Centro Universitrio Fundao Santo Andr Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras

CURSO: CINCIAS BIOLGICAS

GENTICA MENDELIANA 3 ANO

NOME: N:

Profa. Dra. Adriana Madeira lvares da Silva 2005

ATIVIDADE 1 CICLO CELULAR - DIVISO CELULAR

1) Observe o esquema de ciclo celular, ele pode ser dividido em duas fases, _________________ e ____________________. 2) A interfase pode ser subdividida em fases ____, ____ e ____. 3) A mitose pode ser dividida em ___________, __________, __________ e ___________.

4) O que apoptose? Ela importante? O que pode acontecer com uma clula que no entra em apoptose?

5) Explique o funcionamento das ciclinas (observe a figura e explique)

6) Observado o esquema abaixo, nota-se uma fase G0, o que quer dizer isso?

7) O que ponto de restrio, qual sua importncia?

8) O que acontece na fase S do ciclo celular?

9) Construa um grfico da variao da quantidade de DNA durante as diferentes fases do ciclo celular. TEOR DE DNA

4C

2C

G1

G2

G1 TEMPO

10) Suponha que a clula em questo tenha 2 pares de cromossomos, quantos pares ela ter nas fases abaixo relacionadas. Desenhe ao lado cada uma das fases. a) G1 b) S c) G2 d) PRFASE e) METFASE f) ANFASE

g) TELFASE

11) Quantos pares de cromossomos tem essa clula? A fase do ciclo celular

12) Quantos pares de cromossomos tem essa clula? A fase celular deste ncleo

13) Divida essa clula INTRFASE G1

1)

FASE S E G2

METFASE

TELFASE

14) Explique a replicao de DNA detalhadamente, conforme mostra a figura abaixo.

15) Compare a figura da diviso celular em clula vegetal (Junqueira p. 251) e a diviso celular em clula animal.

16) O que so cinetcoros?

17) Em que fase do ciclo celular ocorre a duplicao dos centrolos?

18) Qual o papel do citoesqueleto na diviso celular?

ATIVIDADE 2 MEIOSE
1) Observe a figura de meiose e responda a) Trata-se de clula animal ou vegetal? Justifique b) Em que fase ocorre o crossing-over? c) O que so quiasmas? d) O que ocorre na meiose II? e) Quais as fases da meiose I? f) Quais as subfases da prfase I da meiose?

2) Faa o grfico da quantidade de DNA durante a meiose. QUANTIDADE DE DNA 4X

2X

G1

G2 MEIOSE I MEIOSE II TEMPO

INTERFASE

3) Qual a importncia biolgica da meiose?

4) Qual meiose reducional? Meiose I ou Meiose II?

4) Faa a diviso meitica da clula abaixo (pinte cada cromossomo com uma cor) INTRFASE

DUPLICAO

CROSSING-OVER MEIOSE I

SEPARAO DOS PARES

TELFASE I

MEIOSE II

TELFASE II

10

ATIVIDADE 3 RAZ DE CEBOLA

MITOSE PROTOCOLO (Profa. Dra. Catarina Satie Takahashi USP Ribeiro Preto) Entre os inmeros materiais que permitem a observao da diviso celular, as razes meristemticas da cebola talvez sejam os mais prticos e mais fceis de serem visualizados. Esta a razo pela qual foi escolhida para analise da mitose e ainda para demonstrar a ao dos corantes como o carmim actico e a reao de Feulgen. Essa tcnica permitir a contagem do nmero de cromossomos de diferentes espcies vegetais, bem como estudar a morfologia dos cromossomos para montagem dos caritipos ou ainda observar se ocorreu alguma aberrao cromossmica. preciso que se escolha material em diviso como razes em crescimento ou mesmo clulas em cultura. Material: Adquirir as cebolas comerciais, limpar a parte inferior do bulbo e colocar para germinar em frascos contendo gua corrente. Trocar a gua com freqncia. Caso nunca tenha feito isso, pergunte aos tcnicos a metodologia. Espere que germine e que as razes atinjam de um a 1,5 cm. Com uma pina de ponta fina remover as razes que estaro prontas para serem trabalhadas. Pr-tratamento: Quando h a necessidade de bloquear as clulas em metfase e encurtar os cromossomos para facilitar o seu estudo procede-se ao pr-tratamento. Os antimitticos mais utilizados so a colchicina, bromo naftaleno, hidroxiquinolina e gua gelada (zero a 2C). O tempo pode variar de 1 a 5 horas. Fixao: A fixao interrompe todo o processo de atividade celular de modo bastante rpido e permite a preservao da integridade da estrutura cromossmica. O fixador mais utilizado composto de trs partes de etanol para 1 parte de cido actico glacial. Tambm pode ser utilizada a soluo: seis partes de etanol, trs partes de clorofrmio e 1 parte de cido actico. O tempo de fixao pode variar de 1 a 24 horas. Armazenamento: Muitas vezes h a necessidade de armazenar o material, o mesmo pode ser feito passando do fixador para lcool 95 e depois para o lcool 70. O material se conservado em geladeira pode durar vrios meses. Caso no v armazenar, passar do lcool 70 para a gua e estar pronta para a prxima etapa. Colorao: A Reao de Feulgen inicia-se pela hidrlise do material com cido clordrico. A hidrlise tambm utilizada para facilitar que as clulas possam espalhar-se na lmina, pois ela amolece o material. Ela dissolve a pectina da membrana das clulas e faz o citoplasma tornar-se claro. Mas a ao no nosso caso para que o cido clordrico libere os grupos aldedos do acar da molcula de DNA destruindo a ligao qumica entre as bases de purina e o acar desoxirribose. A hidrlise pode ser realizada a quente ou a frio. A quente quando se tratam as razes por 12 minutos em HCl 1N a 60C e a frio quando as razes so tratadas por uns 30 minutos em HCl 5N. Estes so os tempos ideais para a raiz de cebola. Cada material tem o seu tempo ideal. Aps a hidrlise passar para gua destilada fria para interromper o processo, em seguida segurar as razes com uma pina e passar rapidamente no papel de filtro para retirar o excesso de gua e mergulhar no reativo de Schiff. Se estiver trabalhando com vidro claro colocar dentro de um armrio para que fiquem no escuro. Deixar por uns 40 minutos. As pontas das razes devem estar bem coradas. O reativo de Schiff preparado a partir da fucsina bsica que se fixa nos grupamentos aldedos liberados durante a hidrlise dando a colorao vermelha violeta aos cromossomos. conhecida como reao de Feulgen, pois, foi ele o primeiro a descrever a tcnica (Feulgen, 1926). Se a sua reao foi um sucesso passar as razes por trs banhos de 5 a 10 minutos em gua sulfurosa recm-preparada. 11

Montagem: Colocar na lmina uma gota de cido actico 45% e sobre ela a raiz. Com a ajuda de dois estiletes retirar a coifa e separar a regio mais densamente corada, descartando o resto do material. Colocar a lamnula sobre esse material prestando ateno na quantidade de cido actico. Segurar a lmina e com a outra mo utilizando a ponta de um lpis com borracha dar suaves pancadas para esparramar o material de maneira a obter uma monocamada de clulas. Enrole a lmina com papel de filtro e pressione de maneira a eliminar o cido actico em excesso. Tomar cuidado para no deslizar a lamnula. Saber escolher a regio mais densamente corada significa que estar trabalhando com clulas no processo de diviso e livre de sujeira o que permitir uma anlise mais fcil. Para tornar a lmina permanente congelar em nitrognio lquido, deslocar a lmina, passar rapidamente por banhos de lcool 95, xilol, xilol e blsamo do Canad. Existem outros meios de montagem que tem afinidade com lcool, no necessitando passar pelo xilol. Se no dispuser de nitrognio lquido, mergulhar gelo seco em metanol ou fazer uma cmara saturada com vapores de lcool 95 e deixar a lmina, a lamnula ir se deslocar sozinha. Anlise: O tecido meristemtico radicular das plantas muito bom para observar as diferentes fases da mitose. Contar o nmero total de clulas em interfase, prfase, metfase, anfase e telfase num total de 1000 clulas. Fazer o esquema de cada uma das fases. Calcular o ndice mittico (nmero de clulas em diviso pelo nmero total de clulas x 100). CARMIM ACTICO um corante muito prtico e de fcil trabalho. Aps a fixao das razes, as mesmas so colocadas em uma lmina que contenha uma gota de carmim actico. Colocar a lmina na chama de uma lamparina de maneira a aquecer o corante. Repetir a operao algumas vezes, renovando sempre o corante. Quando a raiz estiver bem corada, lavar com cido actico 45%, fazer uma limpeza geral na lmina, cortar a ponta mais densamente corada e proceder a montagem da lmina como no item anterior. Observaes: O reativo de Schiff que foi transformado em incolor adora voltar sua forma bem colorida, assim todo o cuidado pouco, forrar o balco de trabalho, limpar muito bem todo o material utilizado, muito cuidado com o seu avental as mos e todo o resto. Voc est trabalhando num laboratrio de pesquisa, para todos nos um prazer recebe-lo, mas solicitamos que preste muita ateno, todo material utilizado deve ser separado, passado vrias vezes na gua para depois ser colocado no vasilhame para lavagem. Na medida do possvel deixar lavado. No temos pessoal para lavagem de material, assim o trabalho dever ser facilitado ao mximo. Vrias pessoas esto deixando de usar o laboratrio para que voc possa realizar as suas aulas prticas. Todo o material danificado por desateno ter que ser reposto imediatamente ao laboratrio.

