UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLAN INGENIERIA QUIMICA LABORATORIO DE CINETICA QUIMICA Y CATALISIS

Catlisis Enzimtica
Reporte de la experimentacin
ANGEL VIVEROS ALEJANDRA ATENGUEO REYES KARINA HERNANDEZ MARTINEZ JOSE DE JESUS TORRES VIQUEZ ROCIO

Profesora: Alejandra Rodrguez Pozos Gpo. 2608B 2011-II

Introduccin Las enzimas son catalizadores que se utilizan en los sistemas biolgicos. Se encargan de llevar a acabo las reacciones qumicas, las enzimas son protenas las cuales se vena afectadas por la temperatura y el pH, factores que pueden inhibirlas o desintegrarlas. Algunas de las reacciones que llevan a cabo las enzimas son de xido-reductasas, transferasas, hidrolasas, liasas, isomerasas y ligasas. Las enzimas tienen una importancia a nivel industrial muy alta, tal es el caso que son muy utilizadas en las industrias farmacutica, de alimentos y qumica. La reaccin estudiada en esta experimentacin es la hidrlisis de la urea cuya enzima catalizadora es la ureasa. La enzima presente es extrada del frijol de soja. La reaccin es monitoreada por medio de la medicin de la conductividad, en donde la conductividad registrada es la seal de los iones formados durante la reaccin. La reaccin que se lleva a cabo es:

Objetivos
Estudiar el mecanismo de reaccin para reacciones enzimticas. Realizar la extraccin de la enzima ureasa de frijol de soja. Determinar la temperatura de actividad mxima del catalizador. Obtener los parmetros de la ecuacin de rapidez mediante las ecuaciones de Lineweaver-Burk y Eadie-Hofte.

Procedimiento
Preparacin de soluciones: 1. 2. 3. 4. 100ml de urea 0.02M. 25ml de urea de concentracin 0.015M 25ml de urea de concentracin 0.004M 25ml de urea de concentracin 0.007M Parte A: Preparacin de la ureasa

1. Se trituraron en un motero 0.5g de frijol de soja. 2. Se agregaron 10ml de etanol al 30% en volumen. 3. Se centrifugo a 2500 rpm durante 15min.
Parte B: Temperatura de actividad mxima del catalizador

1. En un tobo de ensaye se colocaron 20ml de urea 0.02M. 2. Se fijo el tubo de ensaye a un soporte universal y se coloco en un bao para calentar. 3. Se equilibro el bao a 20C y se agregaron 4 gotas de la ureasa, se mezclo y se puso en marcha el cronometro. 4. Se midi la conductividad cada diez segundos. 5. Se siguieron los pasos 1 al 4, variando la temperatura en 30, 40, 50 y 60C. Parte C: Parmetros de la ecuacin cintica 1. Se realizaron los pasos 1 al 4 de la parte B; con la temperatura ptima que se obtuvo en la parte B, para las concentraciones de urea de 0.015M, 0.007M y 0.004M.

Resultados Anlisis de resultados

Mtodo de Lineweaver- Burke Para determinar la constante de Michaellis y la rapidez mxima por medio del mtodo de Lineweaver-Burke, se grafico el inverso de las concentraciones del sustrato [S], que en este caso fue la urea, contra el inverso de la rapidez obtenida anteriormente por regresin lineal: Tabla de datos para la construccin del grafico para el mtodo Lineweaver-Burke [S] M r0 (S/seg) 1/[S] 1/ro

0.015 1.25174825 66.6666667 0.79888268 0.007 0.71258741 142.857143 1.40333661 0.004 0.42692308 250 2.34234234

Grafico Lineweaver-Burke
2.5 y = 0.0084x + 0.2219 2 1.5 1/ro 1 0.5 0 -50 -0.5 0 50 100 1/[S] 150 200 250 300

Siguiendo la ecuacin de Lineweaver-Burke, de una lnea recta:

Por lo tanto, sustituyendo valores con la ecuacin obtenida experimentalmente: y = 0.0084x + 0.2219

0.037 Mtodo de Eadie Hofstee La constante de Michaellis y la rapidez mxima se determina por medio del mtodo de EadieHofstee, se grafico la rapidez obtenida por el inverso de las concentraciones del sustrato [S], que en este caso fue la urea, contra la rapidez obtenida anteriormente por regresin lineal: Tabla de datos para la construccin del grafico para el mtodo Eadie-Hofstee [S] M /[S] 0.015 0.007 0.004 /[S] (S M/seg) (S/seg)

83.4498833 1.25174825 101.798201 0.71258741 106.730769 0.42692308

Eadie-Hofstee
4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 -10 0 -0.5 10 20 30 40 50 60 70 80

y = -0.0338x + 4.0849 R = 0.979

90 100 110 120 130 140

Siguiendo la ecuacin de Eadie Hofstee, de una lnea recta:

Por lo tanto, sustituyendo valores con la ecuacin obtenida experimentalmente: y = 4.0849-0.0338x

Conclusiones

Bibliografa
Atkins, P. W. (1986). Fisicoqumica. Mxico: Fondo Educativo Interamericano. Vargas, A. O., & Vargas, Y. M. (2005). Clculo de Parmetros de rapidez en Cintica Quimica y Enzimtica. Mxico: Universidad Nacional Autnoma de Mxico.