1.

Aminocidos e Protenas
As protenas so as molculas orgnicas mais abundantes nas clulas e correspondem a cerca de 50% ou mais de seu peso seco. So encontradas em todas as partes de todas as clulas, tendo funes fundamentais na lgica celular. Em virtude desta importncia qualitativa e quantitativa, as protenas tm sido largamente estudadas e seus segredos desvendados, no que diz respeito sua sntese ou aproveitamento metablico. Os -aminocidos encontrados em peptdeos e protenas consistem de um grupo funcional cido carboxlico (-COOH), um grupo amino (-NH2) e um hidrognio (-H) ligados ao tomo de carbono-. Grupos-R (cadeia lateral) distintos, tambm esto associados ao carbono-alfa, desta forma, o carbono- encontrado nos aminocidos tetradrico ou assimtrico (exceto no caso da glicina onde o grupo-R o hidrognio). Um aminocido difere de outro justamente pelo grupo-R (cadeia lateral).

A unio entre dois aminocidos, forma um dipeptdeo, assim como trs unem-se formando um tripeptdeo e assim sucessivamente, sendo que a unio de vrios aminocidos ir dar origem a uma cadeia polipeptdica. So conhecidos 20 aminocidos (Alanina, Arginina, Aspartato, Asparagina, Cistena, Fenilalanina, Glicina, Glutamato, Glutamina, Histidina, Isoleucina, Leucina, Lisina, Metinonina, Prolina, Serina, Tirosina, Treonina, Triptofano e Valina) encontrados nas molculas de protenas, com sua sntese controlada por mecanismos genticos, envolvendo a replicao do DNA e transcrio do RNA. A metade dos aminocidos sintetizada pelo organismo e vai suprir as necessidades celulares; aqueles que no so sintetizados precisam estar presentes na dieta e so chamados de aminocidos essenciais e os aminocidos no-essenciais aqueles que so sintetizados no organismo.

Figura 1-1 : Representao da estrutura geral dos aminocidos em pH neutro.

As protenas so macromolculas de alto peso molecular, polmeros de compostos orgnicos simples, os -aminocidos. Nas molculas proticas os aminocidos se ligam covalentemente, formando longas cadeias no ramificadas, atravs de ligaes peptdicas envolvendo o radical amino (-NH2) de um aminocido e o radical cido carboxlico (COOH) de um outro, havendo a liberao de uma molcula de gua durante a reao (Figura 1-2).

Figura 1-2: A ligao peptdica ocorre entre o grupamento -COOH de um aminocido com o grupamento -NH2 de outro. O primeiro aminocido da cadeia peptdica aquele que possui o grupamento amino-terminal e o ltimo, o que possui o livre o grupamento carboxila-terminal. O grupamento R sempre ocupa posio oposta ao prximo, devido ao C ser assimtrico, o que vai contribuir para a forma tridimensional da protena.

Esta grande variabilidade proporciona arranjos incontveis entre as cadeias peptdicas em sua estrutura tridimensional bem como na funo da protena, uma vez que os diferentes aminocidos possuem diferentes propriedades qumicas que, em conjunto, sero responsveis pela funo da protena.

O estudo da composio e polaridade do grupamento R permite agrupar os aminocidos em quatro classes distintas: a) Aminocidos com grupamento R apolar ou hidrofbico: so os menos solveis, devido ausncia de grupamentos hidroflicos no grupamento R. So eles: Cadeia aliftica hidrocarbonada: alanina, leucina, isoleucina, valina e prolina; Anel aromtico: fenilalanina e triptofano; Tioter: metionina. Hidrognio: glicina. A alanina representa o aminocido mais solvel deste grupo e a prolina , na realidade, um iminocido onde o grupamento R um substituinte do aminogrupo. A glicina o aminocido mais simples em virtude de possuir como R apenas um tomo de hidrognio (apolar), sendo tambm o nico aminocido que no possui carbono assimtrico. Algumas vezes classificado como polar, pois o grupamento funcional lhe confere certa solubilidade. b) Aminocidos com grupamento R polar no-carregado: possuem grupamentos hidroflicos na cadeia carbonada que no se ionizam, porm conferem maior solubilidade ao aminocido. So eles: Hidroxila: serina, treonina e tirosina; Grupo Amida: asparagina e glutamina; Sulfidrila ou Tiol: cistena; A cistena e a tirosina tem os grupamentos R mais polares, sendo portanto os mais solveis desta classe. A cistena, freqentemente, ocorre nas protenas em sua forma oxidada, a cistina, na qual a sulfidrila (SH) esto unidas formando pontes dissulfeto (S-S) que so ligaes covalentes importantes na estabilizao da molcula protica. A asparagina e a glutamina so amidas do cido asprtico e do cido glutmico, respectivamente. c) Aminocidos com grupamento R polar carregado positivamente (bsicos): Lisina, arginina e histidina; todos possuem grupamento R de 6 carbonos e a carga positiva localiza-se em um tomo de nitrognio do R.

d) Aminocidos com grupamento R polar carregado negativamente (cidos): cido asprtico e cido glutmico. So citados como aspartato e glutamato em virtude de se ionizarem em pH fisiolgico adquirindo carga negativa no grupamento carboxila (COO-). Na Figura 1-3 esto representados todos os aminocidos.

Figura 1-3: A estrutura geral dos aminocidos est em preto e os grupos-R (cadeia lateral) esto em vermelho.

