Metodologa analtica para la cuantificacin de compuestos bioactivos en Lepidium meyenii con el fin de potenciar su oferta para exportacin

Eliana Esparza, Gustavo Gonzales, Carlos Arbizu, Waltraud Kofer y Eric Cosio

La maca tiene una multitud de actividades biolgicas reportadas

Antianmica Reduce sntomas de la menopausia

Energizante
Aumenta el conteo espermtico

Antioxidante

Reduccin de la hiperplasia prosttica

Promueve la fertilidad

Aumenta la libido

Estimulante del crecimiento

La maca pertenece a una de las cuatro familias vegetales que acumulan glucosinolatos. Los presentes en maca tienen su origen metablico en los aminocidos aromticos fenilalanina, tirosina y triptfano. Las variaciones estructurales adicionales son producto de la actividad de hidroxilasas y metiltransferasas especficas.

OH OH O OH H H OH H S N H SO4
-

OH OH O OH H H OH H S N H SO4
-

O H3C

OH OH O OH H H HO OH H S N H SO4
-

OH OH O OH H H OH H S N H SO4
-

HO OH OH O OH H H OH H S OH H SO4 N
-

OH O OH H H OH H

H SO4 N
-

O CH3

N H

HO

N H

Variacin fenotpica en maca

La maca es exportada primariamente como hipocotilos los cuales han sido secados al aire libre de 4 a 8 semanas. Este proceso tradicional de secado introduce una fuente de variabilidad en el perfil de productos naturales.
Secado tradicional Uno a dos meses Radiacin UV intensa Baja presin baromtrica Temperatura alta de da Congelamiento en la noche

Baja humedad ambiental

Algunas cuestiones pendientes

1. Qu compuestos son los mejores marcadores de la potencia biolgica de este producto? 2. Qu compuestos son los mejores indicadores de la calidad del procesamiento?

OH

Bencilglucosinolato
OH O OH H S H OH N H O O S
-

OH OH

Esquema sugerido de la relacin biosinttica entre metabolitos secundarios de maca

Mirosinasa

Bencilnitrilo Mirosinasa Citocromo P450

N C

Nitrilo liasa
O

Benzaldehdo Benzaldehdo reductasa

COOH

Bencilisotiocianato S
NH2

Hidrlisis

Cit P450

Fenilalanina Decarboxilasa Lpidos de membrana

OH

Bencilalcohol
NH2 O

+
HO

CH3

Bencilamina

cido palmtico Amidohidrolasa de cido graso

O CH3

NH

Macamida MAC 16

Se sintetizaron adems doce macamidas para ser utilizadas como estndares en HPLC y para ensayos biolgicos

Secuencia analtica utilizada

Maca Fresca Liofilizacin Polvo seco Secado tradicional

Extraccin en 70% MeOH, 70C, 1h

SPE RP18

SPE SAX + Sulfatasa

HPLC Amidas Isotiocianatos

OPA-HPLC Aminas

HPLC Desulfoglucosinolatos

El contenido de glucosinolatos disminuye durante el secado tradicional a la mitad de los valores presentes en maca fresca.
Glucosinolates
70 Maca fresca Maca seca

60

50

mg/g peso seco

40

30

20

10

0 JTA 125 JTA 127 JTA 138 JTA 192 JTA 193 JTA 85 JTA 86

Cdigo germoplasma CIP

Por otra parte el secado tradicional resulta en un incremento en diez veces del contenido de bencilamina libre
Benzylamine
5 Maca fresca Maca seca 4

mg/g peso seco

0 JTA125 JTA127 JTA138 JTA192 JTA193 JTA 85 JTA 86

Cdigo germoplasma CIP

De la misma manera, se observa que el contenido de cidos grasos insaturados libres en maca seca tradicional aumenta 12 veces en relacin a la maca fresca liofilizada
1400

cidos grasos 18:2 y 18:3 libres (g/g p.s.)

1200

Maca fresca liofilizada Mac seca tradicional

1000

800

600

400

200

0 JTA 125 JTA127 JTA 138 JTA 192 JTA 193 JTA 85 JTA 86

Cdigo germoplasma CIP

Las macamidas no son un producto natural de la maca fresca, si no que son producto de las reacciones hidrolticas que ocurren durante el secado tradicional. Sus niveles se incrementan hasta en 40 veces durante el secado.
Macamides
1200 Maca fresca Maca seca

1000

g/g peso seco

800

600

400

200

0 JTA 125 JTA127 JTA 138 JTA 192 JTA 193 JTA 85 JTA 86

Cdigo germoplasma CIP

No slo los niveles absolutos sino tambin el perfil de las amidas observadas para maca fresca liofilizada y maca seca tradicional cambian.

