En los ltimos 25 aos se descubri, caracteriz y purific un grupo importante de mediadores peptdicos.

Estos mediadores, denominados citocinas, funcionan como reguladores en alta y baja respuestas inmunitarias, inflamatorias y reparadoras del husped a la lesin, Muchos de estos polipptidos semejantes a hormonas se secretan en el curso de respuestas inmunitarias e inflamatorias. Las citocinas producidas por linfocitos se designan linfocinas, en tanto que los pptidos sintetizados por monocitos o macrfagos se conocen como monocinas. Las citocinas funcionan como seales intercelulares que regulan respuestas inflamatorias locales y, en ocasiones, sistmicas. Las citocinas se distinguen de hormonas endocrinas en que son producidas por diferentes clulas ms que por glndulas especializadas. En general, no existen en el suero y act'an en forma paracrina (es decir, locales, prximas a las clulas que la producen) o autocrina (es decir, directamente sobre las clulas que la producen) en lugar de endocrinas, esto es, sobre clulas blanco distantes. Las citocinas modulan reacciones del husped a antgenos extraos o agentes nocivos al regular proliferacin, movilidad y diferenciacin de leucocitos y otras clulas. Aunque algunos linfocitos, macrfagos, queratinocitos y lneas de fibroblastos transformados secretan citocinas en forma espontnea al medio de cultivo, clulas en reposo y la mayor parte de lneas celulares normales deben ser estimuladas para producir citocinas. Los linfocitos T o B obtenidos de donadores inmunizados pueden activarse especficamente por antgenos para producir linfocinas. Las clulas activas producen muchas citocinas en forma simultnea y son difciles de aislar una de otra. Ahora que bastantes genes que codifican citocinas se han clonado, se sabe que son numerosas y muestran caractersticas genticas no relacionadas. En general, las citocinas son pptidos o glucprotnas secretores con pesos moleculares que oscilan de 6000 a 60 000. Son compuestos muy potentes que actan en concentraciones de 1.0-10 -10-15 mol/L para estimular funciones en clulas blanco despus de interacciones especficas entre ligando y receptor. Esta actividad tan delimitada ha facilitado su identificacin por bioanlisis, pero las cantidades tan pequeas que se producen han impedido su purificacin. No obstante, la caracterizacin de las citocinas ha avanzado a un ritmo fenomenal gracias a los desarrollos tecnolgicos recientes: 1) uso de clonas celulares que producen concentraciones elevadas de un nmero limitado citocinas; 2) evolucin de tcnicas de cromatografa en lquido (HPLC), de elevado rendimiento; 3) disponibilidad de anticuerpos monoclonales para neutralizacin e identificacin; 4) purificacin por inmunoafinidad y, en especial, 5) el uso de tcnicas de clonacin de genes. Una sola citocina purificada puede tener efectos mltiples sobre la proliferacin y diferenciacin de muchos tipo celulares. En consecuencia, las citocinas pueden mostrar un Traslape considerable de sus efectos biolgicos sobre tejidos linfoicle, mieloide y conectivo. Ademas citocinas de propiedades biolgicas distintas pueden tener acciones semejante al iniciar la produccin de una cascada dee citocinas idnticas o de una por otra.

INTERLEUC1NA-1 (IL-1)
Consiste de dos pptidos distintos que muestran multiplicidad de actividades inmunizaras,

inflamatoria y reparadoras. stas incluyen efectos sobre clulas linfoides y no linfoides (fig. 71). En 1972, se descubri un factor activador de Iinfocitos (LAF), que en comitgeno para timocitos murinos, en el sobrenadante de cultivos de clulas sanguneas perifricas humanas adherentes y de esplenocitos murinos. Adems, LAF .ano era comitgeno ya que incrementaba de manera sinergista la respuesta p iferativa de iinfocitos murinos a lectinas, corno concanavalina A (Con A) o tV -emaglutinina (PHA). En 1974, se inform cr.c monocitos humanos cultivados secretaban tambin un factor activador de clula.* 3 (BAF), que estimulaba la produccin de anticuerpo por esplenocitos de ratn con escasas clulas T. Anlisis subsecuentes revelaron que las propiedades qun ::.is de LAF y BAF eran semejantes y que tambin se parecan a la estructura d factores pirgenos derivados de macrfagos, llamados pirgenos endgenos. En 979, esto.s factores se bautizaron de nuevo como inter- leucina-1 (TL-1). Esta se . mtifica por bioanlisis de su efecto comitgeno sobre timocitos, por lneas celulares reactivas a L-1 o, en poca ms reciente, por anlisis kimuosorbente ligado, a enzima (ELISA).
Productores e ncluccvas de SL-1
La IL-1 se sintetiza en once cipos de macrfagos, sin importar su tejido de origen, y tambin en queraunocitos, clulas dendrticas, astrocitos, clulas microgiiales, linfocitos B normales, clonas cultivadas de clulas T, fibroblastos, neutrfilos, clulas endoteliales y clulas de msculo liso. Sin embargo, factores anlogos a IL-1 se producen virtualmente en todos los tipos de clulas nucleadas. Aunq ue algunas lneas celulares sintetizan cantidades bajas de IL-1 constitutivamente, la mayor parte de las clulas normales deben ser estimuladas por diversos asentes para producir IL-1. Esta

W BBBBBNBB* B

IHSBRIi^U ^HMRIPIi..-^
Cuadro 7-1. Propiedades caractersticas de las cod.

^HRHMHRp

Citocina

PM

Fuentes principales '|

celulares Tipo primario de actividad

IL-1

17 500

M acrfa gos y ot ros I n ni u n opo t e n c i a c i Inflamatoria '; * n (cuadro 7*2)

Uy||^g^^g|||

IL-2

15 500

Linfoeiios T y LGL 1

Factor de crecimiento de Activa clul; clulas Ty B

IL-3

14 000-23 000

Linfocitas T

Fa c t o r d e p ro 1 i fe rae Estimula la i n hematopoytica rnicloides te.

p.

IL-4

20 000

ClulasTH 1

Factor de crecimiento de Favorece el c p rol clulas Ty 0; estimula i fe rae i reacciones de IgE

"i

L-5

1.8 000

CclulsTH

Estimula a eosinilos

clulas

y Favorece el cambio

.ivi . . n'.O:

L-

22 000-30 000

t* Fibroblastos y o i ros Factor de crecimiento de Factor de ere. hibridomas; aumenta la produccin . policlonal : l'S' i .1 inflamacin

L-7

25 COO

Clulas estrmicas 1;

Linfopoyetina

Genera clula;, crecimien

de s fac

L-8

8 SCO

M a er f a gos y o t ros

Quimioatraccin de neuirfilos y linfocitos T

Regula el infiltracin el.

arrai,

G-CSF

18 COO-22 000

Monodias y otros

Facforde mieloide

proliferacin G e n e ra nc u t r fi 1 o.-;

