MTODOS

FSICOS

DE DE

SEPARACIN SUSTANCIAS

PURIFICACIN

ORGNICAS

Mariana Lpez Snchez Jorge Triana Mndez Francisco Javier Prez Galvn Mara Esther Torres Padrn

MTODOS FSICOS DE SEPARACIN Y PURIFICACIN DE SUSTANCIAS ORGNICAS

___________________________________________________________ Mariana Lpez Snchez Jorge Triana Mndez Francisco Javier Prez Galvn Mara Esther Torres Padrn ___________________________________________________________
Impresin: Febrero de 2005 Universidad de Las Palmas de Gran Canaria Servicio de Reprografa, Encuadernacin y Autoedicin Universidad de Las Palmas de Gran Canaria (ULPGC) Mquina Fotocopiadora Marca: Xerox, Modelo Docutech Nmero de Serie: 1104516609 Depsito Legal: GC 136 2005 ISBN: 84 689 - 1114 - 3 ________________________________________________________________

de

la

NDICE
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Filtracin Decantacin Cristalizacin Sublimacin Destilacin Extraccin Cromatografa Bibliografa

1 3 3 5 7 12 20 49

INTRODUCCIN
Cuando se quiere conocer la composicin de una sustancia orgnica es necesario seguir tres etapas bsicas. Obtener una muestra representativa de la muestra. Separar o aislar cada una de las sustancias componentes de la mezcla para su posterior anlisis. Identificacin de cada uno de los componentes de dicha muestra. La segunda de las etapas es una de las ms complejas, laboriosas y difcil de realizar El conocimiento de los mtodos de aislamiento y purificacin de un compuesto es fundamental en Qumica Orgnica por las siguientes razones: Poder determinar su estructura En los procesos de sntesis. Seguimiento de las reacciones qumicas

Estos mtodos estn basados en las diferencias que existen entre las propiedades fsicas de los componentes de una mezcla (puntos de ebullicin, densidad, presin de vapor, solubilidad, etc.) Filtracin Decantacin Cristalizacin Sublimacin Destilacin Extraccin Cromatografa

Mtodos de separacin

FILTRACIN POR GRAVEDAD

Consiste en retener partculas slidas suspendidas de un lquido o un gas forzando la mezcla a travs de una barrera porosa que puede ser mallas, fibras, material poroso o un relleno slido.

FILTRACIN POR SUCCIN

La filtracin a vaco o por succin se utiliza para mezclas como barros y pastas. El agua al pasar a travs de la trompa, en el estrechamiento interior, aumenta su velocidad originando una disminucin de presin. Esto origina una succin del aire a travs de la conexin con el matraz, originando un pequeo vaco en ste. Tambin se emplea para separar los cristales obtenidos a partir de una disolucin.

DECANTACIN
Consiste en separar componentes que contienen diferentes fases siempre que exista una diferencia significativa entre las densidades de las fases ( dos lquidos no miscibles, un slido de un lquido. etc.)

CRISTALIZACIN
Proceso de separacin de un soluto a partir de su disolucin, por sobresaturacin de la misma, aumento de la concentracin o por enfriamiento de esa disolucin. La cristalizacin permite separar solutos prcticamente puros. Cmo se sobresatura una disolucin para cristalizar el soluto? que comience a

Saturando la disolucin en caliente con posterior enfriamiento de la misma Aumentando su concentracin evaporando una parte del disolvente Adicionando a la disolucin otra sustancia ms soluble en el disolvente que el compuesto que se desea separar

TIPOS DE DISOLUCIONES
Disolucin no saturada: concentracin de soluto es inferior a su solubilidad Disolucin saturada: concentracin de soluto es igual a su solubilidad Disolucin sobresaturada: concentracin de soluto es superior a su solubilidad (sistema inestable)

Cuanto ms lento sea el enfriamiento de la disolucin saturada ms grandes y puros sern los cristales del slido que se separa.

EL PROCESO DE CRISTALIZACIN
Tcnica ms simple orgnicos slidos. y eficaz para purificar compuestos

Consiste en disolver el slido impuro en la menor cantidad de disolvente posible y en caliente. En estas condiciones se genera una disolucin saturada que a medida que se va enfriando se sobresatura y origina la cristalizacin. Como el proceso de cristalizacin es dinmico, las molculas que estn en la disolucin alcanzan el equilibrio con las que forman parte de la red cristalina. El alto grado de ordenacin de esa red no permite la participacin de impurezas en la misma. Por eso es conveniente que el proceso de enfriamiento sea lento para que los cristales se formen poco a poco y el lento crecimiento de la red cristalina excluya las impurezas. Si el enfriamiento de la disolucin es muy rpido impurezas pueden quedar atrapadas en la red cristalina. las

ELECCIN DEL DISOLVENTE DE CRISTALIZACIN

Para su eleccin es muy til la regla semejante disuelve semejante. Los disolventes ms usados en orden de polaridad creciente son: hexano, cloroformo, acetona, acetato de etilo, etanol y agua. Es conveniente elegir un disolvente cuyo punto de ebullicin no sea superior a 60C y que a su vez sea por lo menos 10 C menor que el punto de fusin del slido que se desea

cristalizar, para que se pueda eliminar fcilmente por evaporacin. Muchas veces es necesario usar una mezcla de disolventes y es conveniente probar diferentes mezclas hasta encontrar aquella que nos proporciones la cristalizacin ms efectiva. Una vez obtenidos los cristales se procede a eliminar el lquido sobrenadante llamado aguas madres generalmente mediante un proceso de decantacin.

RECRISTALIZACIN
Con el fin de conseguir una cristalizacin ms correcta algunas veces es necesario llevar a cabo un recristalizacin La finalidad de este proceso es conseguir un adecuado grado de pureza que nos permita determinar el punto de fusin de la sustancia. El punto de fusin de un compuesto es una caracterstica fsica que nos confirma el grado de pureza de una muestra. No se puede hablar de punto de fusin exacto sino de un intervalo de fusin. Si la muestra est impura el intervalo de fusin es alto. En la siguiente tabla presentamos los disolventes ms empleados en la cristalizacin de las clases ms comunes de compuestos orgnicos. Tipos de compuestos Hidrocarburos teres Haluros Compuestos carbonlicos Alcoholes y cidos Sales Disolventes sugeridos Hexano, ciclohexano, tolueno ter, diclorometano Diclorometano, cloroformo Acetato de etilo, acetona Etanol Agua

SUBLIMACIN
Es el paso de una sustancia del estado slido al gaseoso sin pasar por el estado lquido. Se puede considerar como una forma especial de destilar una sustancia slida. El slido que sublima se convierte directamente por calefaccin (sin fundir) en su vapor, despus se condensan sus vapores a slido mediante enfriamiento

La temperatura de sublimacin es aquella a la cual la presin de vapor del slido iguala a la presin externa. Para que una sustancia sublime debe tener una elevada presin de vapor, es decir, las atracciones intermoleculares en estado slido deben ser dbiles Cuanto menor sea la diferencia entre la presin externa y la presin de vapor de una sustancia ms fcilmente sublimar. La sublimacin es un mtodo excelente para la purificacin de sustancias relativamente voltiles. Ejemplos: la desaparicin de la nieve, sin fundir, en un da de invierno fro pero soleado, el dixido de carbono slido, la naftalina y el yodo que subliman a la temperatura ambiente.

