CAPTULO 4

Inmunoglobulinas. Sntesis y regulacin de la produccin de IgE

Mara Roco lvarez Lpez, Mara Roco Lpez lvarez, Manuel Muro Amador

Las inmunoglobulinas (Igs) son un grupo de glucoprotenas sricas de movilidad electrofortica variable, aunque la mayora se concentran en la fraccin de las globulinas. Se caracterizan por su capacidad de unirse a un antgeno y son sintetizadas por clulas de estirpe B y secretadas al medio tras la diferenciacin del linfocito B a clula plasmtica. Cuando un linfocito B entra en contacto con un antgeno lo hace atravs de su receptor especfico (inmunoglobulina). Tras esta interaccin sufre una expansin a clula plasmtica secretoras de inmunoglobulinas en forma soluble (anticuerpos), molculas que son los principales efectores de la respuesta inmunitaria humoral. Las funciones de los anticuerpos pueden realizarse por la protena unida a membrana, al funcionar como receptor del antgeno y, tambin por las formas solubles o anticuerpos sricos. Entre las funciones que realizan las formas solubles destacan las siguientes: neutralizacin, opsonizacin, activacin del complemento y citoxicidad mediada por anticuerpos (ADCC). Las funciones y su efectividad varan segn el tipo o subtipo de inmunoglobulina y su localizacin. Existen cinco clases de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM que se diferencian en la estructura molecular, en el tipo de cadena pesada (, , , y ) y en el contenido de hidratos de carbono. Los miembros de cada clase se dice que son del mismo isotipo. En este captulo se har referencia a la estructura, sntesis, tipos y funciones de las distintas inmunoglobulinas, aunque por la naturaleza de la temtica que aborda el libro se estudiar en mayor profundidad la sntesis y regulacin de la inmunoglobulina E (IgE).

1. ESTRUCTURA Bioqumicamente las Igs son glucoprotenas, cuyo contenido en glucosacridos vara entre el 3 y el 18%. Desde el punto de vista electrofortico, muestran una gran heterogeneidad, pues su espectro se extiende desde la fraccin , donde se concentran la mayora, hasta la faccin del espectro electrofortico srico. La unidad bsica, monmero, de las inmunoglobulinas est constituida por dos cadenas polipeptdicas ligeras (L) idnticas y otras dos pesadas (H) tambin idnticas. Cada cadena ligera est unida covalentemente a una pesada, y las pesadas unidas entre s por puentes disulfuro y fuerzas no covalentes (figura 1A). Las cadenas pesadas (H), son responsables de las caractersticas estructurales y funcionales de cada inmunoglobulina. Cada cadena puede dividirse en "dominios" o regiones de homologa, de aproximadamente 110 aminocidos. En su forma nativa, globular, cada dominio forma una estructura plegada en dos estratos a la que confiere estabilidad un puente disulfuro intracatenario. La cadenas pesadas, constan de 4 5 dominios, uno aminoterminal que configura la regin variable (VH) y los otros dominios forman la regin constante (CH). Las cadenas ligeras pueden ser de dos tipos, kappa () y lambda () y, estn slo formadas por dos dominios: uno aminoterminal o variable (VL) y otro carboxiterminal o constante (CL) que se une al dominio CH1 de la cadena pesada. Estos dominios constituyen no slo la unidad estructural y evolutiva de las inmu-

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Sitio unin al antgeno N

CDR1 CDR2 CDR3

VL

Puentes disulfuro

Carbohidrato

CL

Cadena ligera

CH2 Regin bisagra

CH3

N VL

CH1 Cadena pesada N

Papana

Pepsina

SS

SS SS

SS

SS SS SS SS

SS

SS

SS

SS SS SS SS

SS

SS

SS

SS

SS Fc F (ab) 2

Fc

Figura 1. A, representa un modelo de una inmunoglobulina G que muestra la estructura tetracatenaria basica con los diferentes dominios de las cadenas pesadas y ligeras y los puentes disulfuro intercatenarios. B, muestra la estructura con detalle bioqumico la estructura de IgE,las lneas gruesas indican estructura primaria de las cadena pesada e y la de las cadenas ligeras L. Adems se detallan las posiciones de enlaces disulfuro, los sitios de accin de enzimas proteolticas y los correspondientes fragmentos generados.

noglobulinas, sino tambin la de otras molculas, que se encuadran dentro de la denominada superfamilia de las Igs. Dentro de esta familia estructural figuran molculas tan importantes como el receptor de linfocitos T, los antgenos linfocitarios codificados por la regin MHC (clase I y II), los corre-

ceptores CD4 y CD8, molculas de adhesin como CD2, LFA3 e ICAM-1, receptores de factores de crecimiento celular, etc. Todas estas molculas, ejercen funciones de reconocimiento o adhesin intercelular y son fundamentales para el manteniemiento de la homeostasis por el sistema inmunitario1-3.

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A pesar de la homogeneidad estructural y del comportamiento fsico-qumico de las inmunoglobulinas, stas presentan diferecias en la estructura primaria y secundaria de sus cadenas pesadas, dando lugar a cinco clases de molculas denominadas IgM, IgD, IgG IgA, e IgE. Los diferentes miembros de cada clase se dice que tienen el mismo isotipo, aunque puedan tener distinta especificidad. Variaciones en la secuencia de aminocidos determinan la existencia de subclases: en la clase IgA se diferencian dos, IgA1 e IgA2 y la clase IgG se subdivide en IgG1, IgG2, IgG3 y IgG4. Las cadenas pesadas son responsables de las caractersticas estructurales y funcionales de cada clase o subclase, se denominan con la letra correspondiente del alfabeto griego (1, 2, , , 1, 2, 3, 4 y ) y como se ha indicado constan de 4 5 dominios. El dominio o regin aminoterminal se denomina "variable" (VH). Dentro de l se diferencian tres regiones hipervariables, tambin llamadas determinantes de complementariedad (CDR1, CDR2 y CDR3), que estn directamente implicados en la unin al antgeno y son flanqueados por regiones estructurales FRs (del ingls, frame regions), de secuencia altamente conservada que les hace responsables del plegamiento caracterstico. El resto de los dominios forman la regin "constante" (CH), cuya estructura difiere en cada isotipo. En las cadenas , y , existe una regin de longitud variable llamada bisagra (H, del ingls, hinge) que se sita entre los dominios CH1 y CH2 y confiere flexibilidad a la molcula de inmunoglobulina. En las Igs de membrana, el extremo carboxiterminal tiene una prolongacin de unos 26 aminocidos hidrofbicos que constituyen la regin de transmembrana, seguida de otro segmento intracitoplsmico, de longitud variable, rico en aminocidos bsicos y posiblemente implicado en la transduccin de seal. Estas Igs de membrana (mIgs) se pueden unir a un heterodmero de dos molculas Ig-/Ig- con un solo dominio de Ig y un tallo citoplsmico de mayor tamao que el de mIgs que facilita la sealizacin intracelular (1). Este conjunto forma parte con otras molculas del receptor de la clula B o BCR. Las cadenas ligeras kappa () y lambda () estn formadas por 212 aminocidos repartidos en dos dominios. Su dominio carboxiterminal o constante (CL) se une al dominio CH1 de la cadena pesada mediante un puente disulfuro y su secuencia ami-

noacdica no vara entre los miembros de un mismo tipo. El extremo aminoterminal (VL), presenta mayor variabilidad de secuencia, esta variabilidad se concentra en tres regiones hipervariables (CDRs) de aproximadamente 10 aa, cuya situacin y funcin son iguales que las de la cadena pesada.

2. ORGANIZACIN GNICA: REORDENAMIENTO Y DIVERSIDAD El conocimiento de la extraordinaria diversidad de inmunoglobulinas que es capaz de sintetizar el organismo signific una aparente contradiccin respecto al principio de "un gen-una protena", establecido como mxima en los inicios de la gentica molecular y que implicaba la necesidad de tener una gran cantidad de DNA destinado a este fin. Posteriormente se comprob que la informacin gentica necesaria para la sntesis de todas las inmunoglobulinas est contenida en un pequeo espacio del genoma4. Los genes que codifican cada uno de los tipos de cadenas ligeras y las cadenas pesadas estn situados en cromosomas distintos. El locus de la cadena pesada se sita en el cromosoma 14, el de la cadena kappa en el 2 y el de la lambda en el 22. Sin embargo, la organizacin de estos tres loci es similar. Cada locus est compuesto de mltiples genes o segmentos gnicos que codifican las regiones V y C de la protena, separados por intrones y por segmentos que no se transcriben. En el extremo 5' se sitan los genes V que codifican la mayor parte de la regin variable (95 aa.), cada uno de ellos precedido por un exn "leader" (L) que contiene la seal de inicio de la transduccin y codifica los 20 o 30 aa. aminoterminales que forman un pptido que slo se mantiene en las protenas secretoras o de transmembrana. A una distancia variable de esta regin, en sentido 3', se encuentra la regin de los genes C, uno en el locus y seis en el , que codifican el dominio constante de la cadena ligera. En el locus H existe un gen C de cada clase o subclase y que consta de tres o cuatro exones que codifican los dominios constantes de la cadena pesada y de otros exones que codifican los extremos de transmembrana y citoplsmico. En los loci H y , entre los genes V y C, se sitan los genes J (del ingls: join, unir). En el locus H, adems, existen los genes D (de diversidad) y en el locus cada gen C va precedido de un gen J. Los segmentos D y J

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Locus de la cadena pesada

L1 V1 L1 V1 Ln Vn D ?

J (6 genes funcionales)

C3

C2

DNA embrionario Reordenamiento DJ (linfocito pro-B L1 V1 L1 V1 Ln Vn D3 J2 C C C3 C2

Reordenamiento VDJ

L1 V1 D3 J2 DNA del linfocito B Transcripcin L1 V1 D3 J2 RNA primario Procesamiento del RNA splicing RNA mensajero Transcripcin L Polipeptido V DJ

C3

C2

C3

C2

L1 V1 D3 J2 AAAA

Procedimiento y glicosilacin L Cadena pesada (Linfocito pro-D) Carbohidrato Regin variable Regin constante V DJ

Figura 2. Esquema del reordenamiento del gen de la cadena pesada. En este caso se representa el proceso para la sntesis de la cadena .

codifican los aa. carboxiterminales de la regin V, incluyendo la tercera regin hipervariable (CDR3).