M-CSF

18 000-26 000

Moi^ocilos y oros

Factor de porli fe racin de Genera macrfc macrfagos

GM-CSr

14 000-38 000

Ce;ulas Ty oros

Factor de proliferacin monomieiocica

Mielopoyesis

!FNa FNp1IFNy

18 000-20 COO 25 000 20 000-25 000

Leucocitos Fibroblastos Linfoeiios T y clulas NK

Antiviral, antiproiiferativa e in munomodu ladera

Estimulacin de r Induccin de an: celular (por eje

-il u lai v.bm

TNFc LT T'NF/3

17 000 18 000

Maerp fagos y O ros Li n foci t os T

inflamatoria, inmunopotenciadora y tumoricida

Trombosis vascu

! ! ! >no

TGF

25 000

Plaquetas. hueso y oros

Fibroplasia e inmunosupresin

Curacin de herid:; . , n ode la ci n sea

produccin es activada por diferentes agentes, Incluyendo adyuvantes como lipopolisacrido (LPS) y muramiidipptido (MDP), irradiacin ultravioleta nociva, partculas de urato o silicato, hidrxido de aluminio y microorganismos. Los agentes que activan a linfocitos pueden estimular a macrfagos a producir IL-1, por contacto directo entre clulas, que se controla genticamente por molculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) clase II (captulo 4) o por produccin de linfocinas como TNF, CSF o IFNy que estimulan a macrfagos. La naturaleza del estimulante determina si IL-1 se acumula de manera predominante en sitios intracelulares o si se libera al entorno extracelular. Por ejemplo, partculas de ltex, LPS y zimosn, estimulan un incremeto de IL-1 in- tracelular y extracelular; en tanto que partculas de slica y acetato de forbol miristato (PMA), estimulan en forma preferencial la secrecin de IL-1 al medio. No se han identificado factores celulares intrnsecos que regulen la liberacin de IL-1 pero al parecer, el dao celular es una causa. IL-1 se encuentra en algunos tejidos en ausencia de estmulos nocivos; por ejemplo, lquido amnitico y orina contienen concentraciones significativas de IL-1 e IL-15. La expresin de RNAm y la produccin de IL-1 se observan en piel y cerebro humanos. Ai tiempo de la fase ltea del ciclo menstrual y durante ejercicio extenuante, las concentraciones de IL-1 en el plasma humano se elevan. Los antagonistas especficos de la produccin de IL-1 son de gran inters teraputico, debido a que se implica en enfermedades inflamatorias crnicas. Los corticosteroides, que ya tienen uso extenso como antiinflamatorios, inhiben la produccin de IL-1 por macrfagos. Las prostaglandinas, que por s mismas causan inflamacin, al parecer inhiben la secrecin de IL-1 por macrfagos. As, por ejemplo, prostaglandina E2 (PGE2), un producto de la va de la ciclooxigenasa, ejerce un efecto negativo sobre la produccin de IL-1. De modo inverso, los inhibidores de la va de lipooxigenasa reducen la cantidad de IL-1 liberada, y es probable que los leucotrienos estimulen la produccin de IL-1 (captulo 13).

Estudios de estructura y funcin de JL-1

L-1 existe en dos formas moleculares llamadas IL-1 e IL-1/3. Hasta la fecha en todas las especies se han identificado dos genes distintos que codifican IL-la e IL-1/3 (cuadro 7-2). Las dos molculas humanas que exhiben 45% de homologa a nivel nucletidos y slo 26% de homologa a nivel aminocidos, muestran antigenicidad distinta. A pesar de esto, la potencia y las actividades de IL-la e IL-1 /? son casi idnticas y se unen con igual afinidad a los mismos receptores de superficie. Muchos tipos celulares expresan los dos genes IL-1, perd las proporciones de IL-la e IL-1/3 pueden variar ampliamente; por ejemplo, los^monocitos producen de preferencia IL -1/3, en tanto que los queratinocitos sintetizan cantidades rrayores de IL-la. Al principio, IL-la e IL -1/3 se traducen como propptidos (PM 31000), que son procesados por enzimas para producir una forma soluble (PM 17 000), en la membrana o lejos de ella, que luego actan en el medio extracelular. En la superficie de las clulas se ha detectado IL-la con actividad biolgica (pero no IL-1/?) y as, es posible que participe en interacciones durante el contacto de clula a clula.

Cuadro 1-2. Propiedades de atocinas inflamatorias humanas

Propie erad Cromosoma Proforma 2 271 aminocidos (L-Ia), 269 aminocidos (IL-1/3) Forma madura 159 aminocidos (IL-lcr), 153 aminocidos (L-1/3) Fuentes celulares IL-1 236 aminocidos (TNFa), 204 aminocidos (TNF/3) 157 aminocidos (TNFa), 171 aminocidos (TNF/?) TNF

M a er f agos, q u e ra t i n oc i t Macrfagos, linfocitos Ty B, q u e r a os, clulas endoteliales, t i n oc i t os, f i b ro b 1 a s t os, fibroblastos, astrocitos, clulas endoteliales, astrocitos linfocitos B y T (TNFa); subconjnto ThI, lneas celulares B con EBV (TNFp)

Receptor

GlucoproteTna 60-80-kDa Kd 10! mol/L 50-5 000 sitios/clula

G1 u c o p r o t e n a 8 0 - k D a Kd = 10'10 mol/L 1 000-10 000 sitios/clula

Efectos

i ti vivo

Infiltracin neutrofflica locaj Hipersensibilidad tipo tarda Fibroplasia y angiognesis Pirgeno endgeno Reactantes de fase aguda Neutro filia Radioproteccin Adyuvante y agente an ti microbiano

Infiltracin neutrofilica local Reaccin de Schwartzman y necrosis tu moral Pirgeno endgeno Reactantes de fase aguda Caquexia, neutrofilia Radioproteccin Adyuvante Angiognesis

Receptores para iL-1

IL-1 acta sobre clulas blanco por medio de receptores de elevada afinidad en la membrana plasmtica. El nmero de receptores vara de alrededor de 100, en la clula T? a algunos miles, en fibroblastos, pero su afinidad es relativamente constante (k d - 10'10 mol/L), lo cual sugiere que la mayor parte de tipos celulares poseen un receptor comn para IL-1. La pieza extraceiular del receptor para IL-1 pertenece a la superfamilia de genes para inmunoglobulinas. Hay una regin transmembrana de 21 aminocidos y una cola citoplsmica con 217 aminocidos. La expresin de los receptores para IL-1 en la superficie celular es regulada en baja por internacin despus de unirse a IL-1. Por el contrario, glucocorticoides y prostaglandinas incrementan la expresin de receptores funcionales para IL-1 en algunos tipos celulares humanos, por ejemplo, fibroblastos y clulas B, pero no en clulas T, monocitos o neutrfilos. An no se identifican los procesos intracelulares crticos despus de fijacin de IL:1 a su receptor, aunque en algunos tipos celulares se han detectado concentraciones elevadas de diacilgiicerol, AMP cclico (AMPc), protenas G y ornitina descarboxilasa.

Inhibidores de las actividades de IL-1

La actividad de IL-1 puede ser regulada por factores endgenos que afecta produccin de atocinas por modulacin, ya sea de la expresin de receptores la transduccin de seal despus de que la produccin de receptores se ha de cadenado. Un antagonismo inespecfico potente a las acciones de IL-1 se atribu factor transumi ante de proliferacin 3 (TGF/J), corticosteroides y hormona o timulante del me la noc to (MHSa). Un factor inhibidor en la orina de pacientes leucemia mielgena compite en forma especfica con IL-1 por la fijacin a receptores. La inhibicin farmacolgica de la actividad de IL-1 (por ejemplo, corticosteroides) puede ser ti] en el control de algunas reacciones inflamatoria

Efectos inmunifarios e inflamatorios de 1.-1 y IMF

TNF tambin consiste de dos pptidos distintos con actividades inmunitari locales mltiples y tambin inflamatorias sistmicas. Adems, se incluyen efectos S clulas linfoides y no linfoids (figura 7-2). Al principio se describi a TNFa ci una actividad en el suero qufe induca necrosis hemorrgica de ciertos tumores in y, ms adelante, se descubriqxn forma independiente como caquectina, un medie circulante de desgaste durante infestacin parasitaria. TNFa se produce macrfagos activados y en .otras clulas, y tiene un amplio espectro de activid biolgicas sobre numerosas clulas blanco inmunitarias

y no inmunitarias. fotoxina, que es, en forma Drimaira, un producto de linfocitosT, se designa tami como TNF3. TNFa y TNF3 se unen al mismo receptor en clulas blanco > consecuencia, tienen las mismas acciones biolgicas.

