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Analisis Instrumental

ANALISIS INSTRUMENTAL
Instrumentos usados en anlisis instrumental.
Las tcnicas son de dos tipos:
pticas
Electroanaliticas.
pticas: absorcin, fluorescencia molecular, IR, absorcin y emisin atmica,
quimioluminiscentes.
El instrumento, cualquiera sea la tcnica , consta generalmente de cinco
componentes:
Fuente de energa radiante (FER)
Selector de banda (SB)
Cubeta (donde se coloca la muestra)
Detector (registra la seal)
Registrador
Consideraciones generales de cada dispositivo:
Fuente de energa radiante.
Para cualquier tcnica la FER debe generar una radiacin que sea lo
suficientemente potente para ser detectada y medible fcilmente. Adems esa
FER debe ser estable y la potencia Po , potencia incidente, debe ser constante
durante un determinado tiempo. Es decir, durante el tiempo de duracin del
anlisis. Generalmente las FER estn conectadas a una fuente reguladora de
potencia. Dentro de las FER hay de dos clases:
Continuas
De lnea
Las FER continuas son aquellas que emiten radiacin en forma continua en un
todas las longitudes de onda de la regin espectral. Es decir son aquellas que
presentan un espectro de emisin que es una banda que va generalmente
desde la zona del UV (aproximadamente 190- 350 nm) hasta 800nm (visible). A
mayor longitud de onda esta el IR.
La emisin debe ser en un amplio rango de longitudes de onda. Suelen usarse
en tcnicas que involucran molculas como absorcin, fluorescencia y
fosforescencia molecular.
Fuente de energa radiante continua usada en el UV
En esta regin el equipo viene con lmparas de Hidrogeno, de Deuterio, estas
emiten radiacin en la regin del UV.
Conformacin de estas lmparas.
Constan de un tubo de vidrio al vaco que en su interior tiene H
2
o D
2
a baja
presin que cuando se produce una descarga elctrica los electrones de esa
descarga colisionan con las molculas del gas y provocan la excitacin hacia
niveles energticos superiores de los electrones del gas. Cuando esos
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electrones vuelven a su estado fundamental lo hacen emitiendo radiacin
continua en la zona del UV. Tienen espectro continuo en la zona del UV
Dentro de la zona del UV hay tambin lmparas de argon (Ar) , lmparas de
xenn (Xe), lmparas de mercurio a alta y a baja presin. Estas tambin se
usan en el UV pero son mas intensas que las anteriores.
Particularmente la de Xe se utiliza en fluorescencia molecular.
En la zona del visible se usa generalmente la lmpara de filamento de
tungsteno o wolframio, este tipo de lmparas son como las que de los faros de
auto. Es un tubo de vidrio al vaco con un filamento de tungsteno (wolframio)
adentro. Cuando se hace una descarga elctrica circula corriente que genera
un calentamiento en el filamento de tungsteno y ese calentamiento provoca una
emisin de radiacin en la zona del visible en la zona del IR cercano. Alcanzan
temperaturas de 3700K
Hoy en da estas lmparas tienen en su interior una cierta cantidad de algn
halgeno, generalmente I
2
gaseoso, con el objeto de aumentar la vida til de la
lmparas, dado que las descargas pueden fundir o gastar el filamento. Esta
aumenta porque el I
2
al ponerse en contacto con el tungsteno en estado
gaseoso se une a este (I
2
W), y lo vuelve a unir al resto del filamento, por eso
duran muchsimo ms.
Eso adems hace que el mximo de emisin se desplace hacia la zona del
visible .
El IR se divide en tres regiones: cercano, medio y lejano.
En el cercano se puede usar la lmpara de Tg (Tungsteno)
En el medio y en el lejano las lmparas son de slidos inertes que se
calientan a temperaturas entre 1500 y 2000 K.
Fuentes de lnea
Las FER de lnea se caracterizan porque emiten un nmero limitado de bandas
muy estrechas de radiacin y cada una de esas bandas de radiacin abarca un
intervalo muy pequeo de longitudes de onda. Se dice que emiten lneas, un
rango muy chiquito de longitudes de onda. En los grficos se ven lneas
(bandas muy estrechas). Este tipo de fuente se utiliza en las tcnicas que
involucran tomos (absorcin atmica, en emisin atmica no se usa FER)
La mas usada es la lmpara de ctodo hueco, otra es la lmpara de descarga
sin electrodos.
LASER
Hay un tercer tipo de fuente, ni contina ni de lneas, que es el lser. El lser es
una fuente de energa radiante muy intensa, que emite radiacin en un ancho
de banda muy estrecho pero en forma continua. Son fuentes que presentan
una elevada resolucin y suelen usarse mucho en la tcnica Raman, absorcin
molecular e IR
Conformacin de una fuente lser
Medio activo, componente principal de la fuente, puede ser de un cristal slido
(generalmente rub), un semiconductor (generalmente arseniato de galio),
colorantes orgnicos o esta formado de un gas, generalmente argon.
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El tubo es bombardeado por una fuente externa que excita a los electrones
hacia niveles superiores, cuando vuelven hacia el estado fundamental emiten
energa. Los espejos reflejan la radiacin emitida , generando cascadas de
electrones y esto hace que la intensidad de la radiacin emitida sea mayor. El
haz que emerge de esa fuente es una radiacin muy potente.
Cualquier tipo de las fuentes antes vistas forman parte del primer dispositivo de
un instrumento , segn la tcnica se usan diferentes lmparas.
Selector de banda
Dentro de los SB tenemos los filtros y los monocromadores
Filtros: de absorcin y de interferencia
Monocromadores: los de redes y los de prismas
Funcin del SB: aislar un rango de longitudes de onda lo mas estrecho
posible, es decir que esa radiacin que emerge (Po) tiene que ser lo mas
monocromtica posible para que solamente emita un rango muy chiquito de
longitud de onda (ley de Lambert-Beer, el rango es + ). La luz salida de la
FER es policromtica, se la hace lo menos ancha posible.
Los instrumentos mas sencillos usan filtros
Ancho de banda efectivo: esta relacionado con la resolucin (por ejemplo
50nm es mucho). Hoy en da algunos instrumentos tienen un ancho de banda
de 0,1 nm . Los filtros por lo general tienen anchos de banda relativamente
grandes, sobre todo los filtros de absorcin. El ancho de banda efectivo da una
idea sobre la calidad del SB.
Hay dos clases de SB: filtros y monocromadores
Conformacin de los filtros de absorcin.
Son dos vidrios coloreados que tienen la finalidad de absorber la radiacin y un
vidrio central, en un soporte plstico. La radiacin que no fue seleccionada es
transmitida generando el ancho de banda seleccionado, generalmente se usa
en la regin del visible. El ancho de banda de estos filtros va de 20 a 250 nm
Filtros de interferencia (posteriores): se usan tanto en la regin del UV como
en la regin del visible, en algunos casos en la regin del IR y proporcionan
anchos de banda ms estrechos que los anteriores. Tienen la caracterstica de
generar un ancho de banda efectivo en funcin de la interferencia ptica.
Generalmente como material dielctrico F
2
Ca o F
2
Mg
Una radiacin incidente coincide con la radiacin siguiente que incide en el
material dielctrico, se suman, se ponen en fase y as sucesivamente de tal
manera que la emergente es estrecha y muy intensa. Interferencia ptica
constructiva. Las restantes radiaciones pasan, se pierden. Hoy en da son los
ms usados.
Monocromadores: se tienen los de redes y los de prisma. Tienen diferentes
resoluciones
Los instrumentos que tiene monocromadores permiten hacer un barrido
espectral, por lo tanto se puede hacer un curva espectrometrica.
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Conformacin de los monocromadores
Constan de una rendija de entrada por donde penetra un haz de radiacin
policromatica, es la encargada de seleccionar. Adems tiene dos espejos o
lentes colimadores que tienen la funcin de generar, producir, un haz de
radiacin paralelo, tiene adems un sistema dispersivo que puede ser una red
de reflexin o un prisma que tiene la funcin e dispersar a la radiacin en sus
longitudes de onda individuales. Hoy en dia la mayora usan redes de
difraccin, los prismas son mas caros. Tiene tambien una ventana o rendija de
salida que selecciona o aisla el ancho de banda deseado.
Redes de Reflexion
El haz incide en el espejo colimador, que genera haces paralelos que inciden
en el sistema dispersivo (por ejemplo una red de reflexin. El Angulo de
incidencia es distinto al Angulo inicial) cuando la radiacin incide en la red se
produce un fenmeno de difraccin (fenmeno que genera la dispersin de la
radiacin) y esa radiacin va contra el segundo espejo y sale por la rendija de
salida, siendo lo mas estrecha posible. La cantidad de dientes de la red varia la
aliad, van desde 300 a 2500 dientes.
Prismas
En los instrumentos que tiene prisma tambin hay una rendija de entrada, una
lente colimadora , pero el fenmeno de dispersin ocurre por un proceso de
refraccin (desvo de la direccin). Luego pasa por una lente focalizadora
(movil) hacia la ventana de salida. Hoy en da los instrumentos tienen redes. El
material del prisma varia segn el uso, los prismas de cuarzo se usan en el UV
y de vidrio se usan en el visible, lo cual constituye una limitacin.
Cubetas
Hay de muchos tipos y formas, segn la regin de trabajo (redondas,
cuadradas, de flujo, etc.)
En el UV generalmente las cubetas son de cuarzo o slice fundido, en la regin
del visible pueden ser de vidrio o plstico.
En el IR son de un vidrio especial o cubetas que tienen una ventana de NaCl
cristalino. Se seleccionan segn regin. Las cubetas no deben tener
imperfecciones y deben estar limpias.
Detectores
Dispositivos que tienen la funcin de detectar la energa radiante que les llegue
y traducirla en una seal que sea fcilmente medible, esta seal generalmente
es elctrica. Deben tener ciertas caractersticas: deben ser estables e un
amplio intervalo de longitudes de onda, una elevada sensibilidad en la regin
de trabajo, adems deben presentar una elevada relacin seal-ruido
(R=seal/ruido). La seal elctrica que se genera en el detector debe ser
proporcional a la potencia de radiacin que llega al detector. Tienen que dar
una respuesta rpida.
Dentro de los detectores hay dos grupos
Fotoelctricos: de tipo A y B
Trmicos
Fotoelctricos.
Son los que se utilizan en el UV , en el visible y en el IR cercano
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Trmicos: se respuesta se basa en el poder calorfico que brinda la radiacin
(esto se vera mas adelante),se utilizan generalmente en la zona del IR.
Dentro de los fotoelctricos se tienen dos tipos, en general los fotoelctricos, el
A y el B se basan en que tiene una superficie que tiene la capacidad de
absorber la radiacin electromagnetica, esta absorcin genera la emisin de e-
y entonces da lugar a una fotocorriente
En el primer grupo, llamado A la absorcin de energa radiante provoca la
emisin de electrones y genera una fotocorriente desde la banda de
conduccin hasta la banda de valencia y eso tambin genera una fotocorriente.
Grupo A tres tipos de detectores caractersticos.
Celda fotovoltaicas
Fototubos de vaco
Tubos fotomultiplicadores
Grupo B
Fotodiodos
Fotodiodos dispuestos linealmente
Celda fotovoltaica: generalmente se utilizan en instrumentos muy sencillos
que se usan para mediciones directas (de campo), en la regin del visible y
esta formado por un tubo de vidrio que en su interior tiene un electrodo de Cu,
sobre la superficie de ese electrodo se deposita un material semiconductor,
generalmente selenio, y a su vez se lo recubre con un bao de Ag o Au.
Cuando incide la radiacin que proviene de la fuente de energa radiante, se
produce una promocin, una excitacin de los electrones del material
semiconductor, se genera una corriente de e-, esta corriente es recolectada por
el electrodo y es la que se mide, es proporcional a la cantidad de radiacin que
incidi.
Fototubos de vaco: de los equipos ms viejos. Ver fotocopia. Es un tubo de
vidrio al que se le ha hecho vaco y que en su interior tiene un ctodo
semicilndrico y un alambre que acta como nodo, ese ctodo esta recubierto
por un material fotosensible que cuando llega la radiacin se genera una
emisin de electrones que se dirigen al catodo generando una foto corriente y
esa fotocorriente es proporcional a la radiacin incidente.
Esa fotocorriente es muy dbil, estos instrumentos necesitan tener un
amplificador.
Tubos fotomultiplicadores: tambin se los llama PMT. Estn formados por un
tubo de vidrio al vaco que contiene un ctodo recubierto con un material
fotosensible y un nodo. La diferencia con el tubo al vaco es que entre el
nodo y el ctodo hay un conjunto de 9 o 10 plaquitas recubiertas por un
material fotosensible que se denominan dinodos que tienen la funcin de emitir
o amplificar la emisin de electrones. Esos dinodos estn colocados de manera
tal que uno presenta potenciales menos negativos que el que precede, lo cual
intensifica la seal haciendo innecesario el uso de amplificadores.
Grupos B
Los otros dos tipos de detectores se basan en que cuando absorben la
radiacin electromagntica provocan la promocin de electrones de la capa de
conduccin a la banda de valencia, generando huecos positivos y e- que dan
lugar a una fotocorriente.
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Fotodiodos: estn formados por unos dispositivos que esta recubierto por un
material semiconductor. Este dispositivo esta colocado sobre una placa de
vidrio o de cuarzo y todo el conjunto esta dentro de un recipiente al vaco.
Generalmente como el material semiconductor se suele utilizar silicio o
germanio , cualquiera de los dos tienen cuatro electrones en la capa de
valencia , quiere decir que cuando se van a fabricar el detector , el fotodiodo,
colocan ese material semiconductor y a su vez le agregan como impurezas en
algunos casos Galio y en otros casos Arsnico, con el objeto de aumentar la
capacidad conductora del material. Cuando se le agrega (dopaje) As, estamos
frente a un semiconductor tipo n, cuando se le agrega Galio es de tipo p.
Este tipo de material semiconductor tiene la caracterstica de que cuando incide
radiacin electromagntica provoca la promocin de estos electrones que
adquieren la energa suficiente como para romper el enlace que los mantiene
en una estructura rgida y pasan a la banda de conduccin, se generan huecos
positivos y negativos por aumento de temperatura. La respuesta es muy rpida
,ms que los anteriores (nanosegundos). En algunos casos se requiere
amplificador.
Fotodiodos dispuestos linealmente: consiste en una serie de fotodiodos tipo
n-p (200- 250 hasta 3000-3500 fotodiodos). Este tipo de detector se utiliza en
instrumentos que se llaman arreglo de diodos. Con este tipo de detector se
puede hacer un barrido espectral muy rpidamente , en aproximadamente 0, 1
segundos de distintas longitudes de onda. Este tipo de instrumentos, por tener
este tipo de detector , no usan SB de tipo monocromadores, sino que tiene
espejos como sistema dispersivo. Es el nico instrumento que la radicacin
policromatica incide sobre la muestra.
Registrador
Es uno dispositivo que decodifica la seal que llega y permite su lectura,
pueden ser analgicos, digitales, incorporados o no.
Esquemas
Existen diferentes tipos de instrumentos:
I-Simple haz
II-doble haz (b) en el espacio
III doble haz temporal (c)
Simple Haz:
Es el mas sencillo. La conformacin esa una FER, SB, Cubeta, Detector,
Registrador. Se dice simple haz porque de la FER, llega a la muestra
solamente un haz de radiacin.
Este tipo de instrumento se calibra con blanco (de reactivo o agua destilada) El
0%T es automtico, luego se pone la cubeta y se lleva a 100%T.
No conviene usarlo para hacer barrido espectral porque no hay forma de
compensar las fluctuaciones de la FER. Cuando se calibra habra que hacerlo
con el blanco para cada longitud de onda, es poco practico.
Son instrumentos sencillos, se usan para mediciones puntuales, no para hacer
curva espectrometricas
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Doble Haz:
Se caracterizan en que cuando la radiacin emergente del SB se divide en dos
haces, de tal manera que una parte de la radiacin pasa a travs de una
cubeta de referencia y la otra parte a la travs de la muestra. Hay dos cubetas
(una de referencia donde va el blanco y otra con la muestra)
Hay dos tipos
Doble haz en el espacio: la radiacin se divide en dos y de manera
simultanea atraviesan la muestra y la cubeta de referencia, cada una llega a su
detector, cuyas seales convergen a un amplificador del tal manera que se
compensan para formar una sola seal que llega al registrador.
Doble haz temporal: a la salida de la FER hay una espejo rotatorio que hace
que la radiacin pase a travs de la cubeta de referencia y de la muestra
alternativamente, las seales van llegan a un nico detector, se amplifica y
registra. La cua ptica disminuye la potencia de la radiacin que pasa travs
de la cubeta de referencia para tener una intensidad semejante a la que
proviene de la muestra. Sino existiese la cua, la radiacin de la FER que pasa
por la cubeta no perdera potencia. En cambio si disminuye la potencia e la
muestra entonces la cua achica la diferencia entre las intensidades de las
seales.
Ventajas del instrumento de doble haz:
Las posibles fluctuaciones generadas por el ruido del instrumento
pueden ser compensadas ya que existen dos haces. Estas fluctuaciones
se deben mayoritariamente a cambios de voltaje en la FER
Permite hacer un barrido espectral
Arreglo de diodos
Hay un tercer grupo de instrumentos llamados instrumento multicanal o arreglo
de diodos.
Son instrumentos que tienen una conformacin ptica muy sencilla pero tienen
la caracterstica de que pueden o permiten detectar en forma simultanea
lectura en toda la regin del espectro.
Registra lecturas en todas las longitudes de onda, permitiendo obtener mucha
informacin rpidamente.
Esta formad por una FER seguida por la cubeta de la muestra, luego un SB fijo
y el detector que en este caso son diodos supuestos linealmente (muchos
diodos n-p soportados por un chip)
La radiacin que incide sobre la muestra es policromatica, una vez que la
atraviesa el SB dispersa la radiacin en sus diferentes longitudes de onda que
llegan a los diodos. Es tan rpido el proceso que la radiacin policromatica no
alcanza a destruir la muestra (en caso de que la muestra sea plausible de ser
destruida por la radiacin).
Procesos luminiscentes
Fluorescencia molecular
Fosforescencia molecular
Quimioluminiscencia
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Son tcnicas de emisin. Las primeras dos tambin se conocen como tecnicas
fotoluminiscentes. Son tcnicas donde las molculas son excitadas por la
accin de una fuente de energa radiante.
En la quimiluminicencia las molculas son excitadas a travs de una reaccin
qumica.
En ambos casos la excitacin genera la seal analitica.
Son tecnicas mas selectivas, ya que no todas las moleculas tiene propiedades
luminiscentes.
Fundamento de la tecnica
Al aplicar radiacin se excita a las molculas de tal forma que los electrones
saltan a estados de energa superiores
Cuando una molcula es excitada absorbe energa, que le permite a los
electrones absorber energa. Los electrones tratan siempre de deshacerse de
ese exceso de energa volviendo al estado fundamental. Esta energa en
exceso se puede perder en diferentes procesos:
Radiantes: se pierden o absorben en forma de foton , h. Es lo que se
mide
No radiante: generalmente se da por prdida, transferencia o disipacin
de calor al medio
Procesos no radiantes
Relajacin vibracional. Este proceso que se debe a choques entre molculas
excitadas y el solvente, ocurre entre estados vibracionales de un mismo nivel
electrnico.
Conversin interna: es un proceso intramolecular, ocurre cuando dos niveles
electrnicos estn muy prximos y generan un solapamiento de los niveles
vibracionales, es decir, vibran juntos y se va perdiendo parte de esa energa
hasta llegar a un nivel menor de energa
Pre-disociacion: se debe a que la energa involucrada en el proceso de
conversin interna puede, en algunos casos, provocar una predisociacin de la
molecular. Romper algn enlace y entonces el analito pasa a ser otro
compuesto.
Disociacion: ocurre cuando la energa es muy alta y rompe los enlaces de la
molecula, con lo cual no tiene lugar el proceso de absorcin.
Estos procesos ocurren muy rpido (de 10
-5
a 10
-9
segundos)
La longitud de onda aplicada en estas tecnicas, que es la que produce la
absorcin depende de los factores anteriores.
A longitud de onda bajas (UV) puede ocurrir que las molculas sufran un
proceso de disociacin molecular. Se rompen enlaces y esa molcula original
ya no es la misma.
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Fluorescencia molecular
En caso de producirse relajacin vibracional y conversin interna, una vez que
todos los electrones estn en el nivel vibracional mas bajo del nivel electrnico
excitado, vuelven a su estado fundamental emitiendo energa (fotones) .
A este proceso radiante se lo llama fluorescencia molecular. Se puede definir
fluorescencia molecular como la diferencia de energa desde el nivel vibracional
mas bajo del estado excitado hacia cualquier nivel vibracional del estado
fundamental.
La molecula se excita en el UV y emite en el visible, de la ecuacin E:h/ se
deduce que a menor longitud de onda mayor energia y viceversa. Entonces si
la molecula absorbe en el UV y emite en el visible, es porque hay perdida de
energia por estos procesos no radiantes.
La fluorescencia es un proceso tambin muy rpido (10
-6
a 10
-10
segundos)
Una de las caractersticas de la fluorescencia molecular, desde el punto de
vista del proceso, es que la fluorescencia ocurre entre niveles electrnicos de
igual multiplicidad (singulete, por el principio de Pauli, electrones con spines
apareados).
Fosforescencia molecular
Existe otro proceso no radiante que se llama cruce entre sistemas
Cruce entre sistemas: este proceso no radiante suele darse cuando por algn
motivo (por ejemplo un solapamiento entre diferentes niveles vibracionales de
estados electrnicos excitados singulete-triplete) los electrones pasan de un
estado excitado , singulete, a un estado excitado, triplete, que se forma con
energa transitoria, inestable, donde los electrones tienen los spines
desapareados, no siguen el principio de Pauli.
Pero aun en este estado triplete puede haber un exceso de energa que se
pierde por relajacin vibracional de manera que los electrones queden en el
nivel vibracional mas bajo de ese estado triplete y de all vuelvan al
fundamental emitiendo energa.
Este proceso se denomina fosforescencia y en general toma un poco mas de
tiempo que la fluorescencia (de 10
-4
a 10 segundos)
La principal diferencia con la fluorescencia es que la fosforescencia ocurre
entre niveles electrnicos de diferente multiplicidad (triplete)
Conversion externa
Puede darse otro proceso no radiante que es el proceso de conversin externa.
Ese proceso involucra la transferencia de energa entre las molculas que son
excitadas y las molculas del solvente. Ese proceso provoca una disminucin
en la intensidad de fluorescencia y se conoce con el nombre de QUENCHING
La disminucin en la intesidad tambien puede deberse a la disociacin y
predisociacin.
Ambas tcnicas requieren una longitud de onda de excitacin y necesitan una
longitud de onda de emisin.
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Analisis Instrumental
Es decir, se necesitan dos selectores de banda.. Las longitudes de onda tienen
la relacion
exciatacion
<
emision
, es decir, que la longitud de onda de emisin sea
mayor que la de absorcin.


