UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MXICO

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza Carrera de Biologa

Evaluacin farmacolgica de Tagetes lucida Cav. (Asteraceae) en la

nocicepcin inducida en ratones

TESIS
Que para obtener el ttulo de Bilogo Presenta: Hugo Soria Tapia
Director de Tesis: Dra. Mara Eva Gonzlez Trujano
Instituto Nacional de Psiquiatra Ramn de la Fuente Muiz

Asesor Interno: Dra. Eva Aguirre Hernndez

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Vo. Bo.

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Dra. Mara Eva Gonzlez Trujano

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Dra. Eva Aguirre Hernndez

Agosto 2011

INDICE

I.
1.1 1.2 1.3 1.3.1 1.4 1.4.1 1.5 1.5.1 1.6 1.6.1 1.6.2 1.6.3 1.6.3.1 1.6.4

Marco terico.
Definicin del dolor. Epidemiologia del dolor. Clasificacin del dolor. El dolor abdominal. 9 4

3 3

Teraputica. Efectos farmacolgicos no deseables. 10 Modelos experimentales. 19 Modelo de estiramiento abdominal. 19 Yauhtli planta medicinal mexicana. 20 Antecedentes histricos de Tagetes lucida Cav. 20 Botnica de Tagetes lucida Cav. 21 Usos medicinales de Tagetes lucida Cav. 23

Tagetes lucida Cav. en el alivio del dolor. 23

Estudios qumicos y farmacolgicos. 24

II. III. IV.

4.1

Planteamiento del problema. 36 Hiptesis. 37 Objetivo general. 37

Objetivos particulares. 37

V.
5.1 5.2 5.3 5.4

Metodologa. 38
Material vegetal. 38 Obtencin del extracto. 38 Preparacin del extracto y los frmacos. 39 Material biolgico. 39

5.5 5.6 5.6.1 5.6.2 5.7

Grupos experimentales. Evaluacin farmacolgica del extracto. 40 Modelo de estiramiento abdominal Writhing. 40

39

Evaluacin de efectos depresores sobre el Sistema Nervioso Central (SNC). Anlisis estadstico. 42

41

VI
6.1 6.2

Resultados. 42
Respuesta antinociceptiva de Tagetes lucida Cav. Efecto depresor sobre el SNC producido por Tagetes lucida Cav. 44 42

VII VIII IX

Discusin. 51 Conclusiones.
55

Bibliografa. 56

I.

Marco Terico

1.1 Definicin de dolor.

Dado la dificultad para englobar en una sola definicin la multitud de aspectos y variedades que presenta el dolor, se han propuesto un gran nmero de enunciados para tratar de encontrar la ms precisa; por lo tanto, el trmino dolor es definido en la edicin ms actual (22) del diccionario de la Real Academia Espaola, basado en su etimologa latina (dolor, ris), como: aquella sensacin molesta y aflictiva de una parte del cuerpo por causa interior o exterior y que se padece en el nimo como sentimiento de pena o congoja. La Asociacin Mundial para el Estudio del Dolor (IASP) la define adems como: una experiencia sensorial y emocional desagradable, asociada con un dao tisular, ya sea real, potencial o descrito en trminos de dicho dao (Guevara et al., 2004). El dolor se percibe cuando la seal del estmulo es trasmitida a distintas reas corticales del sistema nervioso central (SNC), producindose no slo una respuesta refleja, ni slo una sensacin desagradable, sino una respuesta emocional con varios componentes, tales como: 1) Sensorial-discriminativo: hace referencia a cualidades estrictamente sensoriales del dolor, tales como su localizacin, calidad, intensidad y sus caractersticas temporoespaciales. 2) Cognitivo-evaluativo: analiza e interpreta el dolor en funcin de lo que se est sintiendo y lo que puede ocurrir. 3) Afectivo-emocional: sensacin dolorosa acompaada de ansiedad, depresin, temor, angustia, entre otros. Respuestas en relacin con experiencias dolorosas previas, a la personalidad del individuo y con factores socio-culturales (Lpez, 1996) Tradicionalmente el dolor es percibido como una sensacin o signo de algn tejido daado o una alarma de advertencia de alguna enfermedad. La perspectiva biopsicosocial enfatiza que el dolor es un proceso dinmico que no slo es influido por mecanismos biolgicos, psicolgicos y sociales, sino que tambin produce cambios que pueden afectar las

respuestas futuras hacia el dolor (Keefe y France, 1999). De tal manera que, el dolor es una percepcin consecuente a la activacin del sistema nociceptivo, que es uno de los responsables de la homeostasis del organismo. En circunstancias fisiolgicas tiene una funcin protectora pero existen patologas en que el dolor se convierte en un sntoma principal que llega a ser el centro de la enfermedad (Ortega et al., 2002).

1.2 Epidemiologa del dolor.

En el ao 2000, la Encuesta Nacional de Salud identific que 3.5 millones de mexicanos fueron hospitalizados; en ese sentido, un estudio nacional registr que 96.3% de los enfermos hospitalizados manifestaron dolor (Guevara y Covarrubias, 2008). Las principales causas de hospitalizacin fueron las de origen obsttrico y las intervenciones quirrgicas (Guevara et al., 2007). En el 22.7% de los enfermos fue una intervencin teraputica, lo que propicio que el nmero de procedimientos quirrgicos se incrementara un 25% durante el quinquenio de 2000 a 2005. En dicho contexto, se identific que 80% de los enfermos de este tipo presentan dolor de intensidad moderada a severa (Guevara y Covarrubias, 2008). En series internacionales se ha documentado que 78% de los sujetos hospitalizados y 77% de los pacientes quirrgicos han experimentado dolor (Guevara et al., 2007). En nuestro pas, las principales causas de morbimortalidad se encuentran asociadas a la presencia de dolor. De acuerdo a cifras proporcionadas por el Instituto Nacional de Estadstica, Geografa e Informtica (INEGI), entre las principales causas de mortalidad de la poblacin mexicana destacan diversas patologas (Fig. 1), tales como, las enfermedades del corazn, la diabetes mellitus, el cncer y los

accidentes (Covarruvias, 2008).

Se ha estimado que la prevalencia nacional de diabetes mellitus se encuentra entre el 7.5 y 8.18%; lo anterior traduce que si la prevalencia de la neuropata diabtica dolorosa es del 20 al 24%, entonces se puede estimar que de 800,000 a 1,920,000 personas son potenciales portadoras de dolor por esta causa (Guevara y Covarruvias, 2008). En el caso del cncer; es una de las principales causas de muerte en nuestro pas, contribuyendo a 12.7% de mortalidad general (13 % en hombres y 14.5% en mujeres). En series internacionales se ha informado que de 80 a 90% de estos pacientes presenta dolor (Guevara et al., 2007). Del mismo modo, durante el ao 2000, se documentaron 10 millones de casos nuevos en el mundo. Esta terrible enfermedad genera dolor en el 75% de los individuos que la padecen (Covarruvias, 2008). Respecto a los accidentes, que es una de las principales causas de internamiento hospitalario. En este sentido, un estudio nacional ha documentado que 96.3% de los pacientes hospitalizados refiere dolor. Aunado a lo anterior, en Mxico se carece de estudios de corte epidemiolgico, tendientes a estimar la frecuencia y prevalencia del dolor crnico. Se estima que esta manifestacin del dolor, afecta al 15% de la poblacin general. Por lo que posiblemente, cerca de 16 millones de mexicanos padezcan este penoso sndrome (Covarruvias, 2008).

La elevada prevalencia del dolor y las desventajas de su tratamiento ineficaz, han mostrado que el alivio de este sntoma es subptimo. En este sentido, se ha documentado que 64% de los pacientes con dolor posoperatorio severo no recibi analgesia y que el manejo del dolor en el paciente oncolgico frecuentemente es ineficaz (Guevara et al. 2007). Series de estudio muestran que el 78% de los pacientes ha experimentado dolor agudo durante la hospitalizacin; de stos, el 45% present dolor insoportable, sin embargo, nicamente el 49% de las notas de enfermera mencionan que existe una mejora de la sintomatologa dolorosa. Un grupo de mdicos de diferentes instituciones hospitalarias del pas, aplic a 55 pacientes un cuestionario, el cual const de 15 reactivos principales. Los resultados del cuestionario aplicado muestran que el 96.36% de los entrevistados presentaron dolor; esto contrasta con otras series en las cuales el dolor se presenta del 70% al 80%. De los pacientes con dolor se encontr que la mayora registr dolor de moderado a severo, lo cual no difiere de otras series. El 60% de los pacientes indican que el dolor interfiere con sus actividades laborales, adems que, el dolor afecta el estado de nimo del 54.55% de los entrevistados. Del mismo modo el dolor perturba el sueo de 56.56% de los pacientes, as mismo esto no es diferente a lo referido en otras series (Guevara et al., 2004). Con el objetivo de identificar las tendencias para el diagnstico y el tratamiento del dolor neuroptico (DN) en Mxico, se dise un cuestionario con 15 reactivos orientados a explorar la frecuencia, tipos de dolor, signos y sntomas concomitantes; entre otros reactivos. El cuestionario se aplic a 105 mdicos de 13 estados de la Repblica Mexicana. Dieciocho no regresaron el cuestionario y 17 lo contestaron en forma incompleta descartndose para su anlisis. Se evaluaron 70 cuestionarios. Se encontr que 61.42% atiende a pacientes con DN en su prctica diaria, as mismo 67.14% atiende a pacientes con dolor agudo y 40% con dolor por cncer. Al preguntar sobre el tipo de dolor ms frecuente que se atiende en la consulta, 17.14% consider al dolor neuroptico, 14.28% al dolor por cncer y 10% al dolor agudo. Con respecto a los sntomas que ms frecuentemente acompaan al DN, se report que la alodinia es el

sntoma ms frecuente con el 50%, 12.85% consider a la hiperestesia y 8.57% a la hiperalgesia (Guevara et al. 2006). Para determinar el manejo del dolor, en pacientes con dolor crnico, se realizo un estudio descriptivo correlacional, con una muestra compuesta por 151 pacientes mayores de 18 aos de edad con presencia de dolor crnico de ms de tres meses de evolucin. El estudio se realiz en una institucin pblica del rea metropolitana de Monterrey Nuevo Len, Mxico. Para determinar el manejo del dolor se utiliz el ndice del Manejo del Dolor y el esquema de la Escalera Analgsica de la Organizacin Mundial de la Salud. Los resultados mostraron que el 90.7% de los participantes present dolor en el momento de la entrevista. Respecto a la intensidad del dolor 29.8% presentaron dolor leve, 39.7% dolor moderado y 21.2% dolor severo. Al cuestionar a los participantes si el dolor haba sido causa de incapacidad laboral en los ltimos seis meses, el 39% de los que se desempean laboralmente respondi de manera afirmativa. El 70% de los participantes present un inadecuado manejo del dolor. Las actividades de la vida diaria que presentaron limitacin de moderada a severa a causa del dolor fueron: Labores del hogar con 67.6%, caminar 62.92%, manejar o utilizar algn tipo de transporte 54.3% y durante el sueo con 51%. No se encontraron diferencias entre la intensidad del dolor y la limitacin de actividades de la vida diaria respecto al sexo. La artritis reumatoide fue la principal patologa causante de dolor crnico en 59.6% de los pacientes y la media del tiempo de evolucin del padecimiento fue de 9.15 aos con una desviacin estndar de 8.45 (Gonzles y Moreno, 2007). (Figura 2).

Figura 2. Patologas ms comunes causantes de dolor crnico (Covarrubias, 2008)

El dolor abdominal agudo es uno de los problemas ms frecuentes en la prctica diaria de cirujanos, internistas, pediatras y gineclogos. En general representa no menos de una de cada 20 consultas no relacionadas con trauma en los servicios de urgencia de los hospitales generales. Es un problema difcil y complejo que plantea al mdico una gran variedad de posibilidades diagnsticas que involucran a diversos rganos y sistemas. El dolor abdominal agudo se define como aquel que tiene una evolucin de menos de 6 horas y generalmente se le entiende como sinnimo de abdomen agudo y de emergencia abdominal (Defilippi, 2002). Se ha documentado que la prevalencia del dolor crnico en la poblacin general es del 27%; si se considera la poblacin del pas (105 millones de personas en 2008), entonces se puede estimar que cerca de 28 millones de mexicanos padecen dolor crnico (Guevara y Covarrubias, 2008). Lo anterior proporciona una panormica de la magnitud de esta problemtica en la poblacin general.