Genes para TNFa y TNF 3 y sus productos

El gen para TNFa humana se localiza dentro de los genes MHC o prximo a e en el brazo corto del cromosoma 6, ligado en forma estrecha con el gen para T (cuadro 7-2). El grado de'homologa entre TNFa y TNF/3 es de 46% a r nuclctidos y de 28% a nivel de aminocidos. La forma precursora de TNFa cons de 236 aminocidos. Antes o durante secrecin, 79 aminocidos de! extremo an se desprenden por accin enzimtica de la forma pro para producir TNFa sol madura (PM 17 400). Aunque TNFa y TNF/3 (PM 20 000) no muestran reac< inmunitaria cruzada, se unen con igual afinidad a los mismos receptores. Si bie lisis de clulas tumorales por macrfagos activados y fijos en formaldehdo pu bloquearse con anticuerpos monoclonales a TNFa, se ha propuesto una formi TNFa activa unida a membrana.

Inductores y productores de TNF

Muchos tipos celulares pueden sintetizar TNFa. Monocitos y macrfagos prodi; TNFa en respuesta a PM A, LPS, virus Sendai, MDP, clulas tumorales, micoplas o BCG (bacilo de Calmettp-Gurin) (cuadro 7-2). Los nfocitos pueden ser timulados para producir TNF3 por antgenos o mitgenos, pero linfocitos y cl asesinas naturales (NK) tambin producen algo de TNFa. Adems,"cierto nir
Cuadro 7-3. Comparacin de clulas blanco y acciones de IL-1 y TNF/LT

lulas o tejidos blanco focitos T

Efectos Potencia ia expresin del receptor para L-2 Induce produccin de linfocinas Acta como comitgeno de timocitos

IL-la, $
4 4 4-

TNF/LT
4-

+
444

++
4

focitos B

Potencia la produccin de anticuerpos Estimula la proliferacin de clulas B

+
4 4* 4

ulas neuroendocrinas

Libera C'RF para ACTH hipofisaria y corticoides suprarrenales Induce fiebre mediada por prostaglandinas Induce somnolencia y anorexia

_
4 44

itrfilos *

Acta como quimiotctico

Incrementa adhesividad, fagocitosis, ADCC, formacin de intermediarios de oxgeno Causa degranulacin y liberacin de enzimas nocitos y macrfagos Actan como quimiotctcos Inducen prostaglandinas, IL-1, IL-, GM-CSF e IL-8 Coactivacin para estado citoci'dico alas endotefiales y scularesdel msculo o i s oblas tos soclasto s d roe i tos oblastos/clulas loviales latocitos Incrementa la adhesividad (I-CAM1) Induce actividad procoagulante, IL-1, IL-6, GM-CSF, inhibidor del estimulante del plasmingeno, prostaglandinas y MHC Actan como agentes mitgenos y angiognicos Disminuye las concentraciones de fosfatasa alcalina Causa resorcin sea (aumento de colagenasa) Incremento del recambio de cartlago Acta como mitgenoy expresa oncgenes Induce prostaglandinas, L*t. IL-6, colagenasa, GM-CSF o IL-8 Induce algunos reactantes de fase aguda Disminuye citocromo P450 e incrementa C3 Incrementa cobfe plasmtico, disminuye Fe 4- Zn plasmtico ilas hematopoyticas Inhibe proliferacin y diferenciacin de algunos precursores Estimula clulas precursoras l^s tumorales e ectadas por virus xwritos ' Disminuye ttulo de lipoprotenlipasa Aumenta lipolisis ilas epiteliales Acta como agente mitgeno Secreta colagena tipo IV ;las pancreticas las dendrticas Sin datos nfonnados. Modula concentraciones de insulina Incrementa la activacin de clulas T
4 4 4 44 4+

_
4 4 44

-V + ++
4- 4 4- 4

+
4- 4

4- 44 4

-f. + *+
4 4 4 4

44

+ + -f
4

_
4 4

Acta selectivamente como agente citosta'tico/citocida

+ 4-

N.D.1 N.D.

+
4

4-

N.D,

pueden incrementar la capacidad de los monocitos para producir otros mediadores inflamatorios como prostaglandinas, L- y el pptido atrayente de neutrfiios que se ha rebautizado como IL8. Adems, IL-1 y, en grado an mayor TNF, incrementan la adhesividad de las clulas endoteliales ai inducir la expresin de molculas membranales adhesivas como la molcula de adherencia intrnseca tipo 1 (ICAM-1). Estas diferencias pueden explicar los efectos ms pronunciados in vivo de TNF sobre vasos y clulas tumorales. La inyeccin de IL-1 induce respuestas inflamatorias locales agudas que comienzan en la hora siguiente y llegan al mximo en 3 a 4 horas, Al principio, los neutrfiios se adhieren a clulas endoteliales y se marginan a lo largo de las paredes vasculares. A esto sigue infiltracin de neutrfiios y edema por extravasacin de lquidos hacia los tejidos. Por el contrario, la liberacin lenta de IL-1 de discos con copolmero de acetato de etilenvinilo, implantados en el tejido subcutneo, conducen a formacin de granulomas por hipersensibilidad tarda (DT.H) con infiltracin considerable de clulas mononucleares, fibrosis y formacin de vasos sanguneos nuevos. Las inyecciones intradrmicas de TNF producen tambin inflamacin aguda con infiltracin de neutrfiios. Ambos, IL-1 y TNF, son mitgenos para las clulas endoteliales y muestran in vivo una actividad angiognica. TNF y, en menor grado IL-1, estimulan a las clulas endoteliales para sintetizar prostaglandinas, L- y factor procoagulante (factor tisular III), que puede iniciar la cascada de la coagulacin. Esta coagulacin local y los efectos inflamatorios, bloquean la circulacin sangunea y pueden explicar la i propiedad nica de TNF de causar necrosis

hemorrgica e infartos en tumores, caracterstica que condujo al descubrimiento inicial de TNF. La reaccin hemorrgica de Shwartzman se ha atribuido a TNF, debido a que el choque endotxico puede ser bloqueado pon la administracin de antisuero a TNF. En general, la reaccin de Shwartzman es una coagulopata intravasc'ular diseminada (CID) mortal, que ocurre despus de exposicin general a la endotoxina, seguida en el transcurso de 24 horas por una segunda dosis intravenosa de la endotoxina. Se sabe que inyecciones repetidas de IL-1 producen reacciones de Shwartzman locales. Dosis bajas de IL-1 actan de manera sinergista con TNF para inducir l.choque hernorrgico de una reaccin de Shwartzman.

Efectos neuroendocrinos de IL-1 y TNF

IL-1 y TNF actan solas y juntas para inducir cierto nmero de reacciones inflamatorias generalizadas, adems de las mencionadas, como fiebre mediada por el hipotlamo y respuestas de fase aguda mediadas por hepatocitos, IL-1, pero no TNF,. estimula al hipotlamo a producir ; factor liberador de corticotropina (CRF), que es- tirnula la liberacin de hormona adrenocorticotrpica (ACTH) de la hipfisis; a su , vez, sta induce la produccin de glucorticoides en las suprarrenales. Por lo tanto, IL-1 inicia un circuito regulador de retroalimentacin negativa, dado que los glucocorticoides suprimen la produccin de IL-1 y TNF Adems, TNF y tambin IL-1 pueden inducir a IL- que, a su vez, activa la sntesis de ACTH, con potencial para elevar los valores plasmticos de glucocorticoides. Los glucocorticoides tienen la propiedad de incrementar la expresin del receptor para IL-1 (IL-1R), pero no para TNF, en linfocitos B humanos. La propiedad de

de mediadores endgenos son inductores activos de TNF, coi cebadas), IL-1, el propio TNF, GM-CSF, CSF-1, leucotrieno activante de plaquetas (PAF) e IFN y junto con LPS (para m;s abreviaturas del cuadro 7-1).