REATIVO DE SCHIFF 1- Ferver 200 mL de gua destilada, retirar do fogo e aos poucos dissolver 1 g de fucsina bsica (Harleco ou Fischer), volte no fogo bem baixo se todo o corante no se dissolver. Tomar cuidado para no espirrar o corante. 2- Esfriar at 50C a temperatura ambiente e filtrar em papel de filtro.

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3- Adicionar 30 mL de HCl 1N e 3 gramas de metabissulfito de potssio (K2S2O5). Misturar muito bem e agitar com vigor. Deixar a soluo numa garrafa escura e no escuro e agitar vrias vezes. Deixar por 24 horas e agitar o maior nmero de vezes. 4- Adicionar 0,5 gramas de carvo descolorante e agitar por alguns minutos. Filtrar rapidamente em papel de filtro. Caso no consiga um liquido totalmente incolor repetir a operao. 5- Guardar em vidro escuro no refrigerador. GUA SULFUROSA A soluo tem que ser preparada na hora do uso. Misturar 5 mL de HCL 1N, 5 mL de metabissulfito de sdio (Na2S2O5) e 90 mL de gua destilada. CARMIN ACTICO Ferver 100 mL de cido actico 45% (45 mL de cido actico em 55 mL de gua destilada), apagar o fogo e dissolver 1 grama de carmim. Misturar muito bem, esfriar e filtrar em papel de filtro.

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I - PROTOCOLO 2 SIMPLIFICADO
MATERIAL a) Razes de cebola b) Corante orcena aceto-clordrica c) cido actico a 50% d) Copos, lminas, lamnulas, pinas, estiletes, tesoura, esmalte incolor, lamparina de lcool. PROCEDIMENTO a) Colocar uma cebola emborcada em 1 copo com gua, de forma a permitir que a regio onde se formam as razes da cebola (o disco ou caule) toquem a gua; b) Deixar as razes crescerem at atingirem 2 cm. Cortar de 3 a 4 razes em tamanhos de 1 a 2 cm na parte apical e transferi-las para um vidro de relgio contendo orcena aceto-clordrica; c) Aquec-las sobre uma lamparina de lcool at a emisso de vapores, sem contudo deixar ferver; d) Deixar esfriar por 5 minutos; e) Repetir esta operao 2 vezes mais e, aps o 3 aquecimento, deixar esfriar e repousar por 15 minutos; f) Colocar uma das razes sobre uma lmina limpa e separar os 2-3 mm apicais, desprezando o resto da estrutura; g) Juntar 1 gota de orcena sobre o meristema seccionado e, com muito cuidado, cobrir o material com a lamnula; h) Com um lpis, bater suavemente a preparao para se obter uma extenso unicelular; i) Com um pedao de papel de filtro, eliminar o excesso de corante; j) Esmagar ento com os polegares apoiados sobre a lamnula coberta com o papel de filtro; k) Vedar a lamnula com esmalte incolor; l) Observar ao microscpio ptico. OBS: Caso se deseje obter lminas permanentes, ao invs de se vedar o material com o esmalte, deve-se colocar a lmina com a lamnula virada para baixo, em um vidro relgio com cido actico 50% at a lamnula cair. Deixar a lmina secando em um suporte e passar a lamnula para um frasco contendo xilol. Esta lamnula pode ser montada com Permount em uma lmina limpa. Passar uma outra lamnula no frasco com xilol e coloc-la com uma gota de Permount sobre a lmina com o material. Deixar secar. RESULTADOS a) Examinar as diversas fases da mitose, procurando caracterizar cada uma delas. b) Desenhar as diferentes fases da mitose, procurando ressaltar os aspectos mais importantes de cada uma delas. c) Que fase(s) da mitose deveria(m) ser escolhida(s) caso se necessitasse determinar o nmero de cromossomos de uma dada espcie? DISCUSSO

1. Quando, durante o ciclo celular, tem lugar a duplicao dos cromossomos? 2. Qual a diferena entre cromtides irms e no irms? Entre cromossomos homlogos e no homlogos? 3. Observando-se o processo mittico possvel afirmar que ambas clulas-filhas herdam a mesma quantidade e o mesmo tipo de informao que existia na clula-me? Justifique sua resposta.

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4. Duplique esta clula e indique os cromossomos homlogos, as cromtides irms e as no irms.

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ATIVIDADE 4 OBSERVAO DE RAZ DE CEBOLA (LMINAS PRONTAS)

O OBJETIVO DESTA OBSERVAO : a) Identificar as fases da mitose b) Identificar na interfase as clulas diferenciadas e as indiferenciadas c) Calcular o ndice mittico PROCEDIMENTO a) Focalizar a lmina em mdio aumento b) Identificar no campo escolhido as clulas em diviso c) Classificar essas clulas segundo as fases d) Contar todas as clulas do campo (sem mudar de campo). Desenhe a observao de 1 campo e) Calcular o ndice mittico dividindo o nmero de clulas em diviso pelo nmero total de clulas (devem ser contados pelo menos 200 ncleos, se necessrio, troque de lmina) AUMENTO X

NMERO DE CLULAS EM INTRFASE = NMERO DE CLULAS EM PRFASE = NMERO DE CLULAS EM METFASE = NMERO DE CLULAS EM ANFASE = NMERO DE CLULAS EM TELFASE = NMERO DE CLULAS EM DIVISO =

IM= IM=

CLULAS EM DIVISO TOTAL DE CLULAS

1) Em qual local da raiz ocorre a diviso celular com grande freqncia?

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2) Esquematize a ponta da raiz e suas partes

3) Qual a importncia do ponto de checagem ou ponto de restrio para o organismo vivo?

4) Qual clula est mais sujeita a mutaes, uma que se divide pouco ou uma que se divide muito? Explique

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ATIVIDADE 5 OBSERVAO DO NDICE MITTICO EM LMINAS PREPARADAS PELO GRUPO

NMERO DE CLULAS EM INTRFASE = NMERO DE CLULAS EM PRFASE = NMERO DE CLULAS EM METFASE = NMERO DE CLULAS EM ANFASE = NMERO DE CLULAS EM TELFASE = NMERO DE CLULAS EM DIVISO =

IM= IM=

CLULAS EM DIVISO TOTAL DE CLULAS

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ATIVIDADE 6 CRIANDO Drosophila

Obs: Para esta prtica, os alunos devero (com antecedncia) trazer dois vidros mdios de maionese vazios e limpos. CICLO DE VIDA

IDENTIFICAO

Desenho da mosca observada (macho e fmea)

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Na lupa: Identificar os machos e as fmeas Identificar as caractersticas gerais como: a) b) c) d) Cor do corpo Cor do olho Tipo de asa Outras caractersticas

Coloca-las de volta no vidro antes que acordem

PESQUISA: COMO FEITO O MEIO DE CULTURA??

