UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MARING DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA CELULAR E GENTICA

Isolamento de DNA de clulas de Fragaria ananassa (morango)

OBJETIVOS Realizar a extrao de DNA genmico de um organismo. Observar molculas de DNA e discutir a utilizao do mtodo. INTRODUO Os morangos que consumimos so plantas da espcie Fragaria ananassa. Estas plantas so Rosceas, ou seja, so da mesma famlia das rosas que enfeitam muitos jardins. Elas se reproduzem principalmente por meio do estolo, que um ramo que cresce paralelo ao cho, gerando brotos de novas plantas. As variedades de morangos que consumimos hoje so resultado de cruzamentos de espcies diferentes que ocorriam, naturalmente na Europa (Frana e Rssia) e nas Amricas (Chile e Estados Unidos). Uma das razes de se trabalhar com morangos que eles se prestam muito bem extrao de DNA, porque so muito macios e fceis de homogeneizar. Morangos maduros tambm produzem pectinases e celulases, que so enzimas que degradam a pectina e a celulose (respectivamente), presentes nas paredes celulares das clulas vegetais. Alm disso, os morangos possuem muito DNA seu conjunto de cromossomos so octoplides. MATERIAL 1. 1 saco plstico tipo "zip loc" 2. 1 morango (fresco ou congelado) 3. 10 ml de soluo de extrao de DNA (veja como fazer abaixo) 4. Aparato filtrante: 1 filtro de papel com funil ou 1 filtro de pano ou gaze 5. lcool etlico gelado (pode ser lcool 70 g.l.) 6. 1 tubo de ensaio limpo 7. 1 basto de vidro ou 1 palito de madeira (tipo churrasco) 8. Soluo de Extrao: a. 5 ml de detergente (de preferncia sem corantes) b. 1,5 gramas de NaCl (sal de cozinha) = 2 colheres de ch c. 90 ml de gua (H2O), de preferncia mineral MTODO 1. Coloque um morango, previamente lavado e sem as spalas (as folhinhas verdes) em um saco zip loc. 2. Esmague o morango com o punho por, no mnimo, 2 minutos. 3. Adicione a soluo de extrao ao contedo do saco. 4. Misture tudo, apertando com as mos, por 1 minuto. 5. Derrame o extrato no aparato filtrante e deixe filtrar diretamente dentro do tubo. No encha totalmente o tubo (encha somente at 1/8 do seu volume total). 6. Derrame devagar o lcool gelado no tubo, at que o mesmo esteja cheio pela metade. 7. Mergulhe o basto de vidro ou o paude-laranjeira dentro do tubo no local onde a camada de lcool faz contato com a camada de extrato. 8. Mantenha o tubo ao nvel dos olhos para ver o que est acontecendo. RESULTADOS Assim que os participantes derramarem o etanol gelado no extrato de morango ser possvel visualizar fitas brancas muito finas de DNA, que se formaro na interface entre as duas camadas. Agitando-se o DNA que se formou na camada de etanol, este formar fibras como as de algodo, que grudaro no objeto que se est usando para misturar (basto de vidro ou madeira). QUESTES 1. O que ocorre quando se coloca o detergente? 2. O que ocorre quando se coloca o sal? 3. O que ocorre quando se coloca o etanol? 4. O que se espera quando se coloca o etanol a diferentes temperaturas, por exemplo 10C, 4 e 10? 5. Quais as finalidades da extrao do DNA nos seres humanos? 6. Durante o processo de extrao, as molculas de DNA podem se quebrar? BIBLIOGRAFIA Retirado e adaptado de um mtodo de Diane Sweeney a ser publicado em Biology: Exploring Life, Pearson Education Arquivo pdf da extrao de DNA de morango Informaes sobre as espcies de morango Para saber mais voc pode visitar tambm o site, em portugus, DNA VAI ESCOLA.http://agronomy.ucdavis.edu/gepts/pb143/cr op/strawber/strawber.html