2.1. SNTESIS Y REORDENAMIENTO GNICO La sntesis de inmunoglobulinas requiere que los linfocitos B sufran un proceso madurativo lineal. Durante este proceso de diferenciacin, estos linfocitos pasan por diferentes estadios, desde el de pro-linfocito B al de linfocito B maduro que expresa en su superficie molculas de inmunoglobulinas y,

de aqu el linfocito B se diferencia a clulas plasmticas secretoras de anticuerpos. Inicialmente, los linfocito B producen anticuerpos IgM. Los dominios de la regin variable de la cadena pesada son codificados por los elementos V, D, J y se localizan adyacentes a los exones C que codifican la regin constante (C) de la cadena pesada de IgM en el extremo 5 del locus de la cadena pesada de las Inmunoglobulinas (IgH). Tras una apropiada estimulacin, el linfocito B, puede modificar el isotipo de anticuerpo que produce conservando la especificidad frente al antgeno. Durante el proceso, el

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DNA genmico se divide y se vuelve a unir yuxtaponiendo los elementos VDJ a los exones de la regin C que codifican las cadenas las pesadas , y de los isotipos IgG, IgA e IgE respectivamente5. El proceso de reordenamiento gnico (del ingls, switching), se inicia en el linfocito pro-B. El primer paso afecta a uno slo de los cromosomas que contiene el locus H y consiste en la unin de un segmento D con uno J, mediante un mecanismo de recombinacin en el que se pierde el material gnico intermedio (figura 2). Despus un proceso anlogo, junta un segmento V con el reordenado DJ formando el gen VDJ. Las uniones D-J y V-DJ permiten cierta flexibilidad de modo que pueden perderse o introducirse uno o varios nucletidos al azar. Si el reordenamiento VDJ tiene xito (pues la variabilidad en la unin implica la posibilidad de aparicin de un codn sin sentido), se suprime el proceso en el otro cromosoma, y si no, se intenta en el otro cromosoma. De esta forma, cada clula produce una sola cadena H diferente. En este estado se produce la transcripcin dando lugar a una cadena de RNA que contiene los genes CH y el VDJ separados por un intrn. Este posteriormente se elimina mediante un proceso llamado de divisin (del ingls, splicing), que pone en contacto el gen VDJ con el C (el ms proximal), al tiempo que se aade la cola de poli-A caracterstica de los mRNA. La traduccin de este RNA origina las cadenas citoplasmticas que se pueden detectar por primera vez en los linfocitos pre-B. Si el reordenamiento del gen de la cadena pesada tiene xito se activa el reordenamiento del locus kappa que se hace de forma similar y, slo si este no es efectivo en ninguno de los cromosomas, se reordenar un gen lambda. De este modo cada clula producir uno solo de los dos tipos de cadena ligera.

ocurren mutaciones somticas que afectan a las CDRs. La consecuencia es una nueva diversificacin y la posibilidad de que alguno de estos cambios signifiquen una ganancia de afinidad por el antgeno. Aunque en principio todos los linfocitos B sintetizan IgM, con posterioridad a la estimulacin antignica y gracias a la interaccin con linfocitos colaboradores (Th) y las citoquinas producidas por estos puede tener lugar el cambio de isotipo, que permite la produccin de anticuerpos con cadenas pesadas pertenecientes a diferentes clases. El cambio hacia uno u otro isotipo est en relacin con la citoquina secretada y, concretamente la IL-4 y la IL-13 determinan el cambio a IgE.

3. FUNCIONES DE LAS INMUNOGLOBULINAS Tras la interaccin del antgeno con el anticuerpo tiene lugar la funcin efectora de ste. Esta funcin la puede desarrollar como receptor de membrana de linfocitos B, provocando su activacin para la sntesis de Igs y la diferenciacin a clula plasmtica productora de anticuerpos solubles. Aparte de la unin a antgenos (virus, toxinas, etc) que impide el contacto con sus receptores especficos y neutraliza su accin patgena, accin que es comn a cualquier tipo de anticuerpo, el resto de funciones efectoras son dependientes del tipo de anticuerpo, de su estructura y de su localizacin (1,3). Por ello, en esta primera parte, se ofrece un resumen de las propiedades y funciones de las distintas clases de inmunoglobulinas existentes, reflejando sus propiedades fsicoqumicas y las diversas funciones que realizan (tabla I).

3.1. INMUNOGLOBULINA G Esta inmunoglobulina constituye el 75% del total de las Igs en suero, siendo su concentracin aproximada de 1500 mg/dl. Su forma molecular es la de monmero, con un peso molecular de 146 kd y un coeficiente de sedimentacin de 7S. Las cadenas pesadas estn constituidas por cuatro dominios, con una regin bisagra entre los dominios CH1 y CH2. Su contenido de hidratos de carbono es de un 2-3% al tener unido al dominio CH2 un N-oligosacrido. Existen 4 subclases de IgG que se diferencian en la cadena pesada, el nmero de

2.2. DIVERSIDAD Los genes de las inmunoblobulinas se reordenan durante la ontogenia del linfocito B. Gracias a dicho reordenamiento cada linfocito produce una inmunoglobulina distinta dando lugar a un sin nmero de molculas diferentes que, en conjunto, podrn reconocer cualquier antgeno. Adems, cuando tiene lugar el reconocimiento antignico, el linfocito B implicado va a sufrir un proceso de activacin y proliferacin durante el cual

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TABLA I. Caractersticas fisicoqumicas y funciones de las Igs PROPIEDADES

Peso Molecular Forma secretada % Glicosilacin Subtipos Concentracin (mg/mL) % en suero Vida media (das) Barrera placentaria Act. Complemento Va clsica Va alternativa Unin por Fc Macrfago Neutrfilo Basfilo y mastocito Actividad antiviral Lisis bacteriana +++ +++ +/ +/ + + +++ +++ +++ +++ + + +++ ? ? +++ ? ? ++ + + + +++ + + + ++++ +? + IgG1 IgG2

IgG
150.000 Monmero 4% IgG3 IgG4

IgA
160=400.000 Mono-Di-Trmero 10% IgA1 IgA2

IgM
900.000 Trmero 15% IgM

IgD
180.000 Monmero 18% IgD

IgE
190.000 Monmero 18% IgE

9 50% 23 +++

3 12% 23 +

1 8% 7 +++

0,5 5% 23 +++

3 12% 6

0,5 3%

1,5 10% 5

0,04 <1% 2a8

Trazas <1% 1a5

puentes disulfuro intracatenarios (2 en IgG1 y IgG4, 4 en IgG2 y 15 en IgG3), as como en la longitud y secuencia de la regin bisagra (ms larga en la IgG3). Estas subclases se encuentran en cantidades diferentes en el suero; as la IgG1 tiene una concentracin aproximada de 900 mg/dl, la IgG2 de 300, la IgG3 de 100 y la IgG4 de 50. Estas cifras varan mucho dependiendo de la edad, las diferencias gnicas entre individuos y las tcnicas utilizadas para su determinacin. A pesar de esto, existen deficiencias descritas de las subclases de IgG, siendo la deficiencia de IgG3 la ms comn en los adultos y la de IgG2 en nios, esta ltima asociada a una pobre respuesta a antgenos tipo polisacridico. La deficiencia de IgG4, sola o acompaada de IgG2, es difcil de determinar debido a su bajo nivel en suero, que algunos individuos sanos no pueden ser detectables por las tcnicas habituales. Al ser la IgG1 la de mayor concentracin srica, su dficit conlleva a un fuerte descenso del total de IgG, por lo que

suele diagnosticarse en la inmunodeficiencia comn variable. Esta inmunoglobulina es la principal en la respuesta secundaria (de alta afinidad tras un segundo contacto con el antgeno), y se encuentra distribuida tanto en espacios intra como extravasculares. Respecto a su funcin, es la nica Ig capaz de atravesar la placenta (con menor eficiencia en el caso de la IgG2)y, por tanto confiere inmunidad al recin nacido. Tambin es capaz de fijar el complemento por la va clsica, al unirse el C1q al dominio CH2 (ms fcilmente en el caso de IgG1 e IgG3), o por la va alternativa. Los macrfagos y neutrfilos poseen receptores en su membrana para la regin Fc (con mayor afinidad por los de IgG1 e IgG3) y su unin al complejo antgeno-anticuerpo favorece la fagocitosis del antgeno en cuestin. Este proceso se conoce como opsonizacin. Una funcin similar a la opsonizacin es la citotoxicidad celular dependiente de anti-

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cuerpo (ADCC), en la cual, la unin de los receptores para Fc de la clula citotxica (natural killer, macrfagos y neutrfilos) con los anticuerpos unidos a la clula diana, provoca la activacin de la clula citotxica y la consiguiente destruccin de la clula diana.

sonas no tiene niveles demostrables de IgA en suero y, aunque se le asocia con infecciones respiratorias recurrentes, en la mayora de los casos no hay una manifestacin clnica demostrable.

3.3. INMUNOGLOBULINA M 3.2. INMUNOGLOBULINA A Representa un 15% del total de Igs del suero, con una concentracin media de 350 mg/dl. Aqu, principalmente se encuentra como monmero, aunque tambin existen dmeros y trmeros, con un peso molecular que vara entre 160 y 400 kd. Las cadenas pesadas de esta clase estn compuestas de cuatro dominios con una regin bisagra entre el segundo y el tercero. A continuacin del ltimo de estos dominios existen 18 aminocidos extra, tambin presentes en la IgM, que posibilitan la unin mediante un puente disulfuro a la denominada cadena J. Esta cadena J, es necesaria para la creacin de las formas polimricas sricas y de la IgA secretora (sIgA). Esta forma de IgA es la predominante en las secreciones, tales como la saliva, leche, calostro, lgrimas y en las membranas mucosas del aparato genitourinario, el respiratorio y el gastrointestinal. La forma tpica de la sIgA consta de dos unidades de cuatro cadenas junto con la cadena J y el componente secretor, con un peso molecular total de 380 kd y un coeficiente de sedimentacin de 11S. El componente secretor protege a la molcula de la destruccin proteoltica. A diferencia de las unidades tetramricas y la cadena J, el componente secretor no es sintetizado por los linfocitos B, sino por las clulas epiteliales prximas a las membranas mucosas y secretoras, que al unir la IgA por los receptores de la membrana basal, la endocitan y la transportan hacia el medio externo, uniendo al mismo tiempo el componente secretor (S) y formando la sIgA. Existen dos subclases de IgA: IgA1 e IgA2, siendo la IgA1 la predominante en suero y la IgA2 en las secreciones. A pesar de que puede activar el complemento por la va alternativa y poseer actividad antiviral, su principal funcin se debe a la presencia en las mucosas donde acta impidiendo la entrada de sustancias extraas en el organismo. La deficiencia de IgA es bastante frecuente en la raza caucsica, estando asociada a un defecto gentico de la maduracin de los linfocitos B. As, una de cada 700 perRepresenta alrededor del 10% del total de Igs, con una concentracin de unos 150 mg/dl. Se encuentra en forma de pentmero de unidades de cuatro cadenas y, al igual que la IgA, tiene la cadena J que facilita por medio de puentes disulfuro la unin de las distintas unidades. Las cadenas pesadas de la IgM estn compuestas de 5 dominios y no poseen regin bisagra. El contenido de hidratos de carbono es de un 15% por tener unidos 5 N-oligosacridos (uno a los dominios CH1, CH2 y a la regin caudal y dos al dominio CH3). Todo esto supone un peso molecular de 900 kd y un coeficiente de sedimentacin de 19S. Es la Ig predominante en la respuesta primaria (de baja afinidad en un primer contacto con el antgeno) y, estn distribuida en el espacio intravascular. Se encuentra presente de forma mayoritaria en la superficie de los linfocitos B, actuando como receptor de membrana y es la ms eficiente en fijar el complemento por la va clsica. Con la unin de tan solo una molcula de IgM a una superficie celular extraa, se provoca un cambio conformacional de la regin Fc de la Ig que permite la interaccin del C1q con el dominio CH3. Esta unin desencadena la cascada del complemento que tiene como resultado la lisis de la clula en cuestin.

