Prof.

Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

3. Reproduccin. EL OVARIO
1. ANATOMA GENERAL DEL OVARIO El ovario es la gnada femenina. En la mujer sexualmente madura es una estructura en forma de almendra de ~ 4x2x1 cm. y de ~ 7 a 14 g de peso, que se sitan en la pelvis, en posicin variable, en dependencia de los movimientos del tero. Se le sita en la "fosita ovrica" formada por la convergencia de la arteria hipogstrica, el urter y la arteria obturatriz. Su superficie es blanquecina con aspecto rugoso, aumentando las rugosidades con la edad. Se encuentran ligados al tero por el ligamento tero - ovrico y a la trompa por la fimbria ovrica. Una tercera conexin es el ligamento infundbulo plvico, pliegue del peritoneo del ligamento ancho por el que discurren las arterias ovricas, ramas directas de la aorta, las venas ovricas, que drenan a la cava inferior y a la renal izquierda, y la inervacin vegetativa. Histolgicamente se encuentra formado por: a) La cortical: Recubierta por un epitelio superficial, conocido impropiamente como epitelio germinal, situndose inmediatamente despus un estroma denso: la tnica albugnea, seguido de un espacio ms laxo donde estn las estructuras funcionales: los folculos. b) La medular: Es una continuacin del hilio ovrico, por donde transcurren los vasos sanguneos, que llegan por el ligamento infundbulo plvico, esta formada por un estroma entre el que pueden distinguirse restos embriolgicos mesonfricos y elementos celulares de aspecto secretor. No hay folculos. 2. FORMACIN DEL OVARIO La gnada primitiva se forma precozmente. En el embrin de 4 mm., en la cara interna del mesonefros se ve un engrosamiento de epitelio celmico con una condensacin del mesnquima mesonfrico subyacente: estas dos estructuras forman la cresta gonadal primitiva, idntica en ambos sexos, y que sufrir sus primeras modificaciones en la semana 6 post-fertilizacin cuando llegue el tercer componente gonadal, las clulas germinales. En este momento, la interaccin de las clulas germinales con el mesnquima y el epitelio de la cresta genital formarn la gnada primitiva, idntica en ambos sexos. a) Origen y aparicin de las clulas germinales Las clulas germinales aparecen en el embrin de 3 mm., en el endodermo extraembrionario del saco vitelino, en la proximidad de la vescula alantoidea (estadio de 12 somitas; 4 semanas posfecundacin). Se reconocen las clulas germinales por ser grandes, con ncleo y nucleolo prominentes, citoplasma vacuolado, repleto de glucgeno, pocas organelas, a diferencia del endodermo, teniendo como marcadores su actividad de fosfatasas alcalinas y esterasas inespecficas y el Oct4 (un factor de trascripcin especfico). b) Migracin a la cresta genital Desde el saco vitelino estas clulas germinales primordiales emigran hacia la cresta genital, en grupos, siguiendo el mesenterio dorsal y el mesnquima mesonfrico. La progresin se consigue por movimientos ameboideos, guiado por un quimiotactismo desconocido. Mientras progresan se multiplican por mitosis. Las clulas germinales primordiales alcanzan la cresta genital en el embrin

3. Rep. El ovario

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

de 5 mm. (5-6 semanas post fecundacin), y su llegada provoca el posterior desarrollo y diferenciacin gonadal de esta cresta genital. c) Multiplicacin, diferenciacin y desaparicin Mediante mitosis, en la cresta genital en la semana 8 habrn unas 600.000 oogonias, pero a partir de este momento van a concurrir tres fenmenos, mitosis, inicio de la meiosis y apoptosis. En la semana 20 hay unos 6-7 millones, de los que 2/3 son ya ovocitos de I orden. El inicio de la meiosis y la proteccin mediante el recubrimiento por la granulosa primitiva se hace paulatinamente imperativo, pues hacia el 7 mes, la apoptosis es creciente y al nacimiento no hay, prcticamente oogonias, solo ovocitos de I orden. El Ovocito se mantendr detenido en la profase de la meiosis I hasta poco antes de la ovulacin, la causa de esta detencin no se conoce, pero estara ligada a un factor inhibidor de la meiosis producido por las clulas de la granulosa que lo envuelven. d) Cambios iniciales en la cresta genital La llegada de las clulas germinales y su ubicacin inmediata debajo de la condensacin del epitelio celmico genera nuevas transformaciones. Estas se suelen dividir en dos fases: - Fase de gnada indiferente - Fase de diferenciacin gonadal: La fase de gnada indiferente se inicia al llegar las clulas germinales primordiales, que inducen cambios en esta cresta genital, aumentando el engrosamiento epitelial de superficie que proyecta hacia el mesnquima unos cordones celulares, cordones de Pflger. Entre los cordones epiteliales, el mesnquima, se organizan tambin formando los cordones medulares. El mesnquima es compartido con el mesonefros, metanefros y suprarrenal. e) Esto va a ser un ovario La fase de diferenciacin hacia el ovario se produce con el recubrimiento progresivo de las clulas germinales primordiales por las clulas de los cordones epiteliales, ests sern las clulas de la granulosa planas, que lo aslan y protegen. Las clulas germinales primordiales son ahora ya oogonias y el conjunto, granulosa plana recubriendo la oogonia, son los folculos primordiales. La diferenciacin mesenquimal que formar la teca interna no se har aparente hasta que el folculo primordial progrese en su desarrollo madurativo. f) Por que se forma el ovario La formacin del ovario requiere la existencia de dos cromosomas X de los que al menos uno se encontrara activo, aunque los genes necesarios implicados en el proceso no estn claros. Las delecciones terminales Xp11 a Xp22.1 se asocian a amenorrea primaria, y las delecciones de Xq13 a Xq26 producen amenorrea primaria o fallo ovrico prematuro. Lo genes asociados al X implicados en el fallo ovrico prematuro son el FMR1 ( Gene del X frgil ) en Xq27.3, el FMR2 en Xq28, XPNPEP2 en Xp25, el ZFX en Xp22.1, el BMP15 en Xp11.2. Tambin hay genes autonmicos como las mutaciones de FRS, el ATM, FOXL2. g) Regulacin de procesos relacionados con las clulas germinales primitivas La diferenciacin de las clulas germinales primitivas en el saco vitelino se debe a la influencia local de varios factores del la superfamilia del TGF, en especial de las protena morfogenticas del hueso (BMP-4, (BMP)-2 y BMP-8B), expresando sus mediadores Smad1 y Smad5, necesarios para su correcto desarrollo. La emigracin de las clulas germinales primitivas hacia la cresta gonadal precisa de la expresin de la Integrina 1 y del receptor c-kit y su ligando. 3. Rep. El ovario 2