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ATIVIDADE 7 CRUZAMENTO DE Drosophila

MATERIAL OBRIGATRIO PATA TODOS OS ALUNOS: 1) PINCEL NO. 0 OU 1 2) VIDROS PARA A CULTURA (2 POR ALUNO PEGAR A ESPECIFICAO) 3) PEDAO DE BORRACHA (TIPO CHINELO HAVAIANAS) 4) LUPA DE MO E LANTERNA 5) ESTOJO COM MATERIAL, AVENTAL E CANETA QUE ESCREVE EM VIDRO

1) Seleo das moscas virgens: como feita a seleo das moscas para o cruzamentos?

2) Cruzamento I (MOSCAS SELVAGENS X MOSCAS VESTIGIAIS) Procedimento: ATENO! PREENCHER A FOLHA ANEXA CONFORME O EXPRERIMENTO FOR OCORRENDO a) Etiquetar o tubo que contm o meio de cultura colocando o cruzamento, o nome do grupo e a data.(anotar a data na folha anexa e os detalhes) b) Juntar o macho e a fmea no tubo com meio (cuidado para as moscas no fugirem) c) Durante a semana anotar o aparecimento de ovos e larvas d) Depois de uma semana descartar os pais (anotar a data na folha anexa) e) Observar o surgimento de larvas e pupas (anotar tudo na folha anexa) f) Depois de uma semana contar a prole (F1) e transferir 3 casais para outro tubo etiquetado (anotar na folha anexa g) Depois de uma semana eliminar os pais (F1) h) Depois de uma semana contar a F2 i) Descartar as moscas

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FOLHA ANEXA DO EXPERIMENTO I INCIO DO EXPERIMENTO I DATA_____/______/______

CRUZAMENTO P X P LINHAGENS CRUZADAS: _____________ X ____________ GENTIPO ______________________ X _______________________ GAMETAS ( ____________________________________________________________) QUADRADO DE PUNNET

APARECIMENTO DE OVOS EM _________/_______/_________ APARECIMENTO DE LARVAS EM ___________/___________/_________ APARECIMENTO DE PUPAS EM __________/_____________/__________ DESCARTE DOS PAIS EM __________/_____________/____________ NASCIMENTO DA F1 EM ____________/_________/____________ CONTAGEM DA F1 EM_________/_____________/____________ RESULTADO DA CONTAGEM

CRUZAMENTO F1 X F1 QUANTAS MOSCAS? __________________________________ DATA _______/____________/_________ GENTIPO DAS MOSCAS CRUZADAS __________________ X ________________ GAMETAS (_________________________________________________________)

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QUADRADO DE PUNNET

APARECIMENTO DE OVOS EM _________/_______/_________ APARECIMENTO DE LARVAS EM ___________/___________/_________ APARECIMENTO DE PUPAS EM __________/_____________/__________ DESCARTE DOS PAIS (P2) EM __________/_____________/____________ NASCIMENTO DA F2 EM ____________/_________/____________ CONTAGEM DA F2 EM_________/_____________/____________ RESULTADO DA CONTAGEM

APLICAO DO TESTE DO QUI-QUADRADO FENTIPO OBSERVADO ESPERADO

TOTAL

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Anexo - 1 Lei
I - INTRODUCO Na maioria dos organismos vivos que conhecemos, tais como aves, mamferos, plantas, rpteis, etc., os genes ocorrem aos pares, o mesmo acontecendo com os seus cromossomos. Por isso eles so chamados de organismos diplides (do grego diploos = duplo + eidos = semelhante). Estes pares de genes, que ocupam posies definidas nos cromossomos, so chamados de alelos (do grego allelon = um e outro). J os cromossomos que compartilham os genes alelos so chamados de cromossomos homlogos. Durante a gametognese, os genes alelos e, por conseguinte, os cromossomos homlogos, segregam-se, de modo que cada gameta formado acaba sendo portador de apenas um gene de cada par. Esta segregao dos genes alelos durante a formao dos gametas conhecida como a Primeira Lei de Mendel. As drosfilas (Drosophila sp) so organismos diplides encontrados em quase todas as partes do mundo. Por se alimentarem de frutas em decomposio, elas tambm so conhecidos como as "moscas das frutas", Estes dpteros constituem excelente material para estudos genticos em 19.boratrio, pois oferecem grandes vantagens sobre outros materiais, visto apresentarem: Ciclo de vida curto, variando de 12 a 15 dias, o que favorece a obteno de um grande nmero de geraes em um pequeno espao de tempo; Produo de um grande nmero de descendentes; Exigncia de alimentao simples e barata pois, elas podem ser mantidas em um meio de cultura contendo apenas banana ou fub, gar, fermento de po e nipagin (fungicida que evita a contaminao do meio); Existncia de muitos tipos mutantes, com caractersticas fenotpicas que podem ser facilmente observadas a olho nu ou lupa; Um pequeno nmero de cromossomos, o que vem favorecer o seu estudo; A diferenciao entre machos e fmeas relativamente simples, e pode ser feita considerandose os seguintes caracteres: MACHOS: So menores que as fmeas; a extremidade do abdmen arredondada e escura; apresentam pentes sexuais (tarsais) no 1 segmento tarsal (formados por um agrupamento de cerdas); possuem placa anal e cerdas copuladoras na poro ventral. FMEAS: So maiores que os machos; a extremidade do abdmen pontiaguda e clara; no possuem pentes sexuais; possuem placa anal e aparelho ovopositor. O objetivo deste captulo demonstrar atravs do experimento abaixo, no qual est envolvido um par de genes responsvel pela cor do corpo (ebony = cinza escuro ou preto e seu alelo selvagem = cinza) o princpio da primeira lei de Mendel. Para tanto o aluno dever ser capaz de diferenciar machos e fmeas de Drosophila, bem como os indivduos de cada linhagem, realizar cruzamentos, coletar e analisar estatisticamente os dados (atravs de um teste de Qui-quadrado) para verificar se a segregao destes caracteres est ou no de acordo com a Primeira Lei de Mendel.

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ATIVIDADE 8 SEGUNDA LEI DE MENDEL

1) Cruzamento II (MOSCAS SELVAGENS X MOSCAS EBONY) Procedimento: ATENO! PREENCHER A FOLHA ANEXA CONFORME O EXPRERIMENTO FOR OCORRENDO a) Etiquetar o tubo que contm o meio de cultura colocando o cruzamento, o nome do grupo e a data.(anotar a data na folha anexa e os detalhes) b) Juntar o macho e a fmea no tubo com meio (cuidado para as moscas no fugirem) c) Durante a semana anotar o aparecimento de ovos e larvas d) Depois de uma semana descartar os pais (anotar a data na folha anexa) e) Observar o surgimento de larvas e pupas (anotar tudo na folha anexa) f) Depois de uma semana contar a prole (F1) e transferir 3 casais para outro tubo etiquetado (anotar na folha anexa g) Depois de uma semana eliminar os pais (F1) h) Depois de uma semana contar a F2 i) Descartar as moscas da F2

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FOLHA ANEXA DO EXPERIMENTO II INCIO DO EXPERIMENTO II DATA_____/______/______

CRUZAMENTO P X P LINHAGENS CRUZADAS: _____________ X ____________ GENTIPO ______________________ X _______________________ GAMETAS ( ____________________________________________________________) QUADRADO DE PUNNET

APARECIMENTO DE OVOS EM _________/_______/_________ APARECIMENTO DE LARVAS EM ___________/___________/_________ APARECIMENTO DE PUPAS EM __________/_____________/__________ DESCARTE DOS PAIS EM __________/_____________/____________ NASCIMENTO DA F1 EM ____________/_________/____________ CONTAGEM DA F1 EM_________/_____________/____________ RESULTADO DA CONTAGEM COM FENTIPO OBSERVADO

CRUZAMENTO F1 X F1 QUANTAS MOSCAS? __________________________________ DATA _______/____________/_________ GENTIPO DAS MOSCAS CRUZADAS __________________ X ________________ GAMETAS (_________________________________________________________)