3.4. INMUNOGLOBULINA D Esta inmunoglobulina se encuentra presente en baja concentracin en suero, unos 4 mg/dl. Su forma molecular es la de monmero con un peso molecular de 180 kd y un coeficiente de sedimentacin de 7-8S. Posee regin bisagra y cuatro dominios en las cadenas pesadas. El contenido de hidratos de carbono es del 18% al tener unido un oligosacrido a CH2 y dos a CH3. No se conoce la funcin que realiza, aunque por estar presente de forma mayoritaria junto a la IgM en la superficie de los linfocitos B inmaduros, se cree que puede desempear algn papel en el desarrollo de stos.

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4. INMUNOGLOBULINA E: CARACTERSTICAS GENERALES Y SNTESIS Los anticuerpos IgE alergeno-especficos son responsables de la generacin de hipersensibilidad inmediata cuando expresados sobre clulas efectoras portadoras en su superficie de los receptores de alta afinidad (FcRI), tales como mastocitos o basfilos, reaccionan con los antgenos o alergenos. Estas reacciones constituyen uno de los mecanismos efectores ms poderosos del sistema inmunitario. Pero adems las investigaciones realizadas en los ltimos cinco aos permiten suponer que la IgE puede estar envuelta en otros mecanismos indirectos, tales como captura, procesamiento y presentacin de alergenos, fundamentales en la patognesis de enfermedades alrgicas. Esta presentacin de antgenos mediada por IgE puede conducir a una continua activacin del sistema inmune debida a la presencia de altas cantidades de IgE y de un amplio nmero de clulas T alergeno especificas del tipo Th2, ello aun en presencia de muy bajas concentraciones de alergeno. As, una posible funcin de IgE mediando la presentacin de antgeno (IgE-MAP), podra tener lugar por interaccin con sus receptores especficos: FcRI (Receptor de alta afinidad) o con FcRII/D23 (Receptor de baja afinidad). Estas interacciones expandiran la clulas B e induciran el cambio de isotipo hacia IgE, lo que conducira a un avance de la enfermedad, tal como se ha observado en ciertos pacientes alrgicos que sufren deterioro al pasar de ser sensibles a un solo grupo de alergenos a manifestar un sndrome multialrgico6. El trmino anafilaxia, se aplica para describir la forma sistmica de las reacciones de hipersensibilidad, y fue descrito en 1902 por primera vez por Richet y Portier al observar que una segunda inyeccin en perros de tentculos de anmona, produca reacciones adversas que finalmente conducan a la muerte. Para describir este fenmeno propusieron la palabra anafilaxis, en contraposicin al termino profilaxis. Los individuos que tienden a desarrollar respuestas de hipersensibilidad potentes se llaman atpicos. En 1906, Von Pirquet predijo que la inmunidad y las reacciones de hipersensibilidad deban depender de la interaccin entre una sustancia extraa y el sistema inmunolgico y que la hipersensibilidad tendra mecanismos subyacentes de tipo inmunolgico. Sin embargo, la presencia de anticuerpos reag-

nicos en el suero de individuos alrgicos no fue descrita hasta 1921 por Prausnitz y Kstner. Estos autores demostraron que la inyeccin intracutnea de extracto de pescado a un individuo sensible, produca una reaccin papuloeritematosa y que la reactividad frente al alergeno se poda transferir a un individuo normal, inyectndole el suero de los individuos sensibles. Posteriormente se demostr la transferencia pasiva de hipersensibilidad a otros alergenos. Estas observaciones indicaban que los pacientes atpicos tenan anticuerpos, que mediaban las reacciones de hipersensibilidad inmediata, aunque no pudo detectarse ningn anticuerpo responsable, entre los conocidos hasta entonces en el suero de la mayora de pacientes. Por ello, el principio activo, aun desconocido, responsable de la transferencia de hipersensibilidad se denomin reagina7,8. En 1967 trabajos del grupo de Ishizaka demostraron que los anticuerpos reagnicos no pertenecan a ninguna de las clases de inmunoglobulinas IgG, IgM, IgA o IgD, ni estaban asociados a ninguna de las subclases menores de la IgG. El anlisis antignico puso de manifiesto, aos ms tarde, que esta protena representaba una clase distinta de inmunoglobulina, pero con determinantes antignicos de cadenas ligeras y comunes a todas las clases de inmunoglobulinas conocidas. Adems, el anticuerpo reagnico posea determinantes antignicos no compartidos con ninguna de las inmunoglobulinas de cualquier otra clase o subclase2,4. La estructura antignica de la reagina, junto a la existencia de actividad de anticuerpo asociada a la protena, fue suficiente para justificar la conclusin definitiva de que representaba una clase distinta de inmunoglobulina, a la que la Organizacin Mundial de la Salud denomin oficialmente como inmunoglobulina E, o IgE.

4.1. ESTRUTURA DE LA IGE

Y PROPIEDADES FISIOQUMICAS

La IgE es una glicoprotena con un coeficiente de sedimentacin de 8S y un peso molecular de 190 kDa que tiene un alto contenido en carbohidratos de aproximadamente un 18% pues tiene unidos seis oligosacridos (tres a CH1, uno a CH2 y dos a CH3). Las molculas de IgE, al igual que las otras inmunoglobulinas, estn constituidas por dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras, con dominios constantes (C) y varia-

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bles (V) como las otras inmunoglobulinas (figura 1B). Las regiones V son producto de los mismos genes que las de otras inmunoglobulinas, las regiones C de la cadena pesada estn codificadas por el gen localizado en el grupo de genes de cadenas pesadas de inmunoglobulinas (Ig). Por tanto la IgE se produce como consecuencia del cambio de isotipo de cadena pesada y se ha calculado que las cadenas pesadas, denominadas cadenas , poseen un peso molecular de 72.300 Daltons9. Mediante proteolisis con papana, la IgE se escinde en los fragmentos Fc y Fab. Bajo condiciones ptimas, adecuadas para la mejor produccin de fragmentos Fc, una porcin de Fc se degrada y da lugar a fragmentos Fc ms pequeos denominados Fc' (ver figura 1). Los fragmentos Fc contienen determinantes antignicos de al menos dos especificidades diferentes (1, 2), ambos determinantes son caractersticos para la clase IgE de inmunoglobulinas y uno de ellos (1) es compartido por diferentes fragmentos Fc'. El fragmento Fab est formado por una cadena ligera y una porcin de la cadena pesada (Fd) que contiene el determinante antignico idiotpico (0) caracterstico de la IgE. Como otras inmunoglobulinas, la IgE es tambin susceptible a la proteolisis con pepsina, que da lugar a la produccin de un gran fragmento denominado F(ab')2, formado por las dos cadenas ligeras, una fraccin de una cadena pesada que incluye el Fd, y por el tercio aminoterminal de Fc. El anlisis antignico de este fragmento demuestra que el fragmento F(ab')2 comparte determinantes antignicos 1 con el Fc. La presencia del mismo determinante antignico en el fragmento Fc' indica que dicho fragmento Fc' corresponde al tercio aminoterminal de la porcin Fc de las cadenas pesadas1,8. La estructura proteica primaria de IgE contiene 40 medios residuos de cistena por molcula, de los cuales 30 se encuentran en las dos cadenas y los 10 restantes en las cadenas ligeras. La reduccin de la molcula a pH neutro, en ausencia de agentes desnaturalizantes, rompe 8 de los 20 puentes disulfuro. Bennich y Bahr-Lindstrm, han estudiado la secuencia de aminocidos de la cadena y han determinado la localizacin de los puentes disulfuro5. Su porcin citoplsmica es mas larga que la de IgM e IgD y de modo similar a la de IgG est formada por unos treinta aminocidos. Estructuralmente las cadenas se agrupan en 5 dominios, dos en la porcin Fd y tres en la porcin Fc y estn unidas por dos puentes

disulfuro intercatenarios: Adems, la cada cadena posee un puente disulfuro entre la porcin bisagra y la Fd.

DE LA INMUNOGLOBULINA

4.2. PROPIEDADES BIOLGICAS E

La de IgE es una inmunoglobulina que se caracteriza por su capacidad para establecer uniones de alta afinidad con los receptores FcRI para la IgE ubicados en la membrana de los mastocitos y basfilos y en algunas otras clulas como las de Langerhans y monocitos de pacientes atpicos1,4,6. Con menor afinidad y al formar complejos, se une a los receptor FcRII de ms amplia distribucin que los primeros, como veremos ms adelante. Los anticuerpos IgE poseen una actividad hemaglutinante comparable a la de IgG, lo que indica que son anticuerpos polivalentes. Los agregados de IgE no fijan el complemento por la va clsica, pero s por la va alternativa. Los agregados de Fc tienen una mayor actividad de fijacin del complemento que los agregados de IgE y los agregados de F(ab')2 son menos activos. Por lo que parece que la estructura fundamental para la fijacin del complemento est presente en el tercio aminoterminal de la porcin Fc, aunque alguna porcin adicional presente en los otros dos tercios carboxiterminales podra tambin estar implicada en esta actividad. La IgE circula como un anticuerpo bivalente y su concentracin en plasma de sujetos normales es inferior a 1g/mL, cifra que en condiciones patolgicas alcanzan cifras superiores a 1000 g/mL. Esta inmunoglobulina, presenta valores sricos prcticamente indetectables en el nacimiento, dado que carece de la propiedad de atravesar la barrera placentaria. Sin embargo, en la undcima semana de vida fetal se detectan linfocitos B portadores de membrana sIgE. A partir del nacimiento, los valores sricos de IgE aumentan hasta llegar a un mximo entre los 10-15 aos, disminuyendo luego directamente y mantenindose constantes durante toda la vida adulta. Pero la propiedad biolgica ms importante y conocida, aunque adversa, de la IgE es su capacidad de sensibilizar tejidos homlogos como consequencia directa de la unin al receptor de alta afinidad. El hecho de que la sensibilizacin de la piel humana se deba a IgE y no a otras inmunoglobulinas, se confirma mediante las denominadas

