana, por exemplo, foi construda em cima desses recursos, livremente importados do resto do mundo. No justo que poucas companhias agora se apropriem dessa herana biolgica universal. 2) O aumento (sem precedentes) nas colheitas do mundo industrializado, assim como do terceiro mundo, pode ser atribudo ao livre movimento de conhecimento, aos recursos genticos e pesquisa pblica. As colheitas aumentaram cinco vezes em duas geraes, depois de serem necessrias 15 geraes anteriores para esta colheita dobrar. Na dcada de 70, quase todos os hbridos norte-americanos de milho resultaram do cruzamento de duas linhagens, originadas de programas de melhoramento de universidade pblicas. 3) A experincia mostra que o custo de privatizar o progresso gentico e ser exorbitante. Estudos feitos na Frana pelo Institut National de la Recherche Agronomique (INRA), mostram que o custo adicional das sementes de trigo hbrido equivale a US$ 500 milhes (oramento do INRA) para um ganho gentico que poderia ser mais facilmente obtido usando-se variedades crioulas produzidas pelos agricultores. 4) Desistir dos direitos sobre essa herana significa liberar o complexo gentico-industrial para direcionar o progresso tecnolgico unicamente para os lucros. Da forma como a questo vem sendo conduzida pelas grandes empresas, no h uma demanda social para OGMs. O termo somente uma cortina de fumaa para as demandas desse complexo gentico-industrial. Como possvel perceber, so muitas as implicaes dessa tecnologia e estas precisam ser profundamente avaliadas, explicitadas e discutidas, pois do interesse de toda a sociedade a percepo clara dos seus possveis riscos e benefcios. A RELAO DA COMUNIDADE CIENTFICA COM O GOVERNO A investigao que ocorre na Inglaterra visando elucidar o veredicto final da comisso especialmente formada para aconselhar uma deciso do governo a respeito da vaca louca, est trazendo a tona, uma discusso a respeito da relao entre cientistas e governo. Em sua edio de 5 de agosto deste ano, a Revista Nature, alm de considerar o assunto em seu editorial, informa na pgina 490, que os membros do Spongiform Encephalopathy Advisory Committee (SEAC) foram pressionados por representantes governamentais no sentido de endossar um parecer sobre a segurana da carne. Membros da

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referida comisso declararam que foram procurados por membros de rgos governamentais que solicitaram-lhes a aprovao de um texto que a carne bovina era segura. Segundo o Presidente desta comisso, os membros se sentiram inconfortveis e apreensivos em ter que aprovar uma nota to curta. intrigante o fato de que as verses do parecer circulou por diversas autoridades inglesas para comentrios. A temeridade da reao pblica expressada por autoridades governamentais fez com que a comisso retirasse frases do parecer final tipo nenhum cientista diria que no haveria risco em comer carne bovina. A abdicao de se basear em dados puramente cientficos por parte de membros da comunidade cientfica quando convocada para aconselhar o governo, como est sendo constatado neste episdio, se constitui num perigo para a populao. O balano feito em maio de 2001 indicou que mais de 100 pessoas j morreram na Inglaterra e Frana, e que a doena j atingiu vrios pases europeus, tanto no gado quanto na espcie humana. O fato de que carne e gado europeu foram importados por outros pases nos ltimos anos, se constitui numa ameaa, pois os agentes infecciosos desta doena, os prions, podem ter sido disseminados. Esta relao entre cientistas membros de comisses governamentais e governo deve ser melhor definida. O recado vem da prpria populao, que j no acredita mais nas decises governamentais sobre questes que envolvem riscos sade e ao ambiente. Este fato no exclusividade da Inglaterra. A polmica em torno das implicaes dos alimentos transgnicos um exemplo notrio em vrios pases.. No Brasil, a aprovao para liberao comercial da soja transgnica pela Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio) tambm foi tomada de forma apressada? Algum paralelo com a Inglaterra? A deciso se deu sem os dados dos estudos de impacto ambiental nos diversos ecossistemas brasileiros e do efeito do herbicida a base de glifosate, que ser aplicado na referida soja, na sade humana e meio ambiente. Neste momento, cabe uma reflexo acompanhada de um conjunto de aes, a respeito do comportamento e das relaes entre cientistas e governo. Para evitar tais tipos de episdios como o da vaca louca, h a necessidade de uma definio clara do papel destas comisses, a forma de escolha, bem como transparncia nos trabalhos das mesmas. possvel rejeitar o princpio da precauo quando a populao corre risco? Devem os interesses maiores da populao no podem ser sobrepostos por interesses econmicos imediatos? O QUE SE ESPERA DOS PROFISSIONAIS DA BIOLOGIA? 1) uma atitude crtica e imparcial face aos riscos e s potencialidades; 2) uma atitude eticamente responsvel, engajada em acompanhar individual e publicamente os atos da biotecnocincia e em praticar tanto uma "sabedoria prudencial" quanto uma preveno eficaz; 3) obedincia as normas legais e precaucionrias. Como as naes e os grupos internacionais movem-se na direo do desenvolvimento ou evoluo das normas de biossegurana, essencial que existam mtodos cientficos para avaliar os riscos associados com as introdues na agricultura (Barton et al., 1997). O estado de valores do pesquisador to importante para a qualidade da cincia que produz quanto sua titulao, competncia metodolgica e capacitao tcnica (Azevedo, 1995). A biotica deve identificar racionalmente e responsavelmente as implicaes sociais e culturais das descobertas nas cincias da vida concernentes a sade, agricultura, alimentos, ambiente e estratgias de desenvolvimento. As aplicaes da biotecnologia no podem ser

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restritas a um territrio. Ento a biotica, inevitavelmente, tem uma dimenso internacional, o que no quer dizer que a dimenso nacional deve ser relegada (Kutukdjian, 1997). O paradigma biotico tem como princpio fundamental um tipo de solidariedade antropocsmica, que seja ao mesmo tempo dialgica, procedural, pragmtica, aberta aos afetos e evolutiva (Schramm, 1996). dever dos cientistas atuar como debatedores, decodificadores e facilitadores deste debate abrangente e polmico, atual e de extrema importncia para o pas. Anlises com bases em dados cientficos evitam a promiscuidade dos debates e permitem a distino entre cincia e crena. A NECESSIDADE DE UM DEBATE PBLICO COM A SOCIEDADE A ampla gama de implicaes que este tema dos OGM engendra, ultrapassa hoje os limites da cincia. As questes ticas, sociais, econmicas e polticas no podem estar dissociadas do tema e do eixo das discusses. Parte da sociedade comunga a percepo de que este assunto est sendo conduzido de forma inadequada, como demonstram protestos de grupos de presso e ONG. Esta percepo encontra respaldo nos episdios recentes da doena da vaca louca, entre outros. Portanto, o dilogo deve ser social e extrapolar as paredes dos laboratrios cientficos e gabinetes governamentais. Por fim, tambm preciso avaliar os impactos sobre o domnio no acesso e uso dos recursos genticos. Afirma-se, com freqncia, que o insumo mais importante para o novo milnio o conhecimento. As tecnologias decorrentes deste conhecimento podero acentuar assimetrias nas relaes econmicas e sociais entre as naes mais desenvolvidas e menos desenvolvidas, caso no forem estabelecidos mecanismos compensatrios e regulatrios. No se pode admitir que interesses econmicos de uma minoria se sobreponham aos interesses maiores da sociedade. Contudo, os recursos genticos no tero papel menos importante que o conhecimento. Biotecnologias sem diversidade so mero exerccio acadmico, como afirma um documento da FAO (1999). Desta forma, imperiosa a manuteno da diversidade bem como fundamental tomar as medidas para evitar as ameaas sua eroso gentica. CONCLUSES As sociedades secularizadas e complexas esto dispostas a renunciar aos benefcios da biotecnocincia? O fato que existem muitas biotecnologias e h a necessidade de avaliar individualmente a aplicao de cada uma delas nos mais diversos aspectos. importante ter em mente que a engenharia gentica opera com base na manipulao do DNA de organismos vivos. Esta interveno ocorre em um nvel muito mais complexo do que qualquer outra tecnologia j anteriormente aplicada. Esta tecnologia aplicada em um nvel de funcionamento da natureza a respeito do qual nossa base de conhecimento cientfico ainda insuficiente (Griffiths, 1999). Depois de quase 30 anos de desenvolvimento a tecnologia de OGM ainda se baseia em processos do tipo tentativa e erro, portanto imprecisos e pouco cientficos. Assim, os cientistas tm poucas condies de prever o comportamento do novo gene no organismo hospedeiro, sendo inadequado chamar-se esta tecnologia de science-based. Em suma, a engenharia gentica encontra-se em seu estgio bsico de pesquisa e cincia, sendo prematura a liberao comercial de plantas transgnicas.