TCNICA DE SUBLIMACIN
Se calienta en el vaso de precipitados el yodo slido y lo tapamos con una superficie fra, en esta caso un baln al que se le aade agua hielo para evitar que el vapor de yodo eleve peligrosamente su temperatura. El vapor de yodo choca con el fondo del baln, y la rpida disminucin de la temperatura hace que el yodo vuelva al estado slido en forma de pequeos cristales que se pueden observar al levantar el baln.

DESTILACIN
La separacin y purificacin de lquidos por destilacin constituye una de las principales tcnicas para purificar lquidos voltiles. La destilacin hace uso de la diferencia entre los puntos de ebullicin de las sustancias que constituyen una mezcla. Las dos fases en una destilacin son la vaporizacin o transformacin del lquido en vapor y la condensacin o transformacin del vapor en lquido. Existen varios tipos de destilaciones. La eleccin en cada caso se hace de acuerdo con las propiedades del lquido que se pretenda purificar y de las impurezas que lo contaminan. El mtodo fsico consiste en suministrar calor a la mezcla logrando que el lquido de menor punto de ebullicin se vaporice en primer lugar y luego se produzca la condensacin de ese vapor al ponerlo en contacto con una superficie fra.

DESTILACIN SIMPLE
Tcnica utilizada en la purificacin de lquidos cuyo punto de ebullicin es inferior a 150C a la presin atmosfrica. til para eliminar impurezas no voltiles Tambin sirve para separar dos lquidos con puntos de ebullicin que difieran en al menos 25 C. El vapor formado por la ebullicin del componente, simplemente se condensa y se recoge en el matraz.

DESTILACIN A VACO O PRESIN REDUCIDA

Tcnica usada en la separacin de lquidos con un punto de ebullicin superior a 150 C. Como un lquido hierve cuando su presin de vapor iguala la presin atmosfrica, se puede reducir su punto de ebullicin disminuyendo la presin a la cual se destila Para mantener una ebullicin homognea se puede usar plato poroso o adaptar al conjunto un capilar para mantener la ebullicin homognea. Este montaje nos permite destilar lquidos a bajas temperaturas evitando de esta forma la descomposicin trmica de las sustancias. Similar al anterior excepto que el sistema se conecta a una bomba de vaco o una trompa de agua. Equipo de destilacin a vaco

DESTILACIN FRACCIONADA
Tcnica que se utiliza en la separacin de sustancias cuyos puntos de ebullicin difieren entre s menos de 25C.

La diferencia con la destilacin simple es que incorpora una columna de fraccionamiento (o de rectificacin) entre la disolucin y el refrigerante. La columna de fraccionamiento consta de un tubo largo de vidrio que lleva en su interior un relleno inerte (hlices de vidrio) o unos platos de condensacin. La columna aporta una gran superficie para el intercambio entre el vapor que sube y el condensado que desciende, lo que hace posible una serie de vaporizaciones y condensaciones a lo largo de la columna. Equipo de destilacin fraccionada

EL PROCESO DE DESTILACIN FRACCIONADA

En cualquier punto de esa columna de fraccionamiento, condensado fro recibe calor del vapor que asciende y vuelve a vaporizar parcialmente formando un vapor que enriquece en el componente ms voltil. el se se

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De la misma manera, al ceder calor al condensado el vapor se enfra formando un condensado ms rico en el componente menos voltil. Con la columna adecuada y un control suficiente de la temperatura se pueden separar con esta tcnica lquidos que difieren unos pocos grados en su punto de ebullicin. UNA DESTILACIN FRACCIONADA ES EQUIVALENTE A UNA SECUENCIA DE DESTILACIONES SIMPLES Y POR TANTO UN PROCESO MS EFICIENTE. Esta tcnica es particularmente importante en la industria del petrleo, donde el crudo se destila para obtener diferentes fracciones de intervalos de ebullicin creciente. A partir de estas fracciones se pueden obtener sustancias puras mediante procesos ulteriores. Torre de destilacin fraccionada del petrleo crudo

DESTILACIN EN CORRIENTE DE VAPOR

Tcnica que se solubles en agua usa en la separacin de sustancias poco

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Al hacer pasar una corriente de vapor a travs de la mezcla, ambos componentes se destilan juntos. Como el agua y el compuesto son inmiscibles, cada uno de ellos ejerce su presin de vapor independientemente del otro (al contrario que en la destilacin simple) Cuando la suma de la presin de vapor del compuesto y del agua se iguala a la presin atmosfrica, por debajo de 100C, se produce la destilacin conjunta de ambos componentes. Equipo de destilacin con arrastre de vapor

La condensacin de los vapores produce una mezcla acuosa a partir de la cual se extrae el compuesto deseado por filtracin o extraccin. Se emplea para separar una sustancia de una mezcla que posee un punto de ebullicin muy elevado y que se descompone al destilar. Tambin se utiliza para separar disolventes de alto punto de ebullicin de sustancias slidas que no son arrastradas.

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Principal mtodo de obtencin de los aceites esenciales, fragancias naturales muy apreciadas que se encuentran en las plantas, como el mentol, eucaliptol, eugenol, la vainillina, etc.

EXTRACCIN
Tcnica general ms utilizada para purificacin de un compuesto orgnico reaccin o de sus fuentes naturales el de aislamiento una mezcla y de

Se aplica a todo tipo de mezclas ya sean slidas, lquidas o gaseosas Est fundamentada en la diferencia de solubilidades de los compuestos.

LEY DE DISTRIBUCIN O REPARTO

La distribucin de un soluto entre dos disolventes inmiscibles est gobernada por la ley de Distribucin o de Reparto. Para un soluto A distribuido libremente entre dos fases se cumple: K = [Ao] / [Aw]

[Ao] = Concentracin del soluto en la fase orgnica [Aw] = Concentracin del soluto en la fase acuosa K = Coeficiente de reparto El soluto A se distribuye entre las dos fases en funcin de su solubilidad en ambas originando un equilibrio de particin dinmico. Este equilibrio viene definido por su constante de equilibrio, constante de distribucin o coeficiente de reparto K. Cuando se ha alcanzado el equilibrio se establece una diferencia entre las relaciones de concentracin en ambas fases. Esa relacin de concentraciones entre la fase orgnica y la fase acuosa es independiente de la cantidad total de A

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Fase orgnica

Fase acuosa

Mediante extracciones sucesivas con pequeas porciones del disolvente extractante, se separa mayor cantidad de soluto que con una sola extraccin en la que se utilice todo el volumen de extractante.

