11 Nmero de publicacin: 19

OFICINA ESPAOLA DE PATENTES Y MARCAS

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51 Int. Cl.:

ESPAA

A61K 31/7068 (2006.01) A61K 31/7072 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01)

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TRADUCCIN DE PATENTE EUROPEA

86 Nmero de solicitud europea: 04023557 .4 86 Fecha de presentacin : 06.06.1996 87 Nmero de publicacin de la solicitud: 1491201 87 Fecha de publicacin de la solicitud: 29.12.2004

T3

54 Ttulo: Mtodos para reducir la toxicidad de agentes quimioteraputicos y antivirales con nuclesidos de

pirimidina acilados.

30 Prioridad: 07.06.1995 US 472210

73 Titular/es: Wellstat Therapeutics Corporation

930 Clopper Road Gaithersburg, Maryland 20878, US

45 Fecha de publicacin de la mencin BOPI:

72 Inventor/es: Vonborstel, Reid W. y

01.08.2006

Bamat, Michael K.

45 Fecha de la publicacin del folleto de la patente:

74 Agente: Carvajal y Urquijo, Isabel

01.08.2006

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Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicacin en el Boletn europeo de patentes, de
la mencin de concesin de la patente europea, cualquier persona podr oponerse ante la Ocina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposicin deber formularse por escrito y estar motivada; slo se considerar como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposicin (art. 99.1 del Convenio sobre concesin de Patentes Europeas).
Venta de fascculos: Ocina Espaola de Patentes y Marcas. P de la Castellana, 75 28071 Madrid

