Cromatografa de Gases

La cromatografa de gases es la tcnica a elegir para la separacin de compuestos orgnicos e inorgnicos trmicamente estables y voltiles. Es la separacin fsica de dos o mas compuestos, basada en la diferente distribucin de dos fases, una de las cuales es la estacionaria y otra la mvil. A diferencia de los otros tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona con las molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna. El reparto o particin de los componentes de la muestra con la fase estacionaria, se basa en sus diferentes solubilidades en esta fase a una temperatura dada. Por lo tanto los componentes de la mezcla (solutos o analitos) se separan entre si en base a sus presiones de vapor relativas y de acuerdo a sus afinidades con la fase estacionaria. Este tipo de procesos cromatograficos se denominan elusin. Tipos de cromatografa de gases Existen 2 tipos de cromatografa de gases: La cromatografa gas-slidos (GSC) La cromatografa gas-liquido (GLC), siendo esta la que se utiliza mas ampliamente, y que puede llamar simplemente cromatografa de gases (GC).

La cromatografa de Gas-Liquido: Se lleva a cabo por medio del reparto de los componentes de una mezcla qumica. Se basa en una separacin por particin de un soluto sobre una fase gaseosa mvil y una fase liquida estacionaria sostenida sobre un soporte solido. Se puede dividir en cromatografa de gases en escala preparatoria y en cromatografa de gases en determinacin de propiedades fsicas. La cromatografa Gas-Solido: Se basa en la absorcin de sustancias gaseosas sobre las superficies solidas. Aqu la fase estacionaria es un slido activo capaz de absorber los distintos componentes de la muestra. Como por ejemplo el carbn vegetal, gel de slice y tamices moleculares.

Componentes de un cromatografa de gases 1. El gas portador: Cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los componentes de la muestra. Crear una matriz adecuada para el detector

Un gas portador debe reunir ciertas caractersticas:

Debe ser inerte para evitar interacciones tanto con la muestra como con la fase estacionaria para prevenir su reaccin con el analito o la columna. Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa. Fcilmente disponible y puro. Econmico Adecuado al detector a utilizar. Velocidad del gas portador. Cantidad de muestra inyectada. Material del cual esta elaborada la columna. Enrollado de la columna.

2. Sistema de inyeccin de muestras: La inyeccin de muestra es un apartado critico, que se debe inyectar una cantidad adecuada y debe introducirse de tal forma qye sea rpida para evitar el ensanchamiento de las bandas de salida; este efecto se da con cantidades elevadas de analito. El mtodo mas utilizado emplea una micro jeringa para introducir el analito en una cmara de vaporizacin instantnea, esta cmara esta a 50C por encima del punto de ebullicin del componente menos voltil, y esta sellada por una junta de goma de silicona septa o septum. El material de la aguja es de acero inoxidable, al igual que el embolo, mientras que el cuerpo de la columna es de vidrio borosilicatado. Un criterio til en la seleccin de jeringas es utilizar cuyo volumen total sea menos dos veces mayor que el volumen a ser inyectado y deben ser limpiadas y enjuagadas con solventes apropiados. Otra forma de inyectar la muestra para columnas capilares es la tcnica de Splitlness injection, la cual es til para muestras difusas. Finalmente otra tcnica es la de On-column injection en la cual la muestra es introducida directamente por medio de una jeringa especial. El sistema de inyeccin mas frecuente es el cual involucra la aplicacin de un divisor de flujo o la eliminacin del mismo El modo Splitless, se empleo mas para determinar pequeas cantidades o trazas. En caso de muestras solidas, simplemente se introducen en forma de disolucin, ya que en la cmara de vaporizacin instantnea el disolvente se pierde en la corriente de purga y no interfiere en la elucin.

La decisin ms importante en la fijacin de los parmetros para un anlisis por cromatografa gaseosa, es la seleccin de la mejor columna o fase estacionaria. Otra caracterstica importante es la seleccin de la temperatura de la columna, pero es muy crtico debido a la amplia posibilidad de programaciones que se puedan seguir. Para seleccionar una fase estacionaria se deben seguir algunos de los siguientes criterios: Informe previo acerca de la separacin requerida. Selectividad Polaridad Limites de temperatura Actividad de cada compuesto Tiempo de anlisis Capacidad Sangrado Detectores selectivos Versatilidad

3. La columna: Es el lugar donde ocurre la separacin. Se dice que el corazn de un cromatografo. Los materiales con los cuales generalmente se pueden elaborar las columnas son: cobre, aluminio, acero inoxidable, vidrio o tefln. El relleno puede ser solido, o un liquido recubriendo un slido.