1.3 Clasificacin del dolor.

Han sido muchos los intentos de clasificar los diferentes tipos de dolor, proponindose clasificaciones basadas en la etiologa, expectativa de vida, segn la regin afectada, la intensidad, y el tiempo de duracin entre otras. La clasificacin etiolgica que el Subcomit de Taxonoma de la IASP ha dado del dolor es la siguiente: dolor gentico o congnito, dolor postraumtico, postquirrgico, por quemaduras, dolor infeccioso, parasitario; dolor

inflamatorio, inmune, dolor por cncer, dolor txico, metablico, dolor degenerativo, mecnico, dolor disfuncional, dolor de origen desconocido y dolor psicolgico. La clasificacin segn la expectativa de vida, donde existen bsicamente dos tipos de dolor; el maligno, que es el producido a consecuencia del cncer o del sida y benigno, representado por aquellos procesos que no comprometen la supervivencia del individuo. De la clasificacin segn la regin afectada proporcionada por el Subcomit de Taxonoma de la IASP se pueden distinguir el dolor de cabeza, cara y boca; dolor de la regin cervical; dolor de la parte superior de la espalda y miembros superiores; dolor de la regin torcica; dolor abdominal; dolor bajo de
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espalda, columna lumbar, sacro y coccgeo; dolor de miembros inferiores; dolor plvico; dolor anal, perianal, genital y el dolor que afecta a ms de tres regiones. En la clasificacin segn las caractersticas temporales del dolor, se pueden catalogar en episodios simples, continuos, recurrentes o paroxsticos. O bien, en Agudo y Crnico, que desde el punto de vista prctico se utiliza con mayor frecuencia por las grandes diferencias que existen entre uno y otro en cuanto a la modulacin central del dolor, la repercusin sobre el individuo y el enfoque teraputico (Lpez, 1996).

1.3.1 El dolor abdominal.

El dolor abdominal recurrente se define como aquel que aparece con una intensidad que es capaz de interferir con las actividades cotidianas, que se presenta con una frecuencia igual o mayor a tres episodios en un periodo superior a tres meses; es un dolor de larga duracin, intermitente o constante, funcional u orgnico; el funcional es aquel caso en el que no se hayan encontrado signos demostrables de algn proceso patolgico de tipo anatmico, metablico, infeccioso, inflamatorio o neoplsico (Rubinos y Mora, 2006).

1.4 Teraputica.
Entre los frmacos ms utilizados que producen efectos teraputicos como analgsico, antiinflamatorio, antipirtico, antiagregante plaquetario e inhibidor de la biosntesis de prostaglandinas, nombrados de manera generalizada como antiinflamatorios no esteroideos (AINE), se mencionan a los siguientes: salicilatos (cido acetilsaliclico, salicilato de sodio, triflusal), pirazolonas (metamizol), paraminofenol (paracetamol), indoles (indometacina, sulindaco), derivados del cido actico, (diclofenaco, aceclofenaco, ketorolaco), fenamatos (meclofenamato, cido mefenmico, cido flufenmico) derivados del cido propinico (ibuprofeno, naproxeno, flurbiprofeno), oxicamas (peroxicam), alcanonas (nabumetona) y coxibs (celecoxib, etoricoxib, parecoxib, valdecoxib) (Montoro, 2003).

Los analgsicos centrales de tipo opioide son aquellos que interaccionan con los receptores especficos del SNC. Entre los Opiceos fuertes se puede mencionar a la morfina. Entre los analgsicos centrales dbiles u opiceos dbiles estn la codena que es derivado de la morfina. En el tratamiento del dolor de moderado a intenso se suelen utilizar codena, dihidrocodena, buprenorfina, tramadol y los coadyuvantes, medicamentos usados para aumentar la eficacia analgsica de los opioides, tambin permiten adicionar ciertas drogas que actan sobre el componente psicofsico que concierne al dolor. Los ms utilizados son los antidepresivos (Amitriptilina), benzodiazepinas (Diazepam, Bromazepan, Lorazepam,

Clonazepam), neurolpticos (Haloperidol, Clorpromazina, Prometazina), anticonvulsivantes (Carbamacepina, Fenitona, Gabapentina) y los corticoides (Prednisona, Dexametasona) (Montoro, 2003).

1.4.1 Efectos farmacolgicos no deseables

La utilizacin de los frmacos ms ampliamente utilizados como analgsicos, antiinflamatorios (AINE) se ve limitada por la posible aparicin de efectos adversos que han sido conocidos desde su introduccin. Los AINEs como grupo farmacolgico son responsables de 70,000 ingresos hospitalarios y 7,000 fallecimientos anuales en todo el mundo como consecuencia de sus diversos efectos secundarios (Muriel et al. 2007). Los efectos adversos gastrointestinales de estos frmacos son posiblemente los ms comunes, seguidos de las reacciones renales adversas (alteraciones en la hematodinmica renal e insuficiencia renal), las cutneas (fenmenos de hipersensibilidad, urticaria o eritema multiforme), neurolgicas (cefaleas, tinnitus), hepticas (elevacin de enzimas hepticas) y las cardiovasculares (Muriel et al. 2007). Los salicilatos constituyen un grupo de compuestos derivados del cido saliclico: aspirina o cido acetilsaliclico, acetilsalicilato de lisina, salicilato sdico, salsalato o cido salicilsaliclico, diflunisal, etc. Estn disponibles para ingestin como comprimidos y sobres

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efervescentes, pero tambin son ingredientes activos de una amplia variedad de preparaciones tpicas disponibles en el mercado (Lpez, 2003). Los salicilatos estimulan el centro respiratorio, produciendo hiperventilacin y alcalosis respiratoria. Interfieren con el ciclo de Krebs, limitan la produccin de adenosn trifosfato (ATP) e incrementan la produccin de cidos orgnicos (lactato, piruvato, acetoacetato),

llevando a cetosis y a acidosis metablica. En los nios la alcalosis respiratoria puede ser transitoria de forma que la acidosis metablica puede aparecer precozmente. La acidosis a su vez incrementa la severidad de la intoxicacin, aumentando la penetracin de salicilato en el SNC y otros tejidos (Lpez, 2003). El cido acetilsaliclico provoca dao digestivo el cual se presenta por la irritacin de la mucosa gstrica, la cual se puede ulcerar, el cuadro va acompaado por dispepsias, nuseas y vmitos, cefaleas, zumbidos de odos y disminucin de la agudeza auditiva; hipersensibilidad con edema angioneurtico, rinitis, urticaria y disnea, en la sangre altera la coagulacin, provoca adhesividad y anemia hemoltica (Muriel et al. 2007). El salicilismo que es provocado por consumo prolongado de salicilatos, sus manifestaciones clnicas son nauseas, vmitos, somnolencia, confusin mental, sed, deshidratacin, parestesias, sudoracin, hiperventilacin, taquicardia, intolerancia a la glucosa, necrosis renal. (Muriel et al. 2007). La deshidratacin se debe a un aumento de prdidas gastrointestinales (vmitos) y prdidas insensibles (hiperpnea y fiebre). La toxicidad severa se acompaa de deshidratacin mayor del 5-10%. Pueden aparecer alteraciones electrolticas, como hipocalcemia y a la excrecin renal de potasio, sodio y bicarbonato, resultando una orina alcalina (Lpez, 2003). La toxicidad en el SNC viene mediada por la hipoglucemia. Pueden existir niveles bajos de glucosa en SNC y liquido cfalo raqudeo (LCR) a pesar de glucemias en rangos normales. Se manifiesta con tinnitus, prdida de audicin, hiperpnea, agitacin, vrtigo, delirio, alucinaciones, seguido de somnolencia y letargia, que puede progresar a desorientacin,

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convulsiones, edema cerebral, hipertermia, coma y, eventualmente, muerte. Las convulsiones y el coma son los signos ms significativos de toxicidad severa (Lpez, 2003). En el tracto gastrointestinal la intoxicacin par salicilatos produce sobre todo nuseas y vmitos; en ocasiones disminucin de la motilidad gastrointestinal, hemorragia

gastrointestinal, perforacin intestinal y pancreatitis. En el sistema cardiovascular produce taquicardia, hipotensin, shock hipovolmico, arritmias ventriculares, asistolia. El fallo renal agudo es infrecuente, secundario a deshidratacin o fallo multiorgnco (Lpez, 2003). En algunas ocasiones aparecen manifestaciones hemorrgicas por hipoprotrombinemia y disfuncin plaquetaria, incluso coagulacin intravascular diseminada dentro de un fallo multiorgnico, asociado a intoxicacin crnica; la hemlisis es infrecuente. Muchos de los sntomas de toxicidad aguda y crnica se solapan. En la intoxicacin crnica, los sntomas usualmente tienen un inicio ms lento, y a menudo se pasan por alto o se consideran parte de una enfermedad subyacente. Suelen presentarse por error de dosificacin de los padres, y ocurren con ms frecuencia en ancianos. El estado mental se altera, y conlleva una alta mortalidad (Lpez, 2003). Los derivados del para-aminofenol como el acetaminofn o paracetamol que es el metabolito activo de la fanecetina, es un analgsico derivado de la anilina (alquitrn de hulla) (Insel, 2001). La popularidad del paracetamol ha aumentado en los ltimos aos y este incremento en la disponibilidad lo ha transformado en uno de los agentes ms comunes tanto en las sobredosis accidentales como intencionales (Muriel et al. 2007). La sobredosis aguda ocasiona lesin heptica mortal, el efecto colateral ms grave de la sobredosificacin aguda de acetaminofn es la necrosis heptica (hepatotoxicidad) que depende de la dosis, a dosis teraputicas recomendadas, suele ser bien tolerado. Provoca lesiones en piel, a veces surgen erupciones cutneas y otras reacciones alrgicas, la erupcin por lo comn es eritematosa o urticaria, pero en ocasiones es ms grave y se acompaa de fiebre medicamentosa y lesiones de mucosa. En ocasiones el consumo de paracetamol se ha acompaado alteraciones sanguneas como neutropenia, trombocitopenia, pancitopenia, agranulocitosis, metahemoglobinemia,
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anemia hemoltica ligada al dficit de glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa (Glu-6-P-dH). En ocasiones tambin se observan necrosis tubular renal y nefritis intersticial; cuando existe intoxicacin aguda se presentan nauseas, vmitos, cianosis, anorexia y dolor abdominal, posteriormente aparece un aumento de la bilirrubina con ictericia y aumento del tiempo de protrombina, un estado de acidosis metablica con intolerancia a la glucosa y glucosuria; puede surgir una encefalopata heptica que pude conducir al coma y muerte. El paracetamol ms alcohol pueden dar un cuadro de hepatotoxicidad (Muriel et al. 2007 e Insel, 2001). Las pirazolonas producen nuseas, dolor abdominal y somnolencia por intoxicacin leve. Efectos multisistmicos en intoxicacin severa son: gastrointestinales (nuseas, vmitos, diarrea), SNC (vrtigo, convulsiones, coma), cardiovasculares (edema pulmonar, hipotensin, arritmias, parada cardiorespiratoria), acidosis metablica y respiratoria, y alteraciones electrolticas. La toxicidad severa diferida (2-7 das) incluye disfuncin renal y heptica as como supresin de la mdula sea (Lpez, 2003). Del metamizol destacan como efectos secundarios la agranulocitosis provocada por anticuerpos antileucocitarios especficos y la anemia aplsica, Su accin sobre la mucosa gstrica es escasa si se compara con otros AINE, pero si se fuerza la dosis de metamizol llega a producir claras lesiones gstricas. A dosis elevadas produce decaimiento, aturdimiento e hipotensin y alteraciones renales, puede potenciar la accin de otros depresores del SNC. En la intoxicacin aguda puede llegar a provocar convulsiones y coma, parada respiratoria y cuadros de insuficiencia heptica (Muriel

et al. 2007).
Los fenamatos constituyen una familia de antiinflamatorios no esteroideos derivados del cido N-fenilantranlico. Con los fenamatos los principales efectos colaterales frecuentes (que surgen en el 25%, aproximadamente de todos los enfermos) se sitan en el aparato digestivo, casi siempre se manifiestan como dispepsia o molestia de la porcin superior de las vas gastrointestinales, aunque puede ser intensa la diarrea y sta es un sntoma relativamente comn, suele acompaarse de esteatorrea e inflamacin intestinal, vmitos, Un posible efecto colateral grave en casos espordicos es la anemia hemoltica que puede ser de tipo
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autoinmunitario. Los fenamatos estn contraindicados en sujetos con antecedentes de enfermedades de vas gastrointestinales. De surgir diarrea o una erupcin cutnea, hay que interrumpir inmediatamente el uso de frmacos (Insel, 2001). Tambin pueden presentarse mioclonas, convulsiones (sobre todo con el cido mefenmico), fallo renal y acidosis metablica. La mayora se recuperan completamente en 24 horas (Lpez, 2003). Los sntomas ms comunes de los derivados del cido propinico son cefalea, tinnitus, somnolencia, vmitos y dolor abdominal (Lpez, 2003). Ingestiones menores de 100 mg/kg no son txicas. La toxicidad severa por ibuprofeno se ha informado principalmente en nios, y puede ocurrir en ingestiones por encima de 400 mg/kg. Los sntomas aparecen a las 4 horas en el 9% de los adultos y 5% de los nios, ceden en 24-48 horas (Lpez, 2003). El efecto secundario ms frecuente del ibuprofeno son la molestias gastrointestinales, incluso llegando a la ulceracin y a la hemorragia, colitis isqumica, se han descrito casos de hepatitis txica, alopecia, insuficiencia renal, trastornos hematolgicos (agranulocitosis, leucopenia,

