Universidad Nacional Autnoma de Mxico Facultad de Qumica Gentica y Biologa Molecular

Clave 1630
Profesor: Javier Plasencia de la Parra Departamento de Bioqumica Lab. 101, Conjunto E javierp@unam.mx

UNIDAD I. INTRODUCCIN Y BASES CELULARES DE LA HERENCIA

Gentica y Biologa Molecular Objetivos del Curso

Proporcionar los principios bsicos en los que se sustenta la Gentica y las predicciones de la herencia. Comprender a nivel molecular en qu consiste, cmo se transmite y cmo se expresa la informacin gentica.

Gentica y Biologa Molecular

Ao 1859 1865 1869 1902 1910 1944 1953 1958 1966 1973 1977 2001 Quin Charles Darwin G. Mendel F. Miescher Sutton & Boveri T. Morgan Avery et al.
Watson, Crick

Algo de Historia....

Evento
Publica el Origen de las Especies Principios de segregacin y distribucin indep. Descubre el DNA Proponen la teora de los cromosomas Demuestra que los genes estn en los cromosomas Demuetran que el DNA contiene la informacin gentica Determinan la estructura tridimensional del DNA

Messelson & Stahl Demuestra la replicacin semiconservativa del DNA

Varios Boyer & Cohen F. Sanger et al. Venter at al.

Desciframiento del cdigo gentico Clonan DNA en un plsmido Desarrollan mtodo para secuenciar DNA Publican la secuencia completa del genoma humano

Gentica y Biologa Molecular

GENTICA. Estudia las bases y principios de la herencia. Genesis = origen. Gen o gene: La unidad bsica de la herencia. Es un fragmento de DNA con la informacin para sintetizar una protena o un RNA.

BIOLOGA MOLECULAR. Estudio de la estructura de los genes y sus funciones a nivel molecular.

Aplicaciones de Gentica y Biologa Molecular

Diagnstico Gentico Terapia Gnica Fitomejoramiento Medicina Genmica Ingeniera Gentica

Diagnstico gentico Amniocentesis

La amniocentesis es una prueba prenatal se extrae una pequea muestra del lquido amnitico que rodea al feto para analizarla.

Se utiliza con frecuencia durante el segundo trimestre de embarazo para diagnosticar ciertos defectos congnitos cromosmicos y genticos.

Sndrome de Down: Trisoma 21 (Tres copias del cromosoma 21).

Medicina genmica/ Terapia gnica

Introducir clulas transformadas (con un gen intacto) en el tejido somtico para corregir una funcin defectuosa o en la lnea germinal.

Inmunodeficiencia combinada sevra. Defecto en la desaminasa de adenosina. Clulas madre de la mdula sea se transforman.

Fitomejoramiento. Aprovechar la diversidad gentica en especies vegetales para generar cultivos resistentes a plagas y enfermedades, con tolerancia a ambientes adversos y de un alto rendimiento.

Genmica y Bioinformtica Estudio de la estructura y funcin de genomas completos. Genoma humano: 3.5 X 109 pb Genoma E. coli 4 X 106 pb

Tamao Relativo de los Genomas de distintos organismos.

Pares de Bases

Ingeniera Gentica
Produccin de frmacos. Produccin de insulina humana en clulas de Escherichia coli

Ingeniera Gentica
Cultivos de plantas que expresan protenas bacterianas con actividad insecticida. Plantas resistentes a insectos. Plantas resistentes a virus. Plantas resistentes a herbicidas.

Durante el Ciclo celular se controla la replicacin del DNA y la divisin de la clula

P-M-A-T

El dogma central de la Biologa Molecular Replicacin. El DNA duplica su

informacin antes de la divisin celular

Transcripcin. Parte de la molcula de DNA (gen) es copiada a RNA. Metabolismo del RNA.
Procesamiento, transporte. Traduccin. Se traduce la secuencia de nucletidos del RNA a secuencia de aminocidos para sintetizar una protena.

GEN: La unidad bsica de la herencia. Es un fragmento de

DNA con la informacin para sintetizar una protena o un RNA. darse en un locus.