Podemos clasificar las columnas segn el propsito del proceso cromatografico Las empaquetadas o de relleno: Tienen generalmente de 1 a 5 metros de longitud de 3.175-1.270 milimetros de dimetro Se clasifican en: Analitica Preparativas

 Las tubulares abiertas o capilares: Estas son mas comunes en la actualidad debido a su mayor rapidez y eficiencia. Estn construidas en acero inoxidables, vidrio, slice fundida o tefln. Debido a su longitud y a la necesidad de ser introducidas en un horno, las columnas suelen enrollarse en una forma helicoidal con dimetros de 10 a 30cm, dependiendo del tamao del horno. Tienen generalmente de 15 a 30 metros de longitud. Se clasifican en: WCOT (Wall Coated Open Tubular) Pred recubierta abierto tubular SCOT (Support Coated Open Tubular) Soporte recubierto abierto tubular Columnas recubiertas consisten un tubo capilar, cuyas paredes estn recubiertas con fase estacionaria liquida. En apoyo a las columnas revestidas, la pared interna del capilar esta revestida con una capa delgada de material de apoyo como la tierra de diatomeas, en la fase estacionaria que se ha absorbido. Las SCOT son generalmente menos eficientes que las columnas WCOT. Ambos tipos de columnas son mas eficientes que las columnas de relleno. Los factores la eficiencia de una columna: Longitud de la columna Dimetro de la columna Naturaleza de las fases Cantidad de la fase estacionaria Temperatura de la columna

4. El detector: Es un dispositivo para revelar la presencia de las sustancias eluidas a la salida de la columna cromatografica. Podemos expresar que el detector son los ojos de un cromatografo. Es un dispositivo capaz de convertir una propiedad fsica, no medible directamente, en una seal elaborable y ofrecernos informacin sobre la naturaleza y magnitud de la propiedad fsica. En cromatografa un detector funciona comparando una propiedad fsica entre el gas portador puro y el mismo gas portador llevando cada uno de los componentes que previamente se han separado en la columna, esta accin se traduce en una seal tipo elctrica, que posteriormente se amplificara mediante un registrador grafico o integrador permitiendo indicar el momento que salen de la columna los componentes.

Clasificacin de los detectores Detectores segn su grado de selectividad: Universales: Responde a la mayora de los solutos que pasan por l. Especficos o Selectivos: Exhibe una gran respuesta a un grupo particular de sustancias como un mnimo de respuestas a otras. Detectores Destructivos y No Destructivos: Esta clasificacin, obviamente, es en referencia a si la muestra es destruida o no. Detectores segn su modo de respuesta: Dependientes del flujo msico: Producen una seal que es proporcional a la cantidad de soluto que pasa a travs de el en la unidad de tiempo, pero es independiente del volumen de gas portador requerido para la elusin. Dependientes de la concentracin: Da una seal proporcional a la cantidad de soluto por la unidad de volumen de gas portador que pasa a travs de l. Detectores segn el proceso de detencin: Ionizacin ptica Espectroscpico Electroqumico Caractersticas de los detectores: Sensibilidad: Medida de la efectividad de un detector para convertir la muestra en una seal elctrica medible. Linealidad: Rango de masa o concentracin de muestra sobre el cual el detector mantiene una sensibilidad constante sin una desviacin arbitraria. El significado practico de la linealidad del detector es el que indica al analista la concentracin para la cual el detector es confiable. Hay dos limites en la curva de linealidad: El limite de concentracin inferior, que es dado por el limite de decteccion El limite superior, definido por un % de desviacin arbitrario de la curva de linealidad, normalmente se toma un 5% de desviacin.