EJEMPLO
Se extraen 1000 ml de una disolucin acuosa que contiene 60 gramos de I2 con 1000 ml de tetracloruro de carbono. Se desea saber: A) La cantidad de I2 que queda en la disolucin acuosa. B) La cantidad de I2 que queda en la disolucin acuosa si la extraccin se realiza con dos porciones sucesivas de 500 ml de Yodo es 80 veces ms soluble en CCl4 que en CCl4. DATO: el agua. A) Una nica extraccin

X = gramos de Yodo remanentes despus de la extraccin Concentracin de I2 en CCl4 = 60 x / 1000 Concentracin de I2 en H2O = x / 1000 80 = Concentracin de I2 en CCl4 / Concentracin de I2 en H2O 80 = [ 60 x / 1000] / [ x/ 1000 ] = 60 x / x x = B) 0,47 gramos de yodo remanentes

Dos extracciones sucesivas Primera extraccin

B 1)

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Y = gramos de Yodo remanentes despus primera extraccin Concentracin de I2 en H2O = Y / 1000 Concentracin de I2 en CCl4 = 60 Y / 500 80 = [ 60 Y / 500 ] /

de

finalizada

la

[ Y / 1000 ]

Y = 1,46 gramos de Yodo remanentes B 2) Segunda extraccin Z = gramos de Yodo remanentes despus de segunda extraccin Concentracin de I2 en H2O = Z / 1000 Concentracin de I2 en CCl4 = 1,46 Z / 500 80 = [ 1,46 Z / 500 ] / [ Z / 1000 ] Z = 0,0356 gramos de yodo remanentes finalizada la

EXTRACCIN LQUIDO LQUIDO

Consiste en tratar la mezcla de compuestos con un disolvente de tal forma que uno de los componentes se disuelva en dicho disolvente y el resto de las sustancias no lo haga. Los compuestos orgnicos en disoluciones acuosas se extraen generalmente agitando vigorosamente dicha solucin con un disolvente orgnico no miscible. El proceso se realiza en un embudo de decantacin

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EL PROCESO DE EXTRACCIN LQUIDO LQUIDO

1) Se agita vigorosamente ambas capas 2) Se deja sedimentar ambas capas. 3) Se separan La eliminacin del disolvente se realiza en un rotavapor

ELIMINACIN (ROTAVAPOR)

DE

UN

DISOLVENTE

PRESIN

REDUCIDA

Consiste en eliminar un disolvente orgnico de una mezcla de reaccin El motor elctrico produce el giro de un tubo que tiene un ajuste esmerilado al cual se acopla el matraz de fondo redondo que contiene la disolucin. El matraz debe estar parcialmente sumergido en un bao de agua y girando. En el caso de disolventes orgnicos usuales la temperatura del bao debe oscilar entre 35 40 C Acoplado al sistema hay un refrigerante por el que circula generalmente agua, que origina la condensacin de los vapores del disolvente que se recogen en un colector El conjunto es un sistema cerrado conectado a una bomba de vaco, una trompa de agua o un circuito de vaco Esto tambin se puede realizar mediante destilacin simple, sin embargo, es el procedimiento ms empleado por ser ms rpido y cmodo.

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EXTRACCIN SLIDO LQUIDO

Para la extraccin en continuo donde la sustancia a extraer se encuentra en estado slido y el extractor es un lquido se emplea el SOXHLET. Tcnica ms utilizada y consiste en extraer la mezcla con un disolvente que disuelve todos los componentes. La extraccin continua es una combinacin de extraccin destilacin que permite la recuperacin del disolvente.
Equipo soxhlet para la extraccin en continuo

PROCEDIMIENTO
1) La mezcla slida finamente dividida se introduce en un cartucho de extraccin y se coloca en el Soxhlet 2) El disolvente ebullicin. elegido se coloca en el matraz y se lleva a

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3) Los vapores del encima de la muestra

disolvente

extractor

se

condensan

por

4) El condensado caliente lixivia la muestra mientras se va llenando el cartucho. 5) Cuando la cmara se ha llenado, la disolucin se sifona y vuelve al matraz de destilacin. El proceso se repite sucesivamente con lo que se consigue que aumente la concentracin del extracto en el disolvente extractor.

EXTRACCIN CON FLUIDOS SUPERCRTICOS (EFS)

Tcnica muy utilizada para la extraccin de aceites esenciales (aromas y fragancias), medicinas naturales, pesticidas naturales, tabaco libre de nicotina, caf y t descafeinado, productos libres de colesterol y en el tratamiento de residuos orgnicos industriales. Un fluido es supercrtico cuando est sometido a condiciones superiores a su presin y temperatura crtica, en este caso se encuentra en estado supercrtico. En este estado la lnea de separacin de fases lquido gas se interrumpe. Esto implica la existencia de una sola fase en la que el fluido tiene propiedades intermedias entre las de un lquido y un gas. Mantiene su gran difusividad (propia de los gases) mientras consigue una alta densidad (propia de los lquidos)

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CARACTERSTICAS DE LOS

FLUIDOS SUPERCRTICOS

Dada la relacin directa entre la densidad de un fluido con su poder de solvatacin, vemos como los fluidos supercrticos tienen una gran capacidad de solvatacin que, unido a la enorme difusividad que presentan, les permite penetrar a travs de matrices porosas aportando al fluido supercrtico una gran versatilidad. Su gran poder disolvente junto a una gran capacidad penetracin en los slidos permite el agotamiento rpido prcticamente total de los slidos extrables. (pe, en extraccin de productos naturales se originan extractos alta pureza). de y la de

Pueden separarse totalmente en forma sencilla de los extractos modificando la presin y la temperatura, hasta el extremo, si es necesario de que el fluido pase al estado gaseoso.

FLUIDOS MS USADOS

EN EFS
(C2H).Eteno (C2H4)

Dixido de carbono (CO2). Agua (H2O.Etano Propano (C3H8) Xenn (Xe) xido nitroso (N2O)

De todos ellos el ms usado es, tanto a nivel de laboratorio como en procesos industriales el dixido de carbono. Se trata de un gas inocuo (no txico, no corrosivo, no inflamable) abundante, barato y cuyas condiciones crticas son relativamente bajas (31C, 73 atm) y por tanto fciles de operar.

EL PROCESO DE SUPERCRTICOS

EXTRACCIN

MEDIANTE

FLUIDOS

1) La mezcla, generalmente un slido molido, es cargada en el extractor. 2) El CO2 es alimentado hacia el extractor a travs de una bomba de alta presin (100 400 bar). El CO2 comprimido es calentado hasta la temperatura de extraccin (30 60C). 3) Ingreso en el extractor donde se a extraer. disuelven los compuestos

4) La mezcla CO2 extracto es enviada a un separador (50 160 bar) previo paso a travs de una vlvula de reduccin. A temperatura y presin reducida, el extracto precipita espontneamente en el separador, mientras que el CO2, libre de cualquier extracto, es reciclado al proceso, con unos pasos previos de enfriamiento y compresin

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5) El CO2 se puede usar slo o combinado con otros fluidos como metanol, amoniaco, etc. que permite variar su polaridad logrando con ello mejorar la selectividad de la separacin. A estos aditivos se les llama modificadores polares 6) La separacin se realiza frecuentemente en etapas, manteniendo condiciones distintas en dos o tres separadores, para fraccionar el extracto en funcin de las solubilidades de los componentes y las especificaciones deseadas de los productos. VENTAJAS MEDIANTE E INCONVENIENTES DE FLUIDOS SUPERCRTICOS LA TCNICA DE EXTRACCIN

El CO2 no deja residuo en los compuestos procesados. No hay presencia de disolventes orgnicos en el extracto. El uso de temperaturas moderadas evita la degradacin trmica del extracto. Alto coste de los equipos y su mantenimiento. No se obtienen todos los compuestos presentes en la muestra. Para cualquier composicin de la muestra inicial no existen datos experimentales para conocer como se distribuye el soluto en el fluido supercrtico. Este es su mayor inconveniente.