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PARTE 4 LEGISLAO PERTINENTE

1-DIREITOS DE PROTEO E PATENTES
A proteo propriedade intelectual incide sobre criaes do intelecto humano, no abrangendo a descoberta de algo preexistente. Assim a patente a expresso legal do privilgio temporrio (explorao comercial) concedido pelo Estado pessoa fsica ou jurdica, pela criao de algo novo. Para ser patentevel o invento deve ser descrito de tal maneira que possa ser reproduzido por qualquer pessoa que tem competncia na arte. Alm disso a inovao deve ter uso prtico definido. Para obter a patente, a inveno deve ser tambm novidade. Uma criao mecnica nova quando ainda no foi divulgada publicamente. No caso de microrganismos, mesmo que identificados recentemente, existiu previamente em estado natural e ento no seria novidade. A maioria dos pedidos de patentes em biotecnologia se constituem em descobertas em no em invenes, e ento no seriam patenteveis. Um invento no pode ser bvio: deve expressar soluo inovadora, em relao ao estado da arte - distinto de descoberta, referente a algo desconhecido, porm preexistente (Schneider, 1993). Neste caso, tanto as enzimas quanto os genes utilizados em plantas transgnicas preexistiam na natureza assim como os princpios ativos de organismos vivos usados na industrializao de produtos diversos. O Congresso Nacional aprovou a lei n 9.279 de 14 de maio de 1996 (DOU de 15/05/96), que regula direitos e obrigaes relativos propriedade industrial. Apesar dos quatro anos de tramitao, a discusso deste complexo projeto na comunidade cientfica e mesmo na sociedade ocorreu de forma tmida, infreqente e superficial Sua aprovao ocorreu num ambiente de divergncia de opinies e presses polticas e econmicas, as mais diversas. Entre as caractersticas da lei, merecem destaque: - A sua complexidade: a lei possui 243 artigos e complexa do ponto de vista tcnico. - Ao detentor de patentes so conferidos amplos direitos e praticamente nenhum dever. - Uma vez concedida a patente, se cria o monoplio. A lei, ento restringe a soberania com relao a proteo de determinados setores da economia nacional. - patentevel a inveno que atenda aos requisitos de novidade, atividade inventiva e aplicao industrial. -No se considera inveno nem modelo de utilidade: ..., o todo ou parte de seres vivos naturais e materiais biolgicos, encontrados na natureza, ou ainda que dela isolados, inclusive o genoma ou germoplasma de qualquer ser vivo natural e os processos biolgicos naturais (grifos nossos),... - No so patenteveis:..., o todo ou parte de seres vivos, exceto microorganismos transgnicos que atendam aos trs requisitos de patenteabilidade - novidade, atividade inventiva e aplicao industrial e que no sejam mera descoberta... Neste caso, microorganismos transgnicos so organismos, exceto o todo ou parte de plantas e animais, que expressem, mediante interveno humana direta em sua composio gentica, uma caracterstica normalmente no alcanvel pela espcie em condies naturais. Patente perdida. Em 1985 foi extrado lectina do caroo da jaca, cuja descoberta foi publicada pelo Journal of Immunology (vol. 34, n 3, p.1740-1743). Atualmente a empresa Norte americana Pearce produz e comercializa a lectina de jaca sem mesmo a autorizao dos descobridores. Entretanto a jacalina pode ser produzida por qualquer pessoa. O Brasil exporta apenas o caroo (matria prima), cujo valor agregado extremamente baixo. A divulgao da inveno antes da solicitao da patente, inviabiliza qualquer pedido de registro a posteriori, tanto pelos descobridores, quanto pelos que querem produzir e comercializar a descoberta.

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Patente encontrada. A Zidovudina (AZT) um nucleosdeo, cuja descoberta foi publicada no Journal of Organic Chemistry em 1964. Quatorze anos depois, a empresa britnica Wellcome patenteou o uso desta substncia no combate a AIDS, e comercializa por US$ 180.00 cada 100 cpsulas. No Brasil a empresa Microbiolgica sintetizou por processo prprio e poderia comercializar a mesma quantidade por US$ 80.00 se o 'uso do produto' no fosse patenteado. O patenteamento de genes poder vir a conflitar com o registro de uma nova cultivar, nos pases onde adotado o esquema de Direito de Proteo de Cultivares. Caso o gene seja isolado por um laboratrio mas inserido em plantas por uma outra instituio, o direito de comercializar e cultivar a nova variedade provavelmente dever reembolsar duas novas operaes at agora no feitas no Brasil. Como conseqncia, o custo da semente dever aumentar significativamente, dependendo do gene transferido. Nos pases da Europa, a companhia de melhoramento pagar os 'royalties' pelo uso do gene nos seu programa e cobrar 'royalties' sobre o uso e comrcio de eventuais OGMs que desenvolver com tal gene. O tipo de acordo entre as partes ainda est sendo estudado. A regulamentao nos pases europeus vai ainda prever a transferncia de genes inseridos de PTs para outras cultivares. Muitas patentes 'amplas' (ex: qualquer mtodo de modificao de genes de Bacillus thuringiensis) tem sido concedidas no Estados Unidos. Em decorrncia disso, est havendo uma srie de aes na Justia de vrias empresas contra a empresa detentora da patente.

2-LEI DE PROTEO DAS CULTIVARES

Um dos primeiros pases a adotar a proteo de cultivares foi os Estados Unidos em 1930, com o Plant Patent Act. Esta medida garantia ao melhorista o direito de propagar as mudas de variedades protegidas por um perodo de 17 anos. A justificativa utilizada para a implantao da medida foi incentivar o investimento em pesquisas com plantas de propagao vegetativa. Somente 40 anos mais tarde os Estados Unidos implantaram o sistema de proteo de cultivares com propagao sexuada, o Plant Variety Protection Act. O desenvolvimento de novas cultivares e de outras tecnologias agrcolas provocou um grande impacto na agricultura mundial. Concomitantemente a isto ocorreu uma grande mobilizao para estabelecer sistemas de proteo nos pases industrializados. No ano de 1961, em Paris, ocorreu a primeira conveno internacional que resultou na criao da Unio Internacional para a Proteo de Obtenes Vegetais (UPOV). A UPOV um organismo internacional, que estabelece os direitos de melhorista ou de propriedade intelectual sobre as variedades melhoradas. Posteriormente esta conveno foi revisada em 1972, 1978 e 1991. A adeso a uma das duas ltimas convenes (1978 ou 1991) requer que o pas tenha estabelecido uma legislao prpria e compatvel com as diretrizes estabelecidas. Alm disso, a Organizao Mundial de Propriedade Industrial (WIPO ou OMPI) determinou que os pases membros que no tivessem estabelecido legislao sobre o assunto no poderiam aderir Conveno de 78, estando automaticamente includos na Conveno de 1991. O Brasil, que agora tem sua Lei de Proteo de Cultivares (Lei n 9456 de 25/04/97), solicitou adeso a Conveno de 1978, a qual tem a preferncia da maioria dos pases, uma vez que este o sistema de proteo mais adequado para o desenvolvimento agrcola mundial. Atualmente, j assinaram esta conveno mais de 20 pases, entre os quais Canad, Estados Unidos, pases da Europa, Argentina, Uruguai e Chile. Especialistas do mundo inteiro tem sido unnimes em afirmar que a conveno de 1991 satisfaz preferencialmente as grandes empresas produtoras de sementes em detrimento do interesse social. Por isto mesmo, poucos pases aderiram a esta ltima conveno. Embora em alguns pases exista o direito de patente sobre variedades, o acordo TRIPS permitiu aos estados membros o direito de excluir da patenteabilidade as cultivares de plantas e as raas de animais. O Brasil utilizou esta prerrogativa. A nova lei de propriedade industrial (Lei n 9.279), tambm chamada de Lei de Patentes, aprovada em maio de 1996, 84