Propriedades cido-bsicas dos aminocidos

Os grupamentos amino e cido, encontram-se na forma ionizada quando em soluo. Dependendo do pH, o grupamento amino com carga positiva (forma catinica) ou o grupamento cido carboxlico com carga negativa (forma aninica), podem predominar. Porm, em determinado pH (pH isoeltrico ou Ponto isoeltrico), haver somente uma forma dipolar (ou seja, positiva e negativa ao mesmo tempo), onde ser observada uma neutralidade eltrica na molcula. Estes ons dipolares, so tambm chamados de zwitterions (expresso alem que ao p da letra significaria algo como "ons hermafroditas"), predominam no ponto isoeltrico (pHi). A forma catinica predominar em pH abaixo do pHi, enquanto que a forma aninica predominar em pH acima do pHi, uma vez que abaixo ou acima do pHi haver deficincia ou excesso de H+ na soluo, respectivamente, o que varia a carga eltrica pois o grupamento COO- receber H+ e o NH3+ doar ser H+. O valor do pHi varia de acordo com o aminocido e corresponde a um valor que serve como identificador e classificador dos aminocidos de acordo com a variao do pH. Os valores de pK1 e pK2 correspondem aos valores de pH onde o aminocido funciona como um tampo durante uma curva de titulao. Para melhor entender esses conceitos, considere que se realizssemos uma titulao de um cido por uma base, teramos, inicialmente, um pH cido que iria aumentando proporcionalmente ao acrscimo de base (Figura1-4).

Esse aumento proporcional no valor o pH se d porque cada molcula de base adicionada neutraliza uma de cido (formando gua e o sal correspondente) at o valor de equivalncia entre a quantidade de bases e cidos, onde o pH neutro (pH=7,0). um valor tnue, pois qualquer quantidade de base adicionada a mais eleva o pH para a faixa alcalina. No entanto, se esta mesma titulao fosse realizada com a adio de um aminocido no meio a ser titulado, um grfico representando a elevao do pH demonstraria duas zonas de estabilizao (uma em pH cido e outra em pH bsico) indicando que h duas zonas de equilbrio qumico, onde no h a variao do pH mesmo com a adio da base no meio cido (Figura 1-5). Essas regies demonstram que os aminocidos so responsveis por uma funo tamponante (evitam variaes bruscas de pH). Como a forma dipolar a que ocorre no pHi, toda vez que o pH cai abaixo do valor do pHi (acidificao do meio), o aminocido recebe o H+ adicionado atravs da extremidade COO- tornando-se um ction. Quando o pH eleva-se acima do valor do pHi (alcalinizao do meio), o aminocido torna-se um nion devido doao do H+ pelo grupamento NH3 + (Figura 1-6). Se relacionarmos em um grfico o pH em funo dos equivalentes de uma base adicionada a uma soluo cida de um aminocido, observaremos os pontos fundamentais no comportamento cido-bsico dos aminocidos (Figura 1-5).

Figura 1-4 - Em uma titulao convencional de um cido por uma base, a adio de base modifica o pH cido original para bsico passando pelo pH neutro 7,0.

Figura 1-5 - A curva de titulao da glicina. O pHi (somente formas dipolar isoeltricas) corresponde mdia entre os valores de pK1 ([dipolar] = [catinica]) e pK2 ([dipolar] = [aninica]).

No incio da titulao, teoricamente, s existe a forma catinica em virtude de o aminocido funcionar como um receptor de prtons, ou seja, como uma base. Ao adicionar uma base (OH-) ao sistema, comea a haver a neutralizao com o aparecimento da forma dipolar at um determinado ponto em haver igualdade de concentrao entre as duas formas, entrando o sistema em equilbrio, correspondente ao pK1.

titulao, induzido pelo grupamento R (o pK3 freqentemente denominado de pKR). Essas informaes acerca da propriedade cido-bsica dos aminocidos so fundamentais para a compreenso da funo das protenas como um tampo intracelular e, tambm, dos mtodos de identificao dos aminocidos e de separao das protenas que se baseiam na capacidade de aminocidos e protenas mudarem de carga eltrica de acordo com o pH do meio.

Estrutura das protenas

Devido caracterstica anftera dos aminocidos (podem ser ctions ou nions) e a capacidade de modificao da carga eltrica do grupamento R observada em vrios aminocidos as protenas tero conformao estrutural bastante diversificada uma vez que os aminocidos se relacionaro entre si de maneira variada. A flexibilidade dada pelo C devido ao fato de ele ser assimtrico (ligado a quatro grupos diferentes: NH3 +, COO-, H e R) o que lhe garante livre rotao em seu eixo. Esta flexibilidade da molcula protica dada pelo C, confere uma grande versatilidade protena, o que faz de sua estrutura tridimensional o ponto chave para sua funo. Entretanto, esta flexibilidade limitada pela existncia de interaes qumicas entre as cadeias peptdicas e entre os grupamentos R dos resduos de aminocidos, seja intermolecular ou com outros compostos qumicos alheios composio original da protena. Cada tipo de protena possui uma configurao tridimensional peculiar que determinada pela seqncia de aminocidos e pelo grau de inclinao entre as ligaes qumicas (proporcionada pelos arranjos intermoleculares). A estrutura molecular das protenas muito complexa, por essa razo conveniente dividi-la em nveis distintos de organizao, veja a seguinte figura.

Figura 1-6 - As trs formas carregadas dos aminocidos. A forma dipolar corresponde quela que contm um plo positivo em NH3 + e outro negativo em COO- (a carga final neutra) e corresponde nica forma existente no pHi. A forma catinica est presente em qualquer valor de pH abaixo do pHi, enquanto que a aninica tpica do aumento do valor do pH acima do valor do pHi.