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reacciones inversas del tipo P-K, en las que una inyeccin intracutnea del anticuerpo especfico contra la IgE en individuos normales induce una reaccin papuloeritematosa. Esta reaccin, no se puede inducir con anticuerpos anti IgG, IgA, IgM o IgD, ni siquiera a elevadas concentraciones. Dado que los individuos normales poseen IgE con afinidad por las clulas diana implicadas en las reacciones P-K, se considera que los mecanismos implicados en la reaccin cutnea inducida por anticuerpos anti-IgE son la consecuencia de la combinacin de los anticuerpos con IgE normal unida a las clulas. El periodo de latencia ptimo para la sensibilizacin de la piel es de uno a tres das y la sensibilizacin persiste durante mucho tiempo, ello se debe a que la IgE tiene una alta afinidad por sus receptores en el mastocito7,8. No obstante, la anterior propiedad por adversa no justificara por s misma la existencia de IgE en el organismo, al que como otras molculas descubiertas por acciones

no beneficiosas, no le resultara til disponer de todo un sistema complejo que no tuviera una accin fisiolgica importante. Hoy se sabe que IgE puede mediar la presentacin antignica y ejercer una funcin benfica importante sobre la eliminacin de parsitos, constituyendo la que podra ser su accin fisiolgica fundamental y que podra justificar, al menos en parte, la existencia de esta inmunoglobulina6. As, junto con la IgA, es la responsable de las reacciones ADCC llevadas a cabo por los eosinfilos contra parsitos del tipo de los helmintos que resisten a la accin de otras clulas citotxicas. Sin embargo, como se ha sealado anteriormente, la funcin ms conocida de la imunoglobulina E, se debe a su habilidad para activar los mastocitos y basfilos, a travs de su interaccin con el receptor de alta afinidad (FcRI) mediando as las reacciones de hipersensibilidad. La formacin del complejo antgeno-IgE-receptor provoca la activacin de estas clulas y la liberacin de sustancias inflamatorias y va-

Recombinacin de switch de la cadena pesada

L1 V1 D3 J2

C3

DNA reordenado del linfocito B productor de IgM Deleccin de genes

DNA reordenado del linfocito B productor de IgE

L1 V1 D3 J2

Transcripcin y procesamiento

L1 V1 D3 J2

ARNmC

AAAA

Traduccin Cadena pesada Figura 3. Esquema del cambio de isotipo por switch de la cadena pesada . El ADN reordenado de un linfocito B productor de IgM, se vuelve a reordenar eliminando los genes intermedios C y C conservando el gen C en posicin 3. Una vez producida la deleccin, el ADN resultante se transcribe a ARNm Ce y este se traduce posteriormente a proteina constituyendo la cadena pesada de la molecula de IgE.

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Th

IFN-

IL-2 C-Plasm

IL-4

IL-5

IL-6

APC B ()

IL-4 (+)

Seal de contacto

Induccin del switch por IL-4

Produccin de IgE

Figura 4. Principales interacciones celulares y moleculares implicadas en el cambio de isotipo de inmunoglobulinas. En la parte izquierda se representa la interaccin T-B tras el reconocimiento de antgeno y en la derecha de la figura se sealan las molculas que intervienen en la diferenciacin hacia clula plasmtica productora de IgE.

soactivas al medio, cuya consecuencia final es la elaboracin de una respuesta de hipersensibilidad inmediata. Ms reciente, es el conocimiento de que tiene una funcin moduladora de sus propios receptores FcRI o receptor de alta afinidad y, FcRII (CD23) o receptor de baja afinidad y que, la IgE alergeno especfica puede facilitar la captura de antgenos por los linfocitos B, va CD23, gracias a su capacidad para inducir aumentos de este receptor de baja afinidad. Esta ltima habilidad incide sobre los linfocitos B, facultandoles para actuar como clulas presentadoras de antgeno (CPA) y conducir as a un aumento de la respuesta inmunitaria. Por el importante papel que juega esta inmunoglobulina en la sensibilizacin atpica y en el desarrollo de procesos alrgicos, en este captulo, se hace un estudio ms exahustivo y extenso de esta inmunoglobulina, atendiendo especialmente a los mecanismos que inducen su sntesis. Por el inters actual se hace tambien una referencia a los principales genes y molculas implicados en la regulacin del proceso.

4.3. SNTESIS DE IGE A la vista de las diversas funciones pleiotrpicas que la IgE tiene en alergia, se han aunado muchos esfuerzos para intentar definir los diferentes mecanismos que gobiernan su produccin. Como ya se ha referido la sntesis de inmunoglobulinas requiere que los linfocitos B sufran un proceso madurativo lineal. La IgE como ocurre con otras inmunoglobulinas, se produce por un cambio de isotipo que como para otras inmunoglobulinas, se realiza gracias a un proceso de delecin y recombinacin gnica (figura 3). Este cambio, en el caso de la IgE, conlleva una serie de mutaciones somticas en la transcripcin de la lnea germinal que implican el reordenamiento de los genes VDJ y su combinacin por yuxtaposicin de los genes de la cadena pesada con los correspondientes de su regin variable. El proceso se acompaa de delecin de las regiones intermedias, codificantes para las cadenas pesadas de cualquiera de las otras cuatro inmunoglobulinas5,10.

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Sin embargo, el linfocito B una vez maduro, tiene an que experimentar una serie de cambios que facilitan su interaccin con otras clulas y que, le convierten en clula productora de IgE. A estos cambios contribuyen una serie de seales adicionales que inducen la transformacin de los linfocitos B en clulas plasmticas productoras de IgE (figura 4). Para que la sntesis de IgE sea eficaz, se requieren al menos dos tipos de seales adiconales a la seal de contacto o cognitiva: la primera seal, se aporta por mediadores solubles, especialmente interleucina-4 (IL-4) y, tambin por interleucina13 (IL-13), las cuales contribuyen a la activacin del proceso de la transcripcin de la lnea germinal . Esta primera seal es contrarregulada por interfern (IFN). La segunda seal, es dependiente de la interaccin cognitiva entre de linfocitos T y B (va interaccin TcR-MHC) con la contribucin de la activacin del CD40 de las clulas B por interaccin con su ligando (CD40L). Esta ltima seal, que se estabiliza por molculas coestimuladoras y de adhesin, permite la activacin de los linfocitos B y, como ltimo escaln de la respuesta al antgeno, origina la aparicin de transcriptos maduros para la produccin de IgE. Si se revisa el esquema del cambio de isotipo (switching) tratado anteriormente, el principal mecanismo para este cambio, es el proceso llamado recombinacin de switch1,9,11. Este proceso de cambio de isotipo se ofrece esquematicamente, para el caso de IgE, en la figura 3. Sin embargo, recientes estudios han ofrecido cierta luz sobre los mecanismos moleculares por los que las citoquinas inducen los cortes y yuxtaposiciones de la lnea germinal de DNA, indicativos de que las alteraciones o cambios en estas citoquinas pueden condicionar el proceso. Especialmente, como inductoras de IgE, intervienen IL-4 e IL-13. Para la compresin de las distintas interacciones se ha propuesto un modelo que facilita la comprensin del proceso y que, resume las principales interacciones moleculares que participan en la regulacin de la sntesis IgE (ver resumen al final del captulo). No obstante, el proceso es mucho ms complejo y pone en juego una serie de factores citoplsmicos y nucleares altamente implicados en dicha regulacin. Adems, como tambien se ver, las variantes genticas (polimorfismos) de las citoquinas y de sus receptores, pueden afectar la eficiencia del proceso y a la predisposicin individual para la atopie.

4.4. CITOQUINAS Y OTRAS MOLCULAS

QUE REGULAN LA SNTESIS DE IGE

Adems del control ntimo que se ejerce sobre el proceso de transcripcin, la secrecin de IgE, est tambin controlado por la interaccin de diversas molculas que se inducen por la accin de citoquinas. Entre las ms estudiadas figuran algunas interleuquinas, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-13, IFN- y TNF- y molculas de adhesin, como CD23, CD40 y sus ligandos. Estas molculas pueden tener efectos inductores o inhibitorios y, de ellas, por la limitacin de espacio, slo se comentan las que por ejercer una mayor influencia han sido ms estudiadas y, cuyos efectos directos estn bastante bien establecidos (tabla II).

4.4.1. Interleucina-4 La interleucina-4 (IL-4) es una linfoquina producida por linfocitos T CD4+ de tipo Th2 y por mastocitos. IL-4 ejerce acciones anti-inflamatorias sobre los monocitos, produccin de quimioquinas e induccin de enzimas que metabolizan el cido araquidnico sobre clulas del epitelio bronquial. Como todas las linfoquinas, ejerce sus funciones mediante la unin a un receptor especfico expresado en las membranas celulares, acta sobre clulas B en reposo hacindolas sensibles a otros estmulos, tiene capacidad para producir una expansin de la proliferacin de linfocitos B activados 12 y dirige el cambio de isotipo haca IgE, mediante la in induccin de factores nucleares

TABLA II. Principales molculas reguladoras de la sntesis de IgE Efecto inductor IL-4 IL-13 IL-5 IL-6 CD23 CD40 CD58 CD80 EVB Hidrocortisona Efecto inhibidor IFN-g IL-8 IL-10 IL-12 CD14

CD, grupo de diferenciacin de antgenos leucocitarios, proviene del ingls cluster of differentiation.EVB, virus de Ebstein-Barr.

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responsables de la transcripcin de la cadena pesada de la lnea germinal 5,10-13. Esta molcula, tambin promueve la expansin de linfocitos de tipo Th2 que controlan la proliferacin y las acciones de eosinfilos y mastocitos, la proliferacin de linfocitos T en humanos y el aumento de la expresin de CD23 y de MHC de clase II. Este efecto indirecto de IL-4, junto con su efecto directo sobre la produccin de IgE, indica que IL-4 tiene un papel principal en las enfermedades alrgicas. Por el contrario, IL-4 suprime la induccin y funcin de los linfocitos Th1, que segregan molculas pro-inflamatorias de inters en la inmunidad celular. A travs de esta va, esta interleuquina inhibe la liberacin de otras citoquinas pro-inflamatorias como IL-1, IL-6, IL-8 y TNF-, producidas por monocitos activados. Adems, tanto interleuquina-4 como muchos de sus efectos son contrarregulados por IFN-14,15.

pendiente de IL-4 pero dependiente de Il4R13. Sin embargo, esta interleuquina se inhibe por IFN-, IFN-, TGF- e IL-12, y se aumenta por IL-6. Esta inhibicin sugiere, que los procesos que conducen a la sntesis de IgE en respuesta a IL-13, estn modulados por mecanismos similares a los que controlan la inducida por IL-4. A pesar de su homologa estructural y funcional, estas dos citoquinas no presentan efectos aditivos ni sinrgicos en la induccin de la sntesis hacia IgG4 o IgE. No obstante, desde el principio, se observ que el compuesto hIL-4. Y124D, bloqueaba tanto la proliferacin como la sntesis de inmunoglobulinas inducida por IL-4 e IL-13, lo que sugiri que ambas citoquinas podan unirse al mismo receptor. Esto es en parte cierto, ya que aunque existen receptores diferentes para ambas citoquinas, IL-4R e IL-13R, hoy se sabe que comparten elementos comunes13,18.