 Rango dinmico lineal: Rango sobre el cual la sensibilidad del detector es constante. Ruido: Es cuantificar por el promedio de la amplitud pico-pico de la seal. El significado de conocer el nivel de ruido de un detector es un factor determinante en la determinacin de la cantidad mnima detectable y el lmite inferior del rango lineal. Limite de deteccin: Esta definido como la mnima cantidad de sustancias que pueden producir una seal que sea el doble de nivel de ruido. Corriente de fondo: Seal constante de salida generada por el proceso en el que un detector opera sin que alguna sustancia pase a travs de l. Esta seal es muy importante ya que permite diagnosticar el buen o mal funcionamiento del detector.

Detectores ms usados Detector de conductividad trmica: mide la conductividad trmica del gas portador, ocasionada por la presencia de sustancias eluidas.

Detectores de ionizacin a la llama: Basado en la medida de las variaciones de la corriente de ionizacin en una llama oxigeno, hidrogeno debido a la presencia de sustancias eluidas. Detectores de captura electrnica: Basada en la electronegatividad de las sustancias eluidas y su habilidad para formar iones negativos por captura de electrones. Detector de fotometra a la llama: Basada en la medida de la intensidad de la emisin molecular de la fluorescencia de heteroatomos en la molcula orgnica. Detectores de fotoionizacin (PID): El gas eluido al final de la columna se somete a una radiacin ultravioleta con energias entre 8.3 y 11.7 eV, mediante la aplicacin de un potencial a la celda de ionizacin se genera una corriente de iones, la cual es amplificada y registrada.

 Detector en llama alcalina Detector de espectrometra de masas.

Tipos de anlisis en cromatografa de gases Anlisis de pesticidas organoclorados y organosfosforados: Extraccin con solvente adecuado Concentracin con calor y nitrgeno Limpieza Inyectar en el cromatografo

Anlisis de metales pesados en agua: Acidificar la muestra Concentrar la muestra Inyectar en el cromatografo Anlisis de tejido: Extraer Limpiar Purificar Inyectar en el cromatografo

Anlisis cuantitativo: Existen varios mtodos para cuantificar un pico cromatografico: Normalizacin de rea Normalizacin de rea de factores de respuesta Estandarizacin externa Estandarizacin interna.

Anlisis cualitativo: Los procedimientos para identificacin de los picos cromatograficos podemos dividirlos en dos categoras: Identificacin cromatografica o Por datos de retencin o Por serie homologas (ndices de retencin de Kovacs)

 Identificacin No cromatografica o Anlisis clsicos o Identificacin por: Adicion de estndar Formacin de derivados Sustraccin de un componente o Identificacin con tcnicas auxiliares: UV, IR, MS, RMN 5. Soporte: La funcin bsico del soporte es la de mantener, sostener y retener la fase estacionaria. Idealmente debera ser un material inerte que mantiene la fase estacionaria sobre su superficie como una pelcula delgada. La mayora de los soportes cromatograficos estn hechos de DIATOMITA. Qumicamente es casi todo slice, con algunas impurezas, tambin se conoce como TIERRAS DIATOMACEAS. Domina el campo de los soportes debido a su estructura, superficie y disponibilidad. Hay que tomar en cuenta dos cosas a la hora de escoger un soporte: Estructura o Caractersticas fsicas: Tamao de partcula Dimetro del poro Densidad rea superficial La qumica de superficie o caractersticas superficiales Grupos silanoles activos Iones metalicos Adems de las caractersticas anterioes, la seleccin del soporte va a depender tambin de: La naturaleza de la muestra La naturaleza de la fase liquida El uso que se le va a dar a la columna: General, Especifico La eliminacin o reduccin de los sitios activos de adsorcin de un soporte cromatografico puede efectuarse de varias maneras: Remocin por lavado con acido (NAW o AW) Eliminacin o remocin por reaccin del grupo Silanol

 Saturacin de la superficie con una fase liquida Impregnado o recubriendo con material solido inerte.

Procesamiento de datos El procesamiento de datos en cromatografa incluye 3 objetivos: Colectar y analizar los datos de modo de obtener informacin cualitativa y cuantitativa y generar los reportes correspondientes. Colectar y procesar la seal proveniente del detector de modo de producir un cromatograma y la informacin correspondiente como rea de los picos, tiempo de retencin y ancho de los picos. Optimizar los parmetros cromatografico. Los datos obtenidos pueden ser procesados mediante un sistema que incluya un registrador e integrador sin ninguna o muy poca capacidad del procesamiento o a travs de sistemas computarizados que incluyen un procesamiento posterior mas sofisticado y completo mediante el empleo de un software apropiado.

