Agrobiotecnologa

Curso 2011

Biotecnologa en reproduccin animal

Lino Baraao

Departamento de Fisiologa, Biologa Molecular y Celular Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires

Sumario
Introduccin Inseminacin artificial Superovulacin / Transferencia de embriones Produccin de embriones in vitro Micromanipulacin Criopreservacin Aplicacin a diferentes especies animales
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Biotecnologa en reproduccin animal

Conclusiones Referencias

Introduccin

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La capacidad reproductiva de las hembras es limitada

En la mayora de las especies domsticas existen entre 300.000 y 500.000 ovocitos por ovario en el momento del nacimiento. El ciclo estral en bovinos tiene una duracin de 21 das. En bovinos se produciran 17,4 ovulaciones por ao y 261 ovulaciones en 15 aos. La capacidad reproductiva de la hembra bovina es menor en comparacin a su potencial.

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Biotecnologa en reproduccin animal

La biotecnologa de la reproduccin est fundamentalmente orientada a aumentar la capacidad reproductiva de las hembras.

Ovognesis y desarrollo folicular

Ovario
Folculo Primario Folculo Terciario

Epitelio germinal Folculo Terciario

Folculo Secundario Folculo atr sico Cuerpo blanco Cuerpo hemorrgico Cue rpo lteo

Crecimiento Folicular
Independiente de gonadotrofinas
Folculo preantral Folculo en crecimiento Folculo antral temprano

Reclutamiento inciado por FSH

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Control intraovrico

Control gonadotrofinas

Folculo ovulatorio Folculos primordiales

Adaptado de: Senger. Pathways to pregnancy and parturition, 1997.

Folculo antral

Esquema de un folculo antral

Clulas de la granulosa Zona pelcida

Ovocito Ncleo

Clulas de la granulosa

Ovocito

Microscopa electrnica de barrido de un folculo antral

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Control hormonal del ciclo estral

El ciclo estral est regulado por el eje hipotlamo-hipfiso-gonadal

Hipotlamo GnRH Progesterona Hipfisis FSH LH Inhibina Estradiol

CL

Folculo

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Ovario

Ciclo estral y sincronizacin de celos

CL

Sincronizacin de celos - Prostaglandina F2 alfa - Progestgenos

CL

Ovulacin Progesterona CA

Atresia

Estradiol PGF2

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FSH LH

Ciclo estral

Dinmica folicular durante el ciclo estral y control de las ondas foliculares

Dinmica folicular
Dimetro de los folculos (mm)

18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 2

Lutelisis Onda anovulatoria

Folculo ovulatorio

Onda ovulatoria

10 12 14 16 18 20 22

Das del ciclo estral

Sincronizacin de onda folicular y ovulacin: GnRH, estradiol

Dimetro de los folculos (mm)

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18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 2 4

GnRH

PF2

Folculo ovulatorio

10 12 14 16 18 20 22

Das del ciclo estral

Inseminacin artificial

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La inseminacin artificial es la tcnica reproductiva mas difundida

Tcnica de inseminacin artificial en el ganado bovino: - Simple - De bajo costo - Efectiva

Oviducto

102
Vagina Cervix tero Unin tero-tubal
Sitio de fertilizacin

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107

105

103

Gradiente en el nmero de espermatozoides viables despus del servicio en el tracto genital de la hembra

Ventajas y aplicaciones de la inseminacin artificial

Aumento del progreso gentico

- Aumento de la eficiencia de estimacin del valor . gentico (ensayo de progenie) - Uso intensivo de un macho de alto valor gentico - Rpida difusin de la gentica superior

Control de enfermedades venreas Eliminacin de costos asociados al toro Uso de machos incapacitados Transporte y conservacin prolongada de material gentico Utilizacin de semen sexado

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Produccin de semen en el ganado bovino

Regin frica Norteamrica Sudamrica Lejano Oriente Oriente Medio Europa Total

Centros de coleccin de semen 18 69 71 188 17 239 602

Toros 646 9.627 530 9.228 268 19.803 40.102

Dosis producidas frescas 55.204 0 0 8.874.920 16.794 2.694.903 11.641.821

Dosis producidas congeladas 1.484.850 43.270.500 5.917.269 63.938.027 2.559.640 115.176.785 232.347.071

Adaptado de: Vishwanath, Theriogenology, 2003.