4.4.2. Interleucina-13 Su caracterizacin es ms reciente y comparte algunas propiedades estructurales y funcionales con IL-4. Es una protena no glicosilada de 132 aminocidos con una masa molecular de 12 Kd, cuya secuencia de aminocidos presenta una homologa del 30% con la de IL-4. Se sabe que IL-13 media el cambio de isotipo no slo hacia IgE, sino tambin hacia IgG4, e influye en la transcripcin de la cadena pesada de la lnea germinal y en la expresin de CD23 en clulas B normales. Es decir, IL-13 junto con IL-4, induce la sntesis de IgE5,13. Una caracterstica fundamental es que la induccin del cambio de isotipo y la sntesis de IgE por IL-13, en presencia de clulas T CD4+ o de anticuerpos monoclonales antiCD40 es independiente de IL-4. Por otra parte y en contraste con IL-4, IL-13 no tiene efecto promotor del crecimiento sobre clulas T activadas ni modifica la expresin de CD23, CD40 y HLA-DR en clulas pre-B16,17. En general, mientras IL-4 es central para el cambio de isotipo hacia IgE en linfocitos B y para la maduracin de linfocitos T colaboradores hacia el fenotipo Th2, IL-13 aunque tambin interviene en la sntesis de IgE, no tiene un papel claramente asignado sobre linfocitos T, pero s se relaciona con la atopia. Por otro lado, IL-13 no parece tener papel en la eliminacin de helmintos, es decir sus acciones no son siempre redundantes con las de las IL-4 y ejerce sus efectos inde-

4.4.3. Interfern- IFN- es una citoquina secretada normalmente por los linfocitos durante la respuesta inmunitaria, especialmente por la mayora de linfocitos T CD8+, por algunos CD4+ pertenecientes al subtipo Th1, y en menor grado, por clulas NK. Aunque presenta cierta actividad antiviral, es mucho menos activo en este sentido que otros interferones. Casi todas las clulas expresan receptores para IFN- y responden a esta citoquina aumentando la expresin de MHC de clase I, lo que resulta en una mayor eficiencia en la presentacin de antgenos intracelulares y en un aumento de la funcin citotxica que destruye a patgenos intracelulares. Al contrario de lo que ocurre con otros interferones, IFN- tambin aumenta la expresin de MHC de clase II y promueve la presentacin antignica a los linfocitos T CD4+. Por otra parte, se le conoce como el activador de macrfagos ms potente, pues aumenta la capacidad citotxica de dichas clulas e induce su secrecin de IL-1, IL-6, IL-8 y TNF y, de igual modo puede activar otras clulas como neutrfilos, clulas NK y clulas endoteliales. Generalmente no se considera un factor pro-inflamatorio, pero puede aumentar la funcin inflamatoria de TNF- y mediar la activacin de clulas endoteliales y la migracin de clulas inflamatorias12. IFN- es capaz de aumentar la actividad de las clulas Th1 y, por tanto, induce la in-

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munidad mediada por clulas, pero inhibe la proliferacin de las clulas Th2 suprimiendo la inmunidad humoral. Adems, al actuar sobre linfocitos Th2, regula negativamente la produccin de IL-4, lo que repercute en una inhibicin de IL-4 e inhibe potencialmente sus efectos sobre las clulas B, afectando especialmente a la sntesis de IgG1 e IgE20.

4.4.4. Genes de IL-4, IL-13 Los genes que codifican para estas citoquinas estn localizados en una regin de 25 Kb sobre la porcin proximal del cromosoma 5q31, junto con los genes de IL-3, IL-5, Il-13 y GM-CSF regin que ha sido fuertemente asociada con el asma y la atopia5,19. En el tercer intrn de IL-4 existe un dinucleotido que ha sido ligado a los niveles de IgE total en suero, pero no se ha relacionado con el asma en la poblacin Caucasoide, mientras que en la poblacin Japonesa se ha relacionado tanto con el nivel de IgE total como con el asma. En cualquier caso este hallazgo soporta la candidatura de IL-4 como un locus para la atopia dentro del cromosoma 5q31. Se han descrito por lo menos 5 variantes genticas en el promotor de IL-4, entre ellas la correspondiente a la posicin -590C/T ha sido tambin relacionada con ms altos niveles de IgE y alta actividad IL-4 in vitro, debido a su afinidad por diversos factores de transcripcin y alteracin de la movilidad electrofortica. Otras 2 variantes identificadas no han sido ni con la atopia ni con el asma. Otras informaciones han sugerido que junto a IL-4, un locus prximo, tal como el de IL-13, y que ejerce una actividad similar a IL-4, puede constituir un locus candidato para la atopia y el asma. Como en el caso de IL-4 tambin para IL-13, se han descrito 2 variantes genticas en relacin con el asma: una en el promotor y que se asocia con la produccin de IL-13 y la otra que representan un cambio de carga y puede alterar la unin ligando-receptor e incrementar la sealizacin va IL-13.

mento de la transcripcin y expresin de CD40. Esta molcula es una protena de membrana de 50 Kd, cuya estructura es afn a varios receptores de factores de crecimiento. La porcin intracitoplsmica de CD40 de 62 aminocidos es esencial para la transducin de seales y la porcin extracelular, homloga al p75 de NGFR (nerve growth factor receptor)10, puede interactuar con el componente transductor de seales del receptor de IL-6 (gp130), esta conexin de las vas de IL-6 y CD40 sugiere que CD40 pueda ser un receptor para el factor de crecimiento. Existe un ligando para CD40, la molcula gp39 o CD40L, que juega un papel central en el crecimiento y la diferenciacin celular B. CD40L es expresado solamente por los linfocitos T activados, fundamentalmente por los linfocitos CD4+ y una pequea proporcin de linfocitos CD8+. Es una protena de membrana de tipo II, con extremo carboxiterminal extracelular y compuesta por 22 aminocidos intracitoplasmticos, 24 aminocidos transmembrana y 215 aminocidos en su dominio extracelular, este dominio es homlogo al de TNF- y TNF-. Se ha sugerido que en cultivos estimulados con IL-4, se puede inducir la expresin del ligando de CD40, el cual media la liberacin de sCD23 y la sntesis de IgE. Por otra parte, se sabe que IL-4 aumenta la respuesta de linfocitos B a CD40L y la expresin de mRNA de CD40 en las clulas B22. Resulta interesante resaltar que, entre todas las interacciones de las molculas de adhesin, solo se ha probado que la interaccin CD40-CD40L es importante para la respuesta de anticuerpos, dependiente de las clulas T. Curiosamente, la carencia del gen que codifica esta molcula puede dar origen a una inmunodeficiencia conocida con el nombre de Sndrome de Hiper-IgM, en el cual se bloquea el cambio de isotipo de las IgS23.

4.4.6. Citidin deaminasa activada (AID) Se trata de una enzima que se expresa especficamente en linfocitos B activados de bazo y en los centros germinales. Esta enzima tiene homologa con la enzima ApoB que participa en la edicin del mRNA y parece que media el cambio de isotipo hacia IgE. De hecho, en ratones carentes de enzima, se ha observado un bloqueo completo del cambio de isotipo junto a niveles altos de IgM y, en humanos, ciertas mutaciones

4.4.5. CD40/CD40L CD40 es una molcula de superficie expresada por los linfocitos B, clulas dendrticas foliculares, monocitos, epitelio normal y algunos carcinomas epiteliales20. La activacin de linfocitos B in vitro produce un au-

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de AID han sido identificadas en la forma autosmica recesiva del sndrome de hiper IgM5.

DE LA INMUNOGLOBULINA

4.5. RECEPTORES ESPECFICOS PARA EL FC E Se conocen dos receptores de esta inmunoglobulina, cuya principal diferencia es su grado e afinidad por IgE, pero tambin se diferencian en otros aspectos, los cuales se tratan de resumir en este apartado.

c. Los dos poliptidos constituyentes de la cadena tiene 62 aminocidos y presentan similitud con la cadena del complejo del receptor de la clula T, especialmente en su porcin citoplsmica. Slo 5 residuos aminoterminales de la estructura predicha para este receptor, son extracelulares y, el resto de residuos son intracelulares. Mientras que la cadena contiene el sitio de unin a IgE, las cadenas y , son las estructura responsables de la activacin celular que se produce tras el reconocimiento del antgeno, sugiriendo que despus del reconocimiento antignico, estas cadenas estn implicadas en la transducin de seales9,25.

4.5.1. Receptor de alta afinidad: FRI Tanto los mastocitos como los basfilos poseen receptores especficos para el fragmento Fc de las cadena pesadas de IgE, estos receptores poseen alta afinidad por la IgE y se han denominado como FcRI. Adems de en estas clulas, tambin se han podido identificar en la superficie de clulas de Langerhans epidrmicas, en eosinfilos y en algunos macrfagos drmicos, aunque en estas clulas no se ha podido probar su funcin9,13,24.

b) Actividad funcional y seales de transducin Este receptor constituye un modelo para los receptores multicadena de la respuesta inmunitaria. Como se sabe IgE tras su unin a la cadena de FcRI, acta como receptor para el antgeno en la superficie de los mastocitos y basfilos. La unin a IgE parece ocurrir en dos fases: en la primera tendra lugar el reconocimiento del receptor del mastocito mediante el dominio constante H4 de la cadena pesada de la IgE y, en la segunda, se establecera la unin definitiva entre el segundo dominio C terminal de FcRI y el dominio H3 de la IgE. Una vez situada la IgE en la superficie del mastocito o basfilo, los fragmentos Fab de IgE quedan libres para establecer la unin con el antgeno. Al parecer, un elemento que contribuye a la avidez de la IgE por los FcRI del mastocito es el puente disulfuro inter H-H establecido entre los dos residuos de cistena que ocupan la posicin 318. La unin posterior del antgeno a la IgE, as fijada sobre la superficie de mastocitos y basfilos, dara paso a la intervencin de las cadenas y , quines enviaran seales al interior de la clula tras interaccionar con una molcula "lyn" (perteneciente al grupo de las src-kinasas), que est anclada en la membrana y se asocia al receptor. Para que estas seales puedan transmitirse, parece indispensable que el receptor forme agregados que permitan su fosforilacin y la de protenas asociadas necesarias para iniciar todos los acontecimientos que, finalmente conduciran a la li-

a) Estructura de FcRI La molcula consta de cuatro polipptidos separados en tres subunidades: cadena , cadena y dos cadenas idnticas entre si denominadas , dispuestas sobre la membrana celular como se representa en la figura 5. Para que el receptor se pueda expresar en la superficie de la clula es necesaria la presencia simultnea de las tres subunidades. a. La cadena , tiene 180 residuos aminoterminales en el dominio extracelular que forman dos secuencias repetidas de 90 aminocidos y pertenecen a la superfamilia de las inmunoglobulinas. Adems, cada cadena del FcRI posee una regin intramembrana de naturaleza hidrofbica constituida por 20 aminocidos y su regin citoplsmica est constituida tambin por unos 20 aminocidos carboxiterminales. Esta cadena contiene el sitio de unin a la IgE. b. La estructura primaria de la cadena est formada por 243 aminocidos, es enteramente hidrofbica y, por tanto, se sita sobre la membrana, a la que atraviesa cuatro veces.