Problemas en el anlisis y soluciones Personales: Es significativo desde el momento de la toma de muestra. Trabajar con el mayor cuidado al tomar la muestra y prepararla Temperatura: Que no sobrepase la indicada en el proceso de evaporacin, para que no reporte datos errneos. Montaje de tcnicas El montaje de una tcnica de cromatografa de gases es netamente empirica, el perfil de los analitos que se quiera determinar, la eleccin de la fase mvil, los tiempos de retencin estarn dados exclusivamente por las condiciones particulares de la columna frente al equipo. Las rampas de temperatura a seleccionar bien pueden ser isotrmicas o escalonadas. La eleccin del gas depender del tipo de detector, la eleccin de la columna depender de la polaridad de los compuestos a separar, el detector depender del tipo de compuestos a detectar. La eleccin de los estndares es fundamental en el desarrollo de la tcnica. La estabilizacin de la lnea base de la fase mvil en la fase estacionaria a travs del tiempo es fundamental para establecer un mtodo. Una lnea de base poco estable o irregular

que cambia la intensidad frente al detector a medida que fluyen debe ser afinada y estabilizada antes de introducir los analitos. El layout de los parmetros del rango de temperatura del horno, la adecuada eleccin de la columna y su fase estacionaria incluye tipo, lago y dimetro; la eleccin adecuada del tipo de detector, las temperaturas del detector e inyector, los volmenes de analito, debern ser establecidas de modo tal que se obtenga la mayor eficacia en separar los analitos, y con la mejor resolucin posible. La pureza de la muestra depender de la preparacin previa de la misma. La CG es una metodologa altamente efectiva y su performance permite una amplia gama de posibilidades para la qumica analtica en compuestos orgnicos. Una derivacin de esta tcnica es la cromatografa HPLC que funciona en base a la afinidad del analito por la fase mvil liquida en vez de gaseosa.

La sensibilidad de la tcnica CG puede incluso detectar microgramos del analito si est bien montada. La cuantificacin se basa en clculos del rea bajo la curva que es proporcional a la concentracin del analito. Comnmente se usa en estndar interno de trabajo. Ejemplo Determinacin por CG de los productos de degradacin trmica de las tabletas con 10mg de Policosanol Resumen: Se desarrollo y valido un mtodo analtico para la determinacin de los palmitatos y estearatos de hexacosanilo, octacosanilo y triacontanilo, productos de degradacin trmica de las tabletas de policosanol 10mg. El mtodo se basa en la extraccin de dichos porductos con n-hexano y su posterior anlisis por CG en columna de relleno, con el empleo de estearato de docosanilo como patrn interno, previo clculo de los factores masicos de respuesta con patrones sintetizados para este fin. La evaluacin del mtodo mostro que este responde linealmente a un intervalo de concentraciones correspondientes a 2.5-30% de degradacin con recobrados 99.77-100.90% que no se diferencuaron significativamente del 100% segn la prueba t d student para p=0.05. Adems, presento una buena precisin CVs<4% en condiciones de respetabilidad y de precisin intermedia. Los lmites de deteccin y cuantificacin: 0.003 y 0.011mg respetivamente, demostraron que el mtodo permite la determinacin de estos productos en tabletas con menos de un 2% de degradacin.