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DESCRIPCIN Mtodos para reducir la toxicidad de agentes quimioteraputicos y antivirales con nuclesidos de pirimidina acilados.
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Campo de la invencin Esta invencin se reere generalmente al tratamiento de la toxicidad provocada por agentes quimioteraputicos y agentes antivirales con derivados acilados de nuclesidos de pirimidina no metilados. Estos compuestos son capaces de atenuar el dao al sistema hematopoytico en animales que reciben quimioterapia antiviral o antineoplstica. Esta invencin tambin se reere a la proteccin de otros tejidos afectados por quimioterapia antiviral o antineoplstica, incluyendo el epitelio gastrointestinal. Antecedentes de la invencin
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Una complicacin principal de la quimioterapia del cncer y de la quimioterapia antiviral es el dao a las clulas de la mdula sea o la supresin de su funcin. Especcamente, la quimioterapia daa o destruye clulas precursoras hematopoyticas, encontradas principalmente en la mdula sea y el bazo, dicultando la produccin de nuevas clulas sanguneas (granulocitos, linfocitos, eritrocitos, monocitos, plaquetas, etc.). El tratamiento de pacientes de cncer con 5-uorouracilo, por ejemplo, reduce el nmero de leucocitos (linfocitos y/o granulocitos) y puede dar como resultado una susceptibilidad aumentada de los pacientes a la infeccin. Muchos pacientes de cncer mueren de infeccin u otras consecuencias del fallo hematopoytico subsiguiente a la quimioterapia. Los agentes quimioteraputicos tambin pueden dar como resultado una formacin de plaquetas por debajo de la normal que produce una propensin a la hemorragia. La inhibicin de la produccin de eritrocitos puede dar como resultado anemia. El riesgo de dao al sistema hematopoytico u otros tejidos importantes puede impedir la utilizacin de dosis de agentes para quimioterapia sucientemente altas para proporcionar buena ecacia antitumoral o antiviral. Muchos agentes para quimioterapia antineoplstica o antiviral actan inhibiendo la biosntesis, el metabolismo o la funcin de los nucletidos, o de hecho son anlogos de nuclesidos que substituyen a los nuclesidos normales en los cidos nucleicos, produciendo RNA o DNA defectuoso. El 5-uorouracilo es un agente para quimioterapia antineoplstica citorreductor qumicamente importante que acta en parte a travs de la incorporacin en el RNA, produciendo RNA defectuoso; la inhibicin de timidilato sintetasa mediante monofosfato de uorodesoxiuridina tambin puede contribuir a la citotoxicidad del 5-FU. La utilidad clnica del 5-FU est limitada por su toxicidad (especialmente para la mdula sea). Especcamente, su utilidad clnica est alimentada por una relacin teraputica (la relacin de dosis txica a dosis ecaz; una relacin teraputica alta implica que un frmaco tiene ecacia con poca toxicidad) baja. El 5-FU y muchos otros agentes para quimioterapia tambin afectan a otros tejidos, especialmente la mucosa gastrointestinal, produciendo mucositis, diarrea y ulceracin. La estomatitis (ulceracin de la mucosa de la boca) es particularmente problemtica para los pacientes, haciendo dolorosos el comer y el tragar. D.S. Martin y otros (Cancer Res. 42:3964-70 [1982]) presentaron que poda administrarse seguramente a ratones una dosis txica de 5-FU (con fuerte actividad antitumoral) si era seguida por la administracin de una alta dosis de uridina que empezaba varias horas ms tarde. Se ha observado que esta estrategia de rescate incrementa el ndice teraputico del 5-FU en modelos tumorales animales, permitiendo la administracin de las dosis txicas altas de 5FU que son necesarias para provocar la regresin del tumor o evitar el crecimiento del tumor mientras que se protegen preferentemente los tejidos normales (especialmente importante es la mdula sea) mediante la administracin subsiguiente de uridina (D.S. Martin y otros, Cancer Res. 43:4653-61[1983]). Los experimentos clnicos que implican la administracin de uridina se han complicado debido a las propiedades biolgicas de la propia uridina. La uridina es escasamente absorbida despus de la administracin oral; la diarrea es limitativa de la dosis en seres humanos (van Groeningen y otros, Proceedings of the AACR 28:195 [1987]). Por consiguiente, es necesaria la administracin parenteral de uridina para la inversin clnicamente signicativa de la toxicidad con 5-FU, lo que requiere el uso de un catter venoso central, puesto que la ebitis ha sido un problema en experimentos clnicos iniciales cuando la uridina se administraba a travs de un catter intravenoso pequeo (van Groeningen y otros, Cancer Treat Rep. 70:745-50 [1986]). La infusin prolongada a travs de catteres venosos centrales requiere la hospitalizacin de los pacientes. Adems, existen molestias e incomodidades considerables para los pacientes. Se han desarrollado profrmacos oralmente activos de 5-FU que se convierten enzimticamente o espontneamente en 5-FU, generalmente despus de la absorcin desde el intestino hacia la corriente sangunea. Esto permite la autoadministracin por los pacientes, sin la incomodidad de la administracin intravenosa. Por otra parte, en algunos regmenes de quimioterapia, se intenta la exposicin sostenida, por ejemplo una infusin intravenosa constante durante varios das o semanas, de los tumores a 5-FU. La administracin oral de profrmacos de 5-FU puede proporcionar en principio tal disponibilidad sostenida de 5-FU a los tumores. El 5-uoro-1-(tetrahidro-2-furfuril)uracilo (FT) es un profrmaco oralmente activo de 5-uorouracilo. Se convierte enzimticamente en 5-uorouracilo principalmente en el hgado. Sin embargo, el hgado tiene niveles relativamente
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altos de la enzima dihidropirimidina deshidrogenasa, que degrada el 5FU, produciendo metabolitos que no son tiles en la quimioterapia del cncer y que adems contribuyen a la toxicidad del 5-FU.
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Se cree que la citotoxicidad del 5FU, el metabolito activo del FT, es un resultado de su incorporacin en conjuntos de nucletidos, donde ciertos anabolitos ejercen efectos txicos, por ejemplo el monofosfato de 5-uorodesoxiuridina inhibe la timidilato sintasa, privando as a las clulas de timidina para la sntesis de DNA, y la incorporacin de trifosfato de 5-uorouridina en el RNA deteriora sus funciones normales en la traduccin de la informacin gentica. Para inhibir el catabolismo de 5FU derivado de FT, se han administrado otros compuestos con el FT. En particular, el pirimidinuracilo inhibe el catabolismo de 5FU sin inhibir su citotoxicidad. La formulacin clnica ms ampliamente usada de FT contiene uracilo en una relacin molar 1:4. Esto permite una reduccin signicativa en la dosis de FT requerida para alcanzar un efecto teraputico. Otras pirimidinas, incluyendo uridina, timidina, timina y citosina, son menos efectivas que el uracilo o no son mejores para potenciar la ecacia antitumoral del FT sin potenciar inaceptablemente la toxicidad. Tambin se han utilizado potentes inhibidores sintticos de dihidropirimidina deshidrogenasa (DHPDHasa) con FT o 5FU. La 5-cloro-2,6-dihidroxipirimidina (CDHP) es ms potente que el uracilo como un inhibidor de DHPDAHasa. Sin embargo, este compuesto tambin aumenta la toxicidad del 5FU, de modo que, en su implantacin clnica pretendida, se coadministra un tercer componente, el cido oxnico, para reducir la toxicidad intestinal. Varios investigadores han administrado pirimidinas con 5FU intentando mejorar el ndice teraputico de este agente antineoplstico. In vivo, la uridina y la timidina cuando se administran al mismo tiempo que el 5FU incrementaban tanto la ecacia antitumoral del 5FU como su toxicidad, de modo que no exista un incremento neto en el ndice teraputico (Hartman y Bollag, Med. Oncol. & Tumor Pharmacother., 3:111-118 [1986]). Burchenal y otros (Cancer Chemother. Rep., 6:1-5 [1960]) resumieron estudios exhaustivos sobre las interacciones de 5FU y 5-uorodesoxiuridina (FUDR) y compuestos de pirimidina. Apuntaron que a pesar del hecho de que las pirimidinas y los nuclesidos de pirimidina, en dosis que son inactivas solas, potenciaban notablemente los efectos antileucmicos de pequeas dosis de FUDR o FU, no ha sido posible con ninguna combinacin mejorar signicativamente y con algn grado de regularidad los resultados que pueden obtenerse con dosis toleradas mximas de FU o FUDR solos. De forma similar, Jato y otros (J. Pharm Sci., 64:943-945 [1975]), en una investigacin de combinaciones de desoxiuridina con 5FU y FUDR, presentan que cualquier benecio teraputico de la terapia de combinacin poda duplicarse con 5FU o FUDR a una dosis superior. Aunque la desoxiuridina, al inhibir el catabolismo de las uoropirimidinas, permita la administracin de dosis inferiores, no exista mejora en la actividad antitumoral a dosis equitxicas de la combinacin frente a FU o FUDR solos. Como en el caso de la uridina, los problemas de escasa biodisponibilidad despus de la administracin oral limitan la utilidad clnica de la administracin de las propias desoxicitidina, citidina y desoxiuridina para la modulacin de la toxicidad de agentes para quimioterapia. La arabinosilcitosina (Ara-C) es un agente importante en el tratamiento de la leucemia y tambin es til como un inmunosupresor. La toxicidad para la mdula sea (mieloide y eritroide) asociada con la administracin de AraC puede evitarse parcialmente mediante la administracin de desoxicitidina (Belyanchikova y otros, Bull. Exp. Biol. Med. 91:83-85 [1981]), mientras que la toxicidad de Ara-C para los linfocitos no se atena tan fuertemente mediante desoxicitidina. En los cultivos celulares, las clulas progenitoras mieloides normales se protegen de Ara-C mediante desoxicitina mejor que las clulas leucmicas (K. Bhalla y otros, Blood 70:568-571 [1987]). La desoxicitidina tambin atena la toxicidad de 5-aza-2-desoxicitidina y arabinosil-5-azacitosina en cultivos celulares (K. Bhalla y otros, Leukemia 1:814-819 [1987]). La infusin prolongada (5 das) de altas dosis de desoxicitidina a travs de un catter venoso central se propuso como un medio para la ejecucin clnica de la modulacin de la toxicidad de Ara-C con desoxicitidina (K. Bhalla y otros, Leukemia 2:709-710 [l988]). El cido N-fosfonoacetil-L-asprtico (PALA) es un agente antineoplstico que inhibe la enzima aspartato transcarbamoilasa, una enzima implicada indirectamente en la biosntesis de nucletidos de pirimidina. Los efectos secundarios del PAL implican principalmente el dao al tracto gastrointestinal y la mucositis. La pirazomurina (un anlogo de pirimidina conectado a travs de carbono), la 6-azauridina y la 6-azacitidina intereren todas con la sntesis y el metabolismo de nucletidos de pirimidina. La 3-azidodesoxitimidina (AZT) se usa clnicamente en pacientes infectados con el virus de inmunodeciencia humana (HIV, el agente infeccioso en el SIDA). La AZT prolonga el tiempo de vida de pacientes infectados con HIV, pero tambin deteriora la hematopoyesis, produciendo leucopenia y anemia. En cultivos celulares, la uridina alivia la toxicidad inducida por AZT para clulas progenitoras de granulocitos/macrfagos sin deteriorar las acciones antivirales de la AZT (Sommadossi y otros, (1988) Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 32:997-1001); la timidina atena tanto la toxicidad como la actividad antiviral. En ratones, la administracin parenteral de altas dosis de uridina proporcionaba algn alivio de la anemia inducida por AZT, pero solo a dosis de uridina que incrementaban la mortalidad durante el estudio; una dosis atxica baja de uridina (500 mg/kg/d) no reduca la toxicidad hematolgica inducida por AZT (A. Falcone y otros, Blood 76:2216-21[1990]). Sommadossi y Kouni (Patente de EE.UU. 5077280) propusieron la administracin de uridina mediante inyeccin intravenosa peridica para atenuar la toxicidad por AZT. Bhalla y otros, (Blood 74:1923-1928 [1989]) presentaron que la desoxicitidina protege a clulas progenitoras de la mdula sea humana normales in vitro contra la citotoxicidad de AZT con conservacin de la actividad antirretroviral.
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El 5-uoroorotato, un anlogo del precursor de nucletidos de pirimidina cido ortico, tiene efectos antiproliferativos sobre clulas humanas, pero es especialmente til para tratar infecciones con parsitos malricos, por ejemplo, Plasmodium yoelii o Plasmodium falciparum, que dependen de la biosntesis de pirimidina de novo. La administracin de uridina a ratones tratados con 5-uoroorotato atenuaba la toxicidad para el husped debida al ltimo sin deteriorar su actividad antimalrica (ZM Gmez y PK Rathod, Antimicrob. Agents Chemother. 34:1371-1375 (1990). La didesoxicitidina (ddC) tambin es til contra infecciones retrovirales incluyendo HIV; efectos secundarios de la ddC incluyen neuropata perifrica, lceras bucales y conteos de plaquetas reducidos. La toxicidad de la ddC sobre clulas progenitoras mieloides humanas en cultivo puede ser mitigada por desoxicitidina sin deteriorar de ese modo la ecacia antirretroviral de la ddC (K. Bhalla y otros, AIDS 4:427-31 [1990]). Los mtodos descritos en la tcnica anterior citados previamente para administrar estos nuclesidos de pirimidina para modicar la quimioterapia en el entorno clnico no son prcticos (la infusin prolongada de desoxicitidina o uridina a travs de un catter venoso central requiere hospitalizacin, riesgo de infeccin e incomodidad para el paciente) ni satisfactorios (la uridina administrada oralmente se absorbe escasamente; dosis teraputicamente adecuadas de uridina oral producen diarrea). La solicitud de patente de EE.UU. de propietario comn N de Serie 438.493 demuestra el uso de derivados acilados de citidina y uridina para incrementar los niveles tanto de citidina como de uridina. Se han sintetizado algunos derivados acilados de nuclesidos de pirimidina para usar como productos intermedios protegidos en la sntesis de oligonucletidos o anlogos de nuclesidos, por ejemplo 5-O-benzoiluridina, triacetilcitidina y triacetiluridina. Vase el catlogo de 1991 de Sigma Chemical Company, pginas 155, 980 y 981, respectivamente. Un objetivo principal de esta invencin es proporcionar un mtodo para prevenir o tratar ecazmente sntomas txicos de quimioterapia antiviral o anticancerosa, incluyendo, pero no limitados a, dao al sistema hematopoytico y a la mucosa gastrointestinal.
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Un objetivo adicional de la invencin es proporcionar compuestos y mtodos para permitir la administracin de dosis superiores de los agentes para quimioterapia.
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Un objetivo adicional de la invencin es proporcionar mtodos para incrementar niveles en sangre y tejidos de uridina y citidina, y sus correspondientes desoxirribonuclesidos desoxicitidina y desoxiuridina, a travs de la administracin oral de un compuesto o compuestos. Un objetivo adicional de la invencin es proporcionar un mtodo para prevenir o mitigar el dao al epitelio gastrointestinal debido a agentes para quimioterapia citotxicos.