c(luz)
E=h h
,a mayor longitud de onda menor E
Teoricamente toda molecula que absorbe energia puede ser luminiscente, para
estimar o determinar esto existe un parametro rendimiento cuantico que esta
presente en ambas tcnicas
f
f
f CES IE CI PD D
K
=
K -K +K +K +K +K
Este parmetro nos da una idea cualitativa para poder interpretar como pueden
influir factores estructurales y el entorno qumico en la intensidad de
fluorescencia o fosforescencia. Este parmetro relaciona las distintas
velocidades relativas de los distintos procesos radiantes y no radiantes.
Kf= velocidad relativa de fluorescencia
Krv: relajacin vibracional
Kces= cruce entre sistemas
Kce=conversin externa
Kci=conversin interna
Kpd= pre disociacin
Kd= disociacin
Una molecular tiene caractersticas de ser fluorescente si Kces es mnimo o
nula y Kci tambin, Kpd y Kd deben ser nulas. f es un valor entre 0 y 1. Esta
en manuales, handbooks, etc.
Esta relacionada con medio y estructura. Kpd y Kd estn relacionadas con la
estructura mientras que Ices y Kci dependen del medio (solvente, pH, etc.). Por
eso se puede estimar las fluorescencias (si son fuertes o no, cualitativamente)

f
cercanos a 1 = mucha fluorescencia o fosforescencia

f
cercanos a 0 = poca fluorescencia o fosforescencia.
La emisin siempre ocurre en la regin del visible
Factores que afectan las intensidades
Tipo de transiciones
Uno de los factores fundamentales para que una molcula sea fluor o
fosforescente es el tipo de transiciones que presenta. Generalmente las
molecular que presentan fluorescencia son molculas que presentan
transiciones * y las que presentan fosforescencia son molculas con
transiciones n* .
Como a veces esto es impredecible (si tiene o no caractersticas de fosfo o
fluorescente) se hacen siempre determinadas consideraciones. Se sabe que
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Analisis Instrumental
generalmente para las molculas que tengan este tipo de transiciones se parte
de que la energa de excitacin ocurre a longitudes de onda partir de 250nm
hasta aproximadamente 380nm. Es decir en la regin del UV. A menores
longitudes de onda, en el UV lejano, la energa es tan alta que puede darse el
proceso de la disociacin de la molcula, en este caso son molculas que
tienen transferencia *
Es importante conocer la estructura de las molculas. Determinadas molculas
como por ejemplo los hidrocarburos no aromticos, con dobles enlaces, que
tiene trancisiones * , generalmente tienen caractersticas fluorescentes.
Los hidrocarburos aromticos, por ejemplo el benceno, por si solo tiene
caractersticas fluorescentes.
Susituyentes
La presencia de sustituyentes pueden variar la intensidad de fluorescencia,
fundamentalmente cuando los sustituyentes son halgenos. En los aromticos
halogenados se produce conversin externa y eso disminuye la intensidad.
Tambin hay molculas que tiene grupos C=O o algn heteroatomo como N, S
donde predominan las transposiciones n * y esto hace que la molcula
tenga caractersticas fosforescentes.
Rigidez
Es importante la estructura en el sentido de la rigidez. Entre fluoreno y bifenilo,
por ejemplo, el grupo CH2- en el fluoreno le brinda mayor rigidez haciendo
que tenga mayor eficiencia que aquellas que no son rgidas (se mueven). Si se
mueven estn favorecidos los choques entre molculas y por lo tanto la
conversin interna, lo cual disminuye la intensidad.
El entorno qumico tambin es importante
Temperatura. Debe ser ptima de tal manera que se eviten choques entre
molculas y se vean favorecidas la conversin externa, ya que esto disminuye
la intensidad de fluorescencia
Solvente: debe ser el adecuado: si se usa un solvente muy viscoso las
colisiones disminuyen lo que puede favorecer la fluorescencia. Tambin es
importante conocer la polaridad del solvente, esta puede provocar una re
orientacin de las molculas del solvente alrededor de las molculas que uno
quiera excitar y esto puede provocar elevacin de la seal de flor o
fosforescencia
pH: siempre es importante controlarlo. Hay especies que son fluorescentes a
cierto pH y a otro no.
O
2
y atomos pesados
Otro factor a tener en cuanta es la presencia de tomos pesados.
Se debe elegir el solvente adecuado para evitar que estos tomos pesados
favorezca la conversin externa y disminuya la fluorescencia (por ejemplo
cuando se usa como solvente bromuro de isopropilo).
Otro factor es la presencia de O
2
disuelto, en algunos casos la presencia de O
2
puede generar una oxidacin de las molculas y esto hace que cambie la
estructura de las molculas y disminuya la intensidad de fluorescencia
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Analisis Instrumental
Todas estas variables y la estructura molecular se deben conocer y tener en
cuenta al hacer una determinacin cuantitativa.
INSTRUMENTACION EN TECNICAS FLUORESCENTE Y
FOSFORESCENTES.
El fluorimetro es un instrumento sencillo, de simple haz. Tiene una FER , un
dispositivo (selector de banda), un lugar donde se pone la muestra (cubeta) y a
90 respecto de la radiacin incidente tiene colocado otro selector de banda y
luego viene el detector
Hay dos selectores de banda porque se necesita una longitud de onda de
excitacin y de emisin
La mayora de los equipos que se utilizan en el laboratorio son fluorimetros , es
decir que tienen como selectores de banda filtros, o en algunos casos
monocromadores, pero uno fija las longitudes de onda con las que va a trabajar
(ex y em)
Hay otros instrumentos que tienen monocromadores de red, se llaman
espectrofluorimetros y permiten hacer espectros (barridos de longitudes de
onda). Uno puede obtener con este instrumento ex y em, es decir se hacen
dos curvas espectrometricas.
FER
Siempre hay una FER que provoca la excitacin de las molculas. Las FER
que se utilizan en la tcnica de fluorescencia y fosforescencia molecular son
fuentes continuas. Son aquellas que emiten en un amplio rango de longitudes
de onda, el espectro que se obtiene es una banda.
En las lmparas usadas en estas tcnicas la potencia que emiten tiene que ser
de mayor intensidad que en absorcin molecular.
Dentro de las FER mas comunes utilizadas estn: lmparas de Xe, lmpara de
Hg a baja presin y la lmpara de Hg a alta presin. Cualquiera de las tres son
tubos de vidrio donde adentro hay gas a baja presion (salvo de la Hg a alta
presion) y tienen filamentos de los distintos componentes. Cuando se genera la
descarga electrica emiten radiacin. La lampara de Hg a alta presion emite
lineas intensas de radiacin en forma continua.
En los primeros fluorimetros se utilizaba la lmpara de Hg a baja presin, esta
tenia la caracterstica que emita a longitudes de onda definidas, si bien era
contina tenia determinadas longitud de onda de a las que emita con mayo
intensidad, esto hacia que esas lmparas fueran inestables. Hoy en da la
mayora de los equipos tiene lmpara de Xe. Este es estable, por lo que el
espectro es mas contino y mas uniforme. Hay algunas que combinan la de Xe
y la de alta presin. Los equipos mas caros usan lser como FER
Selector de banda
Los selectores de banda que puede tener los fluorimetros son filtro de
interferencia, el espectrofluorimetro tiene monocromadores de red.
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Analisis Instrumental
Cubetas
Las cubetas son de cuarzo o de vidrio, pero la caracterstica que tienen que
presentar es que todas las caras sean transparentes (a diferencia de las de
absorcin molecular).Esto se debe a que lo que vamos a medir es un seal de
fluorescencia y esta se emite en toda direccin y sentido.
Detectores
Los detectores pueden ser de cualquiera de los vistos de tipo fotoelectrico,
PMT, diodos dispuestos linealmente, etc. El detector esta colocado a 90
respecto de la radiacin incidente porque solo se necesita la seal de
fluorescencia, no la relacin P/Po. Colocando el detector en cualquier otro
ngulo se asegura que lo que llega al detector es solo la seal de fluorescencia
y no hay perdida por absorcin. Se necesita otro selector de banda para que al
detector solo llegue la em.
Instrumento en fosforescencia
En fosforescencia molecular el instrumento tiene muy pocas diferencias.
La FER tambin es continua , generalmente lmpara de Xe. Con dos
diferencias
Que esa lmpara acta en forma de flash, va irradiando la muestra en forma
alternada. Esto es porque la fosforescencia tarda un poco mas en ocurrir que la
fluorescencia. De tal manera que despus de un determinado tiempo uno pude
medir la intensidad de fosforescencia
Como selectores de banda tienen exactamente los mismo y las cubetas
tambin son las mismas.
Los detectores tambin son los mismos
Los equipos de fosforescencia vienen provisto de un dispositivo que permite
trabajar a temperaturas muy bajas (T de N
2
liquido, se aplica burbujeando).
Esto es para evitar que en algunos casos la seal de fluorescencia sufra alguna
disminucin o degradacin.
La fosforescencia es muy sensible y selectiva.
En otro casos se trabaja a T ambiente para hacer determinadas
fosforescencias , pero en este caso se debe trabajar con medeos organizados.
Suele utilizarse como medeos organizados las y dextrinas.
Efecto de la concentracin en la intensidad de fluorescencia
Relacin entre la seal de fluorescencia con respecto a la concentracin.
Cualquiera de la tres tcnicas son sensibles selectivas y permiten o tienen
limites de deteccin muy bajos , es decir que podemos determinar pequeas
cantidades de muestras.
La intensidad de fluorescencia es proporcional a la intensidad de radiacin
incidente. Podemos plantear.
o
F=K(P -P)
Donde K es una constante que depende de la eficiencia cuantica de la
molecula.
13
Analisis Instrumental
Si recordamos la ley de Beer:
-bc
o o
P P
A=-log =10
P P
| `

. ,
Si reemplazo y saco factor comn Po y luego desarrollando la serie de Taylor:
( ) ( )
-bc
o
2 3
o
F=KP (1-10 )
2.303bc 2.303bc
2.303bc
F=KP - +
1! 2! 3!
]
]
]
]
Si la A es menor que 0,05 (soluciones diluidas) los trminos elevados al
cuadrado y al cubo y dems se hacen despreciables. Si eso ocurre podemos
decir que:
o
K
F=KP 2,303bc=Kc
1 442 4 43
La fluorescencia molcular es mas sensible que la absorcin molecular por lo
que se pueden medir valores muy chicos de seales dado que a bajas
concentraciones la relacin es lineal. Esto ocurre cuando trabajamos con
soluciones diluidas y permite hacer determinaciones cuantitativas.
Esta tecnica es mas sensible que la absorcin molecular ya que se trabaja en
rangos de A muy chicos, lo que conduce a pendientes mas elevadas.
La fluorescencia molecular se aplica para compuestos organicos, inorgnicos
(en este caso se los debe quelar primero, solos no son luminiscentes),
muestras ambientales, etc. La fosforescencia tiene aplicaciones similares, pero
es mas seleciva aun que la fluorescencia.
PMQ para una tecnica luminiscente:
1) Fijar las condiciones operacionales
Seleccionar mediante una curva espectrometrica las longitudes de onda de
excitacin y emisin y calibrado: el instrumento se calibra a 0 intensidad con el
blanco de reactivo y al 100 con el testigo de mxima concentracin, la curva
queda entonces como Intensidad vs concentracin.
2) Preparacin y medicion de testigos y muestra
3) Procesamiento por minimos cuadrados
4) Expresin del resultado como intervalo de confianza, 95%
x0
C = X tS porque es una curva de calibrado g.l = n-2
Quimioluminiscencia (reaccin qumica)
Es una tcnica muy selectiva, muy sensible y tiene la ventaja de que es una
tcnica simple. Ocurre cuando una reaccin qumica genera una especie, esa
especie esta excitada y cuando vuelve a su estado fundamental lo hace
14
Analisis Instrumental
emitiendo radiacin. Esa radiacin puede ser transmitida o transportada a otra
especie que luego emite radiacin.
Se la define como emision de radiacin electromagntica generada a traves de
una reaccion quimica, la emision ocurre en el visible y en el IR
Puede ser directa o indirecta
Directa: un precurso reacciona con un oxidante fuerte, el precurso genera un
producto transitorio excitado p->p*, luego vuelve emitiendo hv
Indirecta: otro camino, mas usado, es en forma indirecta. El precursor mas el
oxidante dan el producto electronico excitado, pero este no alcanza para emitir,
se lo ayuda agregando un fluoroforo que recibe la energia del producto
intermedio y cuando vuelve al fundamental emite fotones.
A + B C
C* C + h P P* P* P + h


