Introducción

La electroforesis es un proceso que se utiliza para separar macromoléculas en una solución. La

electroforesis en agarosa permite separar moléculas de DNA, cuando éstas son sometidas a un campo
eléctrico y atraídas hacia el polo opuesto a su carga neta. Hay dos fuerzas de acción opuesta que
determinan la velocidad de la partícula. Primero, la fuerza eléctrica atrae en DNA hacia el electrodo y la
intensidad de la atracción es directamente proporcional a la carga. Segundo, la fuerza de rozamiento se
opone a la migración y su intensidad depende del tamaño y la forma de la partícula.

El DNA está compuesto por cuatro nucleótidos que tienen carga negativa y peso molecular similar. Por lo
tanto, la aceleración impuesta por la fuerza eléctrica es igual para cualquier molécula de ácido nucleico.
La diferencia en velocidad de migración estará dada por diferencias en la fuerza de rozamiento, o sea por
la forma y tamaño de la molécula de DNA. En el caso del DNA doble cadena, la forma es la misma para
cualquier molécula, entonces las distintas moléculas tendrán una velocidad que sólo dependerá de su
tamaño, es decir, de su longitud en pares de bases.

Para lograr una separación eficiente se utiliza un medio soporte que aumenta la fricción recibida por las
macromoléculas y reduce la difusión al mínimo. Este medio un polímero orgánico, conocida como gel,
por su consistencia gelatinosa. Las mezclas de DNA de diferentes tamaños se hacen migrar a través del
gel durante cierto tiempo y se obtiene una separación en el que la distancia migrada por una molécula es
inversamente proporcional a su longitud en pares de bases (tamaño). (1)

La agarosa es un polisacárido (originalmente obtenido de algas, como el agar-agar, pero de composición

homogénea), cuyas disoluciones (típicamente de 0.5 a 2 %) poseen la propiedad de permanecer liquidas
por encima de 50 grados C y formar un gel, semisólido al enfriarse. Este gel esta constituido por una
matriz o trama tridimensional de fibras poliméricas embebida en gran cantidad de medio líquido, que
retarda el paso de las moléculas, se usa usualmente para separar moléculas grandes de alrededor 20.000
nucleótidos. (2)

Objetivo

Determinar la integridad del DNA gnómico purificado en el practico anterior

Materiales

- agarosa
- buffer TBE 10X (1M Tris, 1M acido bórico, 20mM EDTA)
- buffer carga DNA 6X (12% glicerol, 60mM EDTA pH 8,0, 0,6% SDS, 0,15% azul bromofenol)
- SYBR-Safe
- Standard de 1kb

Procedimiento:

Preparar un gel de agarosa al 0,7% en TBE 1X. para esto se disuelve 0,7g de agarosa en 90ml de H20 y
10ml de buffer TBE 10X. Se calienta hasta que la solución se vea completamente transparente y se le
agrega 10microl de SYBR-safe. Mezclar bien y agregar a la cámara de sellada y con las peinetas. Esperar
que gelifique aproximadamente 30 minutos. Llenar la cámara con buffer TBE 1X y retirar las peinetas.
Agregar buffer de carga 6X a cada muestra y cargar en el gel. No olvidar dejar un bolsillo para cargar el
Standard.
Correr el gel a 70-80V. Los fragmentos de DNA se observan a la luz UV en el transiluminador.
Resultados

Gel Agarosa 7%, carril 1 estándar peso molecular, carriles subsiguientes muestra DNA de los alumnos.
Carril JP, carril correspondiente a mi DNA obtenido en el practico anter.

Discusión

La muestra de DNA extraída desde sangre en el carril JP corresponde al DNA gnómico obtenido en el
laboratorio anterior mediante método de extracción con Alcohol (Fenol Cloroformo), demuestra la gran
cantidad de Ácidos nucleicos obtenidos por este método. Esto se ve reflejado en lo demarcado del carril.

Mi muestra se encuentra por sobre a la primera banda del estándar en el gel debido que por el gran peso
molecular que posee la molécula de DNA sin cortar (mediante enzimas de restricción), los fragmentos no
logran atravesar por los poros del gel (sobre los 20000 pares bases), dado que este gel se encuentra a una
concentración de 0,7% (alrededor de 10-15 mil pares bases)

Conclusión

Rosario Calderón

http://ciencias.bc.inter.edu/amlugo/biol2013/electroforesisDNA.htm
http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/electroforesis.html