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QUADRADO DE PUNNET

COLOCAR OS FENTIPOS ESPERADOS DENTRO DO QUADRADO APARECIMENTO DE OVOS EM _________/_______/_________ APARECIMENTO DE LARVAS EM ___________/___________/_________ APARECIMENTO DE PUPAS EM __________/_____________/__________ DESCARTE DOS PAIS (P2) EM __________/_____________/____________ NASCIMENTO DA F2 EM ____________/_________/____________ CONTAGEM DA F2 EM_________/_____________/____________ RESULTADO DA CONTAGEM TOTAL DE MOSCAS CONTADAS ______________________ APLICAO DO TESTE DO QUI-QUADRADO FENTIPO OBSERVADO ESPERADO

TOTAL

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ANEXO - 2 LEI DE MENDEL

INTRODUO Nos organismos diplides os genes ocorrem aos pares, o mesmo acontecendo com os cromossomos. Durante a gametognese, os genes, que ocupam posies definidas nos cromossomos, segregam. Dessa forma, cada gameta formado portados de apenas um gene de cada par. Esta segregao dos alelos durante a formao dos gametas conhecida como a Primeira Lei de Mendel. Alm disso, os pares de cromossomos homlogos segregam independentemente durante a gametognese. Consequentemente, o mesmo ocorre com os pares de genes localizados em cromossomos no homlogos. Isso permite a formao, ao acaso, de novas combinaes gnicas nos gametas. Esta condio conhecida como a Segunda Lei de Mendel. A mosca das frutas Drosophila melanogaster constitui um timo material para a demonstrao da Segunda Lei de Mendel. Isto devido a facilidade de manuteno de estoques deste inseto em laboratrio, a fcil identificao de machos e fmeas, a variedade de mutantes disponveis e ao ciclo reprodutivo relativamente curto. O objetivo deste captulo demonstrar o princpio da Segunda Lei de Mendel, atravs do experimento abaixo, no qual esto envolvidos dois pares de genes, localizados em pares de cromossomos no homlogos. Para atingir os objetivos desta prtica, o aluno dever ser capaz de identificar machos e fmeas, distinguir as linhagens, realizar cruzamentos, coletar e analisar estatisticamente os dados (atravs de um teste de Qui-quadrndo) para verificar se a segregao destes caracteres est ou no de acordo com a Segunda Lei de Mendel.

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ATIVIDADE 9 HERANA LIGADA AO SEXO

1) Cruzamento III: MOSCAS SELVAGENS FMEAS X MOSCAS WHITE MACHOS Procedimento: ATENO! PREENCHER A FOLHA ANEXA CONFORME O EXPRERIMENTO FOR OCORRENDO a) Etiquetar o tubo que contm o meio de cultura colocando o cruzamento, o nome do grupo e a data.(anotar a data na folha anexa e os detalhes) b) Juntar o macho e a fmea no tubo com meio (cuidado para as moscas no fugirem) c) Durante a semana anotar o aparecimento de ovos e larvas d) Depois de uma semana descartar os pais (anotar a data na folha anexa) e) Observar o surgimento de larvas e pupas (anotar tudo na folha anexa) f) Depois de uma semana contar a prole (F1) e transferir 3 casais para outro tubo etiquetado (anotar na folha anexa g) Depois de uma semana eliminar os pais (F1) h) Depois de uma semana contar a F2 i) Descartar as moscas

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FOLHA ANEXA DO EXPERIMENTO III INCIO DO EXPERIMENTO III DATA_____/______/______

CRUZAMENTO P X P LINHAGENS CRUZADAS: _____________ X ____________ GENTIPO ______________________ X _______________________ GAMETAS ( ____________________________________________________________) QUADRADO DE PUNNET

APARECIMENTO DE OVOS EM _________/_______/_________ APARECIMENTO DE LARVAS EM ___________/___________/_________ APARECIMENTO DE PUPAS EM __________/_____________/__________ DESCARTE DOS PAIS EM __________/_____________/____________ NASCIMENTO DA F1 EM ____________/_________/____________ CONTAGEM DA F1 EM_________/_____________/____________ RESULTADO DA CONTAGEM COM FENTIPO OBSERVADO

CRUZAMENTO F1 X F1 QUANTAS MOSCAS? __________________________________ DATA _______/____________/_________ GENTIPO DAS MOSCAS CRUZADAS __________________ X ________________ GAMETAS (_________________________________________________________)

30

QUADRADO DE PUNNET

COLOCAR OS FENTIPOS ESPERADOS DENTRO DO QUADRADO APARECIMENTO DE OVOS EM _________/_______/_________ APARECIMENTO DE LARVAS EM ___________/___________/_________ APARECIMENTO DE PUPAS EM __________/_____________/__________ DESCARTE DOS PAIS (P2) EM __________/_____________/____________ NASCIMENTO DA F2 EM ____________/_________/____________ CONTAGEM DA F2 EM_________/_____________/____________ RESULTADO DA CONTAGEM MACHOS WHITE: FMEAS WHITE: MACHOS SELVAGENS: FMEAS SELVAGENS: TOTAL DE MOSCAS CONTADAS ______________________ APLICAO DO TESTE DO QUI-QUADRADO FENTIPO OBSERVADO ESPERADO

TOTAL

31

ATIVIDADE 10 HERANA LIGADA AO SEXO

1) Cruzamento IV: MOSCAS SELVAGENS MACHOS X MOSCAS WHITE FMEAS Procedimento: ATENO! PREENCHER A FOLHA ANEXA CONFORME O EXPRERIMENTO FOR OCORRENDO a) Etiquetar o tubo que contm o meio de cultura colocando o cruzamento, o nome do grupo e a data.(anotar a data na folha anexa e os detalhes) b) Juntar o macho e a fmea no tubo com meio (cuidado para as moscas no fugirem) c) Durante a semana anotar o aparecimento de ovos e larvas d) Depois de uma semana descartar os pais (anotar a data na folha anexa) e) Observar o surgimento de larvas e pupas (anotar tudo na folha anexa) f) Depois de uma semana contar a prole (F1) e transferir 3 casais para outro tubo etiquetado (anotar na folha anexa g) Depois de uma semana eliminar os pais (F1) h) Depois de uma semana contar a F2 i) Descartar as moscas

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FOLHA ANEXA DO EXPERIMENTO IV INCIO DO EXPERIMENTO IV DATA_____/______/______

CRUZAMENTO P X P LINHAGENS CRUZADAS: _____________ X ____________ GENTIPO ______________________ X _______________________ GAMETAS ( ____________________________________________________________) QUADRADO DE PUNNET

APARECIMENTO DE OVOS EM _________/_______/_________ APARECIMENTO DE LARVAS EM ___________/___________/_________ APARECIMENTO DE PUPAS EM __________/_____________/__________ DESCARTE DOS PAIS EM __________/_____________/____________ NASCIMENTO DA F1 EM ____________/_________/____________ CONTAGEM DA F1 EM_________/_____________/____________ RESULTADO DA CONTAGEM COM FENTIPO OBSERVADO

CRUZAMENTO F1 X F1 QUANTAS MOSCAS? __________________________________ DATA _______/____________/_________ GENTIPO DAS MOSCAS CRUZADAS __________________ X ________________ GAMETAS (_________________________________________________________)

33

QUADRADO DE PUNNET

COLOCAR OS FENTIPOS ESPERADOS DENTRO DO QUADRADO APARECIMENTO DE OVOS EM _________/_______/_________ APARECIMENTO DE LARVAS EM ___________/___________/_________ APARECIMENTO DE PUPAS EM __________/_____________/__________ DESCARTE DOS PAIS (P2) EM __________/_____________/____________ NASCIMENTO DA F2 EM ____________/_________/____________ CONTAGEM DA F2 EM_________/_____________/____________ RESULTADO DA CONTAGEM MACHOS WHITE: FMEAS WHITE: MACHOS SELVAGENS: FMEAS SELVAGENS: TOTAL DE MOSCAS CONTADAS ______________________ APLICAO DO TESTE DO QUI-QUADRADO FENTIPO OBSERVADO ESPERADO

TOTAL

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ATIVIDADE 11 ESTUDO DE CROMATINA SEXUAL

