Universidade Paulista

Apoptose

Edmar Jorge Martini Guilherme Henrique Mainhani Jhoni Henrique Gasparini Nayara dos Santos Moraes Maria Gabriela Martinez Rino

RA: 437968-3 RA: A03EIH-9 RA: A014G6-4 RA: A20374-5 RA: 487290-8

Araatuba 2010

Resumo
Apoptose ou morte celular programada um processo essencial para a manuteno da homeostase tecidual, porque responsvel pela eliminao de clulas defeituosas ou suprfluas. Para que este processo ocorra necessrio uma que cascata de eventos bioqumicos e moleculares especficos, regulados geneticamente aconteam. A morte celular programada muito eficiente, mas os seu descontrole pode ocasionar srias patologias como as doena auto- imunes. A morte celular por apoptose um fenmeno complexo caracterizado por retrao da clula, perda da aderncia com as clulas vizinhas e matriz extracelular, condensao da cromatina, fragmentao do DNA e formao de corpos apoptticos. Muitas molculas como as caspases esto envolvidas nas vias de ativao da apoptose, a liberao do citocromo c da mitocndria tambm necessrio para que o mecanismo ocorra. Uma srie de mecanismo complexos esto envolvidos na apoptose, e seu estudo de extrema importncia pois a apoptose esta relacionada com o controle de vrios processos vitais e com diversas patologias como o cncer. A compreenso desses mecanismos poder gerar estratgias no combate de diversas patologias como o cncer e o Mal de Alzheimer.

Sumrio

Resumo.........................................................................................................................1 Sumrio........................................................................................................................2 1. Introduo................................................................................................................3 2. Desenvolvimento.....................................................................................................4 2.1 Morfologia.............................................................................................................4 2.2 Patognese..........................................................................................................5 3. Concluso.............................................................................................................10 Referncias...............................................................................................................11

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INTRODUO

O termo apoptose (do grego apo= de, e ptose=cair) foi criado em 1972 por Kerr, Wyllie e Currie para designar morte celular programada, no acidental. Apoptose um fenmeno celular em que a celular estimulada a acionar mecanismos que ir culminar sua morte. um processo individual, ou seja, a morte de uma clula no leva a morte de outra clula. um processo eficiente que depende de vrios fatores para que as modificaes morfolgicas aconteam, necessrio que ocorra uma srie de eventos moleculares e bioqumicos especficos, porm geneticamente regulados. A apoptose quando fisiolgica benfica, porque atua na homeostase tecidual, na defesa do organismo, pois destri clulas infectadas por vrus e outros microorganismos, alm de aniquilar as clulas de revestimento que esto comprometidas e expostas a genobiticos como as do pulmo, do intestino ou da epiderme. Apoptose tambm responsvel pela moldagem dos organismos como ocorre na metamorfose de sapos, nas membranas interdigitais dos dedos, na formao dos sistemas biolgicos e dos vasos sanguneos, entre outros. A mitose e a apoptose so de extrema importncia para a homeostase tecidual, quando h um descontrole de apoptose patologias iro surgir, dentre alguns exemplos temos os cnceres e doenas auto-imunes. Apoptose, muito frequente acontece tanto fisiologicamente quanto patologicamente, a regreo das mamas aps o desmame, a degradao das clulas endometriais durante o ciclo menstrual e a destruio de clulas durante a embriognese so exemplos de apoptose. Estudos envolvendo genes na apoptose foram realizados no nematdeo Caenorhabditis elegans (C. elegans), em humanos o processo muito parecido com o que acontece no C. elegans, neste nematdeo a apoptose regulada principalmente por trs genes da famlia ced (cell death abnormal): ced-3, ced-4 e ced-9, que so homlogos respectivamente.
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de protenas pr- apoptticas, APAF-1, e Bcl-2