trombocitopenia leve y anemia hemoltica) sndrome menngeo asptico, alteraciones de la visn (escotoma, visin borrosa, ambliopa, modificaciones en la percepcin de colores), trastornos gastrointestinales (diarrea y constipacin), convulsiones, coma, apnea, hipotensin, bradicardia, acidosis metablica con anin gap aumentado (Lpez, 2003 y Muriel et al. 2007). El naproxeno produce trastornos digestivos, los ms frecuentes son nauseas, vmitos, diarreas, constipacin, si es por va rectal molestias anales, melenas, ulcera gastroduodenal, se ha asociado a pancreatitis aguda, fallo renal y lesiones hepticas, dentro de las alteraciones nerviosas se presentan cefaleas, vrtigos, somnolencia, perdida del conocimiento transitoria, irritabilidad, depresin, insomnio, sordera pasajera y muy poco frecuentes se presentan agranulocitosis, prurito y alteraciones cutneas, descomposicin de la insuficiencia cardiaca, descenso del poder de contraccin uterina en parto. Fenoprofeno produce hipotensin y taquicardia (Lpez, 2003 y Muriel et al. 2007). De los derivados del cido actico, el diclofenaco que es un derivado del cido fenilactico, creado especficamente como antiinflamatorio. Su uso produce efectos adversos en
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20% de los pacientes y en promedio, 2% de ellos interrumpen su uso como consecuencia de dicha situacin (Insel, 2001). Con el uso de diclofenaco a veces aparecen nuseas, vmitos, diarreas y gastralgia, que ceden sin necesidad de retirar el tratamiento, raramente existe elevacin de transaminasas (Muriel et al. 2007), pero en 15% de pacientes con osteoartritis tratados con diclofenaco hay incremento de las actividades de aminotransferasa heptica en plasma y solo en contadas ocasiones se acompaan de manifestaciones clnicas de hepatopata (Insel, 2001). Otras respuestas adversas a el diclofenaco incluyen efectos en SNC, erupciones cutneas, exantema, edemas, retencin de liquidos; el cuadro por intoxicacin se manifiesta con irritabilidad, mioclonias, cefaleas, vrtigos, ataxias, convulsiones, agitacin motora; alteraciones digestivas con nauseas, vmitos, diarreas. Puede dar lugar a alteraciones de la coagulacin por ser antiagregante plaquetario, adems no se han descartado posibles efectos teratgenos (Muriel et al. 2007 e Insel, 2001). El diclofenaco produce fallo heptico de inicio diferido (1-3 meses) de origen idiosincrsico, tinnitus, alucinaciones y fallo renal agudo. Las sobredosis de sulindaco son excepcionales, provocando estupor, coma, oliguria e hipotensin (Lpez, 2003). El ketorolaco es un potente analgsico pero posee poca eficacia antiinflamatoria. Es uno de los pocos AINE aprobados para su aplicacin parenteral (Insel, 2001). Las reacciones adversas establecidas a travs de la amplia experiencia clnica mundial con el ketorolaco se centran principalmente en el tracto gastrointestinal (estreimiento, diarrea, dispepsia, dolor gastrointestinal, nauseas, ulceras) en el sistema nervioso central (cefaleas, vrtigos, insomnio, excitabilidad, somnolencia, mareos), as como dolor en el sitio de la inyeccn; las reacciones adversas suelen ser reversibles, de baja intensidad y dosis-dependientes (Muriel et al. 2007 e Insel, 2001). Indoles: De un 35 a 50% de los pacientes que reciben dosis teraputicas de indometacina presentan sntomas indeseables y en promedio 20% debe abandonar su empleo. Casi todos los efectos colaterales dependen de la dosis (Insel, 2001). Los sntomas y complicaciones gastrointestinales consisten en anorexia, nauseas, dolor abdominal vmitos, diarreas, ulcus gstrico, sangrado intestinal, rectorragia si se administra por via rectal, pancreatitis aguda,
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hepatitis toxica, cuadro ictrico; vrtigos, acfenos problemas relacionados con el SNC (cefaleas frontales pulstiles que surge en 25 a 50% de las personas que la ingieren durante largo tiempo obnubilacin, somnolencia, temblores, confusin mental, visin borrosa e insomnio), con menor frecuencia se encuentran las depresiones, psicosis, confusin mental, alucinaciones, convulsiones, sncope y coma se han reportado suicidios. Las reacciones por hipersensibilidad se manifiestan en la forma de erupciones, prurito, urticaria y como cuadro ms grave, crisis agudas de asma y broncoespasmos. Daos hematolgicos se presenta anemia por sangrado intestinal crnico, neutropenia, trombocitopenia, anemia aplsica, agranulocitosis y alteraciones de coagulacin (epistaxis y hemorragias vaginales). Los daos oftalmolgicos son retinopata, opacidad corneal y alteracin de la agudeza visual y los daos metabolicos son hiperkaliemia, hiperglicemia e hipoaldosteronismo. (Muriel et al. 2007 e Insel, 2001). Oxicamas: La incidencia de efectos colaterales en sujetos que reciben peroxicam es del 20%, en promedio 5% de los pacientes abandona el uso del frmaco por efectos adversos (Insel, 2001). Entre los efectos secundarios ms frecuentes del peroxicam son reacciones gastrointestinales, la incidencia de ulcera pptica es menor al 1% pero normalmente no es necesario retirar el tratamiento; necrosis papilares renales, disminuye la excrecin renal de litio en grado clnicamente importante, interaccin con el periodo motor del parto cefaleas y mareos (Muriel et al. 2007 e Insel, 2001). Coxibs: las reacciones adversas del celecoxib son pocas, destacando por su frecuencia las molestias digestivas que incluyen diarrea, dispepsia y dolor abdominal, una preocupacin adicional de este grupo la constituye la posibilidad de aumento de accidentes tromboemblicos cardiovasculares por inhibicin de la prostaciclina endotelial; las del etoricoxib estn gastroenteritis, dolor abdominal, flatulencia, diarrea, dispepsia, molestias epigstricas como distencin abdominal, reflujo constipacin, sequedad de boca, ulcera gastroduodenal, sndrome de colon irritable, esofagitis, vmitos, perforacin y hemorragias gastrointestinales; infecciones en el tracto respiratorio superior y del tracto urinario son poco frecuentes, la hipersensibilidad al frmaco es muy rara pero puede producir edema facial y prurito; aumento del apetito,
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ganancia de peso, edema o retencin de lquidos; ansiedad, depresin disminucin de la agudeza mental, mareos cefaleas, insomnio, parestesias y somnolencia, visin borrosa; insuficiencia cardiaca congestiva, hipertensin, infarto de miocardio, espasmos o calambres musculares, rigidez (Muriel et al. 2007). Analgsicos centrales de tipo opioide. Los efectos teraputicos del dolor propiciados por los opioides se asocian con efectos secundarios indeseables importantes, algunos de los cuales dan lugar a la morbilidad, dificultando y limitando su utilidad de tratamiento. La mayora de los efectos no deseables suelen presentarse al comienzo del tratamiento, resolvindose en el curso del mismo, a excepcin de la constipacin, que suele persistir todo el tiempo (Muriel et

al. 2007, Montoro, 2003). En lo que corresponde a los opiceos cabe mencionar la
farmacodependencia: existen tres procesos que participan en un grado ms o menos variable. La tolerancia es la disminucin de la eficacia de un opioide ante la administracin repetida o descenso de su efecto por administracin a largo plazo; como relevancia clnica es importante distinguir entre tolerancia a la analgesia y tolerancia a los efectos secundarios. La dependencia fsica se presenta con frecuencia en aquellos que reciben opioides con regularidad. Es una adaptacin fisiolgica del organismo a la presencia de un opioide. Se relaciona con el desarrollo de un sndrome de abstinencia tras la interrupcin sbita del tratamiento con opioides, una reduccin importante de la dosis o la administracin de un frmaco antagonista (Naloxona) o un agonista-antagonista (Buprenorfina); el temor a la interrupcin del tratamiento o la falta de medicamento origina respuesta de ansiedad o comportamiento de bsqueda del frmaco que se conoce como dependencia teraputica. La dependencia psicolgica o adiccin es un fenmeno psicolgico caracterizado por la bsqueda y uso compulsivo de la droga sin motivos mdicos y se manifiesta por un fuerte deseo de consumir drogas para producir efectos psquicos independientes del alivio del dolor (Montoro, 2003 y Muriel et al. 2007). El deterioro de las funciones cognitivas: la sedacin persistente no es frecuente en el paciente que carece de otras causas que predispongan a dicha alteracin. La depresin
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respiratoria varia ostentosamente con la dosis, va de administracin y velocidad de acceso del opioide al SNC, que depende de la liposolubilidad del agente; a dosis altas se pueden producir ritmos anormales y apnea, provocando una reduccin de la sensibilidad del centro respiratorio al CO2, por otra parte, son capaces de deprimir el reflejo de la tos (Muriel et al. 2007). El estreimiento aparece por la actividad antidiarreica que presentan los opiceos se debe a la reduccin de la motilidad y secrecin gastrointestinal, que evidentemente ocasionan estreimiento, se ha observado adems un aumento en la presin de las vas biliares con hipertona del esfnter de Oddi y con frecuencia inducen retencin urinaria. Los efectos cardiovasculares se manifiestan produciendo bradicardia e hipotensin por vasodilatacin, tanto arterial como venosa. Tambin presentan efectos neuroendocrinos que modifican la secrecin hipofisiaria, estimulan la secrecin de la hormona adrenocorticotropa (ACTH), somatostatina, prolactina, hormona estimuladora de los melanocitos tipo (-MSH) y hormona antidiuretica; e inhiben la secrecin de la hormona estimulante de la tiroides (TSH), hormona luteinizante (LH) y la hormona folculo estimulante (FSH). La depresin del sistema inmune es causada por la administracin crnica de opioides, dicha depresin provoca inhibicin de la actividad proliferativa de la clulas progenitoras; alteraciones en la diferenciacin linfocitaria, cambios en la funcionalidad de macrofgos en los cuales se reduce la actividad; quimiotaxis y actividad fagoctica, aumentando la susceptibilidad a las infecciones, reduciendo la capacidad de formar anticuerpos. Otros efectos que se derivan de la ingesta de sustancias opiceas son hipotermia de origen hipotalmico, miosis, hipertona de origen central y vasodilatacin cutnea (Muriel et al. 2007). Dosis teraputicas de morfina son capaces de disminuir la frecuencia respiratoria y pueden llegar a producir respiracin irregular. Sin embargo, dosis altas pueden afectar incluso la regulacin voluntaria de la respiracin, asimismo, se ha observado que la administracin de morfina induce la atrofia del bazo y del timo. (Muriel et al. 2007). La codena de menor potencia analgsica y depresora del SNC no presenta ninguna capacidad de inducir

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farmacodependencia, los efectos secundarios que se manifiestan son nuseas, vmitos, mareos, vrtigo, somnolencia y estreimiento (Montoro, 2003).

1.5 Modelos Experimentales

La investigacin bsica y clnica ha avanzado mucho en los ltimos aos en su intento de conocer a fondo los mecanismos ntimos de la nocicepcin. Esto ha sido posible gracias al empleo de animales como modelos de dolor. Los modelos de dolor agudo y crnico son tiles para el estudio y desarrollo de nuevos tratamientos farmacolgicos (Ortega et al., 2002). En la actualidad, no se pueden conocer las sensaciones dolorosas que experimenta un animal, ya que obviamente no las pueden comunicar, slo podrn ser estudiadas las reacciones de stos ante estmulos nocivos de muy diversa naturaleza como conductas nociceptivas. Es por ello que se adapt la definicin de dolor de la IASP para que pudiera ser aplicada a los animales. As, la nocicepcin en animales es considerado como una experiencia sensorial aversiva causada por una lesin real o potencial que produce reacciones motoras y vegetativas progresivas, desencadena un comportamiento aprendido de evacin y puede modificar comportamientos especficos de la especie, incluyendo los sociales (Ortega et al., 2002).

1.5.1 Modelo de estiramiento abdominal

En cuanto a la estimulacin qumica, sta involucra la administracin de agentes qumicos como el cido actico va intraperitoneal. Este tipo de estmulo marca su diferencia no slo en tiempo, si no porque es uno de los ms apegados al dolor clnico debido al umbral que presentan y tambin a su naturaleza fsica. Este estmulo es conocido como modelo visceral en el cual se realiza la inyeccin intraperitoneal de un agente irritante, prueba conocida como writhing. La administracin intraperitoneal en membranas serosas provoca un

comportamiento muy estereotipado en el ratn, que se caracteriza por contracciones abdominales, movimientos del cuerpo como un todo (en especial de las patas traseras), la torsin de los msculos dorso-abdominales y una reduccin en actividad y coordinacin
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motora. La prueba es a veces llamada respuesta de constriccin abdominal o prueba de estiramiento, en donde se registra la incidencia por unidad de tiempo de las torsiones abdominales que resultan de la inyeccin del agente qumico (Collier et al. 1967 y Le Bars, 2001). Estas conductas se consideran reflejos y son prueba de dolor visceral. El nmero de contracciones o torsiones est sujeto a una gran variabilidad. Las variables que intervienen en este modelo dependen directamente del agente qumico como son la temperatura, concentracin que a su vez determinar los cambios del comportamiento del animal. Esta prueba suelen funcionar no slo para detectar analgsicos dbiles, sino tambin analgsicos para dolor moderado a severo (Le Bars, 2001).

1.6

Yauhtli planta medicinal mexicana

1.6.1 Antecedentes histricos de Tagetes lucida Cav.

Entre las distintas fuentes para el estudio de la herbolaria medicinal prehispnica del centro de Mxico, destacan las que se produjeron en el siglo XVI por el inters particular de la corona espaola, de los misioneros o las autoridades virreinales (Sierra, 2000).