prev em seu art. 18 que as variedades vegetais no so patenteveis. Com a lei 9456, as cultivares melhoradas passaram a ser protegidas pelos direitos de melhorista. A diferena entre o sistema de patentes e o de direitos de melhorista, est basicamente restrita aos efeitos da proteo. Ou seja, a proteo no to severa com os pesquisadores, agricultores e consumidores, como o caso das patentes. Nos pases onde as patentes de cultivares so permitidas, a proteo abrange at a fase de industrializao do produto primrio. Alm desta lei, existem outros instrumentos que afetam o uso de recursos genticos vegetais como a Conveno da Biodiversidade Biolgica (de 5/6/1992) e a Lei de Acessos, que ora tramita no Senado Federal (PLS n 306, de 1995). Principais aspectos da Lei de Proteo de Cultivares Em consonncia com a legislao disponvel, o rgo a quem compete a proteo das cultivares o Servio Nacional de Proteo de Cultivares (SNPC), vinculado ao Ministrio da Agricultura e Abastecimento. A lei n 9456 no especifica claramente a estrutura nem as atribuies deste rgo, o que foi feito recentemente atravs do MAA. Para o registro de uma determinada cultivar no SNPC, a mesma deve ter nome prprio e apresentar as caratersticas de distinguibilidade, homogeneidade e estabilidade (simbolicamente abreviadas por DHE). Portanto, a variedade a ser protegida no poder ser idntica a uma j registrada no pas ou em pases com os quais o Brasil tem tratados. No caso de cultivares de autofecundao ou hbridos, a cultivar tambm deve apresentar a caracterstica de homogeneidade, ou seja no poder apresentar misturas. Finalmente, a cultivar tem que ser estvel, ou seja manter suas caractersticas atravs das geraes. A Lei de Proteo de Cultivares protege pelo perodo de 18 anos as videiras, plantas frutferas, florestais e ornamentais e por 15 anos, as demais espcies. A ata vigente da UPOV a de 1978, pela qual os Estados membros devem aplicar a Conveno para um mnimo de 24 espcies ou gneros num prazo de 8 anos, aps a entrada em vigor lei. Em seu artigo 4, a lei prev a incluso das mesmas gradativa. Assim, num primeiro momento a Lei abranger 5 espcies, s quais sero acrescidas de mais 5 aps 3 anos da regulamentao da lei. Outras 14 espcies sero incorporadas at o oitavo ano aps a regulamentao. Quando protegida, o detentor do registro, chamado de titular, detm os direitos de melhorista. Ou seja, o produtor de sementes (ou mudas) que quer utilizar a cultivar em lavoura comercial de produo de sementes (ou mudas) dever ter licena do titular, a ser obtida mediante acordo. Por ocasio da compra de semente (ou muda) de cultivar protegida para o primeiro plantio de lavoura comercial, o agricultor estar pagando os royalties referente a proteo no preo final do produto. A lei ainda prev salvaguardas que permitem a interferncia do Ministrio da Agricultura na multiplicao e comercializao das cultivares protegidas. A primeira delas a licena compulsria que permite a explorao de uma cultivar protegida sem a autorizao de seu titular. Nos casos de emergncia nacional ou abuso do poder econmico, uma cultivar protegida poder ser tornar de uso pblico restrito. Entretanto, em ambos os casos, o titular ter assegurado a remunerao referente a explorao e o assunto ter especificidade em regulamento posterior. PRINCIPAIS IMPLICAES DA LEI Do ponto de vista do produtor, a lei tambm flexvel ao lhe permitir utilizar como semente para a safra seguinte, material colhido no ano anterior, com exceo da cana-deacar. Para os pequenos produtores, a lei permite alm do uso da prpria semente, a troca de material protegido com outros pequenos agricultores sem ferir a legislao. Para tanto, o interessado deve atender o que est previsto nas normas do INCRA para seu enquadramento como pequeno produtor rural. 85

No mbito do Mercosul a existncia de um mercado livre, num curto prazo de tempo, implica na necessidade de compatibilizao das legislaes dos Estados membros, que hoje apresentam diferenas marcantes. Dos pases membros do Mercosul, agora s o Paraguai no tem legislao prpria. Atualmente variedades desenvolvidas no Brasil esto sendo cultivadas nos diversos pases da Amrica Latina e vice-versa, sem nenhum pagamento de royaties. Por certo, esta situao dever ser outra aps esta lei. Do ponto de vista tcnico, a questo mais polmica a possibilidade de proteo de cultivar essencialmente derivada. O problema estabelecer as diferenas mnimas entre uma cultivar essencialmente derivada e a cultivar ancestral protegida. Estas diferenas mnimas so difceis e onerosas de serem estabelecidas. A prpria lei no seu artigo 3 (incisos III e IX), no determina com preciso qual a margem mnima que separa ambas, ao remeter para rgo competente o estabelecimento dos critrios de diferenciao. Embora a lei de patentes proba o patenteamento de plantas e animais, ela permite o patenteamento de processos, inclusive os biotecnolgicos. Neste caso haveria a possibilidade de uma planta transgnica ser duplamente protegida, pela lei de cultivares e pela lei de patentes. No Brasil, esta tm sido a forma preferida por empresas do setor para tentar obter o patenteamento de plantas transgnicas. Este aspecto vm gerando controvrsias em vrios pases, inclusive no mbito da Comunidade Europia uma vez que alguns pases membros aceitam a dupla proteo Guerra e Nodari, 1997).

3- BIODIVERSIDADE, BIOTECNOLOGIAS E AGRICULTURA

A biodiversidade no seu conceito mais amplo compreende todas as formas de vida, ecossistemas e processos ecolgicos, reconhecendo hierarquias nos nveis gentico, taxonmico e do ecossistema. A magnitude da biodiversidade brasileira no conhecida com preciso tal a sua complexidade. A estimativa de que no territrio brasileiro existam mais de 2 milhes de espcies distintas de plantas, animais e microorganismos. O Brasil o pas com a maior diversidade gentica vegetal do mundo, contando com mais de 55.000 espcies catalogadas de um total estimado entre 350.000 e 550.000. Cerca de 2/3 destas espcies se encontram nos trpicos, estimando-se que o Brasil detenha cerca de 75% de todas as espcies existentes nas grandes florestas. Apenas 8% das espcies vegetais tem sido estudadas em termos de compostos fitoterpicos bioativos e apenas 1.100 espcies de plantas foram exaustivamente estudadas em suas propriedades medicinais (Guerra e Nodari, 1996). O potencial de utilizao sustentvel da biodiversidade fruto da disponibilidade de matria-prima, tecnologia e mercado (Dias, 1996). Por exemplo, um parente silvestre do trigo originrio da Turquia proporcionou genes para a resistncia a doenas, que transferidos para variedades comerciais de trigo resultam num ganho anual de US$ 50 milhes, somente nos EUA. Uma variedade de cevada da Etipia forneceu um gene de resistncia a vrus que transferido para variedades em cultivo na Califrnia, proporciona uma economia de US$ de 160 milhes. Outro exemplo elucidativo o de Catharantus roseus, originrio de Madagascar. As vendas pela Eli Lilly das drogas anti-leucmicas vincristina e vinblastina, derivadas desta planta, atingem valores anuais de US$ 200 milhes. Apesar da riqueza da nossa biodiversidade vegetal, a maior parte das atividades econmicas baseia-se em espcies exticas: cana-de-acar originada de Nova Guin, caf da Etipia, arroz das Filipinas, soja da China, cacau do Mxico, citros da China, trigo da Asia Menor, eucaliptos da Austrlia, pinheiros da Amrica Central e gramneas forrageiras da frica, entre outras. Afirma-se que desde o incio da agricultura, em torno de 90% de todas as variedades vegetais desenvolveram-se pelas "foras da natureza"; 9,9% por meio dos esforos da humanidade at o incio deste sculo e apenas 0,1% pela utilizao de mtodos modernos de melhoramento gentico. Apesar de no ser possvel precisar com segurana, as

