Biorreatores e Processos Fermentativos

Formas de conduo dos Bioprocessos

Aula 7 Profa. Dra Ilana L. B. C. Camargo Cincias Fsicas e Biomoleculares IFSC - USP

A escolha dos tipos de biorreator e bioprocesso tambm dependem da classificao do produto microbiano

Classificao do produto microbiano 1) Metablitos primrios (associados ao crescimento) Consistem nos compostos produzidos simultaneamente sntese de clulas microbianas na fase de crescimento. Neste caso, a formao do produto diretamente proporcional formao de biomassa. Ex.: Aminocidos, nucleotdeos, produtos finais de

fermentao (etanol e cidos orgnicos), enzimas.

A escolha dos tipos de biorreator e bioprocesso tambm dependem da classificao do produto microbiano
Classificao do produto microbiano

2) Metablitos secundrios
(no-associados ao crescimento) A formao do produto no est diretamente relacionada razo de crescimento de clulas. Usualmente acumulam durante o perodo de limitao de nutrientes ou de produtos residuais que segue aps fase ativa de crescimento. Estes compostos no tem relao direta com a sntese de materiais celulares e com o

crescimento normal. Exemplo: maioria de antibiticos e

micotoxinas.

A escolha dos tipos de biorreator e bioprocesso tambm dependem da classificao do produto microbiano

Bioprocessos
Formas de conduo de um processo fermentativo: Infinitas!!! -- Enorme flexibilidade de operao Formas mais bsicas: 1. 2. 3. Descontnuo Com um inculo por tanque Com recirculao de clulas Processo por meio de cortes

- Semicontnuo 1. Sem recirculao de clulas 2. Com recirculao de clulas

Descontnuo alimentado

- Contnuo 1. Executado em um reator 2. Executado em vrios reatores

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Formas de conduo de um processo fermentativo:

Fermentao descontnua Ou Fermentao em batelada

Processo

fermentativo

caracterizado

pela

inoculao

incubao de microrganismos, de tal forma, a permitir que a fermentao ocorra sob condies timas. Neste tipo de

produo, nada adicionado, exceto oxignio (processo

aerbio), cido ou base (controle de pH) ou antiespumante.

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Formas de conduo de um processo fermentativo:

Fermentao descontnua Ou Fermentao em batelada

Um inculo por tanque; Processo mais seguro quando se necessita manter as condies de assepsia
(esterilizao ao final de cada batelada);

Fornece conhecimento bsico da cintica do processo

antes de se buscar reatores alternativos; Base para comparaes de eficincias atingidas.

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Descontnuo simples batelada sem recirculao de clulas Sistema fechado e de volume constante. Na prtica dificilmente ser aplicado industrialmente Sua baixa eficincia estimula o surgimento das formas alternativas

Nmero de biorreatores (dornas)

Processo descontnuo com fornecimento ininterrupto

Lquido fermentado

Processo Downstream

D = nmero de dornas ou biorreatores

F = Vazo mdia de lquido fermentado para tratamento final V = Capacidade til de cada dorna

Nmero de dornas / biorreatores

Fim da descarga

td

td = tc
tf
Fim da fermentao

Fim da carga

Incio do preparo do biorreator

tc

td

Tempo

td = tempo necessrio para se descarregar um biorreator tc = tempo necessrio para se limpar e carregar um biorreator tf = tempo necessrio para que haja fermentao em um biorreator

Nmero de dornas / biorreatores

Fim da descarga

td

td

tf
Fim da fermentao

Fim da carga

Td separa o incio de 2 biorreator consecutivos

Incio do preparo do biorreator

td

tf

Dorna/Biorreator D inicia seu funcionamento no instante (D-1) x td que igual ao instante td + tf D = nmero de dornas ou biorreatores (D-1) x td = td + tf F = Vazo mdia de lquido fermentado para tratamento final D = 2 + tf / td e ainda Td = V = Capacidade til de cada biorreator

Tempo

V/F

D = 2 + (F . tf / V)

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Descontnuo simples batelada - Sem recirculao de clulas Vantagens: -Fcil operao; -Menor risco de contaminao;

-Construo e instrumentao simples e barata;

-Processo adequado para curtos perodos de tempo; -Versatilidade de usos Desvantagens: -Esgotamento do meio de cultivo e acmulo de compostos txicos ou degradao do produto; -Menor produtividade volumtrica; -Preparo do reator entre uma batelada e outra reduz tempo til e aumenta custos.

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Descontnuo com recirculao de clulas

H o reaproveitamento como inculo, o microrganismo da batelada anterior (comum em destilarias de lcool): Sedimentao no fermentador (cervejarias) Centrifugao do meio fermentado Tendncia em aumentar o nmero de contaminantes a cada nova batelada Leite de lvedo (suspenso altamente concentrada) com gua e cido sulfrico 2 a 3 h sob agitao: elimina contaminantes e clulas que j se apresentem em fase de degenerao

Bioprocessos
Descontnuo em processo por meio de cortes

out

Biorreator A foi cortado para o Biorreator B

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Descontnuo em processo por meio de cortes

Cortes podem ser feitos

Fase de crescimento mais intensa quando se deseja propagar o inculo

Aps o trmino do processo fermentativo

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Descontnuo em processo por meio de cortes Desvantagens: I. Sucesso de cortes pode acarretar srias quedas no rendimento, principalmente quando se trabalha com meio no esterilizado II. O nmero de cortes sucessivos no pode ser previsto o controle do rendimento poder indicar em que momento deve-se suspender o trabalho por meio de cortes e se iniciar nova fermentao com inculo novo Experincia adquirida ao longo do tempo na indstria leva o pessoal a decidir quais modificaes que devem ser feitas no processo, aumentando, dia a dia, o rendimento e/ou a produtividade do mesmo