Inseminacin artificial con semen sexado

Especie Humana Porcina Equina Bovina Canina Ovina

Diferencia X-Y (%) 2,8 3,6 3,7 3,8 3,9 4,2

Adaptado de: Johnson and Welch, Theriogenology, 1999.

Posibles usos del semen sexado

Produccin animal Animales de compaa Deportes (perros, caballos) Investigacin Animales transgnicos Medicina humana

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- Enfermedades genticas ligadas al sexo - Eleccin del sexo

El uso de semen sexado para inseminacin artificial de bovinos es an limitado

Alto costo de la tecnologa

- Utilizacin de semen fresco (no criopreservado) - Separacin de 1x107 espermatozoides de cada sexo por hora con una pureza de 90% - Equipamiento costoso

Menor fertilidad
- Dosis de inseminacin reducidas (2x106) - Espermatozoides con reducida fertilidad

Utilizacin de semen sexado

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- Test de progenie - Aumento de la presin de seleccin - Asociado con otras tecnologas (superovulacin y transferencia de embriones, fertilizacin in vitro)

Superovulacin / Transferencia de embriones

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La superovulacin y transferencia de embriones permite incrementar la tasa reproductiva de hembras de alto valor gentico
Donante

Receptoras

Cras de la donante

Superovulacin Transferencia de embriones Sevicio natural o inseminacin artificial Recuperacin de embriones

Las respuestas a los tratamientos superovulatorios son muy variables

Hormonas utilizadas:
Gonadotrofinas extradas de la hipfisis de porcinos u ovinos (pFSH y oFSH) - Relacin FSH/LH variable - Vida media corta, mltiples aplicaciones - Riesgo de Encefalopata Espongiforme Bovina (EEB) Gonadotrofina de yegua preada (eCG) - Vida media larga, anticuerpos anti-eCG Gonadotrofina de la menopausia humana (hMG) - Alto costo FSH y LH recombinante - Alto costo

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Desarrollo y trnsito embrionario en el tracto genital

Da 0 = Celo Da 2 Da 3 Da 4 Da 5

Da 1

Da 6-8

Morfologa embrionaria
Embriones bovinos da 4 Embriones bovinos da 8

Tomado de: Lattanzi et al., Biol. Reprod., 2003.

La recoleccin de embriones se realiza por medios no quirrgicos

Circuito cerrado con flujo continuo Catter de 3 vas

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Instrumental utilizado para la recoleccin no quirrgica

Catter de 3 vas: flujo continuo

Entrada de fluido Crvix Entrada de fluido (1o va) Entrada de aire (2o va) Salida de fluido Vagina Salida de fluido (3o va)

Catter de 2 vas: flujo discontinuo

Entrada y salida de fluido Entrada y salida de fluido (1o va)

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Baln con aire

Entrada de aire (2o va)

Bsqueda y evaluacin de los embriones en el laboratorio

Filtro para retener embriones

Lavado de los filtros

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Bsqueda de embriones

Blastocistos en diferentes estadios

Manejo sanitario de los embriones

A A B

Interaccin patgenoembrion

zona pelcida
C

patgeno

Lavado de embriones

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Embriones no aceptables

Transferencia no quirrgica de embriones

Catter y puntas plsticas estriles descartables. (Minitb, Alemania)

Catter de transferencia metlico (Mintb, Alemania) Cargado de la pajuela empleada para la transferencia
Algodn Aire

Pajuelas (0,25 ml) empleadas para la transferencia (Mintb, Alemania).

Aire

Medio de cultivo

Embrin en medio de cultivo

Medio de cultivo

Aplicaciones de la transferencia de embriones

Aumento del progreso gentico

- Aumento de la presin de seleccin - Reduccin del intervalo generacional - Difusin de la mejora gentica

Control de enfermedades Importacin-exportacin Conservacin de especies en peligro de extincin

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Produccin de embriones in vitro

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Produccin de embriones in vitro

Ovarios de matadero Recoleccin de ovocitos Animales vivos (OPU) Maduracin in vitro

Fertilizacin in vitro

Descongelado y capacitacin de los espermatozoides

Cultivo in vitro
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Criopreservacin Transferencia de embriones

Recoleccin de los ovocitos

Obtencin de ovocitos a partir de animales sacrificados
para consumo
- Progreso gentico mnimo - Garanta sanitaria escasa - Uso en Investigacin
Lavado de ovarios Aspiracin de los folculos antrales Complejos cmulus-ovocito

Maduracin nuclear y maduracin citoplasmtica

Expansin del cmulus
24 h 24hs

Reinicio de la meiosis
Vesicula germinal 10-12 h Metafase I 10-12 h Metafase II

CP

Maduracin nuclear: reinicio de la meiosis

Inhibidor de la meiosis

Inhibidor de la meiosis

Evolucin de los niveles de MPF y MAP-quinasa.