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

Mientras de las clulas germinales primitivas emigran van multiplicndose por mitosis, lo que es estimulado por varios factores como el TIAR1 (codifica una protena que se une al RNA), el Pog (proliferation germ cells) y del LIF (leucemia inhibitory factor) y de varias citoquinas asociadas. Durante la migracin de las clulas germinales primitivas su DNA se modifica, borrndose progresivamente los imprintings genmicos heredados, un proceso que ha finalizado al alcanzar la creta genital coincide. Una vez se forme el folculo, con el crecimiento y la maduracin de las oogonias se establecern los imprintings propios de su origen femenino. La multiplicacin de las clulas germinales primitivas muestra cierta dependencia de las gonadotrofinas y del timo, que estimularan sus mitosis y posteriormente las de las oogonias. La apoptosis de las oogonias no recubiertas por la granulosa primitiva parece provocada por un dficit en factores de supervivencia, entre los que se implicara el ligando del kit, el LIF, el factor de crecimiento de los fibroblastos (FGF), o por inductores de la apoptosis como el TGF-, el ligando del Fas o la Activina. (para revisin adjunto el siguiente trabajo Marques et al, HRU 2008) 3. LOS COMPONENTES DEL FOLCULO a) El ovocito No es una clula quiescente, sino en actividad, manteniendo una interaccin constante con la granulosa envolvente a travs de los puentes nter citoplasmticos que se tienden mutuamente a travs de la membrana pelcida. El ovocito mantiene activos los genes que forman las mucoprotenas de la Zona Pelcida, la ZP1, ZP2 y ZP3, que estn controlados por el factor de trascripcin del oocito y que juegan un papel importante en la regulacin de la fertilizacin. El ovocito acta sobre la granulosa impidiendo su diferenciacin lutenica y regulando su multiplicacin a travs de factores como el GDF-9 y el BMP-15. El ovocito, con el crecimiento folicular, tambin inducir la formacin de la teca interna mediante el factor GDF-9. b) La granulosa Se origina en el epitelio celmico y se introduce en la rete ovari, y rodea a cada ovocito. No est vascularizada y esta separada por una membrana basal del resto del tejido gonadal. Sus clulas mantendrn un contacto estrecho entre ellas y con el ovocito a travs de gap junctions, formadas por las protenas conexina 37 (en el oocito) y conexina 43 (en la granulosa). La FSH induce la formacin de conexina 43, mientras que el pico LH bloquea su formacin y acelera los procesos de degradacin provocando la desconexin celular. La granulosa producir estradiol, en el folculo preovulatorio, aromatizando la Testosterona que le llega de la Teca Interna, su actividad aromatasa est estimulada por la FSH y la sntesis de testosterona en la teca por la LH. La granulosa muestra diferencias anatmicas y funcionales segn su ubicacin, por las influencias de las clulas vecinas, as las prximas a la pared folicular es la que tiene la mayor capacidad esteroidognica y ms receptores a las gonadotrofinas, mientras que las que estn en la zona intermedia muestran la mayor capacidad mittica. Las clulas del cmulo no expresan aromatasa ni casi receptores LH, pero son activas produciendo la matriz extracelular de hialuronidasa, proteoglicanos y protenas de unin de proteoglicanos cuando son estimuladas por las prostaglandinas en la ovulacin. Esta matriz extracelular provoca la expansin y la rotura folicular. c) La teca Provienen de las clulas mesenquimales y existiran varios fenotipos: En la medular ovrica estn las clulas intersticiales primarias, pero desaparecen ya en el ovario del embrin de 20 semanas. Ests clulas tienen una capacidad esteroidognica limitada, no 3. Rep. El ovario 3