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chamadas variedades hbridas modernas, geradas principalmente nos pases com pesquisa mais avanada, respondem por uma grande parte da produo agrcola mundial e a expanso de grandes reas de monocultura com estas variedades poderia colocar em risco o total da diversidade gentica. Afirma-se tambm que as sementes so um reflexo do cdigo gentico da sociedade que as desenvolvem, produzindo rplicas dos sistemas agrcolas destas sociedades e colocando novamente em cena a diviso entre um Hemisfrio Norte rico em tecnologia mas pobre em recursos genticos e um Hemisfrio Sul pobre em tecnologia mas riquissimo em diversidade biolgica. Estima-se que um gene potencialmente til do Sul pode representar negcios de US$ 1 bilho no Norte e que o germoplasma do Sul contribua com valores estimados em US$ 66 bilhes por ano na economia dos EUA, prevendo-se o advento da revoluo do gene com genes patenteados pelas grandes corporaes transnacionais, associando os recursos genticos como estratgia central para controle do suprimento mundial de alimentos (Machado, 1996). REVOLUO VERDE, BIODIVERSIDADE E BIOTECNOLOGIAS A emergncia das biotecnologias na produo agrcola mundial vem ocorrendo em um contexto de esgotamento de um modelo de explorao agrcola baseado na chamada "revoluo verde". Estas tecnologias fundamentadas no uso intensivo de energia e insumos no beneficiaram todas as culturas e todos os agricultores, especialmente os pequenos produtores. De uma maneira geral estas tcnicas visavam uma adequao do ambiente variedade melhorada. Os programas de melhoramento vegetal baseados na utilizao racional da biodiversidade e orientados a uma agricultura sustentvel consistem em um processo de ajuste de uma determinada variedade a um determinado ambiente. A chamada revoluo verde caracterizou-se por alguns equvocos merecedores de reflexo. O primeiro diz respeito ao fato de que os geneticistas foram solicitados a criar variedades altamente produtivas em condies de abundncia de fertilizantes e gua e apesar do xito inicial, essas variedades demonstraram suscetibilidade a pragas e doenas, necessitando-se agregar mais um componente oneroso ao sistema de produo, os pesticidas. O segundo relaciona-se excessiva sub-estimao dos desgastes ambientais causados por concentraes excessivas de fertilizantes e pesticidas que acabaram por contaminar mananciais de gua implicando em riscos para a populao. O terceiro diz respeito ameaa a diversidade gentica em consequncia da disseminao em escala global de poucas variedades (Sachs, 1995). O fluxo relativamente livre de materiais e informaes entre pesquisadores agrcolas em diferentes pases do mundo essencial para reduzir as disparidades na capacidade de pesquisa destes pases. Uma das maiores diferenas entre o sistema de pesquisa durante a revoluo verde e aquele que emerge das biotecnologias que, enquanto o primeiro caracterizou-se pela predominncia do domnio pblico nos investimentos e resultados da pesquisa e pelo fluxo relativamente livre de informaes, o segundo vem se caracterizando pelo domnio privado de investimentos e pelas restries no fluxo de informaes (BonteFriedheim, 1989). BIOTECNOLOGIAS E AGRICULTURA Os setores da agroindstria, florestal e pesqueiro respondem por 40%, 4% e 1% do PIB brasileiro, respectivamente. Produtos da biodiversidade respondem por 31% das exportaes brasileiras, especialmente atravs do caf, soja e laranja (Dias, 1996). A biomassa vegetal atravs do lcool da cana-de-acar, da lenha e do carvo derivados de florestas nativas e plantadas, responde por 17% da matriz energtica nacional. A obteno de plantas transgnicas depende basicamente da possibilidade de identificar, isolar, clonar, transferir e integrar caractersticas importantes, sendo que, em ltima anlise, o sucesso das tcnicas de engenharia gentica baseia-se na expresso adequada do gene inserido. O escasso conhecimento sobre estes genes o principal

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entrave para a aplicao destas biotecnologias avanadas na agricultura brasileira e uma vez eliminados os entraves relacionados com a lei de patentes e de biossegurana, os produtos a serem ofertados no mercado sero as variedades transgnicas resistentes a herbicidas e as que contm genes de Bacillus thuringensis para resistncia a insetos. Outro entrave a grande dificuldade na resoluo e manipulao de caracteres quantitativos, os de maior importncia do ponto de vista econmico. Estas abordagens so estratgicas para a ampliao de mercado de grandes empresas do setor no Hemisfrio Norte. No por acaso, no ano de 1994, nos EUA, foram realizados 1.500 testes de campo com plantas transgnicas, 28% dos quais sobre resistncia a herbicidas e 23% sobres resistncia a insetos. Dado o avano das biotecnologias na agricultura mundial cabe uma apreciao de sua pertinncia no modelo agrcola brasileiro. Por biotecnologias pertinentes entende-se aquelas tecnologias que contribuem ao desenvolvimento sustentado por serem tecnicamente factveis dentro do nvel de desenvolvimento tcnico-cientfico do pas, por trazerem benefcios mensurveis aos destinatrios, por serem ambientalmente seguras e por serem socioeconomica e culturalmente aceitveis (Izquierdo et al., 1995). Desta maneira cabe questionar quais as biotecnologias pertinentes ao atual estgio de desenvolvimento da agricultura brasileira. Das chamadas biotecnologias avanadas nfase poderia ser dada s modificaes dos constituintes dos produtos agrcolas, visando o aumento de sua qualidade, como por exemplo a alterao da biossntese de carboidrato e protenas de reserva. Tcnicas de engenharia gentica podem ser aplicadas para a produo de tipos especficos de amido ou alterar outros carboidrato como celulose e pectina. Genes que regulam a produo de amilose e batatinha j foram clonados, sugerindo que a produo deste composto pode ser manipulada. A engenharia gentica tambm poder contribuir para minimizar os efeitos do estresse abitico sobre as cultura agrcolas. Plantas submetidas a condies limitantes de seca, temperaturas e salinidade acumulam compostos de baixo peso molecular e a insero de genes originados de bactrias permite o acmulo compostos de alto peso molecular elicitando mecanismos de tolerncia nestas plantas. J as chamadas biotecnologias intermedirias apresentam um potencial maior de aplicao a curto prazo na agricultura brasileira. Entre elas cabe citar o desenvolvimento de variedades com capacidade de fixao biolgica do nitrognio e de biofertilizantes como fungos micorrzicos. Tcnicas associadas produo de bioinseticidas j so rotineiramente empregadas na agricultura brasileira como o caso da produo do fungo entomopatgeno Beauveria bassiana. Com isto pode-se diminuir os custos de produo bem como eliminar os impactos negativos dos pesticidas sobre o ambiente e sade humana. Entre as biotecnologias intermedirias observa-se um grande potencial para a utilizao dos marcadores moleculares no mapeamento gentico. Uma das principais aplicaes destes mapas genticos relaciona-se com a seleo assistida por marcadores (MAS). Esta metodologia se baseia na escolha do marcador molecular como critrio de seleo na expectativa de selecionar-se de forma indireta os alelos de interesse a ele ligados. nas tcnicas de cultura de tecidos vegetais ou de micropropagao que se observa o maior impacto das biotecnologias hoje no Brasil, principalmente no que tange espcies ornamentais, frutferas e florestais. A propagao clonal massal de variedades melhoradas e isentas de patgenos vem sendo empregada rotineiramente nos setores mais avanados destas reas no Brasil. No estado do RS, o emprego de variedades de moranguinho originadas da cultura de meristemas a partir da metade da dcada de 80, foi o ponto de partida para a melhoria do sistema de produo desta cultura permitindo que a produtividade mdia passasse de 3,6 para 40 t/ha. Hoje em todo o Brasil empregam-se mudas provindas desta tcnica relativamente simples e de baixo custo. Impacto similar vem ocorrendo com a cultura da batatinha, cuja produtividade mdia elevou-se de 10,7 t/ha em 1980 para 15,2 t/ha em 1995. Este aumento de produtividade foi atribudo principalmente ao plantio de batatas-semente certificadas, livres de vrus, produzidas pela Embrapa. Em Santa Catarina, nos laboratrios da EPAGRI foram desenvolvidos protocolos para a