ALELO: Una de las diferentes formas de un gen que puede

Alelo para chcharos verdes

Locus color de frutos

Par de cromosomas homlogos

Alelo para chcharos amarillos

GENOTIPO: Composicin allica especfica de una clula o un

individuo. Se refiere al total de su genoma o conjunto de genes.

FENOTIPO: Forma que toma un carcter (o conjunto de stos)

en un individuo particular. Manifestacion externa observable de un genotipo concreto.

Algunas definiciones importantes antes de ver Mitosis y Meiosis Cromosoma. La molcula de DNA formando un complejo con RNA y protenas y que contiene a los genes ordenados en forma lineal. Cromtida. En mitosis o meiosis, una de las dos subunidades idnticas unidas por el centrmero y que resultan de la replicacin del cromosoma. Ploida. Se refiere al nmero de juegos (sets) de cromosomas o mltiplos. La mayor parte de las clulas en un humano son diploides (2n); tienen dos juegos de cromosomas (2 x 23 = 46). Los gametos (espermatozoides y vulos) son clulas haploides pues tienen solamente un juego de cromosomas (n). En humanos: 23

Relacin Genotipo Fenotipo e influencia del medio ambiente

Carcteres cualitativos estn determinados por un gen

Gene A

carcter

Carcteres cuantitativos estn determinados por varios genes y son influenciados por el medio ambiente

carcter fenotipo

Tipos de mutaciones de pares de bases.

Secuencia silvestre

CATTCACCTGTACCA GTAAGTGGACATGGT
Transicin (T-A to C-G) Transversin (T-A to G-C)

CATCCACCTGTACCA GTAGGTGGACATGGT

CATGCACCTGTACCA GTACGTGGACATGGT

Sustituciones de pares de bases transicin: pirimidina a pirimidina transversin: pirimidina a purina

Delecin o eliminacin Insercin

CATCACCTGTACCA GTAGTGGACATGGT

CATGTCACCTGTACCA GTACAGTGGACATGGT

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El DNA se encuentra empacado en los cromosomas eucariontes

Segmento de doble hlice DNA + Histonas = Nucleosomas Empaquetamiento de nucleosomas. Cromatina de 30 nm Seccin de cromosoma en forma extendida Seccin de cromosoma en forma condensada El DNA extendido de una clula de mamfero medira aproximadamente 1 mt delongitud Octmero de Histonas: H2A; H2B; H3;H4

Cromosoma en metafase

Dado que el DNA es la molcula que almacena la informacin gentica, debe ser replicado de una manera fidedigna.
La mitosis est diseada especficamente para distribuir los cromosomas de manera equitativa. Se distribuyen copias exactas del material gentico.

Clula diploide 2n

Clula diploide 2n
Mitosis

Clula diploide 2n

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Durante el Ciclo celular se controla la replicacin del DNA y la divisin de la clula

P-M-A-T

El centrosoma o centro organizador de microtbulos es una zona en el citoplasma de la clula donde se producen los microtbulos. Cada centrosoma contiene un par de centriolos que se componen de fibras formadas por microtbulos.

Los microtbulos se elongan por la oligomerizacin de tubulinas y

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MITOSIS
I. Profase: En el ncleo, la cromatina se condensa. Se observan los cromosomas que se han duplicado estn unidos por el centrmero. (Cromtidas). Se degrada la envoltura nuclear. En el citoplasma, los centrosomas se mueven hacia los polos de la clula y las fibras del huso mittico empiezan a elongarse. II. Metafase: Las fibras del huso se unen a los centrmeros del cromosoma en unas estructuras especializadas llamadas cinetocoros. Hay un cinetocoro en cada una de las cromtidas. Los cromosomas migran hacia la lnea media entre los dos centrosomas.
Plano de la metafase

III. Anafase: El centrmero se rompe y las cromtidas se mueven hacia los polos opuestos endireccin de los respectivos centrosomas. Ahora que estn separadas, las cromtidas se denominan cromosomas.