1er Cuerpo Metafase I polar Metafase II

MPF

MAPKinasa
Vescula Ruptura de la germinal vescula germinal
Pico preovulatorio de LH Remocin del ovocito del folculo

Ovulacin Fertilizacin

Fertilizacin in vitro
Gradiente de Percoll
Antes de la centrifugacin Despus de la centrifugacin

Coincubacin de ovocitos y espermatozoides

Diluyente Semen 45% Percoll Espermatozoides no motiles Espermatozoides motiles

90% Percoll

Activacin del ovocito y bloqueo espermtico

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Fertilizacin, descondensacin de la cromatina y formacin de proncleos

Proncleos

2do CP 1er CP 1er CP

2do CP 1er CP

Segregacin de cromosomas homlogos

Descondensacin de la cabeza del espermatozoide

Espermatozoide descondensndose en el citoplasma

Formacin de proncleos y singamia.

1er y 2do CP

1er CP
Espermatozoide que no penetr la zona pelcida Proncleos

Los ovocitos fertilizados se cultivan in vitro por 8 das

Desarrollo de embriones in vitro

Estadio pronuclear

Embrin de 2 clulas

Embrin de 4 - 8 clulas

Mrula

Blastocisto expandido

Blastocisto protrudo

Sistemas para el cultivo de embriones in vitro

Co-cultivo: relacionado a altos ndices de anormalidades

. al nacimiento (mayor tamao, distocia, malformaciones).
- Concentracin de O2: 20% - Medio de cultivo: TCM-199 o Menezos B2 + suero fetal . bovino (SFB) - Lneas celulares: Vero; BRL - Cultivos primarios: clulas de la granulosa; clulas . oviductales

Medios Definidos: mayores tasas de desarrollo, menor

. mortalidad perinatal y porcentaje de malformaciones. . Mayor reproducibilidad.
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- Concentracin de O2: 5%
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- Medio de cultivo: SOF (Synthetic Oviductal Fluid) . . + aminocidos + seroalbmina bovina (BSA)

Los embriones producidos in vitro son menos viables que los producidos in vivo

Caractersticas de los embriones producidos in vitro:

- Menor viabilidad - Mayor sensibilidad al enfriamiento y criopreservacin - Mayor cantidad de lpidos - Uniones intercelulares anormales - Menor nmero de clulas - Menor proporcin de clulas en el macizo celular interno - Mayor incidencia de anormalidades cromosmicas

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- Menor tasa de preez despus de la transferencia - Mayores prdidas fetales durante la gestacin

Puncin folicular (Ovum Pick-Up; OPU)

Obtencin de ovocitos a partir de animales vivos
Dispositivo de OPU Tubo de acero

Bomba de vaco

Ecgrafo

Transductor

Tubo interno de acero del sistema de gua

Mango

Aguja 19-G

Conector de acero

Tubo de silicona

Tubo de acero

Transductor

Fijacin del ovario Ovario

Aguja

Pared rectal

Pared vaginal Dispositivo de OPU

Cervix

Adaptado de: Bols et al., Theriogenology, 1995.

Aplicaciones de la produccin de embriones in vitro

Investigacin bsica: - Produccin de embriones en diferentes estadios de . desarrollo a bajo costo a partir de ovarios de animales . sacrificados para consumo Aplicaciones comerciales: - Produccin de mayor nmero de embriones - Menor intervalo generacional por uso de animales . prepberes (OPU) - Obtencin de embriones de vacas preadas (OPU) - Obtencin de embriones de vacas que no pueden ser . superovuladas y/o con problemas reproductivos (OPU) - Obtencin de embriones de animales muertos

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Base para el desarrollo y/o aplicacin . de otras tcnicas: - Clonacin - Produccin de animales transgnicos

Micromanipulacin

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Produccin de mellizos por microciruga

Apertura de la zona pelcida para extraer al embrin.

Divisin de una mrula fuera de la zona pelcida.

Unidad de micromanipulacin
Tomado de: Palma et al., Rev. Arg. Med. Vet.,1991.