Receptor paro TNF

En varios tipos celulares se han observado entre 1 000 y is elevada afinidad para TNF por clula (Kj es alrededor de 2 x l Estudios de enlaces cruzados revelaron las estructuras de fijar- 60 000-80 000) sobre clulas jiumanas. La accin de TNF ; considerable en presencia de IFN y en varias clulas blanco, p por incremento de la expresin del receptor para TNF. Toda gran parte los efectos intracelulares de TNF. *i t

Actividades inmunitarias de IL-] y TNF

Los efectos multifacticos de mediadores inflamatorios de amp tantes, ya sea IL-1 o TNF, pueden estudiarse juntos. Aunqu elevada afinidad para IL-1 y TNF, que se han encontrado prcti tipos de clulas nucleadas, tienen una estructura que no se res estas dos citocinas muest.ra.ri un grado notable ele traslape de acti' y no inmunitarias in vitro (cuadro 1-3). Aunque los efectos in tambin muestran algunas semejanzas, TNF tiene in vivo efe-. . oclusin vascular y antitumorales, en tanto que IL-1 protege . nocivos y moviliza ms el recambio seo (cuadro 7-3). Diferenci: de produccin in vivo y tambin vida media y distribucin, p diferencias de sus actividades in vivo. IL-1 potencia reacciones inflamatorias mediadas por mecanu Promueve la proliferacin de linfocitos T al incrementar la produce- derivadas de los propios linocitps T, como IL-2 y sus receptor amplifica la capacidad de clulas presentadoras de antgeno (APC' activar las respuestas inmunitarias que dependen de clulas T inrnunitarios de TNF no sehan establecido de manera definid,. TNF tambin es comitgeno para los timocitos e induce la sntesis . IL-2. Se ha demostrado que IL-1 y TNF aumentan la proliferac.- expresin de receptores clb superficie para inmunoglobulinas y iu anticuerpos. La inyeccin de IL-1 o de TNF junto a un antgeno, adyuvante sobre las respuestas de anticuerpo que dependen de
r

Actividades inflamatorias de IL-1 y TNF

In vitro, TNF tiene efectoi ms potentes que IL-1 sobre neut. '. clulas endoteliales.
Concentraciones altas (alrededor de 1 000 no de. IL-1 son quiinotcticas para neutrfilos, y TNF aclis.; respiratoria y la degranulacin de ste. De igual modo, TNF considera quimiotctico para monocitos in vitro. No obstante,
Cuadro 7-3. Comparacin de clulas blanco y acciones de L-1 y TNF/LT

lulas o tejidos blanco ifocitosT

Electos

IL-1 a,/? + + 4 4- 4-

TNF/LT

Potencia la expresin del receptor para IL-2 Induce produccin de linfocinas Acta como comitgenode timocitos

444-

ifocitos B

Potencia la produccin de anticuerpos Estimula la proliferacin de clulas B

5>

4 4

lulas neurcendocrinas

Libera CRF para ACTH hipofisaria y corticoides suprarrenales Induce fiebre mediada por prostaglandinas Induce somnolencia y anorexia

+ + +

+
4

utrfils l

Acta como quimiotctico Incrementa adhesividad, fagocitosis, ADCC, formacin deintermediarios de oxigeno Causa degranulacin y liberacin de enzimas

. mocitos y macrtagos

Actan como quimiotctics Inducen prostaglandinas, IL-1, IL-, GM-CSF e IL-8 i Coactivacin para estado citoci'dico

4 4

4 44

: ulas endoteliales y res del msculo i 4 ' 50 l

\ ascula

Incrementa la adhesividad (I-CAM1) Induce actividad procoagulante, IL-1, IL-6, GM-CSF, inhibidor de! estimulante del plasmingeno, prostaglandinas y MHC Actan como agentes mitgenos y angiognicos Disminuye las concentraciones de fosfatasa alcalina Causa resorcin sea (aumento de colagenasa) Incremento del recambio de cartlago Acta como miigeno y expresa oncgenes Induce prostaglandinas, IL-1, IL-6. colagenasa, GM-CSF IL-8

4 4

4 4- 4 4 44

e oblas tos

4+ 4

i . eoclastos

......
. idrocitos

< : & t' ; roblastos/celulas , *, novia les ] # | 1 ^atocitos

44

4-

Induce algunos reactantes de fase aguda Disminuye ctocromo P450 e incrementa C3 Incrementa cobte plasmtico, disminuye Fe 4- Zn plasmtico

4 4 4

* jlas hematopoyticas

Inhibe proliferacin y diferenciacin de algunos precursores Estimula clulas precursoras

] j ulas tumorales e . "* ; fectadas por virus

Acta selectivamente como agente citosttico/citocida

4 4-

1 f ; ( pocitos

Disminuye titulo de lipoprotemlipasa Aumenta iiposis

4 4

4- 4- 4- 4

....................
1

' jlas epiteliales

| Acta como agente mitgeno i Secreta colagena tipo IV

N.D.1 N.D.

Modula concentraciones de insulina > jlas pancreaticas

4 4

t jlas dendriicas
f

Incrementa la activacin de clulasT 1

N.D.

Sn datos informados.

pueden incrementar la capacidad de los monocitos para producir otros mediadores inflamatorios como prostaglandinas, IL- y el pptido atrayente de neutrfilos que se ha rebautizado como IL8. Adems, IL-1 y, en grado an mayor TNF, incrementan la adhesividad de las clulas endoteliales al inducir la expresin de molculas membranales adhesivas como la molcula de adherencia intrnseca tipo 1 (ICAM-1). Estas diferencias pueden explicar los efectos ms pronunciados in vivo de TNF sobre vasos y clulas tumorales. La inyeccin de IL-1 induce respuestas inflamatorias locales agudas que comienzan en la hora siguiente y llegan al mximo en 3 a 4 horas. Al principio, los neutrfilos se adhieren a clulas endoteliales y se marginan a lo largo de las paredes vasculares. A esto sigue infiltracin de neutrfilos y edema por extravasacin de lquidos hacia los tejidos. Por el contrario, la liberacin lenta de IL-1 de discos con copolmero de acetato de etilenvinilo, implantados en el tejido subcutneo, conducen a formacin de granulomas por hipersensibilidad tarda (DTH) con infiltracin considerable de clulas mononucleares, fibrosis y formacin de vasos sanguneos nuevos. Las inyecciones intradrmicas de TNF producen tambin inflamacin aguda con infiltracin de neutrfilos. Ambos, IL-1 y TNF, son mitgenos para las clulas endoteliales y muestran in vivo una actividad angiognica.TNF y, en menor grado IL-1, estimulan a las clulas endoteliales para sintetizar prostaglandinas, IL-6 y factor procoagulante (factor tis lar III), que puede iniciar la cascada de la coagulacin. Esta coagulacin local y los efectos inflamatorios, bloquean la circulacin sangunea y pueden explicar la propiedad nica de TNF de causar necrosis hemorrgica e infartos en tumores, caracterstica que condujo al descubrimiento inicial de TNF La reaccin hemorrgica de Shwartzman se ha atribuido a TNF, debido a que el choque endotxico puede ser bloqueado por la administracin de antisuero a TNF. En general, la reaccin de Shwartzman es una coagulopata intravascular diseminada (CID) mortal, que ocurre despus de exposicin general a la endotoxina, seguida en el transcurso de 24 horas por una segunda dosis intravenosa de la endotoxina. Se sabe que inyecciones repetidas de IL-1 producen reacciones de Shwartzman locales. Dosis bajas de IL-1 actan de manera sinergista con TNF para inducir el choque hemorrgico de una reaccin de Shwartzman.

Efectos neuroendocrinos de IL-1 y TNF

IL-1 y TNF actan solas y juntas para inducir cierto nmero de reacciones inflamatorias generalizadas, adems de las mencionadas, como fiebre mediada por el hipotlamo y respuestas de fase aguda mediadas por hepatocitos. IL-1, pero no TNF, estimula al hipotlamo a producir factor liberador de corticotropina (CRF), que estimula la liberacin de hormona adrenocorticotrpica (ACTH) de la hipfisis; a su vez, sta induce la produccin de glucorticoides en las suprarrenales. Por lo tanto, IL-1 inicia un circuito regulador de retroalimentacin negativa, dado que los glucocorticoides suprimen la produccin de IL-1 y TNF Adems, TNF y tambin ILrl pueden inducir a IL-6 que, a su vez, activa la sntesis de ACTH, con potencial para elevar los valores plasmticos de glucocorticoides. Los glucocorticoides tienen la propiedad de incrementar la expresin del receptor para IL-1 (IL-1.R), pero no para TNF, en linfocitos B humanos. La propiedad de los gluco'ce: : . es de incrementar la expresin de IL-1R sobre las clulas B? sugiere que IL~i. pue-; ... participar en la capacidad reconocida de estos esteroides de actuar como aed de linfocitos f policlonales in vitro e in vivo. Esta regulacin paradeae ; de IL-1R en linfocitos B por esteroides, de otro modo inmuno:: ;v. uares, puede servir para suprimir aun ms la inflamacin por diversiaaa /a a de la respuesta inmunitaria lejos de inmunidad celular. As, los estero! .; s, aeen favorecer la inmunidad humoral a expensas de la celular, disminuye:! - ..-.damacin.