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

tienen receptores LH y solo logran metabolizar compuestos C21 en C19. Las clulas tecaintersticiales (teca interna) se diferencian bajo la influencia del GDF-9 del oocito. Expresan el receptor kit, cuyo ligando es producido por la granulosa. Las clulas teca intersticiales producen KGF (factor del crecimiento derivado del keratinocito) y HGF (factor del crecimiento del hepatocito) que con la FSH estimulan a la granulosa, a que produzca aromatasa y kit-ligando, que a su vez estimulan a la teca en un loop de autoestimulacin, que tambin afecta al oocito ya que este tambin expresa el receptor kit. Son la fuente principal de andrgenos del ovario. Las clulas intersticiales secundarias, son residuos de las clulas de la teca interna de folculos atrsicos, que permanecen en su localizacin primitiva, funcionalmente operativas e inervadas por fibras noradrenrgicas. Las clulas intersticiales del hilio ovrico son clulas grandes lutein-like, indiferenciables de las clulas de Leydig, conteniendo tambin cristaloides de Reinke. Su actividad endocrina es relevante en la pubertad, en la gestacin y en la perimenopausia, cuando son ms prominentes. Estn inervadas por fibras simpticas no mielinizadas. d) Otros componentes del ovario - El estroma ovrico: Formado por fibroblastos sin actividad esteroidognica significativa. Tienen receptores andrognicos, por lo que en los hiperandrogenismos se produce un aumento de su densidad. Su funcin es de aislamiento de las estructuras funcionales del ovario, folculos y cuerpo lteo, tanto fsica como bioqumicamente. Producen factores de crecimiento y protenas de unin de estos factores. Estas clulas expresan cantidades significativas de grelina, una protena que se une e inactiva a la follistatina (que inactiva a la activina), protenas morfogenticas del hueso e IGF-binding proteins. Tambin segrega fizzledrelated protein, que se unen a los miembros de la familia de sealizadotes Wnt. - El epitelio de superficie: Tambin denominado epitelio germinal, residuo del epitelio celmico que dio origen a la granulosa y a la rete ovari. Se asientan sobre una membrana basal, mostrando cilios y microvillis apicales. Su papel est en la reparacin de los defectos resultantes de la ovulacin y en el transporte de materiales en la cavidad peritoneal. Este epitelio forma quistes de inclusin que muestran una tendencia a la metaplasia y neoplasia epitelial. Estos quistes no son solo consecuencia del proceso ovulatorio, los hay tambin en los ovarios con anovulacin crnica, por lo que tambin se ha propuesto que contribuyan procesos inflamatorios. - Leucocitos y macrfagos: Los macrfagos suelen situarse en el intersticio y alrededor de los capilares perifoliculares y no presentan variaciones cclicas, aunque infiltraran e influirn en el cuerpo lteo. En el periodo periovulatorio y con la atresia folicular hay ms infiltracin leucocitaria, en especial de mastocitos Tras la ovulacin eosinfilos y clulas T, por quimitactismo, van al cuerpo lteo, donde se activan, pero no estn implicadas en el proceso de involucin lutenica, pero producen linfocinas, que atraen y activan a los macrfagos, que aparecen esparcidos como clulas oscuras y estrelladas tipo K. Estos macrfagos influyen sobre las clulas del cuerpo lteo mediante contactos intercelulares y con la produccin de factores del crecimiento y citoquinas, y tambin influyen en la luteolisis. La gestacin previene la invasin de macrfagos.

3. Rep. El ovario

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

- Inervacin: Hay una inervacin extrnseca principalmente simptica y sensitiva y una menor proporcin de parasimptica. Su papel principal es la regulacin del flujo sanguneo, aunque tambin influyen en la sntesis hormonal, pero solo en animales se ha demostrado una accin nerviosa central reguladora de la esteroidognesis ovrica. A nivel local la estimulacin elctrica de las fibras simpticas que inervan la teca confiere a estas una morfologa esteroidognica, mientras que la denervacin disminuye la actividad de la 3hidroxiesteroide-dehidrogenasa. La estimulacin -adrenrgica sinergiza con las gonadotropinas estimulando la sntesis de andrgenos, por lo que esta hiperestimulacin podra estar implicada en algunos hiperandrogenismos. La inervacin intrnseca esta formada por neuronas que expresan el receptor del factor del crecimiento nervioso de baja afinidad p75, algunas son catecolaminrgicas Existen influencias intraovricas con las clulas germinales y somticas, con influencias paracrinas y autocrinas. 4. FOLICULOGNESIS Este desarrollo folicular ocurre en dos fases: - Fase de crecimiento lento - Fase de crecimiento acelerado La detencin de las mitosis de las oogonias supone la formacin del folculo primordial (60 m.) que queda constituido por un ovocito, detenido en la fase de dictiotene de la meiosis, una capa de granulosa de clulas aplanadas y la membrana basal. En este momento, el proceso de constitucin de los folculos primordiales es independiente de la accin de las gonadotrofinas (ocurre igualmente en el sndrome de resistencia ovrica). Los folculos primordiales, desde que se forman van pasando a folculos en otros estadios del desarrollo. Las causas por la que un folculo primordial pasa a la fase de crecimiento no se conocen, pero no depende de las gonadotrofinas, pues hasta la fase de folculo preantral se puede seguir en el animal hipofisectomizado. - Fase de crecimiento lento As, de forma continua, los folculos primordiales son reclutados para entrar en la fase lenta del crecimiento, que los llevar hasta la fase final del folculo preantral de 120 m, aunque los mecanismos responsables de este reclutamiento no se conocen, suelen ser los folculos primordiales ms corticales los que son reclutados primero. Este proceso es continuo desde el quinto mes de la vida intrauterina. Todo el desarrollo posterior depende, entre otros factores, de forma especial, de la accin de las gonadotrofinas, pues en el sndrome de ovarios resistentes solo hay folculos primordiales. La fase de crecimiento lento lleva a formar el folculo primario, los primeros ya se ven en el ovario del embrin del 5-6 mes, lo que conlleva el crecimiento del ovocito, el desarrollo de la zona pelcida y la conversin de la capa de granulosa aplanada e incompleta en otra cuboidea, que recubre totalmente al oocito, as como la aparicin de la teca interna. El nmero de folculos que entran en la fase de crecimiento lento es proporcional al nmero que quedan en el ovario, por lo que disminuyen con la edad.