Introduccin: El policosanol es un producto hipocolesterolemizante con efecto antiplaquetario concomitante, cuya eficacia, seguridad y tolerabilidad han sido probadas en pacientes con hipercolesterolemil del tipo II1, asi como en pacientes con hipercolesterolemia secundaria asociada a la Diabetes mellitus de tipo 2.2 y en pacientes con mltiples factores de riesgo coronario 3. Este producto, comercializado en forma de tabletas revestidas, est compuesto por una mezcla de alcoholes alifticos primarios, extrada y purificada a partir de la especie Saccharum officinarum L., entre los cuales el componente principales el 1-octacosanol, seguido por el 1-triaconsanol, el 1-hexacosanol y otros en menor proporcin. Debido a la interaccin a elevada temperatura de estos alcoholes con el estearato y el palmitato de magnesio, sustancias utilizadas entre formacin de los palmitatos y estearatos de los alcoholes que conforman este ingrediente activo en las tabletas sometidas a estudios de estabilidad acelerada 5. As la f de los esteres del octacosanol como productos de degradacin trmica en la formulacin de policosanol 5mg, conllevo al desarrollo y validacin de una metodologa analtica por CG que sirviera de apoyo a los estudios de estabilidad la cual constituyo la primera de su tipo para la determinacin precisa y exacta de esta clase de compuestos, ya que las desarrolladas y publicadas anteriormente 7.8 tienen solo un carcter cualitativo o carecen de informacin sobre los aspectos cuantitativos del anlisis. Dicha metodologa permiti complementar para dichas tabletas las exigencias actuales de la industria farmacutica en cuanto al desarrollo de mtodos para la determinacin de los productos de degradacin en formulaciones de nuevas sustancias activas. Sin embargo, al ser desarrollada anteriormente la formulacin de policosanol 10mg y realizarle los correspondientes estudios de estabilidad acelerada 10, se observo que adems de los esteres del alcohol mayoritario, aparecen otros 4 productos de degradacin: los palmitatos y estearatos de triaconsanilo y hexacosanilo. Este hecho requiri la modificacin del mtodo previamente desarrollado de forma que pudiera ser utilizado en la determinacin del total de productos de degradacin que aparecen en esta nueva forma terminada. Materiales y Mtodos: Sntesis de los esteres patrones En un recipiente PYREX abierto se mezclaron igual nmero de moles de acido y de alcohol correspondiente a cada uno de loes esteres de inters, con 0.005eq/g de acido ptoluensulfonico se colocaron en un equipo de microondas modelo MA 1197 y se irradio a 250 W durante 5 min, los esteres formados se purificaron por recristalizacion en diclorometano. De esta forma se obtuvieron los compuestos que se citan a continuacin. Palmitatos de: hexacosanilo P26, octacosanilo E28, triacontanilo E30 y docosanilo E22, todos con ms de un 96% de pureza determinada por CG Reactivos y disoluciones: N-metil-N-trimetilsililtrifluoroacetamida (MSTFA, FLUKA, SUIZA)

Disolucin de patrn primario.DPI: Se pesaron 50mg de E22 y se llevaron a un volumtrico de 100ml, se diluyo y llevo al volumen indicado con n-hexano. Disolucin patrn de trabajo (DPT): Se pesaron 13.1mg de P26, 119.7MG DE p28 32.1mg de P30 9.0mg de E26 76.7mg de E28 y 16.7mg de E30, fueron llevados a un volumtrico de 100ml se diluyo y llevo al volumen indicado con n-hexano. Disolucin matriz de referencia (DMR): En un tubo de ensayo se aadieron 2ml de DPT, se llevo a sequedad a 60C en corriente de aire. Se adicionaron 3ml de DPI y se calent a 60C durante 1 min. Equipos Cromatgrafo de gases modelo GC 14A condetector de ionizacin por llama, acoplado a un sistema de cmputo modelo C-R4A (Shimadzu, Japn), equipado con columna cromatogrficade vidrio silanizado de 3 m x 4 mm de dimetro interno, rellena con OV101 al 3% sobre Cromosorb W AW-DMCS (80-100 mallas). La temperatura del horno, inyector y detector fue 320 C. Los flujos de gas portador (Ar), Hidrgeno y aire fueron 50, 40 y 400 mL/min, respectivamente. El volumen de inyeccin fue 3 L. Cromatgrafo de gases GC 8000 acoplado a espectrmeto de masas MD800 con sistema de cmputo (Fisons Instruments, Inglaterra). Se emple una columna capilar SPB-5 de 25 m x 0,32 mm (Supelco, USA). El horno se program de 100 a 200 C a 40 C/min, de 200 a 320 C a 10 C min1 y se mantuvo isotrmico a esta temperatura por 90 min. El flujo del gas portador (Helio) fue 1 ml.min1. Las temperaturas del inyector, la fuente y la interface fueron 320, 250 y 200 C, respectivamente. El tiempo de barrido fue 0,9 s, la energa de ionizacin fue 70 eV y el volumen de inyeccin fue 1 L. Preparacin de la muestra de ensayo Un total de 60 tabletas de tres lotes comerciales fueron sometidas a degradacin acelerada por termlisis, a 55 C durante 9 meses, en una estufa con temperatura controlada. Para la identificacin de los productos de degradacin por CG acoplada a Espectrometra de Masas (CGEM) y su determinacin cuantitativa por CG se tomaron aleatoriamente 20 tabletas y se les determin el peso promedio. Se trituraron en el mortero hasta obtener un polvo fino y homogneo. En un tubo de ensayos se pes, con una exactitud de 0,1mg, alrededor del peso promedio de las tabletas y se aadieron 3mL de la DPI. Se calent a 60 C con agitacin ocasional durante 15min, se filtr en caliente y una alcuota de 500 L se llev a un vial de 1,8 mL. Se adicionaron 50 L de MSTFA y se calent durante 15min a 60 C para derivatizar los alcoholes del policosanol presentes en el medio.