Prosseguindo a titulao, com o aumento do pH em virtude do aumento gradual da concentrao de base, comear a predominar a forma dipolar com a queda proporcional da forma catinica at um ponto onde s haver a forma dipolar. Neste ponto, o pH corresponder ao pH isoeltrico (pHi) onde o sistema se apresentar eletricamente neutro. Ao se adicionar mais base, h o aparecimento da forma aninica at um determinado ponto em que haver igualdade na concentrao entre a forma dipolar e a aninica, entrando o sistema, novamente, em equilbrio agora entre a forma dipolar e a forma aninica, correspondente ao pK2. Adicionando mais base, haver a predominncia da forma aninica at o pH 14 onde, teoricamente, s haver a forma catinica. Alguns aminocidos apresentam um terceiro plat de estabilidade em sua curva de titulao (pK3) que correspondente a um terceiro momento de equilbrio durante a

de aminocidos estrutura primria das protenas, tambm pode ser responsvel por modificao em sua eficcia funcional. 2) Estrutura secundria: relaciona a forma que a cadeia polipeptdica assume no espao, que pode ser de -hlice ou -folha pregueada. A conformao em -hlice conferida atravs do ngulo de toro que os resduos de aminocidos apresentam na ligao peptdica, estabilizada por pontes de hidrognio entre o oxignio do grupamento carboxila de um C e o H do grupamento amino do outro aminocido (Figura 1-9).

Figura 1-7: Nveis de organizao da estrutura molecular de uma protena.

1) Estrutura primria: diz respeito seqncia de aminocidos, dada pela seqncia de nucleotdeos da molcula de DNA responsvel por sua sntese. A estrutura primria de peptdeos e protenas refere-se ao nmero linear e a ordem dos aminocidos presentes. A conveno para a designao da ordem dos aminocidos a de que o Nterminal (ou seja, o final com o resduo com o grupo -amino livre) para a esquerda ( do primeiro aminocido) e do C-terminal (ou seja, o fim com o resduo que contm um grupo carboxila livre) para a direita. Nesta estrutura so encontradas ligaes peptdicas e eventualmente, dependendo da protena, podem ser encontradas ainda as pontes de dissulfeto.

Figura 1-9 - A forma de -hlice possvel graas formao de pontes de hidrognio entre os grupamentos funcionais dos aminocidos da ligao peptdica e ao posicionamento contrrio dos grupamentos R.

A forma de -folha pregueada possvel graas a pontes de hidrognio que ocorrem entre duas partes da cadeias polipeptdicas (Figura 1-10) dentro da molcula protica. Uma protena pode apresentar os dois tipos de organizao secundria dentro de sua molcula (Figura 1-11).

Figura 1-8 : Exemplo de estrutura primria

Esta seqncia deve ser fundamentalmente mantida, sob o peso de a protena perder sua funo, como o caso da presena de valina ao invs de glutamato no sexto aminocido da cadeia polipeptdica da hemoglobina, que causa a doena gentica denominada de anemia falciforme. A ausncia ou acrscimo

Figura 1-10 A forma de -folha pregueada ocorre entre duas cadeias peptdicas dentro da molcula

protica, resultante entre pontes de hidrognio entre elas, resultando em um dobramento entre os aminocidos sobre si formando um ngulo caracterstico que lembra as folhas pregueadas dos formulrios contnuos.

3) Estrutura terciria: corresponde s relaes da cadeia polipeptdica no sentido de estabilizar a conformao tridimensional. Muitos tipos de interaes qumicas podem ocorrer dentro de uma molcula protica para garantir a estabilidade das cadeias polipeptdicas. As mais fortes so as ligaes covalentes, como a que ocorre entre dois aminocidos cistena que se unem atravs de pontes dissulfetos entre seus grupamentos SH formando o complexo cistina (Figura 113).

Interaes Hidrofbicas: So as foras nocovalentes mais importantes para a estabilidade da estrutura enovelada. Ocorrem entre aminocidos de cadeia lateral hidrofbica, excluindo e afastando as molculas de gua no momento da ligao. Interaes eletrostticas (ligaes inicas): Ocorrem entre aminocidos que possuem carga positiva ou negativa na cadeia lateral. Foras de van der Waals: uma fora de atrao inespecfica que ocorre quando dois tomos quaisquer esto prximos. Apesar dessas foras serem comparativamente fracas em relao as demais, o efeito cumulativo de numerosas interaes tem substancial influncia para a estabilidade da estrutura enovelada.

Figura 1-11 Estrutura molecular da enzima da gliclise triose fosfato isomerase que apresenta regies em -hlice (espirais em azul) e em -folha pregueada (setas vermelhas).

H, ainda a formao de pontes de hidrognio, interaes eletrostticas e interaes fracas de van der Waals entre os grupamentos R. Foras no covalentes que estabilizam a estrutura protica tridimensional: Pontes de Hidrognio: Grande nmero de pontes de H so formadas no interior e na superfcie das protenas. Alm de formar pontes de H entre si, os grupos polares das cadeias laterais dos aminocidos podem interargir com a gua ou com o esqueleto polipeptdico. As pontes de H contribuem moderadamente para direcionar o enovelamento.

Figura 1-12: Exemplos de ligaes que estabilizam a estrutura terciria de protenas.

Figura 1-13 A unio covalente entre dois aminocidos cistena entre seus grupamentos SH, gera uma ponte dissulfeto formando um grupo cistina extremamente rgido que ajuda a manter a estrutura terciria das protenas.

Esta estrutura terciria comum a todas protenas e polipeptdios (cerca de 50 aminocidos). Algumas protenas contm apenas uma cadeia polipeptdica (p.ex.: mioglobina, Figura 1-14) enquanto outras so composta por mais de um tipo iguais ou diferentes entre si (protenas oligomricas), como o caso da hemoglobina (Figura 1-15). 4) Estrutura quaternria: o arranjo espacial entre cadeias peptdicas das protenas oligomricas, definida por interaes nocovalentes entre as cadeias peptdicas e outros compostos de origem no protica que, freqentemente, fazem parte da protena. A estrutura quaternria, portanto diz respeito ao arranjo no covalente formado por vrias cadeias polipeptdicas como o caso da hemoglobina.