3. Rep. El ovario

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

El crecimiento a folculo secundario supone la proliferacin de la granulosa, formando varias capas, y la aparicin de la teca externa, por la presin que ejerce el crecimiento folicular sobre el entorno. En esta fase la granulosa posee receptores FSH pero, la mayora de estos folculos, carecen de receptores LH en la teca interna, por lo que no pueden sintetizar androstendiona. Solo aquellos folculos que desarrollen receptores LH lograran seguir su desarrollo, la mayora de ellos, no obstante, entraran en esta fase en atresia. Parece que los que desarrollan receptores LH son los que alcanzan esta fase del desarrollo en el momento del pico de FSH de mitad del ciclo. La formacin del folculo secundario tambin lleva al acoplamiento funcional entre las clulas de la granulosa y el ovocito a travs de las gap junctions, que permiten los intercambios metablicos y de sustancias de bajo peso molecular. Estas estructuras permite que las clulas de la granulosa del cmulus controlen despus la reanudacin de la meiosis y sustituyen la falta de una red vascular interna permitiendo la comunicacin entre las distintas estructuras del folculo. En esta fase la teca interna adquiere su aspecto epitelial de clulas esteroidognicas y aparecen en ellas los receptores LH. Junto el desarrollo de la teca se produce la vascularizacin, con una red capilar que alcanza la membrana basal y que se acompaa de vasos linfticos. - Fase de crecimiento acelerado La fase acelerada de crecimiento tiene una duracin ~ 85 das. Alcanzada la fase de folculo secundario, o de folculo clase I, de unos 120 m. de dimetro, algunos de estos folculos preantrales van a iniciar la fase acelerada del crecimiento, que con una duracin de 85 das (tres ciclos sucesivos), desembocar en unos folculos antrales de unos 2 mm., o folculos clase V. El reclutamiento de parte del pool de folculos secundarios maduros a las fase acelerada del crecimiento la provoca la FSH. El folculo que ovula entr en esta fase al inicio de la fase ltea tres ciclos antes. Las caractersticas de esta fase acelerada del crecimiento es un aumento del nmero de clulas de la granulosa " x 600 " y del dimetro folicular " x 15 ", conseguido no solo por el aumento de las clulas de la granulosa sino tambin por la formacin y el crecimiento del antro (repleto de lquido folicular. La aparicin del antro supone el paso al folculo terciario. Estos poseen ya muchos receptores FSH en la granulosa y de LH en la teca interna. El paso de folculos preantrales a antrales se produce por el aumento de FSH que se inicia durante los ltimos das de la fase ltea y primeros das de la fase folicular. De este grupo de folculos terciarios se producir la seleccin folicular final. La fase terminal o exponencial del crecimiento folicular convertir el folculo antral de 2 mm. (Clase V) en folculo preovulatorio. Es del pool de folculos Clase V existente en la fase ltea tarda del ciclo del que surgir el que ovular en el ciclo siguiente. En esta fase el nmero de clulas de granulosa se multiplica aun por 600 y el dimetro folicular pasa de 2 a 20 mm., el folculo pasa de clase V a clase VIII con una duracin de unos 5 das en cada fase. En esta fase la cohorte de todos los folculos fase V que fueron reclutados a esta fase exponencial de crecimiento ir seleccionando los folculos hasta un nmero semejante, caracterstico de cada especie. La dominancia folicular se establecer en el folculo clase VI - VII de 5 a 10 mm. de dimetro, durante los 5 primeros das del mismo ciclo en que ovular, anteriormente esta dominancia no se puede establecer pues pueden haber folculos ms pequeos, pero con ndices de mitosis de la granulosa muy altos, capaces de alcanzar el tamao y la madurez de otros ms grandes, pero el 5 da del ciclo ovulatorio esto ya no puede ocurrir.

3. Rep. El ovario

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

As pues la dominancia folicular se establece en el folculo de 10 mm., una semana antes de que ocurra la ovulacin y esta sealada por la composicin diferenciada, respecto a folculos del mismo tamao pero no dominantes, del lquido folicular que posee FSH, tasas 10 veces superiores de estradiol y 10 veces ms nmero de clulas de la granulosa, mientras no se diferencia en el contenido de andrgenos. Tambin existen cambios en la teca del folculo dominante, con ms receptores LH y mucha ms vascularizacin. El establecimiento de la dominancia folicular es justificada por unos por una mejor capacidad de respuesta de un determinado folculo, en tanto que los otros folculos, en un medio menos favorable, regresan, pero tambin existen teoras que otorgan al propio folculo un papel dominante activo inhibiendo el crecimiento de los otros, en cualquier caso el proceso es mal conocido y es la expresin de la existencia de unos mecanismos de amplificacin autocrinos/paracrinos de reguladores intraovricos. Seguramente el alcanzar el momento ptimo de desarrollo, definido como la mayor precocidad y capacidad de respuesta a unas tasas crecientes de FSH, seria el factor ms importante para esta seleccin que se mantendra merced a fenmenos de amplificacin intraovricos: El folculo preovulatorio es el que al disminuir la FSH a partir del da 5 lograra amplificar su desarrollo con ventaja al aumentar el flujo sanguneo local por la accin del Factor endotelial del crecimiento vascular, ello aumenta su provisin de FSH, su capacidad esteroidognica, el aumento de Activina, que potencia las acciones locales de la FSH, el aumento de IGF I que aumenta las mitosis de la granulosa su capacidad de aromatizacin y la esteroidognesis de la teca, que a su vez son potenciadas por la FSH y estradiol en un circulo que se autoperpetua. Experimentalmente la electrocoagulacin del folculo ms grande (dominante) o del cuerpo lteo retrasa la aparicin del prximo pico LH en 12 das, lo que significara el tiempo necesario para que se estableciera una nueva dominancia y capacidad de ovulacin, lo que lleva a pensar que es el folculo dominante quien determina la duracin de la fase folicular y el cuerpo lteo de la fase ltea, actuando el hipotlamo hipfisis solo como facilitador de unos procesos que ocurren en el ovario. No parece que la seleccin del folculo dominante este predeterminada por un proceso intrnseco de ese folculo, pero una vez adquirida la dominancia no es transferible. Esta seleccin del folculo dominante puede ser sobrepasada por estimulacin con gonadotrofinas. El factor ms importante para que otros folculos no alcanzaran esta dinmica de crecimiento final seria la disminucin de la FSH, provocadas por los factores que segrega el folculo en una fase ms avanzada del desarrollo. 5. OVULACIN a) Cronologa y bases El fenmeno que mejor marca la ovulacin es el pico de LH, producindose la rotura folicular unas 36 horas despus, no siendo necesario el aumento paralelo de la FSH que se produce. Este pico de LH puede provocarse solo por los niveles de estrgenos, y en el ciclo normal este pico de LH ocurre 24 horas despus del pico de los estrgenos, pero la presencia de progesterona acorta su presentacin un 50 %: En el ciclo normal la progesterona comienza a aumentar unas 12 horas antes del pico LH. El IGF I acta sinrgicamente al FSH y LH para producir la sntesis de estradiol y progesterona. El pico de LH puede producirse sin variar la amplitud y frecuencia de los pulsos de GnRH. En el folculo dominante hay receptores de LH tanto en la teca como en la granulosa (en esta ms en la pared del folculo, disminuyendo progresivamente, estando ya ausentes en el cmulus) y un sistema de comunicacin intercelular con gap junctions que permite el paso de iones y molculas del tamao del AMPc entre las distintas ubicaciones celulares. Los receptores LH de la granulosa aparecen por la accin de la FSH y del estradiol, pero no eran operativos por las bajas tasas de LH. El pico de LH se bloquea 3. Rep. El ovario 7

