Facultad de Ciencias Biolgicas Prof.

Martha Valdivia Cuya

Fisiologa general, Practica N 1

EFECTO DE LA TOLERANCIA OSMTICA Y CAMBIO DE FORMA CELULAR

1. INTRODUCCIN

Todas las clulas presentan unas membranas como barrera de proteccin, la cual por sus componentes, como lpidos y protenas, hacen que esta sea semipermeable. En esta pueden ocurrir ciertos procesos de difusin, como es el caso del agua y de las soluciones en general, proceso conocido como smosis. Cuando las disoluciones tienen su respectivo soluto con una concentracin diferente al que tiene el citoplasma, es cuando el solvente procede a entrar o salir de la clula dependiendo del caso, ocasionando ciertos cambios en ella, como por ejemplo el hincharse o sino el contraerse. La presin osmtica se define como la fuerza necesaria para detener el flujo a travs de la membrana, entonces cuando se agrega una solucin de determinada concentracin, diferente al del medio intracelular, se generar una gradiente de presin osmtica y por ende una determinada respuesta como en el caso anterior. Se dice que dos soluciones son isosmticas si ejercen la misma presin osmtica a travs de una membrana solo permeable al agua. Si una de las soluciones ejerce menos presin osmtica que la otra, es hiposmtica respecto a la otra solucin; si ejerce una presin osmtica es hiperosmtica. La osmolalidad (u osmoticidad) se define as, sobre la base de un osmmetro ideal: uno en que la membrana osmtica permite pasar al agua, pero impide completamente el paso de solutos. Todas las soluciones con el mismo nmero de partculas disueltas por la unidad de volumen tienen la misma osmoralidad y se definen como isosmticos.

2. RESUMEN: En esta prctica de laboratorio trabajaremos con espermatozoides extrados de la cola del epiddimo de ratn macho, a los que someteremos con una solucin isosmtica primero para evaluar la motilidad, sobrevivencia y el cambio de forma, estableciendo as los datos control; despus los trataremos con soluciones anisosmticas, determinando tambin los tres caracteres sealados. De esa forma estaremos analizando la fisiologa del espermatozoide, en este caso relacionado a su tolerancia osmtica, pues veremos en cual de las tres soluciones con diferente presin osmtica aun se pueden tener un buen esperma, a pesar de haber modificado su medio. Adems observaremos si al variar la concentracin del medio, estos gametos pueden sufrir ciertas

Facultad de Ciencias Biolgicas Prof. Martha Valdivia Cuya

Fisiologa general, Practica N 1

modificaciones morfolgicas o incluso si llegan a morir. En todo caso, al acabar la practica tendremos la nocin de a que concentraciones (en osmoles como unidad trabajada) se puede tener aun una muestra de espermatozoides de ratn vivos y cul es la tolerancia de los espermatozoides de ratn.

3. MARCO TERICO El mantenimiento del volumen celular es fundamental para la viabilidad de las clulas ya que no slo define su forma y la osmolalidad intracelular sino que tambin gobierna otras funciones celulares como por ejemplo el crecimiento, la migracin, la diferenciacin y la muerte celular, el metabolismo intracelular, el transporte epitelial, la liberacin de hormonas y la excitabilidad celular. La membrana plasmtica se comporta como un osmmetro celular ya que es altamente permeable al agua y poco permeable a otros solutos orgnicos e inorgnicos que actan de osmolitos celulares. Por ello, un cambio en la osmolaridad extracelular (cambio anisosmtico) o un cambio del contenido intracelular (cambio isosmtico) produce un flujo vectorial de agua para reestablecer la diferencia de presin osmtica generada a ambos lados de la membrana. Esta difusin que conduce al agua a su punto de equilibrio termodinmico, induce cambios substanciales en el volumen celular frente a los cuales las clulas animales han desarrollado mecanismos especficos para reestablecer el volumen inicial y no comprometer su funcin celular. Algunos organismos inferiores como las bacterias, las levaduras y las plantas han desarrollado estructuras membranales complejas con paredes extracelulares rgidas que ejercen una presin hidrosttica adicional, permitindoles resistir diferencias de presin osmtica importantes sin la necesidad de modificar el volumen celular. La expresin matemtica que define el flujo de agua a travs de las membranas celulares queda recogida en el cuadro siguiente:

Facultad de Ciencias Biolgicas Prof. Martha Valdivia Cuya

Fisiologa general, Practica N 1

En condiciones isotnicas, el mantenimiento del volumen celular constante (steady state volume) se consigue gracias al balance entre las vas de flujo pasivas activas en condiciones de reposo y la actividad de la bomba de Na+-K+-ATPasa (mecanismo de pump and leak) , cuyo funcionamiento permite mantener el gradiente electroqumico a travs de la membrana necesario para el cotransporte y acumulacin de protenas, azcares y aminocidos indispensables para las funciones metablicas celulares, contrarrestando con la extrusin de iones de Na+ (ion para el cual la membrana es altamente impermeable) la ms elevada presin osmtica existente en el interior celular debida a la acumulacin de estos osmolitos orgnicos. En los organismos superiores la mayora de las clulas difcilmente se ven expuestas a cambios substanciales en la tonicidad del medio ya que la osmolaridad del plasma est finamente regulada por la funcin renal. No obstante, existen algunas excepciones a esta generalizacin: 1) las propias clulas de la mdula renal que se exponen a concentraciones cuatro veces superiores a la osmolaridad del plasma, 2) las clulas sanguneas (hemates, leucocitos) cuando circulan a travs del rin y 3) las clulas que se encuentran formando parte de algunos revestimientos epiteliales, como p. ej. el epitelio intestinal cuya osmolaridad extracelular se ve aumentada despus de una ingesta o diluda por una ingesta excesiva de agua y el epitelio respiratorio, la cara luminal del cual est recubierta por un lquido llamado ASL (airway surface liquid; vase apartado II de la introduccin) que modifica su tonicidad segn las condiciones ambientales: una ventilacin fra o seca lo vuelve hipertnico mientras que una ventilacin hmeda lo vuelve hipotnico. Ante estas situaciones, las clulas han desarrollado mecanismos que les permiten responder a estas variaciones de volumen y recuperar su estado inicial.

4. MATERIALES Y MTODOS Para el estudio de esta prctica han sido seleccionados 2 ratones machos, en una estado de madurez sexual. El animal debe ser inmovilizado y se procede a la dislocacin cervical, inmediatamente despus utilizando unas tijeras se procede a la extirpacin del epiddimo, para la obtencin y contrastacin seminal. Tras la recuperacin de la cauda epididimaria, se procede al corte de ste y posteriormente a la separacin del tejido de los espermatozoides en todo momento en condiciones isotermas 37 oC, determinndose de manera rutinaria: la movilidad, vitalidad y el cambio de forma. MOVILIDAD (M): se estim el porcentaje de espermatozoides en movimiento (de O a 100) y la calidad del mismo). Se observ en una muestra de semen diluido en citrato sdico isoosmtico, entre portaobjetos y cubreobjetos previamente atemperados a 37C, mediante microscopio ptico. El valor del Ml se expresa en porcentaje.

Facultad de Ciencias Biolgicas Prof. Martha Valdivia Cuya

Fisiologa general, Practica N 1

INDICE DE VITALIDAD: se estima el porcentaje de espermatozoides vivos (de 0 a 100), Para la estimacin se utiliz la tincin de la eosina quien nos indica si el espermatozoide se encuentra con vida o no.

a) a) Espermatozoide con vida b)

Espermatozoide sin vida

CAMBIO DE FORMA: al igual que los dems estados se estima el porcentaje del cambio de forma del espermatozoide (de 0 a 100 que presentan algn tipo de morfoanomalias. Observando en muestra de semen diluida con diferentes concentraciones anisosmoticas entre portaobjetos y cubreobjetos mediante el microscopio ptico.

a) Diferentes tipos de formas de un espermatozoide

5. RESULTADOS

Facultad de Ciencias Biolgicas Prof. Martha Valdivia Cuya

Fisiologa general, Practica N 1

CONTROL Movilidad Vitalidad Cambio de forma

PORCENTAJE

Cuadro con los porcentajes promedio de las caractersticas que estamos estudiando (movilidad, vitalidad y cambio de forma).

CONCENTRACI ONES/ CARACTERSTI CAS Movilidad (%) Vitalidad (%)

Cambio de forma (%)

Facultad de Ciencias Biolgicas Prof. Martha Valdivia Cuya

Fisiologa general, Practica N 1

6. DISCUSIN DE RESULTADOS