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Formas de conduo de um processo fermentativo:

Formas mais bsicas: 1. 2. 3. Descontnuo Com um inculo por tanque Com recirculao de clulas Processo por meio de cortes

- Semicontnuo 1. Sem recirculao de clulas 2. Com recirculao de clulas

Descontnuo alimentado

- Contnuo 1. Executado em um reator 2. Executado em vrios reatores

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Semicontnuo sem recirculao de clulas
Adiciona-se o meio de fermentao e o inculo in 2 1 3

out

Aguarda-se o trmino da fermentao;

Operao 1

Operao 2

Retira-se parte do meio fermentado, mantendo-se, no reator o restante de mosto fermentado; Adiciona-se ao reator um volume de meio de fermentao igual ao volume de meio fermentado retirado anteriormente

Operao 3

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Semicontnuo com recirculao de clulas
Quando o meio retirado do fermentador na operao 2, pode-se centrifug-lo e reaproveitar as clulas adicionando-as junto ao novo meio na operao 3

Meio + clulas

out

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Semicontnuo Vantagens:

a) Possibilidade de operar o biorreator por longos perodos de tempo (meses) sem que seja necessrio preparar um novo inculo; b) Possibilidade condies de, de uma vez conhecidas conseguir as melhores

operao,

produtividade

significativamente maior do que a obtida em processo descontnuo

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Formas de conduo de um processo fermentativo:

Formas mais bsicas: 1. 2. 3. Descontnuo Com um inculo por tanque Com recirculao de clulas Processo por meio de cortes

- Semicontnuo 1. Sem recirculao de clulas 2. Com recirculao de clulas

Descontnuo alimentado

- Contnuo 1. Executado em um reator 2. Executado em vrios reatores

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Descontnuo alimentado Batelada alimentada (fed-batch)

Importncia em escala industrial

Importncia em nvel de pesquisa

Fermentao descontnua continuamente alimentada com nutrientes

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Descontnuo alimentado Batelada alimentada Fed-batch
1 tcnica em processos microbianos, onde um ou mais nutrientes so adicionados ao fermentador durante o cultivo e em que os produtos ai permaneam at o final da fermentao. A alimentao do meio ou substrato pode ocorrer continuamente (1 etapa) ou em pulsos (vrias etapas).

O volume do reator varivel

Muito utilizado para metablitos secundrios (antibiticos)

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Descontnuo alimentado Batelada alimentada (fed-batch) Vantagens: - Controle de oferta de substratos s clulas: 1) Permite alta concentrao de substratos indutores; 2) Impede o efeito de represso catablica (presena de alta concentrao de substrato inibe a sntese de compostos de interesse ocorre muito com enzimas e antibiticos); 3) Mantm baixa concentrao de substratos inibitrios para formao de produto (cido ctrico) Permite obteno de alta concentrao celular

Desvantagens:
Maior risco de contaminao Maior necessidade de controle do processo (adio nutrientes)

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Formas de conduo de um processo fermentativo:

Formas mais bsicas: 1. 2. 3. Descontnuo Com um inculo por tanque Com recirculao de clulas Processo por meio de cortes

- Semicontnuo 1. Sem recirculao de clulas 2. Com recirculao de clulas

Descontnuo alimentado

- Contnuo 1. Executado em um reator 2. Executado em vrios reatores

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Contnuo
O meio adicionado de forma contnua e os produtos de fermentao tambm so continuamente removidos

Objetivo da cultura contnua controlar o crescimento celular em um nvel de produtividade tima

Sistema aberto Volume mantido fixo ou constante O Produto produzido continuamente

Estado de Equilbrio: Concentrao de clulas e nutrientes so constante

Fatores limitantes: taxa de diluio ou fluxo e concentrao de substrato limitante

Bioprocessos
-Contnuo sem recirculao de clulas

Agitao necessria para distribuio rpida dos nutrientes

Bioprocessos
-Contnuo com recirculao de clulas

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Contnuo Mais utilizados em bancada para desenvolvimento de processos, no so muito usados industrialmente So mais usados no tratamento de resduos onde no h preocupao com contaminao!!

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Contnuo Vantagens -Maior produtividade volumtrica - Controle da velocidade de crescimento e manuteno da atividade metablica celular por longos perodos de tempo; -Menor perda de tempo til.

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Contnuo Desvantagens

-maior risco de contaminao (tempo muito longo em sistema aberto)

-Nem sempre possvel produzir compostos no relacionados ao crescimento em culturas contnuas; -Dificuldade de utilizao de substratos complexos de composio varivel; -Surgimento de mutantes ou variantes genticas menos produtivas; - Instabilidade de plasmdeos; -Dificuldade de utilizao de organismos filamentosos (difcil homogeneizao pelo padro crescimento e viscosidade do meio);

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Formas de conduo de um processo fermentativo:

Formas mais bsicas: 1. 2. 3. Descontnuo Com um inculo por tanque Com recirculao de clulas Processo por meio de cortes

- Semicontnuo 1. Sem recirculao de clulas 2. Com recirculao de clulas

Descontnuo alimentado

- Contnuo 1. Executado em um reator 2. Executado em vrios reatores

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Pr-inculo

Biorreao Biorreatores

Processo descontnuo simples

Inculo

Smith J E, Biotechnology, ed. Cambridge, 2004

Bibliografia

Schmidell W, Lima UA, Aquarone E, Borzani W. Biotecnologia Industrial: Engenharia Bioqumica. Volume 2. Ed Edgard Blcher LTDA, So Paulo, 2001. Cap. 8-12