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CROMATOGRAFA
Cromatografa significa Escribir en Colores [del griego cromos (color) y grafe (escribir)]. Debe su nombre al bilogo ruso Mikhail Tswett primera persona que utiliz esta tcnica (1906) al separar una mezcla de pigmentos naturales. Utiliz una columna larga de vidrio, rellena de sulfato de calcio finamente dividido y con una llave en su extremo inferior. Comprob que al colocar una mezcla de pigmentos verdes de una planta en una columna que se eluye con ter de petrleo, aparecen unas bandas horizontales con diferentes colores que se corresponden con cada uno de los pigmentos de la mezcla y que indica que ha habido una separacin a lo largo de la columna
Aproximacin a la tcnica de Tswett

La separacin no tiene nada que ver con el color de los compuestos sino con la diferente afinidad de adsorcin de los pigmentos hacia el yeso. De esta forma los compuestos que se adsorben ms dbilmente avanzan por la columna de cromatografa con ms rapidez que los compuestos que se adsorben ms fuertemente. Aunque el color tiene poco que ver con la cromatografa moderna, su nombre ha persistido y se sigue utilizando para describir todas las tcnicas de separacin en las que intervienen una fase mvil y una fase estacionaria.

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DEFINICIN DE CROMATOGRAFA
Se entiende por cromatografa al conjunto de tcnicas analticas que se fundamentan en la separacin que se produce cuando una mezcla de compuestos es arrastrada por una fase mvil a lo largo de una fase estacionaria. La tcnica cromatogrfica de purificacin consiste en separar mezclas de compuestos en funcin de su diferente afinidad entre una fase estacionaria y una mvil. Todas las tcnicas cromatogrficas dependen de la distribucin de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles, una de ellas llamada fase activa o fase mvil, que transporta las sustancias que se separan, y que progresa en relacin a otra fase llamada fase estacionaria
El sistema cromatogrfico Soluto

Fase Mvil Fase Estacionaria

CLASIFICACIN DE LOS PROCESOS CROMATOGRFICOS

La fase mvil puede ser un lquido o un estacionaria puede ser un slido o un lquido. gas. La fase

Teniendo en cuenta la naturaleza de la fase estacionaria se establece la siguiente clasificacin. CROMATOGRAFA DE ADSORCIN: la fase estacionaria es un slido sobre el que se adsorben los componentes de la muestra. Cromatografa Lquido Slido CLS (fase mvil lquido) Cromatografa Gas Slido CGS (fase mvil gas) Cromatografa en Capa Fina CCF (fase estacionaria slida en forma plana y la mvil lquida)

CROMATOGRAFA DE REPARTO: la fase estacionaria es un lquido sostenido por un slido inerte. Cromatografa lquido) Lquido Lquido CLL (fase mvil un

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Cromatografa Gas Lquido CGL (fase mvil un gas) Cromatografa en papel (fase estacionaria es una capa de agua adsorbida sobre una hoja de papel)

CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO: la fase estacionaria es una resina de intercambio inico y la separacin se produce por la unin de los iones a la fase estacionaria. CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN MOLECULAR: la fase estacionaria es una estructura parecida a un tamiz y la separacin se produce en funcin del tamao de las molculas. Teniendo en cuenta clasifica en: la forma de la fase estacionaria se

Cromatografa en columna Cromatografa plana (cromatografa en capa fina y en papel.

CROMATOGRAFA DE ADSORCIN
Existen ciertas sustancias slidas, qumicamente inertes, que tienen la propiedad de adsorber o fijar dbilmente en su superficie a una gran cantidad de compuestos. La fortaleza con la que se adsorben las sustancias sobre un adsorbente dado vara de un compuesto a otro. Entre los adsorbentes ms usuales: slica Gel (xido de silicio), almina (xido de aluminio), celulosa, fluorosil (silicato de magnesio) y sulfato de calcio. La separacin adsorcin de estacionaria. se realiza por la diferente tendencia de los compuestos orgnicos por la fase

La fase mvil desplaza y disuelve a los componentes de la mezcla segn sea su afinidad por la fase estacionaria es decir, los componentes ms polares estarn adsorbidos con ms fuerza y sern ms difciles de separar de la fase estacionaria que los componentes poco polares. Los menos polares no presentan una interaccin importante con la fase estacionaria (gel de slice) y no sern retenidos.

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H Si O H O Si O Si O Si O H O O Puede formar puentes de hidrgeno o enlaces de tipo dipolo-dipolo. R

Silicagel
En un proceso de adsorcion los componentes de son adsorbidos por la fase estacionaria con intensidad de tal forma que el proceso adsorcin hace que unos componentes avancen ms rpidamente que la mezcla diferente desorcin otros.

La adsorcin es un proceso de superficie mientras que la absorcin es la penetracin de una sustancia en el seno de otra (al escribir el papel adsorbe tinta mientras que la esponja absorbe agua). En cualquier fenmeno de adsorcin influyen tres variables independientes: el adsorbente, el disolvente y las sustancias a cromatografiar. Por tanto, s una molcula tiene una gran afinidad pasar muy lentamente mientras que otro componente con menos afinidad lo har ms rpidamente.

Adsorbentes menor a adsortivo

por orden de Disolventes por orden de menor mayor poder a mayor poder eluyente Hexano, ter de petrleo Heptano Ciclohexano Tetracloruro de carbono Benceno Tolueno Cloroformo ter dietlico Acetato de etilo Piridina Acetona Propanol Etanol Metanol Agua Mezcla de cidos o bases con agua, alcoholes o piridina.

Azcar, almidn Inulina Talco Carbonato de sodio Carbonato de potasio Carbonato de calcio xido de magnesio Gel de slice activada Almina activada (Al2O3)

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La regla general es elegir la polaridad anloga a la de la muestra a emplear y en la casos adsorbentes poderosos (activos) para polares y adsorbentes con menos actividad para polares.

del disolvente mayora de los sustancias no sustancias ms

En la tabla anterior se indica una relacin de adsorbentes y disolventes ordenados de menor a mayor polaridad, (actividad y poder eluyente respectivamente).

CROMATOGRAFA DE PARTICIN O REPARTO

Tcnica donde la separacin selectiva de los componentes se produce por el diferente grado de solubilidad que estos puedan tener con las dos fases participantes. Es decir, como si se estuviese produciendo un elevado nmero de extracciones. Por ello, las fases tiene que ser inmiscibles entre si y el soluto sufre un equilibrio de particin entre ambas que queda definido por una constante K, llamada coeficiente de reparto, cuyo valor depende para una fase estacionaria determinada y para una fase mvil dada, de la naturaleza del soluto a aislar, lo que origina las diferencias en la retencin y la consiguiente separacin. El soluto se reparte entre el lquido de la fase estacionaria y la fase mvil, por diferencia de solubilidad, hasta alcanzar el equilibrio. La tcnica cromatogrfica consiste en disponer de una columna de tal forma que su contenido sea capaz de establecer fuerzas de retencin hacia una sustancia, a la vez que un disolvente que pasa continuamente por esa columna sea capaz de establecer fuerzas de disolucin hacia ese soluto. Lgicamente, para que la fase estacionaria se mantenga dentro de la columna debe estar formando una delgada pelcula sobre un soporte inerte. En este tipo de cromatografa se debe controlar la temperatura y los volmenes de ambas fases (estacionaria y mvil) ya que estos parmetros alteran la solubilidad y por tanto el coeficiente de reparto.