Son dos caminos para legar a la emision, reaccion en medio adecuado (con
oxidante fuerte y catalizador) o transferencia d energia
A +B reaccionan, me dan una especie excitada (los electrones de C* estn en
un nivel excitado) cuando vuelven lo hacen emitiendo radiacin
H puede ser transferida a otra especie (P) provocar la excitacin y cuando
vuelve al estado inicial lo hace emitiendo.
Luminometro
Solo consiste en tener un recipiente donde .. Se produce la reaccin y se mide
directamente la seal que emite. Se necesita un recipiente donde se coloca la
muestra y un detector (solo detectar emisin de radiacin que se genera).
Generalmente es un PMT
Lo que hay que tener en cuenta es que la reaccin ocurre muy rpidamente y
hay que medir en el momento que se logro la mxima intensidad de
quimioluminiscencia. Uno tiene que buscar el TM, porque cuando se va a hacer
una curva de calibrado, si se toma el tiempo incorrecto la intesidad es menor y
la curva ya no es tan buena. El tiempo es un parmetro muy importante (tiempo
donde se produce la mxima seal). Se debe realizar previamente un grafico
de seal funcin del tiempo, eso hace a la sensibilidad del metodo.
Condiciones operacionales
Se debe trabajar con soluciones testigos. Hay que controlar las variables
experimentales u operacionales . Hay determinados componentes o reactivos
que tienen caractersticas luminiscentes (siempre se usan), tiene la
caracterstica de provocar componentes luminiscentes. El que ms se usa es
luminol (a) y luciferina , este en medio alcalino en presencia de O
2
, tiene la
caracterstica de formar un componente que es el 3-aminoftlalato y emitir
radiacin caracterstica a 420-425 nm. Esta intensidad de radiacin a esta
longitud de onda se ve modificada por la presencia de algunos metales , por
ejemplo Cu, Fe, V, Co, ya que disminuyen la intensidad de la seal. Uno puede
determinar pequeas cantidades de metales con estas tcnicas.
15
Analisis Instrumental
Para hacer la determinacin cuantitativa , se preparan testigos con distintas
concentraciones se hace la curva de calibrado y se da un resultado como
intervalo de confianza,
Con cualquiera de las tres tcnicas se pueden hacer determinacin de
compuestos orgnicos, inorgnicos, en pequeas cantidades ya que son muy
sensibles y selectivas
Espectroscopia atmica
Se basa en la absorcin o emisin de energi radiante por parte de tomos.
Esos tomos generan absorcin o emisin que da origen a espectros de
bandas estrechas, que son aproximadamente de 10
-5
a 10
-2
nanmetros.
El + es mucho mas chico que en emision o absorcin molecular
Esto es porque se ven involucrados los niveles electrnicos (ni lo rotacionales
ni los vibracionales). Los espectros son ms sencillos. El ensanchamiento que
se ve puede deberse a tres fenmenos o procesos
Efecto de incertidumbre
Efecto por presin
Efecto ensanchamiento doppler
Efecto de incertidumbre o ensanchamiento natural: esta relacionado con el
tiempo que tardan los electrones cuando pasan del estado fundamental al
estado excitado y volver al estado fundamental, en un tiempo muy limitado. Al
volver se provoca el ensanchamiento
Efecto por presin (efecto Lorentz): se debe a choques que se generan
entre las especies que absorben energa o emiten y los otros iones o atomos
presentes en el medio. Eso provoca una disipacin o cambios en lo niveles
energticos y como consecuencia trae que haya una dispersin con respecto a
la longitud de onda de absorcin.
Efecto doppler: ocurre cuando usamos como atomizador a la llama. Los
tomos de la especie en estudio por efecto trmico chocan debido al
movimiento en el interior de la llamada provocan el ensanchamiento en la
banda

Transformacin del analito en tomos.
Se usan atomizadores, hay de dos tipos:
{

'

ICP=plasma de acomplamiento inducido


Atomizadores Chispa elelctrica
Llama
Discretos Electrotermicos
Atomizadores continos: Son aquellos donde la muestra se introduce en
forma de solucin y se convierte en una niebla de gotitas muy chiquitas
mediante un nebulizador que luego es transportado por un gas hacia la zona
donde se produce la atomizacin. En cambio en los atomizadores discretos se
16
Analisis Instrumental
coloca en su interior un determinado volumen (cantidad de muestra) y all se
produce la atomizacin de la especie.
Llama: se puede utilizar tanto en emisin como en absorcin atmica. Una
llama esta compuesta por una mezcla de un combustible y un comburente
(mezcla C/C).
Es importante conocer la temperatura a la cual toda la muestra entra en estado
atmico gaseoso.
Uno de los parmetros fundamentales es la temperatura
Zonas de la llama
Zona de combustin primaria: es el cono interno es la zona donde recin
comienza a generarse y producirse las reacciones de combustin entre el
combustible y el oxidante. Son reacciones rpidas que no alcanzan a llegar al
equilibrio
En esta zona todava no se alcanza la temperatura ptima
Zona de combustin intermedia: en esta zona las reacciones de combustin
estn en equilibrio termodinmico, la temperatura deseada se logra y es
constante y homognea, se logra la misma temperatura. Es la zona de trabajo
En la tercera zona: zona secundaria, es la externa. La ms fra, es la zona que
esta en contacto con la atmsfera, difusa. Pueden ocurrir reacciones
secundarias, no conviene trabajar all.
Para seleccionar la T optima se debe tener en cuenta que la mezcla C/C
genera un fondo de llamada
Otros factores de dependencia adems de la mezcla C/C
La velocidad con que fluyen los gases para tomar la llama
De la relacin molar C/C
Del diseo del quemador
De la altura de la llama
Tambin es importante la velocidad de ingreso de la muestra o de los testigos a
la llama
Proceso de atomizacion
Transporte de la muestra: en solucin, es aspirada a travs de un capilar y
transportada a traves de un tubo plastico de diametro pequeos hacia el interior
del nebulizador. La velocidad con que ingresa la muestra y los testigos debe
mantenerse siempre igual y debe ser reproducible (preparados de igual
manera). Una vez que llegan al nebulizador este transforma la solucin en finas
gotas (spray), de tamao homogneo muy chiquitas, de tal manera que antes
de que llegan a la llama, el propio nebulizador, a traves del spoiler, es el
encargado de desechar aquellas gotas que no son homogneas, las de mayor
tamao. Una vez que el spray homogeneo llega a la llama (optima) ocurren tres
procesos.
1) Evaporacin del solvente ocurre cuando el aerosol llega a la llama, se
evapora el solvente y quedan las partculas de la sal. Depende del tamao de
gotas, velocidad de ingreso, tiempo de contacto con la llama y tipo de solvente.
Si estas condiciones no son buenas, la muestra estara contaminada
17
Analisis Instrumental
2) Volatilizacin: las partculas slidas pasan al estado de vapor y una vez
que ocurri esta etapa ocurre la etapa final. Esta etapa depende de la
capacidad de volatilizacion de la muestra y de la temperatura.
3)Atomizacin: la sal se disocia y se forman los tomos neutros al estado
gaseoso, quedando disponibles para absorber o emitir energia.
Llama: puede usarse tanto en emision como en absorcin atomica
Como atomizador la llama es mas econmica, pero debe tenerse cuidado con
la temperatura de a llama, que sea optima y suficiente para lograr la
atomizacin completa de la muestra y adems debe tenerse cuidado que
cuando se selecciona la mezcla C/C para trabajar el espectro de emisin de
esa muestra no interfiera en la seal del analito.
ICP= plasma de acoplamiento inducido
Este atomizador se utiliza en la tcnica de emisin atmica, no en absorcin
atomica
Plasma: un gas calentado y parcialmente ionizado que tiene la caracterstica
de conduccin la electricidad. Generalmente como plasma se utiliza Argon
Antorcha: esta formada por un tubo de cuarzo, dentro de otro, rodeados por
una bobina de induccin que esta conectada a un generador de radio
frecuencia. Por el interior de esos tubos circula un gas inerte, generalmente
Argon
Cuando se genera una descarga elctrica que proviene de la bobina de
induccin ese argon se ioniza, generando en el medio iones argon y una
corriente elctrica de electrones que genera el plasma, logrando un aumento
de temperatura del gas que llega a alcanzar en el extremo superior de la
antorcha entre 9000 y 10000 grados Kelvin. Es ah donde se logra la
atomizacin de la muestra. Es una llama muy luminosa pero sin combustin.
Una de las ventajas frente a la llama es que se logra mayor temperatura sin
que haya combustin. La temperatura se controla, se la mantiene estable y
constante, haciendo fluir Argon en forma tangencial (contracorriente,
refigerando el tubo). No hay espectro de fondo porque no hay combustin
Introducccion de la muestra.
El equipo tiene una entrada para el capilar donde se introduce la muestra, esta
llega al nebulizador, se forma el spray y de all es introducida por la parte
inferior de la antorcha de plasma hacia el cono superior que es donde se
producen los tres procesos ya vistos.
Condiciones operacionales
Una de las variables que uno debe controlar es como generar ese plasma,
regular la generacion de la radiofrecuencia. Si es muy baja o no es la optima el
plasma que se genera es un plasma con forma de lagrima y hay perdida de
muestra, no llega toda la zona de combustin maxima
La forma adecuada del plasma es como lo indica el dibujo B donde esa
antorcha tiene como una inflexin de tal manera que no deja que se escapen
las gotitas. De esta manera llega mayor cantidad de muestra.
Ventajas del ICP frente a la llama:
18
Analisis Instrumental
Temperatura: es muchsimo mayor , el tiempo de contacto entre la
muestra y la antorcha es menor, lo que optimiza los procesos de
evaporacin, volatilizacion y atomizacion
Los limites de deteccin son mucho mas bajos que si se utiliza la llama.
Otra ventaja es que con el ICP como atomizador hay una elevada
densidad electrnica en el medio y esa densidad electrnica evita que
existan interferencias debido a especies que se ionizan fcilmente,
Otra ventaja es que el efecto matriz o las interferencias generadas por el
efecto matriz es menor que utilizando la llama y eso se debe a que
estamos en un medio qumicamente inerte que favorece el tiempo de
vida de los tomos neutros en estado gaseoso donde no hay
combustin.
Atomizadores discretos-> electrotrmicos-> horno de grafito
Se utiliza en absorcin atmica.
Se les llama as porque se coloca determinado volumen o cantidad de muestra,
hasta que se logra la atomizacion completa.
Horno de grafito: Se utiliza en absorcin atomica, no en emisin.
Es un cilindro de grafito recubierto por un material piroelectrico. Esta abierto en
los dos extremos y tiene un orificio en la parte frontal por donde se introduce la
muestra. La longitud es aproximadamente de 5 cms y tiene n dimetro interno
de 3 a 8 mm.
Ese cilindro abierto permite que este conectado a un par de conectores
elctricos y alrededor del tubo circula un gas inerte (Argon) que tiene la funcin
de desalojar vapores que pueden quedar en el interior del tubo. Dentro del
cilindro se encuentra una plataforma llamada plataforma de lvov , tambin
recubierta del material piroelectrico y sobre ella se deposita la muestra de tal
manera que queda toda concentrada sobre esa plataforma.
Como ese horno esta conectado a esos contactos elctricos la muestra sufre
un proceso de atomizacin debido a un calentamiento provocado por
resistencias elctricas (electrotrmico).
Dentro de ese horno ocurren los tres procesos ya vistos (evaporacin del
solvente, volatilizacin o calcinacin y atomizacin)
La evaporacin del solvente ocurre a temperaturas alrededor de los 100C,
luego hay una etapa de calcinacin que comprende entre 350 y 1500C. en la
ultima fase, la atomizacin, las temperaturas son mayores , de 1500 hasta
3000C, donde se logra la atomizacin completa de la muestra.
Este ciclo se va programando segn el tipo de muestra que se tiene. Hoy en
da los equipos tardan entre 3 o 4 segundos en lograr la atomizacin completa.
Ventajas
Trabajar con hornos de grafito tiene algunas ventajas en comparacin
con la llama:
Se puede trabajar con pequeas cantidades de muestra (micro o nano
gramos o litros)
Los limites de deteccin son mucho mas bajos que la llama
La muestra no sufre ningn proceso de dilucin en el horno, si se ponen
por ejemplo 5gr entran al ciclo 5 gr. Si se usa la llama la muestra debe
estar diluida, debe ser aspirada (se puede perder) luego llega a la
mezcla C/C donde tambin se puede perder.
19
Analisis Instrumental
Se debe controlar bien que tipo de reactivo se utiliza, si necesita agua, etc
Desventajas:
Es un mtodo muy caro
Si por algn motivo el ciclo no es completo (no se logra la atomizacin
completa) y dentro del horno quedan molculas que pueden absorber la
radiacin o pueden dispersarla, conduciendo a errores.
Las tcnicas son absorcin y emisin atmica.
Emisin atmica
Se basa en medir la emisin de energa radiante generada por parte de tomos
neutros en estado gaseoso. Luego de que fueron excitados trmicamente. La
tcnica de emisin atmica es una tcnica analtica cualitativa y cuantitativa
porque relaciona la emisin con la concentracin. Cualitativa porque esos
tomos emiten a una longitud de onda caracterstica, propia de cada elemento
y cuantitativa porque relaciona la emisin con la concentracin.
En la tcnica de emisin atmica no hay FER, la energa la proveen la llama y
el ICP (funciona como atomizador y como FER). La muestra se coloca en el
atomizador. Llega todo a la llama o al ICP. Luego tiene selectores de banda o
filtros de interferencia o monocromadores. La radiacin llega al detector, que
generalmente son PMT y luego al registrador.
La variable ms importante a controlar es la temperatura.
Generalmente la tcnica de emisin se usa para detectar metales
monovalentes o bivalentes: Li, Na, K etc. Tanto en forma cuantitativa como
cualitativa, ya que la longitud de onda de emisin es caracterstica de cada
elemento.
La tcnica es cuantitativa porque la IE (intensidad de emisin)=kC, a
soluciones diluidas la relacin es lineal, lo que permite preparar curvas de
calibrado.
El resultado se expresa bajo las condiciones usuales y la expresin V
i
V
ii
.
Las variables, en el caso de al presin del gas, se deben controlar.
Excepcionalmente en la prctica no se puede controlar la presin de gas
(porque es de lnea). As que no se hace curva de calibrado. Se aplica el
mtodo del factor.
Absorcin atmica
Se basa en medir la absorcin de energa radiante por parte de los tomos
neutros en estado gaseoso luego de haber sido excitados por una fuente de
energa radiante. La caracterstica es que la fuente es discontinua, entra
radiacin en un nmero limitado de longitudes de onda caractersticas. La
lmpara que ms se utiliza en absorcin atmica es la lmpara de ctodo
hueco.
Lmpara de ctodo hueco: tubo cilndrico hueco con ventana de cuarzo o
vidrio, en su interior tiene Argon a baja presin y tiene como nodos un
alambre de Tungsteno y como ctodo tiene una lamina cilndrica que esta
recubierta con la sal del elemento a determinar. Hoy en da hay lmparas
multielemento. Emite radiacin caracterstica del analito en estudio, es hace a
la tcnica mas selectiva.
20
Analisis Instrumental
Otra lmpara que suele utilizarse es la lmpara de descarga sin electrodos.
Luego de la FER viene el Atomizador que en este caso es la llama o el horno
de grafito.
Dispositivo que acta como selector de banda: filtros o monocromadores.
Detector: los mas comunes tiene PMT y luego el registrador.
Tambin existen elementos simples y de doble haz.
Dos aplicaciones de la tcnica de absorcin atmica para trazas
Generacin de hidruros
Tcnica de vapor fro.
Generacin de hidruros
Se usa cuando se quiere determinar pequeas cantidades, trazas de Arsnico,
Selenio, Bismuto, antimonio, plomo y con la tcnica de absorcin atmica
propiamente dicha no se puede cuantificar.
Lo que se hace es tratar a la muestra con NaBH
4
en medio acido, de tal
manera que se forme un hidruro y ese hidruro tiene la caracterstica de ser
voltil, puede ser arrastrado por un gas y llevado directamente hacia un
atomizador. En el atomizador se descompone el hidruro y se originan los
tomos neutros en estado gaseoso de ese elemento.
- +
4 3 3 3 3 3 2
3BH + 3H + 4H AsO H BO + 9H As + 3H O
La cuantificacin se hace por testigos y curva de calibrado, como es usual.
Ventajas:
El analito es arrastrado de la matriz y esto hace que disminuyan las posibles
interferencias por la matriz.
Vapor fro
Se utiliza para determinar pequeas cantidades de Hg en solucin. El equipo
es semejante al anterior pero se mezcla la solucin de mercurio con una
solucin de cloruro estaoso Cl
2
Sn en presencia de algn oxidante fuerte
(H
2
SO
4
o HNO
3
). De esta manera esto se agita y el ion mercurio se convierte en
vapor metlico (vapor de Hg) y es arrastrado por un gas inerte hacia la cubeta
de absorcin y de all se mide directamente a la longitud de onda
caracterstica del Hg que es 264nm
Se puede determinar cuantitativamente en ambos casos
Tanto en absorcin como en emisin atmica puede haber dos tipos de
interferencia: espectrales y qumicas.
Espectrales: se dan cuando la absorcin o emisin de una especie genera un
solapamiento de las bandas caractersticas, provocando dispersin de la seal
o disminuyendo la intensidad.
1) La mas comn es aquella que se origina cuando el atomizador es la llama y
la mezcla C/C proporcin aun espectro de fondo de absorcin o emisin.
Solucin: cambiar la mezcla C/C.
21
Analisis Instrumental
2) Otra que puede ocurrir es, sobre todo en el horno de grafito, que quede
algn metal (St,Ti) que a determinada temperatura forman xidos con las
paredes de los hornos refractarios y esos xidos emitan en la zona donde
emite el analito y que tambin enmascaren la seal a cuantificar. Este tipo de
interferencia se trata de eliminar aumentando la temperatura hasta que los
xidos sean inestables y no interfieran en la medicin.
3) Otra interferencia posible es que la atomizacin no sea completa y quede
molculas que generan un espectro (por ejemplo el Ca
2+
). Se soluciona
aumentando la temperatura.
4) Otra interferencia es que en la muestra haya dos sustancias que emitan o
absorban a longitudes de onda cerca, solapando las seales
Efecto matriz
En absorcin o emision atmica es importante controlar la interferencia
provocada por la matriz del compuesto, es decir por los otros componentes
presentes. Este caso se presenta cuando debido a la presencia de compuestos
en la matriz interfieren con la muestra. Por ejemplo el Ca
2+
en leche, en la
leche hay otros componentes, se debe separa al Ca
2+
y atomizarlo todo, de otra
manera el resto de los constituyentes interfiere.
El efecto matriz es particularmente importante en el anlisis de alimentos, ya
que son matrices complejas
Se soluciona trabajando con instrumentos que presentan determinadas
caractersticas.
Esta interferencia es mas frecuente en absorcin atmica y puede corregirse
de dos formas:
Mtodo de correccin con una fuente continua : los equipos ya viene
equipados as (con una lmpara continua y otra de ctodo hueco). De tal
manera que ambas radiaciones pasan en forma alternada a travs del
atomizador, as la radiacin que proviene de la lmpara de ctodo hueco es
absorbida por los tomos neutros al estado gaseoso y por las molculas que
generan ese efecto matriz mientras que la radiacin que provino de la lmpara
continua es absorbida por las molculas de tal manea que al detector llega
solamente la compensacin de ambas seales y esa es la seal que se registra