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Estos y otros objetivos de la invencin se alcanzan mediante el uso de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado para la fabricacin de un medicamento para la prevencin o reduccin de efectos txicos de la terapia citorreductora, en donde al usarlo dicho medicamento se administra en una terapia que comprende: (a) administrar 5-uorouracilo (5-FU) a un ser humano en una dosis de 1000-1600 mg/m2 del ser humano; y (b) administrar una cantidad farmacuticamente ecaz de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado. Estos y otros objetivos de la invencin tambin se alcanzan mediante el uso de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado para la fabricacin de un medicamento para tratar el cncer, en donde al usarlo dicho medicamento se administra en un tratamiento que comprende: (a) administrar un inhibidor de la enzima dihidropirimidina deshidrogenasa; (b) administrar 5-uorouracilo (5-FU) a un ser humano en una dosis de 1000-1600 mg/m2 del ser humano; y (c) administrar una cantidad farmacuticamente ecaz de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado. Estos y otros objetivos de la invencin tambin se alcanzan mediante el uso de 5-uorouracilo (5-FU) en una dosis de 1000-1600 mg/m2 de un ser humano para la fabricacin de un medicamento para la terapia citorreductora de un ser humano, administrndose dicho medicamento antes, durante y/o despus de la administracin de una cantidad farmacuticamente ecaz de un derivado acilado y un nuclesido de pirimidina no metilado. As, la presente invencin proporciona la administracin oral o parenteral de derivados acilados de nuclesidos de pirimidina no metilados, por ejemplo, derivados acilados de uridina, desoxiuridina, citidina o desoxicitidina, que se administran a animales, incluyendo mamferos tales como seres humanos. La administracin de estos compuestos solos o en combinacin es til para prevenir o mitigar los efectos txicos de la quimioterapia citorreductora en animales. As, estos compuestos, solos o en combinacin, son tiles en el tratamiento de trastornos de la hematopoyesis inducidos por agentes qumicos; son tiles como adyuvantes para la quimioterapia del cncer y antiviral y son tiles para el tratamiento de otros estados patolgicos.
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Un aspecto importante de esta invencin es el descubrimiento de que los derivados acilados de nuclesidos de pirimidina no metilados tienen propiedades teraputicas inesperadas. Compuestos tiles en la invencin
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En todos los casos excepto cuando se indica, las letras y las letras con subndices que simbolizan substituyentes variables en las estructuras qumicas de los compuestos de la invencin son aplicables solo a la estructura inmediatamente precedente a la descripcin del smbolo.
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Los compuestos tiles para atenuar la toxicidad debida a agentes anticanceroso o antivirales tienen las siguientes estructuras generales: (1) Un derivado acilado de uridina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 , R3 y R4 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo de un metabolito, con tal de que al menos uno de dichos substituyentes R no sea hidrgeno, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo. (2) Un derivado acilado de citidina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 , R3 y R4 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo de un metabolito, con tal de que al menos uno de dichos substituyentes R no sea hidrgeno, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo.