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CROMATOGRAFA DE ADSORCIN EN COLUMNA

Cromatografa liquido slido que utiliza columnas huecas verticales de vidrio cerradas en su parte inferior con una llave que permite la regulacin del flujo de la fase mvil. Como fase estacionaria se emplean bsicamente dos adsorbentes, gel de slice y almina. La tcnica consiste en rellenar la columna con el adsorbente elegido que debe sedimentar sin que se produzcan canales o grietas. En la parte superior de la columna se coloca la mezcla a separar, llamada cabeza de la columna que se obtiene mezclando el adsorbente con la muestra con el eluyente (fase mvil) que va a ser utilizado en el proceso de separacin Se deja que el eluyente empiece a descender por la columna ya sea por gravedad o a presin (cromatografa flash). Se produce la adsorcin de los componentes con diferentes intensidades logrando que unos avancen ms que otros. En la parte inferior de la columna se recogen las diferentes fracciones cromatogrficas que se analizan y agrupan en funcin de sus caractersticas.

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El rendimiento del proceso depende bsicamente preparacin de la columna y del proceso de elucin.

de

la

El relleno de la columna puede ser en seco o en hmedo. El seco tiene el inconveniente de que pueden aparecer burbujas de aire en la columna que son difciles de eliminar. Tambin hay que tener presente que los adsorbentes al empaparse de los eluyentes aumenta su volumen y pueden romper la columna. El relleno hmedo evita los problemas anteriores y consiste en llenar la columna en forma continua con una mezcla de adsorbente con el eluyente a utilizar de menor polaridad. La cantidad de adsorbente a emplear es de 20 25 gramos de adsorbente por cada gramo de mezcla a separar. Este es el tipo de cromatografa ms utilizado en Qumica Orgnica. El orden aproximado de elucin de los compuestos es el que se indica a continuacin.

Aumento de la polaridad movimiento ms lento

Alcanos Alquenos teres Hidrocarburos halogenados Hidrocarburos aromticos Aldehdos y cetonas steres Alcoholes Aminas cidos carboxlicos

Polaridad de los disolventes ms usuales:

Aumento de la polaridad, se eluye ms fcilmente

Alcanos (hexano, ter de petrleo) Tolueno Hidrocarburos halogenados ter dietlico Acetato de etilo Acetona Alcoholes cido actico.

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CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

La tcnica de Cromatografa en Capa Fina CCF ( TLC, sus siglas en ingls Thin Layer Cromatography) es una adaptacin especial de la cromatografa de adsorcin muy utilizada en Qumica Orgnica ya que entre otras cosas nos permite: Determinar el grado de pureza de una muestra Comparar muestras. Hacer el seguimiento de una reaccin qumica Controlar el contenido de las fracciones obtenidas por cromatografa en columna Determinar las condiciones ms adecuadas para una cromatografa en columna.

La fase estacionaria consiste en una fina capa delgada de gel de slice o almina adherida a un soporte de vidrio, aluminio o materiales plsticos con un grosor que puede oscilar entre 1 hasta 0,1 0,2 mm. Algunas placas vienen con indicadores fluorescentes. Para realizar la cromatografa se aplica la muestra disuelta en la parte inferior de la placa, y a 1 cm del borde de la misma, con la ayuda de un capilar. Las muestras se deben colocar entre 1 - 1,5 cm del extremo de la placa de tal forma que al ponerla en contacto con el disolvente que se encuentra en la cubeta no cubra la muestra.

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El cromatograma se introduce verticalmente en un recipiente cerrado llamado cubeta de cromatografa o tanque de desarrollo que contiene en su fondo una pequea cantidad del eluyente que se vaya a usar (fase mvil) dejando que el disolvente ascienda por capilaridad.

Las sustancias que forman parte de la muestra se adhieren a la fase estacionaria o son arrastradas con la fase mvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a su afinidad por la fase estacionaria. Cuando el eluyente ha ascendido hasta casi el borde superior de la placa, se saca, se seca y se observan las seales. Muchas veces las sustancias desarrolladas por este mtodo, al no ser coloreadas, no son visibles. Para hacerlas visibles se utiliza luz ultravioleta entre 240 270 nm. Para hacer visibles aquellas seales que no se detectan a la luz UV ni son coloreadas, se procede al revelado de la placa usando un revelador destacando entre los ms usuales el Yodo y el Oleum [mezcla de cido sulfrico (4%) cido actico (80%) y agua (16%)] El revelado consiste en pulverizar el cromatograma con la especie reveladora y posterior calentamiento en una estufa alrededor de 100 C, logrndose de esta manera la carbonizacin de los compuestos orgnicos. El cromatograma una vez revelado nos presenta mediante manchas el grado de pureza de la muestra o el nmero de compuestos presentes en ella.

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Cmara para el revelado de la placa

Cromatograma

CONCEPTO DE FACTOR DE RETENCIN - Rf

Para determinar las posiciones relativas de las seales se utiliza el concepto de Rf o Factor de Retencin. El Rf es la relacin que existe entre el recorrido de una mancha, medido desde el origen hasta el centro de la misma, y el recorrido por el disolvente (fase mvil) medido desde el origen hasta el frente.
Distancia recorrida por la seal de un compuesto

Rf

-------------------------------------------Distancia recorrida por el frente del disolvente

El Rf se expresa en valores que oscilan desde 0,01 hasta 0,99 y, tambin en porcentaje.

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Cuanto menos haya recorrido la sustancia estacionaria, menor ser el Rf de la misma.

en

la

fase

Los valores de Rf se pueden utilizar con fines comparativos para identificar sustancias al comparar con muestras autnticas de las mismas.

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA BIDIMENSIONAL

Cuando las mezclas a analizar son complicadas la cromatografa unidireccional slo nos conduce a una separacin parcial. Para conseguir una mejor separacin de las manchas se la TLC bidimensional. utiliza

La tcnica consiste en realizar una CCF normal pero colocando la muestra en una esquina del cromatograma y eluyendo dicha placa con un disolvente A. Cuando el eluyente ha llegado al extremo superior de la placa se saca y se seca. A continuacin se gira la placa 90 y se vuelve a cromatografiar utilizando otro eluyente B. El empleo de un disolvente con caractersticas diferentes al primero permite aumentar el recorrido de las sustancias facilitando la separacin parcial de las seales. Despus del segundo desarrollo se saca la placa de la cubeta se seca y se revela con algn agente selectivo.

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Tambin es posible identificar un compuesto determinado sobre un cromatograma bidimensional por comparacin de su posicin (Rf) con la de algn compuesto estndar colocado sobre el mismo cromatograma.
Capa fina bidireccional

Giro 90

Disolvente

x
Disolvente

TLC PREPARATIVA
La cromatografa en capa fina tambin se puede usar con fines cuantitativos para separar pequeas cantidades de un compuesto. Las separaciones preparativas se realizan en placas estndar de 20 x 20 cm (algunas veces en placas de 20 x 40 cm) ms gruesas y el volumen de la muestra tambin debe ser mayor (alrededor de 10 ml). La muestra se aplica en forma de banda lineal pipeta Pasteur o con un capilar. mediante una

Para la TLC preparativa podemos utilizar todos los sistemas de disolventes que hemos descrito para la TLC analtica obteniendo los mismos resultados. Una vez realizada la cromatografa, las bandas de inters se ponen de manifiesto utilizando una tcnica no destructiva con el reactivo adecuado (luz UV o Yodo).