]

]
]
LC
atomos atomos moleculas
LCH +
moleculas LCH LC
detectores
Correccin por efecto Zeeman
Otra forma de corregir, evitar o disminuir el efecto matriz es a travs de la
correccin por efecto Zeeman. En este caso tambin hay una compensacin de
seales de tal manera que al detector solo llega la seal correspondiente al
analito.
Este instrumento es un horno de grafito rodeado por un electroimn que
desdobla los niveles energticos correspondientes a los tomos libres neutros
al estado gaseoso, de tal forma que cuando llega la radiacin de la LCH
22
Analisis Instrumental
absorben de manera alternada los ANLg y las posible molculas que
interfieren. Mediante un dispositivo el detector solo registra la seal de los
ANLg.
Cuando la luz pasa en forma normal absorben los ANLg y las molculas,
cuando pasa en forma polarizada y el nivel electrnico se desdobla, solo
absorben los ALNg.
Quimicas
Las interferencias qumicas generalmente ocurren cuando no se tuvo en cuenta
o no se controlaron correctamente las condiciones operacionales
1)La presencia o formacin de compuestos poco voltiles (algunos aniones,
SO
4
, PO
4
, tienen la caracterstica de que a determinada T reaccionan y forman
compuesto poco voltiles con el analito en estudio, por ejemplo con Mg o Ca).
Esto lleva a que haya menos ANLg , interfiriendo asi con la cantidad a
determinar. Se soluciona agregando a la solucin del analito un compuesto
llamado agentes liberadores, que tienen la caracterstica de reaccionar con el
anion antes de que este lo haga con el analito. Se usa Litio o Silicio como
agentes liberadores.
2)Otra posible interferencia es el equilibrio de disociacin. Algunos compuestos
tienen la caracterstica de afectar y modificar el equilibrio de disociacin de
algunas sales. Por ejemplo: si se tiene ClNA a determinada T se forman los
ALNg, pero si hay HCl en el medio en determinadas condiciones los tomos de
Cl provenientes del HCl hacen efecto de masa y desplazan el equilibrio.
Equilibrio de ionizacin: se debe elegir la T adecuada del atomizador de tal
manera que no provoque la ionizacin de la muestra. De no ser posible
cambiar la T de ionizacin se agrega al medio supresores de ionizacin cuya
funcin es ionizarse mas rpidamente que el analito en estudio. En el medio
habr electrones que desplazan el equilibrio a favor de la no ionizacin del
analito. Esta situacin lgicamente no sucede en el ICP, dado que el plasma es
gas parcialmente ionizado.
Espectrometra de absorcin en IR
Esta tcnica de absorcin de energa radiante comprende la zona que va
desde 700 nm hasta aproximadamente 1300/1500 nm .
La regin puede dividirse en cercano, medio y lejano
Generalmente desde el punto de vista analtico las determinaciones
cualicuantitativas se trabajan en ir cercano y medio
La tcnica se usa mucho para la determinacin de compuestos orgnicos.
Caracteristicas de los espectros
Los espectros se grafican en porcentaje de transmitancia en funcin del
numero de onda (1/). Los espectros dan picos o bandas caractersticos a
distintos grupos funcionales, por eso decimos que es una tcnica que permite
identificar compuestos. (Hay dos espectros de ejemplos en fotococopia1): son
dos alcanos que presentan similitud en algunos picos, por ejemplo en zona de
2800-3000 cm-1, hay una banda tpica de unin C-H, luego en 1600-1400 cm-1
hay otra banda caracterstica de la unin C-C ).
23
Analisis Instrumental
Es una tecnica cualitativa y puede usarse para hacer cuantificaciones, estas
ultimas se ven condicionadas por el estructura del compuesto. Las moleculas
polinucleares, por ejemplo, son difciles de determinar cuantitativamente porque
las bandas se superponen.

Generacin de un IR
La radiacin proviene de zona del IR cercano-1500nm [E:hc/v] cuanto mayor es
la longitud de onda menor es la energa: la radiacin que proviene de esa zona
no es muy intensa (como si lo es la UV. y visible).
Esa radiacin no alcanza para producir transiciones electrnicas, es decir, solo
alcanza para generar cambios en las energas rotacionales y vibracionales. Es
decir que la absorcin a partir de molculas en esta zona es bastante selectiva:
no todas las molculas son capaces de absorber radiacin a esta longitud de
onda, porque para que se produzca esta absorcin de energa las molculas
deben tener un momento dipolar distinto de 0.
La absorcin cambia cuando el momento bipolar de la molecula es distinto de
cero. Las molculas no son rgidas, sino que tienen un movimiento alrededor
de un eje imaginario (movimientos vibracionales de tensin o deformacin).
Eso genera un cambio en cada molcula que esta relacionado con la densidad
de carga que hay alrededor de cada tomo y la distancia que hay entre ambos
centro de cargas.
Ejemplo HCL
H -CI
+ -
Cuando la radiacin que proviene de una fuente de energa incide sobre una
molcula y la frecuencia de esa radiacin coincide con al frecuencia vibracional
y rotacional propias de la molcula, se origina un cambio en el momento dipolar
de la molcula yeso produce la absorcin de energa radiante. Entonces ese
cambio de momento es lo que va a medir.
Condiciones
Esa caracterstica la tienen las molculas formadas por heteratomos (en
general). Mientras que las molculas homopolares (O
2
, N
2
) tienen un momento
dipolar igual a cero: esas no absorben en el IR.
El cambio de momento bipolar en estas tecnicas es irreversible.
Los espectros de molculas sencillas son simples (con pocos picos) mientras
que en las molculas mas complejas hay muchas bandas, que pueden
superponerse haciendo mas difcil la determinacin.
La condicin para que, la molcula absorba en al regin IR es tener un
momento diferente de cero, entonces al momento de ser irradiada la molcula
ese momento cambie (se perturbe).
Instrumentos
Lo que existen actualmente son Dispersivos y no dispersivos.
1.- Instrumental dispersivo (simple y doble haz)
2.- Instrumental no dispersivo (simple haz)
1.- Instrumental dispersivo. (doble haz)
24
Analisis Instrumental
En general se usan para hacer determinaciones cualitativas.
Se llaman as porque tiene un sistema de monocromadores que dispersan la
radiacin que llega a la red de reflexin y emerge por la hendija de salida (ver
fotocopia 1)
Hay una FER, un espejo a la salida de ella que divide la radiacin en dos. Esa
radiacin pasa a travs de dos cubetas (muestra y referencia), luego la
radiacin que viene de la cubeta de referencia se atena con un atenuador,
luego se unen esas dos radiaciones, producen una interferencia constructiva y
as llegan al detector.
El monocromador esta despus de la muestra (para esta tcnica no es
necesario ponerlo antes, porque la radiacin IR no es tan potente y no modifica
a la muestra). Tanto la FER como los detectores tiene caractersticas trmicas:
responden (sobre todo los detectores) a cambios de temperatura.
Funciona de igual manera que cualquier insterumento de doble haz.
2.- Instrumentos no dispersivos
Permiten hacer determinaciones cuali y cuantitativas.
Este tipo de instrumentos se conocen como instrumentos de IR con
transformada de Fourier. No tienen sistema dispersivo sino que cuentan con un
interferometro, cuya funcion es modelar y modular la radiacin proveniente de
la Fer.
Tiene un algoritmo matemtico cuya funcin es decodificar la seal que se
registra y transformarla en un espectro fcilmente identificable o que se pueda
interpretar bien
Los componentes de estos instrumentos (que en general son de simple haz)
son:
FER, interfermetro, compartimiento de muestra, detector.
Intefermetro
El interfermetro es que el reemplaza al monocromador y la diferencia que
tiene con este es que solo permite que pase una rango estrecho de longitudes
de onda pero no ocurre el proceso de dispersin sino que aca hay movimientos
de espejos que permiten que llegue radiacin a la muestra a diferentes
longitudes de onda

El interfermetro esta compuesto por una combinacin de espejos: fijos y
mviles que redirigen la radiacin hacia la cubeta de la muestra; y en el medio
de ellos hay otro dispositivo llamado cortador del haz o de la radiacin cuya
funcin es dividir el haz de radiacin que le llega.
El cortador del haz esta recubierto por un material que permite que parte de
radiacin se refleje y otra se transmita.
Funcionamiento
Llega radiacin de la FER, pasa por el espejo colimador (para que vayan en
forma paralela), los rayos llegan al cortador del haz y parte de ellos se reflejan
y esa radiacin que se refleja incide en el espejo mvil, otra parte de la
radiacin atraviesa el cortador del haz y llega al espejo fijo. Entonces cuando,
por movimientos mecnicos, se va moviendo el espejo mvil de tal manla que
ambos espejos quedan a igual distancia del divisor del haz, ambas radiaciones
25
Analisis Instrumental
(las de los dos espejos) quedan en fase y se produce interferencia constructiva
que aumenta la intensidad de esa radiacin que luego pasa por la muestra a
una determinada longitud de onda. El funcionamiento del cortador es similar al
del filtro de interferencia
Mientras que si las distancias de ambos espejos son diferentes, la radiacin no
esta ms en fase y al detector le van llegan diferentes seales en funcin de la
distancia entre los espejos.
Lo que se registra en el detector es un interferograma que a travs de la
transformada de Fourier se decodifica y se obtiene un espectro convencional.
Estos equipos son de ultima generacin, en vez de tener un sistema ptico de
monocromadores tienen un inteferometro con espejos que selecciona una
longitud de onda por medio del espejo mvil.
Inteferograma
Es la seal en funcin de la distancia de los espejos. Como el barrido es muy
amplio, el interferograma es como en b, el algoritmo desarma eso y lo
transforma en una seal que se puede leer como el (a) (fotocopia 2).
FER. Validas para instrumentos radiantes y no radiantes.
Son slidos inertes que se calientan elctricamente y alcanzan temperaturas de
alrededor de 1500 -2200 K. Sonn fuentes continuas, es decir que el espectro
de emisin de la lmpara debe ser una banda que abarque un amplio rango de
longitudes de onda. La intensidad de radiacin vara en funcin de la
temperatura.
Hay varios tipos de FER con las caractersticas anteriormente descriptas.
1) Lmpara incandescente de Nernst
Es la ms comn. Formada por un cilindro formado por una mezcla de oxido de
Circonio y otros xidos de diferentes metales. Ese cilindro tiene un dimetro de
1-2 mm y una longitud de aproximadamente 50mm. Esta rodeado por una
cubierta de un material protector que tiene la funcin de evitar que ese cilindro
se sobrecaliente y se queme. En los extremos del cilindro se ha conectado
cables de platino cuya funcin es transmitir la electricidad y alcanzar
temperaturas entre 1200 y 2200 aproximadamente. Ver figura 4. La mayor
intensidad de emisin depende de la temperatura que alcance la lmpara.
2) Globar
Es una varilla cilndrica de aproximadamente 50mm de longitud y 5 mm de
dimetro. Esa varilla de es carburo de silicio y esta rodeada de una resistencia
que hace que se alcanzen temperaturas que van desde 1300 a 1800 K
emitiendo asi en forma continua en el IR
3) Filamento incandescente
Es un alambre en forma de espiral de Ni y Cr. Alcanza temperaturas de hasta
1000K.
4) Arco de mercurio.
Es una lmpara que utilizan los instrumentos que permiten trabajar en la regin
del IR lejano. Consiste en un tubo de cuarzo que tiene vapor de mercurio a baja
presin. Cuando pasa la electricidad (cuando se conecta) ese vapor de
26
Analisis Instrumental
mercurio se ioniza originando un plasma y ese plasma emite una radiacin
continua en la regin del IR lejano.
5) Lmpara de Tungsteno
Es la misma que vimos en absorcin molecular. Se usa en IR cercano.
6) Lser de CO2 (para instrumentos no dispersivos con transformada de
Fourier)
Actualmente hay instrumentos que tiene como FER un lser de CO2. Este tipo
de fuente generalmente se usa cuando se esta haciendo un control
medioambiental para determinar contaminantes atmosfricos (NH3, benceno)
Esta serie de lmparas son comunes. La caracterstica fundamental es que son
slidos inertes que se calientan y emiten radiacin .
Cubetas o celdas
Son recipientes que presentan ventanas que son transparentes a la radiacin
IR. Esas ventanas pueden ser de NaCI, NaBr, KBr,CeBr
Selectores de banda
Segn el instrumento: sistema dispersivo(monocromadores)
Sistema no dispersivo: interfermetro.
Detectores
La caracterstica principal de los detectores de IR es que su respuesta depende
del poder calorfico de la radiacin
Hay tres tipos de detectores
Los dos primeros (trmicos) generalmente se usan en instrumentos con
sistemas dispersivos mientras que los fotoconductores y piroelectricos se usan
en equipos no dispersivos.
1.- Detectores trmicos
Este tipo de detector, cuando llega la radiacin se produce un calentamiento y
ese aumento de temperatura es lo que se registra (hay una variacin de
temperatura).La respuesta depende de la capacidad calorifica de la radiacin.
Hay de varios tipos:

Neumtico de golay
Termocuplas
Bolometros
Los tres funcionan bajo el mismo principio .
Neumatico de golay:
Es una cmara que en su interior tiene gas a baja presion y en un extremo
tiene una membrana4cuando la radiacin incide en el detector, el gas se
calienta, se expande y ejerce presin sobre la membrana que se desplaza
segn el poder calorifico de la radiacin, generando una seal termica T y ese
aumento de temperatura es
la senal que se mide,
Termocuplas:
La unin de un alambre con una esfera en la punta de Bismuto y Antimonio,
todo eso soportado o colocado sobre un soporte conductor yeso colocado
27
Analisis Instrumental
dentro de una cmara donde se ha hecho vaco. Cuando llega la radiacin,
incide en el gas, se genera un aumento de temperatura y ese aumento de
temperatura genera una diferencia de potencial y esta ultima es la seal que se
mide. Generalmente esa seal es muy chica y requiere amplificador.
Bolometros
Funcionan de forma semejante a las termocuplas con la nica diferencia que
estn formadas por laminas de platino o de nquel. Se genera un aumento de
temperatura, una diferencia de potencial y de ah la seal que se mide.
2.- Detectores piroelectricos .
Se basan en que cuando llega la radiacin la absorben y la transforman en una
seal medible
Estn formados por lminas cristalinas de materiales pirolectricos que tienen la
caracterstica de presentar propiedades trmicas y elctricas. Generalmente se
usa como material piroelectrico sulfato de triglicina (STG). Este material se
coloca entre dos electrodos y cuando la radiacin es absorbida se produce un
calentamiento del STG y al calentarse varia la distribucin de carga en la
superficie, lo que genera una corriente elctrica y esa corriente elctrica es la
seal que se mide.(Parecidos a los diodos n-p)
3.- Detectores fotoconductores.
Estn formados por una delgada capa de un material semiconductor.
Generalmente se usa sulfato de Pb. Este material semiconductor esta
depositado sobre un vidrio y todo eso esta recubierto por un tubo de vidrio y
sellado al vaco. Cuando llega la radiacin se produce una promocin de los
electrones de valencia, del sulfato de Pb y esto hace que se genera una
corriente y esa corriente es la seal que se mide.
28
Analisis Instrumental
Tcnicas electroanalticas
Estas tcnicas cuantitativas que se basan en reacciones electroqumicas, es
decir, que tiene en cuenta las propiedades elctricas de los analitos cuando
estn en solucin dentro de una celda electroqumica. Generalmente son
especificas respecto a una tecnica optica. El instrumento es mas sencillo y mas
barato que los usados en tecnicas opticas.
Este tipo de celda tiene la particularidad de ser especificas debido a que se
puede determinar actividades de distintas especies cuando se encuentran en
disolucin y estas especies estn en distintos estado de oxido-reduccin
Puedo determinar Fe
2+
, Fe
3+
Adems , con esta tcnica puedo determinar la actividad de la especie que es
importante para calcular constantes de equilibrio. Adems la instrumentacin
utilizada es mas barata. En ese tipo de tcnica se tiene en cuenta reacciones
de oxido reduccin que ocurren en la interfase electrodo-disolucin
Para poder aplicar una tcnica electroanaltica necesitamos una celda
electroqumica. Esta es un recipiente que tiene conectados dos electrodos que
estn sumergidos en un recipiente que contiene una disolucin del electrolito a
determinar . Pueden ser de tipo galvanicas o electroquimicas.
Reaccin electroqumica
Definicin: es la responsable de las transformaciones qumicas que sufren las
especies debido al paso de corriente elctrica a trabes de los electrodos y del
movimiento o transporte de especies cargadas o no desde la disolucin hacia
los electrodos.
Conformacion de una celda electroquimica
29
Analisis Instrumental
Puede haber de dos tipos:
Una de ellas es la celda galvanica y la otra es la celda electroltica
La celda galvnica es aquella que al conectarse a dos electrodos las
reacciones electroqumicas ocurren espontneamente y se genera una
corriente. Este tipo de celda se utiliza en tcnicas potenciometricas
En la celdas electrolticas se requiere de una fuente externa de energa para
que funcione y esa energa es consumida y as tiene lugar la reaccin. Este tipo
de celda se utiliza en tcnicas polarograficas.
Teniendo en cuanta la nomenclatura de la IUPAC siempre el proceso de
reduccin ocurre en el ctodo y el proceso de reduccin en el nodo y siempre
el potencial de una celda segn la iupac es : el potencial del ctodo menos el
potencial del nodo. Los e- que circulan se deben a la redox. Los iones se
mueven hacia los electrodos, este movimiento puede deberse a tres procesos
La especie que esta dentro de la celda electroqumica se mueve con tipo de
movimiento:
Conveccion
Migracin
Difusin
Conveccion :es el movimiento de la disolucin originado por agitacin debido a
un aumento de T, una agitacin magntica o mecanica.
Migracin: es el movimiento o movilidad de los iones provocados por atraccin
electroestatica entre los iones y los electrodos (positivos atraen partculas
negativas y viceversa)
Difusin: es el movimiento de la especie originado por un gradiente de
concentracin (de mayor concertacin hacia la interfase electrodo-disolucin) .
Dependiendo de la tecnica a usar estos movimiento son de mayor o menor
importancia.
Electrodos polarizados y despolarizados
Alrededor de los electrodos se forma una doble capa difusa. Esta se forma por
un primer reordenamiento. Luego de aplicar un potencial . si aumenta el
potencial la doble capa se hace mas gruesa y esto hace que los electrones no
puedan alcanzar la interfase , all no hay proceso faradicos y no se produce
redox. Se dice que el electrodo esta polarizado. La capa es la responsable de
que existan dos procesos que dan origen a dos tipos de corrientes (Faradicas y
no faradicas)
En una celda electroqumica siempre se produce una corriente porque hay una
transferencia de electrones desde el seno de la solucin hacia el electrodo.
Pero esa cantidad de corriente esta gobernada y limitada por distintos
procesos. Esos proceso se denominas faradicos y no faradicos.
Procesos faradicos: son aquellos donde siempre hay un reaccin de oxido
reduccin en la superficie o interfase electrodo-disolucin. La corriente all
30
Analisis Instrumental
generada se llama corriente faradica. Esta corriente es necesaria en
potenciometria.
Procesos no faradicos : pueden ocurrir cuando por algn proceso
termodinmico o cintico (por ejemplo adscorcion), no ocurra una reaccin
redox y tenga lugar otros procesos que generan una corriente , pero la
corriente es una corriente de carga. Esos procesos que ocurren modifican de
alguna manera la interfase electrodo-disolucin. Se dice entonces que la
corriente generada es no faradica.
El grafico a representa un electrodo polarizado. Es decir a medida que aumenta
(varia) el potencial, no hay variacin en la intensidad de corriente. Esto sucede
cuando ocurren procesos no faradicos
El grafico b representa a un determinado potencial constante varia la intensidad
de corriente. En este caso el electrodo esta despolarizado. Esto sucede cuando
ocurren procesos faradicos.
Proceso de polarizacion
Son los procesos que ocurren cuando hablamos de la polarizacion de un
electrodo: ocurren distintos procesos antes de llegar a la polarizacion o
despolarizacion del electrodo.
Transferencia de masa: primera etapa.
Aqui la especie oxidada se mueve desde el seno de la solucin hacia el la
interfase electrodo disolucion mediante un movimiento de migracin.
Segunda etapa : generacion de especies indeseadas.
Se debe a la generacin de alguna reaccin qumica y dar origen a especies
intermedias . estas especies intermedias pueden tambin oxidarse o reducirse.
Si ocurre no hay transferencia de electrones
Tercera etapa: cambios fisicos en el analito
En las proximidades de la superficie de cada electrodo puede ocurrir la quinta
etapa , es decir, ocurrir un cambio en el estado fsico de la especie, la cual
puede adsorberse , disociarse o cristalizarse antes de la transferencia de
electrones.
Cuarta etapa: transferencia de carga
La cuarta etapa puede ocurrir a distintas velocidades.
La polarizacion depende entonces de las velocidades de reaccion de las
diferentes etapas. Por supuesto la etapa mas lenta es la que controla el
proceso y eso lleva asociado que la intensidad de corriente se vea limitada por
cada una de estas etapas.
Si la primera etapa es la mas lenta, se dice que el electrodo esta
polarizado por concentracin .
Si la segunda etapa es la mas lenta el electrodo esta polarizado por
reaccin quimica
Si la tercera etapa es la lenta el electrodo esta polarizado por adsorcin
o disociacin
Si la cuarta etapa es la lenta el electrodo esta despolarizado
Calculo teorico del potencial de una celda
31
Analisis Instrumental
Se calcula utilizando la ecuacin de Nersnt . Esta ecuacin surge de una serie
de consideraciones termodinmicas, trabajando a P y T constante que se basa
en los cambios de energa libre para una reaccin dentro de una celda
electroqumica.
Si consideramos segn la IUPAC.

'

n=numero de electrones involucrados en la reaccion


G=-nFE F=cte de Faraday
E:potencial normal de celda
Podemos a travs de ecuacin llegar escribirla como la ecuacin de nersnt
como esta en la transparencia
Recordemos que la actividad de una especie es

2
1
I=
2
i i
C Z
El f esta relacionado con la fuerza inica de la solucin (I). I depende de la
concentracin y carga de la especie.
Cuando en qumica analtica se trabaja con soluciones diluidas el coeficiente de
actividad f tiende a 1 , por lo tanto podemos decir que a=C, si la solucin es
diluida.
Considerando el ejemplo anterior tenemos
0
P
0.0591 [red]
= E = E - log
n [ox]
reaccion en el electrodo
El potencial frente al eletrodo de referencia se calcula siguiendo el esquema de
celda.
Esquema de una celda
Hacia afuera el electrodo (Zn
0
)
La barra / indica electrodo, sumergido en una solucin de Zn
2+
con una
dada concentracin molar
La doble barra // indica puente salino
Cu
2+
con su concentracin molar / (el otro electrodo) Cu
0
(Zn
2+
)
Hacia fuera los electrodos. Al centro sus soluciones
P=potencial de un solo electrodo
Ep=E
2
-E
1
potencial de unin liquida
32
Analisis Instrumental
El potencial se unin liquida se genera cuando se ponen en contacto dos
soluciones de distintas concentracin. Desde el punto de vista experimental ,
este potencial se puede minimizar colocando al puente salino y se hace casi
despreciable por lo tanto en el Ej no se considera.
Existe otro parmetro que es el potencial norma de electrodo o potencial
estndar de electrodo. Ese potencial es una constante fsica caracterstica de
los pares redox. Ese potencial se calcula cando el cociente de actividad de la
especies reducidas y oxidas es igual a 1. Esto ocurre cuando los reactivos y
productos tiene una actividad igual a 1
}

142 43
1
0 0
P P
0
0.0591 [red]
= E = E - log = E
n [ox]
El potencial del electrodo de H es cero (E=0)
Potenciometria
La tcnica que utiliza estas celdas es la potenciometria
Utiliza celdas galvanicas
Utiliza dos electrodos : uno de referencia y otro indicador
Utiliza soluciones electrolticas

Una tcnica potenciometrica se basa en relacionar la concentracin de una


especie con la medida del potencial que se genera entre un electrodo indicador
y un electrodo de referencia.
Electrodo indicador: es aquel cuyo potencial responde a la variacin de la
actividad de las especies en estudio.
Electrodo de referencia: mantiene constante su potencial aun cuando se
producen pequeos pasajes de corriente, generalmente se utiliza como anodo.
Potencial de celda: potencial del anodo potencial del catodo
Dentro de lo electrodos indicadores tenemos dos tipos: los indicadores
metlicos y los indicadores de membrana
Electrodos indicadores metalicos
Se basan en que el potencial se genera a traves de una redox, que ocurre en la
interfase electrodo-disolucion, mientras que en los electrodos selectivos el
potencial se genera medianrte un intercambio de iones a traves de la
membrana.
Dentro de los indicadores metlicos tenemos
Los de 1era especie
Los de 2da especie
Los redox
Los de 1era especie o cationico
33
Analisis Instrumental
Son electrodos que estn constituidos por una barra de metal sumergida en
una solucin que contiene los propios iones. Ejemplo: una barra de Cu
0
que se
sumerge en una solucin de Cu
2+
}
142 43
0 2+
1
0Cu /Cu
P
0
0.0591 [red]
= E = E - log
n [ox]
Los electrodos de segunda especie o anionicos.
Estn formados por una barra metlica que esta en contacto con una solucin
saturada de una sala poco soluble del metal y una determinada concertacin
del anion correspondiente a la sal
Ejemplo: Ag
0
/ClAg
(sat)
;Cl
-
(X
m
)
Cuando la concentracin molar del anion (Cl
-
) es mayor que 1M este electrodo
se comporta como electrodo de referencia.
Si no, es un electrodo anionico ([Cl
-
]<1M).
Los electrodos redox
Estn formados por una barra de metal inerte (platino, paladio, oro) que esta
sumergida en una solucin que contiene una cupla redox
Ej: Pt/Fe
2+
; Fe
3+
o Pd/Cs
3+
; Cs
4+

6 447 4 48
era
da
electrodos
indicadores referencia
metalicos membrana
1 especie
2 especie
redox
Electrodo de referencia: su potencial no varia aun cuando hay pequeos
pasajes de corriente, permanece constante en funcin del tiempo
Dentro de los electrodos de referencia tenemos el electrodo de H que es el que
se utiliza para calcular los potenciales normales o estndar y ese electrodo
tiene un potencial igual a cero. A todas las T y cuando la actividad de H
+
es 1M.
Electrodo de calomel
Otro electrodo muy frecuente es el de calomel. Este electrodo es un tubo de
vidrio que en su interior tiene una pasta de Hg que esta en contacto con una
solucin de Hg
2
Cl
2
. Esa pasta de cloruro mercurioso esta saturada y con una
elevada concentracin de KCl.
En el extremo inferior del tubo tiene una orificio poroso que esta en contacto
con la solucion de CLK (es de tipo anionico , [Cl-]>1M ) y adems en la parte
interna hay un alambre de platino que es el que hace el contacto.
Este electrodo de calomel saturado (ECS) es que el que se usa como
referencia y tiene un E=0.268V
34
Analisis Instrumental
Otro electrodo de referencia que se usa es el electrodo de Ag/ClAg
(s)
; Cl
-
(Xm)
.
Cuando la concentracin de Cl es mayor a 1M el electrodo es de referencia.
El potencial de este electrodo de referencia es E=0.242V . su E se calcula
usando al electrodo de H como E de referencia.
Potecial normal de electrodo.
Es una constante fisica caracteristica de cada especie. El potencial normal de
electrodo se calcula cuando las actividades de las especies reducidas y
oxidadas son iguales a 1M. Asi se puede calcular los diferentes potenciales de
las distintas especies y poder clasificarlos , teniendo en cuenta su capacidad de
reducirse
Titulacion potenciometrica
Una de las aplicaciones prcticas es la titulacion potenciometrica: consiste en
medir el potencial de una celda galvanica luego del agregado de alicuotas de
un agente valorado, trabajando a corriente nula
Una celda de titulacion es un recipiente donde tenemos: electrodo indicador ,
electrodo de referencia, una bureta, la solucin del electrolito. Nosotros vamos
a ir mirando el potencial en funcin de lo mililitros de agente valorado gastados.
De esa curva de titulacion potenciometrica vamos a obtener los militros de
agente valorado que gastamos en la titulacion y por medio de una reaccin
estequiometrica calculas la concertacin del analito. Se utiliza una celda
galvanica , es decir , la nica corriente que debe generarse es la corriente que
proviene de la reaccin de oxido reduccin, en la interfase electrodo-disolucin
En los electrodos indicadores metlicos la corriente se produce por una
reaccin redox
En un titulacion potenciometrica estn involucrados dos tipos de reacciones:
una reaccin electrnica y una reaccin qumica.
Puede entonces haber titulaciones de precipitacin, neutralizacin, de
formacin de complejos, y una reaccin redox. Cualquiera de estas reacciones
puede producir al agregar el agente valorante . Dan lugar a cuatro tipos de
titulaciones potenciometricas.
Electrodos de membrana
El otro tipo de electrodos indicadores que existen son electrodos selectivos de
cationes y moleculas.
Electrodos de membrana: o electrodo selectivo a iones.
Estos tiene la particularidad de estar formados por una membrana que es
selectiva a distintos iones. La membrana esta en contacto con los iones pero
de actividad conocida y constante. Permiten hacer medidas directas, hay
especificos para cada ion.
La presencia de esa membrana en la disolucin hace que se modifique la
movilidad de los iones dentro de esa solucin y se genere un potencial que va
a depender de la concentracin. Se genera un potencial por gradiente de
35
Analisis Instrumental
concentracin que genera un intercambio de iones a traves de la membrana
Este potencial es el que se usa para calcular la concertacin
Es importante conocer la naturaleza de la membrana.
Existen electrodos selectivos a cada ion, la capacidad del electrodo de ser o no
selectivo depende en gran parte de la membrana. Esta debe presentar una
minima solubilidad , es decir la solubilidad de la membrana en la disolucin del
analito debe tender a cero. La membrana responde selectivamente a distintos
iones , es importante conocer la composicin de la membrana.
Adems, la membrana debe tener una determinada conductividad elctrica.
Generalmente , la conductividad esta dada por iones monovalentes que
constituyen la membrana. Adems , la membrana debe tener una reactividad
selectiva con el analito o sea debe interactuar electivamente con el analito ne
estudio. Generalmente, las membranas son de molculas grandes o agregados
moleculares como vidrios, resinas, slice. Algunas membranas estn formados
por compuestos inorgnicos como haluros de Ag.Esto hace que sean poco
solubles o insolubles. Deben estar siempre hidratadas para facilitar la reaccin
de intercambio que ocurre a ambos lados de la misma.
Las tres caractersticas fundamentales que debe cumplir una membrana son:
Minima solubilidad (dada por la composicin con grandes moleculas)
Conductividad elctrica (dada por los iones monovalentes)
Reactividad selectiva al analito en estudio. La membrana tiene que
poder interactuar de manera selectiva con el analito.
Hay dos tipos de membrana que se utilizan en este tipo de electrodo: las
membranas cristalinas, las no cristalinas y dentro de esta ultima tenemos las
membranas de vidrio, las formadas por lquidos y las movilizadas por lquidos
rgidos.
Membrana no cristalina de vidrio
El mas comn es el electrodo selectivo a H
+
que es el electrodo selectivo a pH.
Hoy en da los electrodos selectivos son electrodos combinados . El indicador y
el de referencia estn juntos dentro de un tubo de vidrio.
Dentro de ese tubo de vidrio hay una solucin de HCl concetrado , saturada
con ClK, de actividad de H
+
constante y un alambre de Ag que acta como
electrodo de referencia.
A su vez en el interior tiene otro electrodo de referencia de Ag/ClAg que forma
junto con el electrodo indicador la celda que se utiliza para medir pH.
La membrana de vidrio esta formada por redes tridimensionales de silicatos y
dentro de esas redes existen cationes mono, bi y trivalentes. Los monovalentes
son los encargados de la conductividad selectiva de la membrana, los bi y
trivalentes permanecen retenidos por los silicatos y mantiene humeda y rigida a
la membrana. Esta membrana esta en contacto con la solucion de H de
actividad desconocida
Potencial a travs de membrana: una de la caracterstica fundamental de la
membrana es que debe estar hidratada para poder medir la actividad de
analito. Debe estar hidratada en la cara externa cuando esta en contacto con la
solucin del analito y la parte interna cuando esta en contacto con la disolucin
36
Analisis Instrumental
del analito de actividad constante. La regin intermedia esta seca , all es
donde se encuentran los iones monovalentes, se desplazan a lo largo de esa
red cristalina y son los responsables de la conduccin elctrica que va a
permitir generar un potencial.
Los iones Na
+
originan el potencial entre la disolucin externa y la membrana
externa y un potencial entre la solucin interna y la membrana interna. (P
i
y P
ii
).
La diferencia a ambos lados de la membrana es lo que se conoce como
potencial limite, potencial de membrana o potencial de superficie. La reaccin
de intercambio que ocurre genera el gradiente de concentracin. El movimiento
genera carga en la membrana y eso genera el potencial.
H V Na Na V H
+ + +