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

en la hiperestimulacin ovrica con gonadotrofinas un bloqueo cuyo origen es ovrico, pensndose que hay una protena folicular que lo bloquea: La GnSIF (gonadotropin surgeinhibiting factor), que parece distinta a la "inhibina". b) Acciones secundarias al pico de la LH - Se bloquea en la granulosa la trascripcin de los genes que inducen sus mitosis y la sntesis de las conexinas, por lo que se produce una desconexin de la granulosa con el oocito; tambin se activan en la granulosa otros genes, como el COX-2 o la hialurnico sintetasa-2, as como la aparicin de receptores de la progesterona. - Como consecuencia de la aparicin del COX-2 (la COX-1 no se expresa en la granulosa), se produce la sntesis de prostaglandinas: Bsicamente E2, sntesis que no es dependiente de esteroides y que puede ser simulada por el AMPc y el GMP. La PGE2 pueden simular casi todas las acciones de la LH, pero si se bloquea su sntesis las acciones de la LH continan salvo la rotura folicular. Los inhibidores de la COX-2 en los humanos retrasan la rotura folicular y en los primates inhiben la ovulacin mientras se produce la luteinizacin del folculo. - El cmulus se expande por el aumento de la sntesis de cido hialurnico, que con el acoplamiento de la cadena pesada del inhibidor plasmtico de la inter--tripsina y la prostaglandina E inducen la expresin de la protena de unin del a. hialurnico TSG-6. - Luteinizacin de la granulosa, que en parte est inhibida por la Activina, que tambin disminuye la sntesis de Progesterona. La aparicin de receptores de Progesterona en la granulosa es importante para la que tenga lugar la ovulacin, pues los bloqueadores de la Progesterona evitan la ovulacin). La expresin de estos receptores no se relaciona con la activacin de la COX-2 y sus productos. - Se reinicia la meiosis, con expulsin del primer corpsculo polar, por la supresin de la inhibicin por el OMI (oocyte maturation inhibitor) c) Morfologa de la ovulacin La rotura folicular se produce con la aproximacin del estigma a la superficie, y no es un fenmeno explosivo, pues la presin intrafolicular no es alta, ni aumenta, la expulsin del huevo y del lquido folicular es progresiva y suave. Se requiere Progesterona y Prostaglandinas, pero tambin estas implicadas otros productos de la granulosa de la pared folicular (la mayora aun no identificados y que si fueran exclusivas del ovario tendran gran inters para establecer nuevas tcnicas de anticoncepcin) siendo relevante el factor de trascripcin CAAT (protena estimuladora de la unin a la protena III. Parece que se producen ms ovulaciones en el ovario derecho. d) Mecanismos finales implicados: Los mecanismos propuestos para la expulsin del oocito son: - Proteoltico: Las acciones de enzimas proteolticos son muy aparentes en la formacin y progresin del estigma y la rotura de la pared folicular, pues la aplicacin local de inhibidores de la protelisis evitan la ovulacin. Especialmente estaran implicados los activadores del plasmingeno (la progesterona y la FSH aumentaran su produccin) y las MMP (aunque no todas las MMPs estaran implicadas. Parece que las proteasa ms implicada seria la ADAMTS-1 (una desintegrin-metapoproteinasa) y tambin la Catepsina L, ambas inducidas por la progesterona - Mucificacin: El cmulus y el oocito se sueltan de la pared folicular antes de la ovulacin. En algunas especies se ha visto que este proceso se asocia al deposito de acido hialurnico, proceso que es estimulado por la FSH. En el lquido folicular hay mucopolisacridos cidos (proteoglicanos) que regularan la presin coloido-osmtica, 3. Rep. El ovario 8