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Capa gruesa sin revelar

La zona de la placa que contiene dicha banda es raspada y recuperada en un matraz y extrada con el disolvente adecuado. Finalmente el disolvente es evaporado para la recuperacin del soluto. Esta tcnica tiene la ventaja de que su tiempo de desarrollo es inferior al de una cromatografa en columna.

CROMATOGRAFA EN PAPEL
Es similar a la CCF, excepto en que como fase estacionaria se utiliza una capa de agua adsorbida sobre una hoja de papel (lquido retenido sobre un soporte slido inerte). El papel contiene retenido alrededor de un 20% de agua. El soporte general que se utiliza es papel Whatman nmero 1 y nmero 3 para separaciones analticas y Whatman 3MM para trabajos preparativos No es estrictamente una cromatografa de adsorcin sino una combinacin de adsorcin y reparto. El reparto se produce entre el agua que hidrata la celulosa de la fase estacionaria y la fase orgnica mvil.

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Cubeta para cromatografa en papel

La tcnica consiste en colocar el papel (fase estacionaria) en una cubeta de vidrio colgndolo de un soporte. La fase mvil, colocada en el fondo de la cubeta (1 1,5 cm), entra en contacto con el papel sobre el cual, a 1 cm de distancia hemos colocado las muestras que deben ser arrastradas y separadas. Este tipo de cromatografa, llamada ascendente, se debe realizar en unas condiciones estndar de saturacin previa de la fase estacionaria ya que el disolvente se puede evaporar del papel antes de que se produzca la separacin y no se consiga el efecto deseado. La tcnica de cromatografa en papel se utiliza preferentemente cuando se trata de separar compuestos polifuncionales o muy polares como aminocidos o azcares. La tcnica descendente es similar a la anterior y slo se diferencia en que el papel es introducido por su parte superior en una canaleta donde hay una pileta para el disolvente. Las muestras colocadas en la parte superior del papel, a 1 1,5 cm de la canaleta, sern arrastradas hacia abajo por el eluyente (fase mvil). Los resultados de ambas tcnicas son similares. En forma anloga a la TLC se pueden realizar cromatografas en papel tanto preparativa como bidimensional.

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Comparacin de las tcnicas de cromatografa en columna y plana

CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA EFICIENCIA - HPLC

Tcnica muy utilizada para el anlisis de compuestos orgnicos pesados como pesticidas, aromticos polinucleares, frmacos, vitaminas, alimentos etc. Cromatografa de adsorcin conocida como HPLC (siglas en ingls High Performance Liquid Chromatography) o Cromatografa Lquida de Alta Presin o Resolucin. Es una variante de la cromatografa en columna donde la fase estacionaria est formada por partculas muy pequeas, en forma esfrica, que hace que el empaquetamiento de la columna sea muy compacto. La disminucin del tamao de los poros que forman la fase estacionaria hace que la cromatografa sea muy lenta prdida de carga, por lo que hay que instalar a la entrada de la columna un sistema de bombeo que tiene dos finalidades: I) Superar la resistencia del relleno II) Aportar un flujo de fase mvil que puede ser controlado a lo largo de toda la cromatografa En estas condiciones se consigue acortar el tiempo de anlisis

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de las columnas de gravedad. En la cromatografa lquida los componentes de una mezcla son llevados a travs de una fase estacionaria fijada dentro de una columna de cromatografa mediante el flujo de una fase mvil lquida. Las separaciones estn basadas en las diferentes velocidades de migracin que existen entre los componentes de la mezcla que dependen de su naturaleza y su interaccin con las fases. Una cromatografa por HPLC puede tener un poder de separacin miles de veces superior al de una columna simple. Las partculas de relleno suelen ser microesferas de slice, almina o resina cuyo dimetro oscila entre 3 25 m (micras). Las columnas de HPLC son de acero inoxidable, con un dimetro interno de 2 5 mm y una longitud variable de 10 30 cm dependiendo del dimetro de las micropartculas de relleno. El flujo a presin se aplica entre 1500 800 psi. En la cromatografa HPLC, como en cualquier tipo de cromatografa, se distinguen una fase estacionaria y una fase mvil. Como ambas compiten con las molculas del soluto sern de polaridades diferentes. Si la fase mvil la integran compuestos orgnicos poco polares, la fase estacionaria ser relativamente polar. La tcnica derivada de esta situacin se llama de fase normal por ser la modalidad ms usual de la HPLC. Si la fase mvil la forman lquidos acuosos o polares y la fase estacionaria es poco polar o apolar, la tcnica se llama de fase inversa (cada vez ms usada). HPLC en fase normal Fase mvil poco polar (hexano, tetracloruro de carbono, benceno, etc.) Fase estacionaria polar (generalmente slice) HPLC en fase inversa Fase mvil polar (agua, disoluciones amortiguadoras de pH, metanol, acetonitrilo, etc.) Fase estacionaria no polar: (habitualmente silica injertada con compuestos orgnicos que contienen desde 8 hasta 18 tomos de carbono). Esta tcnica requiere un equipo muy sofisticado que describimos a continuacin.

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ESQUEMA DE UN CROMATGRAFO HPLC

Gases disueltos Jeringa o vlvula para la muestra Inyector Desgasificador de solventes Espacio trmico Cmara del disolvente Columna analtica Medidor de presin Filtro Lectura Precolumna

Bomba Detector y Amplificador Vlvula de seguridad y purga Recoleccin o descarga

Descarga

CMARA DEL DISOLVENTE Los componentes de la fase mvil para HPLC necesitan un estricto control de pureza fsica y qumica por ellos tienen que ser filtrados y muchas veces desgasificados. Es conveniente que en esta cmara (reservorio) existan desgasificadores (aplicacin de ultrasonidos) para eliminar los gases del disolvente pues producen burbujas en la columna que interfieren en los resultados. Se puede trabajar con un solo disolvente (elucin isocrtica) o se puede cambiar continuamente la composicin del disolvente (elucin por gradiente). BOMBA DE ALTA PRESIN Es la encargada de introducir la fase mvil (eluyente) en la columna de cromatografa. Estas bombas deben aportar un flujo constante del disolvente entre 0,001 hasta 10 ml/minuto. Las elevadas presiones que generan las bombas (varios centenares de atmsferas) no constituyen un peligro de explosin ya que los lquidos no son muy compresibles. No obstante, muchos

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cromatgrafos presentan vlvulas de seguridad y purga por si se produce este proceso. PRECOLUMNA El empleo de una columna previa (precolumna) a la columna analtica mejora la eficiencia de la separacin cromatogrfica. Su misin es eliminar contaminantes y partculas de polvo. CMARA DE INYECCIN DE LA MUESTRA - INYECTOR. Dispositivo por medio del cual se introduce la muestra en el sistema cromatogrfico. La inyeccin se realiza con una jeringa que se introduce en el inyector y descarga la muestra para su anlisis. La muestra no debe contener slidos para que no se atasque, si es necesario hay que proceder a su filtracin. La muestra debe ser disuelta en el mismo eluyente que se va a utilizar. El volumen a inyectar de muestra debe ser el menor posible para que los resultados sean ms ntidos. COLUMNA ANALTICA Es el corazn del sistema cromatogrfico, en ella se produce la retencin de los diferentes compuestos que permite su separacin. ESPACIO TRMICO - CALENTADOR. Su misin es controlar la temperatura del proceso que puede oscilar desde la ambiental hasta 150C. Manteniendo la temperatura constante se obtienen mejores resoluciones cromatogrficas. DETECTOR. Dispositivo que colocado a la salida de la columna nos indica quien va en la fase mvil. Su misin es detectar los momentos de emersin de los componentes y proporcionar informacin cualitativa y cuantitativa de los mismos. La accin del detector se traduce en una seal, (normalmente de tipo elctrico) que posteriormente se amplifica y registra en un grfico llamado cromatograma. El cromatograma consta de una serie de picos que se emplean para identificar cualitativamente (posicin en el eje) y cuantitativamente (rea de los picos) a los componentes de la muestra, al compararlos con cromatogramas estndar. Se dividen en dos tipos: Detector selectivo. Aquel que responde a una propiedad del soluto en disolucin.