+

V: acido salicilico.
El equilibrio de la reaccin , como debe estar hidratada la membrana, tiende a
desplazarse hacia la derecha. La superficie de la membrana predomina el
Acido Silicico y lo mismo ocurre en la cara interna de la membrana. El
equilibrio esta desplazado segn la concentracin de protones tanto en el
medio como en la disolucin y eso genera un potencial limite E
b
= E
2
- E
1
.
Este es un parmetro analtico que se usa para medir pH.
Electrodo selectivo a pH
El potencial limite esta dado por la diferencia de potencial de los potenciales a
cada lado de la membrana (cada uno responde a la ecuacin de Nersnt). Este
es el parmetro analtico que da una idea del pH de la solucin.
En esa solucin externa hay solucin de H
+
cuya concentracin o actividad no
conocemos pero del lado interno hay una concentracin de protones conocida
y constante.
El potencial limite queda en funcin de la actividad de la especie en disolucin
(es que el no se conoce).
pH=-log(a) , Eb=L-0,059pH potencial limite en funcin del pH para un electrodo
selectivo a pH.
El potencial limite es el parmetro analtico que me va dar el pH de la solucin.
Es decir, el potencial de un electrodo indicador de este tipo, ser igual al
potencial limite, responsable del pH, mas un potencial de referencia interno
mas un cierto potencial de asimetra (este potencial de asimetra es muy chico
y se debe a las distintas tensiones en la estructura de la membrana)
E
ind
= E
b
+ E
ref2
+ E
asi
37
Analisis Instrumental
E
b
=E
ind
- E
ref
Potencial de asimetra.
Es un potencial muy pequeo y se debe a las diferencias de tensiones en la
estructura de la membrana, generada fundamentalmente por desgaste. Es
despreciable.
Limitaciones del electrodo selectivo a pH.
Este mismo electrodo, selectivo a H+, puede segn las condiciones ser
sensible a otros iones monovalentes y en ese caso cuando el electrodo se usa
para medir soluciones bsicas puede ser que sea sensible a iones Na+, K+. La
mediad o el valor de pH en ese casos era menor que el valor real y en ese caso
se dice que el electrodo presenta un error alcalino. Entonces debe definirse un
parmetro que se denomina coeficiente de selectividad.
Ese coeficiente indica como afecta la presencia de un ion en la disolucin sobre
la mediad del pH. Es decir sobre el valor del potencial limite . En algunos casos
puede darse que el electrodo sufra lo que se conoce con el nombre de error
acido. Sucede a solucin de pH inferiores a 0,5 o 1. en estos casos el pH
medido es mayor que el real.
Coeficiente de selectividad k
Esta variable esta involucrada dentro de la ecuacin del potencial limite de
membrana -log (a1KA,B,b1)-. Este coeficiente de selectividad representa la
relacion que existe entr la respuesta de dos iones que estan presentas en la
misma disoclucion. Es el grado de interferencia que genera un ion sobre otro.
Indica cuanto interfiere la otra especie con respecto al electrodo del analito (B
interfiere con con el electrodo selectivo a A, por ejemplo)
Toma valores de 0 a 20 o 30 y es un dato que viene tabulado por el fabricante.
Si el coeficiente tiende a 0 indica que el ion no interfiere en la medicion
pH operacional: el pH de una solucin debe ser una constante universal.
Segn IUPAC y segn el instituto nacional de patrones y tecnologa (NIST)
establece como pH operacional aquel que se obtiene de la calibracin directa
del instrumento con disoluciones patrones conocidas preparadas a partir de
estndares primarios, seguido de la determinacin de pH de la disolucin
incgnita. Estas soluciones se compran, no se preparan y no se conoce su
fuerza inica.
Aplicacin del electrodo selectivo a H+
Sirve para medir si una solucin es acida o es bsica , pero no se puede saber
la concentracin de H
+
que hay en la solucin si hacemos una medida directa.
Esto se debe a como se calibra el electrodo, al no conocerse la fuerza ionica de
los buffers es imposible relacionarla con la fuerza inica de la muestra,
entonces al ser diferentes los coeficiente de actividad no se puede medir [H
+
]
Electrodo de membrana no cristalina liquida
Con los otros tipos de electrodos de membrana no cristalina tenemos los de
membrana liquida. Ese tipo de electrodo esta formado por un tubo de vidrio que
en su interior tiene otro tubo de vidrio y en el extremo inferior presenta una
membrana de plstico porosa que se encuentra impregnada por un liquido
38
Analisis Instrumental
hidrofobito, esta saturada de uno o varios intercambiadores inicos orgnicos
que se encuentran entre los dos tubos.
Dentro el tubo interno se encuentra un electrodo de referencia interno
sumergido en una solucin acuosa del metal que uno quiere determinar.
Generalmente se usa para cationes bivalentes aunque los hay para
monovalentes.
El potencial se genera de la misma manera que el de vidrio, a traves de un
intercambio ionico en la membrana.
Electrodos no cristalinos de un liquido inmovilizados por un polmero
rigido
En este caso los electrodos son semejantes al anterior con la nica diferencia
en que la membrana ya no es de plstico son que son membranas de cloruro
de polivinilo y esto hace que la membrana sea mas flexible y eso hace que el
coeficiente de selectividad sea menor. Con estos elctrodos se pueden hacer
medidas directas de diferentes cationes y aniones. Cuando se calibra el
instrumental se lo hace con su solucin patrn preparada por uno mismo.
Quiere decir que uno va a conocer esas soluciones patrones entonces va a
permitir conocer la concentracin de la muestra.
A)Electrodos de membrana cristalina
Hay de dos clases:
1)Cristal nico (membrana formada por un nico cristal)
2)Policristalinos o mezcla de cristales.
1)Cristal nico: las membranas estn formadas por Fluoruros de Lantano
(LaF
3
) y es selectiva a iones F-. el electrodo es un tubo de vidrio que en la parte
inferior tiene una membrana que tiene un dimetro de 10 mm
aproximadamente y un espesor de 2 o 3 mm . esa membrana , que es de LaF
3
,
mediante un tratamiento con F
2
Eu (fluoruro de europio) con el objeto de
aumentar la capacidad conductora de la membrana. Se crean huecos en la
membrana para que los iones F puedan moverse con mayor facilidad y se
genere el potencial limite.
Dentro de ese tubo de vidrio que forma parte del electrodo se encuentra un
disolucin que contiene NaCl y NaF donde la actividad de F es constante y
conocida, en la cual esta sumergido el electrodo de referencia interno.
Dependiendo de la concentracin molar de F que hay en la disolucin se
genera un potencial y ese potencial limite generado es el que se va a relacionar
despus, a travs de la ecuacin de Nersnt con la concentracin de F
-
La caracterstica que tiene este electrodo es que se puede trabajar en un
amplio rango de temperatura (entre 0 y 80C) sin que haya variacin del
potencial. La nica limitacin que tiene el uso del electrodo es que a pH
superiores a 8 empiezan a interferir lo OH del medio y a pH menos a 4 o 5
comienzan a molestar los H+, pues se forma HF en el medio y ya no se tiene
iones F- para detectar (el electrodo tiene una menor respuesta). Es bastante
selectivo.
2) Mezcla de cristales: generalmente la membrana es una mezcla de sales de
haluros de Ag con sulfuros de Ag en relacin 1:1. se hace una mezcla
homognea de tal manera que aumente la conductividad de la membrana. Son
39
Analisis Instrumental
electrodo que se suelen usar como electrodos selectivos para iones Ag
+
. Es
decir que como electrodo selectivo de Ag podemos tener de membrana
cristalina o no cristalina (segn como este formada la membrana)
Lo importante siempre es conocer la composicin de la membrana y saber que
siempre se puede hacer una medida directa, salvo en el caso del electrodo de
vidrio selectivo a protones.
Otros electrodos.
Existen electrodos selectivos a molculas. Hay de dos tipos
Electrodos selectivos a molculas gaseosas
Electrodos selectivos a molculas orgnicas
Tambin se conocen como sondas sensibles a gases. Son dispositivos
formados con un electrodo selectivo de iones que esta retenido por una
membrana permeable a gases y entre el electrodo selectivo y la membrana
sensible se encuentra una solucin interna que es la que va generar el
producto para su posterior deteccin.
El gas disuelto pasa a travs de la membrana permeable y se encuentra con la
solucin interna- Al entrar en contacto se generan diferentes productos , en el
caso del CO
2
se generan H
+
y HCO
3-
,uno de los productos que se genera es
que reacciona con el electrodo selectivo.
Se pueden usar, todo, para determinaciones cuantitativas (con lo selectivos)
Se calibran con testigos preparados por uno mismo, luego se lee la muestra y
se obtiene la concentracin del analito. Son lecturas directas de replicas, el
resultados se expresa como es usual.
Voltamperometria
Estas tcnicas abarcan un conjunto de tcnicas que permiten obtener
informacin de una especie a travs de la medicin de corriente en funcin de
un potencial aplicado. Se mide intensidad de corriente en funcin de un
potencial aplicado. El grafico generado generalmente es sigmoidal
Dentro de estas tcnicas tenemos

'


'

'