2. 2.1 Morfologia

DESENVOLVIMENTO

Uma caracterstica marcante de uma clula em apoptose o formato de meia lua, isto acontece por causa do encolhimento da clula, o citoplasma fica mais denso, as organelas ficam mais compactadas, a cromatina torna se densa e acoplada a membrana nuclear, ficando de tamanhos e formas bem diferentes, porm bem delimitados. Logo aps o ncleo se fragmenta (carriorrexe) produzindo fragmentos, bolhas citoplasmticas (projees citoplasmticas) so emitidas, posteriormente ocorre a fragmentao em corpos apoptticos com fragmentos nucleares e,ou organelas estreitamente acondicionadas. Uma caracterstica marcante da apoptose fragmentao internucleossmica do DNA que ir possuir um padro marcante. Uma endonuclease ira produzir tamanhos diferentes de fragmentos de DNA, porm sempre mltiplos de 200 pares de base, que possuem padro caracterstico de bandas em gel de agarose, tornando fcil a identificao. . A endocitose dos corpos apoptticos realizada por clulas vizinhas o que facilitado pela exteriorizao da fosfatidilserina pelos corpos apoptticos que funciona como ligante para os receptores de fagcitos ou de clulas vizinhas. Na microscopia ptica comum difcil de observar clulas em apoptose, porque este fenmeno individual, na colorao hematoxilina-eosina os corpos apoptticos aparecem intensamente basfilos, ou seja, corado por corantes bsicos como exemplo a hematoxilina. Na microscopia eletrnica a observao facilitada porque possvel observar a condensao do citoplasma, da cromatina e da mitocndria. Com a microscopia de varredura possvel observar tambm a formao das bolhas ou brotamentos, bem como a fragmentao da clula em corpos apoptticos. Clulas em apoptose so facilmente observadas nos centros germinativos de linfonodos onde existe grande quantidade de linfcitos apoptticos e nas hepatites virais em que possvel ver hepatcitos em apoptose.

Figura 1. Alterao de permeabilidade de membranas, condensao cromatina, encolhimento celular, formao de corpos apoptticos sem desintegrao de organelas.