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Ejemplo, el detector UV/Visible nos mide la absorcin de un producto a una determinada longitud de onda, el fluormetro que nos mide la fluorescencia, etc. El ms utilizado es el detector espectrofotomtrico UV/Vis por ser el ms sensible y estable a los cambios de flujo y temperatura (trabaja en el rango 190 650 nm). Es el ms utilizado porque muchos solutos absorben este tipo de radiacin y son bastantes sensibles a ella. El sistema ms simple emplea la emisin a 254 nm de una lmpara de mercurio y deteccin a una sola longitud de onda.
Esquema de un detector espectrofotomtrico UV/Visible

Detector universal. Aquel que responde cuando una propiedad de la fase mvil es modificada por la presencia de un soluto en ella. Ejemplo, el detector de ndice de refraccin (RI) nos mide el cambio en el ndice de refraccin entre el lquido contenido en el matraz y la referencia. Los ms utilizados son el detector de el de conductividad. COLECTOR DE FRACCIONES En este mdulo se van recogiendo las fracciones a medida que van llegando al detector. Esta recogida nos separa los ndice de refraccin y

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componentes de idnticas propiedades entre s, salvo que aparezcan picos solapados. A continuacin se toman las muestras, se comprueba su pureza mediante una cromatografa en capa fina y se efectan los ensayos de identificacin con las tcnicas disponibles, IR, RMN, Fluorescencia, Masas, etc. La mayora de los cromatgrafos de HPLC llevan incorporados un colector de fracciones. ORDENADOR CROMATOGRFICO Microprocesador diseado solo para esta tcnica, es el nexo entre todos los componentes del equipo. Su misin es controlar todas las variables del proceso e indicar en cada instante las condiciones del sistema.

CROMATOGRAFA DE GASES
Tcnica cromatogrfica que se utiliza para separar compuestos orgnicos voltiles como hidrocarburos, fenoles, disolventes, cidos grasos, etc. Hay dos tipos de cromatografa de gases: Cromatografa Gas Slido (CGS) donde la fase estacionaria es un slido y la fase mvil un gas inerte. (Tcnica muy limitada solo aplicable a compuestos gaseosos de bajo peso molecular). (Cromatografa de adsorcin) Cromatografa Gas - Lquido (CGL) donde la fase estacionaria es un lquido retenido sobre la superficie de un soporte slido y la fase mvil es un gas. En este caso la separacin de los compuestos depende de la constante de solubilidad de la muestra entre la fase lquida y la fase gaseosa. Esta es la tcnica conocida vulgarmente como cromatografa de gases CG (Cromatografa de reparto). MTODO GENERAL DE LA CROMATOGRAFA DE GASES Una pequea muestra del material a separar se inyecta en una corriente de gas inerte (fase mvil)) que lo transporta hasta la columna de cromatografa que contiene el medio adecuado para ir retardando el flujo de los componentes individuales de la muestra. Los componentes de la muestra se van separando en la columna cromatogrfica debido a las diferencias de su perfil de particin o retencin entre la fase mvil gaseosa y la fase estacionaria slida o lquida. La diferencia en la adsorcin o en el reparto sobre el material de la columna es el factor que hace posible la separacin. Los compuestos ya separados emergen a intervalos de tiempo discretos (caracterstico de cada componente) y pasan a travs de un tipo de detector.

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Esquema general de un cromatgrafo de gases

ELEMENTOS DEL CROMATGRAFO DE GASES GAS PORTADOR: Los ms usuales son el helio, argn, nitrgeno, dixido de carbono e hidrgeno, inyectados a presin que oscila entre 2 6,3 atm. Su eleccin depende del tipo de detector instalado en el cromatgrafo. El gas portador, qumicamente inerte, se mezcla con la muestra vaporizada impulsndola por el interior de la columna. INYECTOR: Dispositivo encargado de introducir la muestra en la columna. Se mantiene a temperaturas elevadas entre 200 350 C. La temperatura de trabajo se debe elegir de tal forma que se consiga la volatilizacin de todos los componentes presentes en la mezcla, pero no debe ser superior a la temperatura de ebullicin del componente menos voltil ya que puede producir su descomposicin. COLUMNAS: La columna de cromatografa est situada dentro de un horno ya que esta tcnica se realiza a elevadas temperaturas. Las columnas pueden ser de vidrios, plsticos y

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metlicas (cobre - nquel y acero inoxidable). Generalmente se usan columnas metlicas (ms caras pero ms eficaces) cuya longitud oscila entre 1 4,5 m y entre 2 20 mm de dimetro. En las columnas de adsorcin los adsorbentes ms usuales son la almina, gel de slice y carbn activo. En columnas de reparto el material de relleno consiste en un soporte slido finamente dividido como celita, arcilla o esferitas de vidrio que portan el lquido voltil. Los lquidos ms empleados son las siliconas, grasas y glicoles polietilnicos. DETECTOR: Los componentes de la muestra ya separados, abandonan la columna de cromatografa y se dirigen hacia el detector que mide alguna propiedad fsica del compuesto que origina una seal elctrica sobre el registrador. Entre los detectores ms usuales est el de ionizacin de llama, conductividad trmica, el termoinico (para detectar compuestos orgnicos con nitrgeno y fsforo y el detector fotomtrico de llama til para el anlisis de contaminantes del agua y del aire como pesticidas e hidrocarburos. REGISTRADOR: El proceso de separacin por cromatografa de gases queda reflejado en un cromatograma donde se observan una serie de picos. Cada pico representa una sustancia de las eluidas en la columna. Estos picos vienen caracterizados por tres parmetros: * Tiempo de retencin: tiempo transcurrido entre la inyeccin de la muestra y la elucin de un producto de la misma. * Volumen de retencin: volumen total del gas portador que se ha necesitado pasar a travs de la columna para separar completamente la sustancia responsable de ese pico. Volumen retencin = (tiempo retencin) x (velocidad del flujo) * rea de los picos: directamente relacionada con la concentracin de la sustancia detectada. La altura de los picos en el cromatograma se expresa en unidades de potencial elctrico. El rea de los picos se calcula multiplicando el alto del pico por el ancho del mismo medido a la mitad de su altura.

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Actualmente los cromatgrafos de gases llevan incorporados unos aparatos llamados integradores que realizan esa funcin automticamente. La identificacin de los productos separados se realiza comparando su tiempo de retencin o volumen de retencin con el de sustancias conocidas. En el anlisis de mezclas con sustancias desconocidas la tcnica de la cromatografa de gases no es suficiente. En este caso es necesario recoger la muestra a la salida del detector para realizar su identificacin con las tcnicas habituales de IR, RMN, UV y Masas. Esta tcnica tiene dos grandes ventajas: * til para separar cantidades muy pequeas de material (del orden de 10 4 g). * Requiere poco tiempo para su realizacin al contrario que otras tcnicas analticas.