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micropropagao de mudas de bananeira livres de nematides e da broca da bananeira, reduzindo drasticamente a necessidade de aplicao de pesticidas de alto impacto ambiental, humano e com possveis efeitos residuais no fruto. Paralelamente a isto, instalouse um laboratrio de produo do fungo entomopatgeno Beauveria bassiana, permitindo o controle biolgico do moleque da bananeira. Os exemplos anteriores mostram que, paradoxalmente, as biotecnologias intermedirias so as que vem tendo maior aplicao no atual estgio de desenvolvimento agrcola do pas. Esta constatao tambm valida para diversos pases da Amrica Latina e do Caribe. Na Costa Rica, Honduras, Colmbia e em Cuba, a maior parte das mudas de abacaxizeiros e bananeiras so produzidas por tcnicas de micropropropagao. Em laboratrios da Costa Rica, Honduras e Cuba, tcnicas biotecnolgicas relativamente simples como a seleo de linhagens celulares resistentes permitiram a obteno de variedades de bananeiras resistentes molstia fngica sigatoka-negra (Mychosphaerella fijiensis) (Izquierdo, 1995). Nos bananais de Cuba estima-se um gastos de US$ 700,00/ha para o controle desta molstia. Em pases da sia um programa da FAO intitulado "Do laboratrio ao campo: biotecnologia agrcolas para pequenos produtores" identificou e recomendou as biotecnologias que deveriam estar disponveis e seu custos passveis de serem .absorvidos pelos pequenos produtores. Estas biotecnologias incluem a cultura de tecidos para a micropropagao de variedades sadias de razes e tubrculos, frutferas e ornamentais, inoculantes derivados de bactrias, fungos e algas, bioinseticidas, produo de fungos comestveis. Este projeto vem revelando timos resultados nos pases de sua abrangncia: Bangladesh, India, Indonsia, Nepal, Filipinas, Sri Lanka, Tailndia e Vietname (Knudsen, 1991). DESAFIO ATUAL At o momento ainda no foi possvel estabelecer com clareza o papel e a insero das biotecnologias na agricultura brasileira. Esta tarefa complexa e paradoxal, se considerarmos o carter geralmente excludente das tecnologias de ponta, ditas sofisticadas e caras. Contudo, dependendo da evoluo e consolidao de tcnicas biotecnolgicas pertinentes, elas podero se tornar "janelas de oportunidades" para a produo agrcola, aumentando as chances para os agricultores menos capitalizados. Este aspecto j vem sendo observado em pases perifricos ao redor do mundo (Bergamasco et al, 1995). Contudo, como notaram Rojas e Jaff (1994) esta janela de oportunidades poder no existir por muito tempo, a menos que os pases em desenvolvimento criarem condies e capacidades para em curto espao de tempo utilizarem seus recursos, antes que as grandes corporaes do Hemisfrio Norte o faam. Alm disto, como afirma Van de Sande (1994) o desenvolvimento de tecnologias durante a revoluo verde foi um processo padronizado e unidirecional, dos pesquisadores para os agricultores. J o desenvolvimento das biotecnologias pode ser bi-direcional e permitir respostas a problemas regionais especficos. Por isso o sucesso das biotecnologias depende, em grande escala, do estoque de conhecimento acumulado ao longo do tempo pelos agricultores. Por exemplo o conhecimento das populaes nativas sobre plantas medicinais, sobre espcies e variedades nativas e sobre os sistemas de manejo de fundamental importncia para o desenvolvimento de biotecnologias pertinentes. Duas afirmaes feitas por Sachs (1995) merecem anlise e reflexo. A primeira observa que a produo de alimentos necessita tornar-se menos intensiva em energia e, ao mesmo tempo, mais eficiente do ponto de vista energtico. A segunda diz que um reexame radical dos objetivos e critrios de avaliao dos sistemas de pesquisa agrcola gerados no mbito da revoluo verde, demonstra que o futuro da agricultura pertence aos sistemas de produo intensivos no conhecimento e no nos insumos.

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PARTE 5 - BIOTICA
1-INTRODUO
A expresso tica resultante da fuso de duas palavras gregas: ethos - modo de ser ou carter; mos ou mores - costume ou costumes. Refere-se avaliao normativa das aes e do carter de indivduos e grupos sociais. Usada alternativamente com moralidade para se referir s obrigaes e deveres que governam a ao individual. "A tica a teoria ou cincia do comportamento moral dos homens em sociedade" (Vazquez, 1980). O estudo da tica a reviso crtica sobre valores. Para tal h necessidade de liberdade e ausncia de preconceitos. A BIOTICA um neologismo: bios e ethos - modo de ser (tica) da vida. Trata das questes ticas da medicina, da sade pblica e das cincias da vida. A biotica pergunta-se sobre a legitimidade dos projetos de efeitos biotecnolgicos.

2-HISTRICO
Em 1948 o Cdigo de Nuremberg foi estabelecido e contm normas para a pesquisa com seres humanos. Estabelece ainda a responsabilidade individual do pesquisador. Posteriormente, em 1964 houve um aperfeioamento do mesmo com a Declarao de Helsinque e suas verses seguintes com as revises de 1975 (Japo), 1983 e 1989 (Venezuela). A primeira Conferncia de Biossegurana foi realizada em Asilomar no ano de 1975. Foram estabelecidas recomendaes para manuseio, conteno e armazenamento de produtos perigosos bem como protocolos laboratoriais e os procedimentos associados aos diversos tipos de riscos. Tambm foi declarada uma moratria voluntria com relao s pesquisas na espcie humana (Science, 188:991-994, 1975) porque as previses dos impactos eram impossveis de serem adequadamente conhecidas. O maior saldo foi o respeito do pblico pelo gesto de precauo dos cientistas. Em 1992 foi realizada a Conveno sobre a Diversidade Biolgica (CDB) no Rio de Janeiro, a qual contemplou a necessidade de um protocolo de internacional de biossegurana visando proteger a sade e o meio ambiente. Uma segunda conferncia, 25 anos depois, ou seja, no ano 2000, foi realizada em Asilomar. Nesta conferncia, foram enfatizados o estreitamento do investimento privado e o avano da cincia; a ampliao e o fortalecimento das leis de proteo, notadamente a de patentes; a pressa na comercializao dos produtos e servios da biotecnologia; a omisso de resultados; a falta de precauo e o rompimento de valores ticos. Em decorrncia, os cientistas comearam a perder a credibilidade da sociedade e uma reao aos produtos das biotecnologias, em especial os transgnicos.