Tagetes lucida

Cav. o yauhtli (De la Garza, 1990; Schultes y Hofmann, 2000 y

Daz,1976), planta originaria de Mxico de uso frecuente y muy antiguo, fue y sigue siendo una de las plantas sagradas ms importantes entre los nahuas. Sus nombres comunes son: pericn, San Miguel, periquillo, flor de Santa Mara, yerba ans, yerba de nubes, amarillo espiritado (en los conjuros pronunciados durante el parto). Pertenece al grupo de plantas de Tlloc, o sea, las plantas sagradas, y tal vez fue la que ocup el sitio principal, pues era una epifana del dios. La planta al fumarse parece tener efectos alucingenos, sin embargo, no se tienen referencias de un uso adivinatorio de ella (De la Garza, 1990). Aunque Schultes y Hofmann (2000) y Daz (1976) mencionan que para provocarse visiones los huicholes fuman una mezcla de Nicotina

rustica y T. lucida la que frecuentemente acompaan con un fermento de maz (tesjuino),

ocasionalmente el yauhtli se fuma solo. Adems al yauhtli se le atribuyen efectos sobre la

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mente, as, sus poderes psicoactivos (si los tiene) parecen producirse mejor cuando se quema o se aspira en forma de polvo; se dice que en la fiesta de Xocotl Uetzi, a los esclavos que se iban a sacrificar quemados, primero les arrojaban polvo de yauhtli en la cara para que perdieran el sentido y no sintieran tanto la muerte; enseguida, los ataban de los tobillos y manos para despus ser arrojados al fuego. La diosa de las yerbas medicinales Teteo Innan est muy directamente asociada con el yauhtli, pues es patrona de las parteras y esta planta tena un gran uso obsttrico. Hay otras especies de Tagetes que utilizan los nahuas, principalmente para curar; ellas son el cempoalxochitl (T. erecta), el macuilxochitl (T. canulata) y el llamado tepecempoaxochitl o cempaschil de cerro; se dice que hay siete variedades de Tagetes que sanan diversos males y excitan el apetito venreo (De la Garza, 1990).

1.6.2 Botnica de Tagetes lucida.

T. lucida pertenece a la familia Asteraceae, tribu Tageteae; la familia comprende plantas que
son herbceas, anuales o perennes, sufruticosas o subarbustos; con hojas alternas u opuestas, casi siempre provistas de glndulas pustulares con compuestos odorferos; flores liguladas por lo general presentes, pistiladas, frtiles, amarillas, anaranjadas, rara vez blancas; flores del disco perfectas, frtiles, usualmente amarillas; ramas del estilo truncadas o con apndices. La tribu,

sensu stricto, comprende unos 20 gneros y unas 260 especies concentradas en las regiones
ms ridas de Amrica, especialmente abundantes en Mxico. El gnero Tagetes ha sido ubicado como parte de Helenieae y de Heliantheae en diversas ocasiones; en el sentido tradicional constituyen un grupo monofiltico. Algunos representantes se han cultivado tradicionalmente como plantas de ornato y de uso ceremonial por sus flores llamativas (Villarreal, 2003). Esta planta es comn en la vegetacin secundaria derivada de bosques de encino, pino y tropicales caducifolios. Se encuentra en una altitud de 800-2700 m. Florece de julio a diciembre. Es una planta herbcea perenne de hasta 1 m de alto, con fuerte olor a ans al estrujarse; tallos erectos, varios desde la base, poco ramificados, la ramificacin ascendente,
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glabros a puberulentos; hojas opuestas, simples, ssiles, elpticas a lanceoladas, de 4 a 10 cm de largo y 0.5 a 2 cm de ancho, pice agudo a obtuso, base atenuada,margen serrulado, con abundantes glndulas diminutas; cabezuelas agrupadas en cimas corimbosas, congestas, terminales, en pednculos de 10 a 20 mm de largo, con un par de brcteas en la base, similares a las hojas pero ms pequeas; involucros cilndricos a fusiformes, de 7 a 10 mm de largo y 1.5 a 3 mm de grueso, brcteas 5 a 8, connadas color verde a prpura, con abundantes glndulas diminutas; flores liguladas, usualmente 3, limbo orbicular, de 3 a 5 mm de largo y 4 a 8 mm de ancho, amarillo claro a amarillo-anaranjado; flores del disco 5 a 8, tubulares a infundibuliformes, 6 a 7 mm largo, amarillas; anteras verdosas; aquenios lineares, 5 a 6 mm largo, estriados; vilano 2 a 6 escamas 1 a 2 mm largo con 2 aristas, 3 a 6 mm de largo (Villarreal, 2003) (Figura 3).

Figura 3. Tagetes lucida Cav. A. rama con cabezuelas; B. cabezuela; C. flor del disco; D. anteras; E. aquenio. Tomada de Villareal, 2003.

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1.6.3 Usos medicinales de Tagetes lucida Cav.

Los usos medicinales de Tagetes lucida se han valorado mediante diferentes preparaciones. En t se recomienda contra diarrea, disentera, empacho, vmito, reumatismo, asma, tifoidea, varices y resfriado; se usa tambin como antihelmntico, abortivo, emenagogo y carminativo (Guadarrama et al., 2008). Adems, se ha detectado actividad antibitica contra Salmonella

pyogenes y Candida albicans, lo anterior indica que la planta es efectiva cuando se utiliza en
procesos infecciosos que involucran a estos organismos (Vibrans, 2009). En infusin, es diurtica, estimula la menstruacin, provoca aborto, favorece el parto, quita el dolor de cabeza, combate los venenos, sana diarreas, empacho y lceras, deshace tumores, mezclada con cacao y estafiate cura la tos, el frio y sana a los que escupen sangre y tienen calentura (Guadarrama et al., 2008 y Vibrans, 2009). Los mazahuas de San Felipe del progreso, Estado de Mxico, la ocupan en el tratamiento que se le da a la madre despus del parto: hierven las flores y las hojas para hacer un t que le dan de beber a la embarazada; para calentarle el cuerpo hierven la planta y la mezclan con alcohol y le hacen vaporizaciones en la vagina. Cuando se queda la placenta, el t lo preparan con pericn y altamiza y para los entuertos se mezcla con otras hierbas. El espanto se cura tomndolo en t y se dan baos con el cocimiento elaborado junto con chilillo, abrojo y epazote. A los nios espantados se les da a cucharadas durante nueve das. Para aliviar el empacho se hierven las flores de pericn con la raz de la hierba de San Nicols. (Sierra, 2000). Adems de sus usos medicinales, el humo de la planta al quemarse se usa para ahuyentar mosquitos, es decir como insecticida, en ceremonias, para condimentar bebidas y licores. Entre sus diversas virtudes curativas se emplea como incienso mezclada con copal. (Biblioteca digital de la Medicina Tradicional Mexicana, 2009).

1.6.3.1 Tagetes lucida Cav. en el alivio del dolor.

El gnero Tagetes puede producir dermatitis atpica por contacto, popularmente se considera como una planta abortiva, no se dispone de informacin que documente su seguridad en nios o durante el embarazo o la lactancia (Germosn-Robineu, 2007).
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1.6.4 Estudios qumicos y farmacolgicos

En aos recientes muchas especies del gnero han sido reevaluadas como fuentes de metabolitos secundarios biolgicamente activos de diferentes tipos, que pueden ser usados en la industria y la medicina; cada tipo de dichos compuestos es acumulado predominantemente en rganos especficos de la planta. Los componentes del aceite esencial con propiedades antimicrobianas e insecticidas, as como de los flavonoides que actan como antioxidantes son preferiblemente sintetizados en las flores y las hojas. Los carotenoides, principalmente lutena y steres de lutena, usados en preparaciones farmacolgicas, como colorantes y aditivos de alimentos, adems de ser conocidos por sus efectos de anti-envejecimiento y anti-cancergeno, se encuentran slo en los ptalos de las flores. Los tiofenos, compuestos sulfuro poliacetilnicos, poseen una fuerte actividad antimicrobiana, son principalmente acumulados en las races. Se indica que los tiofenos poseen propiedades alelopticas, insecticidas, nematicidas, antimicticas, germicidas y citotxicas; adems, han resultado ser tiles como marcadores quimiotaxonmicos (Marotti et al., 2010). Los estudios fitoqumicos han revelado que T. lucida contiene cumarinas, lactonas y terpenos, aceite esencial en el que slo se ha identificado un componente mayoritario denominado estragol, entre los flavonoides, particularmente se mencionan los glucsidos de quercetina, quercetagritn, tagetona, tagetina y canferol, taninos, pectina y gomas (Cambar et al., 1984). En la raz se ha detectado un compuesto sulfurado, el 5-(3- buten-1-inil)-2,2'-bitienil (BBT) y en la semilla se indica la presencia de un alcaloide no identificado. (Biblioteca Digital de la Medicina Mexicana, 2009). Un trabajo presentado en el XIII Congreso Nacional de Biotecnologa y Bioingeniera y VII Simposio Internacional de Produccin de Alcoholes y Levaduras que se realizo del 21 al 26 de junio del ao 2009 en Acapulco, Guerrero. El cartel que se present en el rea de Biotecnologa Agrcola y Vegetal menciona que los metabolitos como terpenos, cumarinas y flavonoides se encuentran en extractos crudos de T. lucida independientemente del lugar en donde se colecte; pero principalmente muestra que por la fluorescencia presentada en los

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ensayos de cromatografas de capa fina hechas a los extractos crudos los compuestos presentes en la especie corresponden a flavonoides (254 nm, color azul oscuro; 365 nm, amarilla, azul o verde), terpenoides (manchas oscuras por causa del revelador Liebermann-Burchard) y cumarinas (365 nm, azul, marrn, o azul-verdosa intensa) (Bez, et al. 2009) Oranday et al. (2008) mencionan que los productos hechos a partir de extractos de plantas tienen un gran potencial para ser utilizados en mtodos alternativos para el control de mosquitos. Algunos de los extractos ms activos son los realizados con derivados de las plantas del gnero Tagetes, estos extractos con actividad insecticida son derivados de Tagetes patula, T.

erecta y T. minuta. Los cuales adems poseen actividad antibacterial y larvicida contra el
tercer estadio de la larva de Aedes aegypti y Anopheles stephensi. Oranday et al. (2008) purificaron un compuesto con actividad larvicida de Tagetes lucida a partir de un extracto hexnico que presento un Rf de 0.62 y al analizarlo con cromatografa de gases acoplada de espectroscopia de masa el compuesto obtuvo un tiempo de retencin de de 11.6 minutos adems dio positivo en el test de 2,4-dinitrofenilhidrazina (2,4-DNPH) el compuesto resulto ser la 7-metoxicumarina (herniarina). Se sabe que las hidroxicumarinas son producidas por las plantas para protegerse de los insectos y estn involucradas en la resistencia de las plantas ante enfermedades provocadas por hongos (Septoria, Alternaria o Cercospora), plagas (caros:

Steneotarsonemus pallidus) o virus (Oranday et al., 2008). Especficamente la cumarina 7, 8dihidroxicumarina es activa contra las bacterias gran positivas y negativas utilizadas en el ensayo realizado por Cspedes et al. (2006). Tiofenos naturales que comnmente contienen 12 tomos de carbono son metabolitos secundarios caractersticos del gnero Tagetes (Figura 4). Los tiofenos naturales son compuestos poliacetilnicos biolgicamente activos cuya actividad es incrementada por la irradiacin con luz ultravioleta de onda larga (UV-A, 320-400 nm) (Margl et al. 2002), poseen una fuerte actividad antiviral, antimicrobial, antimictica, nematicida e insecticida bajo irradiacin, mientras que su toxicidad es reducida en la oscuridad. Esto convierte a las plantas del gnero Tagetes en fuentes de productos naturales muy tiles para suprimir las poblaciones
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de nemtodos del suelo y de recursos para la fabricacin de pesticidas naturales (Margl et al. 2002 y Marotti et al., 2010). Se sabe de cuatro tiofenos presentes en abundancia en el gnero

Tagetes, estos son: 5-(3-buten-1-inil)-2,2-bitienil (BBT), 5-(4-hidroxi-1-butinil)-2,2-bitienil

(BBTOH), 5-(4-acetoxi-1-butinil)-2,2-bitienil (BBTOAc) y 2,2,5,2-tertienil -tertienilo (-T). Las concentraciones en la planta varan de acuerdo a la especie, el estado de desarrollo, rgano vegetativo y distribucin de las cavidades secretoras, sin embargo el sitio de mayor concentracin de tiofenos es en la raz. El gran espectro de eficiencia de los tiofenos como agentes antimicrobianos y su capacidad biodegradable, los hace muy atractivos como alternativa del uso de pesticidas qumicos (Margl et al. 2002 y Marotti et al., 2010). El tertienilo es un cristal amarillo, peso molecular 248, punto de fusin 93-94 C, soluble en ter, acetona y etanol, insoluble en agua; presenta actividad antimicrobiana. El -tertienilo puede ser fototxico en presencia de luz ultravioleta cercana y producir una fotodermatitis por un mecanismo que no depende de la peroxidacin lipdica de la membrana (Santa Cruz, 2005).