Ilustracin de las tcnicas cromatogrficas en capa fina y gases.

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Aplicacin de la cromatografa de gases en la determinacin de drogas. Los picos del cromatograma se identifican positivamente por comparacin con los de estndares conocidos de drogas.

CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO

Mtodo muy utilizado en la separacin de iones inorgnicos como nitratos (NO3-), sulfatos (SO42), separacin y purificacin de molculas biolgicas (pe, protenas) y en los procesos de desionizacin del agua. La tcnica es muy similar a la utilizada en la cromatografa en columna y la separacin se produce en funcin de la carga que posee el soluto. Fase estacionaria: resinas de intercambio inico que tienen la propiedad de separar especies ionizadas (aniones o cationes) Fase mvil: generalmente disoluciones amortiguadoras de pH.

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La afinidad de los compuestos por los grupos cargados de la fase estacionaria est influida por el pH que determina su estado de ionizacin. El intercambiador inico consiste en una matriz insoluble a la que se han unido covalentemente grupos cargados. Estos grupos cargados pueden ser reversiblemente intercambiados por otros iones de la misma carga sin alterar la matriz. Hay dos tipos de intercambiadores inicos Intercambiador catinico. Posee grupos cargados negativamente que atraen cationes (cargas +). Tambin se les conocen como intercambiadores inicos cidos porque sus cargas negativas proceden de la ionizacin de sus grupos cidos. Las resinas catinicas presentan como grupos funcionales ms frecuentes el sulfonato SO3 H+ y el carboxilato -COO- H+. Intercambiador aninico. Posee grupos cargados positivamente que atraen aniones (cargas negativas). Tambin se les conocen como intercambiadores inicos bsicos ya que las cargas positivas que poseen resultan de la asociacin de protones con grupos bsicos. Las resinas aninicas suelen contener grupos amonio cuaternario -RN+R3 (-NH3+OH) y (-+N(CH3)3OH-) Se utilizan normalmente como fase mvil disoluciones acuosas tamponadas ya que las propiedades del agua contribuyen a la disociacin de los grupos inicos y al hinchamiento de la matriz efectos que aumentan el intercambio inico. Hay que tener presente dos reglas bsicas

1) La temperatura del proceso que afecta a la constante de equilibrio (pK) de la disolucin tampn por lo que puede variar su capacidad de tamponamiento. 2) Que los iones del tampn no interfieran en el proceso de intercambio inico ya que si estos iones llevan carga opuesta a la de los grupos funcionales del intercambiador inico intervendrn en el proceso de intercambio inico y causarn perturbaciones en el pH. CONCLUSIN: Utilizar tampones catinicos con intercambiadores aninicos y tampones aninicos con intercambiadores catinicos

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Tampones ms usuales en cromatografa de intercambio inico

Intercambiador inico Catinico

Tampn Acetato Citrato Fosfato Hepes L-Histidina Imidazol Trietanolamina Tris Dietanolamina

pKa 4,75 4,75 7,20 7,55 6,15 7,00 7,77 8,16 8,80

Rango de tamponamiento 4,2 4,2 6,7 7,6 5,5 6,6 7,3 7,5 8,4 5,2 5,2 7,6 8,2 6,0 7,1 7,7 8,0 8,8

Aninico

EL PROCESO CROMATOGRFICO

DE INTERCAMBIO INICO

1) Instalacin de la columna: la resina de intercambio inico se empaqueta en la columna. Los rellenos de las resinas son polmeros cruzados de estireno y etilbenceno a los que se les ha aadido los grupos funcionales cido (SO3H) o bsico (Todo este conjunto recibe el nombre de matriz de la NH3OH). columna o lecho de la columna. 2) Aplicacin de la muestra reversible de la misma. producindose la adsorcin

3) Separacin de las sustancias las molculas que poseen una carga opuesta a la del intercambiador se adsorben, mientras que las molculas neutras o las que poseen la misma carga que la del intercambiador se eluyen a lo largo de la columna. Las sustancias se separan entre s porque poseen diferentes afinidades por el intercambiador inico, debido a sus diferencias de cargas. La separacin del compuesto de la matriz cargada se puede realizar cambiando el pH de la disolucin El intercambio de iones es un proceso instantneo equilibrio esquematizado en las siguientes reacciones: y en

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Intercambiador catinico.
R - SO3
-

.... Na+

H3N+ R

R SO3

.... + NH3 R+

Na+

Intercambiador aninico R4N+ .... Cl+ - OOC

R4 N

.... OOC

Cl

Separacin de protenas por cromatografa de intercambio inico

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CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN MOLECULAR

Tambin conocida como Cromatografa de Filtracin sobre Gel, Cromatografa de Permeacin sobre Gel y Cromatografa por Tamao Molecular o por Tamices Moleculares. Es un tipo especial de cromatografa separacin de sustancias que poseen diferentes. que se utiliza en la volmenes o tamaos

La fase estacionaria, llamada malla molecular, est formada por partculas altamente porosas que permiten la separacin de los componentes de la mezcla en funcin del tamao de las molculas. No existen interacciones entre la fase estacionaria soluto. Se separan por el tamao de la partcula. y el

Las especies ms utilizadas como fase estacionaria se dividen en dos tipos: Tipo Inorgnico: como las zeolitas sintticas, por ejemplo los tamices moleculares de Linde. Tipo Orgnico: como geles y biogeles (polmeros orgnicos) por ejemplo, el Sephadex (polmero cruzado derivado del dextrano) Todas estas especies poseen cavidades o poros a travs de los cuales las molculas pueden pasar o ser retenidas. MECANISMO DE FILTRACIN SOBRE GEL La muestra a cromatografiar se aade por la parte superior de la columna y se procede a su elucin con el disolvente adecuado. Las sustancias cuyo tamao molecular es superior al de los poros del gel no pueden atravesarlo por lo que pasan con el lquido a travs del lecho emergiendo las primeras en la columna. El tamao de estas molculas determina el llamado lmite de exclusin de tal forma que aquellas molculas que superan dicho lmite sern las primeras en ser eluidas. Las molculas ms pequeas penetran en los poros quedando retenidas en su interior y sern las ltimas en ser eluidas. Las molculas que emergen de la columna siguen decreciente respecto a sus pesos moleculares. un orden

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Separacin de protenas mediante cromatografa de exclusin molecular.

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BIBLIOGRAFA "Anlisis Instrumental" Skoog Leary Ed. McGraw Hill (1993)

"Cromatografa Lquida de Alta Resolucin" Adrin Garca de Marina Ed. Limusa (1988) "Determinacin de Estructuras Orgnicas" Daniel J. Pasto Carl R. Jonson Ed. Revert (1984) "Gua de Prcticas de Qumica Orgnica" Mariana Lpez Snchez Jorge Triana Mndez Mara Esther Torres Padrn Ed. Servicio de Reprografa y Encuadernacin Universidad de Las Palmas de Gran Canaria (2001) - Benito del Castillo

"Introduccin a la Cromatografa" David Abboutt R.S Andrews Ed. Alambra (1983) " Manual de Cromatografa" Juan Francisco Loro Ferrer Coleccin Textos Universitarios. Gobierno de Canarias. Consejera de Educacin - Cultura y Deportes (2001)