Hemiembriones despus de la divisin.

Tomado de: Palma, Biotecnologa de la Reproduccin, INTA (Argentina), 2001.

Mellizos idnticos producidos por microciruga

Biopsia y sexado

Blastmero

PCR

Inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoide (Intracitoplasmic Sperm Injection; ICSI).

Ovocito maduro (metafase II)

Micropipeta

Inyeccin pronuclear
Ovocito fecundado

Micropipeta

Proncleo

Transplante nuclear
Ovocito en MII Enucleacin

Clula donante

Transplante nuclear

Produccin de quimeras por agregacin de clulas a un blastocisto

Blastocisto

Micropipeta

Clulas inyectadas

Criopreservacin

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Tasas de enfriamiento para diferentes sistemas de criopreservacin

Vitrificacin
Estabilizacin

Congelamiento gradual
Seeding

25 Temperatura (oC) -7 -30

2.500 20.000 oC/min 0,3 0,6 oC/min

-196 15 25 Tiempo (minutos) 90

Adaptado de: Palma, Biotecnologa de la Reproduccin, INTA (Argentina), 2001.

Caractersticas de los mtodos de criopreservacin

Congelamiento Gradual
- Formacin de cristales de hielo - Baja concentracin de crioprotectores: mayor . probabilidad de dao por enfriamiento - Alto costo: equipo para el descenso controlado . de la temperatura
Equipo para enfriamiento controlado

Vitrificacin
- No hay formacin de cristales de hielo - Alta concentracin de crioprotector: mayor . probabilidad de dao osmtico y por toxicidad - Bajo costo: enfriamiento directo en N2 lquido

Refrigeracin
- Enfriamiento a 4 oC por 24 a 72 h
Termo de nitrgeno lquido

Descongelamiento: mtodo de transferencia directa

Tapn algodn Aire Aire Sellado

Solucin extractora del crioprotector

Embrin en solucin con crioprotectores

Solucin extractora del crioprotector

Tapn algodn

Crioprotectores permeables:
- Glicerol - Dimetilsulfxido (DMSO) - Propilenglicol - Etilenglicol

Solucin extractora del crioprotector

Crioprotectores impermeables:
Embrin en solucin con crioprotectores

- Sacarosa - Trealosa - Glucosa - Rafinosa

Embriones bovinos transferidos en el ao 2002

Embriones producidos in vivo Continentes Frescos 5.557 89.472 Congelados 8.785 99.652 Total 14.342 (2,7%) 189.124 (34,7%) 119.118 (22,2%) 92.412 (17,2%) 90.371 (16,8%) 32.945 (6,4%) 538.312 Embriones producidos in vitro Frescos 4 464 Congelados 97 30 Total 101 494

Africa Amrica del Norte Amrica del Sur Asia Europa Oceana Total

73.952

45.166

46.630

2.040

48.670

39.375 41.753 17.631 267.740 (48%)

53.037 48.618 15.314 270.572 (52%)

13.859 5.952 42 66.951

8.968 5.191 52 16.378

22.827 11.143 94 83.329

Adaptado de: Data Retrieval Committee Annual Report, IETS, 2003.

Conclusiones: aplicaciones biotecnolgicas a la reproduccin de animales

Inseminacin artificial y congelacin de semen

- Control de enfermedades de transmisin sexual - Uso intensivo de un macho de alto valor gentico - Aumento de la eficiencia de estimacin del valor gentico . (ensayos de progenie)

Sincronizacin e induccin de la ovulacin

- Aumento de la eficiencia de la produccin de terneros - Aumento de la eficiencia del manejo productivo y reproductivo

Superovulacin, transferencia y criopreservacin de . embriones

- Uso intensivo de hembras de alto valor gentico - Rpida difusin de gentica superior: transporte y . comercializacin alrededor del mundo a bajo costo - Sanidad Animal: importacin de embriones libres de patgenos Agrobiotecnologa
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- Recuperacin mas eficaz de individuos exticos y razas en . peligro de extincin - Conservacin in vitro por tiempo indefinido de una amplia . variedad de especies mamferas

Conclusiones: aplicaciones biotecnolgicas a la reproduccin de animales

Sexado de espermatozoides y embriones

- Produccin de descendencia del sexo deseado

Produccin in vitro de embriones

- Uso mas intensivo de hembras de alto valor gentico - Utilizacin de hembras que no pueden ser superovuladas - Produccin de embriones con ovarios de matadero