INTRODUO A cromatina sexual um corpsculo heteropicntico, encontrado nos ncleos interfsicos das clulas somticas femininas dos mamferos em geral. formada por um dos cromossomos sexuais X que se duplica tardiamente e que geneticamente inativo. Foi primeiramente observada em neurnios de gatas, com o aspecto de um grnulo heterocromtico que se localizava junto membrana nuclear, sendo exclusivamente encontrado nas fmeas. Por esse motivo, passou a ser utilizado no diagnstico do sexo em mamferos, a seguir foi confirmada sua presena nos tecidos femininos humanos, inclusive em neutrfilos polimorfonucleares do sangue perifrico, onde seu aspecto lembra um bastonete. Devido a sua grande importncia no diagnstico do sexo cromossmico, seu estudo tornou-se obrigatrio nos laboratrios de gentica mdica. nula no homem normal ou pode ser observada numa taxa muito baixa. Em mulheres normais, esfregaos da mucosa oral apontam freqncias de cromatina positiva que vo de 20 a 50%. Uma vez que o nmero de cromatinas sexuais foi verificado corresponder ao nmero de cromossomos X menos um, seu estudo tambm muito til no diagnstico de aneuploidias sexuais como Sndromes de Turner e Klinefelter, nas disgenesias gonadais, em casos de mosaicismo, etc. Este captulo tem como objetivo ensinar ao aluno como preparar uma lmina com esfregao da mucosa oral para a observao e identificao do corpsculo de Barr ou cromatina sexual. II MATERIAIS a) b) c) d) e) f) g) h) i) j) k) Corante fucsina bsica Fenol 5% cido actico glacial Formaldedo 70% lcool absoluto lcool 95% lcool 70% Agua destilada Lminas Esptulas de madeira Microscpio

PROCEDIMENTO a) Dissolver 3g de fucsina bsica em 100mL de lcool etlico 70% (soluo estoque); b) Em outro frasco, separar 10 mL desta soluo estoque e acrescentar 90 mL de fenol a 5%, 10 mL de cido actico glacial e 10 mL de formaldedo a 37%; c) Deixar em repouso por no mnimo 24 horas antes de utilizar esta soluo na colorao das lminas; d) Com o uso de esptulas ou de lmina limpa, raspar a face interna da bochecha. Desprezar este primeiro raspado e em seguida raspar novamente; e) Espalhar o material sobre lminas limpas. Deixar secar; f) Hidratar primeiramente em lcool 70% por 5 minutos, em seguida em gua destilada por 8 minutos: g) Corar durante 15 minutos na soluo preparada a partir da soluo estoque; h) Desidratar em lcool 95% e lcool absoluto, com uma passagem rpida em ambos.

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RESULTADOS a) Observar a lmina em microscpio ptico, com objetiva de imerso. b) Faa um esquema de uma clula de mucosa oral com cromatina sexual. DISCUSSO 1. Qual o significado gentico do corpsculo de Barr? 2. O que voc pode concluir dos seguintes dados: a) indivduos com 47 cromossomos e que no apresentam corpsculo de Barr. b) indivduos com 47 cromossomos e que apresentam corpsculo de Barr.

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ANEXO - HLX
INTRODUO A determinao do sexo entre os seres vivos pode se dar atravs de diferentes mecanismos de herana. Em certas espcies de animais e plantas, os indivduos compartilham o mesmo conjunto de genes para determinao do sexo masculino e feminino. Em alguns casos, o que determina se um indivduo ser macho ou fmea so as condies ambientais ou ento a proporo herdada entre estes genes. Por exemplo, na orqudea Catasetum fimbriatum, as plantas que crescem em locais ensolarados (e portanto, mais secos), desenvolvem flores femininas. Por outro lado, aquelas que crescem em locais sombreados (e portanto, mais midos), desenvolvem flores masculinas. J em abelhas e formigas, as fmeas so diplides, isto , apresentam dois conjuntos n de cromossomos (ou dois genomas) e surgem pela unio de um vulo com um espermatozide, e os machos so haplides e surgem por partenognese. Em outros grupos de organismos, como na maioria das espcies vegetais e em peixes, os genes para determinao do sexo so encontrados em duas ou mais formas allicas diferentes, onde uma delas determina o sexo masculino e a outra, o feminino. Sendo assim, o sexo nesses indivduos dado atravs de herana mendeliana simples. Em outros organismos, tais como os mamferos, aves e rpteis, alm do conjunto cromossmico comum a machos e fmeas, chamados de cromossomos autossmicos (A), existem um ou dois cromossomos (denominados de X e Y, ou Z e W) responsveis direta ou indiretamente pela determinao do sexo nestes organismos. Nestes casos, um dos sexos sempre portador de dois cromossomos sexuais homlogos (Ex: XX e ZZ) e sempre produzir gametas idnticos quanto ao cromossomo sexual que recebem, sendo ento chamados de SEXO HOMOGAMTICO. J o outro sexo, ter dois cromossomos sexuais diferentes ou apenas um cromossomo sexual (Ex: XY, XO, ZW e ZO), logo eles originaro gametas diferentes com relao aos cromossomos sexuais que eles recebem e por isso eles so chamados de SEXO HETEROGAMTICO. A tabela a seguir mostra os diferentes sistemas de determinao do sexo atravs de cromossomos sexuais: SISTEMA
XY

GAMETAS M=
(AX) (AY) (AX) (AO) (AZ) (AZ)

GAMETAS M=
(AX)

SEXO
(AAXX) = (AAXY) = (AAXX) = (AAXO) = (AAZZ) = (AAZW) = (AAZZ) = (AAZO) =

OCORRNCIA
Mamferos, alguns anfbios (no gnero Axolot), em alguns vegetais (Ex.: Cannabis sativa) e na mosca das frutas (Drosophila melanogaster). Percevejos, baratas e ganfanhotos. Aves, borboletas, mariposas, traas e em alguns peixes. Rpteis.

XO ZW ZO

(AX) (AZ) (AW) (AZ) (AO)

O termo herana ligada ao sexo geralmente se refere ao mecanismo de herana dos genes encontrados no cromossomo X. Como nesta situao, os genes recessivos se manifestam nos machos em dose simples, isto , em hemizigose. Nas fmeas necessrio estarem em homozigose, devido presena de dois cromossomos X. A herana desses genes tambm conhecida como herana cruzada, pois dependendo do tipo de cruzamento, a caracterstica da me se manifestar nos filhos, enquanto que as filhas sero fenotipicamente iguais ao pai. Nas clulas diplides de Drosophila melanogaster so encontrados oito cromossomos. Dos quatro pares que se formam na meiose, trs sero comuns s clulas dos machos e fmeas (autossomos). O quarto par denominado de par sexual que nas fmeas constitudo por dois cromossomos X e nos machos por um cromossomo X e um Y, ambos bastante diferentes na sua morfologia. O objetivo deste captulo realizar experimentos utilizando o gene white (que determina cor de olhoi branca) e seu alelo selvagem (cor de olho vermelho) que, em Drosophila melanogaster, est localizado na regio no homloga do cromossomo X, para verificar como se d o mecanismo de herana ligada ao sexo. Para atingir os objetivos desta prtica, o aluno dever ser capaz de identificar machos e fmeas, distinguir as 37

linhagens, realizar cruzamentos, coletar dados e fazer uma anlise estatstica (teste do Qui-quadrado) para verificar se a segregao destes caracteres est de acordo ou no com o preconizado pela Herana Ligada ao Sexo.