Figura 4. Tiofenos ms comunes del genero Tagetes (Margl et al. 2002)

Al realizar el extracto con dietilter se identific metil chavicol (estragol) y metil eugenol entre los principales cuatro componentes detectados por medio de la Cromatografa de Gases (CG), adems de detectar alinol (Guzman y Manjarrez, 1962). En un estudio comparativo del anlisis por Cromatografa de Gases acoplada a Espectrometra de Masas (CGEM) del aceite esencial de varias especies de Tagetes mencionan que la hoja y la flor contienen
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limoneno (16.5%), -ocimeno (14%), -cariofileno (28%), mirceno (4-5%), tagetona, dihidrotagetona, tetrahidrotagetona, estragol, metil eugenol, linalool, alil-anisol y anetol (Hthlyi et al. 1986). El aceite esencial obtenido por hidrodestilacin de las partes areas de Tagetes lucida analizado por medio de CG con dos fases estacionarias distintas (OV-1 y CW-20M) y CG-EM con varias tcnicas de ionizacin (EI, PICI, NICI) permitiern identificar 53 compuestos, de los cuales los principales fueron anetol (23.8%), metil-eugenol (24.3%) y estragol (33.9%) (Bicchi et

al., 1997). stos datos coinciden con el trabajo de Cicci (2004) y Amner et al. (2007) en el que
se describe al metil chavicol (estragol 95-97%) como el principal constituyente de dicho aceite y en cantidades menores a los monoterpenos -mirceno, (E)--ocimeno y linalool, la cantidad de hidrocarburos sesquiterpnicos fue slo del 1-2%. -cariofileno, (E)--farnesina, germacreneD y (E,E)--farnesina son los que ms abundan (Cicci, 2004). El estragol es un compuesto ampliamente utilizado como saborizante y aromatizante en la industria de alimentos y bebidas alcohlicas; admas se utiliza en perfumes, jabones, detergentes y como percusores en sntesis orgnica para formulaciones farmacuticas. Este compuesto presenta varias actividades biolgicas como insecticida, bactericida, antiinflamatoria y anestsica. El estragol es reconocido como sustancia segura (GRAS) por sus siglas en ingles y aprobado para su uso en alimentos bajo las secciones 201(s) y 409 de la ley federal de alimentos, medicamentos y cosmticos (FD&C Act) de los Estados Unidos de Norteamrica; sin embargo, se ha demostrado que el estragol y sus metabolitos han mostrado ser genotxicos y producir tumores hepticos en experimentos con animales, debido a esto su empleo est limitado (Amner et al. 2007). El anetol es el componente principal del aceite esencial del ans ( Pimpinella anisum) ya que contiene de un 80-90% de dicho compuesto, tambin es un componente del aceite esencial de

T. lucida (23.8%) (Bicchi et al., 1997). El anetol es un agente saporfero con propiedades
carminativas, por lo que se usa para paliar los problemas de aerofagia y flatulencia en los lactantes (Madurga, 2002). Otras propiedades farmacolgicas son accin estrognica, accin depresora del SNC, potente actividad antimicrobiana, insecticida, antiinflamatoria y anestsica
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(Romero et al. 2007). Si bien la planta de ans es ampliamente admitida para consumo alimentario, existe la posibilidad remota de intoxicacin por su contenido en anetol, en el mbito toxicolgico, concentraciones altas de anetol inducen convulsiones en animales, por lo tanto soluciones altamente concentradas de anetol pueden explicar casos de intoxicacin, principalmente en lactantes. Se han comunicado casos de convulsiones, vmitos y edema pulmonar por ingestin de la esencia de ans en dosis de 1 ml; por lo que se recomienda evitar un cocimiento prolongado en lugar de una simple infusin (Madurga, 2002). El anetol es un compuesto qumico precursor de la para-metoxi-anfetamina (PMA), compuesto conocido con el nombre de xtasis. Por su alto contenido de anetol y estragol en los aceites esenciales de yauhtli y ans, se considera neurotxico; tambin puede originar hepatotoxicidad, incluyendo insuficiencia heptica, dermatitis de contacto e hipersensibilidad (Mattos, et al. 2007). Cspedes et al. (2006) demostr la actividad antimictica y antibacterial en extractos de diclorometano y metanol de las partes areas de Tagetes lucida, de los cuales se aislaron 7 cumarinas: 7,8-dihidroxicumarina, umbeliferona (7-hidroxicumarina), escoparona (6,7-

dimetoxicumarina), esculetina (6,7-dihidroxicumarina), 6-hidroxi-7-metoxicumarina, herniaria (7-metoxicumarina), y escopoletina (6-metoxi-7-hidroxicumarina), as como tres flavonoides, patuletina, quercetina, quercetagetina. El compuesto ms activo contra bacterias gram positivas y gram negativas fue la 7,8-dihidroxicumarina, adems de tener actividad contra Vibrio

cholerae, otros compuestos que presentaron actividad en contra de esta bacteria fueron la
escoparona (6,7-dimetoxicumarina) y la esculetina (6,7-dihidroxicumarina), la escoparona mostro una fuerte actividad contra algunas cepas de hongos en especial

Trichophyton

mentagrophytes y Rhizoctonia solani (Cspedes et al., 2006). Salgado et al. (2007) indican que
los metabolitos ecopoletina, y umbeliferona tambin son activos contra los organismos

Escherichia coli y Proteus mirabilis, demas de los reportados por Cspedes et al., (2006). El
anlisis del efecto antifngico y antibacterial del extracto etanlico de T. lucida mediante el mtodo de antibiograma realizado por Ortiz (2009) indica que el extracto presenta efecto antibacterial en contra de las especies Pseudomanas marginalis (H1), Pseudomanas marginalis
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(Ls-1), Erwinia carotovora (4P) y Erwinia carotovora (Ls-N6SS5). En los extractos metanlicos de hojas e inflorescencias por separado y fraccionados con una particin 1:1 (metanol-hexano) realizados por Olvera (2007) indican que en su mayora, la parte area de la planta est compuesta principalmente por compuestos polares. A partir de los extractos metanlicos Olvera (2007) logro aislar dos metabolitos secundarios de los cuales solo consigui determinar la estructura qumica de uno de ellos, siendo este la herniarina (7-metoxicumarina), la cual describe como cristales finos en forma de agujas de color blanco, con un punto de fusin de 115-119 C, ante la luz ultra violeta (= 366 nm) en las placas cromatogrficas se observa como una mancha azul intensa. La descripcin de Santa Cruz (2005) es de un cristal blanco-amarillo de un peso molecular 176. De los extractos metanlicos de hojas se reporta actividad antimicrobiana en contra de dos cepas de Vibrio cholerae, Yersinia enterocolitica y Candida

albicans, mientras que el extracto de inflorescencias presento efecto contra cuatro cepas de Vibrio cholerae, Yersinia enterocolitica, Sarcina lutea, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis y Candida albicans; en ambos casos se observa que las bacteria Gram-negativas son las ms
sensibles. El efecto antimicrobiano de la herniarina demostr ser efectivo ante cuatro cepas de

V. cholerae. En cuanto a la actividad antifngica de los extractos metanlicos de hojas e

inflorescencias y la herniarina muestran que los dos extractos y el compuesto aislado nicamente provocan inhibicin del crecimiento de la hifa en la especie Aspergillus niger, una de cinco especies utilizadas en los bioensayos. (Olvera, 2007). El extracto de acetato de etilo de las hojas de T. lucida a resultado ser efectivo en la disminucin de germinacin de esporas de los hongos Colletotricum lindemuthianum, Mucor

circinelloides, Candida albicans y Sporothrix shcenckii mientras que el extracto de cloroformoetanol de hoja no inhibe la germinacin de esporas de hongos filamentosos (Damin-Badillo, 2008). La maceracin etanlica de hojas y flores secas (1:1), 50 L fue activo in vitro frente a

Escherechia coli, Shigella dysenteriae, S. flexneri, Salmonella typhi y Streptococcus pyogenes.

El extracto acuoso de flor seca fue activo contra Escherechia coli enteropatogena, Salmonella

enteriditis, S. typhi, Shigella dysenteriae, S. flexneri, S. pneumoniae y S. pyogenes. La

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maceracin hidroalcohlica de hoja y flor 1-2 mg/disco, inhibi el crecimiento de Candida

albicans, C. krusei, C. parapsilosis y C. stellatoidea (Germosn-Robineu, 2007).

Las cumarinas naturales producen efectos variados y pronunciados en los organismos vivos; exhiben numerosas actividades farmacolgicas y fisiolgicas, tales como antibacterial, antioxidante, anti-inflamatoria, antiagregante plaquetario, antimicrobiana, espasmdica, anti HIV-1, vaso dilatador y diurtico (Malik et al. 2011 y Olvera, 2007). La herniarina, adems de poseer actividad antimicrobiana presenta actividad espasmoltica, diurtica y antiinflamatoria. Popularmente se le atribuyen propiedades abortivas (Santa Cruz, 2005). A la patuletina se le atribuye actividad antiespasmdica (Germosn-Robineu, 2007). La DL50 de los extractos preparados con solventes de diferente polaridad de hojas y flor secas con actividad espasmoltica in vitro, frente a espasmo por acetilcolina, administrados por va oral, fue superior a 100 mg/kg de peso (Santa Cruz, 2005 y Germosn-Robineu, 2007). Los extractos hidroalcohlicos de flor y hoja aplicados sobre yeyuno de conejo in vitro (3.2 y 6.4 mg/ml) redujeron la amplitud y las frecuencias de las contracciones intestinales inducidas por serotonina. La infusin de hoja (500 mg/ml) fue antiespasmdica in vitro sobre leon de rata e

in vivo a 20 g/kg (Germosn-Robineu, 2007). La escopoletina est ampliamente distribuida en

el reino animal, es un compuesto nutracutico del que se ha reportado que posee propiedades teraputicas contra la diabetes mellitus, diarrea y cncer (Malik et al. 2011). Las propiedades teraputicas contra la diabetes mellitus han sido estudiadas por Lee et al. (2010), el cual menciona que la escopoletina aislada de los brotes de la flores de Magnolia fargessii inhibe la unin de glucosa a las protenas (Glicacin), interviene en el mecanismo de la aldosa reductasa y la cataractognesis ex vivo. Puesto que la glicacin avanzada es uno de los potenciales mecanismos que produce la hiperglicemia que es causante del dao tisular, la acumulacin de sus productos finales est asociada a la diabetes debido que juega un rol importante en la patognesis de las complicaciones diabticas y del envejecimiento tales como retinopata, neuropata, nefropata, formacin de cataratas y enfermedades vasculares. La escopoletina ha sido aislada de muchas plantas y se han demostrado varios efectos farmacolgicos que posee,
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tales como antiinflamatorio, antioxidante, inhibidor de la acetilcolinesterasa, antitiroideo, antihiperglicemico, adems de actividad sobre la lipoprotein lipasa (Lee et al. 2010). El efecto antiartrtico en ratas con artritis adyuvante inducida realizado por Pan et al. (2009) se ha estudiado por medio de la estimacin de la inflamacin de las patas, patologa y angiognesis sinovial. En el estudio se reporta que la escopoletina inyectada intraperitonealmente a dosis de 50 y 100 mg/kg reduce la inflamacin de las patas de los roedores, adems de mostrar una arquitectura histolgica de las articulaciones cercana a las normales, reduccin de la formacin de vasos sanguneos en los tejidos sinoviales y la produccin de importantes inductores angiognicos endgenos. Se ha indicado que el t produce un fuerte efecto diurtico (Guadarrama et al., 2008 y Vibrans, 2009). Los glucsidos de las flavonas son sustancias con propiedades diurticas, por lo que es muy probable que la quercetagritina sea la responsable del efecto diurtico para un extracto acuoso de esta planta (Sierra, 2000). Todas las especies del gnero Tagetes estudiadas hasta la fecha se caracterizan por la presencia de 6-metoxi y/o 6-hidroxi aglucones de flavona. En el anlisis de un extracto metanlico sometido a hidrlisis para despus identificar el contenido de flavonoides demostr que las partes areas de T. lucida poseen patuletina, isorramnetin, quercetagetina 3-O-arabinosil galactsida e isorramnetina 7-O-glucsido

(Abdala, 1998). Se ha reportado que las flavonas tienen diferentes efectos biolgicos tales como la actividad antibitica, lo cual concuerda con el estudio realizado por Hernndez et al. (2006) en el que se ha reportado que la 5,7,4-trimetoxiflavona presento gran actividad antimicrobial frente a 11 cepas de bacterias y una levadura, adems menciona que las flavonas pueden inhibir la sntesis del material gentico de las bacterias para mediar la actividad antibitica. Las tinturas son preparaciones lquidas, por lo general obtenidas por extraccin de materia vegetal con alcohol o mezclas hidroalcohlicas, luego de la evaluacin de las caractersticas microbiolgicas hechas a una tintura vegetal comercializada con propiedad antibacteriana a partir de Gnaphalium stramineum HBK (flores), Plantago major L. (hojas),

Psidium guajava L. (hojas) y Tagetes lucida Cav. (hojas y flores), en solucin alcohlica al 35%,
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se determino la parecencia de cumarinas y flavonoides; los compuestos flavonoides quercetnicos como la guayaberina presentes en P. guajava, los glicosidos flavonoides de G.