Mtodo de anlisis

La masa correspondiente a cada seal cromatogrfica se obtuvo por el mtodo del patrn interno segn la frmula que se presenta a continuacin. La masa total de productos de degradacin se calcul mediante la suma de las masas individuales encontradas. Mi = (Ai/Api) (Api*/ Ai*) Mi* (Mp / Mm) Donde: Mi = masa del compuesto de inters (mg), Ai = rea del compuesto de inters al analizar la muestra problema, Api = rea del patrn interno al analizar la muestra problema, Api* = rea del patrn interno al analizar la DMR , Ai* = rea del compuesto de inters, total de steres, al analizar la DMR, Mi * = masa del compuesto de inters, total de steres, en la DMR (mg), Mp = masa promedio de las tabletas (mg) y Mm = masa de la porcin de tabletas analizada (mg).
RESULTADOS Y DISCUSIN

En estudios de estabilidad acelerada realizados a la formulacin de policosanol 10 mg (tabletas revestidas) 10, se observ la aparicin de 4 picos cromatogrficos a tiempos de retencin superiores a los de los alcoholes que conforman el principio activo (Fig. 1). El anlisis por CG y por CG-EM de estas muestras permiti la identificacin de las impurezas mayoritarias: palmitatos de hexacosanilo y octacosanilo (picos 1 y 2), y estearatos de octacosanilo y triacontanilo (picos 3 y 4); as como la presencia, en menor proporcin, del estearato de hexacosanilo y del palmitato de triacontanilo, cuyas seales se superponen inevitablemente con las de los compuestos identificados en los picos 2 y 3, respectivamente, debido a la igualdad de masas moleculares y grupos funcionales. En los cromatogramas b y c de la figura 1, obtenidos con la columna de relleno, pueden ser apreciados estos solapamientos, los cuales ocurren de igual forma por CG capilar, como pudimos comprobar en los anlisis realizados por CG-EM, fenmeno que oblig a cuantificar unidos estos dos pares de seales. En esta figura tambin se observa que en las condiciones cromatogrficas empleadas puede ser utilizado el estearato de docosanilo como patrn interno, al no interferir con el policosanol ni con los steres a determinar. Para realizar los estudios de linealidad y exactitud, se hizo necesario preparar una disolucin de referencia con los patrones sintetizados (DPT), en una proporcin similar a la que stos presentan en la tableta degradada: 4,91% de palmitato de hexacosanilo; 44,77% de palmitato de octacosanilo; 3,36% de estearato de hexacosanilo; 12,02 % de palmitato de triacontanilo; 28,69% de estearato de octacosanilo y 6,25% de estearato de triacontanilo. Para conocer esta proporcin, y debido a la coelucin de algunos de los steres de inters, se combin el anlisis por CG de muestras de tabletas degradadas con el de muestras sintetizadas por reaccin de los alcoholes patrones individuales con la mezcla de palmitato y estearato de magnesio que forma el excipiente.
Validacin del Mtodo

Una vez analizada la DMR se pas al anlisis de las tabletas degradadas por termlisis. La determinacin del total de steres por tableta en los ensayos de repetibilidad y precisin intermedia (1,80 0,07 mg y 1,81 0,06 mg, respectivamente) fue realizada con CVs de