2.2 Patognese
A apoptose desencadeada por diferentes estmulos sejam eles exgenos ou endgenos, os estmulos exgenos iro agir em receptores de membrana, os estmulos endgenos iro ser gerados aps diferentes agresses como irradiao, estresse oxidativo, agresso qumica e hipxia. Estes estmulos iro desencadear a ativao das proteases, as quais iro induzir as mudanas morfolgicas e funcionais. Ativao das proteases induzida por rotas diferentes sempre dependente de um fator desencadeante, as rotas mais comuns envolvem: ativao direta de caspases, ativao de caspase via alterao mitocondrial e interferncia com protenas citoslicas reguladoras de apoptose. As caspases (de cysteine asparagil specific proteases) so enzimas que possuem uma cistena no stio ativo que possui capacidadede reconhecer e clivar substratos que possuir resduos de aspartato. So produzidas como precursores inativos denominados ziminognio ou prcaspases, quatorze caspases so conhecidas dentre as quais seis participam da apoptose em humanos so elas (-3,-6,-7,-8,-9,-10) que so divididas de acordo com seus pr- domnios e sua participao na apoptose. Caspases ativadoras so aquelas que possuem um pr-domnio longo, alm de participarem do incio da cascata proteoltica, so elas caspases -8,-9,-10, as caspases efetoras so responsveis pela degradao de diferentes substratos, como DNA, lminas nucleares e as protenas do citoesqueleto, estas possuem um
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pr- domnio curto ou inexistente. Um substrato importante que as caspases clivam o mdm-2 (murine double minute) uma protena que se une a p53, est unio mantm a p53 no citosol da clula, quando este substrato degradado pelas caspases a p53 se desloca para o ncleo ativando genes pr-apoptticos como o Bax. O papel das mitocndrias na apoptose ativar a caspase 9 ou ativar diretamente as caspases efetoras, isto acontece porque a mitocndria libera citocromo c, protena Smac (Second Mitocondrial Activator of Caspases) e AIF (de apoptosis Inducing Factor). Com a liberao do citromo c para o citosol impedir o transporte de eltrons e a formao de ATP. No citoplasma o citocromo c se associara com Apaf-1 ( de Apoptosis Protease Activanting Factor) que tem a funo de ativar a caspase 9, formando uma estrutura chamada de apoptossomo, o qual desencadeara cascata de caspase. Existem cerca de 100 substratos j descritos para as caspases que so divididos em trs categorias: funo estrutural, de sinalizao e de reparo do DNA. Como exemplos de funo estrutural podem citar os componentes do citoesqueleto que quando clivados induzem a perda da forma celular, outro exemplo so as lamininas nucleares que se forem clivas levam ao colapso da lmina nuclear. A Apaf-1 se liga ao ATP ou ao didesoxi- ATP esta unio ocasiona uma mudana conformacional que necessria para ativar a caspase 9. O papel da protena Smac unir-se aos IAPs que so inibidores naturais de apoptose e inibi-los, assim as caspases so ativadas. So vinte e trs protenas Bcl que esto divididas em antiapoptticas (Bcl-2, Bcl-XL, entre outras.) ou inibidoras e em pr-apoptticas (Bax, entre outras) ou ativadoras. A protena Bcl-2 localiza-se nas membranas externas mitocondriais, reticulo endotelial ou envelope nuclear. Esta protena responsvel por constituir ou regular protenas que fazem poros na membrana das mitocndrias. As protenas Bax (bim, bad, BID, Noxa, Hrk, Bd-G, entre outras) so encontradas no citosol, aps estimulo migra para a mitocndria, estas protenas possuem domnios especficos possibilitando a unio com as protenas pr-apoptticas, com isto acontece uma desestabilizao da membrana mitocondrial ocorrendo a liberao do citocromo c e tambm a liberao de protenas ativadoras de caspases, cada pr-apoptticas ativada de uma maneira.
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Na apoptose o gradiente bioqumico da apoptose se dissipa, isto ocorre devido a mudana de permeabilidade da membrana interna mitocondrial, ocasionando um inchao da organela e ruptura da membrana externa. Ocorre a formao de poros de transio na membrana, composto por protenas das membranas externas e internas, estes poros so denominados de PTPC (permeability transition for complex). Com o ruptura destes poros o citocromo c ser liberado que responsvel por liberar eltrons entre os complexos III e IV da cadeia respiratria. A liberao do citocromo c ira desacoplar a cadeia respiratria, desestabilizando a homeostase do on clcio, liberando espcies reativas de oxignio (EROs), AIF (protenas que induz a ruptura do ncleo semelhante a apoptose), caspases 2, 3 e 9, alm de parar a formao de ATP mitocondrial. Bcl-2 e Bcl-Xl so responsveis de fazer a proteo das mitocndrias , e este papel exercido em vrios nveis, como exemplo, interferir na translocao da protena Bax para a membrana interna, impedindo o inchao mitocondrial.