Efecto*

y INF en el tejido conectivo

Los do.. estimulan la actividad de fosfatasa alcalina en osteoblastos, inducen a sto,..- , .ber hueso, y a los condrocitos para incrementar el recambio del cartia, ar la proliferacin de fibroblastos y clulas sinoviales. En lquidos articule *.. . . IL matorios se encuentran valores altos de L-1 y de TNE Es probable que fibra..;.. / .engrosamiento tisular en articulaciones sean mediados por estas citocinas.

Efectas i!,-] y INF en la hematopoyesis

L-1 es e ca a hematopoyelina-1, factor que ejerce una funcin sinrgica con CSF para es; .a- a clulas precursoras, hematopoyticas tempranas de aidula sea y format das gigantes con elevado potencial proliferativo f agonias HFP). Adema - i induce la produccin de clulas

estrmicas medulares a partir de un nmero SF hematopoy;Hicos, y tambin de receptores para ; .... aF~l. Adems, TNF ira. : cavamente la p roduccin de CSF por clulas estrmicas y macrfagos medula; so no favorece la formacin de colonias HPP. La administracin de TNF e ,L<*l induce una neutrofilia considerable, derivada de la mdula sea. Si TNFa a- administra un da antes de ; radiacin letal, es radioprotector. No obstante, I L - i a > ms eficaz como agente radioprotector a concentracin menor que TNFa. -, .-ms, L-1 y 'FNF muestran acciones aditivas o sinergistas en radiopaa a.ai, sugiriendo que sus mecanismos de accin difieren,

Otras -, audades de IL-1 y TNF

IL-1 estrania la proliferacin y funcin de las clulas epiteliales, por ejemplo, produca a a ale colgena tipo V, en tanto que el efecto de TNF sobre las clulas epiteliales a; desconoce. L-1, pero no TNF afecta selectivamente las clulas 3 pancreticas, y causa cambios en las concentraciones plasmticas de insulina. TNF e IL-1 muestran efectos antivirales indirectos mediados, en parte, por la induccin de IFN/3. 7a-F e IL-1 son citostticos y citocidas para diversas clulas tumorales, TNF es citocida para una diversidad mayor de clulas tumorales y las destruye con ms- rapidez que IL-1. Es probable que la caracterstica distintiva de la actividad caquectnica (o de desgaste) de TNF, se relacione con el incremento en la accin de la lipoproleinpasa y, de qu, que lisa adipocitos. Sin embargo, se sabe que tambin L-1 tiene esta propiedad. En resumen, el traslape considerable en el amplio espectro u-c estas citocinas conduce a una redundancia ms bien asombrosa intercelulares. La redundancia proporciona vas alternas pan: - reacciones del husped en urgencias e incrementa la eficiencia, .. exhiben numerosas interacciones sinergistas. El resultado c . enorme de los efectos de cantidades relativamente pequeas cuando ambas se producen.

1NTERLEUCINA-2
f IL-2 es un pptido con PM d 15 400 con 133 aminocidos y uv. interno esencial. Ejerce numerosos efectos inmunitarios al estimuL a y sntesis de linfocina por clulas T, B y NK. En 1976, una hornv ;. llamada primero factor de crecimiento de clula T (TCGF), ....... ..................i estimulante sobre la proliferacin de clulas T humanas y las ca.. '. i rr pilcarse de manera continua en cultivo. El descubrimiento de TCGF b\ ;b : slo el estudio de los factores que intervienen en el crecimiento ,-it sino que tambin proporcion una herramienta valiosa para estu -mn celular y humoral in vi tro. La capacidad de propagarse y desarro!: r. . a p dcclulas T normales nicas, que conserva sus funciones inmunua. ific : 1 facilitado mucho los estudios moleculares y bioqumicos del desan iec y regulacin de clulas T inmunocompetentes.

Propiedades moleculares de IL-2

L-2 humana, de primate yde ratn se ha purificado hasta la hom 1II una protena sencilla (PM 15 000), pero la presencia en cantida... lab! carbohidrato conduce a formas de PM ms elevado. Debido a rme -7; re binante, que carece de grupos carbohidratos, es tan activo comoui deduce que los carbohidratos no son necesarios para su actividad. r 1 Estudios moleculares con DNA complementario clonado ( . 'c fuentes, humanas y de otras especies, indican que hay un solo gen , : . : y c localiza en el : cromosoma 4 humano. No hay homologa o es escasa . 'i de IL-2 y las de otros factores de proliferacin.

Receptores para il-2

Una seal inicial, el antgeno, se presenta en clulas accesorias > .. : ... paso es necesario para activar en estos ltimos a ujna respuesta . linfocitos T en reposo no proliferan en respuesta a las mismas con (10-20 pmol) de Lr2 que dan proliferacin mxima en ciul; antgeno. En } consecuencia, antgenos y lectinas corno PHA son : / - clulas T, debido a que provocan que algunas de ellas sinteticen L-I y res pon mximo a esta interleucina. Este estado, sensible a IL-

2 se de!;- .: ; r .:irrc receptores membranales barala interleucin^ que satisfacen . cri de los receptores para hormonas: 1) constante de fijacin de . : : nini( ecledor de 10 -12 mol/L; 2) fijacin qim se satura en 20 minutos a37C y 3) espe- icidad de 1 iigandos para las clulas blanco. Hayuna correlacin estrecha entr l icentracin de L-2 que causa proliferacin linfocitaria y la que conduce a fijaciir r nificativa de IL-2. . -.. - ' - Un anticuerpo monoclonal, designado anli-Tad (en ingls, antfgeno T Ce II 'ivation que reconoce de manera especfica la cadena a del receptor de L-2 nano) suprime la proliferacin mediada 1 por IL-2 de lneas de clulas T previa-- nte activadas, y bloquea la activacin de linfocitos de sangre perifrica por antgeno cetinas. El receptor para IL-2 se caracteriz por mareaje isotpico de lneas jlares portadoras de ese receptor, seguido por inmurioprecipitacin del receptor L-2 con anti-Tac. La molcula es una glucoprotena con PM de 55 000 a 60 000. { - j - racfenzacin ele otra proena fijadora de IL-2 distinta de Tac : ias lneas diferentes de clulas leucmicas o clonas de estas lneas celulares retienen 2, en ausencia de cualquier antgeno Tac de superficie detectable, por medio de otra tena fijadora de IL-2 (PM 75 000). De hecho, en la actualidad se identifican tres idades de unin para IL-2: el s antgeno Tac (p55) que retiene IL-2 con un Kd .0 ' mol/L; la protena PM 75 000 (p75) que la 9 fija con afinidad intermedia, Kd de 10 * /L, y un tercer receptor que se une con afinidad i! elevada, Kd de 10 ' mol/L y es complejo de dos protenas. Algunos estudios sugieren que p75 puede actuar sola y smitir una seal biolgica en respuesta a la fijacin de IL-2. Al parecer, la nica :in de la fraccin Tac es la formacin de receptores para IL-2 de elevada dad al unirse en un complejo con p75, llamaba lja cadena3 del receptor L-2, ) que incrementa la sensibilidad y rapidez de la respuesta linfocitaria (cuadro . Se, desconoce la naturaleza precisa del complejo entre estas dos protenas loras de L-2. En un modelo hipottico de este complejo, p75 tiene un dominio acitojplsmico responsable de sealamiento y una molcula de IL-2 se une a molcula de cada una de las protenas fijadoras.