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N
Espacio extracelular

N N

Membrana plasmtica

Espacio intracelular

C C N

C C
Figura 5. Estructura del receptor de alta afinidad (FcRI). La cadena a en su porcin extracelular se une a IgE, las cadenas , de cuatro cadenas transmembrana y las dmeros de dos cadenas idnticas as mismo de situacin transmembrana y una pequea regin intracitoplsmica contribuyen a la transmisin de seales al interior de la clula, las zona marcadas con rectngulos rojos son las encargadas de la transduccin de seales tras el contacto del alergeno. Para que la seal se transmita es preciso que se expresen las tres cadenas simultneamente sobre la superficie celular.

beracin de mediadores responsables de las reacciones de hipersensibilidad24,25.

4.5.2. Receptor de baja afinidad: FCRII/CD23 Ms reciente, es la descripcin de la existencia de otros receptores especficos para IgE en clulas hematopoyticas humanas y en algunos tipos de clulas epiteliales en humanos y roedores. Estos receptores, denominados FcRII, presenta una afinidad por IgE unas 100 veces inferior y son estructuralmente diferentes de los receptores clsicos de los mastocitos y basfilos (FcRI)26. En principio, se observ que los anticuerpos frente a este receptor no presentaban reaccin cruzada con los FcRI de mastocitos y basfilos, lo que llev a la caracterizacin de un segundo receptor para IgE (FcRII). Actualmente se sabe que este tipo de receptor se corresponde con la molcula de CD23 y que FcRII/CD23, est ampliamente expresado en varios tipos de clulas hematopoyticas que incluyen: linfocitos, monocitos, plaquetas y eosinfilos y otros tipos celulares como macrfagos, clulas NK y las clulas de Langerhans.

c) Anticuerpos frente al FcRI Se sabe que algunos autoanticuerpos dirigidos contra eptopes del FcRI que se solapan con la zona de unin a IgE, pueden conducir tambin a la liberacin de histamina generando afectaciones que cursan con la elevacin de mediadores de la respuesta atpica. De hecho, aunque en teora estos autoanticuerpos competiran con la unin de IgE a su receptor, en la prctica esta unin al FcRI puede inducir un estmulo similar al que se produce por unin a la IgE y que se traduce tambin en liberacin de mediadores. De ellos, slo un tercio son competitivos con IgE, mientras los otros dos tercios no lo son. Este tipo de anticuerpos han sido descritos asociados a la urticaria crnica idioptica, asma y dermatitis atpica1.

68

El papel probable que puede representar este receptor en diversos procesos inmunitarios, resulta altamente interesante, tanto si se atiende a sus formas de membrana como a las formas solubles. Por esta razn, su estudio ha sido objeto de algunos trabajos de nuestro grupo, que han pretendido analizar la implicacin de su forma soluble en procesos alrgicos, incluida la rinitis. Eso di lugar a una revisin bastante completa de sus funciones27,28, aunque existen tambien otras monografas como la editada por el grupo de J. Gordon, que revisa las dos formas moleculares de estos receptores y, en donde pueden conocerse aspectos que por la limitacin de espacio no pueden tratarse en este captulo29. Aunque FcRII tiene menor afinidad por IgE que los receptores de mastocitos y basfilos, s tiene una elevada afinidad por los dmeros o complejos de IgE, de ah, su importancia en situaciones en las que se forman complejos IgE como ocurre en la mayora de enfermedades alrgicas. As, se ha observado que el nmero de clulas CD23+ est aumentado en todas las situaciones patolgicas o experimentales en que est aumentada la inmunoglobulina E.

gin aminoterminal intracitoplasmtica. La diferencia radica en la utilizacin de un nuevo promotor localizado entre los exones 2 y 3, cuya consecuencia directa, es la subdivisin en dos diferentes primeros exones codificantes para la zona aminoterminal, que se insertan en una regin codificante comn que comprende los exones 3 a 11. Los dos promotores difieren respecto a la especificidad celular y posiblemente en su respuesta a estmulos extracelulares29-30. Desde el punto de vista funcional, se conocen tambien diferencias pues, mientras en monocitos, plaquetas y eosinfilos, CD23 parece tener capacidad para unirse a IgE, como una va alternativa para eliminar parsitos, en las clulas B, CD23 regula la sntesis IgE mediante un mecanismo de retroalimentacin que requiere la interaccin de ambas molculas31.

b) Estructura del CD23 de membrana FcRII/CD23 es una asialoglicoprotena de 45 kDa constituida por 321 aminocidos, y que debido a su dominio lectina tipo C (dependiente del calcio), se incluye en la familia de protenas que engloba al receptor de asialoglicoprotena (ASGPR) y a las protenas de adhesin conocidas como selectinas. El FcRII se considera una protena de membrana integral tipo II, debido a su segmento aminoterminal de localizacin intracitoplasmtica, hecho que representa una caracterstica diferencial con el resto de receptores Fc, cuyo extremo intracitoplasmtico es C-terminal32. Posee una porcin transmembrana, de 21 aminocidos y un fragmento extracelular que constituye la prctica totalidad de la molcula, con 277 aminocidos distribuidos en dos dominios: uno de estructura -helicoidal y otro dominio compacto homlogo a las lectinas Se ha propuesto un modelo estructural en el que la molcula de CD23 intacta formara dmeros o trmeros, ya que la unin eficiente de IgE a CD23 parece requerir dos o ms dominios homlogos a lectinas en una estrecha proximidad y, esto, podra suceder si existieran formas oligomricas de CD23 en la membrana celular26,33. Una caracterstica de esta molcula es la presencia de puntos proteolticos extracelulares, cuya ruptura libera fragmentos solubles que varan entre 12 y 37 kDa (figura 6a). La unin de IgE a CD23 no implica interacciones con los carbohidratos de IgE, el punto de unin como para FcRI, se ha lo-

a) Formas moleculares de CD23 Se han descrito dos tipos de molculas de CD23: FcRIIa, expresado por los linfocitos B no activados y FcRIIb, expresado por linfocitos B activados por IL-4 y por el resto de clulas. Este segundo tipo parece ser el implicado en la sntesis de IgE. El cDNA para la molcula de CD23 humana, ha sido clonado por varios laboratorios, revelndose que el gen que codifica para la molcula FcRII/CD23 (en el cromosoma 19p13), consta de aproximadamente 13 Kb y 11 exones y se ha establecido una muy buena correlacin entre los exones y los dominios funcionales de la protena. El fragmento de 25 Kd, codificado por los exones 9 a 11, estrechamente ligados entre s y, claramente separados del exn 8 por un intrn de 5 Kb. Esta fuerte divisin de los genes refleja la estructura dimrfica de sus productos protecos, es decir CD23 de membrana y CD23 soluble (sCD23). Un nuevo cDNA, distinto del caracterizado previamente, denominado FcRIIa, ha sido clonado posteriormente y para distinguirlo se le ha asignado el nombre de FcRIIb. Ambas molculas de protena difieren en los primeros aminocidos de la re-

69

a
25kDa sCD23

b IgE

COOH rotura protcoltica N-glicosilacin

NH2-citoplasma

N N N

FcRII CD23

Figura 6. Estructura de CD23 soluble e interaccin entre IgE y FceRII. La figura 6a, representa la molcula de FRII/ CD23, sealando la regin citoplasmica N terminal, y los puntos de glicosilacin y ruptura proteoltica. As mismo se indica la parte de la molcula que constituye la porcin soluble de CD23. La parte b de la figura 6, refleja como se dispondra estructuralmente la molcula de IgE sobre los oligomeros de CD23 unin que se realiza a traves de la regin de tipo lectina de CD23 con el tercer dominio CH3 de la cadena pesada de IgE estabilizando s lamolcula de CD23 (Modificadas de Delespesse G et al. Human IgEbinding factors. Immunol Today 1989; 10: 161 y Sutton and Gould. The human IgE network. Nature 1993; 366: 425.).

calizado sobre la regin CH3 de la molcula de IgE y en el dominio de tipo lectina del CD23, cerca del punto de proteolsis, lo que garantiza un recambio rpido34 (figura 6b). Esta molcula, una vez unida a la IgE, estabilizara la estructura doblemente plegada -helicoidal e inducira un cambio en el equilibrio que se orientara hacia la formacin de oligmeros de CD23, con posterior unin a nuevas molculas de la inmunoglobulina que protegeran a CD23 del ataque proteoltico. La especificidad para IgE est determinada por el dominio lectina, mientras que la avidez por la unin viene determinada por la formacin de oligmeros. La capacidad de CD23 para unirse a IgE con relativa alta afinidad, estara conservada en el fragmento inicial de 37 kDa, pero se ira perdiendo progresivamente con cada fragmentacin hacia la forma de 25 kDa, de modo paralelo a la desaparicin de la estructura helicoidal. Las diferencias con otros receptores Fc son: su presencia en los centros germinales,

sus similitudes funcionales con CD72 y que los anticuerpos monoclonales anti-CD23 aceleren la ruptura del CD23 de membrana. La IgE estabiliza la forma intacta de la molcula, pero desde el principio se sugiri la existencia de una contraestructura de CD23 diferente de IgE, esto fue confirmado al describir su capacidad de interaccin con la molcula CD2135.

c) Fragmentos solubles de CD23 La porcin extracelular de CD23 de membrana sufre rupturas progresivas, generando fragmentos que siempre conservan el extremo C-terminal, que contiene el triplete Arg-Gly-Asp, comn a los receptores de la familia de las integrinas. Estas rupturas dan como resultado la formacin de molculas solubles, en general inestables, con diferentes pesos moleculares de 37, 33, 25-27 y 12 kDa, cuya forma ms estable corresponde al fragmento de 25 kDa. Se han

70

planteado distintas hiptesis para explicar estas rupturas: la primera, apunta a que distintas proteasas seran las responsables de las diferentes fragmentaciones; la segunda, que CD23 exhibira actividad autoproteoltica y la tercera, en que CD23 actuara como un cofactor facilitando su proteolsis por diferentes proteasas ligadas a la membrana celular. La teora ms aceptada es la segunda. La velocidad de ruptura de CD23 y consiguiente generacin de fragmentos solubles est regulada por la propia IgE29. La regulacin de CD23 soluble implica tambin a molculas que regulan la sntesis de IgE. As, IL-4 induce la expresin de CD23 y la liberacin de CD23 soluble, mientras IFN- inhibe la expresin postranscripcional de CD23 dependiente de IL-4 en linfocitos B, pero no en el resto de clulas. Curiosamente, IFN- no inhibe la liberacin de CD23 soluble inducida por IL-4. Por otro lado, IFN- tiene una actuacin ms amplia e inhibe, tanto la liberacin de CD23 soluble inducida por IL-4 como la expresin de CD23 en linfocitos B y monocitos28-30.

para ligar IgE, datos recientes informan sobre otras funciones que CD23 soluble (sCD23) tiene in vitro, y de un papel importante para esta molcula in vivo, debido a su doble presencia como factor soluble y de membrana27,31. En la tabla III, se resumen las principales funciones de CD23 que dependen del ligando con el que interacciona.