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(3) Un derivado acilado de desoxicitidina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 y R3 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo de un metabolito, con tal de que al menos uno de dichos substituyentes R no sea hidrgeno, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo. (4) Un derivado acilado de desoxiuridina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 y R3 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo de un metabolito, con tal de que al menos uno de dichos substituyentes R no sea hidrgeno, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo.
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Compuestos tiles para mitigar la toxicidad debida a agentes para quimioterapia anticancerosa o antiviral incluyen los siguientes: (5) Un derivado acilado de uridina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 y R3 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo de a. un cido graso no ramicado con de 5 a 22 tomos de carbono,
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b. un aminocido seleccionado del grupo que consiste en glicina, las formas L de alanina, valina, leucina, isoleucina, tirosina, prolina, hidroxiprolina, serina, treonina, cistina, cistena, cido asprtico, cido glutmico, arginina, lisina, histidina, carnitina y ornitina,
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c. un cido dicarboxlico que tiene 3-22 tomos de carbono, d. un cido carboxlico seleccionado de uno o ms del grupo que consiste en cido gliclico, cido pirvico, cido lctico, cido enolpirvico, cido lipoico, cido pantotnico, cido acetoactico, cido p-aminobenzoico, cido betahidroxibutrico, cido ortico y creatina.

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(6) Un derivado acilado de citidina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 , R3 y R4 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo de a. un cido graso no ramicado con de 5 a 22 tomos de carbono, b. un aminocido seleccionado del grupo que consiste en glicina, las formas L de fenilalanina, alanina, valina, leucina, isoleucina, tirosina, prolina, hidroxiprolina, serina, treonina, cistina, cistena, cido asprtico, cido glutmico, arginina, lisina, histidina, carnitina y ornitina, c. un cido dicarboxlico que tiene 3-22 tomos de carbono,

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d. un cido carboxlico seleccionado de uno o ms del grupo que consiste en cido gliclico, cido pirvico, cido lctico, cido enolpirvico, cido lipoico, cido pantotnico, cido acetoactico, cido p-aminobenzoico, cido betahidroxibutrico, cido ortico y creatina. (7) Un derivado acilado de desoxicitidina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 y R3 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo derivado de a. un cido graso no ramicado con de 3 a 22 tomos de carbono,
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b. un aminocido seleccionado del grupo que consiste en glicina, las formas L de alanina, valina, leucina, isoleucina, tirosina, prolina, hidroxiprolina, serina, treonina, cistina, cistena, cido asprtico, cido glutmico, arginina, lisina, histidina, carnitina y ornitina,
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c. cido nicotnico, d. un cido dicarboxlico que tiene 3-22 tomos de carbono,
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con tal de que la totalidad de R1 , R2 y R3 no sea H, y cuando R3 no es H, entonces R1 y/o R2 tambin pueden ser acetilo, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo. (8) Un derivado acilado de desoxiuridina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 y R3 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo derivado de a. un cido graso no ramicado con de 3 a 22 tomos de carbono,
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b. un aminocido seleccionado del grupo que consiste en glicina, las formas L de alanina, valina, leucina, isoleucina, tirosina, prolina, hidroxiprolina, serina, treonina, cistina, cistena, cido asprtico, cido glutmico, arginina, lisina, histidina, carnitina y ornitina, c. cido nicotnico, d. un cido dicarboxlico que tiene 3-22 tomos de carbono, con tal de que la totalidad de R1 , R2 y R3 no sea H, y cuando R3 no es H, entonces R1 y/o R2 tambin pueden ser acetilo, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo. (9) Un derivado acilado de uridina que tiene la frmula:

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en la que al menos uno de R1 , R2 o R3 es un resto hidrocarboxiloxicarbonilo que contiene 2-26 tomos de carbono y los restantes substituyentes R son independientemente un resto hidrocarbiloxicarbonilo o hidrocarbilcarbonilo o H o fosfato.

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(10) Un derivado acilado de citidina que tiene la frmula:

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en la que al menos uno de R1 , R2 o R3 es un resto hidrocarboxiloxicarbonilo que contiene 2-26 tomos de carbono y los restantes substituyentes R son independientemente un resto hidrocarbiloxicarbonilo o hidrocarbilcarbonilo o H o fosfato. (11) Un derivado acilado de desoxicitidina que tiene la frmula:

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en la que al menos uno de R1 , R2 o R3 es un resto hidrocarboxiloxicarbonilo que contiene 2-26 tomos de carbono y los restantes substituyentes R son independientemente un resto hidrocarbiloxicarbonilo o hidrocarbilcarbonilo o H o fosfato. (12) Un derivado acilado de desoxiuridina que tiene la frmula:

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en la que al menos uno de R1 o R2 es un resto hidrocarbiloxicarbonilo que contiene 2-26 tomos de carbono y los restantes substituyentes R son independientemente un resto hidrocarbiloxicarbonilo o hidrocarbilcarbonilo o H o fosfato.

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La invencin, as como otros objetivos, caractersticas y ventajas de la misma se entendern ms claramente y completamente a partir de la siguiente descripcin detallada, cuando se lea con referencia a los resultados adjuntos de los experimentos analizados en los ejemplos posteriores.
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Descripcin detallada de la invencin La invencin en cuestin se reere al uso en la fabricacin de un medicamento de derivados acilados de nuclesidos de pirimidina no metilados, es decir, derivados acilados de uridina, desoxiuridina, citidina o desoxicitidina, tales como triacetiluridina (TAU), para atenuar la toxicidad de agentes quimioteraputicos y agentes antivirales in vivo. La invencin tambin proporciona la administracin de estos compuestos de nuclesidos de pirimidina, solos o en combinaciones, con o sin otros agentes, a animales. En el caso de muchos agentes para quimioterapia antineoplstica y antiviral, la exposicin de las clulas afectadas a nuclesidos naturales apropiados puede prevenir o mitigar el dao a esas clulas. Los usos de acuerdo con la invencin en cuestin hacen posible reducir la toxicidad mientras que mantienen la ecacia teraputica del agente antiviral o antineoplstico y, a la inversa, incrementar la dosis del agente quimioteraputico mientras se mantiene un grado aceptable de toxicidad. La presente invencin proporciona el uso de compuestos para tratar o prevenir sntomas txicos de la quimioterapia antiviral o anticancerosa a travs de la administracin oral o parenteral de derivados acilados de nuclesidos de pirimidina no metilados. A. Deniciones