stramineum, las cumarinas de P. major , el tertienilo y herniarina de T. lucida le confieren a

la tintura la actividad antibacteriana; adems, los lotes de tintura antibacteriana analizados mantienen la presencia de sus metabolitos activos luego de 180 das de almacenamiento en condiciones extremas de temperatura. (Flores, 2008). La infusin de hoja y flor (1 g/kg) fue inactiva como antiinflamatoria en un modelo de edema de pata de rata inducido por carragenina (Germosn-Robineu, 2007). El extracto etanlico acuoso de las hojas y semillas de Tagetes lucida ejerce un efecto hipotensor en perros por va intravenosa, a una dosis de 5 mg/kg. (Biblioteca Digital de la Medicina Mexicana, 2009). La infusin de hoja (1-5 g/kg) administrada por va oral a rata no induce signos evidentes de toxicidad gstrica ni sangrado digestivo. (Germosn-Robineu, 2007). El extracto alcohlico provoca en algunas personas sntomas cardiovasculares. (Santa Cruz, 2005). De acuerdo con De la cruz (2005) el extracto alcohlico de hojas tiene accin depresora del SNC y actividad hipotensora, pero no tiene actividad inhibidora del apetito, antiaterognica, diurtica, ni antiinflamatoria. Aunque Olvera (2007) indica que las propiedades, tales como analgsico, anticonvulsivante, relajante muscular, prevencin del cncer, fungicidas, insecticidas, estimulante de la regeneracin del hgado son mostrados por el metil-chavicol y el eugenol aislados de esta planta. La DE50 (dosis efectiva al 50%) es de 1.88 g/ml para el extracto

bencnico pero los extractos con mayor potencia son obtenidos con hexano (De la Cruz, 2005). Estudios preliminares indican que la decoccin de hojas tiene cierta actividad

inmunomoduladora en ratones medida por un aumento en la poblacin de linfocitos y en los ttulos de anticuerpos sricos, estos datos no han sido confirmados en estudios posteriores (Olvera, 2007). La planta produce efectos anticolinrgicos, este tipo de frmacos ocasionan un cuadro que semeja el delirio febril, no precisamente fiebre (Daz, 1976). La capacidad antioxidante de los vegetales se debe a las vitaminas, carotenoides, esteroles y principalmente polifenoles; los cuales tienen la capacidad de reducir la formacin
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de radicales libres ya sea por la quelacin de elementos trazas o removiendo los radicales libres y protegiendo las defensas antioxidantes (Aquino et al., 2002). Los compuestos antioxidantes pueden ser usados en la preservacin de alimentos, con propsitos medicinales y cosmticos (Amner et al. 2007). En un estudio in vitro realizado por Aquino et al. (2002) se demostr el efecto antioxidante de un extracto metanlico con una particin en agua y n-butanol (n-BuOH) de las hojas de Tagetes lucida empleando la prueba de DPPH (radical 1,1-diphenyl-2picrylhydrazyl). El anlisis del extracto de n-BuOH dio como resultado el aislamiento de un nuevo glicsido de flavonol, la quercetagenina 3,4-dimetil ter 7-O--D-glucopiranosida, dos nuevos cidos fenlicos, el cido propanoico 3-(2-O--D-glucopiranosil-4-metoxifenil) y el metilester del mismo. El contenido fenlico total del extracto de n-BuOH se determin por el mtodo de Folin-Ciocalteau y se expres como equivalentes de cido cafeico, el contenido fenlico total del extracto fue igual a 279.3 g/mg. En la prueba de DPPH, el efecto antioxidante mostro ser dosis dependiente con una CE50 (mxima concentracin efectiva al 50%) de 6.4 g con respecto al -tocoferol (CE50 10.1 g/mg) usado como control positivo. La fraccin menos activa del extracto de n-butanol mostr un contenido fenlico total de (23.9 g/mg) y en la prueba de DPPH una de CE50 =170.7 g, mientras que las otras tres fracciones mostraron valores de CE50 comparables al extracto principal asi como altos niveles de fenoles totales. De los constituyentes responsables de la actividad antioxidante se identificaron quercetagenina 3,4-dimetil ter 7-O--D-glucopiranosida, quercetagenina 7-O--D-

glucopiranosida, quercetagenina 3-metil ter 7-O--D-glucopiranosida, 6-hidroxicanferol-7-O-D-glucopiranosida, quercetagenina 3,3-dimetil ter. cido cafeico, 6-O-cafeoil--D-

glucopiranosida, cido benzoico 4-(-D-glucopiranosiloxi) y cido glico en pequeas cantidades (Aquino, 2002). La fraccin menos activa di dos nuevos glucsidos

fenilpropanoides: el cido propanoico 3-(2-O--D-glucopiranosil-4-metoxifenil) y metil 3-(2-O-D-glucopiranosil-4-metoxifenil) propanoato, adems de 7-metoxicoumarina (herniarina) (Aquino, 2002). Actualmente, el inters de encontrar antioxidantes de fuentes naturales se ha incrementado considerablemente, tanto para uso en frmacos medicinales, como para
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reemplazar antioxidantes sintticos, los cuales estn cada dia mas restringidos por sus posibles efectos cancergenos (Amner et al. 2007). En el trabajo de Amner et al. (2007) se determino la capacidad antioxidante de los aceites esenciales de especies con alto contenido en trans-anetol y estragol comparndolas con aditivos comunes para alimentos como el Trolox

butilhidroxitolueno (BHT), butilhidroxianisol (BHA) y -tocoferol. La actividad antioxidante de extractos hechos a las hojas y flores de T. lucida por hidrodestilacin asistida por la radiacin de microondas (MWHD) y destilacin con vapor-extraccin con solvente (SDE) CH2Cl2 se determin utilizando el ensayo de decoloracin del catin-radical ABTS+ mediante

espectroscopia ultravioleta-visible (VIS) a 234 nm. La actividad antioxidante total (TAA) fue de 3.68 y 3.8 ( ) del aceite esencial de flores y hojas

respectivamente. La capacidad antioxidante en comparacin con la de BHA, BHT y -tocoferol, fue relativamente baja, lo que se tribuye a la ausencia de fenoles o sustancias capaces de donar hidrogeno. Los resultados de un estudio in vitro de las propiedades antioxidantes de la escopoletina (Figura 5) realizado por Malik et al. (2011) demostr que dicha cumarina, que tambin se encuentra presente en T. lucida, puede desempear un rol importante en la regulacin de radicales libres ya que sus resultados demuestran las propiedades de la

escopoletina para donar electrones que neutralizan a los radicales libres y forman compuestos estables.

Figura 5. Comparacin de la capacidad antioxidante de la escopoletina frente el -tocoferol en diferentes ensayos in vitro (Malik et al. 2011)

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Dentro del gnero, Tagetes lucida es una de las plantas medicinales ms frecuentemente mencionadas. Esta especie ha sido investigada por sus propiedades como sedante, enterobactericidas y para el tratamiento de enfermedades respiratorias (Oranday et al., 2008). A pesar de que se usa en la medicina tradicional mexicana por sus propiedades en el tratamiento de diferentes enfermedades del sistema nervioso central (SNC), como la depresin; la informacin cientfica disponible acerca de estas propiedades de la especie es escasa. El efecto antidepresivo, as como sus potenciales efectos adversos en la conducta sexual

masculina se evalu y estudi en ratas usando la prueba de nado forzado, la actividad motora se prob en el modelo de campo abierto y en la conducta sexual masculina en la experiencia sexual del macho. El extracto acuoso (10, 50, 100 mg/(kg/da) administrado oralmente por 14 das consecutivos y evaluado 2 h despus de la ultima ingesta, redujo significativamente la inmovilidad e incremento el nado sin afectar la conducta de escalar. Las mismas dosis no fueron capaces de modificar la actividad motora o la conducta sexual masculina (Guadarrama

et al., 2008). Cambar et al. (1984) evaluaron los posibles efectos neurofarmacolgicos de Tagetes lucida en ratones albinos en dosis de 10, 20 y 40 mg/kg de extracto acuoso que
produjeron hipotensin y taquipnea y a dosis de 160 mg/kg se observ bradicardia y braclipnea; adems de la reduccin en el tiempo de anestesia producido por pentobarbital sdico. De acuerdo con sus resultados, en el ensayo neurofarmacolgico de Irwin no se observ ninguna diferencia notable entre los ratones tratados con el extracto acuoso de T. lucida en relacin con el grupo testigo (Cambar et al., 1984). De 1983 a 1985 el programa de salud del Instituto Mexicano del Seguro Social (IMSS) en unin con la Coordinacin General del Plan Nacional de Zonas Deprimidas y Grupos Marginados (COPLAMAR), realizaron una investigacin a nivel nacional, en dicha investigacin se contiene informacin de la flora ms comnmente empleada en la medicina tradicional mexicana; en una revisin etnobotnica realizada por Tortoriello y Romero (1992) se eligieron y analizaron principalmente las plantas utilizadas en el tratamiento de desordenes mentales, seleccionando las especies botnicas ms frecuentemente usadas como sedantes, anticonvulsivas e hipnticas. De la informacin
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proporcionada por los curanderos locales se obtuvo que partes de la planta son empleadas as como la va de administracin y preparacin de los remedios, que en todos los casos resulto ser por administracin oral e infusiones respectivamente. As, en la revisin etnobotnica de Tortoriello y Romero (1992) indican que para T. lucida o pericn las partes que se utilizan son las hojas y tallo principalmente, adems, se le atribuyen propiedades anticonvulsivas, sedantes e hipnticas. En una revisin hecha por Adams et al. (2007) se realiz una recopilacin literatura relacionada con la medicina herbolaria tradicional de numerosas plantas que han sido usadas para el tratamiento enfermedades cognitivas relacionadas con la edad avanzada, se menciona que el yauhtli tiene un uso tradicional para el tratamiento del miedo y la demencia.

II.

Planteamiento del problema

En la ltima dcada se ha incluido en la farmacopea de los Estados Unidos de Amrica un nmero considerable de frmacos analgsicos para el control del dolor agudo. A pesar de esto, 76% de los pacientes sometidos a un procedimiento quirrgico efectivo abdominal u ortopdico reporta dolor moderado o severo en el post-operatorio, lo cual sugiere que adems de la disponibilidad de frmacos potentes y variados se requiere atender las diversas variables que participan en la eleccin de los mismos con alternativas novedosas que procuren la eficacia del tratamiento con el mnimo de efectos adversos. La herbolaria es una de las aplicaciones teraputicas entre la poblacin utilizada para diferentes patologas, entre ellas el dolor. Sin embargo, pocos estudios cientficos corroboran cuales plantas medicinales son realmente eficaces y seguras para ello. Tal es el caso de Tagetes

lucida, yauhtli, una planta medicinal que en la literatura cientfica se describe que desde los
antiguos nahuas hasta la actualidad se usa para el tratamiento de diferentes padecimientos, entre ellos el dolor abdominal. Por lo tanto, en el presente proyecto se propone realizar la evaluacin de la actividad antinociceptiva de esta especie en un modelo de dolor visceral y de algunos efectos secundarios en diferentes modelos de sedacin y dao gstrico en roedores con

36

la finalidad de dar evidencia cientfica de las propiedades que se le atribuyen a esta planta en la medicina tradicional.

III.

Hiptesis

Si extractos polares de Tagetes lucida Cav. se utilizan para tratar el dolor abdominal, entonces la administracin del extracto etanlico de esta especie reducir la nocicepcin inducida en un modelo de dolor visceral en ratones.

IV.

Objetivo General

Evaluar la actividad antinociceptiva y efectos secundarios del extracto etanlico de las partes areas de Tagetes lucida Cav. con modelos experimentales en roedores.

4.1. Objetivos particulares

1. 2.

Preparar el extracto etanlico de las partes areas de Tagetes lucida Cav. Evaluar la actividad antinociceptiva del extracto en un modelo de nocicepcin inducida con cido actico al 1% en ratones.

3.

Determinar la ventana de actividad teraputica y la dosis efectiva cincuenta (DE50) del extracto etanlico de T. lucida en la nocicepcin de tipo visceral en ratones

4.

Comparar el efecto del extracto de T. lucida con el de un frmaco antinociceptivo de referencia en ratones.

5.

Evaluar la presencia de posibles efectos adversos y/o secundarios, as como determinar la dosis letal cincuenta (DL50) del extracto etanlico de T. lucida en roedores.

6.

Determinar el ndice teraputico (margen de seguridad) del extracto etanlico de T. lucida.

37

V. Metodologa
El trabajo experimental de este trabajo se realiz en el Laboratorio de Neurofarmacologa de Productos Naturales del Instituto Nacional de Psiquiatra Ramn de la Fuente Muiz.

5.1. Material vegetal

Las partes areas de Tagetes Lucida Cav. se compraron en mercados de la Ciudad de Mxico, la identificacin taxonmica se realiz en el herbario del Instituto Mexicano del Seguro Social bajo la direccin de la M. en C. Abigail Aguilar con No. de registro de IMSS-M15717 del Herbario del Instituto Mexicano del Seguro Social Mxico.

5.2. Obtencin del extracto

Las partes areas de Tagetes lucida secas y trituradas se colocaron en un recipiente para su maceracin a temperatura ambiente en etanol absoluto durante 72 horas por tres veces. El extracto se filtr por gravedad para posteriormente ser concentrado en el evaporador rotatorio hasta la eliminacin completa del disolvente. El rendimiento del extracto se calcul en base al peso seco de la muestra vegetal (Ver diagrama 1).