A configurao espacial final das protenas (estrutura terciria ou quaternria) constante e determinante das funes biolgicas por elas exercidas. As protenas globulares so esferas compactas e irregulares resultantes do enovelamento da cadeia polipeptdica. So bastante solveis em gua e possuem funes diversificadas. A mioglobina e a hemoglobina so exemplos. As protenas fibrosas so protenas de formato cilndrico, apresentam baixa solubilidade em gua e possuem funes estruturais. (p.ex.: colgeno e queratina). O colgeno pouco solvel em gua; apresenta uma tripla hlice estabilizada por pontes de hidrognio. Com uma sequncia repetida de glicina, prolina e hidroxiprolina. Possuindo tambm ligaes cruzadas covalentes de alisinas que aumentam a sua resistncia tensional. A formao de hidroxiprolina e hidroxilisina requer vitamina C. Abaixo um exemplo da estrutura do colgeno, uma protena fibrosa.

Figura 1-14 - Estrutura terciria final da mioglobina, uma protena formada por apenas uma cadeia peptdica. (Adaptado de Devlin, T.M., 1999).

Figura 1-16 Representao esquemtica da estrutura de protenas fibrosas. A estrutura do colgeno evidenciando as cadeias peptdicas unidas em feixes e estabilizadas por pontes de hidrognio.

Figura 1-15 Estrutura quaternria da hemoglobina, uma protena oligomrica formada por quatro cadeias peptdicas unidas por grupamentos prostticos heme.

Algumas protenas tm os dois tipos de conformao, como o caso da miosina muscular e do fibrinognio.

Desnaturao Protica: A exposio de protenas a pH extremos ou temperaturas elevadas, mesmo por perodos curtos, faz com que a maioria delas apresentem modificaes fsicas em sua conformao tridimensional e em sua funo fisiolgica, processo conhecido como desnaturao. Desta forma, a perda da configurao espacial modifica completamente sua funo, podendo at significar a destruio da protena.

Figura 1-17 - O grupamento heme e seu anel tetrapirrlico ligado ao ferro reduzido.

Fisiologicamente, condies extremas de desnaturao protica so obtidas com variao brusca acima de 50oC e pH abaixo de 5,0, ambas condies incompatveis com a vida. Desta forma, o desenovelamento protico em hipertermia ou acidoses leva a diminuio ou at perda da funo protica, mas que se mostra reversvel quando cessa a causa da variao de temperatura e/ou pH. Este processo de renaturao, entretanto no visualizado em condies experimentais extremas onde a desnaturao protica irreversvel.

Protenas conjugadas
Muitas protenas apresentam em sua composio, molculas no proticas ligadas de forma covalente ou no aos aminocidos das protenas, denominados, genericamente, de grupo prosttico. A hemoglobina (Figura 1-15) uma protena conjugada cujo grupamento prosttico so quatro grupamentos hemes (Figura 1-17) que se ligam de forma no covalente s cadeias peptdicas.

Um grupo importante de protenas conjugadas so as glicoprotenas que esto presentes na superfcie celular (p.ex.: mucina), fazem parte de protenas estruturais (p. ex.: o colgeno), so hormnios (p.ex.: glucagon) ou receptores de membrana. A glicose liga-se de maneira irreversvel a uma frao da hemoglobina (hemoglobina glicada) e permite a monitorao da concentrao de glicose plasmtica (glicemia) at 120 dias (vida mdia da hemoglobina) antes da coleta de sangue. Outra frao de glicose fixa-se albumina formando as frutosaminas que, maneira da hemoglobina glicada, monitora a glicemia anterior da coleta em at 30 dias (vida mdia das albuminas). As lipoprotenas so importantes transportadoras dos lipdios plasmticos, principalmente os triglicerdeos e o colesterol. De acordo com a variao das lipoprotenas pode-se avaliar o risco para doenas cardacas coronarianas.

2. Metabolismo dos aminocidos e das protenas

A frao metablica de energia obtida a partir de aminocidos, se eles so derivados de protena diettica ou a partir de protena tecidual, varia muito com o tipo de organismo e com condies metablicas. Carnvoros podem obter (imediatamente aps uma refeio) at 90% das suas necessidades energticas a partir da oxidao de aminocidos, enquanto que herbvoros podem preencher apenas uma pequena frao de suas necessidades energticas por esta via. A maioria dos microrganismos pode expulsar aminocidos a partir de seu ambiente e utiliz-los como combustvel, quando exigido pelas condies metablicas. Plantas, no entanto, raramente ou nunca oxidam aminocidos para fornecer energia, os hidratos de carbono produzidos a partir de CO2 e H2O na fotossntese so geralmente sua nica fonte de energia. Nos animais, aminocidos sofrem degradao oxidativa em trs diferentes circunstncias metablicas: 1. Durante o procedimento normal de sntese e degradao de protenas celulares alguns aminocidos que so liberados a partir de protena de degradao e no so necessrios para a nova sntese protica sofrem degradao oxidativa. 2. Quando uma dieta rica em protenas e aminocidos e a ingesto ultrapassa as necessidades do organismo para a sntese protica, o excedente catabolizado; aminocidos no podem ser armazenados. 3. Durante o jejum prolongado ou de diabetes mellitus no controlada, quando carboidratos ou esto indisponveis ou no devidamente utilizados, as protenas celulares so utilizados como combustvel. De acordo com todas estas condies metablicas, aminocidos perdem os seus grupos amino para formar grupos -ceto cidos, os "esqueletos de carbono" de

aminocidos. Os -ceto cidos sofrem oxidao a CO2 e H2O, ou, muitas vezes mais importante ainda, fornecem trs e quatro unidades de carbono que podem ser convertidos por neoglicognese em glicose, o combustvel para o crebro, msculo esqueltico, e de outros tecidos. Como no catabolismo de carboidratos e cidos graxos, os processos de degradao de aminocidos convergem em vias catablicas centrais, com os esqueletos de carbono da maioria dos aminocidos encontram o seu caminho para o ciclo de cido ctrico. Uma importante caracterstica distingue os aminocidos de outros processos de degradao catablica: cada aminocido contm um grupo amino, e as vias de degradao de aminocidos, portanto, incluem um passo-chave na qual o grupo -amino grupo separado do esqueleto de carbono e destinado para as vias metablicas do grupo amino.