3-SITUAO NA EUROPA E EUA

Na EUROPA, os 32 membros da Conveno Europia em Biotica aprovaram um documento em fevereiro de 1995, mas sem muito consenso. Em abril de 1997, a Comisso Europia deliberou sobre a obrigatoriedade de rotular os produtos geneticamente modificados como tal, para diferenciar dos demais (Nature, 386:532, 1997). Em 2001 o Parlamento Europeu e do Conselho aprovou a Diretiva 2001/18/CE sobre biossegurana de transgnicos e derivados, em substituio a 90/220/CEE. O Princpio da Precauo fortemente saliente no processo de anlise de liberao intencional no meio ambiente de OGMs. A Suia realizou um plebiscito sobre a possvel banio de produtos transgnicos. Um tero da populao votou pela banio. O envolvimento da sociedade na discusso sobre OGMs cada vez mais crescente, atingindo inclusive os Estados Unidos. Nestas discusses, muitas questes ticas so levantadas, o causa tenso com as questes cientficas.

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4-SITUAO NO BRASIL
Em 1988 o Ministrio da Sade baixou a Resoluo 1/88 que trata de Pesquisas com Seres Humanos, em especial na rea Mdica. Parte operacional no implantada. Segundo vrios cientistas, misturou-se fiscalizao com tica. Sete anos mais tarde uma Comisso de 14 pessoas foi formada para revisar a Resoluo 1/88 a partir de 30.000 questionrios e reunies e audincias pblicas. Em relao aos OGMs, em 2005 foi sancionada a nova Lei da Biossegurana (Lei n 11.105). Especificamente com a espcie humana, a lei de biossegurana apresenta:
Art. 6 Fica proibido: I implementao de projeto relativo a OGM sem a manuteno de registro de seu acompanhamento individual; II engenharia gentica em organismo vivo ou o manejo in vitro de ADN/ARN natural ou recombinante, realizado em desacordo com as normas previstas nesta Lei; III engenharia gentica em clula germinal humana, zigoto humano e embrio humano; IV clonagem humana; V destruio ou descarte no meio ambiente de OGM e seus derivados em desacordo com as normas estabelecidas pela CTNBio, pelos rgos e entidades de registro e fiscalizao, referidos no art. 16 desta Lei, e as constantes desta Lei e de sua regulamentao; VI liberao no meio ambiente de OGM ou seus derivados, no mbito de atividades de pesquisa, sem a deciso tcnica favorvel da CTNBio e, nos casos de liberao comercial, sem o parecer tcnico favorvel da CTNBio, ou sem o licenciamento do rgo ou entidade ambiental responsvel, quando a CTNBio considerar a atividade como potencialmente causadora de degradao ambiental, ou sem a aprovao do Conselho Nacional de Biossegurana CNBS, quando o processo tenha sido por ele avocado, na forma desta Lei e de sua regulamentao; VII a utilizao, a comercializao, o registro, o patenteamento e o licenciamento de tecnologias genticas de restrio do uso. Pargrafo nico. Para os efeitos desta Lei, entende-se por tecnologias genticas de restrio do uso qualquer processo de interveno humana para gerao ou multiplicao de plantas geneticamente modificadas para produzir estruturas reprodutivas estreis, bem como qualquer forma de manipulao gentica que vise ativao ou desativao de genes relacionados fertilidade das plantas por indutores qumicos externos.
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Em1996, a Resoluo 196/96 de 16/10/96 Cria Conselho Nacional de tica de Pesquisa e Comits de tica de Pesquisa Institucional (CEPI) com pelo menos 6 membros. Os CEPI passaram (i) a ser co-responsvel pelas decises e a ter as funes de (ii) consultoria e (iii) educao. Cada comit deve ser registrado no Ministrio da Sade. UFSC institui seu CEPI, com um representante de cada Centro, em 1997. Mais tarde, em 1999, a UFSC institui a Comisso Interna de Biossegurana (CIBio) composta de 5 membros.

5-IMPLICAES DA CLONAGEM DE ANIMAIS

A Dolly popularizou a questo e gerou problemas e dvidas. A Polly que uma ovelha com genes humanos no recebeu ateno da mdia. A discusso sobre os xenotransplantes (transplante de rgos de animais para seres humanos) comea a se ampliar. A clonagem em animais mais recente que em plantas. Nos anos 60 foi obtida a clonagem em sapos e 10 anos depois, em ratos. Em 1994 nasce Astrid, a porca transgnica com genes humanos, que produzem uma protena de membrana, capaz de diminuir ou mesmo eliminar

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os riscos de rejeio de transplantes de rgos do porco para seres humanos. ("Porcoirmo"). Em 1997 a clonagem alcanou outros animais (ovelhas, vacas e macacas). A Clonagem humana vai acontecer num curto espao de tempo? Embora no seja possvel responder esta questo de modo conclusivo, existem fatos relacionados ao assunto que merecem reflexo: gmeos so clones; a clonagem animal pressionar a clonagem humana; demandas individuais (ex: em So Paulo pai que perde filho em acidente quer um clone; me doa vulo para filha gerar neto; mulheres podem gerar filho sem fecundao); a terapia gnica com clulas somticas quase uma realidade; fertilizao in vitro (ou bebs de provetas) - Em 1780 na Inglaterra foi feita a primeira tentativa de inseminao artificial com o esperma do marido. Mais tarde, em 1884 foi feita a inseminao com esperma de um doador. Em 1978, o primeiro beb de proveta. No Brasil, nasce em 1984 o primeiro beb (uma menina que hoje tem 17 anos. Os bebs de provetas, uma realidade nos anos 1980 da realizao de uma idia surgida duzentos anos antes. doao de rgos - crianas so geradas para doao de medula a irmos; clonagem de embries humanos no utilizados para reproduo (por serem defeituosos) at o estdio de 32 clulas (Science, 262:652-653, 1993); os xenotransplantes (transplantes de rgos de animais para humanos); recomposio de rgos humanos via cultura de tecidos (clonagem); bebs com material gentico de duas mulheres (impropriamente denominados de geneticamente modificados) criana gerada com a fertilizao por um espermatozide de um vulo contendo genoma nuclear da me e mitocndrias de uma doadora. Porque a discusso hoje? 1) que anteriormente no havia massa crtica para a discusso. No incio do sculo havia em torno de 8 mil cientistas e qumicos na Europa. Nos anos 80 este nmero cresceu para mais de 5 milhes, com a incluso dos engenheiros. Portanto, a cincia e a tecnologia so consideradas dois dos principais componentes da cultura contempornea. 2) O potencial das tecnologias pode reprogramar o cdigo gentico, e conseqentemente a vida dos organismos. 3) A existncia de vrios conflitos decorrentes de diferentes interesses. 4) A gerao da Dolly popularizou a questo, mas provocou problemas e dvidas. 5) A percepo pblica, aps o episdio da vaca louca; 6) Os possveis riscos associados aos alimentos transgnicos.