duccin y localizacin de IL-2

las T en reposo recin aisladas no expresan RNAm L-2, ni contienen protena . La produccin de L-2 por linfocitos T normales requiere que sean activados mtgeno o por activadores policlonaies.. Otras vas de activacin de clulas T y citos, corno fijacin de ligandos a receptores de superficie CD2, tambin es- lan la produccin de L-2. Estudios de subpoblaeines aisladas de linfocitos y timocitos, muestran que. ntgnos inducen a L-2, a partir de clulas T colaboradoras (TH) CD4. Sin irgo, mitgenos policoriles-potentes y aloantgeqos MHC clase I pueden miar a linfocitos T CD8 a producir L-2. Timocitos medulares estimulados mitgenos especficos secretan concentraciones bajas de IL-2. Adems, un ynjunto de linfocitos granulares grandes (LGL) que portan los marcadores CD2 6, y se relacionan con clulas NK, pueden ser inducidos por lectinas como PHA CSF y IFN y a producir IL-2, :n el anlisis de IL-2 se emplea la incorporacin de timidina tritiada para medir ectos del estmulo en l proliferacin de lneas humana o murina de clulas T Cuadro 7-4. Propiedades del receptor humano para IL-2
Complejo de alia afinidad 1. Compuesto de dos subunidades heterlogas 2. Se expresa transitoriamente 3. Internado por IL-2, inducido por antgeno IL-2, TNT7 e IL-4 4. Transporta activacin de protencinasa, [Ca2 + ] y cambios de pH 5. Incrementa funciones mediadas por clulas (por ejemplo, produccin de linfocinas) 6. Seala el avance de la fase S

p75
1. Participa en el complejo de alta afinidad 2. Es responsable de la internacin del complejo 3. Se presenta sola en algunas clulas T y LGL en reposo 4. En dosis altas de IL-2, produce una seal de transduccin y activacin de genes p55

1. Participa en el complejo de alta afinidad 2. Su expresin transitoria es incrementada por IL-2 3. Inducida por IL-2, TNF, IL-4 e IL- 4. No ocurre seal de transduccin 5. No tiene funciones definidas por s sola

citotxlcas dependientes de IL-2. La IL-2 humana es activo sobre clulas de ratn; por lo tanto, la lnea celular mu ria CTLL se emplea en forma extensa. En una muestra experimental se determina la concentracin precisa de IL-2 por comparacin con una estndar que contiene una cantidad conocida de ese factor. Se dispone de un radioinmunoansis para IL-2, pero es menos sensible que el bioanlisis, y los anticuerpos usados pueden reaccionar con IL-2 inerte, dando valores potenciales falsos. Se est desarrollando un anlisis con receptor marcado con istopo purificado.

Regulacin infracelular de la produccin efe IL-2

Despus de activacin de clulas T, comienza transcripcin y traduccin nueva de IL-2 que se secreta inmediatamente. En linfoeitos humanos normales estimulados con PHA, RNAm para IL-2 se acumula en cuatro horas, alcanza un mximo en 12 horas y despus declina en forma abrupta. La interrupcin rpida de la transcripcin de RNAm, junto a su vida media corta (1 a 2 horas) in vivo, asegura que la produccin de IL-2 sea transitoria. La eliminacin de la seal activadora conduce a una declinacin de los valores de RNAm para IL-2, debido al cese de transcripcin. Recientemente, se ha demostrado que ja regin rica en A + T- del RNAm 3, no traducido para citocinas inducibles como IL-2, imparce inestabilidad al cido nucleico y acorta su vida media. La rpida declinacin de RNAm para IL-2, que siempre se observa en clulas normales activadas, a pesar de estimulacin y transcripcin persistente del gen, ndica que tambin se induce(n) protena(s) represora(s). Este complicado mecanismo de control, que asegura lo transitorio de la produccin de IL-2, es importante en la regulacin de la reactividad inmunitaria para remover a este factor de la respuesta, despus que el antgeno se ha eliminado. Fue: : ..-2 en i a acivacin de clulas
.Lame. a" doI crecimiento linfocitario comprende d'ei era *, (figura7-3). La primero /..ocompetencia, comienza con !a liberaci o do * - * seal exgen a la clie o*, ./oso, que proviene del mitge.a o antg. o. E:o runduce a acdvj o ion pare : .. o-luia T que produce incremento en tao o-o, o escripcion de c oeos gsn-.- -e la fase Go " la fase tempra, G, en . .. d. ekdar. Sin ernl : go, la p a al por s nd o a no es sufi- -nte par. .... 'ar proliferaci.o Se reqie * segunda se . endgena, p que e; ... hilar progreso., con transi.; : . ase S y, por lumo, mitosis. En i a segunda nt, la fijacin de IL-2 a su rece .o : elevada a fu .dal es paso cd "gado pa - ta divisin "hilar ocur .. 1 laboratorio os anticuerp .. anti 1L ai Tac nhi: - esta proli? Je las clulas .....na caractei , ea nica re oceso es c . : :anto IL-2 re receptor se s. alzan de nov: .rrpus c-- . arai inicial e. oeos expresan acentracione . odimasce en es de gran -dad para ' o por un perii. ' > breve despt : de expos antgeno es; ' fico. La de ;->n subsecuente en la expresin del recepir iraordinario a que ocurre ... ...mera independiente respecto a ia presencia do ... -2, indicando que hay otro iv ...o de control o . la presencia IL-2, es. elacin en . riel recep... e.pende de la oropia L~2dr aen signia; .. hay slo ur. . iodo finito : clonas de clulas T inmio : arias se e;v en. En consce aencia, la pe-: va de linfocitos T cesa y la c: r, se dedi : fase G, inclusive en prese uracin de IL-2. Una nueva . icindeao. o causa la rear acin

3 L, I ! t, ?

L, i 1 ... ' W i

figura 7-3. Activacin de linfocitos y funcin

. ! . de cantidades ptimas de recdptres para IL-2 sobre los 1 linfocitos, estimula. lelo: nuevo a multiplicarse en respuesta a IL-2. Este proceso puede repetirse; descrit naturaleza cclica del crecimiento normal de la clula T in vivo, y subraya la necesi de estmulo constante (es d'dcir, antgeno) para inducir la produccin de los rec tores de IL~2 necesarios para proliferacin continua de clonas de clulas Tin vi

Produccin de citadnos inducida por IL-2

La adicin de IL-2 a clulas T activadas, purificadas, favorece varias funciones celul adems de proliferacin (cuadro 7-5). Los linfocitos T activados por IL-2 prodi otras nfocinas como IFN y; linfotoxina; factores de multiplicacin y diferencia de clulas B como IL-4, L6, BCGF y BCDF; factores de proliferacin he topoytica como IL-3, IL-5 y GM-CSF y TGF3. Adems, las clulas T activadas IL-2 muestran un espectro; amplio de citotoxicidad. Estas variadas funcione amplifican ms all de la capacidad de IL-2 para expandir de manera clona la rest de clulas reactivas a antgno. Se requiere un modelo para el desarrollo de r. tividad inmunitaria de las clulas T, que incorpore el concepto de obligatorieda< una seal para la produccin de IL-2 y la expresin de su receptor (figura 73).