Figura 1. Viso geral do catabolismo de amino acidos em mamferos. Os grupos amino e os esqueletos carbnicos seguem caminhos distintos, mas interligados.

Os aminocidos so importantes fontes de energia para o metabolismo celular, porm s so utilizados quando h uma extrema carncia

energtica ou durante a prtica de exerccios fsicos intensos. importante frisar que os carboidratos e lipdios so melhores produtores de energia e a mobilizao de aminocidos pode estar relacionada a uma degradao de protenas musculares ou plasmticas levando o organismo a uma depleo dessas protenas, o que pode trazer conseqncias desastrosas como a atrofia muscular e a hipoalbuminemia. A sntese da uria um dos processos metablicos mais importantes, pois impede a formao de amnia txica ao organismo a partir do nitrognio protico, exclusiva do fgado, o que o torna o centro da degradao de aminocidos. Os msculos precisam ajustar o consumo de aminocidos com a exportao da amnia para o fgado na forma dos aminocidos glutamina ou alanina, em uma via metablica extremamente importante e que permite o equilbrio fisiolgico, principalmente durante a realizao de exerccios fsicos, como ser discutido adiante. A uria a principal forma de excreo do nitrognio protico nos vertebrados terrestres. Em aves e rpteis, o cido rico a principal forma de excreo do nitrognio protico; em peixes e larvas de anfbios a amnia excretada intacta, permanecendo em alta concentrao plasmtica em peixes de gua salgada para manter o equilbrio osmtico.

comum em todos os tecidos podendo ocorre por dois processos diferentes: a transaminao e a desaminao. A transaminao ou aminotransferncia catalisada por enzimas chamadas transaminases ou aminotransferases, que possuem como co-fator o piridoxal-fosfato, a forma ativa da vitamina B6.

Amnia

cido rico

Figura 2: Piridoxal fosfate, o grupo prostetico das aminotransferases. (a) Piridoxal fosfato (PLP) e sua forma aminada, piridoxamine fosfato, so coenzimas estritamente vinculadas s aminotransferases. Os grupos funcionais esto sombreados. (b) Piridoxal fosfato est ligado enzima atravs de interaes no-covalentes e por uma base de Schiff a um resduo de Lisina no stio ativo.

Uria

1. Transaminao e Desaminao
A maior parte do nitrognio protico no utilizada em vias metablicas nos seres humanos. Sendo assim, a retirada do grupamento amino (-NH3+) dos aminocidos o primeiro passo metablico, com a formao de amnia (NH3), um composto altamente txico que excretada, na forma de uria pelos rins. O processo de sntese da uria envolve enzimas tanto citoplasmticas quanto mitocondriais. A retirada do grupamento amino a reao preparatria para essa sntese e

Figura 3. Aspartate Aminotransferase. O stio ativo da enzima dependente de PLP; inclui piridoxal fosfato anexada enzima por uma base de Schiff articulada com lisina 268. Um resduo de arginina no stio ativo ajuda a orientar os substratos pela ligao aos seus grupos.

Esse processo metablico consiste na transferncia do grupamento amino para o cetoglutarato (um cetocido) formando um outro cetocido e o aminocido glutamato. Dependendo do aminocido transaminado, haver um tipo diferente de cetocido formado (p.e.x.: a alanina forma o piruvato; o aspartato forma o oxalacetato) porm sempre o mesmo aminocido glutamato formado. Isso faz com que aps essa reao, uma grande quantidade de glutamato seja produzida no fgado.

Ensaios para avaliao de dano tecidual.

Figura 4: Transaminaes catalisadas por enzima. Em muitas reaes de aminotransferase, o cetoglutarato o grupo amino aceptor. Todas as aminotransferases tm piridoxal fosfato (PLP) como cofator.

Anlises de certas atividades enzimticas no soro sangneo podem dar valiosas informaes sobre diagnsticos para uma srie de doenas. Alanina aminotransferase (ALT; tambm chamada transaminase-glutmicopirvica TGP) e aspartato aminotransferase (AST, tambm chamada glutamateoxaloacetate transaminaseglutmico-oxalactica, GOT) so importantes no diagnstico do corao e do fgado causada por ataque cardaco, toxicidade de drogas, ou infeco. Depois de um ataque cardaco, uma variedade de enzimas, incluindo as aminotransferases, vazam do corao lesado para a circulao sangunea. As medies das concentraes de soro sangneo das duas aminotransferases pelos testes SGOT e SGPT (S de soro) e de uma outra enzima, a creatinofosfoquinase, pela SCK-teste podem fornecer informaes sobre a gravidade dos danos. O SGOT e SGPT testes tambm so importantes na medicina ocupacional, para determinar se as pessoas expostas ao tetracloreto de carbono, clorofrmio, ou outros solventes industriais sofreram danos hepticos. Degenerao heptica causada por estes solventes acompanhada de extravazamento de vrias enzimas a partir de hepatcitos para o sangue.
Glutamato libera seu grupo amino como amnia no fgado.