4.6. RECEPTORES DE IL-4 E IL-13 Existen dos receptores de IL-4 y uno de ellos es compartido con IL-13 y tambin dos receptores para IL-13, pero el receptor de tipo de IL-13 utiliza una segunda cadena cuya funcin no se conoce. El receptor de IL-4 humana es un complejo heterodimrico que incluye una cadena (IL4-R), capaz de ligar a IL-4 con alta afinidad. Esta cadena forma dmeros con otra protena para formar los receptores de tipo I o de tipo II13,19. En clulas de linaje hematopoytico se une a la cadena C para formar el receptor de tipo I. En este tipo de receptor, la primera protena es esencial para la transducin de seales de IL-4 e IL-13, mientras la segunda comparte actividades con otros receptores de citoquinas de los que es tambin un componente esencial, como en IL-2R, IL-7R IL-9R IL-15R. En tejidos no hematopoyticos la cadena IL4-R interacciona con la cadena IL13-1 formando el receptor de tipo II, que a diferencia del anterior es capaz de ligar tambin a IL-13 (figura 7).

d) Actividad funcional de CD23 y sCD23 El CD23 de membrana podra estar implicado en los mecanismos de citotoxicidad celular dependiente de IgE en la defensa contra parsitos y posiblemente, podra actuar como molcula de adhesin celular en virtud de su estructura homloga a las lectinas. Los fragmentos solubles, estaran implicados en la regulacin de la sntesis de IgE humana, en la activacin de la diferenciacin de los linfocitos B y en la proliferacin de linfocitos B y T. Adems de su capacidad

4.6.1. Variantes gnicas El gen de IL4-R se localiza en el cromosoma 16p12, regin en la que junto a otras

TABLA III. Interaccin de CD23 con sus dos ligandos conocidos: IgE y CD23 Ligandos Funciones derivadas de la interaccin de CD23-ligando IgE CD21

Funcin efectora de macrfagos (Fagocitosis) Presentacin antignica linfocitos B a T Disminucin sntesis de IgE Aumento de afinidad de linfocitos B en la respuesta inmunitaria Crecimiento y diferenciacin de linfocitos T y precursores Molcula de adhesin Estmulo de la sntesis de IgE

+ + +

+ + + +

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TABLA IV. Polimorfismo SNP en los genes de IL-4 eIL-13 que intervienen en las seales de y niveles de IgE Single nucleotide polymorphism (SNP) Cambio Mecanismo posible T/C G/C T/C GlnI 10Arg G/A lle50Val C/T C/G T/C Glu375Ala G/T Cys406Arg C/T T/C Ser4l ILeu Pro478Ser Arg55 l Gln Ser76lPro C/T A/G T/C Cambio conformacin? Desequilibrio de unin con Arg55 I Gln 1902 2281 ILI3RA1 Xql3 I083 3'UTR 3'UTR ILI3RA2 Xql3 No identificado Cambio conformacion y capacidad de unin Capacidad de unin? Desequilibrio de unin con Pro478Ser Desequilibrio de unin a Cys406Arg? Cambio de actividad del promotor ? Actividad del promotor? Cambio de la capacidad de unin ? Cambio conformacin?

Gene IL4 ILI3

Locus 5q3l 5q3l

Sitio

Promotor/exon I 3'UTR Promotor 4464 3'UTR

IL4R

16p2l

148 426 747 864 1124 1167 1216 1218 1224 1232 1681

regiones flanqueantes se ha observado un fuerte desequilibrio de unin con la atopia. En este gen se han descrito diversas variantes (tabla IV). As, una variante citoplsmica de IL4-R (Arg551Gln), ha sido identificada y relacionada con el sndrome de hiper IgE y eczema severo. Igualmente, esta variante se ha relacionado con aumentos en la expresin de CD23 en clulas mononucleares de sangre perifrica. El efecto opuesto, ms bajos niveles de IgE, ha sido observado en individuos portadores de este alelo en poblacin germana, lo que se ha explicado por la existencia de asociacin con una segunda variante Pro478/Ser. Otra variante extracelular Ile50Val, ha sido igualmente relacionada con la atopia, la cual parece intervenir en la activacin de la sntesis de IgE y Stat6 que es importante en la transmisin de seales resultantes de la unin a IL-4 e IL-13 (ver figura 7). Por ltimo, la variante Glu375Ala, tambien se asocia con atopia sobre todo cuando est en desequilibrio de unin con la variante Cys406Arg.

En la cadena C se ha encontrado una variante intrnica que ha sido relacionada con una modesta influencia sobre los niveles de IgE. En contraste con IL4-R, poco se sabe sobre el papel de la cadena IL-13R, aunque se han identificado dos componentes del mismo, las cadenas IL13-R1 e IL13-R2. La primera se une dbilmente a IL-13, pero el heterodmero que forma en su unin a IL4R constituye un receptor funcional tanto para IL-13 como para IL-4, de modo que el receptor de IL-13 coincide con el receptor de tipo II para la IL-4. Por el contrario, la cadena IL13-R2 slo es capaz de ligar a IL-13 con alta afinidad y no a IL-4, pero su papel funcional no se conoce19. Los genes que codifican estas dos cadenas mapean de manera independiente sobre el cromosoma Xq13. Se han descrito tres variantes de IL13-R1 en relacin con la atopia, una de ellas se asocia con elevacin de IgE y su existencia es la primera demostracin de una asociacin del cro-

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IL-4 IL-4R C IL-4R

IL-3 IL-13r1

JAK1

JAK3

JAK1

Tyk2

GATA3 Th2

Stat6 Stat6

IgE

Stak6

Tipo I: T y B

Tipo II: B

Genes IL-4 respuesta MHC-II I Il-4R CD23

Figura 7. Esquema representativo de las vas de sealizacin de IL-14 e Il-13 por interaccin con sus receptores.

mosoma X con esta enfermedad. Por el contrario, an no se han descrito variantes de IL13-R2 (tabla IV).

4.6.2. Seales de transducin de IL-4 e IL-13 receptores Existen algunas diferencias entre las seales que se transmite va IL4-R que son funcin de la cadena que le acompae. Tambin hay diferencias en la sealizacin que transmite el receptor de IL-13R. Las seales de IL4-R se asocian con JAK1 y las de la cadena C con JAK3, mientras que IL13-R1 se asocia a Tyk2 y todas las vas se requieren para la activacin de Stat6. Sin embargo, el IL-13R no puede activar a JAK3, lo que indica que la activacin de Stat6 se debe a la cadena de IL4-R. Por estas razones, Stat6 resulta ser una molcula crucial para la sealizacin por IL4 e IL-13. El gen que la codifica se sita en el cromosoma 12q13-14 y ocupa 19Kb con un total 23 exones. Por su importancia en la regulacin de seales que favorecen la sntesis de IgE, esta regin tambin ha sido propuesta como un "locus del asma atpico.

Existen factores que pueden ligar secuencias de esta molcula (entre ellos CD23) y por tanto, la disregulacin de la misma puede generar atopia. Sin embargo, este factor central tambien esta regulado, pues se ha descrito una molcula que puede regular negativamente a Stat6, se trata del factor BCL6, que puede reprimir la transcripcin de Stat6. Como consecuencia de esa regulacin negativa, tambin se ven afectadas las acciones de IL4 e IL-13, de modo que su deficiencia puede ser causa de atopia y asma. Ms an este este efecto puede, adems, ser redundante con la funcin que este factor ejerce en la transcripcin de la lnea germinal 5,13.

DE IGE Y PAPEL DE

4.7. MODELO DE PROPUESTO PARA LA SNTESIS CD23

Este modelo fue propuesto por Fuleihan y su grupo en 1993 (figura 8), quienes sealaron las principales interacciones necesarias para la colaboracin entre las clulas B (productoras de anticuerpos) y las clulas T CD4+, requeridas para conducir la sntesis de inmunoglobulinas haca el isotipo IgE. La

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IL-4
Antgeno procesado
receptor de IL-4 alergeno

CD-3 TCR CD-4 CD-4 0L

MHC clase II

Activacin transcripcin lnea germinal Activa cambio de isotipo

CD-40

Linfocito T

Linfocito B

IgE

Figura 8. Modelo de regulacin de la sntesis de IgE. El esquema representa los diferentes estmulos e interacciones moleculares entre linfocitos T y B que conducen a un aumento en la sntesis de IgE. (Adaptado de Fuleihan R, Ramesh N, Geha RS. Role of CD40-CD40-ligand interaction in Ig-isotype switching. Curr Opin Immunol 1993; 5: 963-967).

participacin de IL-4 es esencial para que el linfocito B IgM+/IgD+ cambie hacia linfocito productor de IgE. El linfocito B menos diferenciado, utiliza la IgM de superficie para capturar al antgeno y presentarlo al linfocito T. Tras la captura, el antgeno es endocitado y procesado generando pptidos que resultan de la fragmentacin del antgeno y se exponen en el contexto de las molculas MHC de clase II a los linfocitos T CD4+ que les reconocen a travs de su receptor clonotpico (TCR). Este reconocimiento implica una serie de cambios del linfocito T que conducen a su activacin11,37. En primer lugar tras la activacin, el linfocito T CD4+ libera IL-4, interleuquina que induce la expresin de su receptor especfico sobre la membrana del linfocito y, en segundo lugar, se produce la unin de la IL-4 a su receptor (IL-4R). Este receptor tiene un tallo citoplsmico que puede interaccionar con tirosin quinasas de la familia Janus (JAK 1-3), para ello, es necesario que el receptor se dimerice y que, su dominio citoplsmico se fosforile, tras lo cul se genera una nueva seal que conduce a la activacin de la transcripcin de la lnea germinal . En este proceso de transcripcin de la lnea germinal como ya se vi al principio, el gen que codifica la regin variable (parte de la molcula de anticuerpo que contiene el lugar de unin al antgeno), se desplaza de su posicin prxima al gen que codifica para la IgM, hacia una posicin prxima al gen que codifica para IgE36,38 (ver figura 3).

