Tema 6.

- Inmovilizacin de enzimas

Inmovilizacin de enzimas. Ventajas e inconvenientes

Qu es la inmovilizacin de enzimas?
proceso en el que se confina o localiza a la enzima en una regin definida del espacio, para dar lugar a formas insolubles que retienen su actividad cataltica y que pueden ser reutilizadas repetidamente.

A. Ventajas
1. 2. 3. 4. 5. Aumento de la estabilidad de la enzima (proteccin frente a cambios de pH, T, fuerza inica, contaminacin y accin de proteasas) Posibilidad de reutilizacin del derivado (disminucin costes del proceso). Posibilidad de uso en procesos en continuo Facilidad de automatizacin Posibilidad de disear un reactor enzimtico de fcil manejo y control, adaptado a la aplicacin de la enzima inmovilizada (cargas elevadas de enzima -aumento en la velocidad de reaccin-, pequeo tamao, mayor pureza y estabilidad del producto, condiciones de reaccin ms suaves, menor tiempo de residencia, control de las concentraciones de intermediarios)

B. Inconvenientes
1. 2. 3. 4. 5. 6. Alteracin conformacional de la enzima respecto a su estado nativo Heterogeneidad del sistema enzima-soporte: existencia distintas fracciones de protenas inmovilizadas con un diferente nmero de uniones al soporte. Prdida de actividad de la enzima durante la inmovilizacin (desnaturalizacin por calor, cambios de pH, radicales libres..) Ms caro que la enzima nativa. Mayor volumen ocupado por enzima inmovilizada que cantidades equivalentes en estado nativo Cambios en la cintica enzimtica (alteraciones de la difusin del sustrato que afectan a la velocidad total de la reaccin -tamao, concentracin, impurezas, agitacin, etc-)

Inmovilizacin de enzimas. Consideraciones

1. Consideraciones para inmovilizar una enzima
1. 2. 3. 4. 5. 6. Modo de empleo (estanco o continuo) Disponibilidad y costo de la enzima Necesidad de purificacin del producto Costo del soporte Economa del proceso de produccin Naturaleza del sustrato

2. Factores a considerar con enzimas inmovilizadas

1. 2. 3. 4. Inactivacin trmica por la larga vida media de las enzimas inmovilizadas Vulnerabilidad a niveles bajos de inhibidores irreversibles Contaminacin con organismos que ataquen al catalizador, al sustrato o al reactor MAYOR CONTROL DE LAS ENZIMAS INMOVILIZADAS

3. Otros factores a considerar

1. 2. 3. El proceso de inmovilizacin debe mantener intacta la estructura de la protena y no bloquear el sitio activo La unin al soporte debe ser muy estrecha La enzima se debe ligar al soporte por sus grupos perifricos

Inmovilizacin de enzimas. Mtodos

1. Caractersticas
Simple y reproducible Suave, barato, seguro, verstil Fcil de usar a gran escala til en un amplio rango de condiciones Aplicable a gran variedad de enzimas Fcil control de la cantidad de enzima inmovilizada Estabilidad de unin enzima-soporte

2. Factores a considerar en su eleccin

Naturaleza qumica y cintica de la reaccin Costos Estabilidad fsica y qumica de los reactantes y enzimas Efecto de la inmovilizacin sobre la actividad y estabilidad de la enzima Rendimiento y pureza del producto

Inmovilizacin de enzimas. Mtodos

MTODOS DE INMOVILIZACIN DE ENZIMAS

MTODOS PARA ENZIMAS SOLUBLES

MTODOS PARA ENZIMAS INSOLUBLES

Sin transformacin qumica

Con transformacin qumica

RETENCIN FSICA

UNIN QUMICA

ATRAPAMIENTO

INCLUSIN EN MEMBRANAS UNIN A SOPORTE puro

RETICULADO

gel

fibras

encapsulacin

reactores

Co-reticulado

adsorcin

Unin covalente

Enlace inico

quelacin