IV. Telofase: Los dos juegos de cromosomas alcanzan los polos de la clula y comienzan a desenrrollarse. Se sintetiza la envoltura nuclear alrededor de los cromosomas para formar los ncleos. Ocurre la divisin celular (citocinesis) y se tienen dos clulas hijas idnticas.

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Mitosis en clulas epiteliales de Xenopus sp. METAFASE

PROFASE ANAFASE TELOFASE

http://www.sciencephoto.com/index.html

Ciclo celular
La proliferacin y la progresin del ciclo celular estn funcionalmente ligadas a los genes asociados con el control del crecimiento.

La integracin de seales positivas y negativas que regulan el crecimiento se puede observar en varios casos: Ciclos de mitosis y meiosis para la generacin de gametos Estimulacin de clulas quiescentes para que proliferen en sitios de cicatrizacin Salida del ciclo celular para que una clula prolifere o vaya a diferenciacin.

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Punto de control o checkpoint para asegurar que se completen los eventos antes de que progrese el ciclo celular
Formacin del huso Alineamiento de cromtidas En la transicin G2-M Completado la replicacin. Dao al DNA En la transicin G1-S verifica la capacidad de la clula para completar la replicacin. Status de la replicacin Dao al DNA Tamao de la clula Esttus nutricional Dao celular y al DNA Fact. crecimiento

A nivel molecular, el ciclo celular est controlado por la actividad fluctuante espacial y temporal de complejos protecos formados por una ciclina y una cinasa dependiente de ciclina

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Las ciclinas son protenas cuya presencia vara durante el ciclo celular

La presencia de la ciclina est regulada por ubiquitinacin y procesamiento en el proteasoma La funcin de las ciclinas es la ACTIVACIN de las CDKs (cinasas dependientes de ciclinas)

Mecanismo de accin de las ciclinas

La ciclina se une en uno de los lados de la hendidura del sitio cataltico de la CDK e induce un cambio conformacional en la estructura terciaria. Estos cambios activan a la cinasa al realinear el sitio activo y prevenir el bloqueo estrico que se presentaba.

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Fosforilacin de Protenas por Cinasas

CINASA DE PROTEINA

PP

SUSTRATO (Protena)

Fosforilacin de Protenas por Cinasas

PP

SUSTRATO (Protena Fosforilada)

La adicin del grupo fosfato cambia el status de la protena. La puede activar o inactivar.

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La actividad del complejo CDK-ciclina se regula a su vez por la fosforilacin de la ciclina

Fosforilacin de protenas involucradas en la transicin G1-S

Funcin de los complejos CDK-Cyc en la fase G1. La va de retinoblastoma En respuesta a un estmulo mitognico en clulas quiescentes, el complejo ciclina D-CDK4 o ciclina DCDK6, son los que comienzan el ciclo celular.

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El factor de transcripcin E2F

Hay 8 isoformas de este factor transcripcional Tiene todos los dominios caractersticos de un factor transc.

Dominio de Unin al DNA

Dominio de Dimerizacin

Dominio de Transactivacin

Cuando el factor E2F est unido a la protena de retinoblastoma no fosforilada, es inactiva

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Cuando la protena RB es fosforilada secuencialmente por los complejos CDK4/6-cycD y CDK2-cycE, se disocia de E2F

El elemento de reconocimiento a E2F en los promotores tiene la secuencia consenso: TTTGGCCC con algunas variantes El factor E2F regula la expresin de muchos genes: Enzimas / Protenas involucradas en la sntesis de DNA Dihidrofolato reductasa Orc1 DNA polimerasa a Timidilato sintasa Reguladores del ciclo celular Cdk2 Ciclina A Ciclina E E2F Otros factores de transcripcin c-myb c-myc

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 Durante la fase G2, se sintetizan factores regulatorios de la mitosis y ocurren modificaciones en la estructura de la cromatina para que sta se pueda condensar. La mitosis involucra remodelado de la arquitectura del genoma de tal manera que se tiene cromatina relajada en la profase y luego muy compacta y durante la metafase.

Profase

Metafase

Remodelado de la cromatina eucarionte.