Micromanipulacin
- Produccin de mellizos idnticos para investigacin o aumentar . la eficiencia de los programas de transferencia de embriones - Clonacin por transferencia nuclear, inyeccin pronuclear o . produccin de quimeras para generar organismos transgnicos Agrobiotecnologa
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- Inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides en especies . en las que no es factible la fertilizacin in vitro

Aplicaciones a diferentes especies animales

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Biotecnologa aplicada a la reproduccin de porcinos

Inseminacin artificial
- IA: Inseminacin artificial convencional en el cervix (3x109 espermatozoides) - IIU: Inseminacin intrauterina en el cuerpo del tero - IIUP: Inseminacin intrauterina profunda a 2/3 de la distancia entre el cervix . y la unin tero-tubal (UUT) (50x106 esperm.)
Cuerpo del tero Cuerno uterino 25 cm de la UUT 18-20 cm del cervix

3. IIUP

2. IIU
Unin terotubal (UUT)

Tracto reproductivo de una cerda

Ovario

13-15 cm Canal cervical

1. IA

Instrumental para inseminacin intrauterina

Adaptado de: Belstra, Annual Swine Report, 2002.

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de porcinos

Control hormonal de estro y ovulacin - Una sola inseminacin por hembra - Inseminacin a tiempo fijo - Disponibles: PG600 (Intervet ,Inc.) - No aprobados: Progestagenos, GnRH, eCG, hCG Transferencia de embriones: - Quirrgico - Endoscopa - No quirrgico: trasncervical Colecta de embriones: quirrgica - Por ciruga o posterior al sacrificio

Deteccin de celo

Transferencias de embriones en cerdos en 2002

Pases Canada Corea Europa USA Total
Inseminacion artificial

Lavajes 129 30 105 ---264

Embriones transferibles 2.405 505 2.098 ---5.008

Hembras recipientes 43 12 85 80 176

Adaptado de: Data Retrieval Committee Annual Report, IETS, 2003.

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de porcinos

Sistemas de produccin de . embriones in vitro
- Uso comercial: aumento del progreso . gentico, transporte del material gentico . a bajo costo y con bajo riesgo sanitario. - Investigacin bsica. - Investigacin con propsitos biomdicos: . xenotransplante de tejidos/rganos, . transgnicos.

Maduracin in vitro:
- Maduracin nuclear: FSH, LH - Maduracin citoplasmtica: EGF, clulas del . cmulus, cistena.

Fertilizacin in vitro:
- Variabilidad del semen: fresco, criopreservado - Contenido de glutatin. - Factores para reducir poliespermia. - Formulacin de medio de FIV (TALP, mTBM)

Problemas del sistema:

- Formacin de proncleo masculino. - Poliespermia.

Cultivo in vitro:
- Modified Whittens medium - North Carolina State University 23 medium - Iowa State University medium - Beltsvile Embryo Culture Medium 3

Origen de los ovocitos

- Ovarios - Tamao de los folculos

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de porcinos

Criopreservacin de embriones
- Alta sensibilidad a la hipotermia (15oC) debido al alto contenido lipdico - Vitrificacin: open pulled straw; OPS
Microscopa confocal de un embrin porcino despus de la criopreservacin para examinar el dao en el citoesqueleto

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de equinos

Inseminacin artificial
- Semen refrigerado (5 oC por 24-48 h) o congelado (gran variabilidad individual en . cuanto a tolerancia la congelacin)

Transferencia de embriones (TE)

- Pases lderes: Estados Unidos, Argentina y Brasil (Australia; Canad; Italia; . Alemania y Francia utilizan la TE en menor medida) - Limitante para la difusin de la TE: Asociaciones de Criadores - Recoleccin de embriones de yeguas que ovulan espontneamente: 0,5-1 embrin . por hembra - Aplicaciones de la TE: Yeguas viejas con pobre historial reproductivo; yeguas en . competencia (carrera, polo, etc.)

Superovulacin
- No existe producto comercial para superovular yeguas: Las hormonas eCG, GnRH y . FSH porcina no son activas. Extracto de pituitaria equina (EPE) aumenta 3-4 veces . la tasa de ovulacin. - Aplicaciones de la superovulacin: TE, puncin folicular, fertilizacin in vitro, ICSI, . criopreservacin.