6-RELEVNCIA DA BIOTICA
O prefixo bio, indica ao mesmo tempo uma inovao e o retorno a uma tradio prmoderna. A relevncia do paradigma biotecnocientfico decorre do fato de que, em princpio, todo o mundo est (ou vir a estar) envolvido nos efeitos da Revoluo Biolgica (fecundao in vitro e transferncia de embries; clonagem; remdios obtidos pelo saber-fazer das biotecnologias; tratamento do cncer, da AIDS e de outras caractersticas indesejveis;

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modificao de plantas e animais pela manipulao e reprogramao de seus genes; combate s grandes endemias e fome; etc.) Com esta revoluo, foram adquiridas novas competncias: o tratamento da informao dos seres vivos. Ento, agora determinadas condies podem ser alteradas em funo dos desejos e projetos humanos. A Revoluo Biolgica no permite somente descrever e compreender a vida, mas tambm modific-la, graas a uma nova forma de saber-fazer proporcionado pela aliana entre tecnocincias da linguagem e tecnocincias biolgicas (Schramm, 1996). O paradigma biotecnolgico constitui um padro de competncia em adaptar a prpria natureza humana aos desejos e projetos humanos, por exemplo, para aliviar o sofrimento, prevenir doenas, melhorar as condies de vida, programar a qualidade de vida dos descendentes, programar o fim da vida, etc. Desta forma, a biotecnocincia levanta uma srie de questes morais inditas, pois o novo tipo de competncia infringe um tabu milenar (Schramm, 1996). Como conseqncia, existe tambm um novo paradigma moral que deve enfrentar os problemas relativos ao paradigma biotecnocientfico. Trata-se do paradigma biotico (Hottois, 1990), expresso proposta por Potter, ainda em 1970. O paradigma biotico atual refere-se ao padro de reflexo e argumentao sobre os valores e suas justificativas a respeito da vigncia de competncia biotecnocientfica em reprograma o fenmeno vida. Na opinio de Schramm (1996), esta discusso se d num contexto pblico em que se defrontam duas posies fundamentais: uma viso essencialmente leiga, secularizada e pluralista, e uma viso religiosa. Entretanto, tal discusso acerca do paradigma biotico est muito restrito aos especialistas, incluindo-se neste grupo os filsofos, telogos, juristas e cientistas. Com a clonagem da ovelha Dolly, o assunto chegou at sociedade como um todo. So cada vez mais comuns artigos em jornais, artigos em revistas cientficas e de divulgao, programas na televiso, mesas redondas em congressos cientficos, discusses sobre projetos de leis relacionados ao assunto, entre outros. Com o avano nas pesquisas sobre xenotransplantes e a possibilidade de que os defeitos genticos se transformem imediatamente em doenas para as seguradoras, a populao, em vrios pases industrializados comeou a participar ativamente nos debates. No Brasil, desde 1998, os debates com os diferentes segmentos da sociedade tomaram vulto. Face a profundidade da competncia gerada pela associao entre estas duas revolues, o debate pblico sobre biotica necessrio. Esta forma de competncia realiza antigas aspiraes de controle da vida e da morte, j amplamente relatadas pelos mitos, as artes e as tcnicas desde a antiguidade. Portanto, ela no , em princpio um fato qualitativamente indito. O novo, contudo, o fato que a revoluo da biotecnocincia no se limitar apenas a considerar o conceito de essncia, mas tambm a projetar e reprogramar o prprio fenmeno da vida na sua totalidade (Schramm, 1996). O prprio conceito de doena est sendo alterado, pois ele poder no mais se restringir a um conjunto de sinais e sintomas, mas estender-se a predisposies genticas para a manifestao de futuras sintomatologias (Beiguelman, 1997). POSSVEL UMA NOVA ALIANA ENTRE FATOS E VALORES? Esta uma questo complexa. O mundo regido por uma pluralidade de interesses e valores contraditrios entre si. O denominador comum, na melhor das hipteses, ser uma mera tolerncia entre pequenas diferenas suportveis. A nova aliana seria, quando muito, algo como uma tica mnima, produzida para que exista alguma forma de compromisso aceitvel pelas partes. Neste caso, o princpio da no-autocontradio deve ser respeitado (Schramm, 1996). A vigncia de uma tica mnima torna possvel estabelecer um conjunto mnimo de proposies pertinentes sobre a biotecnocincia, como maneira de iniciar um jogo lingustico 93

racional, imparcial e no-excrudente num mundo secularizado e politesta: 1) a dimenso biotecnocientfica do saber-fazer contemporneo afeta a qualidade de vida de um nmero crescente de indivduos e populaes, e a rigor de outros sistemas vivos no-humanos, assim como de seus ambientes naturais que, por sua vez, afetam a prpria vida humana; 2) ignorar este fato pode levar a atitudes igualmente problemticas para a auto-realizao da vida humana. A afirmao no se pode escolher determinados aspectos da cincia e recusar outros, mas to-somente aceitar tambm o lado imprevisvel e inquietante (Jacob, 1990) provavelmente decorrente do fato de que a populao jamais participou da discusso e das decises sobre o uso do avano cientfico na forma de tecnologias. Na verdade, estamos precisando uma nova era. De um lado, as industrias juntamente com o auxlio de parte da comunidade cientfica trabalhando para o desenvolvimento de tecnolgias, sem o necessrio conhecimento cientfico sobre os efeitos das mesmas na sade humana o e no ambiente, e de outro lado, os consumidores se organizando para exigir segurana e precauo. Disso pode resultar o avano dos princpios de bitica, que basilar o uso das biotecnologias no futuro. A competncia biotecnocientfica precisa de um acompanhamento racional e imparcial, fornecido pela competncia biotica, capaz de trazer no espao do debate pblico a crtica a eventuais guinadas autoritrias e tecnocrticas, prejudiciais aos direitos das pessoas (Schramm, 1996). 7-A BIOTICA LEIGA As principais caractersticas da biotica leiga podem ser resumidas da seguinte forma (Schramm, 1996): 1) no ter nenhum princpio de autoridade heteronomamente estabelecido, a no ser a autoridade construda pelo consenso livre entre as partes numa sociedade determinada; 2) no ter nenhum princpio absoluto norteador das discusses em mbito pblico e legitimador da maior ou menor relevncia de um argumento, mas somente princpios prima facie, reguladores de conflito; 3) ser, em princpio, tolerante, respeitosa dos argumentos racionais (publicamente relevantes) e das emoes privadas quando estas no ferirem concretamente os iguais interesses de terceiros nem o interesse pblico. Como um interesse um interesse, seja l de quem for esse interesse (Singer, 1984), a discusso deve ocorrer num ambiente de liberdade e sem preconceitos. Desta forma estaria garantido o pluralismo do espao pblico bem como o politesmo e a tolerncia, caractersticas do espao privado.

8-AS NOVAS BIOTECNOLOGIAS - ESPCIE HUMANA

Terapia gentica ou gnica - diz respeito possibilidade de corrigir defeitos ou prejuzos para a qualidade de vida saudvel de indivduos e populaes. Na viso dos defensores da tecnologia, a terapia gentica deve ser considerada como qualquer outra terapia, e no us-la significaria infringir os prprios princpios da beneficncia e de nomaleficncia que imperam desde Hipcrates. No haveria, portanto, nenhuma objeo moralmente relevante contra o uso da terapia gentica, desde que seja tambm respeitados o princpio da autonomia do consumidor e o princpio da justia (ou de eqidade). Contudo, h objees de cunho religioso ("brincar de Deus") e naturalista (liceidade de interferir na autopoiese do mundo natural) (Schramm, 1996). Mas as objees religiosas e naturalistas no consideram adequadamente o ponto de vista segundo o qual a natureza humana algo dinmico, suscetvel de ser remoldado pela prpria competncia biotecnocientfica em rpida expanso. H, contudo, uma objeo mais pertinente que refere94