1,39 y 1,52%, respectivamente. Estos CVs son menores que el lmite permisible (4%) segn Horwitz 12 para el porcentaje en que se presentan estos compuestos en la muestra, por lo que podemos considerar que el mtodo es preciso. La ecuacin de regresin obtenida para el total de steres en el ensayo de linealidad fue: y = (0,468 0,002) x - (0,001 0,005), con lmites de confianza calculados para p = 0,05. El coeficiente de correlacin (r = 0,9999) indic la existencia de una correlacin positiva con una probabilidad superior al 99,9%. Tanto el CVf (1,80%) como el CVb (0,23%) fueron menores que los lmites de aceptacin establecidos (5 y 2% respectivamente), y como se aprecia en la ecuacin, el cero estuvo incluido entre los lmites de confianza del intercepto. Por todo lo anterior se puede considerar que el mtodo es lineal en todo en intervalo de concentraciones estudiado y no presenta sesgo. Los recobrados obtenidos, presentados en la Tabla 1 (99,77 - 100,90%), no fueron significativamente diferentes del 100%, segn la prueba t de Student para p = 0,05, al ser texp < ttab (2,776), por lo que se puede afirmar que el mtodo es exacto. Cantidad Recobrado aadida (mg) promedio (%) texp 0,33 100,91 2,2320 0,67 99,77 0,5650 1,34 100,77 2,2681 2,67 100,33 2,1898 4,01 99,51 0,9019 Tabla 1. Resultados del estudio de exactitud para el total de steres. Para la determinacin de los Lmites de Deteccin y Cuantificacin, 0,003 y 0,011 mg respectivamente, se utiliz el estearato de hexacosanilo por ser uno de los productos de degradacin minoritarios. Tabletas contaminadas con este ster en una cantidad igual al Lmite de Cuantificacin determinado (correspondiente a un 1,67% de degradacin), fueron sometidas a anlisis (n = 6) y se obtuvo un recobrado de 98,74% con un CV = 4,16%. La precisin obtenida satisface el criterio de aceptacin de Horwitz (8%) para esta concentracin de un compuesto en una muestra 12 y segn la t experimental (0,7419), menor que el valor crtico tabulado (2,571), el recobrado obtenido y el 100% no son significativamente diferentes, lo que indica que el mtodo permite la determinacin exacta de estos productos a partir de una degradacin de la tableta menor del 2%. La utilizacin de columnas rellenas en el presente trabajo podra parecer una limitacin del mtodo, ya que stas se encuentran actualmente aventajadas por las columnas capilares; las cuales, aunque mucho ms caras, permiten mayor resolucin cromatogrfica. Sin embargo, la reso103 acta farmacutica bonaerense - vol. 24 n 1 - ao 2005 lucin obtenida en nuestras condiciones satisface la separacin requerida para los picos cromatogrficos de inters tanto como la resolucin obtenida mediante el uso de las columnas capilares, segn se seal al analizar los perfiles cromatogrficos presentados en la figura 1. Por otra parte, el empleo en este mtodo de la misma columna utilizada para el anlisis del ingrediente activo en las tabletas 13 permite una cuantificacin relativamente barata del total de steres, ya que para ello slo se requiere el cambio de las condiciones cromatogrficas. Los resultados de la validacin realizada responden a los lineamientos actuales para la introduccin de un mtodo analtico en el Control de la Calidad 14, por lo que queda sustentada la posibilidad de aplicacin del mtodo desarrollado para los objetivos propuestos.

CONCLUSIONES

La metodologa analtica desarrollada y validada en funcin de la determinacin de los productos de degradacin trmica de las tabletas revestidas que contienen 10 mg de policosanol demostr su aplicabilidad en un amplio intervalo de concentraciones, por lo que puede ser utilizada en el control de calidad y en los estudios de estabilidad de dichas tabletas. Ventaja y Desventajas Ventajas Eficiencia permite una alta resolucin Requiere muestras pequeas Alta sensibilidad, detecta ppm y a menudo ppb Cuantitativa en alta velocidad de anlisis Buena exactitud Fcil de usar, bien conocida.

Desventajas La muestra debe ser voltil No aplicable a muestras termolbiles Muestras sucias requieren de una limpieza previa Se debe utilizar otro sistema de deteccin para confirmacin e identificacin Es necesario algo de entrenamiento y experiencia.