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ATIVIDADE 12 LIMIAR GUSTATIVO AO PTC (FENILTIOCARBOMIDA)

INTRODUCO Em 1931, ao manipular a substncia feniltiocarbamida (PTC), o qumico norte-americano Fox espalhou acidentalmente cristais deste composto no laboratrio. Ao levar, distraidamente a mo boca, sentiu imediatamente um forte gosto amargo, gosto este que, curiosamente, no era compartilhado por seu assistente. Intrigado, submeteu outras pessoas a prova e percebeu que existiam diferenas individuais na capacidade de sentir o gosto desta substncia. Quando muitos indivduos so testados com solues de diferentes concentraes de PTC, verificase que eles se distribuem em dois fentipos distintos: sensveis e insensveis. Porm, essa distino no absoluta, visto que a sensibilidade gustativa a esta substncia apresenta uma grande variao mostrando dois picos, um para os indivduos sensveis e outro para os insensveis. A herana sensibilidade ao PTC determinada por um nico par de genes alelos (T e t) de modo que as pessoas sensveis possuem o gentipo TT ou Tt e, as insensveis, tt. Acredita-se que as diferenas no grau de sensibilidade ao PTC dependem, provavelmente, de genes modificadores. O objetivo deste captulo determinar o limiar de sensibilidade gustativa dos indivduos ao PTC, atravs da utilizao de solues com diferentes concentraes desta substncia. MATERIAIS

16 frascos escuros de 1 litro 16 frascos pequenos pequenos (cerca de 10 mL) com conta gotas 2,6 g de PTC Etiquetas auto-adesivas gua fervida e gua da torneira

PROCEDIMENTOS a) Dissolver 2,6g de PTC em dois litros de gua fervida e resfriada (soluo me). Esperar 3 dias para uma completa dissoluo; b) Separar litro da soluo me e etiquetar com o n 1; c) Misturar ao litro restante da soluo de PTC 1 litro gua fervida e resfriada. Separar 1 litro e etiquetar com o n 2; d) Misturar ao litro restante de PTC, 1 litro de gua fervida e resfriada. Separar 1 litro e etiquetar com o nmero n 3; e) Proceder da mesma maneira para as solues 4 a 15; f) Colocar no frasco 16, gua da torneira e etiquetar com o n 16; g) Guardar todas as solues em um ambiente escuro; h) Montar todas as baterias com as solues de 1 a 16, em pequenos frascos com conta-gotas e identificlos, como feito com os frascos maiores; i) Pingar 2 gotas de soluo n. 15 sobre a parte posterior da lngua de um aluno; j) Anotar se ele sente ou no o gosto amargo; k) Seguir o mesmo procedimento para com as demais solues, em ornem decrescente, at o aluno sentir o gosto amargo, tendo o cuidado de lavar a boca com gua do frasco n 16 aps cada teste;

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l) Em caso de dvida com relao ao sabor amargo ou no de uma determinada soluo, repetir o teste
com ela. RESULTADOS a) Com os dados coletados no grupo, preencher as tabelas abaixo: b) Com base nos dados desta tabela construir um grfico de distribuio de frequncia (de colunas ou de linhas) com os diferentes limiares gustativos no eixo de x. Limiar Gustativo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Total Total de sensveis Homens Mulheres Total Total de insensveis Porcentagem dos sensveis Porcentagem dos insensveis Nmero de indivduos Homens Mulheres Porcentagem Homens Mulheres Porcentagem total

DISCUSSO
a) Determinar se o limiar gustativo ao PTC em pessoas sensveis e insensveis, segundo as solues trabalhadas, realmente varia de pessoa para pessoa. b) possvel observar alguma diferena quanto a sensibilidade ao PTC entre indivduos de sexo feminino e masculino? c) A distribuio quanto a sensibilidade/insensibilidade ao PTC uniforme ou existe algumas solues que agrupam um maior nmero de indivduos sensveis e insensveis? d) Com base nas tabelas e no grfico de distribuio de frequncia, determinar a soluo a partir da qual se pode diferenciar as pessoas sensveis das insensveis ao PTC.

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ATIVIDADE 13 ANLISE DE LIGAO

INTRODUO Em todas as espcies de animais e plantas, o nmero de cromossomos que eles possuem sempre menor que o de genes detectados atravs de estudos genticos. Desse modo, possvel afirmar que cada cromossomo transporta mais de um gene, constituindo assim um conjunto denominado grupo de ligao gnica (ou grupo de "linkage"). Durante a meiose, cada grupo de ligao se comporta como um nico gene, no ocorrendo entre os mesmos segregao independente. Este grupo pode ser desfeito e novas combinaes gnicas podem ser produzidas por um fenmeno biolgico denominado permuta ou "crossingover". A freqncia de uma permuta inversamente proporcional distncia existente entre dois genes. Assim, dois genes que apresentam uma freqncia baixa de recombinao estaro mais prximos entre si do que dois outros genes que apresentam uma alta freqncia de recombinao. Determinando-se a freqncia de recombinao entre vrios genes de um mesmo grupo de ligao podemos construir um mapa mostrando as distncias e a seqncia em que os genes se encontram dispostos ao longo deste cromossomo. Os primeiros estudos em que se detectou o fenmeno de ligao aconteceram no incio deste sculo. Estes experimentos mostravam desvios nas propores fenotpicas esperadas na gerao F2 em cruzamentos envolvendo dois caracteres. Coube a T. H. Morgan em 1911, sugerir o mecanismo de ligao para explicar os desvios nas propores genotpicas de F2 observados em seus experimentos com Drosophila melanogaster. Tendo em vista que este dptero constitui um timo material de estudo de ligao, convm ressaltar que, em D. melanogaster, ao contrrio da maioria dos organismos de reproduo sexuada, a permuta ocorre apenas nas fmeas. Sendo assim, nos machos, os genes localizados em um mesmo cromossomo apresentam ligao completa. O objetivo deste captulo estabelecer a seqncia e a distncia entre os genes scute (determina apenas duas ou nenhuma cerda no escutelo ), crossveinless (determina a ausncia de veias transversais na asa) e forked (determina cerdas grossas e bifurcadas) de D. melanogaster bem como testar estatisticamente a hiptese de ligao entre eles. MATERIAIS
b) Fmeas virgens da linhagem scute, crossveinless e forked. c) Machos da linhagem selvagem d) Eterizador, reeterizador, caneta para escrever em vidro ou etiquetas, pincel e placa de contagem

a) Frascos de 250 mL com meio de cultura

PROCEDIMENTOS Para o estudo destes materiais, preciso adotar os seguintes procedimentos: a) OBTENO DA GERAO F1 1) Selecionar os progenitores que sero cruzados (homozigotos para o carter a ser estudado), tomando-se o cuidado de se trabalhar com fmeas virgens; 2) Colocar em um frasco de cultura 10 fmeas da linhagem scute, crossveinless e forked e 10 machos da linhagem selvagem para estes caracteres.

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Observaes: Observar diariamente os vidros onde essas moscas esto sendo mantidas; Anotar todos os dados relevantes que ocorrem ao longo do experimento; Adicionar fermento ao meio somente quando surgirem as primeiras larvas; Eliminar os pais dois dias aps o aparecimento das primeiras pupas; . notar as caractersticas fenotpicas (sexo. presena/ausncia de veias transversais. presena/ ausncia de cerdas no escutelo e presena/ausncia de cerdas grossas e bifurcadas) de todas as moscas que surgirem dentro de um prazo mximo de 10 dias; Eliminar as moscas que j foram analisadas.

b) OBTENO DA GERAO F2 01. 02. 03. 04. Quando iniciar o nascimento das primeiras moscas F1, separar 10 fmeas (virgens) e 10 machos; Anotar as caractersticas fenotpicas destas moscas; Transferir estes animais para novo frasco de cultura. Estas moscas sero os progenitores da gerao F2; Anotar no vidro o tipo de cruzamento (entre indivduos F1 ou simplesmente Fl x F1) e o fentipo dos progenitores; 05. Seguir as mesmas observaes feitas para obteno da gerao F1; 06. Anotar as caractersticas fenotpicas de pelo menos 200 moscas F2. RESULTADOS a) Resumir os resultados obtidos na anlise fenotpica das moscas, de acordo com a tabela abaixo: Gerao F1 F2 Fentipos Nmero de indivduos

Total b) Aps a coleta de todos os dados realizar uma anlise estatstica, atravs do teste de Qui-Quadrado, para se verificar se eles se comportam como caracteres ligados ou se apresentam segregao independente.

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Teste de Qui-Quadrado para o experimento: Fentipos da gerao F2 Freq. (absoluta) Observada Freq.Esperada (absoluta) (FO - FE)2/FE

x2 DISCUSSO 01. As propores fenotpicas encontradas em F2 esto de acordo com o esperado para genes ligados? 02. Determine a ordem destes genes no cromossomo, a distncia entre eles, bem como o coeficiente de coincidncia e a interferncia. 03. Considere a seguinte situao: dois loci A/a e D/d so to fortemente ligados que nunca se obserevou nenhum recombinante. Caso um indivduo Ad/As for cruzado com um aD/aD, quais fentipos sero vistos na F2 e em que propores? 04. Uma planta com o gentipo AB/ab cruzada com uma ab/ab. Se os dois locos esto a 10 u.m. de distncia, que proporo da prole ser AB/ab?