Clasica
polarografia Por pulsos
Voltamperometria de barrido lineal
Titulacion amperometrica voltamperometria hidrodinamica
Sensores quimicos
Se estudiaran la polarografia clasica, la voltamperometria hidrodinmica para
titulaciones amperometrica y voltamperometria hidrodinmica para sensores
qumicos.
La voltamperometria de barrido lineal tiene la caracteristica de que el potencial
que se va aplicando tiene que variar linealmente con el tiempo.
Generalidades de la voltamperometria de barrido lineal
40
Analisis Instrumental
En cualquiera de las dos tcnicas se miden corriente I vs potencial
Se usa una celda voltamperometrica
La celda voltamperometrica esta compuesta por : tres electrodos sumergidos
en una solucin que contiene al analito y un exceso de un electrolito soporte
(disolucin no reactiva de alta molaridad). Los electrodos estan conectados a
un generador de potencial de barrido lineal.
Estos electrodos son
Electrodo de referencia: mantiene constante su potencial durante la
medicin
Electrodo auxiliar: es un alambre de Pt cuya funcin es conducir la
electricidad desde la fuente generadora de potencial hacia el tercer
electrodo (indicador)
Electrodo indicador: es un microelectrodo , tambin llamado electrodo de
trabajo.
Microelectrodos
Electrodo de disco
Es una varilla de tefln que en la parte inferior tiene una plaquita o disco con
caractersticas conductoras, Este disco a su vez esta conectado a un hilo de Pt
que sirve como conexin.
El disco puede estar recubierto de diferente materiales (Pt, Hg, Au, C grafito) y
segn sea ese material va a presentar diferentes potenciales dependiendo
tambin del electrolito soporte donde esta sumergido (fotocopia 1).
Generalmente este electrodo se utiliza en la voltamperometria hidrodinmica
empleando sensores qumicos. Se suele usar tambin en polarografias por
pulsos
Electrodos de gota de Hg
Hay otro microelectrodos mas usados que son los microelectrodos de gotas de
Hg. Son tubos de vidrio que tiene un deposito, reservorio, donde se coloca el
Hg y en esa gotita de Hg es donde se produce la electrolisis. Las gotas deben
ser chiquitas y homogneas para mantener la reproducibilidad del resultado.
Este tipo de electrodos de gota se usa mucho en polarografia clsica y en
titulaciones amperometricas.
Se trabaja con microeletrodos porque uno debe trabajar tambin en
condiciones de polarizacin por concentracin.
Polarografia Clasica.
En esta tcnica se usa una celda de polarografia (los tres electrodos, el analito
y la solucin de electrolito soporte). Dentro de esa celda polarografica pueden
ocurrir tres tipos de movimiento (conveccion, difusin y migracin) que dan
lugar a respetivas corrientes. En esta tcnica la nica que debe existir es la de
difusin en la interfase electrodo disolucin.
Las corriente de conveccion se elimina trabajando en reposo y a temperatura
constante y la de migracin se elimina usando un electrolito soporte , que
enmascara a la posible corriente de migracin que genere el analito
En estas condiciones la nica corriente involucrada en la determinacin de la
de difusin. El polarograma reflejara la relacin entre el potencial y la corriente
de difusin que ocurre dentro de la celda polarografica. Otra condiciones es
que cuando se hace una cuantificacin se debe asegurar que no haya O
2
41
Analisis Instrumental
disuelto. Si hay O
2
disuelto este se reducir muy fcilmente cuando se apliquen
los potenciales, generando una onda polarografica que puede enmascarar a la
onda polarografica de la especie en estudio. Este problema se resuelve
burbujeando con N
2
Polarograma tipo
Es un grafico de intensidad de corriente versus potencial
La curva B corresponde al electrolito soporte, que tiene un potencial de
reduccin mucho mas negativo que la especie a determinar. Esta caracterstica
del electrolito soporte es una condiciones operacional
Los potenciales aplicados son negativos, ya que la corriente que generan es de
baja intensidad y fcilmente medible. Si se usaran potenciales positivos podra
ocurrir que generen corrientes muy altas y eso hara que no se pueda o que
interfiera, al momento de hacer una determinacin cuantitativa. La corriente alta
que se genera cuando se aplican potenciales positivos es debido a la oxidacin
del agua.
Generacion del polagrama
A medida que se aplican potenciales (y se va midiendo la corriente) se produce
un reordenamiento de cargas en la superficie de la gota de Hg, se va formando
la doble capa (este proceso corresponde a la parte plana de la curva). En esta
fase el electrodo esta polarizado por carga.
A determinado potencial la especie se reduce y el electrodo queda polarizado
por concentracin. La corriente de difusin es la corriente entre la corriente
limite (microelectrodo polarizado por carga) menos la corriente residual
(generada cuando el electrodo esta polarizado por carga, la corriente residual
es generada por el electrolito soporte).
En determinacin cuantitativa I:kC, es decir, en este mtodo se pueden usar
testigos, construir una curva de calibrado y expresar el resultado como
0 Xo
X tS
El grafico queda, segn cada testigo y su correspondiente seal, como
intensidad de corriente vs concertacin del testigo. La relacin entre ambos es
lineal. Muestra y testigo se tratan de la misma manera.
De un polarograma se puede obtener mucha informacin, por ejemplo la
corriente de difusin y el potencial de media onda.
Potencial de media onda.
Esta definido como el potencial donde la intensidad de corriente es la mitad de
la corriente limite, es un parmetro cualitativo que es caracterstico del analito
en un determinado medio. Depende entonces: del analito, del pH, del electrolito
inerte, de la temperatura, pero NO depende de la concentracin.
Permite tener una idea cualitativa para poder identificar o diferenciar distintos
analitos. Como se ve en la fotocopia, cambiando el pH o el electrolito soporte
pueden diferenciarse analitos en una mezcla.
Para aplicar la polarografia es fundamental que la especie sea electroactiva, y
se puede hacer siempre y cuando las condiciones operacionales estn bien
fijadas. Estas son: temperatura, reposo, electrolito soporte y ausencia de O
2
42
Analisis Instrumental
Voltamperometria hidrodinmica.
Hay dos tipos de voltampermetria hidrodinamica: la titulacion amperometrica y
los sensores qumicos.
Una caracterstica de estas tcnicas es que se trabaja en agitacin, es decir,
que la corriente de conveccion junto a la difusin sern parte de la medicin. La
nica corriente eliminada es la de migracin, mediante el uso del electrolito
soporte.
Titulacin amperomtrica
Se basa en medir la intensidad de corriente de una solucin a medida que se
van agregando alcuotas de un agente valorado trabajando a potencial
constante. Se miden corrientes de conveccion y de difusin.
Se usa una celda amperometrica. Esta consta de: tres electrodos (referencia,
auxiliar y el de trabajo, que en este caso se usa goteo de Hg), una bureta
desde donde se agrega el agente valorado y un vaso de precipitado que
contiene la disolucin del analito y el electrolito soporte.
Tiene adems un generador de potencial conectado.
El potencial constante que se aplica se determina hacindole un polarograma a
toda las especies involucradas (analito, agente valorado y producto de
reaccin). Cada especie tendr su curva caracterstica , siempre y cuando sea
electroactivo.
Una vez seleccionado el potencial se agregan las alcuotas del agente
valorado.
Los grficos obtenidos son curvas que presentan en un punto un quiebre, ese
punto de quiebre es el punto de equivalencia. La forma de la curva depende de
cual sea la especie electroactiva.
Ventajas con respecto a la polarografia.
Permite hacer una determinacin cuantitativa siempre y cuando una de las
especies sea electroactiva, mientras que en polarografia todas las especies
deben serlo. Esto permite, por ejemplo, titular un analito no electroactivo si el
agente valorado o el producto lo son.
Condiciones operacionales.
Se debe trabajar en agitacin.
No debe haber O2 disuelto
Como electrodo se usa comnmente el goteo de Hg, aunque a veces aplica
tambin el de disco de Hg.
Sensores quimicos
Esta variedad de voltamperometria hidrodinamica permite hacer
determinaciones directas cuantitativas usando sensores qumicos. Hay
sensores qumicos:
Para molculas gaseosas (CO2 disuelto por ejemplo)
Para molculas orgnicas, tambin llamados biosensores (por ejemplo
para glucosa)
Definicin de sensor qumico.
43
Analisis Instrumental
Es un dispositivo que esta formado por un sistema de reconocimiento y un
transductor.
El sistema de reconocimiento tambin se conoce con el nombre de receptor.
Este receptor puede estar formado por membranas sensibles a gases o
tambin puede estar formado por microorganismo, enzimas inmovilizadas.
Cuando los sistemas de reconocimiento tienen caracteristicas biologicas se les
llama biosensores, sino se les llama simplemente sensores quimicos.
Los transductores pueden ser potenciometricos (como los electrodos sensibles
a molculas), voltampermotricos u pticos.
El transductor voltamperometrico tiene una membrana sensible a gases, una
disolucin de ClK y un ctodo con disco de Pt. Cuando el O
2
difunde a travs
de la membrana y al aplicar un determinado potencial este se reduce en el
ctodo generando una seal de corriente proporcional a la concentracin de O
2
disuelto (son similares a los potenciometricos, solo varia el transductor, en vez
de tener un electrodo selectivo poseen uno voltamperomtrico porque se aplica
un potencial)
Tambin hay sensores qumicos que detectan molculas orgnicas donde el
receptor es una enzima inmovilizada. En lugar de una membrana permeable
tiene una que contiene a la enzima. La membrana esta rodeada de un anillo de
plata que acta como nodo. Luego hay una membrana de dilisis y otra de
acetato (actan como filtros) y un microeletrodo de Pt. Lo nico que varia es la
membrana.
La reaccin entre la glucosa y la enzima da acido gluconico y H
2
O
2
El H
2
O
2
a determinado potencial que se aplica, se oxida y genera una seal de
corriente proporcional a la concertacin de glucosa.
Cuando se tiene un sistema ptico en ve de microeletrodos hay una fibra ptica
concentrada a una espectrofluorimetro o fotometro y en la membrana hay un
reactivo o colorante que reaccin con el producto generando la seal ptica. La
seal viaja por la fibra ptica hasta un PMT.
En resumen:
Los sistemas de reconocimiento pueden ser: membranas sensibles a gases o
membrana sensible a compuestos orgnicos
Los transductores pueden ser: potenciometricos, voltamperometricos u opticos.
Mtodo de redisolucin
Este mtodo consta de tres pasos: Electrodepocision, redisolucin y
determinacin mediante barrido lineal de potencial.
Es una aplica de voltamperometrica que generalmente se usa para determinar
analitos en trazas. Cuando la concentracin es muy baja, aplicando la
voltamperometria comn no se lograra determinar.
El ltimo paso corresponde en realidad a la voltamperometria comn, as que
se puede decir que la clave de estos mtodos consiste en dos pasos
fundamental: la eletrodeposicion y la redisolucin.
Eletrodeposicion.
Se aplica un determinado potencial que logra que se reduzca a los analitos en
disolucin (el potencial debe conocerse). Se aplica el potencial y se agita la
solucin durante determinado tiempo. Con esto se logra que el analito se
preconcentre en las cercanas del electrodo.
Redisolucin
44
Analisis Instrumental
Una vez preconcentrado el analito se detiene la agitacin y se comienza a
aplicar potenciales cada vez mas negativos. Al ir aplicando esos potenciales las
especies vuelven a disolverse, pero cuando lo hacen, cada una empieza a
oxidarse y al oxidarse genera una corriente que se registra y permite
determinar cuantitativamente la concertacin. Se obtiene un grafico de picos
(intensidad de corriente en funcin del potencial). Los picos tiene un punto
mximo, con ese valor y trabajando con testigo, se puede hacer una curva de
calibrado.
El microelectrodo que se utiliza tiene un plaquita cubierta con una solucin de
Hg y es de carbono vitrificado. Se trabaja en un determinado tiempo de
aplicacin, el potencial debe conocerse para asegurar que logre reducir a la
especie.
Los grficos obtenidos son muy claros, lo que permite hacer determinaciones
fcilmente.
Ejemplo:
Si se tiene una mezcla de Pb y Cd, se busca primero el potencial de reduccin
de ambos, se preparan testigos con Cd y Pb, juntos, y registrando los picos
mximos se hace la curva de calibrado
Grafico.
Conductimetria
Las tcnicas conductimetricas permiten medir la conductividad de una solucin
electroltica y esa conductividad esta dada por todos los iones presentes en la
disolucin. Ese valor de conductividad va a depender de todos los iones
presentes en la disolucin. Esto quiere decir que depender de la movilidad de
los iones cuando se aplica una diferencia de potencial
En esta tcnica no interesa lo que ocurra en la interfase electrodo disolucin
sino lo que suceda en el sena de la solucin cuando se aplica un potencial.
Se hace uso de la ley de ohms, que sirve para cualquier conductor elctrico, en
este caso electrolitos disueltos.
La ley dice que la corriente generada o que fluye a traves de un conductor es
directamente proporcional al potencial aplicado e inversamente proporcional a
la resistencia que ejercen los electrolitos en disolucin. [A]=[V]/[]. Se puede
usar siempre que los potenciales sean bajos, del orden de 0 a 100 volts.
Si aplicamos potenciales bajos podemos aplicar la ley de ohms para calcular la
conductividad de la especies en disolucin.
Cuando se conoce el potencial aplicado y se aplica, los electrolitos se mueven
generando una corriente, la nica variable que no se conoce es la resistencia.
A partir de la ley de omhs se puede despejar ese valor de resistencia R=E/i
E: potencial aplicado, i: corriente que ejercen los electrolitos.
El valor de la resistencia R depende de la distancia con que estn ubicados los
dos electrodos y va a depender tambin del rea de los electrodos. (se
estandariza 1 cm de distancia y 1 cm2 de superficie de electrodo).
Quiere decir que ese valor de resistencia va a estar relacionado con el valor
(ro) , resistencia especifica.
Quiere decir que cuando se quiere medir la conductividad lo que se esta
midiendo (G= conductividad elctrica) es la inversa de la resistencia que se
esta generando en el seno de la solucin. Reemplazando ro por L/a, queda
G=1/roxA/l, donde 1/ro es k , la conductividad especifica.
45
Analisis Instrumental
La conductividad de una solucin depende de varios factores:
Geometra del electrodo (rea y distancia entre ellos)
Tipos de iones presentes
Concentracin (la conductividad aumenta con la concentracin, pero no
indefinidamente, a muy altas concentraciones diminuye porque la
electricidad se pierde en roces electroestticos, fuerzas de van der walls,
etc)
Temperatura: idem concentracin
Solvente utilizado
Potencia que se aplique.
Conductividad: da una idea de cmo se mueven los iones al aplicar un
determinado potencial
Conductividad especifica: conductividad de un determinado volumen, un
centmetro cbico. (es la conductividad que tiene lugar en el centmetro cbico
de solucin que se encuentra entre los electrodos, rea 1 cm2, distancia 1 cm)
Conductividad equivalente: se representa con la letra lambda mayscula, ,
indica o expresa la conductividad elctrica de todos los iones presentes en la
disolucin por un gramo equivalente de soluto =k[1000/C] (concentracin por
litro). Cuanto se mueven los electrolitos en un litro de solucin.
La conductividad equivalente disminuye con la concentracin, en agua y a 25
grados, en otros solventes el comportamiento puede ser diferente.
Este valor tambin se representa como la suma de la conductividades de las
especies en disolucin = + -.
En qumica analtica se trabaja a dilucin infinita y esa conductividad
equivalente esta dada por la sumatoria de cada una de las especies en
disolucin, pero no interfieren entre si.
La alta contribucin de los H y los OH es muy grande ya que tiene un gran
tamao, una capacidad conductora y una movilidad elevada.
Mediciones directas
Se pueden hacer determinaciones directas de conductividad, se puede usar en
varias cosas, por ejemplo:
Para conocer la naturaleza de diferentes electrolitos que forman parte de una
sal inorgnica (entre ismeros de la sal), ya que tendrn diferentes
conductividades.
Ayuda a conocer la salinidad o el tipo de sales que componente diferentes
aguas (puede conocerse el tipo de electrolito, cualitativamente al menos).
Conocer la composicin de sal de diferentes matrices (leche, gaseosas, etc
Para hacer estas determinaciones se utilizan celdas como las esquematizadas
en la fotocopia, (a,b y d). Constan de dos recipientes que tiene conectados a
ambos lados los electrodos separados una distancia constante y tienen un rea
determinada, generalmente son de platino recubierto de negro de platino.
Se introduce la muestra y el nivel es el mismo (el nivel del volumen, esquema
a), en ese tipo de celda se hace una medida directa (requiere mucha muestra)
Sino se tiene mucha muestra se usa una celda del tipo b que es como copa
invertida que contiene los electrodos. Esta copa se introduce en la muestra (se
usa en mediciones in situ)
46
Analisis Instrumental
La celda d es una celda de flujo, la muestra circula constantemente, los
electrodos tienen forma anular y suelen usarse en cromatografa
Lo importante en estas determinaciones es controlar las variables
operacionales, temperatura, Tipos de iones presentes, Concentracin, Solvente
utilizado, Potencia que se aplique.
Titulacin conductimetrica
Para esta titulacin se utiliza una celda como la indicada en el esquema c. los
electrodos estn a igual distancia, hay un termmetro para asegurarse una
temperatura constante y una bureta con el agente valorado
Se basa en medir la variacin de la conductividad elctrica de una disolucin a
medida que se agregan alcuotas del agente valorado, la conductividad varia
antes y despus del punto de equivalencia y la forma de las curva va a variar
en funcin de los electrolitos en disolucin y del tipo de titulacin (hay
titulaciones acido base y por precipitacin)
Dentro de las acido base estn: las de acido y base fuertes, las de acido dbil
con base fuerte, las de acido y bases dbiles y generalmente se utilizan, como
en potenciometra, cuando la solucin presenta turbidez o coloracin y no se
puede aplicar un mtodo colorimtrico.
Tambin se usan mucho para determinar las constante de equilibrio de cidos
o bases dbiles
Es importante tener en cuanta que la concentracin del agente valorante debe
ser similar o levemente superior a la del analito.
Cromatografa
Es una tcnica de separacin que se basa en separar diferentes analitos que
forman parte de una muestra para pode cuantificarlos posteriormente.
Clasificacin y tipo de cromatografas
Teniendo en cuenta como esta formada la fase estacionaria y la fase movil (los
analitos estan en la fase estacionaria) se la puede clasificar en
A)Cromatografa plana
En papel y en capa fina. Donde la fase estacionaria se coloca sobre una placa
o papel.
Este tipo de cromatografa generalmente se usa para anlisis cualitativo.
La fase estacionaria son slidos, en el caso del papel es un papel de filtro en el
que se siembra la muestra y luego se le hace pasar el solvente que revela la
macha y esta mancha se mide. La capa fina es de vidrio y silica y funcionan de
la misma manera.
B)Cromatografa en columna
Se divide en
Cromatografa gaseosa : dos tipos CG solida (CGS) y CG liquida (CGL), esta
ultima es mas usada.
En esta cromatografia la fase movil es un gas y la fase movil puede ser un
solido o un liquido impregando en un solido.
Cromatografia liquida
47
Analisis Instrumental
La fase movil es un liquido y la fase estacionaria es un solido o un liquido que
tiene diferentes propiedades:
En algunos casos donde la F.E tiene caractersticas polares, la
separacion ocurre por un fenomeno de adsorcion
En otros casos lo solidos son intercambiadores inicos, dan lugar a la
cromatografia liquida de intercambiadores inicos
En otros casos los slidos son tales que permiten la separecion en
funcion del tamao de la molculas, este tipo se denomina cromatografia
liquida de exclusin.
Otros slidos san lugar a la cromatografia liquida de adsorcin, todo
depende de las caractersticas de la FE.
Siempre existe una cierta relacin entre ambas fases. El soluto que va a
separarse tiene que tener una determinada constante de distribucin entre
ambas fases K=Cs/Cm. La adsorcin es un fenmeno de afinidad entre el
soluto y la fase estacionaria.
Lo que se registra es un cromatograma, un grafico que indica como se separan
los componentes de una mezcla en funcin del tiempo.
Es importante asegurarse una buena resolucin de los picos que se van
obteniendo en el cromatograma. Los picos tiene que partir y volver a la lnea de
base, con forma de campana de gauss totalmente definida.
El parmetro importante es el tiempo de retencin. Con el tiempo de retencin
se puede identificar al analito. Para conocer el tiempo de retencin de un
analito se le hace un cromatograma a un testigo del analito.
El tiempo de retencin es independiente de la cantidad de muestra ingresada y
siempre en un cromatograma cuando comienza la corrida, generalmente,
aparece un piquito chiquito a un determinado tiempo. Ese tiempo se denomina
tiempo muerto y corresponde a algn analito que no fue retenido.
Generalmente se toma como referencia.
Para que exista una buena resolucin de los picos, uno tiene que tener en
cuenta algunos parmetros:
Eficacia de la columna: esta variable esta relacionada con la constante de
distribucin de cada una de las especies que constituyen la muestra. Brinda
una idea acerca de como cada especie se distribuye en la fase mvil y en la
fase estacionaria. Este parmetro de eficacia de la columna se indica con la
letra
V
1-1
R= N
4
| `

. ,
L
V=
Tr
, donde L es la longitud de la columna y Tr el tiempo de retencin
A partir del cromatograma, donde uno conoce Tr y L, puede determinar la
eficacia de la columna.
Factor de selectividad o separacin: este es otro parmetro importante para
lograr una buena separacin. Este factor relaciona las constante de distribucin
de los distintos analitos. Se le llama . Adems da una idea de las posiciones
48
Analisis Instrumental
relativas de cada uno de los analitos. Tambin se puede calcular a travs del
cromatograma ya que
a a m
b b m
K (Tr -T )
= =
K (Tr -T )
, Tm, y los tiempos de retencin se
obtienen desde el cromatograma.
Poder de resolucin: este parmetro tambien es importante para una buena
separacin, se puede calcular a partir del cromatograma, su formula es:
1-1
R= N
4
| `