Figura 5 - A transaminao dos aminocidos ocorre com a formao de um nico aminocido, o glutamato, e um cetocido para cada tipo de aminocido metabolizado. O aceptor de amino o cetocido -cetoglutarato.

As principais transaminases do hepatcito so a transaminaseglutmicopirvica (TGP) ou alanina aminotransferase (ALT) e a transaminaseglutmicooxalactica (TGO) ou aspartato aminotransferase (AST). Essas enzimas transaminam a alanina e o aspartato, respectivamente, possuindo tambm ao sobre os demais aminocidos, apesar de haver uma transaminase para cada tipo de aminocido.

Nos hepatcitos, o glutamato transportado do citosol para mitocndrias, onde ele sofre desaminao oxidativa catalisada pela glutamato desidrogenase. Em mamferos, esta enzima est presente na matriz mitocondrial. a nica enzima que pode usar tanto NAD_ ou NADP_ como o aceptor de equivalentes de reduo. A ao combinada de uma aminotransferase e da glutamato desidrogenase referida como transdesaminao. O -cetoglutarato formado a partir da desaminao do glutamato podem ser usado no ciclo do cido ctrico ou para a sntese de glicose. A vantagem da transaminao justamente a formao de glutamato e a necessidade de uma nica via metablica posterior para a degradao dos aminocidos.

necessita ser convertida em uria mas o msculo no possui as enzimas para essa sntese, somente o fgado. Logo, h a necessidade da formao de um produto no txico para transportar a amnia dos tecidos extrahepticos para serem metabolizadas at uria no fgado. A glutamina e alanina realizam esta funo.

Glutamina Transporta Amnia no sangue O aminocido glutamina o principal transportador de amnia plasmtica aps ser sintetizado a partir da unio de glutamato com amnia pela ao da enzima glutaminasintetase. O glutamato no atravessa a membrana celular devido sua carga eltrica. uma reao que gasta ATP e produz a glutamina que ser degradada at glutamato e amnia no fgado.

Figura 6 - A desaminao oxidativa um processo intramitocndrial que gera amnia par a sntese de uria. estimulada pelo ATP e inibida pelo GTP. O -cetoglutarato regenerado para o citoplasma.

A toxidade da amnia formada impede que esta reao seja citoplasmtica pois poderia levar a sua sada para o sangue, o que acarretaria danos srios, principalmente ao sistema nervoso central. A desaminao oxidativa uma reao intramitocondrial e est acoplada a um processo eficaz de degradao da amnia formada, a sntese da uria. Essa desaminao mitocondrial, requer NAD+ ou NADP+ como receptor dos eltrons da reao. Com a retirada do grupamento amino do aminocido, h a formao de um cetocido. No caso do glutamato (principal aminocido dessa via) o cetocido formado o -cetoglutarato que sai da mitocndria e retorna ao citoplasma para servir de substrato para outra reao de transaminao. O -cetoglutarato um intermedirio do Ciclo de Krebs e a sua sada da mitocndria s pode ocorrer quando o Ciclo de Krebs no est ativo, caso contrrio ele ser utilizado como substrato das enzimas. Em vertebrados, a atividade da glutamato desidrogenase alostericamente regulada. Guanosina trifosfato e adenosina trifosfato so inibidores alostricos, enquanto guanosina difosfato e adenosina difosfato so ativadores alostricos. Assim, uma reduo da energia, acelera a oxidao de aminocidos. Um problema adicional enfrenta os msculos quando degradam aminocidos para o metabolismo energtico: a amnia formada

Figura 7: Transporte de Amnia sob a forma de glutamina. O excesso de amnia nos tecidos adicionada ao glutamato para formar glutamina, um processo catalisado pela glutamina sintetase. Aps o transporte na corrente sangunea, a glutamina penetra no fgado e a NH4 + liberada na mitocndria pela enzima glutaminase.

Alanina Transporta Amnia Msculos Esquelticos ao Fgado

dos

O aminocido alanina tambm um importante transportador de amnia dos tecidos extra-hepticos. Entretanto, a sua sntese atende a algumas necessidades musculares especficas e s observada quando h um intenso trabalho muscular. Nessa situao metablica, o msculo tende a produzir muito lactato resultante da gliclise anaerbica, a partir do piruvato. O lactato pode ser reciclado no fgado gerando nova molcula de glicose na neoglicognese. Porm, o H+ liberado para o sangue tende a levar a uma acidose que uma das causas da fadiga muscular. Da mesma forma, o msculo est degradando muitos aminocidos e aumentando perigosamente a amnia celular. Assim sendo, a sntese da alanina resolve estes dois problemas de uma s vez, j que so necessrios piruvato e amnia para sintetizar uma molcula de alanina (Figura10-29). A alanina captada pelo fgado e degradada gerando novamente o piruvato, que reciclado na neoglicognese fornecendo novas molculas de glicose, garantindo um "segundo flego" para o praticante de exerccio fsico intenso com uma nova carga de glicose plasmtica para o metabolismo energtico. Esta via metablica denominada de Ciclo da glicose-alanina um importante meio de economia energtica do organismo.

Figura 8: Ciclo Glicose-alanina. Alanina serve como um transportador de amnia e do esqueleto de carbono a partir do piruvato do msculo esqueltico ao fgado. A amnia entra no ciclo da uria e o piruvato utilizado para a produo de glicose, que devolvida ao msculo.