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

que en el hipotiroidismo aumentan. In vitro se ve la incorporacin del SO4 en glicosaminoglicanos en la teca y granulosa para pasar rpidamente al lquido folicular, siendo menor esta incorporacin en el folculo preantral. La produccin de mucopolisacridos disminuira antes de la ovulacin al tiempo que aumentara su despolimerizacin y por tanto la presin coloido-osmtica. Esta incorporacin la inhibe la LH y la P4, que actuara de intermediaria de la LH. La heparina, que se forma en el lquido folicular, tiene acciones antimitticas y anti sntesis de protenas, aumentando la coagulabilidad del lquido folicular cuando la ovulacin esta prxima. La heparina sera un regulador local de las gonadotrofinas. - Muscular: La estructura folicular ms externa, la teca, tiene fibras musculares. La LH estimula la sntesis de prostaglandinas capaces de estimular la contraccin de estas fibras, aparte de que existe una inervacin simptica y una respuesta contrctil a las aminas simpaticomimticas. Tambin, en la rata se ha visto actina y miosina en la membrana del vulo, cuya funcin seria la rotacin, la expulsin del primer corpsculo polar, la formacin del espacio perivitelino y la segmentacin inicial. Las caractersticas de la ovulacin no permiten atribuir un gran papel a este tipo de acciones. - Angiognico: El lquido folicular tiene un factor angiognico que interviene en el suministro local de FSH y LH, y quizs tambin intervendra en el proceso de rotura folicular. e) Maduracin del oocito Los mecanismos implicados no estn claros, existe un inhibidor (OMI), ya que cuando se aleja del ambiente intrafolicular la meiosis se reinicia. Hay evidencia de que se existira un medidor intraoocitario que es un heterodimero G protena Gs, lo que implica el funcionalismo de la propia membrana oocitaria. El AMPc juega un papel crtico, y que el dficit de la Fosfodiesteresa PDE4D esta asociada a la ovulacin y a la disminucin de los ovarios a las gonadotropinas. La meiosis se reinicia por el pico de LH completndose y expulsndose el primer corpsculo polar. Entre las acciones relevantes esta la activacin de la Gs y la produccin de AMPc por las adenilciclasa de membrana, y entre los factores de provocacin de este fenmeno estara la transferencia por los Gap juctions de AMPc (los inhibidores especficos de la fosfodiesterasa la PDE3 lo inhiben). En la maduracin del oocito se produce primero la rotura de la vescula germinal, por la disrupcin de la laminas nucleares, lo que lleva a que la cromatina quede expuesta en el citoplasma , se condense, emigre a la porcin apical y se complete la meiosis I. La evolucin a la metafase de la meiosis II es inmediata pero queda detenida y no progresa si no se produce la fertilizacin. Tambin se sigue una maduracin citoplasmtica que se significa por la emigracin cortical de del retculo endoplsmico, mitocondrias y grnulos corticales. El aparato de Golgi desaparece. El citoesqueleto de Actina se modifica condensndose en la corteza en la zona del huso de la metafase II, un lugar, que al contrario que en el resto del oocito, no hay microvillis. Se activan UNAM de origen materno, producindose protenas, siendo relevante la formacin de IP3R-1. Tambin se producen modificaciones post-traslacionales de estas protenas. La maduracin del oocito en cultivo folicular, oocito y granulosa, la estimulan la LH, FSH y la PGE2, que inician la meiosis, tambin lo hace el AMPc, pero es menos efectivo. Sin embargo, el bloqueo de la sntesis de esteroides o prostaglandinas no afecta el inicio de esta maduracin. In vitro, sin granulosa la maduracin se inicia espontneamente pudiendo bloquearse con el AMPc. La granulosa bloquea la maduracin del oocito y no depende del contacto fsico sino que estara mediada por un pptido de un pm 2000 d que se deposita en el antro, el OMI. El pico de LH al disminuir las conexiones de gap junctions, disminuira su potencial y quedara liberado de las inhibiciones metablicas. Este proceso madurativo hasta la 3. Rep. El ovario 9

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

complexin de la meiosis I esta regulado por ciclinas y kinasas ciclino dependientes. La MPF (maturation promiting factor) es un heterodmero de la ciclina B y la cdk1,que es activado por el pico LH. La detencin en la meiosis II depende de la sntesis y acmulo de la c-mos desde el RNAm materno. 7. ATRESIA FOLICULAR Es un proceso que se inicia en cualquier estado de desarrollo folicular, por la ausencia de un estmulo trfico adecuado, y esta presidido por la apoptosis de oocitos y granulosa, siendo el sistema Fas-Fas la clave de este efecto. Los defectos de la protena proapopttica Bax induce un aumento de la dotacin folicular, mientras que los defectos en la protena antiapoptotica Bcl-2 lleva a una disminucin de la reserva folicular. 8. CUERPO LTEO El proceso se inicia aun antes de la ovulacin y del pico de LH. Las mismas clulas foliculares pasan de productoras de estrgenos y protenas reguladoras a productoras de progesterona y otros gestgenos, aunque tambin siga produciendo estrgenos. El aumento de receptores LH, inducido por los estrgenos y la FSH, lleva a la luteinizacin, aun antes del aumento de LH, vindose un rpido incremento de los enzimas implicados en la sntesis de progesterona. La invasin vascular del folculo colapsado con el desarrollo de una rica red vascular es un elemento esencial de la formacin del cuerpo lteo. Este fenmeno tambin est dirigido por el pico de LH que estimula la produccin de VEGF y FGF por la granulosa, la lo que tambin contribuirn las Angiopoyetinas y el receptor Tie-2 expresadas en las clulas endoteliales. Los componentes celulares del cuerpo lteo son heterogneos, las clulas lutenicas que proceden de la granulosa forman ms progesterona, estrgenos y relaxina, las que provienen de la teca interna producen andrgenos y 17--hidroxiprogesterona. La luteinizacin solo afecta a los tejidos del folculo dominante y no a al tejido semejante prximo de otros folculos por lo que se postula la existencia de un regulador local, que ms que un estimulante de la luteinizacin seria un inhibidor, el LI (Luteinizing inhibitor ): Las clulas de la granulosa in vitro se luteinizan. La funcin del cuerpo lteo es dependiente del estmulo de la LH, pues su ausencia hace regresar al cuerpo lteo, no obstante parece que, si no se produce gestacin, con la luteinizacin inicia un ciclo celular temporal preprogramado. En las fases lutenica inicial y media se puede observar la pulsatilidad de la secrecin de LH y de progesterona. La misma progesterona juega un papel trfico ejerciendo una accin intracrina de mantenimiento de la funcin lutenica. La expresin de receptores hCG/LH se conserva durante toda la vida del cuerpo lteo. La involucin del cuerpo lteo coincide con una disminucin de respuesta a la LH, por un fenmeno post-receptor, disminuyendo la expresin de los enzimas de la esteroidognesis. El origen de este fenmeno radicara en las acciones de la prostaglandina F2III (producida por el mismo cuerpo lteo), las citokinas de la familia de TNF-, el interfern IIy ROS producidos por el infiltrado leucocitario. Si se produce la gestacin la produccin de progesterona se mantiene de forma predominante en el cuerpo lteo hasta la 8 semana en que la placenta se convierte en la fuente principal. La regresin estructural del cuerpo lteo se produce por fenmenos deapoptosis y autofagolisis, en los que estn implicados los genes usuales de estos fenmenos.