0.025 Maca fresca liofilizada

1.00 0.90 0.80 0.70 Maca seca tradicional

0.020

mol/g peso seco

mol/g peso seco

0.015

0.60 0.50 0.40 0.30

0.010

0.005

0.20 0.10

0.000

0.00

4mMAC18:3

4mMAC18:2

4mMAC16

4mMAC18

MAC18:3

MAC18:2

MAC16

4mMac16

4mMac18:3

4mMac18:2

Macamida

4mMac 18

Mac18:3

Mac18:2

Macamida

MAC18

Mac16

MAC8

Una alternativa para el anlisis directo de calidad de maca seca es utilizar micro-extraccin en fase slida (SPME) para determinar el perfil de voltiles presentes en la harina
Maca seca en polvo Temperado del vial a 40C

Captura de voltiles por SPME del espacio de cabeza del vial

Anlisis por GC-MS de los compuestos voltiles capturados con SPME y desorbidos directamente en el inyector del GC

Los perfiles SPME en GC-MS de maca fresca liofilizada y maca seca tradicional muestran diferencias significativas en compuestos voltiles. La maca seca tradicional muestra niveles muy bajos de isotiocianatos (BITC) y niveles de benzaldehdo (BCHO) que son el doble que los de maca fresca. Ntese la aparicin de sesquiterpenoides en maca seca tradicional (en rojo).
T IC : D V B 2 .D bundance

T IC : D V B 1 .D

3,5-octadien-2-ona

Abundance

BOH BCHO BCN

BCHO
450000 400000

Etil ster de cido hexanico

450000

Metil ster de cido hexanico

BOH
Metil ster de cido octanoico

400000

Zingibireno
350000

350000

Hexanal
300000

300000

250000

BCN BITC

Metil ster de cido hexanico

250000

4m-BCN 3m-BCHO Curcumeno

200000

200000

150000

150000

-felandreno

-sesquifelandreno -felandreno

100000

100000

4m-BCHO
50000

50000

0 T im e -->

2 .0 0

4 .0 0

6 .0 0

8 .0 0

1 0 .0 0

1 2 .0 0

0 T im e -->

2 .0 0

4 .0 0

6 .0 0

8 .0 0

1 0 .0 0

1 2 .0 0

1 4 .0 0

Maca fresca liofilizada

Maca seca molida

Los sesquiterpenos y monoterpenos observados en maca seca no han sido reportados anteriormente y aaden complejidad al espectro de compuestos bioactivos. Sus niveles deben ser an cuantificados adecuadamente.
H CH3 H CH3 CH3

OH H3C H3C CH3 H2C H3C CH3 H3C H3C CH2

Zingibereno

-Sesquifelandreno
CH3 CH2

Curcumeno

H3C

CH3

H3C

CH3

-Felandreno

-Felandreno

OH

Bencilglucosinolato
OH O OH H S H OH N H O O S
-

Nuevo esquema de relacin biosinttica entre metabolitos secundarios de maca

OH OH

Mirosinasa

Bencilnitrilo Mirosinasa Citocromo P450

N C

Nitrilo liasa
O

Benzaldehdo Benzaldehdo reductasa

COOH

Bencilisotiocianato S
NH2

Hidrlisis

Cit P450

Fenilalanina Decarboxilasa Lpidos de membrana

OH

Bencilalcohol
NH2 O

+
HO

CH3

Bencilamina

cido palmtico Formacin de amidas

O CH3

NH

Macamida MAC 16

Conclusiones y perspectivas
La maca fresca y la secada de manera tradicional presentan diferencias significativas en sus niveles de compuestos bioactivos.
Macamidas y otros compuestos bioactivos se generan durante el procesamiento tradicional, de manera similar a lo que ocurre con otros productos como el t, caf, cacao o vainilla. Es necesario evaluar la cintica de generacin de compuestos indicadores durante el proceso tradicional de secado para optimizar el producto. La tecnologa SPME, muy poco utilizada en el Per, permite llevar a cabo una evaluacin rpida de la calidad del procesamiento de maca seca.