Clonas y lneas de clulas T que dependen de IL-2

IL-2 colabora de preferencia en la proliferacin de clulas Te CD8, pero tarn provoca el desarrollo de clulas TH CD4 y de algunas lneas de clulas Ts C Adems de la capacidad de estas clulas clonadas para liberar IL-2, al pan Cuadro 7-5. Propiedades de IL-2 humana .aperan con clulas adherentes de histocompatibilidad en presencia del antgeno'f : especfico para secretar otros tipos de linfocn&s. . | w Lneas continuas de nfocitos dependientes de,T} preparadas a partir de clulas normales que se emplean para bioanalisis de IL-2 (como la lnea CTLL-2 murina muy usada) son, en realidad, variantes que espontneamente expresan concentraciones altas de receptores para IL-2. Generaciones sucesivas de clulas f expresan en forma constitutiva sitios de fijacin para IL-2 y, por tanto, requieren ' ;lo a este factor para proliferar. CTLL se utiliza para bioanlisis debido a que L esponde slo a IL-2, al contrario de otras lneas celulares sensibles a otros factores WS le crecimiento como IL-4. En ausencia de IL-2 las cjulas CTLL cesan de proliferar % mueren en 12 a 24 horas. > '

no-T

'' nferacciones de IL-2 con clulas ' ':f

lecicn aislados, los nfocitos granulares grandes (LGL), que exhiben actividad de Jf? lula NK inespecfica de antgeno, no expresan el artgeno Tac (PM 55 000) (una V;f| arte del receptor para IL-2). No obstante, pueden ser estimuladas por IL-2 a proferar, producir otras linfocinas e incrementar su actividad de NK. Esta respuesta a ,-2 requiere la presencia de la protena fijadora p75, ya mencionada, en el LGL no slimulado. Despus de incubacin in vitro, LGL comienza a expresar al complejo 55p75 (receptor), adems de antgeno Tac p55. Los receptores de elevada afinidad para IL-2 se, han encontrado tambin en nfoblastos B. Los 1 i ni oblastos normales activados'y tambin algunos transfor- ados, pero no las clulas B en reposo, expresan alrededor de 30% de receptores Uignicos Tac para IL-2, comparados con clulas T activadas. IL-2 puede inducir i incremento en la produccin de anticuerpos y en ja proliferacin de nfocitos B rnales purificados, pero a dosis ms elevadas (dos a tres veces). Normalmente, monocitos y macrfagos tambin exprsan antgeno Tac p55, aunque i concentracin baja. En los ratones, precursores mieloides, clulas cebadas y ; mocitos poseen slo receptores de baja afinidad para IL-2. Sin embargo, la adicin IL-2 a macrfagos act ivados causa estmulo de genes para Tac, GM-CSFy tambin menta las actividades tumoricidas de estos macrfagos.

ectos de iL-2. in vivo

espacios extracelulares coirascitis y edema pulmonar. IL-2 estimula la produccin de

1 Clulas T perifricas activadas

citocinas capaces de activar clulas endoteliales, la permeabilidad vascular; concentraciones elevadas aumentan los valores sricos de ACTH y cortisol, que desembocan en efectos inmunosupresores; las inyecciones intraperitoneales y subcutneas causan concentraciones sricas ms prolongadas de > 2 U./mL en dos y seis horas, respectivamente, de modo que estas vas de administracin permiten el uso de dosis menores con efectos secundarios txicos menos graves. Toxinas (por ejemplo, toxina diftrica) fusionadas con factores del crecimiento (como IL-2) muestran un potencial teraputico considerable para suprimir clulas T reactivas a antgeno. Se ha demostrado que la mezcla de toxina e IL-2 es muy selectiva y tiene efectos deletreos potentes (50% de la dosis mxima eficaz (ED50) de 10-50 pmol) contra cierto nmero de lneas celulares, en particular las clulas relacionadas con el virus linfotrfico de clula T humana (HTLV-1) in vi tro. Esta toxina podra usarse en el tratamiento de leucemia aguda de clulas T y otras neoplasias portadoras de IL-2.

INTERLEUCINAS-4 Y 5
IL-4 e IL--5 son otras dos linfocinas con actividades TCGF y BCGF; sin embargo, IL-3, que acta como un multi-CSF, se estudiar ms adelante con el otro CSF hematopoytico. Las lneas de linfocitos Th CD4 murinas clonadas pueden separarse en dos subconjuntos distintos basndose en su capacidad para producir linfocinas. Slo el subconjunto murino Th 1 secreta IL-2, IFN y y linfotoxina (TNF), en tanto que el subconjunto Th2 y las clulas cebadas secretan IL-4 e L-5. Las propiedades de estas linfocinas se.muestran en el cuadro 7-6. An no se han encontrado anlogos humanos de estos subcon juntos Th. IL-4 (Figura. 7-4). Se detect por primera vez y se clon su gen mediante el uso de actividad de proliferacin de clula B para el anlisis. IL-4, cuyo nombre original fue BCGF-1, es mitgeno para clulas B que se han activado previamente con antgenos dependientes de clulas T, antgenos independientes de T o antisueros anti- inmunoglobulnicos. IL-4 acta de manera sinergista para estimular la proliferacin de linfocitos B. Aunque no es un factor de crecimiento para clulas B en reposo, IL-4 induce aumento rpido de la expresin superficial en clulas B de antgenos MHC case II y receptores para Fe para IgE. Adems,.es regulador importante de la expresin del isotipo inmunoglobulnico. IL-4'mduce l produccin de IgE e IgGl, y reduce la de lgG2b e IgG3 por clulas B estimuladas por LPS. Por lo tanto, promueve el cambio de genes a C-e y C-y 1 y puede tener importancia en la etiologa de alergias atpicas. . Igual que otras citocinas, IL-4 acta sobre clulas no linfoides. Es mitgena para linfocitos T y apoyada multiplicacin de lneas de clulas cebadas. Adems, IL-4 con CSF coestimula la proliferacin de precursores hematopoyticos e induce la
Cuadro 7-6. Propiedades de IL-4 e IL-5
Propiedades Tamao de la forma madura Fuentes celulares Clulas blanco y actividades 20 kDa Clulas TH, clulas cebadas Acta como comitgeno para clulas B Incrementa la expresin de la y FcRs en clulas B Favorece el cambio a IgGI e IgE (disminuye IgGI e IgG3) Acta como estimulante de clulas cebadas Comitgeno para timockos Activa macrfagos Es t i m u 1 a 1'. em a to poyes is ' . l.L-4 18 kDa Clulas TH Acta como coestimulante de la proliferacin y diferenciacin de clulas B Potencia la expresin del receptor para IL-2 Promueve el cambio a IgA Estimula la proliferacin de BC1-1 Estimula a eosinofilos Acta como comitgeno para timocitos IL-5

Tamao de los receptores

60 kDa

46.5 kDa

diferenciacin de ms clulas mieloides maduras. Es activador potente de las funciones citocidas de macrfagos y de la expresin de antgeiuis MHC clase en linfocitos f y en macrfagos. IL-5 IL-5 (figura 7-4) se detect primero con base en su actividad de sustituto de clula T (TRF) y de la actividad proliferante de clula B (BCGF-I) para la lnea BCM de linfoma, y ms adelante se clon. Se ha demostrado que IL-5 murino recombinante promueve la multiplicacin de clulas B activadas y se combina con IL-2 para estimular el crecimiento de linfocitos B. Tambin acelera la produccin de anticuerpo en clulas B, en particular el isotipo IgA. As, IL-5 favorece el cambio de isotipo al gen C-a y tiene efectos mitgenos modestos sobre clulas T Adems, induce la diferenciacin de precursores de mdula sea a eosinfilos y apoya el crecimiento de lneas celulares eosinoflicas e induccin de Te As, al producir IL-4 e IL-5, las clulas Th2 murinas favorecen la produccin de IgE e IgA y el crecimiento y diferenciacin de clulas cebadas y eosinfilos. Esto indica que las clulas T-i2 participan de manera 'preferente en el desarrollo de anticuerpos para reacciones atpicas y en la defensa del husped contra infestaciones parasitarias. Por-ef contrario, las linfocinas producidas por clulas ThI se ocupan selectivamente de la defensa del husped contra enfermedades virales, bacterianas y neoclsicas, ya que IL-2, interferones y TNF/3 promueven actividades de macrfagos como citotoxicidad y fagocitosis, median reacciones DTH y favorecen la produccin de IgGla, En realidad, IFM y e IL-4 por lo comn se oponen en sus efectos sobre la produccin de inrnunoglobulins; FN y aumentar la produccin

de gG3 a expensas de la induccin por IL-4 de IgG o IgE. En el ! . han identificado subpoblaciones homologas de las clulas THI y

INTERLEUCINA-6 (IL : ) Propiedades

IL-6 se conoca en un principio como IFN/32 con base en su posible a .;. y en su reactividad cruzada con antisueros a FN/3. Sin embar recientes muestran que IL-6 no tiene actividad antiviral o es mu tanto, no deber considerarse un interferon. IL- es una citocin . ..-ti s p vid

biolgicas mltiples sobre diversas clulas (cuadro 7-7), La clonacin ,;ne; codifican molculas que expresan estas variadas actividades biolgicas revelo q producto protico de un solo gen posee todas estas actividades, t. iuali el nombre ms comn de eta sustancia es IL-6.