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El trmino nuclesido de pirimidina no metilado, segn se usa aqu, signica nuclesidos presentes en la naturaleza distintos de timidina (5-metildesoxiuridina) o 5-metilcitidina y otros nuclesidos metilados presentes en la naturaleza similares. Ejemplos de nuclesidos de pirimidina no metilados incluyen uridina, citidina, desoxiuridina y desoxicitidina. El trmino derivado acilado, segn se usa aqu, signica un derivado de un nuclesido de pirimidina no metilado en el que un substituyente acilo orgnico substancialmente atxico derivado de un cido carboxlico est ligado a uno o ms de los grupos hidroxilo libres del resto de ribosa de un nuclesido de pirimidina no metilado con una unin ster y/o donde tal substituyente est ligado al substituyente amina en el anillo de pirimidina de la citidina o la desoxicitidina, con una unin amida. Tales substituyentes acilo se derivan de cidos carboxlicos que incluyen, pero no se limitan a, compuestos seleccionados del grupo que consiste en un cido graso, un aminocido, cido nicotnico, cidos dicarboxlicos, cido lctico, cido p-aminobenzoico y cido ortico. Substituyentes acilo ventajosos son cidos carboxlicos que normalmente estn presentes en el cuerpo, o como constituyentes dietticos o como metabolitos intermedios. El trmino anlogo, segn se usa aqu, signica un nuclesido qumicamente modicado en el anillo de pirimidina o en el resto de ribosa (o desoxirribosa) mediante un medio distinto de la acilacin o la ligacin de otros substituyentes biolgicamente lbiles (por ejemplo, fosforilacin de grupos hidroxilo en el azcar). Especcamente, los anlogos de nuclesidos, en el contexto de esta invencin, son frmacos con similitudes estructurales con los nuclesidos presentes en la naturaleza, pero con propiedades antivirales, antineoplsticas o citotxicas. Ejemplos de anlogos de nuclesidos antineoplsticos incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: 5-uorouracilo (5-FU), profrmaco de 5-FU (por ejemplo, ftorafur, 5-desoxiuorouridina, carmofur), uorouridina, 2-desoxiuorouridina, derivados de profrmaco de uorouridina o 2-desoxiuorouridina, uorocitosina, arabinosilcitosina, profrmacos de arabinosilcitosina, ciclocitidina, 5-aza-2-desoxicitidina, arabinosil-5-azacitosina, 6-azauridina, azaribina, 6-azacitidina, triuorometil-2-desoxiuridina, timidina y 3-desazauridina. Ejemplos de anlogos de nuclesidos antivirales incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: 5-etil-2-desoxiuridina, 5-yodo-2-desoxiuridina, 5-bromo-2-desoxiuridina, 5-metilamino-2-desoxiuridina, arabinosiluracilo, didesoxiuridina, didesoxicitidina, 2,3-didesoxicitidin-2eno, 3-didesoxicitidin-2-eno, 3-azido-2,3-desoxiuridina y 3-azidodesoxitimidina (AZT). Anlogos de precursores de nuclesidos de pirimidina, por ejemplo cido N-fosfonoacetil-N-asprtico (PALA), estn abarcados por este trmino. Se considera que algunos anlogos de nuclesidos tienen similitudes estructurales con nuclesidos presentes en la naturaleza particulares. En el contexto de los compuestos de la invencin, los anlogos de nuclesidos se dividen en anlogos de citidina si tienen un grupo amino hexocclico en la posicin 4 del anillo de pirimidina (un grupo amino en esa posicin signica la distincin entre citidina y uridina). Anlogos de nuclesidos que son especcamente anlogos de citidina incluyen, pero no se limitan a: uorocitosina, arabinosilcitosina, profrmacos de arabinosilcitosina, ciclocitidina, 5-aza-2-desoxicitidina, arabinosil-5-azacitosina, 6-azacitidina y desoxicitidina. Anlogos de nuclesidos que se considera especcamente que son anlogos de uridina, incluyen, pero no se limitan a: 5-uorouracilo (5-FU), profrmacos de 5-FU (por ejemplo, ftorafur, 5-didesoxiuorouridina, carmofur), uorouridina, 2-didesoxiuorouridina, derivados de profrmaco de uorouridina, derivados de profrmaco de 2-desoxiuorouridina, triuorometil2-desoxiuridina, 6-azauridina, azaribina, 3-desazauridina, 5-etil-2-desoxiuridina, 5-yodo-2-desoxiuridina, 5-bromo2-desoxiuridina, 5-metilamino-2-desoxiuridina, arabinosiluracilo y desoxiuridina. Algunos anlogos de nuclesidos citotxicos tambin son especcamente anlogos de timidina, por ejemplo la AZT.
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El trmino sales farmacuticamente aceptables, segn se usa aqu, signica sales con sales de adicin de cidos farmacuticamente aceptables de los derivados, que incluyen, pero no se limitan a, cido sulfrico, clorhdrico o fosfrico.
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El trmino coadministrado, segn se usa aqu, signica que al menos dos de los compuestos de la invencin se administran durante un espacio de tiempo en el que los perodos respectivos de actividad farmacolgica se solapan. El trmino hidrocarbilcarbonilo, segn se usa aqu, signica un radical acilo de un cido carboxlico en el que el tomo adyacente al tomo de carbono carbonlico es otro tomo de carbono. El cido carboxlico originario, por ejemplo, puede ser un cido graso, un cido aromtico (por ejemplo benzoato, nicotinoato o sus congneres), un aminocido, un cido cicloalquilcarboxlico o un cido dicarboxlico. El trmino hidrocarbiloxicarbonilo, segn se usa aqu, signica un radical acilo de un cido carboxlico en el que el tomo adyacente al tomo de carbono carbonlico es oxgeno que adems est conectado covalentemente a otro tomo de carbono. Esto tambin puede describirse como un radical de un ster de carbonato de un alcohol, que, cuando se separa de un nuclesido de pirimidina no metilado despus de la administracin, se degrada adicionalmente como dixido de carbono y un alcohol. Alcoholes ventajosos son aquellos que son de baja toxicidad, particularmente aquellos que entran fcilmente en las rutas metablicas o eliminatorias normales. El trmino cidos grasos, segn se usa aqu, signica cidos carboxlicos alifticos que tienen 2-22 tomos de carbono. Tales cidos grasos pueden estar saturados, parcialmente saturados o poliinsaturados. El trmino aminocido, segn se usa aqu, incluye, pero no se limita a, glicina, las formas L de alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, prolina, hidroxiprolina, serina, treonina, cistena, cistina, metionina, triptfano, cido asprtico, cido glutmico, arginina, lisina, histidina, ornitina, hidroxilisina, carnitina y otros aminocidos presentes en la naturaleza. El trmino cidos dicarboxlicos, segn se usa aqu, signica cidos grasos con un segundo substituyente cido carboxlico.