3. Rep. El ovario

10

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

9. FINALIZACIN DE LA FUNCIN OVRICA La edad reproductiva de la mujer tiene un espacio temporal limitado, entre la menarquia y la menopausia. La menopausia marca el cese de la funcin generativa por el agotamiento de los folculos, lo que tambin produce el cese de la funcin endocrina. La primera expresin clnica de la disminucin de la dotacin folicular son las irregularidades menstruales. La disminucin de la dotacin folicular que se produce con la edad se acompaa de una disminucin su calidad. La disminucin folicular se acelera durante los ltimos aos previos a la menopausia, a partir de los 38 aos. El ovario de la menopausia no se caracteriza solo por la disminucin de su volumen y de la dotacin folicular, sino por el aumento del tejido conectivo y la esclerosis y disminucin de los vasos. Tambin el epitelio superficial se aplana y desaparecen los cilios. Varios aos despus de la menopausia todava pueden encontrarse algunos folculos primordiales y en crecimiento. El envejecimiento ovrico tiene un componente gentico que viene a explicar el 85 % de su variabilidad, y que seguramente estara mediado por variantes del receptor de los estrgenos , de la superxido dismutasa y de la apolipoproteina E. La aceleracin de la prdida folicular podra estar facilitada por el aumento de FSH. La calidad de los oocitos tambin disminuye, lo que se traduce en un aumento del nmero de las aneuploidias, un efecto que podra depender de los efectos del estress oxidativo y por la disminucin de la microcirculacin, pues la hipoxia folicular provoca alteraciones del citoplasma de los oocitos, alteraciones en la segmentacin postfertilizacin y defectos de la segregacin cromosmica. Las alteraciones en el aparato mitico serian las decisivas en la generacin de las alteraciones cromosmicas. Tambin el aumento de mutaciones en el genoma mitocondrial influira en la calidad de los oocitos, que serian incapaces de mantener el desarrollo embriolgico inicial si son fertilizados. El tabaco es una influencia ambiental que acelera todos los cambios que ocurren con el envejecimiento, probablemente por el aumento de cotinina en el lquido folicular, que se asocia significativamente con la peroxidacin de los lpidos. Los inhibidores del stress oxidativo ejercen una accin semejante a la FSH rescatando de la atresia folculos en crecimiento, por lo que el efecto del tabaco podra ser a travs de la aceleracin de la mutaciones del DNA mitocondrial. La actividad endocrina del ovario disminuye con la menopausia, manteniendo cierta secrecin de andrgenos, muy diferente segn las mujeres. El andrgeno principal es la Testosterona pero la produccin diaria es la mitad que en la mujer premenopasica, una descenso semejante se observa en la Androstendiona. La sntesis fundamental ocurre en las clulas hiliares, ya que entre las clulas del estroma excepcionalmente solo algunas expresan los enzimas necesarios para la sntesis esteroidea. La sntesis de andrgenos del ovario mantiene cierta regulacin por las gonadotrofinas. Los estrgenos en la menopausia proceden de la aromatizacin perifrica de los andrgenos de procedencia ovrica y suprarrenal. 10. REGULADORES DE LA FUNCIN OVRICA a) Gonadotrofinas La funcin ovrica se produce, en gran medida, bajo la regulacin de las gonadotrofinas hipofisarias y la prolactina. La FSH es el principal estmulo del crecimiento folicular, teniendo receptores a la misma solo las clulas de la granulosa de los folculos secundarios en crecimiento: La FSH estimula las mitosis de la granulosa ( mediada por factores del crecimiento de origen somtico o del oocito ), el nmero de sus Gap Juctions), el contenido en aromatasa y la expresin de P450 reductasa y 17-b 3. Rep. El ovario 11

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

hidroxiesteroide dehidrogenasa, el aumento de sus propios receptores y en fases avanzadas tambin de receptores a LH, y la produccin de Inhibina, Activina e IGF I en los folculos preovulatorios. Sin LH consigue la maduracin folicular hasta la fase preovulatoria. El AMPc no consigue duplicar todas las acciones de la FSH, por lo que deben existir otrosmedadores intracelulares de sus acciones. La LH estimula la esteroidognesis ovrica en la teca y en el cuerpo lteo y los procesos de la ovulacin. No se necesita para el crecimiento y maduracin folicular. El folculo en crecimiento solo tiene receptores LH en la teca interna, donde estimula la esteroidognesis con la formacin fundamental de Androstendiona. En el folculo preovulatorio aparecen tambin receptores LH en la granulosa, necesarios para desencadenar los procesos de la ovulacin y estimular la esteroidognesis del cuerpo lteo. La aparicin de receptores en la granulosa en el folculo maduro permite completar el proceso solo con la LH, pero retrasa la maduracin de los folculos pequeos y la actividad aromatasa en los mismos. Los diferentes intermediarios de la accin de la LH, AMPc, IP3 y Fosfolipasa C son sensibles a las concentraciones de LH. Es necesario para el mantenimiento del cuerpo lteo. La Prolactina (PRL) aumenta y mantiene los receptores de LH en el cuerpo lteo y probablemente tambin colabora en la ovulacin inhibiendo el activador del plasmingeno. Su papel en la funcin ovrica humana es mnima. b) Esteroides Tanto los estrgenos, como los andrgenos y la progesterona estn involucrados en el funcionalismo ovrico. Los Estrgenos actan en el crecimiento ovrico a nivel general mediante su accin inhibitoria sobre la liberacin de gonadotrofinas. A nivel local colaboran a un aumentar el ndice de mitosis de la granulosa, quizs a travs del aumento del IGF I, a una mayor actividad aromatasa y al incremento de receptores FSH. Los Andrgenos son producidos por la teca interna desde donde tienen que difundir a la granulosa para ser aromatizados a estrgenos. El andrgeno producido por la teca es la Androstendiona que si no es rpidamente aromatizado en la granulosa se convierte en Dihidrotestosterona que contrarresta los efectos de los estrgenos e induce atresia folicular. La Progesterona es sintetizada por la granulosa luteinizada y por el cuerpo lteo. c) Pptidos ovricos Mediante efectos endocrinos, paracrinos y autocrinos una gran variedad de pptidos foliculares actan en el funcionamiento ovrico en concordancia con las gonadotrofinas y esteroides. La Inhibina y la activina son dos pptidos formados por dos subunidades proteicas, la subunidad es nica de la inhibina, mientras que la subunidad , existen dos la A y la B , combinndose con la produce dos inhibinas y combinadose entre si tres activinas. Descrita en los aos 30s es producida por la clulas de la granulosa (A) tanto en el folculo como en el cuerpo lteo (B) bajo la estimulacin de las gonadotrofinas. Se observ que inhiba la secrecin hipofisaria de FSH, un efecto que en situaciones fisiolgicas realizan en mayor medida los estrgenos. En la fase lutea los niveles ms elevados de inhibina y estrgenos son responsables de los bajsimos niveles de FSH, lo que impide el crecimiento adicional de folculos. Tambin actuara como potenciadora de la LH en la sntesis de androstendiona y como inhibidora de la aromatasa. La Activina seria el antagonista funcional de la inhibina, aunque no se conoce el tipo celular que la produce. Mantiene tambin una semejanza estructural y funcional con el TGF y con el FIM, aunque en la fase periovulatoria la activina acta ms como inhibidora que como estimulante de la FSH. A 3. Rep. El ovario 12