Cuadro 7-7 Propiedades de IL-6

Propiedad romosoma M de la forma madura uentes celulares ./ ^ ' L-6 V"

m
s

22 000-30 000 Linfocitos T y B, monocitos, clulas endoteliales, clulas epiteliales, fibroblastos

lulas blanco y actividades

Acta como coactor para la secrecin de inmunoglobulinas. en las clulas B Acta como factor de crecimiento para mielomas, hibridomasy plasmaci tomas i Estimula a hepatocitos a producir protenas de fase aguda Acta como comitgeno para timocitosy clulas T Inhibe la proliferacin de algunos carcinomas, leucemias y nfomas de lneas celulares no-B Activa la diferenciacin en lneas celulares monomielocticas y en precursores celulares hematopoyticos normales Estimula ACTH hipofisaria y glucocorticoids suprarrenales

!
El gen,para IL-6 se localiza en el cromosoma 7 Humano. El PM oscila entre 000 debido en parte a glucosilacin y fosforilacin diferencial de una otena sencilla. sintetiza en muchas clulas como linfocitos T y B, mocitos, clulas endoteliales y fibroblastos. Diversos estmulos inducen produccin como TNF, IL-1, factor de derivado de plaquetas, tgenos, mitgenos y endotoxina bacteriana (LPS),

jcepfor para !L~

ii *?

y 30 000, IL- se epiteliales y crecimiento

an variedad de clulas blanco, portadoras de receptores especficos de elevada nidad son sensibles a IL-. Entre ellas, el virus Epsteai-Barr, lneas de clulas B .nsformadas, clulas plasmticas, mielomonocitos y linfocitos T en reposo nor- iles. Las clulas B activadas tienen receptores para IL-, no as en reposo, lo que 3lic.aTTa capacidad de esta interleucina para inducir diferenciacin^en clulas L B ^activadas. Sus constantes de disociacin (Kd) varan de 10 -10* mol/L y hay - -10 receptores por clula; .El gen que codifica al receptor de IL- ya se clon y tiene un dominio anlogo le genes de la superfamilia para inmunoglobulinas. Al contrario de los receptores numerosos factores del crecimiento, el de IL-6" no contiene un dominio con ividad de tirosinacinasa.

:fvdades.de IL-6
-6, como factor estimulante de clulas B, se comporta como agente de erenciacin o maduracin que lleva al linaje* de linfocitos B activados a la aduccin de inmunoglobulinas. Tambin es factor de proliferacin para :.

hibnciomas, plasmacitomas y clulas b sanguneas transformadas por jbts v. Recientemente, se ha demostrado que clulas de raieloma humano recin aisladas producen IL-6 y, adems, expresan receptores para este factor. Los anticuerpos anti IL-6 inhiben la proliferacin de las clulas de mieloma,/// vitro, lo que indica que L- puede funcionar como seal autocrina en el proceso de proliferacin incontrolada del mieloma- , Al contrario de estas propiedades estimulantes, IL-6 realiza actividades an~ tiproliferativas para lneas celulares de carcinoma, leucemia de clulas no-B y linfomas. La administracin in vivo de IL-6 incrementa las cuentas de neutrfilos. Tambin favorece la diferenciacin de lneas celulares mielomonocticas y de precursores hematopoyticos normales, y aumenta la formacin de colonias de estos ltimos. En la respuesta inflamatoria aguda a infeccin o traumatismo, el hgado altera la sntesis de varias protenas plasmticas conocidas como protenas de fase aguda. IL-6, como factor estimulante del hepatocito (HSF), induce la sntesis de estas protenas, incluyendo protena C reactiva, 1-antiquimotripsina, glucoprotena cida a, fibringeno y C3, en tanto que inhibe la generacin de preaibmina y albmina. La expresin de algunas de estas protenas de fase aguda es modulada tambin por IL-1 o TNF, que se combinan de manera sinergista con.la actividad de HSF e IL-6. Adems, la administracin de dosis altas de IL-6 es un pirgeno endgeno. Como factor activante de clulas T o coestimulante puede proporcionar, por lo menos en parte, la segunda seal (inespecfica de antgeno) requerida para activar a esa lnea celular, adems del antgeno o mitgeno. Se ha demostrado que IL-6 potencia la multiplicacin de timocitos en preparaciones de sangre perifrica sin monocitos estimulados por dosis subptimas de PFIA, por vas dependientes e independientes de IL2. Incrementa la produccin de IL-2 y la expresin de receptores para esta ltima. Como se aprecia, IL-1, TNF e IL-6 tienen algunas actividades biolgicas traslapantes (cuadros 7-1 y 7-2). Dado que IL-1 y TNF son inductores potentes de IL-6, ser interesante determinar cuales actividades biolgicas atribuidas a IL-1 o TNF son, en realidad, mediadas por IL-6.

INTERLEUCINA IL-7 Es una citocina recin identificada con PM de 25 000, que acta en forma predominante sobre precursores de linfocitos T y B. Ya se purificaron IL-7 murina y humana y los genes se clonaron y expresaron. Se produce en las clulas estrmicas de mdula sea. Estimula a clulas pre-B y es coactivadora de timocitos jvenes, por lo tanto, puede considerarse una linfopoyetina, Adems, es coestimulante, junto a Jas lectinas, policlonales, de clulas T maduras pero no de clulas B maduras. Su administracin a ratones estimula de manera preferente una hiperplasia de clulas B en bazo y ganglios linfticos. Sin embargo, tambin estimula in vivo la recuperacin de intoxicacin con ciclofosfamida, al estimular precursores mieloicl.es y megacariocitos a producir unidades formadoras de colonia y plaquetas. En consecuencia; al parecer IL-7 posee tambin.efectos hematopoyticos.

Origen 2. Timocitos medulares activados

3. Subconjunto de LGL activados Especificidad de la clula blanca para estmulo prolierativo 1. Subconjunto de clulas T maduras activadas 2. LGL activados 3. Clulas 13 activadas Efectos biolgicos 1. Se une a receptores especficos en clulas T y B y monocitos 2. Estimula la entrada del cirio vital a la fase S, excepto en monocitos 3. Estiinula la secrecin de nfocinas 4. Potencia el estado citocdico de los macrfagos 5. Aumenta la produccin de inmunoglobulinas 6. Activa la accin de asesino natural de los LGL P ro p i e d ad es b i o q u n i i c as . 1. PM 15 400 2.133 aminocidos 3. Punto isoelctrico 8.0
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i el hombre, L:2 rccombinantc inyectado por wd intravenosa es depurado con }idez de la circulacin, con una vida media de 3 a 22 minutos. Parte de la puraein puede deberse a absorcin por clulas T activadas, pero los riones istituyen el sitio principal de eliminacin. Sin embajrgo, la ligazn de las arterias ales .prolonga su vida media* si bien en forma transitoria, y slo productos de gradacin de IL-2 se recuperan en la orina, sugiriendo la existencia de sitios irnos de depuracin. Basados en la molaridad de IL-2, necesaria para una puesta de la mitad del mximo por va intravenosa administradas al hombre, para rar efectos sobre el sistema inmunitario. Una venoclisis continua conduce a con- traciones altas sostenidas de IL-2. Estas dosis elevadas de IL-2 recombinante vocan efectos secundarios txicos mltiples. Uno de los ms importantes es el drome de derrame vascular donde con rapidez.se acumula lquido,en los