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QUESTES - LIGAO GNICA 01. (Fuvest-SP) O cruzamento AABb x aabb produziu a seguinte descendncia: gentipos: AaBb, aaBb, Aabb; aabb freqncias: 48%, 2%, 2%, 48% a) Qual a distncia entre os genes em questo, em unidades de recombinao? b) Qual a posio dos genes nos cromossomos do heterozigoto utilizado no cruzamento? 2. (PUC-SP) Considerando o cruzamento AaBb x aabb, demonstre o resultado genotpico com as respectivas freqncias, supondo a ocorrncia de: a) segregao independente; b) ligao completa (linkage), considerando os genes A e B localizados no mesmo cromossomo. 3. (FEI-SP) Analise os resultados obtidos nos dois cruzamentos abaixo e responda: 1) P __ AaBb x aabb F1 __ AaBb = 350 Aabb = 346 aaBb = 352 aabb = 349 2) P __ AaBb x aabb F1 __ AaBb = 42 Aabb = 160 aaBb = 168 aabb = 40

a) Em qual dos dois cruzamentos ocorreu distribuio independente dos genes, obedecendo segunda lei de Mendel? b) Qual a freqncia de crossing no cruzamento onde dois pares de genes alelos ocupavam o mesmo par de cromossomos homlogos? 4. (Unicamp-SP) Um cruzamento entre uma fmea heterozigota para dois pares de genes (AaBb) e um macho homozigoto (aabb) resultou na seguinte descendncia: AaBb Aabb aaBb aabb. Foi observado, tambm, que todas as classes acima apareceram na mesma freqncia (25%), tanto entre os machos como entre as fmeas. Considerando que h interesse em determinar se existe. ou no, ligao entre os genes estudados. explique qual seria a informao que esse cruzamento fornece. Balophus minhoquensis uma espcie hipottica de animal que habita certas praias de ilhas tropicais. Em certas ilhas, estes animais apresentam corpo redondo, cauda longa e fina e orelhas longas e pontiagudas, sendo denominados variedade A. Em outras ilhas, os animais apresentam corpo alongado, cauda fina e grossa e orelhas curtas e arredondadas, sendo denominados variedade B.

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05. Um cientista, interessado no mecanismo de herana da forma de cauda desses animais, cruzou exemplares da variedade A com outros da variedade B. Todos os descendentes de tal cruzamento apresentaram cauda longa e fina, do mesmo tipo que indivduos da variedade A. O cruzamento dos hbridos entre si resultou em uma gerao F2 composta por oitocentos indivduos, dos quais 580 apresentaram cauda longa e fina e 220 apresentaram cauda curta e grossa como a dos indivduos da variedade B. Com base nos resultados apresentados possvel se estabelecer o mecanismo de herana da forma da cauda em Balophus minhoquensis? Caso sua resposta seja afirmativa, determine o mecanismo. 6. A anlise dos hbridos F1 mencionada no exerccio anterior mostrou que todos eles apresentaram corpo alongado. Dentre os oitocentos indivduos F2 obtidos, 610 apresentaram corpo alongado e 190 apresentaram corpo arredondado. Determine o mecanismo de herana da forma do corpo em Balophus minhoquensis. 7. Foi analisado tambm. no experimento mencionado, o carter forma da orelha. Verificou-se que todos os F1 obtidos no cruzamento de indivduos da variedade A com indivduos da variedade B apresentaram orelhas curtas e arredondadas. Dos oitocentos descendentes obtidos no cruzamento dos F1 entre si, seiscentos apresentaram orelhas curtas e arredondadas e duzentos as apresentaram longas e pontiagudas. Determine o mecanismo de herana da forma da orelha em Balophus minhoquensis. 8. Foi ana1isada em Ba1ophus minhoquensis a herana simultnea dos caracteres forma da cauda e forma do corpo. Nessa anlise, indivduos F1, resultantes do cruzamento entre indivduos da variedade A e indivduos da variedade B e que apresentavam, portanto, cauda fina e longa e corpo alongado foram cruzados com indivduos duplo-recessivos que apresentavam cauda curta e grossa e corpo redondo. Desse cruzamento resultou uma prole de quatrocentos indivduos, constituda por: 97 indivduos com cauda fina e longa e corpo alongado; cem indivduos com cauda fina e longa e corpo redondo; 105 indivduos com cauda grossa e curta e corpo alongado; 98 indivduos com cauda grossa e curta e corpo redondo. A herana desses dois caracteres segue a lei da segregao independente? Justifique sua resposta. 9. Foi analisada tambm a herana simultnea dos caracteres forma da orelha e forma do corpo. Nessa anlise. indivduos F1 resultantes do cruzamento entre indivduos da variedade A e indivduos da variedade B e que apresentavam, portanto. orelhas curtas e arredondadas e corpo alongado foram cruzados com indivduos duplo-recessivos que apresentavam orelhas longas e pontiagudas e corpo redondo. Desse cruzamento resultou uma prole de oitocentos indivduos constituda por: 202 indivduos com orelhas curtas e arredondadas e corpo alongado; duzentos indivduos com orelhas curtas e arredondadas e corpo redondo; 205 indivduos com orelhas longas e pontiagudas e corpo alongado; 193 indivduos com orelhas longas e pontiagudas e corpo redondo. A herana desses dois caracteres segue a segunda lei de Mendel? Justifique sua resposta. 10. Foram realizados tambm experimentos para se estudar a herana simultnea dos caracteres forma da cauda e forma da orelha. Nesse caso, indivduos F1 resultantes do cruzamento entre indivduos da variedade A e indivduos da variedade B e que, portanto, apresentavam orelhas curtas e arredondadas e cauda longa e fina foram cruzados com indivduos duplo-recessivos que apresentavam orelhas longas e pontiagudas e cauda curta e grossa. Desse cruzamento resultou uma prole de 1.200 indivduos constituda por: 484 indivduos com cauda longa e fina e orelhas longas e pontiagudas; 476 indivduos com cauda curta e grossa e orelhas curtas e arredondadas; 120 indivduos com cauda longa e fina e orelhas curtas e arredondadas; 120 indivduos com cauda curta e grossa e orelhas longas e pontiagudas. A herana desses dois caracteres segue a segunda lei de Mendel? Justifique sua resposta. Que tipo de 45

fenmeno est ocorrendo nesse caso? possvel, com base nos dados apresentados, determinar a distncia relativa entre os dois genes em questo? Em caso de resposta afirmativa, qual essa distncia? 11. Em coelhos, o gene que condiciona pelagem manchada dominante sobre seu alelo que condiciona pelagem de colorao homognea. Da mesma forma. o gene que condiciona plo curto dominante sobre o alelo que condiciona plo longo (tipo angor). Coelhos de uma linhagem apresentando pelagem manchada e plos curtos foram cruzados com indivduos de uma linhagem de pelagem tipo angor e colorao homognea. Os F1 produzidos. apresentando todos pelagem manchada e plos curtos. foram cruzados com indivduos de linhagem angor e colorao homognea. Nesse cruzamento foi obtido o seguinte resultado: Nmero de indivduos Comprimento do plo Tipo de Colorao 68 Longo Manchada 431 Longo Homognea 432 Curto Manchada 69 Curto Homognea Com bases nesses resultados responda: a) Os genes em questo tm segregao independente? Justifique. b) Qual a porcentagem de recombinao entre os dois locos gnicos? 12. A distncia entre os genes recessivos cinnabar (olho vermelho-vivo) e vestigial (asa reduzida) em Drosophila 9,5 UR. Os alelos dominantes desses genes so respectivamente C (olho marromavermelhado) e V (asa normal), que chamaremos de selvagem. Ambos os genes so autossmicos. O cruzamento de fmea selvagem (para ambas as caractersticas), duplo-heterozigota e de constituio trans com um macho de olho cinnabar e asa vestigial produziu 180 descendentes. a) Quantos desses 180 descendentes esperamos encontrar para cada fentipo? b) Se cruzssemos uma fmea selvagem (para ambas as caractersticas), filha do casal do item a desta questo, com um macho idntico ao seu pai, obtendo trezentos descendentes, quantos esperaramos encontrar para cada classe fenotpica?