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El trmino cantidad teraputicamente ecaz, segn se usa aqu, se reere a la cantidad que proporciona efectos teraputicos para un estado y un rgimen de administracin dados. B. Compuestos tiles en la invencin
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En todos los casos excepto cuando se indica, las letras y las letras con subndices que simbolizan substituyentes variables en las estructuras qumicas de los compuestos de la invencin son aplicables solo a la estructura inmediatamente precedente a la descripcin del smbolo.
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Los compuestos tiles para atenuar la toxicidad debida a agentes anticanceroso o antivirales tienen las siguientes estructuras generales: (1) Un derivado acilado de uridina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 , R3 y R4 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo de un metabolito, con tal de que al menos uno de dichos substituyentes R no sea hidrgeno, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo.
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(2) Un derivado acilado de citidina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 , R3 y R4 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo de un metabolito, con tal de que al menos uno de dichos substituyentes R no sea hidrgeno, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo. (3) Un derivado acilado de desoxicitidina que tiene la frmula:
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en la que R1 , R2 y R3 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo de un metabolito, con tal de que al menos uno de dichos substituyentes R no sea hidrgeno, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo.
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(4) Un derivado acilado de desoxiuridina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 y R3 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo de un metabolito, con tal de que al menos uno de dichos substituyentes R no sea hidrgeno, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo.

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Compuestos tiles para mitigar la toxicidad debido a agentes para quimioterapia anticancerosa o antiviral incluyen los siguientes: (5) Un derivado acilado de uridina que tiene la frmula:
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en la que R1 , R2 y R3 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo de

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a. un cido graso no ramicado con de 5 a 22 tomos de carbono, b. un aminocido seleccionado del grupo que consiste en glicina, las formas L de alanina, valina, leucina, isoleucina, tirosina, prolina, hidroxiprolina, serina, treonina, cistina, cistena, cido asprtico, cido glutmico, arginina, lisina, histidina, carnitina y ornitina,

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c. un cido dicarboxlico que tiene 3-22 tomos de carbono, d. un cido carboxlico seleccionado de uno o ms del grupo que consiste en cido gliclico, cido pirvico, cido lctico, cido enolpirvico, cido lipoico, cido pantotnico, cido acetoactico, cido p-aminobenzoico, cido betahidroxibutrico, cido ortico y creatina. (6) Un derivado acilado de citidina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 , R3 y R4 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo de a. un cido graso no ramicado con de 5 a 22 tomos de carbono,

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b. un aminocido seleccionado del grupo que consiste en glicina, las formas L de fenilalanina, alanina, valina, leucina, isoleucina, tirosina, prolina, hidroxiprolina, serina, treonina, cistina, cistena, cido asprtico, cido glutmico, arginina, lisina, histidina, carnitina y ornitina, c. un cido dicarboxlico que tiene 3-22 tomos de carbono,

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d. un cido carboxlico seleccionado de uno o ms del grupo que consiste en cido gliclico, cido pirvico, cido lctico, cido enolpirvico, cido lipoico, cido pantotnico, cido acetoactico, cido p-aminobenzoico, cido betahidroxibutrico, cido ortico y creatina.
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(7) Un derivado acilado de desoxicitidina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 y R3 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo derivado de a. un cido graso no ramicado con de 3 a 22 tomos de carbono, b. un aminocido seleccionado del grupo que consiste en glicina, las formas L de alanina, valina, leucina, isoleucina, tirosina, prolina, hidroxiprolina, serina, treonina, cistina, cistena, cido asprtico, cido glutmico, arginina, lisina, histidina, carnitina y ornitina, c. cido nicotnico,

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d. un cido dicarboxlico que tiene 3-22 tomos de carbono, con tal de que la totalidad de R1 , R2 y R3 no sea H, y cuando R3 no es H, entonces R1 y/o R2 tambin pueden ser acetilo, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo.

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(8) Un derivado acilado de desoxiuridina que tiene la frmula:

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en la que R1 , R2 y R3 son iguales o diferentes y cada uno es hidrgeno o un radical acilo derivado de
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a. un cido graso no ramicado con de 3 a 22 tomos de carbono, b. un aminocido seleccionado del grupo que consiste en glicina, las formas L de alanina, valina, leucina, isoleucina, tirosina, prolina, hidroxiprolina, serina, treonina, cistina, cistena, cido asprtico, cido glutmico, arginina, lisina, histidina, carnitina y ornitina,

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c. cido nicotnico, d. un cido dicarboxlico que tiene 3-22 tomos de carbono,

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con tal de que la totalidad de R1 , R2 y R3 no sea H, y cuando R3 no es H, entonces R1 y/o R2 tambin pueden ser acetilo, o una sal farmacuticamente aceptable del mismo.

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(9) Un derivado acilado de uridina que tiene la frmula:

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en la que al menos uno de R1 , R2 o R3 es un resto hidrocarboxiloxicarbonilo que contiene 2-26 tomos de carbono y los restantes substituyentes R son independientemente un resto hidrocarbiloxicarbonilo o hidrocarbilcarbonilo o H o fosfato. (10) Un derivado acilado de citidina que tiene la frmula:

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en la que al menos uno de R1 , R2 o R3 es un resto hidrocarboxiloxicarbonilo que contiene 2-26 tomos de carbono y los restantes substituyentes R son independientemente un resto hidrocarbiloxicarbonilo o hidrocarbilcarbonilo o H o fosfato. (11) Un derivado acilado de desoxicitidina que tiene la frmula:

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en la que al menos uno de R1 , R2 o R3 es un resto hidrocarboxiloxicarbonilo que contiene 2-26 tomos de carbono y los restantes substituyentes R son independientemente un resto hidrocarbiloxicarbonilo o hidrocarbilcarbonilo o H o fosfato.
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(12) Un derivado acilado de desoxiuridina que tiene la frmula:

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en la que al menos uno de R1 o R2 es un resto hidrocarbiloxicarbonilo que contiene 2-26 tomos de carbono y los restantes substituyentes R son independientemente un resto hidrocarbiloxicarbonilo o hidrocarbilcarbonilo o H o fosfato.
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Compuestos ventajosos para usar en la invencin son steres de cido graso de uridina y desoxicitidina, especialmente aquellos con 4 o menos tomos de carbono en el substituyente acilo. Compuestos particularmente ventajosos son steres de cido graso de uridina o desoxicitidina con 2 3 tomos de carbono en el substituyente acilo. Otros compuestos ventajosos para usar en la invencin son derivados hidrocarbiloxicarbonlicos de uridina y desoxicitidina, particularmente aquellos con de 3 a 6 tomos de carbono en el resto hidrocarbiloxicarbonilo. En una modalidad de la invencin, se preparan profrmacos de los compuestos con solubilidad en agua mejorada ligando fosfato a un grupo hidroxilo libre en el resto de aldosa del nuclesido de pirimidina no metilado acilado.