En segundo lugar, se sospecha que CD23, normalmente asociado a molculas HLA-DR y que se concentran en los lugares de contacto clula-clula, pueda estar implicado en la presentacin antignica a los linfocitos T. La expresin de esta molcula se incrementa por accin de IL-4, lo que facilitara la unin a su contraestructura (CD21) presente en los linfocitos T CD4+ y evitara la apoptosis de las clulas B en los centros germinales. Adems, el linfocito T una vez activado, expresa una molcula de aparicin ms tarda, el CD40L, que le permite ligar a la molcula CD40 presente en los linfocitos B y activar el proceso de cambio de isotipo hacia IgE, inicialmente inducido por IL-4. As, se logra establecer finalmente una cascada de amplificadora del sistema cuyo resultado sera un incremento en la sntesis de IgE. El par CD21-CD23, es el nico que controla la sntesis de IgE de una manera isotipoespecfica y est aumentado en pacientes alrgicos. Puesto que la IL-4 y los alergenos tambin incrementan la expresin de CD23 sobre linfocitos T, se ha sugerido que en individuos alrgicos, los linfocitos T CD23+ tambin podran interactuar con los linfocitos B CD21+ y conducir a un aumento de IgE. En individuos normales que no expresan CD23 en los linfocitos T no se producira IgE por esta va. Sin embargo, se ha observado que la estimulacin a travs de CD21, usando anti-CD21 o sCD23 recombinante en clulas de individuos normales, tambin aumenta la produccin de IgE tanto en sis-

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temas dependientes como independientes de linfocitos T35. Segn describi Gordon29, los acontecimientos aqu expuestos tendran lugar en condiciones de exceso de antgeno. En estas condiciones, la IgE libre sera deficitaria, puesto que se estara consumiendo en la neutralizacin del antgeno y, por tanto, el FcRII/CD23 quedara libre. Este CD23, no ocupado, se fragmentara generando molculas de sCD23 que activaran el mecanismo para producir nuevas molculas de IgE, efecto de reactivacin que no parece que pueda ser efectuado por los fragmentos de bajo peso molecular de sCD23. Por el contrario, en ausencia de exceso de antgeno tras haber sido este neutralizado, se volvera a un exceso de IgE y, en estas nuevas condiciones IgE podra unirse al CD23 de membrana, bloqueando la liberacin de CD23 soluble. La consecuencia directa de esta ltima unin sera el frenado del sistema amplificador de la sntesis de IgE y una regulacin negativa del sistema31.

DE LA LNEA GERMINAL

4.8. REGULACIN DE LA TRANSCRIPCIN

La recombinacin para el cambio de isotipo de IgE viene invariablemente precedida por la transcripcin de la lnea germinal (GLT). Como se ha indicado anteriormente, la unin de IL-4 o IL-13 a sus receptores sobre los linfocitos B conduce a la activacin del factor de transcripcin Stat6 que interviene en la induccin de la transcripcin en

el locus C. Los transcritos se originan por la activacin de un promotor en posicin 5 del exn I, localizado justo delante del cuarto exn C5. El promotor I contiene sitios de unin de varios factores de transcripcin, dos de ellos correspondientes a BSAP (Pax5), NFkB, PU.1, Stat6 y C/EBP (figura 9). De ellos, la activacin de Stat6 parece crtica para regular GLT, pero para un funcionamiento normal requiere la presencia adicional de los elementos BSAP y NFkB. A su vez NFkB y Stat6 sinergizan en la activacin del promotor, quizs por interaccin fsica, aunque tambin PU.1 sinergiza con Stat6 y segn Stz y Woisetchalger estas interaciones son suficientes para soportar la transcripcin de la lnea germinal conducida por Stat65,19. Interesantemente, tambin se ha informado que existe un regulador negativo del promotor I y de la transcripcin de lnea germinal . Se trata del factor BCL6, una protena con dominio POZ/zinc-finger que se expresa en linfocitos B y cuyo DNA diana en el promotor es similar al de Stat6. En consecuencia BCL6, puede ligar el sitio de unin de Stat6 y reprimir as la transcripcin de la cadena germinal inducida por IL-4. De hecho, se ha demostrado que ratones BCL6-/- tienen muy aumentado el cambio de isotipo hacia IgE y que ratones BCL6-/Stat6-/- no producen IgE. Por tanto, BCL6 puede ejercer amplios efectos en la regulacin de enfermedades alrgicas, pero no slo por esto, sino porque tambin regula la diferenciacin a Th2 y la expresin de CD235.

BCL6

Stat6
NFkB

BSAP C/EBP PU.1

Figura 9. Estructura del promotor de I. En el esquema se sealan los factores que interaccionan con distintas zonas de este promotor este promotor y se puede observar que Stat6 y BCL6 pueden competir por la misma estructura.

75

4.9. RESUMEN DE LAS BASES GENTICAS

QUE PUEDEN MEDIAR EN LA PRODUCCIN DE IGE Y DE LA ATOPIA

La expresin alergia atpica se asocia significativamente con la presencia de niveles sricos altos de IgE total. En estos niveles sricos influyen determinados factores como la edad, el sexo y la raza, circunstancia que se conoce desde hace tres dcadas por un estudio del grupo de Basarla, en el que observaron que el 59% de las variaciones del nivel de IgE en varones adultos y el 79% en el caso de los nios, eran determinadas por factores genticos39,40. Debido al hecho de que no todos los sujetos atpicos presentan niveles elevados de IgE y, a la inversa, que no todos los sujetos no atpicos tienen niveles bajos de esta inmunoglobulina, Marsh y colaboradores, propusieron la fijacin un valor lmite entre los niveles basales de IgE alto y bajo, que ellos estimaron era de 95 UI/mL (230 ng/ mL). Este nivel permita distinguir mejor, los grupos de sujetos alrgicos de los no alrgicos. Estos autores, propusieron la existencia de un gen regulador principal de la IgE (R/r), segn lo cual la hiperproduccin de IgE se heredara con carcter recesivo41. Posteriormente, se descart la asociacin de cualquier supuesto gen regulador de la IgE y el HLA, pero estudios ms recientes de Blumenthal y otros autores, indican que el nivel basal srico de IgE total viene determinado por la compleja interaccin entre diversos factores genticos y no genticos, sin que se haya podido demostrar una clara participacin de un solo gen principal42-44. No obstante, con frecuencia en las mismas familias en que se detecta una sntesis de IgE en cantidades elevadas, se observa una asociacin con la atopia y, aunque el patrn completo de la herencia es probablemente multignico, por estudios familiares se ha demostrado una clara transmisin autosmica de la atopia. Por tanto, parece clara la existencia de un importante control polignico sobre la produccin de IgE, pero no se descarta la presencia de un gen principal recesivo que pueda determinar la aparicin de niveles altos de IgE. De hecho, el despistaje de genes implicados en el genoma de 11 distintas poblaciones, lleg a relacionar el asma hasta con 18 regiones del genoma, de las cuales las ms relacionadas se sitaban en las regiones 2q, 5q, 6q, 12q y 13q. En la tabla IV, se ofrece una revisin actualizada de las principales regiones y genes candidatos.

As, aunque habra que distinguir entre genes que controlan la produccin de IgE total y los realmente implicados en el asma y enfermedades atpicas, las propuestas ms recientes para estudios de genes que controlan la respuesta IgE, evalan diversos factores relacionados con la dicotoma establecida por los dos tipos de seales necesarias para la sntesis de IgE: seales cognitivas dependientes de MHC que controlan la sntesis de IgE especfica y, seales no cognitivas que participan en la sntesis de IgE total y que se han asociado tambin con el asma. Estas ltimas seales incluyen el entorno gentico de los receptores especficos para IgE (FceRI, FceRII) que respectivamente se localizan en el cromosoma 11q y 19p13 y el de las interleuquinas IL-4, IL-13 y quizs de las regiones que las flanquean en la regin 5q31.1. Por otro lado, para valorar la accin de IL-4 e IL-13, ser preciso considerar las variantes genticas de estas citoquinas y de los diferentes tipos de receptores que medan su accin (IL4-RI, ILR4II o IL13RI e IL13RII)13,19,45. As, los principales focos de inters gentico seran: a) El primer foco de inters se centra en el estudio gentica de receptores de IgE. En el caso de FcRI, tal como inform inicialmente el grupo de Cookson, existira un gen dominante en el cromosoma 11q y, porque ms recientemente,este mismo grupo ha demostrado que en este cromosoma se localiza el gen de la subunidad de FcRI. Por esta razn, esta regin se ha asociado estrechamente con la atopia y, se ha llegado a proponer que el locus causante de la atopia se sita sobre el cromosoma 11q. Los genes FcRII, que mapean en el cromosoma 19 regin 19p13, son tambin de interers por estar implicados en la regulacin de la sntesis IgE. b) El segundo foco de inters se centra en el cromosoma 5, ya que se ha informado sobre una asociacin entre la IgE total en suero y la regin 5q31.1, donde que mapean los genes de interleuquinas reguladoras de la IgE total y la atopia (IL-4, IL-5, IL13). En contraste, no hay evidencia de asociacin de esta regin con la respuesta IgE especfica. c) Un tercer foco de inters, quedara centrado en los cromosomas 16 y X, donde se sitan los genes que codi-

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fican los receptores de IL-4 e IL-13, para los que se han descrito diversas variantes genticas. d) El cuarto foco de inters, esta relacionado con el cromosoma 6, especialmente en la regin 6p donde se sita el Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC). En contraste con las regiones anteriores sta marcara diferencias para la produccin de IgE especfica, cuya regulacin ha sido ampliamente asociada con los genes que codifican antgenos de clase II. Aunque, los primeros estudios fallaron para demostrar alguna asociacin en el caso de anticuerpos IgE especficos, posteriormente usando tcnicas de biologa molecular se han podido describir diversas asociaciones con la produccin de anticuerpos IgE especficos, como las del polen de ambrosa y dactilis glomerata con molculas HLA de clase II (DRB1* 0301 y DRB1*0401). Por el contrario, estudios realizados por Blumenthal no pudieron demostrar asociacin de HLA con los niveles sricos totales de IgE, mientras que un estudio reciente de nuestro grupo ha descrito por primera vez una asociacin con artemisa vulgaris (DR B1*01 y DRB*0501) que si parece relacionarse con un aumento de las cifras de IgE total y especfica de algunos antgenos caracterizados para esta planta44,46.

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