se a terapia gentica aplicada a linha germinal. Neste caso, a alegao que as conseqncias a mdio e longo prazos so amplamente desconhecidas. H tambm outras objees. Ainda no se conhecem os efeitos colaterais da terapia gnica na espcie humama. Outra questo polmica origina-se do Projeto Genoma Humano. Na realidade, o mapeamento do genoma tornar disponvel um nmero praticamente ilimitado de dados sobre indivduos e populaes. O fato que as informaes possuem dupla face. De um lado permitem encontrar terapias e estratgias preventivas. De outro lado, podem revelar informaes a terceiros. Neste caso, a questo pertinente refere-se ao controle da informao para evitar abusos. provvel que o controle poder ser resolvido pela legislao. Desta forma, deixaria de ser um problema para a biotica (Schramm, 1996). Cientistas como Richard Lewontin, diz em seu livro a Triple Helix (2000), que a expresso fenotpica resultante da ontogenia de um indivduo. Ou seja, depende da composio gentica, dos eventos ao acaso durante a ontogenia e do ambiente. No atual estgio de conhecimento, pouco ou nada adiantar a disponibilidade de uma seqncia de 3 bilhes de pares de bases. PERCEPO PBLICA Quanto mais o foco situar-se na segurana do produto para homens e o ambiente, mais as decises devem ser tomadas com base no conhecimento cientfico do que na novidade em si (Porter, 1997). No se admite que questes da mais alta relevncia como a vida, a sade e a morte do homem, sejam decididas por pequenos grupos de cientistas (Silva, 1997). Ano a ano, tem aumentado a participao da sociedade na discusso e nas manifestaes a respeito das biotecnologias. "Dias globais de ao contra a Biotecnologia", de 20 a 27 de abril de 1997, organizado por Jeremy Rifkin. Mais de 200 grupos em 24 pases, principalmente da Europa. Principal razo: alimentos de plantas transgnica podem no ser sadios e podem causar impactos negativos no ambiente. Numa pesquisa de opinio pblica (1998), as pessoas que mais conhecem o assunto so da Alemanha, ustria e Portugal. O nvel de preocupao na Alemanha, ustria, Dinamarca e Japo era superior a 80%, enquanto que na Grcia e Espanha era inferior a 40%. Contudo se a disposio para comprar produtos das biotecnologias acima de 70% no Canad, USA, Portugal e Japo, de menos que 30% na Alemanha e ustria. No Brasil centenas de debates j foram realizados, cartilhas produzidas. Possveis conflitos Alguns autores consideram que o avano inexorvel da tecnocincia leva a um imperativo categrico: tudo aquilo que tecnicamente possvel fazer ser inevitavelmente feito cedo ou tarde, independentemente do fato de ser moralmente lcito ou no. Alm disso, o imperativo tecnolgico desloca os prprios limites morais, pois o que antes no caa no campo do moralmente lcito ou ilcito (pela simples razo que era impensvel) pode ser hoje objeto de avaliao moral e at de questionamento moral (Schramm, 1996). Contudo, a tecnologia poder ser controlada pela sociedade, que tambm decidir o que poder ser feito ou no. Todas as correntes bioticas parecem estar apoiadas em cinco princpios bsicos consensuais, isto , os princpios paradigmticos de autonomia, privacidade, justia, qualidade e eqidade (Knoppers e Chadwick, 1994; Beiguelman, 1997). Juntos com os princpios da beneficncia e no-malificncia refletem na realidade o pensamento angloamericano individual da questo, segundo o padre Lo Pessini (1997). CONFLITOS NA REA DE PRODUO DE ALIMENTOS

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CONFLITO I Posio "naturalista" (defendida por ambientalistas, ecologistas e religiosos), segundo a qual o homem deveria respeitar o finalismo intrnseco dos fenmenos naturais, no podendo, em princpio, "brincar de Deus" nem interferir nos processos de criao. Posio "artificialista" (defendida pelas empresas e alguns cientistas), segundo a qual o que possvel fazer em prol do bem-estar e do progresso cientfico tem em princpio o direito de ser feito e at deve, em determinados casos, ser feito, mesmo que com isso se assumam atitudes anti-naturais. Contudo, cresce no mundo inteiro, o nmero de partidrios do princpio da precauo. O Princpio da Precauo foi estabelecido em acordos internacionais (ex: CDB), como um princpio tico e implica que a responsabilidade pelas futuras geraes e pelo meio ambiente deve ser combinadas com as necessidades antroprocntricas do presente. CONFLITO II Enquanto muitos consumidores apregoam o consumo de produtos naturais ou orgnicos, produtores esto procurando cortar custos de produo e aumentar rendimento, movendo-se em direo oposta atravs do uso de cultivares que tem sido engenheiradas ou medicamentos e outros produtos transgnicos. O conflito praticamente inevitvel. CONFLITO III O conflito comercial entre naes j comeou. A finalizao do Protocolo Internacional de Biossegurana no teve adeso de muitos pases. Desta forma, qualquer operao com OGMs dever haver prvio consentimento do pas importador. Isto est criando grandes dificuldades de comercializao. Seus artigos entram em choque com o que apregoa a Organizao Mundial do Comrcio. Dentre os vrios aspectos, o princpio da precauo, que deve ser adotado em caso de dvida ou falta de conhecimento cientfico e a rotulagem dos produtos transgnicos, devem causar tenso, pois o pas importador pode recusar o produto caso no esteja acompanhado de estudo de risco adequado. Um episdio que ocorreu no ano de 2000, cujas conseqncias ainda no findaram, ilustra vrios tipos de conflitos. O maior fiasco da biotecnologia como j considerado, tratase do StarLink. StarLink, um tipo de Bt que contm o gene Cry9C, foi aprovada nos EEUU para alimentao animal mas no para consumo humano, pois contm uma protena que pode causar reaes alrgicas em humanos, uma vez que a protena Cry9C no quebrada imediatamente nos testes de digesto. A empresa produtora desta variedade (Aventis), distribuiu as sementes sem nenhuma ressalva. Assim, houve contaminao de lavouras vizinhas com plen desta variedade. Tambm, os milhos foram colhidos e misturados com os demais. Resduos desta protena foram detectados em produtos alimentcios e bebidas, tanto nos Estados Unidos quanto em outros pases. Conseqncias: alergia detectada em 7 de 54 pessoas suspeitas, necessidade de recolher no s o milho colhido mas tambm os produtos j processados que poderiam contem a farinha contaminada com este milho, indenizao dos supermercados, indenizao dos compradores no pas e no exterior, indenizao de agricultores que tiveram sua lavoura contaminada pelo plen do StarLink. Estima-se um gasto entre 100 milhes e 1 bilho de dlares, o custo da operao. Dentre as vrias lies, duas so relevantes: 1) no foi possvel localizar 12% da produo desta variedade, o que demonstra que uma vez liberado no ambiente, dificilmente existir controle sobre um OGM; 2) as empresas no esto preocupadas com a sade das pessoas nem com os agricultores, mas em vender seus produtos. Um outro tipo de conflito comercial poder ocorrer entre agricultores, basicamente devido a contaminaes pelos transgnicos. Ocorrendo cruzamentos entre plantas transgnicas e no transgnicas espcie, poder criar conflitos entre produtores que utilizam transgnicos e produtores de alimentos chamados 96

orgnicos, que so considerados de alta qualidade biolgica. Como ser resolvido este impasse? Um caso nos Estados Unidos implicou no prejuzo de US$170.000 a um produtor cuja produo orgnica foi contaminada por milho transgnico Bt. Na Inglaterra e outros pases existem muitas aes tramitando na justia, sobre esta questo, que ainda no tem soluo fcil. O que acontecer no Brasil? Pergunta ainda sem resposta. Plen de plantas transgnicas esto sendo coletados pelas abelhas e espalhados no mel. Em 1999, Friends of the Earth, uma ONG, descobriu plen de canola tolerante a herbicida (Arventis, ex AgrEvo) em abelhas cujas colmias estavam localizadas a 4 km de distncia do experimento de OGM mais prximo. Implicao da poluio gentica: o mel est perdendo o status de alimento sadio e natural. Os apicultores esto sendo forados a se retirar das reas prximas dos testes com OGMs: danos aos produtores de frutas e hortalias. Os danos so tanto para os apicultores como para os produtores de frutas, cujas consequncias podero ser muito srias. A questo da responsabilidade sobre a poluio ainda no est resolvida na Inglaterra. Recentemente (2001) a Unio Europia proibiu a importao de mel porque estava contaminado com plen de canola transgnica.

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