Las protenas asociadas al remodelado de la cromatina son: Histonas acetilasas Histonas desacetilasas

La acetilacin de histonas relaja a la cromatina, mientras que la desacetilacin, la hace ms compacta. Esto tambin se asocia a regulacin transcripcional

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Control del nmero de clulas por proliferacin

Tasa de proliferacin

Patologas asociadas a acumulacin de clulas

Homeostasis celular

Los tumores de las clulas somticas se deben a una serie de mutaciones especficas que se acumulan.
A causa de las mutaciones, las clulas pueden: Aumentar la capacidad proliferativa. Disminuir la susceptibilidad de una clula a apoptosis. Producir un incremento en la tasa general de mutacin.

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Proto-oncogen
Mutacin

Oncogen

Los proto-oncognes codifican protenas que regulan positivamente el ciclo celular o bloquean la apoptosis. Pueden convertirse en oncogenes cuando sufren una mutacin. Este alelo mutante corresponde a una ganancia de funcin. Cuando los supresores tumorales, que regulan negativamente el ciclo celular o regulan positivamente la apoptosis, sufren mutaciones, puede ocurrir prdida de funcin y se promueve la formacin del tumor.

Mutaciones en los genes de las protenas controlan los procesos de proliferacin, regulacin del ciclo celular o apoptosis pueden provocar tumores.
Tipo de funcin de la protena silvestre Activa la progresin del ciclo celular Inhibe la progresin del ciclo celular. Induce la apoptosis. Inhibe la apoptosis. Participa/regula la reparacin de DNA Resultado de la mutacin Oncogen. Ganancia de funcin. Gen supresor de tumores. Prdida de funcin. Gen supresor de tumores. Prdida de funcin. Oncogen. Ganancia de funcin. Gen supresor de tumores. Prdida de funcin Ejemplo Protena Ras Protena de retinoblastoma. Protena p53 Protena bcl-2 Protena ATM

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Ciclo Celular y Cncer

Los oncogenes son formas mutadas de genes que controlan la sealizacin inducida por factores de crecimiento. Estn activos an en ausencia de estos factores de crecimiento e inducen proliferacin celular. Son mutaciones autosmicas dominantes. Ej. ras, myc

Va de sealizacin de Ras

Ras es una protena asociada a receptores membranales de factores de crecimiento. Transduce seales desde la membrana plasmtica para iniciar la proliferacin.

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Mutaciones en supresores tumorales tambin provoca proliferacin descontralada y generacin de tumores

Las protenas RB y p53 son supresores tumorales

p53 es una protena que detecta dao al DNA y detiene el ciclo celular y activa mecanismos de reparacin

Si el dao al DNA es muy severo, ocurre apoptosis

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Cmo se puede explicar una amplia diversidad gentica en una especie?

Phaseolus vulgaris Zea mays

Cmo se puede explicar una amplia diversidad gentica en una especie?

Canis familiaris

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Esta diversidad gentica se genera por la reproduccin sexual, en la que se combina la informacin de dos clulas que provienen de individuos distintos. Cada uno de los padres contribuye con un gameto haploide (n) que se fusionan para producir un cigoto. El cigoto es una clula diploide (2n).
Los gametos haploides se generan por dos eventos de MEIOSIS Clula haploide n Clula haploide n
Meiosis II

Clula diploide 2n

Clula haploide n

Meiosis I

Clula haploide n

Clula haploide n Clula haploide n

Meiosis
Involucra dos divisiones celulares que resultan en clulas hijas (gametos) con la mitad del nmero de cromosomas que las clulas parentales. En la meiosis ocurre intercambio de material gentico en cromosomas homlogos a travs de la recombinacin que ocurre al final de la profase I. La recombinacin resulta en nuevas combinaciones de alelos de distintos genes en un cromosoma.

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Cromosomas homlogos
Una clula diploide tiene dos copias de cada cromosoma. Un juego proviene del padre y el otro de la madre.

Gen a

Gen a

P M1 P1

Los cromosomas M1 yP1 son homlogos pues contienen los mismos genes en el mismo orden. Lo mismo M2 y P2 etc.