. ,
, donde N es el numero de platos tericos, y es el factor de
selectividad.
El valor de R segn sea, indica el poder de resolucin. Por ejemplo R:0.75
muestra picos superpuestos, lo cual no permite saber que cantidad de analito.
representa el pico
En cambio un valor mas elevado de R, por ejemplo R:1,5 brinda una buena
resolucin.
Un valor R de 1 tampoco da una buena resolucin, los picos muestran una
mezcla.
A mayor R mejor es la resolucin, para mejorar este valor se puede trabajar
con columnas mas largas, ya que dan mas tiempo de contacto entre el soluto y
la FE. En algunos casos esto mejor la resolucin.
En funcin del tipo de columna (que se compran con determinada fase
estacionaria) uno debe saber elegir el tipo y la longitud para poder hacer una
buena determinacin cuantitativa.
Cromatografia gaseosa
Hay de dos tipos:
Cromatografia gaseosa liquida, CGL, donde la fase mvil es un gas y la fase
estacionaria es un liquido.
Cromatografia gaseosa solida, CGS, donde la fase mvil es un gas y la fase
estacionaria es un slido.
Esta tcnica se usa mucho para la separacin de componentes voltiles. Los
analitos deben ser estables a la temperatura necesaria para su volatilizacin.
La CGS se basa en la separacin de los analitos teniendo en cuenta la
diferencia de temperatura de volatilizacin de cada analito y en la capacidad
que tengan para ser adsorbidos por la fase estacionaria
La CGL se basa en la diferencia de volatilizacin de cada analito y en la
solubilidad de cada uno en los componentes de la mezcla.
Caractersticas que debe tener la muestra para poder se cuantificada por CG.
Los compuestos deben estar en estado gaseoso
No deben descomponerse a la temperatura de separacin
No deben descomponerse ni adsorberse en la fase estacionaria (no tienen que
quedar retenidos)
Tiene que ser fcilmente detectables
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Analisis Instrumental
Cromatrografo gaseoso
Tiene un tuvo de gas que contiene a la fase mvil (carrier), tiene vlvulas
reguladoras que regulan la salida del gas (flujo constante y conocido)
El gas: debe ser qumicamente inerte, su flujo debe ser constante y conocido.
Para elegirlo se tiene en cuenta:
que debe tener una buena afinidad con el analito,
Cual es la fase estacionaria
Que tipo de detector que se utilizara
Teniendo esto en cuenta se elige el gas, generalmente se usan N2, H2, CO2,
He, Ar.
La fase mvil se divide en dos caminos, uno entra a la columna cromatografica
y la otra va directo al detector.
El cromatgrafo tiene adems un horno cuya funcin es termoestatizar la a la
columna, porque es fundamental que la columna donde se produce la
separacin tenga la temperatura adecuada, pues de ella depende la
separacin.
En uno de los extremos de la columna se encuentra el sistema de inyeccin de
la muestra, que consiste en una cmara de vaporizacin instantnea que al
momento de inyectar la muestra (con jeringas o con una vlvula de inyeccin la
muestra se volatiliza enseguida. Una vez volatilizada, ingresa arrastrada por la
fase mvil a travs de la columna. En es columna se produce la separacin y
desde all van llegando los distintos analitos, se detectan y luego se desechan.
Es fundamental controlar la temperatura de la columna, porque all se produce
la separacin , pero tambin es muy importante asegurarse que la temperatura
de la cmara de volatilizacin sea la apropiada
Las columnas son capilares, largos y de dimetro pequeo
Sistemas de inyeccin
Jeringas: la inyeccin debe hacerse rpido para una buena reproducibilidad y
resolucin. No se usa mas este mtodo.
Vlvulas de inyeccin: un sistema de carga y descarga, loop, y recipiente
pequeo de volumen fijo.
Detectores
Detector de ionizacion en llama (FID).
Es el mas comn y verstil
Se basa en la capacidad de conductividad elctrica que tienen la fase mvil.
Esta formada por una quemador o mechero y en la parte superior de ese
quemador tiene un electrodo colector de electrones. Al llegar el gas inerte y el
analito se ionizan y generan electrones que son colectado dando lugar a una
corriente Es una corriente muy dbil (10
-10
10
-12
A) por lo tanto necesita un
amplificador de corriente. Esa corriente es proporcional a la concentracin del
analito
Detector de conductividad termia (TCD)
Este tipo de detector se basa en que un filamento de tungsteno (W) libera calor
cuando circula a travs de el un gas.
El detector tiene una cmara en cuyo interior hay un alambre en forma de
espiral por donde circula corriente. Cuando a travs de ese espiral circula el
gas , se ioniza, genera una corriente elctrica y esta se detecta.
50
Analisis Instrumental
Detector de captura electrnica
Este tipo de detector generalmente se usa en instrumentos que se usan para
determinaciones medioambientales (de compuestos como halgenos, algunos
grupos Ar)
El ECD se basa en medir la disminucin de la corriente generada entre dos
electrodos. Entre esos dos electrodos hay una placa de un metal radiactivo,
cuando el gas con el analito atraviesan esa placa el material radioactivo ioniza
al gas generando un flujo de electrones , ese flujo de electrones genera una
corriente que es la que se detecta.
Componentes de un cromatgrafo HPLC.
Tubos o recipientes donde se encuentra la fase mvil: son de materiales inerte,
generalmente vidrio. Los solventes mas utilizados suele ser metanol,
acetonitrilo, cloroformo o mezclas de ellos. Deben ser de muy buena calidad y
no deben interaccionar con la muestra.
Vlvulas: permitir y regular la entrada de estos reactivos. La fase mvil debe
fluir en forma continua.
Bombas: generalmente un par, de presin, cuya funcin es impulsar la fase ovil
en forma controlada hacia una cmara de mezclado (n4). All se mezcla y se
homogeneiza la fase mvil donde llega a una vlvulas o sistema de inyeccin.
All convergen la fase mvil y la muestra. Se inyectan pequeos volmenes de
muestra, que deben ser controlados, debido a que se busca una buena
reproducibilidad. Esa vlvula de inyeccin es semejante a las vlvulas
rotatorias vistas en cromatografa gaseosa. Algunos equipos requieren una
precolumna para reconcentrar la muestra. Esas columnas (ver fotocopia) de
HPLC son bastante distintas a las de cromatografa liquida convencional. Una
vez que se va produciendo la separacin va llegando a un detector. Estos
detectores tienen la caracterstica de tener una microcubeta, de volumen muy
pequeo, que va generando una seal elctrica a medida que va pasando la
muestra. Puede ser cualquier detector, de cualquier tipo (comn, arreglo de
diodos, conductimetrico, etc). La seal de la microcubeta es registrada por el
PLC o la computadora y se genera un cromatograma , que es igual al de
cromatografa gaseosa (seal versus tiempo).
Colector de fracciones: se utiliza cuando se empela la cromatografa de forma
cualitativa, para separar pero no cuantificar. En este tipo de cromatografa la
temperatura es un parmetro no muy importante. Se trabaja, generalmente, a
temperatura ambiente.
Aplicaciones.
Son muy amplias, mucho mas que las gaseosas. Se usa mucho en anlisis
farmacutico, para control de calidad de principios activos, en el campo de
bioqumica y medio ambiente , alimentos, etc. Es una tcnica cara por las
columnas y el mantenimiento.
Cromatografa liquida
51
Analisis Instrumental
La cromatografa liquida se basa en la separacin de diferentes analitos
presentes en una muestra, teniendo en cuenta la absorcin selectiva de cada
uno en la fase estacionaria. En este caso como fase mvil tenemos una fase
liquida y como fase estacionaria generalmente un solido que puede ser:
aluminas, slices o diferentes resinas de intercambio inico, que dependiendo
de la relacin carga tamao de la especie, los componentes sern mas o
menos retenidos en la fase estacionaria y esto es lo que va a permitir la
separacin de cada analito. Ocurre entre la fase estacionaria y los
componentes de la mezcla diferentes mecanismo que van a permitir la
separacin. Estos mecanismo pueden ser absorcin, intercambio inico o un
mecanismo de reparto ente una fase y otra.
Cuando la fase estacionaria es orgnica tiene lugar un proceso de distribucin
entre la fase estacionaria y la mezcla que lleva los analitos a separar
Si se usa una resina , esta puede estar cargada y cuando se produce la
separacin se produce un mecanismo o reaccin de intercambio inico.
Cuando la fase estacionaria es un lquido que reencuentra soportado sobre un
polmero se produce un mecanismo de distribucin o extrusin, dependiendo
de los tamaos de las partculas de esa fase estacionaria.
Es fundamental el tamao de las partculas de la fase estacionaria
Cuando surgi la cromatografa liquida de alta resolucin (HPLC o CLARA). Al
fase mvil es un liquido y la estacionaria es un solido. Se trabaja a elevada
presin (caracterstica fundamental). La fase mvil se hace fluir trabajando a
elevadas presiones. En la convencional la fase mvil fluye por gravedad o
haciendo vaco. Luego apareci la cromatografa liquida de alta presin. Al
aumenta as la velocidad de la fase mvil mejoraron las columnas que se
utilizan. Son columnas de dimetros muy chiquitos (8-10 m) y una longitud de
20-25 cms. Esto hace que el relleno sean partculas de dimetro muy pequeo
y esto mejora la eficacia de la columna para que tenga una buena resolucin.
Componentes de un cromatgrafo HPLC.
Tubos o recipientes donde se encuentra la fase mvil: son de materiales inerte,
generalmente vidrio. Los solventes mas utilizados suele ser metanol,
acetonitrilo, cloroformo o mezclas de ellos. Deben ser de muy buena calidad y
no deben interaccionar con la muestra.
Vlvulas: permitir y regular la entrada de estos reactivos. La fase mvil debe
fluir en forma continua.
Bombas: generalmente un par, de presin, cuya funcin es impulsar la fase ovil
en forma controlada hacia una cmara de mezclado (n4). All se mezcla y se
homogeneiza la fase mvil donde llega a una vlvulas o sistema de inyeccin.
All convergen la fase mvil y la muestra. Se inyectan pequeos volmenes de
muestra, que deben ser controlados, debido a que se busca una buena
reproducibilidad. Esa vlvula de inyeccin es semejante a las vlvulas
rotatorias vistas en cromatografa gaseosa. Algunos equipos requieren una
precolumna para reconcentrar la muestra. Esas columnas (ver fotocopia) de
HPLC son bastante distintas a las de cromatografa liquida convencional. Una
vez que se va produciendo la separacin va llegando a un detector. Estos
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Analisis Instrumental
detectores tienen la caracterstica de tener una microcubeta, de volumen muy
pequeo, que va generando una seal elctrica a medida que va pasando la
muestra. Puede ser cualquier detector , de cualquier tipo (comn, arreglo de
diodos, conductimetrico, etc). La seal de la microcubeta es registrada por el
PLC o la computadora y se genera un cromatograma , que es igual al de
cromatografa gaseosa (seal versus tiempo).
Colector de fracciones: se utiliza cuando se empela la cromatografa de forma
cualitativa, para separar pero no cuantificar. En este tipo de cromatografa la
temperatura es un parmetro no muy importante. Se trabaja, generalmente, a
temperatura ambiente.
Aplicaciones.
Son muy amplias, mucho mas que las gaseosas. Se usa mucho en anlisis
farmacutico, para control de calidad de principios activos, en el campo de
bioqumica y medio ambiente , alimentos, etc. Es una tcnica cara por las
columnas y el mantenimiento.
Electroforesis
Esta tcnica se basa en separar especies cargadas en funcin de las distintas
velocidades de migracin cuando estn bajo la influencia de un campo
elctrico. Para que se pueda llevar a cabo la electroforesis es necesario contar
con un medio de separacin o medio electroforetico que tiene la funcin de
actuar como conductor de la corriente y controlar la carga elctrica de los
analitos a determinar . generalmente se utiliza como medio electroforetico
soluciones reguladoras o soluciones tampones. Las especies a determinar van
a una determinada velocidad de migracin cuando son sometidas a un campo
elctrico.
Quiere decir que esta velocidad de migracin va a depender de la viscosidad
del medio electroforetico. Ambos dependern de la magnitud de campo
elctrico que uno aplique. Tambin depender de la carga neta de cada
molcula. A mayor carga mas rpido se movern hacia los electrodos y va a
depender tambin del tamao de esas molculas (mas pesadas, mas lentas).
Siempre se debe conocer el compuesto con el que se trabaja . originalmente ,
en 1930, aparecieron las primera caractersticas de electroforesis y se dividen
en electroforesis libre y de zona.
La libre se basa en utilizar tubos en forma de U y que tenan electrodos
conectados en los extremos. Esos tubos se los rellenaba con una solucin
reguladora y se les inyectaba una solucin de la muestra, se aplicaba un
campo elctrico y comenzaban a separarse los componentes de tal manera
que el que tenia mayor velocidad era el primero que uno recoga y separaba.
Este tipo de electroforesis era muy limitada (pocas muestras, protenas).
Luego apareci la electroforesis de zona, en este caso la movilidad de las
partculas se realiza a travs de un compuesto solido impregnado de una
solucin tampn que contiene a la muestra. Como soporte solido se utilizaba
acetato de celulosa, laminas de papel de filtro , algodn , lana de vidrio y all ,
sobre ese soporte, se aplicaba un campo elctrico logrndose la separacin de
los analitos.
Ese campo elctrico tiene que ser controlado. Si es muy elevado genera un
movimiento de conveccin en la superficie. Al aumentar la temperatura en esa
53
Analisis Instrumental
zona no se logra separar la especie correctamente y hace que la seal sean
bandas muy anchas.
Por eso estos tipos de electroforesis fueron dejando de usarse por ser lentas y
tener muchas desventajas . As es que surge la electroforesis capilar.
Esta tcnica utiliza para la separacin tubos capilares que tiene la funcin de
actuar como celdas electroforeticas . con el empleo de estos tubos capilares
disminuye notablemente el efecto del movimiento por conveccion y permite
entonces una buena separacin de los componentes, en formas mas eficiente y
rpida. La diferencia con la convencional es que la migracin o separacin de
especies se realiza cando estn sometidas a una campo elctrico de elevado
voltaje.
En los extremos del capilar se encuentran los electrodos , que son los
encargados de generar ese movimiento de migracin dentro del capilar. Esa
velocidad de migracin depende de la viscosidad de esa solucin que depende
de la relacin carga/tamao, del tampn, etc.
A ese tubo , de pequeo dimetro, se le hace una ventana que se coloca cerca
del detector
La velocidad de migracin , que depende de estos parmetros, tambin esta
relacionada con dos fenmenos que ocurren all dentro la electromigracion y la
electrosmosis.
Electromigracion: ocurre debido a ese campo elctrico aplicado que hace que
las partculas que estn cargadas se muevan a una velocidad que es
proporcional al campo elctrico aplicado. Se la llama velocidad electroforetica.
El campo depende de la longitud de capilar (Lc) y del potencial que uno aplica
(V)[Lc/V] . estas partculas se van separar , van a tener una determinada
movilidad electroforetica, y esta movilidad electroforetica esta relacionada con
la relacin carga/tamao de las partculas . se obtienen , haciendo una
electroforesis, un electroferograma. De este se puede conocer las velocidades
electroforeticas y las movilidades electroforeticas de cada especie que luego
permite la cuantificacin de la especie. Tambin se pueden obtener el tiempo
de migracin de cada especie para despus relacionarlo con velocidad y
movilidad electroforetica.
Se define como tiempo de migracin al tiempo que tarda el solido en migrar
desde que se inyecta hasta que llega al detector. Va a estar relacionado con la
Lc , longitud del capilar hacia el detector Vd., con el voltaje aplicado y la
velocidad y movilidad electroforetica
Electrosmosis: este fenmeno se debe a que la accin de un campo
electroforetico , adems de moverse, las especies cargadas tambin se mueve
la solucin tampn (solucin reguladora.)
Para que ocurra una buena separacin tiene que ocurrir los dos procesos.
Electrosmosis dentro del capilar: generalmente los capilares son de tefln y
vidrio y los mas comunes de slice fundida. Esos capilares de slice fundida
tiene silanoles (SiOH). Estos silanoles , dependiendo del pH de esa solucin
tampn se ionizan dando compuestos cargados negativamente y
positivamente. A medida que circula la solucin tampn esas cargas negativas
atraen a las cargas positivas de la solucin tampn y se forma primariamente
una capa fija o una capa de adsorcion, sobre esa capa fija se vuelve a formar
otra capaz mas difusa que es una capa mvil , encargada de que cuando se
54
Analisis Instrumental
aplica el potencial , llevar a los componentes de la muestra. Entre esas dos
capas , una fija y otra difusa, se genera por el propio movimiento de las capaz
un potencial denominado potencial Z. este potencial Z va a depender del
espesor de esa doble capa y a su vez la formacin de esa doble capa va a
depender del especies en estudio. Como hay flujo tambin hay una movilidad
electrosmotica,
EO,
y lgicamente una velocidad electrosmotica.
Estos parmetros dependen del potencial que uno este aplicando. Para poder
calcular estos parmetros uno lo hace a travs de los grficos de seal en
funcin de tiempo (electroferograma). De este se puede sacar informacin
cualitativa o cuantitativa (la llamada screening es cualitativa.)
En este tipo de tcnica uno puede aplicar un voltaje de tal manera que las
especies que estn cargadas positivamente vayan hacia el ctodo y las que
estn cargadas negativamente hacia el nodo y uno ten el detector ubicado
cerca del ctodo.
Tambin se puede invertir el potencial y de esa manera colocar el capilar cerca
del nodo. Se invierte el voltaje y el flujo de las especies. Las cargadas
positivamente al electrodo positivo y las cargadas negativamente al negativo (lo
normal es al revs). Dependiendo del fin de uso as se logra una separacin ,
sobre todo cuando el pH es muy acido.
Convencionalmente el positivo a negativo y viceversa. Esto es a pH>4 y el
potencial aplicado es normal. entonces se aplica un potencial inverso de tal
manera que el positivo vaya al positivo y el negativo al negativo, a pH<4.
Es fundamental controlar:
pH de la solucin tampn
La fuerza inica de la solucin tampn (si es muy alta el flujo
electrosmotico disminuye, suelen usarse buffers con fuerza inica
intermedia).
Temperatura de trabajo: generalmente se trabaja a temperatura
constante, que puede variar entre 15 y 25 C
Manteniendo constante la temperatura se evita el efecto joule.
Efecto joule: aumento de temperatura en el capilar, que genera un
movimientote conveccion haciendo que aumente el flujo electrosmotico.
El capilar debe ser bien seleccionado
Cuanto menor es el dimetro del capilar favorece la resolucin de los picos y
meno es el efecto joule que puede ocurrir adentro
Voltaje: voltajes adecuado, del orden de los Kvolts, generalmente a mayor
voltaje mayor separacin.
Generalmente las fuentes de voltaje van de 5 a 30 Kvolts
Introduccin de la muestra al capilar: la muestra puede ingresarse de dos
formas:
Inyeccin hidrodinmica: aplicando presin sobre el capilar inyectado un
determinado volumen de muestra o mediante una bomba de vaco, que
provoca un efecto de succin o por simple gravedad.
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Analisis Instrumental
Inyeccin electrocintica: aplicar un determinado voltaje durante un tiempo
muy corto. Se programa el equipo para que aplique el voltaje y esto permite el
ingreso de la muestra al capilar.
Una vez que ingreso la muestra al capilar, esta circula dentro del capilar con la
solucin buffer, llega al detector donde se registra la seal . el detector puede
ser un detector ptico, cualquiera de los vistos, o un detector electroqumico o
un conductimetrico.
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