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de equinos

Criopreservacin
- Refrigeracin y transporte de embriones: se pueden mantener a 5 oC por 24 h . sin perder viabilidad - Limitantes de la criopreservacin de embriones: cpsula del embrin . (membrana proteica acelular); asociaciones de criadores - Congelacin y vitrificacin de ovocitos
Blastocisto temprano
Blastocele en formacin Detritos celulares

Blastocisto expandido
Blastocele

Macizo celular interno

Trofoblasto

Zona Pelcida

100 m 100 m Cpsula

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de equinos

Recoleccin no quirrgica de embriones
Medio de lavaje Ovario Cervix Oviducto Baln inflable Utero Aire Vagina Recto Entrada medio Vejiga

Embriones equinos transferidos en 2002

Pases Argentina Brasil Canad Europa Sudfrica Estados Unidos Australia Frescos 2.500 3.000 62 71 47 5.000 200 20 11 3 Congelados

30 15

Filtro Salida medio

Adaptado de: Aguilar and Woods, Current Therapy in Large Animal Theriogenology, 1997.

Nueva Zelanda Total

10.725

234

Adaptado de: Data Retrieval Committee Annual Report, IETS, 2003.

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de equinos

Produccin in vitro de embriones: fertilizacin in vitro (FIV); inyeccin . intracitoplasmtica de espermatozoide (ICSI)
- Limitantes de la FIV: maduracin del ovocito y capacitacin espermtica - Disponibilidad de ovarios de matadero para investigacin limitada: informacin limitada . sobre sistemas de maduracin, fertilizacin y cultivo in vitro - ICSI es utilizada como alternativa a la FIV: La inyeccin del espermatozoide evita las . deficiencias de los sistemas de FIV

Transferencia de ovocitos
- Recoleccin de ovocitos: De folculos preovulatorios (madurados in vivo), o durante el diestro . (maduracin in vitro) - Aplicaciones de la transferencia de ovocitos: Infecciones uterinas persistentes; estudios sobre . maduracin de ovocitos in vitro; como alternativa a la FIV

Transferencia de gametas (Gamete Intrafallopian Tube Transfer; GIFT)

- Transferencia de ovocitos y espermatozoides (200.000) al oviducto. - Aplicaciones de la transferencia de gametas: En casos de semen limitante (semen sexado, . congelado, padrillos con bajo recuento espermtico), como alternativa a la FIV

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de ovinos y caprinos

Inseminacin Artificial
- Mtodo de inseminacin: vaginal, cervical, transcervical, intrauterina
Inseminacin transcervical Inseminacin transcervical con endoscopio Inseminacin intrauterina por laparoscopa

Superovulacin y transferencia de embriones

- Alta variabilidad de la respuesta al tratamiento superovulatorio y de . las tasas de fertilizacin. - Recoleccin de embriones y transferencia: procedimiento quirrgico

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de ovinos y caprinos

Produccin de embriones in vitro
- Ovarios de matadero - Puncin folicular laparoscpica de animales vivos

Criopreservacin
- Congelacin gradual o vitrificacin - Embriones producidos in vitro son mas sensibles

Embriones de oveja y cabra transferidos en 2002

Embriones recolectados Ovinos Caprinos 100.496 17.921 Embriones Transferidos: Frescos Congelados 83.453 7.004 52.433 9.234 Almacenados 21.457 7.843 Exportados 19.214 6.784

Adaptado de: Data Retrieval Committee Annual Report, IETS, 2003.

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de camlidos sudamericanos

Llama (Lama glama) Alpaca (Lama pacos)

Poblacin de camlidos sudamericanos en los pases andinos (nmero estimado)

Pas Argentina Bolivia Chile Colombia Ecuador Paraguay Per Guanaco 578.700 54 25.000 ------53 1.600 602.907 Vicua 23.000 12.000 30.000 ---482 ---100.000 165.482 Llama 135.000 2.022.569 70.363 200 9.687 ---989.593 3,776.793 Alpaca 400 324.336 27.585 ---100 ---2.510.912 2.811.612

Vicua (Vicugna vicugna)

Guanaco (Lama guanicoe)

Total

Tomado de: Larocca, Transferencia de embriones y biotecnologa, 2001.