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C. Composiciones para usar de acuerdo con la invencin Las composiciones para usar de acuerdo con la invencin incluyen uno o ms de los compuestos apuntados anteriormente junto con un portador farmacuticamente aceptable.

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Las composiciones para usar de acuerdo con la invencin incluyen, adems de uno o ms compuestos de la invencin y al menos uno de los siguientes agentes que mejoran la hematopoyesis: nuclesidos de oxipurina, congneres de nuclesidos de oxipurina y derivados acilados de nuclesidos de oxipurina y sus congneres, por ejemplo, steres de cido graso de guanosina o desoxiguanosina (vase WO 92/13561 (US N de Serie 653.882, presentada el 8 de Febrero de 1991)), un tensioactivo no inico, una interleuquina tal como IL-1, -2, -3, -4, -5, -6, -7, -8 (ventajosamente IL-1, 3 6), un factor estimulante de colonias, por ejemplo factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), factor estimulante de colonias de granulocitos/macrfagos (GM-CSF), un factor de clulas pluripotenciales (SCF), eritropoyetina (EPO), glucano, poliinosina-policitidina, o cualquier otro agente que tenga efectos beneciosos sobre la hematopoyesis. Derivados acilados de nuclesidos de oxipurina que mejoran la hematopoyesis y que se administran opcionalmente junto con los compuestos anteriores tienen la siguiente estructura general:

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RA = H o un radical acilo de un cido carboxlico con de 2 a 30 tomos de carbono, y RB = H o un radical acilo de un cido carboxlico con de 2 a 30 tomos de carbono, y
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Z = H, OH, =O o NHRC , donde RC = H o un radical acilo de un cido carboxlico con de 2 a 30 tomos de carbono, y L = H u ORD , donde RD = H o un radical acilo de un cido carboxlico con de 2 a 30 tomos de carbono, y

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M = H u ORg , donde Rg = H o un radical acilo de un cido carboxlico con de 2 a 30 tomos de carbono, con la condicin de que al menos uno de L y M sea H, y Q = H, un halgeno, NHRF , donde RF es H o un radical acilo o alquilo que contiene de 1 a 10 tomos de carbono, S unido divalentemente al carbono, en cuyo caso el doble enlace carbono-nitrgeno adyacente es un enlace sencillo y un H est ligado entonces a ese nitrgeno, SRG donde RG es H o un radical acilo o alquilo que contiene de 1 a 10 tomos de carbono, O unido divalentemente al carbono, en cuyo caso el doble enlace carbono-nitrgeno adyacente es un enlace sencillo y un H est ligado entonces a ese nitrgeno, u ORH donde RH es H o un radical acilo o alquilo que contiene de 1 a 10 tomos de carbono, y el enlace C-C entre las posiciones 2 y 3 del resto de aldosa est opcionalmente presente. El nuclesido de pirimidina no metilado acilado usado en la invencin puede formularse con un compuesto capaz de mejorar la captacin y la fosforilacin de nuclesidos en clulas tales como insulina o un carbohidrato insulinognico.