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ATIVIDADE 14 EQUILBRIO DE HARDY-WEINBERG

INTRODUO O conhecimento da dinmica dos genes e seu comportamento em populaes essencial para um bom entendimento de Evoluo, de Melhoramento Gentico, bem como de Gentica Geral. Muito embora os princpios bsicos da Gentica de Populaes sejam relativamente simples, a sua demonstrao na prtica geralmente demorada, em virtude do espao de tempo entre uma gerao e outra. Para resolver esse problema, populaes mendelianas podem ser simuladas no laboratrio. Existem vrias maneiras de se fazer essa simulao e um exemplo apresentado a seguir. O objetivo deste captulo a utilizao de um modelo (botes metlicos de presso) para construir uma populao, onde ocorre acasalamentos ao acaso, e a partir desta calcular freqncias gnicas e genotpicas e verificar se as freqncias obtidas esto em equilbrio de Hardy-Weinberg. MATERIAL a) Empregam-se botes metlicos de presso, que se encaixam, podendo-se designar um tipo de masculino e outro de feminino. b) Esses botes so disponveis nas cores branca e preta, sendo que essas cores representam os alelos de um loco. O de cor preta representa o alelo A1 e a cor branca o alelo A2. c) Devero existir em disponibilidade cerca de 100 pares de botes para cada aluno, sendo 50 brancos e 50 pretos. d) Dois botes brancos unidos constituem um indivduo homozigoto A1A1, dois botes pretos unidos constituem um indivduo homozigoto A2A2 e um boto branco e um preto constitui um indivduo heterozigoto A1A2. Cada boto representa um gameta. PROCEDIMENTO a) Construa uma populao de 64 indivduos, por exemplo, misturando ao acaso um certo nmero de indivduos A1A1, outro nmero de indivduos A1A2 e outro nmero de indivduos A2A2. RESULTADOS a) Determine as freqncias gnicas e genotpicas na populao escolhida.

N= p= q=

A1A1 = A1A2 = A2A2 =

b) Determine as freqncias de indivduos na populao em equilbrio de Hardy-Weinberg.

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Tabela 1 - Frequncias dos gentipos A1A1, A1A2, e A2A2 Proporo Esperada proporo

Gentipos A1A1 A1A2 A2A2 Soma

algbrica

Tabela 2 - Comparao das frequncias esperadas no equilbrio de Hardy-Weinberg com as frequncias observadas. Gentipos A1A1 A1A2 A2A2 Freq. esperada Freq. observada (desvio)2/freq.esp.

x2 =

gl=

Tabela 3 - Frequncias de acaslamentos realizados ao acaso, com respectivas descendncias para se obter a populao da prxima gerao. Acasalamento
A1A1 A1A1 A1A1 A1A2 A1A2 A1A2 A2A2 A2A2 A2A2 x

A1A1 A1A2 A2A2 A1A1 A1A2 A2A2 A1A1 A1A2 A2A2

Frequncia dos acasalamentos Obs. Esp.

Descendncia por acasalamento A1A1A1A2A2A2

Descendncia total esperada A1A1A1A2A2A2

Descendncia total observada A1A1A1A2A2A2

x x x x x x x x

d) Compare as frequncias obtidas na nova gerao, com as propores esperadas no equilbrio de HardyWeinberg. Tabela 4 - Comparao das frequncias esperadas no equilbrio de Hardy-Weinberg com as frequncias observadas. Gentipos A1A1 A1A2 A2A2 Freq. Esperada Freq. Observad (desvio)2/freq.esp.

x2 =

gl =

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DISCUSSO: 01. Observando os resultados obtidos acima, qual a concluso com relao as fequncias gnicas e genotpicas e o equilbrio de Hardy-Weinberg? 02. Organize uma nova populao com outras frequncias, como por exemplo: 4 A1A1, 20 A1A2 e 40 A2A2. Calcule as frequncias gnicas, verifique se a populao est em equilbrio de Hardy-Weinberg.

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ATIVIDADE 15 CITOGENTICA DE PLANTAS

INTRODUO Citogentica uma cincia hbrida que combina citologia e gentica. Esta cincia inclui manuseio dos cromossomos atravs da aplicao de tcnicas de colorao, para a determinao do nmero e morfologia dos cromossomos (anlise cariotpica) e para um melhor entendimento do processo de diviso celular (mitose, meiose) e das modificaes ocorridas na estrutura e nmero dos cromossomos. Para estudos de comportamento e morfologia de cromossomos mitticos e meiticos de plantas, no existe uma tcnica geral que possa ser usada para todos os grupos de plantas. Por esta razo deve-se experimentar diferentes prtratamentos, fixadores, corantes e mesmo mtodos de obteno das preparaes, adaptados para o estudo dos cromossomos de um grupo particular de plantas. O estudo da anlise cromossmica extremamente importante pois permite a caracterizao de um caritipo que em alguns grupos de plantas, pode ser usado na identificao de espcies. O objetivo deste captulo ensinar ao aluno a realizar coletas e tratamento de razes de milho e cebola e us-las para a obteno de metfases que podero ser posteriormente utilizadas para a anlise cariotpica. MATERIAIS a) b) c) d) e) Razes de milho e cebola 8 hidroxiquinoliria 0,02 mol/L Colchicina 0,1% Carmin actico 1% Reativo de Schiff

PROCEDIMENTO a) Coleta de razes. As razes so obtidas de sementes de milho, germinados em placa de Petri e de bulbos de cebola. As razes devem ser coletadas quando estiverem com dois a trs centmetros de comprimento; b) Pr-tratamento. A finalidade do pr-tratamento interromper a diviso celular em metfase. Para obteno dos cromossomos de cebola as razes so tratadas por colchicina 0,1% durante 4 horas. As razes de milho so tratadas com 8-hidroxiquinolina 0,02 mol/L durante 4 horas. Aps o pr-tratamento as razes so fixadas etanol : cido actico na proporo de 3 : 1 durante o perodo de 12:00 a 24:00 horas. Em seguida duas trocas de etanol 70% so feitas e o material mantido em geladeira. c) Colorao pelo Mtodo de Feulgen Este mtodo de colorao usa o reativo de Schiff preparado da seguinte forma: 1 g fucsina bsica 3 g de metabissulfito de sdio 30 mL de HCl 1N 1 g de carvo ativado Adicione 200 mL de gua de torneira em um becker e aquea a 50C. Adicione fucsina bsica e agite. A seguir acrescente simultaneamente o metabissulfito de sdio e o HCl. Coloque a mistura em um frasco 50

escuro e deixar descansar no escuro durante no mnimo 12:00 horas. No dia seguinte acrescente o carvo ativado mexa por 1 minuto e filtre. O filtrado deve ficar incolor ao contrrio, acrescente mais 1 grama de carvo e filtre novamente d) Preparao das lminas 01. 02. 03. 04. 05. 06. 07. 08. 09. 10. Coloque as razes por 5 minutos em gua destilada; Transfira as razes para o NHCl a 60C por 8 minutos; Coloque as razes por 5 minutos em gua destilada Coloque no reativo de Schiff por 1 hora; Lave as razes em gua de torneira at o lquido tornar-se claro; Coloque as razes por 1-3 minutos em cido actico 45%; Esmague as pontas de raiz sobre uma lmina com uma ou duas gotas de carmin actico 1%; Aquea a lmina vagarosamente e evite ferver o corante; Pressione a lmina e lamnula entre duas folhas de papel filtro; Observe ao microscpio.

RESULTADOS a) O mtodo de colorao utilizado foi eficiente? b) Foram obtidas metfases com cromossomos sem sobreposio e com boa morfologia? c) Caso contrrio, seria possvel melhorar o espalhamento e a nitidez das figuras metafsicas? Como? DISCUSSO 01. 02. 03. 04. Qual a importncia do fixador? Qual a diferena de ao entre a 8-hidroxiquinolina e colchicina? Como se d a colorao dos cromossomos pelo reativo de Schiff? Como voc usaria o conhecimento obtido nesta aula?

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