Figura 2: A via receptor (A) desencadeada por membros da super-famlia de receptores de morte celular (tal como CD95/Fas/Apo-1). Ligantes especficos sinalizam agregao e formao de um complexo indutor de morte, que recruta prcaspases atravs de protenas de domnio de morte associada ao receptor. A via
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mitocondrial (B) frequentemente ativada em resposta a danos no DNA, envolvendo a ativao de um membro pr-apopttico da famlia Bcl-2 (Bax, Bid). Membros pr- e anti-apopttico da famlia Bcl-2 regulam a liberao de citocromo c a partir da membrana mitocondrial interna. Este se associa com Apaf-1, dATP e prcaspase-9, formando apoptossomo Caspases subsequentes so ativadas, culminando na clivagem de substratos especficos e morte celular por apoptose. Akt (protena serinatreonina cinase) atua na apoptose fosforilando protenas pr-apoptticas, caspase 9 e fatores de transcrio envolvidos na expresso do ligante Faz, inibindo o processo. O Ikk (Inhibitor of NFkB cinases) ativa o NFkB que induz a expresso de genes IAPs, desfavorecendo a apoptose. Outro mecanismo de apoptose est relacionado com a famlia dos receptores do Fator Necrose Tumoral (rTNF) esta famlia inclui os receptores rTNF-1, Faz/CD95, TRAIL, a caracterstica marcante desta famlia um domnio extracelular rico em cistena. Esta famlia tem uma importncia muito grande na apoptose de clulas T maduras no final da resposta imune e na mitose de clulas infectadas por vrus. Anoikis, do grego, sem lar, denota a apoptose que ocorre aps o destacamento das clulas da matriz extracelular. Este processo foi descoberto primeiro em clulas endoteliais e epiteliais que foram retiradas de sua matriz, esta apoptose pode ser revertida se aps um curto perodo as clulas serem colocadas em contato com o substrato. Como exemplos temos a regreo da glndula mamria, em clulas do msculo esqueltico, entre outros. Estes foram alguns mecanismos apresentados de controle e ativao da apoptose, o estudo destes mecanismos de extrema importncia porque atravs deles poder ser descoberta o controle e a cura de doenas, alm do mais a apoptose juntamente com a mitose so as grandes responsveis pela homeostase tecidual do organismo. Convm lembrar que apoptose no induz inflamao, mesmo que os corpos apoptticos so fagocitados pelos macrfagos no induzem a liberao de quimiocinas e citonas pr- inflamatrias, isto ocorre porque a endocitose mediada por receptores dentre os quais a fosfatidilserina.
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Apoptose est presente na vida dos humanos desde o incio do desenvolvimento, na embriognese, na implantao, na organognese, sendo responsvel pela formao de rgos e tecido, um exemplo clssico a apoptose das clulas das membranas interdigitais.

Figura 3: Interdigitais em apoptose. A degradao de clulas endometriais durante o ciclo menstrual, a regresso da mama, a destruio celular de clulas em constante proliferao como nas criptas intestinais, a morte celular em tumores durante a regresso, dentre outros so exemplos de apoptose. Como mencionado anteriormente a apoptose tem importncia nos tumores, as caractersticas dos cnceres so as mais heterogneas possveis, porm uma caracterstica do tumores crescer alm do limite das clulas normais, ou seja, existe uma enorme e descontrolada proliferao das clulas (mitose). Uma caracterstica marcante dos tumores malignos a incapacidade de realizar apoptose, esta incapacidade pode ocorrer p diversos fatores pode ser induzida por leses no DNA, oxignio reativo, entre outras. Outras patologias tambm esto associadas com a descontrole da apoptose dentre elas podemos citar: Mal de Azheimer, doena de Parkinson, retinite pigmentosa, atrofia muscular espinhal, leucemia mielide aguda e crnica, dentre outras. Nas doenas auto-imunes e neurodegenerativas ocorre apoptose em excesso. No mal de Azheimer apoptose acontece nos neurnios precocemente o que ir causar demncia progressiva e perda da memria .

3. Concluso A morte celular programada ou apoptose est presente na vida dos seres vivos desde o desenvolvimento embrionrio, sendo de extrema importncia para a manuteno da homeostase do organismo. A descontrole dos mais diversos mecanismos que regulam a apoptose pode acarretar srios problemas. O estudo e o entendimento dos mecanismos que levam a apoptose so de extrema importncia para futuros mtodos de preveno ou cura de doenas como o cncer.

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Referncias
Grivicich, I; Regner, A; Rocha, AB. Morte Celular por Apoptose. Revista Brasileira de Cancerologia, 2007; 53(3): 335-343. Anazetti, M. C.; Melo, P.S. Morte Celular por Apoptose: uma viso bioqumica e molecular. Metrocamp Pesquisa, 2007,v.1, n.1, p. 37-58. Ramzi S. Contran, M.D, et al. Robbins, Patologia Estrutural e Funcional. Sexta Edio. Filho, G. B. Bogliolo Patologia. Stima Edio.

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