Estacionalidad de la actividad . reproductiva, que es mas marcada en los . camlidos silvestres (vicua y guanaco) Ovulacin inducida: 22 a 46 h despus de . la cpula Alta mortalidad embrionaria

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de camlidos sudamericanos

Blastocistos bovinos da 7 Embrin de llama da 7

Inseminacin artificial: 30 h despus de estmulo ovulatorio

- Dificultosa colecta de semen - Alta viscosidad, baja concentracin . espermtica, baja motilidad. - Criopreservacin poco eficiente de semen

Superovulacin y transferencia de embriones: respuestas muy variables

Blastocistos reexpandidos 72 h post-descongelacin

- Ausencia de fase luteal - Folculos dominantes por largos perodos

Sistema de produccin de embriones in vitro: poco desarrollado

- Preez de un embrin vitrificado (2002) - Mrulas producidas in vitro por transferencia . nuclear (2003) - Puncin folicular guiada por ultrasonografa . (2000)

Hbridos

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de bfalos (Bubalus bubalis)

Poblacin mundial: 163 millones de cabezas Produccin importante en regiones pantanosas y anegadizas, . donde es irremplazable Baja eficiencia de superovulacin y recoleccin de embriones
Agrobiotecnologa
Biotecnologa en reproduccin animal

Desarrollo de sistemas de produccin de embriones in vitro a . partir de ovarios de matadero o de animales vivos a travs de . la puncin folicular En India 124 embriones fueron recolectados in vivo, 78 fueron . transferidos frescos y 19 congelados en el 2002. Adems 265 . embriones de bfalo estn almacenados

Biotecnologa aplicada a la reproduccin de ciervos (Cervus elaphus)

Existen 2,4 millones de cabezas en 4.500 establecimientos. Altamente estacionales: La actividad ovulatoria comienza en . otoo, los partos estn sincronizados en el verano.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa en reproduccin animal

La produccin in vitro de embriones sera la mejor alternativa . para el uso eficiente del semen recuperado. En 2002, se colectaron ms de 1.000 embriones; cerca de . 800 fueron transferidos. Canad report preeces de . embriones producidos in vitro.

Conclusiones: aplicaciones biotecnolgicas a la reproduccin de animales

Inseminacin artificial y congelacin de semen

- Control de enfermedades de transmisin sexual - Uso intensivo de un macho de alto valor gentico - Aumento de la eficiencia de estimacin del valor gentico . (ensayos de progenie)

Sincronizacin e induccin de la ovulacin

- Aumento de la eficiencia de la produccin de terneros - Aumento de la eficiencia del manejo productivo y reproductivo

Superovulacin, transferencia y criopreservacin de . embriones

- Uso intensivo de hembras de alto valor gentico - Rpida difusin de gentica superior: transporte y . comercializacin alrededor del mundo a bajo costo - Sanidad Animal: importacin de embriones libres de patgenos Agrobiotecnologa
Biotecnologa en reproduccin animal

- Recuperacin mas eficaz de individuos exticos y razas en . peligro de extincin - Conservacin in vitro por tiempo indefinido de una amplia . variedad de especies mamferas

Conclusiones: aplicaciones biotecnolgicas a la reproduccin de animales

Sexado de espermatozoides y embriones

- Produccin de descendencia del sexo deseado

Produccin in vitro de embriones

- Uso mas intensivo de hembras de alto valor gentico - Utilizacin de hembras que no pueden ser superovuladas - Produccin de embriones con ovarios de matadero

Micromanipulacin
- Produccin de mellizos idnticos para investigacin o aumentar . la eficiencia de los programas de transferencia de embriones - Clonacin por transferencia nuclear, inyeccin pronuclear o . produccin de quimeras para generar organismos transgnicos Agrobiotecnologa
Biotecnologa en reproduccin animal

- Inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides en especies . en las que no es factible la fertilizacin in vitro

Referencias

1. Palma, G.A. Biotecnologa de la Reproduccin. Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria (INTA, Argentina), 2001. 2. Gordon, I. Controlled reproduction in cattle and buffaloes. Centre for Agriculture and Biosciences International (CABI), 1996. 3. Karow, A.M. and Critser, J.K. Reproductive tissue banking. Academic Press, 1997. 4. Stringfellow, D.A. and Seidel, S.M. Manual of the International Embryo Transfer Society, IETS, 1998. 5. Larocca, C. Transferencia de embriones y biotecnologa rea de Biotecnologa de la Reproduccin Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad de la Repblica, Montevideo, Repblica Oriental del Uruguay. Libro electrnico, 2001.

Agrobiotecnologa
Biotecnologa en reproduccin animal