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

nivel de la granulosa promociona las mitosis, el aumento de aromatasa, la aparicin de receptores FSH y LH y la sntesis de progesterona (acciones que no ejercera en el folculo preovulatorio donde evita la sntesis de progesterona y la luteinizacin folicular) mientras que en la teca disminuye la sntesis de andrgenos La Follistatina tiene una estructura de una cadena polipeptdica simple siendo producida por la granulosa con unas relaciones con la FSH semejantes a la inhibina a nivel hipofisaria y contrarrestando el efecto estimulante de la aparicin de receptores FSH de la activina. Podra actuar como una protena de unin de la activina. Los IGF son polipptidos implicados en el crecimiento del tejido mesenquimal en el cuerpo y el crecimiento folicular. Existen receptores tanto en la teca como en la granulosa, donde son regulados endocrinolgicamente bajo el estmulo de la FSH. El IGF I es producido por la granulosa estando estimulada por la FSH, pero tambin podra estar implicada en su funcin IGF I de otro origen, aunque la teca no produce cantidades apreciables. Sus efectos principales es estimular la mitosis de la granulosa y el aumento de aromatasa lo que complementa al finalizar la fase folicular en la induccin de receptores LH en la granulosa, la estimulacin de la sntesis de progesterona y de la formacin de androstendiona por la teca. El TGF es una protena que modula el crecimiento epitelial y el desarrollo embrionario y que en el ovario la produce tanto la teca como la granulosa. Regulara el crecimiento del mesenquima ovrico, pero tambin las mitosis de la granulosa, la aparicin de receptores LH y la regulacin de la esteroidognesis. El TGF y el EGF son producidos por la teca pero los receptores estn en la granulosa, a la que estimula a proliferar pero a la que bloquea todas las otras acciones de la FSH asi disminuye la aromatasa, la aparicin de receptores LH, la sntesis de progesterona y la de inhibina. El FGFs es tambin un polipptido con afinidad por la heparina, que intervendra en la regulacin del crecimiento y diferenciacin de la granulosa en el folculo y en la angiognesis del cuerpo lteo, pero contrarrestara otros efectos de la FSH como la induccin de aromatasa, la aparicin de receptores LH, la sntesis de progesterona y la de inhibina. In vitro aumenta el nmero de divisiones que pueden presentar las clulas de la granulosa. El Factor Endotelial de Crecimiento Vascular se describi en el hipotlamo como mantenedor del flujo sanguneo en los sistemas portales, para ser descrito despus en el folculo en crecimiento, contribuyendo a su desarrollo al aumentar el flujo sanguneo, lo que permite la llegada adicional de FSH, cuando sus tasas disminuyen. El Activador del Plasmingeno del tipo tisular es producido por las clulas de la granulosa mientras que el del tipo uroquinasa por la teca. La sntesis por la granulosa aumenta enormemente con el crecimiento folicular, con un mximo antes de la ovulacin: El plasmingeno intervendra en la maduracin folicular y en la ovulacin mediante la disolucin de la membrana basal y el estroma perifolicular. Tambin la GnRH, Relaxina, VIP, EGF y prostaglandinas estimulan la sntesis de activador del plasmingeno por la granulosa. Las Prostaglandinas se encuentran en el ovario, as como los leucotrienos, siendo el lugar de produccin de ambos grupos de sustancias la granulosa. En el lquido folicular la F2 aumenta pero la E2 disminuye antes de la ovulacin, tambin se produce I2. Sus funciones serian reguladoras de la hemodinmica local, la permeabilidad capilar, la quimiotaxis, pero tambin las actividades enzimticas del activador del plasmingeno y la colagenasa. La Citoquinas son pptidos formados por las clulas del sistema inmune para regular el crecimiento y diferenciacin celular. Las clulas inmunes que van al ovario forman interleucina, interfern y factor estimulante del crecimiento de las colonias que intervendra en el funcionalismo ovrico. 3. Rep. El ovario 13

Prof. Carlos Simn

Curso Acadmico 2009-2010

El sistema Renina-Angiotensina colabora a la angiognesis del cuerpo lteo, pero la angiotensina II tambin inhibe la sntesis de progesterona y estimula la de FGF. Otras sustancias que se encuentran en el ovario y que intervienen en su fisiologa son la Oxitocina, Vasopresina, Relaxina, Sustancia P, VIP, PGF, pptidos derivados de la proopimelanocortina y la colagenasa. d) Derivados del Oocito El Oocito es una clula metablicamente activa que acta sobre el desarrollo de la granulosa y de la Teca merced a dos factores, de la familia del TGF-b, el Grow-Development Factor- 9 (GDF-9) y la Bone Morphogenetic Protein-15 (BMP-15).

3. Rep. El ovario

14