2. Sntese da uria
No fgado, ir haver a produo de grande quantidade de um composto nitrogenado atxico formado por duas molculas de amnia, conjugadas com CO2 - a uria. Esta reao se processa parte no citoplasma e parte na mitocndria do hepatcito. Na seqncia de reaes envolvendo a sntese da uria (Figura 10-27), h a sntese do aminocido arginina e a participao dos aminocidos no codificados ornitina e citrulina. A arginina consumida em grande quantidade na produo de uria o que faz com que seja necessria na alimentao de animais jovens, em fase de crescimento. Portanto, esse aminocido apesar de ser sintetizado torna-se essencial na alimentao. As reaes do ciclo da uria podem ser agrupadas a seguir: a) Formao da carbamoil-fosfato: na mitocndria, h a hidratao de um CO2 e uma NH3 (proveniente da desaminao do glutamato), com o gasto de 2 ATP's; Cabamoil-fosfato Sintetase I. 1) Formao da citrulina: o carbomoilfosfato doa seu grupamento carbomoil para a ornitina, que penetrou na mitocndria atravs de um transportador especfico, formando a citrulina. A citrulina sai da mitocndria pelo mesmo transportador de ornitina; Ornitina trancarbamilase. 2) Formao do arginino-succinato: atravs da incorporao de aspartato na molcula de citrulina, com gasto de 1 ATP, no citoplasma. Esse aspartato mobilizado da mitocndria atravs do mesmo transportador que promove a entrada de glutamato na mitocndria; Arginino-succinato sintase. 3) Sntese da Arginina: o arginino-succinato sofre quebra, liberando uma molcula de fumarato e uma molcula de arginina. Esse fumarato requerido para o Ciclo de Krebs,

ativando-o, o que faz com que a sntese de uria e o Ciclo de Krebs "rodem" juntos, via metablica denominada por muitos de "Bicicleta de Krebs"; Arginino-succinato liase. 4) Sntese da Uria: a arginina formada sofre ao da enzima arginase, que catalisa a sntese da uria e a liberao de uma molcula de ornitina que retorna a mitocndria, dando incio um novo ciclo. O Ciclo da Uria pode ser resumido como um processo metablico heptico que degrada amnia com a participao da ornitina e cirtulina como transportadores dessa amnia mitocondrial, favorecendo a liberao da uria formada no citoplasma. A "Bicicleta de Krebs" uma expresso que lembra a integrao existente entre o ciclo da uria e o metabolismo energtico, pois no se pode esquecer que a cada amnia liberada significa que um aminocido foi desaminado e o cetocido formado est apto para o metabolismo celular. Por essas razes, pode-se perceber a importncia dos aminocidos para o metabolismo energtico heptico, alm de que a sntese de glicognio e de cidos graxos impedem uma maior utilizao de carboidratos e lipdios exclusivamente para produzir energia para o hepatcito.

Figura 9: Ciclo da uria e as reaes que alimentam o ciclo com grupos amino. As enzimas que catalisam estas reaes (denominadas no texto) esto distribudas entre a matriz mitocondrial e do citosol. Um grupo amino entra no ciclo de uria como carbamoil fosfato, formado na matriz, sendo que o outro entra como aspartato, formado na matriz por transaminao do oxaloacetato e do glutamato, catalisada pela aspartato aminotransferase. O ciclo da uria consiste de quatro etapas. 1 Formao de citrulina a partir de ornitina e carbamoil fosfato (entrada do primeiro grupo amino); a citrulina passa para o citosol. 2 Formao de argininosuccinato atravs de um intermedirio citrullyl-AMP (entrada do segundo grupo amino). 3 Formao de arginina a partir de argininosuccinato; esta reao libera fumarato, que entra no ciclo de cido ctrico. 4 Formao de uria; esta reao tambm regenera, ornitina. As vias pelas quais NH4+ chega na matriz mitocondrial dos hepatcitos.

O ciclo do cido ctrico e o ciclo da uria esto interconectados

Figura 10: Ligaes entre o ciclo de uria e cido ctrico ciclo. A interligao dos ciclos foram chamados de "Bicicleta de Krebs." O fumarato produzido no citosol pelo ciclo da uria pode ser reaproveitado na mitocndria pelo ciclo do cido ctrico.

A Atividade do Ciclo da Uria Regulada em Dois Nveis.

Figura 11: Sntese de N-acetilglutamato e a ativao da carbamoil fosfato sintetase I.

3. Catabolismo da cadeia carbonada dos aminocidos

Diariamente, h um renovao de cerca de 400g de protenas o que significa que, durante o dia, cerca de 400g de protenas so degradadas porm a mesma quantidade est sendo produzida o que garante uma certa estabilidade na quantidade total de protenas no organismo. Esta taxa de renovao, denominada de taxa de turnover, implica na necessidade da obteno de aminocidos essenciais na dieta alm da sntese dos no-essenciais. Apenas 11 aminocidos so sintetizados no organismo, porm a arginina sintetizada, mas totalmente consumida no ciclo da uria o que a torna indispensvel na dieta e a cistena e a tirosina so sintetizadas a partir da metionina e fenilalanina (aminocidos essenciais) o que faz com somente nove aminocidos sejam verdadeiramente independentes da alimentao. Entretanto, uma alimentao completa apresenta uma grande quantidade de aminocidos, sejam essenciais ou no ou que favorece a uma absoro de aminocidos sempre acima das necessidades dirias. Desta forma, o catabolismo dos aminocidos intenso aps uma refeio protica, permitindo a formao de grande quantidade de uria, resultado da degradao do grupamento amino, como visto anteriormente. O cetocido resultado das reaes de transaminao e desaminao., entretanto, possuem diversos destinos metablicos que podem ser reunidos em dois grandes grupos: 1) os cetognicos; e 2) os glicognicos. O primeiro grupo (os cetognicos) corresponde aos que so degradados em acetil-CoA (de forma direta ou indireta, na forma de acetoacetil-CoA) e fornecem energia de forma imediata no ciclo de Krebs. So fenilalanina, tirosina, triptofano, lisina, isoleucina, treonina e leucina. A acetil-CoA produzida pelos aminocidos cetognicos no pode ser convertida em glicose, o que vai induzir entrada obrigatria no Ciclo de Krebs para a produo de energia. Desta forma, um excesso de catabolismo destes aminocidos levar ao desvio para a produo de cidos graxos, colesterol e corpos cetnicos de maneira idntica a um excesso de acetil-CoA oriundo do