Duplicacin de cromosomas

Recombinacin de cromosomas homlogos

Alineamiento

Separacin de cromosomas

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Durante la meiosis ocurre entrecruzamiento y recombinacin de los cromosomas homlogos

M1

P1

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Duplicacin de cromosomas

Recombinacin de cromosomas homlogos

Alineamiento

Separacin de cromosomas

A diferencia de la mitosis, durante la metafase I de la meiosis, se alinean los pares de los cromosomas homlogos. Durante la anafase estos pares se separan y se distribuyen al azar. Pares M y P quedan distribuidos en las dos clulas despus de la divisin.

Meiosis II

En la meiosis II ocurre una divisin longitudinal de las cromtidas y una subsecuente divisin celular. Cada clula hija contiene un cromosoma del par cromosomal y por lo tanto son clulas haploides. Debido a la recombinacin, los cromosomas de las clulas hijas no son idnticos a los de la clula original.

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Comparacin entre Meiosis y Mitosis

Los cromosomas homlogos se asocian. Los microtbulos solamente se pueden unir a un lado de cada centrmero Los cromosomas homlogos no se emparejan. se asocian. Los microtbulos se unen a cada lado del centrmero.

Los microtbulos separan a los cromosomas homlogos pero las cromtidas hermanas se mantienen unidas.

Los microtbulos separan a las cromtidas hermanas.

En resumen, la meiosis tiene tres funciones: 1. Reducir el nmero de cromosomas de diploide (2n) a haploide (n). 2. Asegurarse de que las clulas haploides estn compuestas de un set completo de cromosomas. 3. Promover diversidad gentica. Debido a todas las posibles combinaciones en la distribucin de los cromosomas, se pueden generar miles a millones de combinaciones diferentes. Esto depende del nmero de cromosomas. Para humanos: 222 = 4,194,304 gametos distintos.

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Meiosis: Generacin de diversidad

Gameto paterno

Gameto materno

Pares homlogos

Gametos potenciales

En mamferos, los gametos son producidos en las gnadas por eventos meiticos que difieren en machos y hembras, tanto en tiempo, como en resultado.

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Ovognesis. Meiosis I
Oocito secundario

Cuerpo polar

El oocito primario sufre una divisin meitica, pero el citoplasma se divide en forma asimtrica pues se forman dos clulas de tamao distinto: Una clula grande oocito secundario. Una clula pequea llamada cuerpo polar.

Ovognesis. Meiosis II

Oocito secundario

Cuando el oocito se divide se forma el oocito maduro y otro cuerpo polar. El cuerpo polar tambin se divide generando otros dos cuerpos polares. Sin embargo, stos ya no se desarrollan y mueren.

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Espermatognesis. Meiosis I

El espermatocito primario que es diploide da origen a dos espermatocitos secundarios que tienen un set de cromosomas haploides duplicados.

Espermatognesis. Meiosis II

Cada espermatocito se divide para forma espermtidos haploides. Estos maduran para formar espermatozoides.

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Meiosis Testculos de Ratn

Fertilizacin: fusin de gametos para formar un cigoto

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Gemelos monocigotos (idnticos)

Un ovocito fertilizado que se divide en dos clulas idnticas durante las etapas tempranas del desarrollo embrionario, dando lugar a dos fetos. Gemelos dicigotos (no idnticos): Dos ovocitos liberados simultneamente y fertilizados al mismo tiempo por distintos espermatozoides.

Formacin de gametos en vegetales.

Las flores son los rganos reproductivos en las plantas. Una vez que se han formado, el siguiente paso en el ciclo reproductivo es la gametognesis. Megagametognesis: Formacin del saco embrionario. Microgametognesis: Formacin del polen.

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La mayora de las plantas tienen flores compuestas que contienen a los rganos masculinos y femeninos.
ptalos

anteras filamentos

estigma estilo ovario

Hay especies que tienen las flores masc. y fem. separadas en el mismo individuo, por ejemplo maz. En otras especies, las flores masc. y fem. se encuentran en individuos distintos (ej. Esprrago, espinaca).

Desarrollo de gametos y fecundacin

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