Diagrama 1. Desarrollo en el proceso de obtencin del extracto etanlico de T. lucida

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5.3. Preparacin del extracto y los frmacos

El extracto crudo se re-suspendi en tween 80 al 0.2 % en solucin salina al 0.9%. El frmaco de referencia se preparar a partir de una sal de Ketorolaco que se disolvi en agua destilada. El cido actico glacial se diluy al 1% con solucin salina al 0.9%. Las soluciones se

administraron va intraperitoneal en un volumen de 10 ml/kg de peso corporal.

5.4. Material biolgico

Ratones macho CD1 (30 a 35 g) y ratas macho Wistar de 200-205 g de peso corporal se utilizaron mantenidos a temperatura controlada de 22 2 C con ciclo luz/oscuridad de 12 horas con libre acceso al alimento y agua (ad libitum). Todo el protocolo experimental sigui las recomendaciones del Comit de Investigacin tica de la Asociacin Internacional para el Estudio del Dolor, los Lineamientos y Estndares ticos para la Investigacin del Dolor Experimental en Animales, as como de las recomendaciones del Comit de tica del Instituto Nacional de Psiquiatra Ramn de la Fuente.

5.5. Grupos experimentales

Para la evaluacin del efecto antinociceptivo se utiliz el modelo de estiramiento abdominal el cual fue inducido en grupos de al menos 6 ratones. El grupo control recibi el vehculo, mientras que los grupos experimentales recibieron dosis de 3, 10, 30, 100, y 300 mg/Kg del extracto. El frmaco de referencia Ketorolaco se prob en 1 mg/kg, i.p. Treinta minutos despus de la administracin de los tratamientos se induj la nocicepcin. El diagrama 2 resume el diseo experimental.

39

5.6 Evaluacin farmacolgica del extracto 5.6.1 Modelo de estiramiento abdominal Writhing

La nocicepcin se induj por la administracin de acido actico al 1% va intraperitoneal (i.p.) en un volumen de 10 ml/kg. Los parmetros que se registraron fueron la latencia al primer estiramiento abdominal y la frecuencia de estiramientos abdominales realizada cada 5 minutos durante 30 minutos (Collier et al. 1968 y Le Bars, 2001).

Diagrama 2. Resumen del diseo experimental.

40

5.6.2. Evaluacin de efectos depresores sobre el SNC

Modelo del campo abierto. Los ratones se colocaron individualmente en una caja de acrlico (23x40x20cm) cuyo base interior est dividida en 12 rectngulos (9.5 cm x 7 cm). El nmero de rectngulos explorados por cada ratn se registr en un intervalo de tiempo de 2 min. Una actividad ambulatoria disminuida significativa es referencia de un efecto sedante (Prut y Belzung, 2003). Modelo del tablero con orificios. Los ratones se colocaron individualmente sobre la superficie de una caja de madera (24x24x20cm). Dicha superficie est perforada con 16 orificios de 3 cm de dimetro igualmente distribuidos y se delimita por paredes de acrlico trasparentes de 20 cm de alto. El nmero de veces que el ratn introduce la cabeza en alguno de los orificios se registra en un intervalo de tiempo de 3 min. La disminucin significativa de la exploracin de los orificios con respecto al control es indicativa de efecto ansioltico (Takeda, Tsuji y Matsumiya, 1998). Modelo de exploracin en cilindro. Los ratones se colocaron individualmente dentro de un cilindro de vidrio (18 cm de altura x 12 cm de dimetro). El nmero de levantamientos espontneos sobre ambas extremidades anteriores se registra durante 5 min. . La disminucin significativa de la exploracin despus de colocar al ratn en un ambiente desconocido con respecto al control es indicativa de efecto ansioltico (Hiller y Zetler, 1996) Modelo de induccin de convulsiones agudas con pentilentetrazol. Despus de transcurridos 60 min de la administracin del extracto se administr el agente convulsivante PTZ (80 mg/kg, i.p.) para inducir crisis convulsivas de tipo clnico-tnico. Inmediatamente despus de la inyeccin de PTZ, los ratones se colocaron en cajas de acrlico trasparente (20x30x15 cm) para la observacin y registro de la latencia a la primer crisis mioclnica, a la primer crisis generalizada o clnico-tnica y a la crisis tnica. El registr se realiz durante 30 min despus de la administracin del PTZ. (Swinyard y Kupferberg, 1985) Evaluacin del dao gstrico. Las ratas se administraron con la dosis de 300 mg/kg del extracto o 1 mg/kg del frmaco analgsico Ketorolaco va i.p. o la combinacin de dosis de extracto de 10-300 mg/kg ms 1 mg/kg de ketorolaco y 30 min despus se administr va oral 1 ml de etanol absoluto. Una hora despus de la administracin de etanol se sacrificaron las ratas en una cmara de CO2, enseguida los estmagos se disecaron y se fijaron con 10 ml de formol al 4% y se dejaron reposar por

41

10 min. Transcurrido este tiempo los estmagos se abrieron por la curvatura mayor y se observaron para el registro de lceras (Szabo et al. 1985)

5.7 Anlisis estadstico

Los datos se presentan como la media el error estndar de la media. Los datos de nocicepcin se refieren como el curso temporal y como el rea bajo la curva (ABC), la cual se calcul utilizando el mtodo de los trapecios (Rowland y Toser, 1989). Anlisis de varianza (ANDEVA) de una va seguido de la prueba de Dunnett se realiz para la comparacin de las diferentes dosis contra el control o frmaco de referencia. El criterio de aceptacin para considerar diferencia estadstica fue de una p<0.05.

VI.

Resultados

6.1 Respuesta antinociceptiva de Tagetes lucida Cav.

El nmero de estiramientos mximo que present el grupo control fue de 32 al transcurrir 10 min despus de la administracin del cido actico al 1%. En la evaluacin farmacolgica se observa que el extracto etanlico de Tagetes lucida produce efecto antinociceptivo dosis dependiente que es significativo a partir de la dosis de 100 mg/kg. Las curvas de las dosis de 30 y 100 mg/kg muestran un comportamiento similar a la curva del frmaco de referencia ketorolaco 1 mg/kg, ya que tienen un mximo de contracciones situado entre los 10 y 15 min, despus el efecto se mantiene hasta concluir el tiempo que dura el ensayo. Las curvas de las dosis de 150 y 300 mg/kg retardan el mximo de estiramientos a 15 min y 30 min y se mantienen hasta finalizar la prueba, donde la dosis de 300 mg/kg evita casi por completo la manifestacin de la conducta nociceptiva (Fig. 6).

42

No. de estiramientos abdominales

40 35 30 25 20 15 10 5 0 0 5 10 15 Tiempo (min) 20

Control Ketorolaco 1 mg/kg Extracto 10 mg/Kg i.p Extracto 30 mg/Kg i.p Extracto 100 mg/Kg i.p. Extracto 150 mg/Kg i.p.

25

30

Figura 6. Efecto del extracto crudo etanlico de Tagetes lucida en la nocicepcin inducida con cido actico al 1% en ratones. Ketorolaco (1 mg/kg,i.p.) se administr como frmaco de referencia antinociceptiva.

La figura 7 muestra el comportamiento del efecto dosis dependiente producido por el extracto etanlico de Tagetes lucida sobre la nocicepcin visceral, ya que al aumentar la dosis del extracto el rea bajo la curva (ABC) de la actividad nociceptiva disminuye. El anlisis de varianza (ANDEVA) demuestra que existe diferencia estadsticamente significativa entre las medias de las dosis comparadas (F=5.76, P<0.001) a partir de la dosis de 100 mg/kg. La prueba de Dunnett permiti identificar que al comparar las medias de las dosis de 100, 150 y 300 mg/kg con la media de la dosis del grupo control, estas son estadsticamente diferentes, pero, al comparar las medias de las diferentes dosis contra la media del frmaco de referencia (ketorolaco 1 mg/kg) result que nicamente la dosis de 300 mg/kg fue significativamente diferente (Fig. 7).

43

Figura 7. Efecto del extracto etanlico (EtOH) de Tagetes lucida en la nocicepcin inducia con cido actico al 1% en ratones. *F6,31= 5.76, *P<0.001 vs. control; #ketorolaco.

6.2. Efecto depresor sobre el SNC producido por T.

lucida Cav.
El efecto ansioltico-sedante producido por el extracto en los diferentes modelos se muestran en la figura 8, en la cual se observa que todas las dosis del extracto disminuyen la actividad de exploracin de los ratones en las tres pruebas realizadas lo cual es indicativo de actividad ansioltica. En el modelo de campo abierto la dosis de 30 y 100 mg/kg no mostraron diferencia estadsticamente significativa entre el nmero de cuadros explorados con respecto a los del control, lo que corrobora un efecto ansioltico en los dems modelos. Sin embargo, la dosis de 300 mg/kg si produjo disminucin significativa en la actividad ambuladora de los ratones demostrando que a esta dosis el efecto depresor es ansioltico y sedante (Fig. 8). En el modelo de tablero con orificios, la exploracin de los ratones disminuyo en forma dependiente de la

44

dosis, aun as, las dosis de 30 y 100 mg/kg no presentan diferencia significativa con respecto al control, nicamente la dosis de 300 mg/kg ocasiona el efecto ansioltico-sedante en comparacin con el control (Fig. 8). Este efecto tranquilizante se nota bastante pronunciado en la prueba del cilindro, ya que a partir de la dosis de 30 mg/kg se observa que la actividad de exploracin es prcticamente nula en los ratones (Fig. 8).

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
Cuadros

cuentas por periodo de tiempo en min

Control 30 mg/kg 100 mg/kg 300 mg/kg

* * *
Orificios Modelo de exploracin

* *

Levantamientos

Figura 8. Efecto del extracto etanlico (EtOH) de Tagetes lucida en la actividad ansioltica-sedante en diferentes modelos en ratones, *P<0.05 vs el respectivo control.

En la figura 9 se muestran los resultados del efecto del extracto etanlico de Tagetes

lucida en las convulsiones inducidas en el modelo con PTZ. La administracin de las diferentes
dosis del extracto no modific el inicio de las mioclonias con respecto al grupo control. Aunque se observ un retraso en la presencia de las crisis generalizadas, ste incremento en el tiempo no fue significativo estadsticamente. Sin embargo, los resultados muestran que el extracto provoca una proteccin significativa en los ratones ante la presencia de las crisis tnicas y la muerte en las dosis de 30 y 100 mg/kg. El efecto se revierte al aumentar la dosis a 300 mg/kg. Para las tres dosis de extracto las mioclonias se presentaron en un lapso de tiempo de dos min; eventualmente las dosis de 30 y 100 mg/kg provocaron el retardo de las crisis generalizadas en ms del doble el tiempo en comparacin con el grupo control, la dosis de 300

45

mg/kg no present esta eficacia puesto que a los tres min se presentan la crisis. Los tratamientos de 30 y 100 mg/kg muestran ser activos para retrasar las crisis tnicas y la posterior muerte de los ratones hasta despus de los 20 min, mientras que en la dosis de 300 mg/kg los ratones presentan la muerte a los 10 min aproximadamente; en el grupo control la muerte se present en promedio a los 13 min.
30 25 20 Latencia (min) 15 10 5 0 Mioclonia Generalizada Tnica Muerte Tipos de crisis producidas por el PTZ
Figura 9. Efecto del extracto etanlico (EtOH) de Tagetes lucida en el modelo de induccin de convulsiones agudas con pentilentetrazol (PTZ) en ratones *P<0.05.

Control 30 mg/kg 100 mg/kg 300 mg/kg

Despus de realizar los modelos de estiramiento abdominal y la prueba de actividad ansioltica-sedante se realizaron cromatografas de capa fina del extracto etanlico crudo de T.

lucida con los solventes acetato de etilo y hexano en proporcin (1:1) para determinar
cualitativamente la presencia de algn metabolito causante del efecto antinociceptivo. La figura 10 muestra que la placa expuesta a la luz ultravioleta revela la presencia de algunos compuestos representados por 2 manchas de color azul intenso, as como de otras manchas de menor tamao e intensidad de color morado, rojo y verde.

46

Figura 10. Cromatografa del extracto etanlico crudo de T. lucida con barrido realizado en acetato de etilo y hexano (1:1).

Posteriormente se realiz la percolacin del extracto en silica gel por medio de lavados con disolventes en cambios de polaridad creciente (diagrama 3). En la figura 11 se muestran las placas observadas con la lmpara de luz ultravioleta (en onda corta y onda larga), la placa presenta las diferentes fracciones resultantes de los lavados, en las cuales se muestra la presencia del mismo compuesto observado en la figura 11, contaminado con una cantidad menor de otros metabolitos. La fraccin ms abundante se someti a ms lavados con acetato de etilo para conseguir purificar el metabolito (Diagrama 3).

Diagrama 3. Proceso de purificacin del compuesto presente en T. lucida.