catabolismo de carboidratos e lipdios. Os demais fornecem intermedirios do ciclo de Krebs (oxalacetato, fumarato, succcinil-CoA e cetoglutarato) bem como o piruvato. Esses produtos podem ser convertidos em glicose atravs da neoglicognese e, assim, produzirem energia para as reaes metablicas celulares, sendo os aminocidos que os produzem chamados de glicognicos por este motivo. Alguns aminocidos cetognicos (fenilalanina, tirosina, triptofano, isoleucina e teronina) podem ser utilizados como substratos para a neoglicognese alm de produzir acetilCoA, sendo chamados, portanto, de glicocetognicos. A Figura 10-30 demonstra a entrada esquemtica dos aminocidos no metabolismo energtico.

Figura 12: Resumo do catabolismo dos aminocidos. Aminocidos so agrupados de acordo com os seus principais degradativos produtos finais. Alguns aminocidos so listados mais de uma vez, porque as diferentes partes dos seus esqueletos de carbono so degradados a diferentes produtos finais. A figura mostra as mais importantes vias catablicas em vertebrados, mas h pequenas variaes entre as espcies de vertebrados. Treonina, por exemplo, degradada pelo menos atravs de duas diferentes vias, bem como a importncia de um determinado caminho pode variar com o organismo e as suas condies metablicas. Os aminocidos glicognicos e cetognicos tambm so delineados na figura, pelo sombreamento colorido. Repare que cinco dos aminocidos so ambos glicognicos e cetognicos. Os aminocidos que so degradados a piruvato tambm so potencialmente cetognicos. Apenas dois aminocidos, leucina e lisina, so exclusivamente cetognicos.

O Catabolismo da Fenilalanina Genticamente Defeituoso em Algumas Pessoas

Figura 13: Vias catablicas para fenilalanina e tirosina. No homem esses aminocidos so normalmente convertidos para acetoacetyl-CoA e fumarato. Defeitos genticos herdados para muitas destas enzimas causam doenas humanas (sombreado amarelo).

Figura 14: Vias alternatives para o catabolismo da Fenilalanina em Fenilcetonria. Em PKU, fenilpiruvato acumula-se em tecidos, sangue e urina. A urina tambm pode conter fenilacetate e fenilactato.

Aminocidos de cadeia ramificada no so degradados no fgado

Figura 15: Vias catablicas de trs aminocidos de cadeia ramificada: valina, isoleucina e leucina. As trs vias, que ocorrem em tecidos extra-hepticos, compartilham as primeiras duas enzimas, como mostrado aqui. O complexo desidrogenase de -cetocido de cadeia ramificada anloga aos complexos da piruvato e -cetoglutarato desidrogenase e exige os mesmos cinco co-fatores. Esta enzima deficiente em pessoas com a doena da urina em xarope de bordo (Maple syrup urine disease).

4. Sntese dos aminocidos

Os aminocidos essenciais so sintetizados nos vegetais atravs do aproveitamento do nitrognio na forma de NH4+, nitritos e nitratos presentes no solo e que so produzidos por bactrias capazes de fixar o N2 atmosfrico convertendo-os nos produtos nitrogenados absorvidos pelos vegetais (p.ex.: Azobacter sp.e Rhizobium sp. fixam o N2; Nitrossomonas sp. e Nitrobacter sp. convertem amnia em nitritos e nitratos). A decomposio bacteriana de animais mortos gera NH4+, nitritos e nitratos, diretamente da degradao dos aminocidos, independente da captao do N2 atmosfrico. Os aminocidos no-essenciais so sintetizados nos animais a partir de molculas precussoras que fazem parte do ciclo de Krebs e do grupamento amino proveniente da degradao de aminocidos. Como vrios aminocidos fornecem intermedirios do ciclo de Krebs, h uma interdependncia entre os aminocidos no seu processo de degradao e sntese. O glutamato, glutamina e prolina so sitentizados a partir do -cetoglutarato. O aspartato sintetizado a partir do oxalacetato (recebendo o grupo amino do glutamato). A asparagina sintetizada a partir do aspartato e o grupo amino provm da glutamina. A alanina oriunda da transaminao do piruvato e glutamato. A serina sintetisada a partir do gliceraldedo-3-fosfato, sendo que a glicina e a cistena derivam da serina. A arginina utilizada durante o ciclo da uria. A tirosina origina-se a partir da hidroxilao da fenilalanina.

Referncias bibliogrficas adicionais para estudo:

CAMPBELL, M.K.; FARREL S.O. Bioqumica. Verso COMBO. So Paulo: Cengage Learning, 2007. Indicado pelo professor. DEVLIN, T.M. Manual de Bioqumica com correlaes clnicas. 2 ed. So Paulo: Edgard Blcher, 1999. NELSON, D.L.; COX, M.M. Lehninger: Princpios de bioqumica. 3 ed. So Paulo: Sarvier, 2002. STRYER, L. Bioqumica. 4 ed. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, 1996. VOET, D.; VOET, J.G.; PRATT, C.W. Fundamentos de bioqumica. Porto Alegre: ArtMed, 2000.

Viso geral da sntese dos aminocidos no-essenciais.