47

Figura 11. Cromatografas de las fracciones obtenidas de la percolacin del extracto de T. lucida

En la figura 12 se muestra el efecto que produjo el compuesto aislado en la conducta nociceptiva inducida por el acido actico (1%). El curso temporal indica que las dosis de 0.3 y 30 mg/kg alcanzan un mximo de estiramientos entre los 15 a 20 min pero an as su actividad no difiere significativamente de la mostrada por el grupo control (Fig. 12). Aunque cabe sealar que el mximo alcanzado por los grupos con el metabolito retrasaron el mximo de estiramiento de 10 min a 15 min en comparacin con el control que presenta el mximo a los 10 min. La dosis de 1 mg/kg mostr un efecto similar al del ketorolaco 1mg/kg. La figura 13 muestra que la dosis de 10 mg/kg fue la nica que presento diferencia estadsticamente significativa con respecto del control, adems de ser la ms efectiva para el mitigacin de la respuesta nociceptiva inducida por el acido actico (1%) 40 35 30 25 20 15 10 5 0 0 5 10
Control 0.3 mg/kg Compuesto 10 mg/Kg Ketorolaco 1mg/kg Compuesto 1mg/Kg Compuesto 30 mg/kg

No. de estiramientos

15

20

25

30

Tiempo (min)
Figura 12. Efecto del extracto crudo etanlico de Tagetes lucida en la nocicepcin inducida con cido actico al 1% en ratones. Ketorolaco (1 mg/kg,i.p.) se administr como frmaco de referencia antinociceptiva.

48

800 700 600 500 400 300 200 100 0 0 0.3 1

Nocicepcin (ABC

10

30

Ket. 1

Dosis Figura 13. Efecto del compuesto aislado del extracto de Tagetes lucida en la nocicepcin inducia con cido actico
al 1% en ratones. *t12= 2.464, *P=0.03 VS control.

La figura 14 muestra el cromatograma del compuesto aislado y purificado obtenido mediante la tcnica de cromatografa de alta resolucin realizada adems con el extracto crudo de T. lucida y el estndar de referencia de escopoletina. Los cromatogramas comprueban la presencia del compuesto puro aislado del extracto etanlico de T. lucida, as como su presencia en el extracto junto a otros 3 componentes. La presencia de escopoletina en el extracto apenas se alcanza a detectar en la muestra del extracto (Fig. 13).
Extracto etanlico

Figura 14. Cromatogramas del extracto etanlico, el compuesto asilado y un estndar analtico de referencia (Escopoletina) realizadas por medio de cromatografas liquida de alta resolucin.

49

Los resultados correspondientes a las pruebas de efectos adversos sobre la mucosa gstrica indican que el extracto etanlico crudo de T. lucida no produce dao gstrico por si solo (Fig. 15B) incluso en la dosis que produce el mayor efecto antinociceptivo (300 mg//kg, i.p.) como se observa en comparacin con una muestra de estmago de rata sin tratamiento (15A). En marcado contraste, la presencia de 1 mg/kg de Ketorolaco (analgsico de referencia) produce dao ulceroso en presencia de etanol, donde severas lesiones gstricas fueron inducidas (Fig. 15C). De hecho con la administracin conjunta del extracto (30, 100 y 300 mg/kg, i.p.) y 1 mg/kg de ketorolaco i.p. no se produjeron lesiones gstricas inducidas con el agente ulcerognico (Fig. 15D, E y F). Lo anterior indica una marcada proteccin gstrica inducida por el extracto de T. lucida a las dosis que produjo antinocicepcin significativa y dosis dependiente (Fig. 7).

Figura 15. Estmagos de ratas empleadas en la prueba de dao gstrico.

50

VII.

Discusin

Con el presente proyecto se obtuvieron evidencias farmacolgicas de la actividad antinociceptiva del extracto etanlico de Tagetes lucida Cav. en un modelo experimental de dolor visceral, con el cual se corrobor una ventana de actividad de 30 a 300 mg/kg, i.p. con eficacia significativa a partir de la dosis de 100 mg/kg que fue similar a la presentada por ketorolaco 1 mg/kg, un frmaco considerado de alta eficacia analgsica y anti-inflamatoria y de mayor potencia que otros de su grupo. No obstante, es bien conocido que el ketorolaco produce diversos efectos adversos no deseables en el tracto gastrointestinal, dentro de los cuales el ms significativo es el dao que produce en la mucosa gstrica al manifestarse en forma de lceras (Muriel et al. 2007 e Insel, 2001). Los resultados demuestran que a diferencia del ketorolaco, el extracto etanlico crudo de las partes areas de T. lucida no produce los efectos de dao gstrico evaluado en ratas, por el contrario lo previene. Aunque cabe sealar que un componente depresor como efecto secundario, que adems podra ser tambin de utilidad teraputica, se produjo en las dosis de 30 a 300 mg/kg, i.p. del extracto de T. lucida. Como se ha mencionado, el uso medicinal ms frecuente de esta planta reportado en algunos Estados de la Republica es en trastornos digestivos, principalmente para dolores de estmago y clicos menstruales (dolor de regla) y dismenorrea o en general para clicos abdominales e inflamacin, entre otros (Biblioteca Digital de la Medicina Tradicional Mexicana, 2009; Guadarrama et al. 2008; Sierra, 2000 y Vibrans, 2009). El modelo de induccin de contracciones abdominales es una prueba funcional no slo para detectar analgsicos dbiles, sino tambin analgsicos para dolor moderado a severo (Le Bars, 2001). De tal manera que la reduccin de las contracciones abdominales producidas por extracto de T. lucida en el modelo de nocicepcin abdominal inducida qumicamente por cido actico demuestran el potencial de esta especie en el tratamiento del dolor visceral (Collier et al. 1967 y Le Bars, 2001). El extracto etanlico de T. lucida ha demostrado tener actividad espasmoltica en estudios in vitro frente a espasmos inducidos con acetilcolina. Por otro lado, extractos

51

hidroalcohlicos de flor y hoja aplicados sobre yeyuno de conejo in vitro (3.2 y 6.4 mg/ml) redujeron la amplitud y las frecuencias de las contracciones intestinales inducidas por serotonina. La infusin de hoja (500 mg/ml) fue antiespasmdica in vitro sobre leon de rata e

in vivo a 20 g/kg. (Germosn-Robineu, 2007 y Santa Cruz, 2005). Tagetes lucida es una de las plantas que adems se utiliza en la medicina tradicional
mexicana por sus propiedades como sedante, ansioltico, en el tratamiento del miedo, la demencia y anticonvulsivo (Adams et al. 2007, Cambar et al. 1984, Guadarrama et al. 2008, Tortoriello y Romero 1992, Oranday et al. 2008). A pesar de que se usa por sus propiedades en el tratamiento de diferentes enfermedades del SNC; la informacin cientfica disponible acerca de estas propiedades de la especie es escasa. En el presente proyecto, adems de la actividad antinociceptiva, se corroboraron la actividad ansioltica, sedante y anticonvulsiva del extracto etanlico de T. lucida. Debido a que el comportamiento exploratorio de los roedores est muy desarrollado y ello les permite tener una actitud nata para explorar su entorno con mucha velocidad mediante el uso de los sentidos del odo, olfato y tacto, de este modo realiza movimientos corporales como marchar, correr y ponerse de pie para realizar la identificacin de dicho entorno; diferentes modelos se consideraron para evaluar el efecto tranquilizante de

T. lucida, los cuales fueron significativos en dosis de 100 a 300 mg/kg, coincidiendo en la
mayora de ellos. Estos resultados de actividad sedante y ansioltica concuerdan con los datos proporcionados por Tortoriello y Romero (1992). En la medicina herbolaria tradicional se ha indicado que para T. lucida o pericn las infusiones son el principal mtodo de preparacin y la va de administracin es oral. Adems, estudios farmacolgicos demuestran que el extracto alcohlico de hojas al 20% tiene accin depresora del SNC (De la Cruz, 2005). La evaluacin de los posibles efectos neurofarmacolgicos de T. lucida en ratones albinos en dosis de 10, 20 y 40 mg/kg de extracto acuoso administrado por va subcutnea no produjo algn efecto neurofarmacolgico pero la dosis de 20 mg/kg acorta el tiempo de anestesia e inicio de la locomocin producido por pentobarbital sdico (Cambar et al. 1984). Por otro lado, se ha reportado que el extracto acuoso (10, 50, 100 mg/(kg/da) administrado a ratas por va oral por
52

14 das consecutivos y evaluado 2 h despus de la ltima ingesta, reduce significativamente la inmovilidad e incrementan el nado sin afectar la conducta de escalar sugiriendo su actividad antidepresiva. Las mismas dosis no fueron capaces de modificar la actividad motora o la conducta sexual masculina (Guadarrama et al., 2008). El agua es un disolvente polar al igual que lo es el extracto etanlico. En nuestros resultados los efectos depresores significativos se observaron mayores de 30 mg/kg, tanto ansioltico-sedante como anticonvulsivo. Respecto a la actividad anticonvulsiva, en la literatura consultada se encontraron dos referencias sobre el uso de la infusin de Tagetes lucida para el control de las convulsiones (Tortoriello y Romero, 1992 y Olvera, 2007). Los resultados de la prueba realizada en este proyecto muestran que el extracto etanlico de T. lucida administrado va i.p. no modifica el inicio de las mioclonias con respecto al grupo control, pero se observa un retraso en la presencia de las crisis generalizadas, ste incremento en el tiempo no fue significativo estadsticamente. Mientras que de manera interesante, los resultados muestran que el extracto en las dosis de 30 y 100 mg/kg protege significativamente a los ratones ante las crisis tnicas y la muerte inducidas con pentilentetrazol, el efecto decae al aumentar la dosis a 300 mg/kg. La dosis que produce el 50% de muertes en los sujetos experimentales se conoce como DL50, es una medida de la seguridad en el uso de sustancias con actividad teraputica. En el presente estudio se utiliz el mtodo de Lorke para su determinacin (Lorke, 1983). El extracto etanlico obtenido de las partes areas de T. lucida produjo una DL50 de 1265 mg/kg administrado por va intraperitoneal. Esto demuestra que la especie tiene una ventana teraputica (10-300 mg/kg) que se aleja de la produccin de toxicidad con un margen de seguridad o ndice teraputico igual a 19. Durante la prueba de toxicidad conforme la dosis era mayor, los ratones mostraban menor actividad ambulatoria y la respiracin levemente agitada, este sntoma puede relacionarse con lo reportado por Germosn-Robineu, (2007) y Santa Cruz, (2005) sobre acciones en el sistema cardiovascular que el futuro sera conveniente e interesante analizar. La prevencin producida por el extracto etanlico de T. lucida sobre el dao gstrico

53

que suele inducir el etanol o el analgsico ketorolaco o ambos da evidencia del potencial de esta especie como un antiulceroso, otro efecto secundario de utilidad teraputica. En las cromatografas realizadas al extracto etanlico crudo de T. lucida para analizar cualitativamente la presencia de metabolitos como posibles responsables de los efectos antinociceptivos y centrales de esta especie se observ la presencia de cumarinas y flavonoides, los cuales mostraron una coloracin azul intensa al ser observados con la lmpara de luz ultravioleta (Bez et al. 2009). Por estas caractersticas en la fluorescencia de las placas se llev a cabo la purificacin de un compuesto mayoritario (Diagrama 3) con caractersticas de una cumarina. Para comprobar el grado de pureza y la compatibilidad con la cumarina escopoletina se envi la muestra a otro laboratorio para realizar una cuantificacin por cromatografa de lquidos de alta resolucin. Los resultados indican que no se trata de escopoletina ya que sta tiene un tiempo de retencin de 12.5 min aproximadamente y el compuesto purificado se presenta en 15.25 min, aunque si fue posible purificarlo. Al realizar la prueba de dolor visceral con el compuesto purificado para determinar la actividad analgsica, se observa que slo produce efecto significativo en la dosis de 10 mg/kg en comparacin con el grupo control. Lo anterior, sugiere que otro compuesto diferente al purificado podra estar involucrado o que suma o potenca los efectos de ste cuando se encuentran combinados en el extracto. Se ha indicado que la actividad antimicrobiana, espasmoltica, diurtica y antiinflamatoria de T. lucida se atribuye al -tertienilo y herniarina que estn presentes en las hojas y flores, la herniarina popularmente se le atribuyen propiedades abortivas (Oranday et

al., 2008, Santa Cruz, 2005). La herniarina es una cumarina que se ha aislado a partir de un
extracto hexnico, presenta un Rf de 0.62 y al analizarlo con cromatografa de gases acoplada de espectroscopia de masa el compuesto tiene un tiempo de retencin de de 11.6 minutos (Oranday et al. 2008). Son cristales finos en forma de agujas de color blanco-amarillo, con un punto de fusin de 115-119 C, de un peso molecular de 176, se observa a la luz ultra violeta (= 366 nm) en las placas cromatogrficas como una mancha azul intensa como la observada en las placas en nuestro estudio (Olvera, 2007 y Santa Cruz, 2005). Tambin se ha aislado a partir
54

de extractos de dicloro metano (Cespedes et al. 2006), metanol (Cespedes et al. 2006 y Olvera, 2007) y etanol (Ortiz, 2009). Aunque le herniarina es otra cumarina que se encuentra en las partes areas de T. lucida podra no ser la que se aisl en este estudio, ya que el punto de fusin que se obtuvo se encuenmtra 132-134 C. La dilucidacin estructural y el anlisis farmacolgico de este compuesto sern de inters para la investigacin bsica correspondiente.

VIII. Conclusiones
El presente proyecto valida el uso que se le da a Tagetes lucida Cav. para el tratamiento del dolor de tipo visceral en la medicina tradicional as como actividad depresora del SNC, donde componentes de tipo cumarina podran ser esenciales en el papel farmacolgico de esta especie.

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