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La composicin til de acuerdo con la invencin puede comprender al menos un compuesto de la invencin y 5uorouracilo.
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En otra modalidad, las composiciones para usar en la invencin comprenden un derivado acilado de uridina o desoxiuridina y un compuesto capaz de inhibir uridina fosforilasa. La uridina fosforilasa es la principal enzima implicada en el catabolismo de la uridina, formando uracilo y fosfato de ribosa. La administracin de un compuesto que inhibe uridina fosforilasa modicar la farmacocintica y la actividad biolgica de la uridina o desoxiuridina producida mediante desacetilacin de derivados acilados de estos dos nuclesidos de pirimidina no metilados. Ejemplos de inhibidores adecuados de uridina fosforilasa incluyen, pero no se limitan a, derivados de barbiturato de 5-bencilo o barbiturato de 5-benzilideno incluyendo barbiturato de 5-bencilo, barbiturato de 5-benciloxibencilo, barbiturato de 5-benciloxibencil-1-[(1-hidroxi-2-etoxi)metilo], barbiturato de 5-benciloxibencilacetil-1-[(1-hidroxi2-etoxi)metilo] y acetilaciclobarbiturato de 5-metoxibencilo, 2,2-anhidro-5-etiluridina y compuestos de aciclouridina, particularmente congneres de aciclouridina substituidos con 5-bencilo incluyendo, pero no limitados a, bencilaciclouridina, benciloxibencilaciclouridina, aminometilbencilaciclouridina, aminometilbenciloxibencilaciclouridina, hidroximetilbencilaciclouridina e hidroximetilbenciloxibencilaciclouridina. Vanse tambin WO 89/09603 y WO 91/16315. En otra modalidad de la invencin, las composiciones tiles comprenden un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado y un compuesto que inhibe la captacin o excrecin celular de nuclesidos de pirimidina no metilados, y promueve de ese modo el mantenimiento de niveles de nuclesidos en sangre despus de la desacilacin enzimtica de dosis administradas de derivados acilados de nuclesidos de pirimidina no metilados. Tales moduladores del transporte o la excrecin de uridina incluyen, pero no se limitan a, dipiridamol, dilazep, probenicid, lidoazina o nitrobenciltioinosina. En otra modalidad de la invencin, las composiciones tiles comprenden un derivado acilado de citidina y un compuesto capaz de inhibir la enzima uridina fosforilasa. La inhibicin de esta enzima es til junto con la citidina ya que la citidina se desamina en parte en la corriente sangunea despus de la desacetilacin de sus derivados acilados, proporcionando uridina a los tejidos. En otra modalidad de la invencin, las composiciones tiles comprenden un derivado acilado de citidina o desoxicitidina y un compuesto capaz de inhibir desoxicitidina desaminasa. Inhibiendo la desaminacin de desoxicitidina o citidina, los inhibidores de citidina desaminasa o desoxicitidina desaminasa, tales como tetrahidrouridina o tetrahidro2-desoxiuridina, modican la ecacia de los derivados acilados de citidina o desoxicitidina. En otra modalidad de la invencin, se usa un inhibidor de citidina desaminasa o desoxicitidina desaminasa para modicar la toxicidad de un anlogo de nuclesido antiviral o anticanceroso (vase el Ejemplo 11). En otra modalidad de la invencin, especialmente para la prevencin o el tratamiento del dao a la mucosa gastrointestinal, la composicin comprende un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado y un agente o agentes con utilidad para proporcionar curacin mucosal o para reducir la incomodidad. Ejemplos de tales agentes incluyen, pero no se limitan a, sucralfato, mezclas de dos o ms dexorribonuclesidos como los descritos en la Patente de EE.UU. 5.246.708 (Solicitud de Patente de EE.UU. 341.925, presentada el 21 de Abril de 1989), alopurinol, antibiticos tales gluconato de clorhexidina o anestsicos locales como benzocana.
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En otra modalidad de la invencin, las composiciones tiles comprenden una combinacin de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado y 5-uorouracilo. En tales composiciones, el derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado se mezcla con (o se administra de otro modo con) el anlogo de nuclesido antineoplstico en relaciones molares que varan de 1:1 a 12:1. Las relaciones molares que varan de 2:1 a 8:1 generalmente son ventajosas. Las composiciones, dependiendo del uso pretendido, se fabrican en la forma de un lquido, una suspensin, una tableta, una cpsula, una gragea, una solucin inyectable, una solucin tpica o un supositorio (vase el anlisis de la formulacin posteriormente).
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Como una alternativa a la formulacin de composiciones que contienen un compuesto de la invencin y otro agente activo (segn se analiza anteriormente), en otra modalidad, los compuestos de la invencin se coadministran con los otros agentes activos.
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D. Compuestos y composiciones tiles de acuerdo con la invencin Los compuestos tiles de acuerdo con la invencin pueden prevenir o tratar el dao al proceso de hematopoyesis y a la funcin del sistema inmunitario en animales. Los compuestos reducen el dao al proceso de hematopoyesis minimizando la prdida en los conteos de clulas sanguneas despus del dao o la supresin de la mdula sea provocados por agentes antivirales o antineoplsticos que afectan a la biosntesis, el metabolismo o la utilizacin de los nucletidos. Estos compuestos son tiles para tratar a seres humanos; sin embargo, la invencin no pretende estar limitada as, estando dentro de lo contemplado por la invencin tratar a todos los animales que experimenten un efecto benecioso a partir de la administracin de los compuestos activos de la invencin. La invencin se encarna adems en la administracin de un compuesto farmacutico una composicin farmacutica de la invencin, o en combinaciones, con el propsito de prevenir, atenuar o mitigar la toxicidad asociada con la administracin de 5-uorouracilo que afecta a la biosntesis, el metabolismo o la utilizacin de nucletidos. Estados especcos en los que se alcanzan ventajas usando los compuestos y las composiciones de acuerdo con la invencin incluyen situaciones en las que el sistema hematopoytico ha sufrido o es propenso a sufrir dao por quimioterapia, particularmente quimioterapia que afecta a la biosntesis, el metabolismo o la utilizacin de nucletidos. Tales condiciones incluyen tratar a animales, por ejemplo pacientes humanos, sometidos a quimioterapia para el cncer o quimioterapia antiviral citorreductora. Especialmente se incluyen aplicaciones veterinarias que requieren el mantenimiento de conteos de clulas en sangre. Los compuestos y las composiciones tambin son tiles para prevenir o tratar el dao provocado por agentes para quimioterapia anticancerosa o antiviral a otros tejidos, incluyendo, pero no limitados, a, el epitelio gastrointestinal. Para este propsito, los compuestos y las composiciones opcionalmente se administran oralmente, como un supositorio o parenteralmente.

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Atenuando el dao a los sistemas hematopoytico e inmunitario provocado por quimioterapia anticancerosa o antiviral, el uso de los compuestos de acuerdo con la invencin puede reducir el riesgo de susceptibilidad a infecciones oportunistas o secundarias (bacterianas, virales o fngicas).
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La ecacia de los compuestos se mejora mediante la coadministracin de agentes que estimulan la captacin y la fosforilacin de nuclesidos de pirimidina por clulas. Tales agentes incluyen factores de crecimiento hematopoyticos (por ejemplo, G-CSF, GM-CSF, SCF, nuclesidos de oxipurina acilados y sus congneres, eritropoyetina e interleuquina), insulina y carbohidratos insulinognicos tales como glucosa o polmeros de glucosa. Tratamiento de Complicaciones Asociadas con la Quimioterapia del Cncer Los conteos de glbulos blancos, y particularmente los conteos de neutrlos, de pacientes tratados con agentes para quimioterapia antineoplstica estndar (por ejemplo, 5-uorouracilo, uorodesoxiuridina, alcaloides de la vinca, ciclofosfamida y otros agentes alquilantes de mostaza de nitrgeno, daunorrubicina, doxorrubicina, metotrexato, arabinsido de citosina, 6-mercaptopurina, tioguanosina, podolotoxinas, cisplatino o combinaciones de tales agentes citorreductores) a menudo estn muy disminuidos. En el caso de agentes citotxicos que actan afectando a la biosntesis, el metabolismo o la utilizacin de los nucletidos, la administracin diaria (oral o parenteral) de una dosis ecaz (por ejemplo, 0,1-10,0 gramos) de un compuesto de la invencin, tal como triacetiluridina (u otros derivados acilados de uridina, citidina, desoxicitidina o desoxiuridina), durante varios das reduce la gravedad de la neutropenia que se produce tpicamente de varios das a varias semanas despus de que se inicie la quimioterapia. Esto reduce la probabilidad de infeccin a lo largo del desarrollo del tratamiento y hace posible que el paciente reciba dosis mayores de los agentes quimioteraputicos y/o que reciba dosis repetidas antes que pacientes comparables no tratados con el derivado o los derivados de uridina. De forma similar, las alteraciones inducidas por quimioterapia en los conteos de otros tipos de clulas sanguneas (linfocitos, plaquetas, eritrocitos, etc.) se mitigan mediante la administracin de los compuestos y las composiciones descritos aqu. El agente antineoplstico con el que han de usarse los compuestos de acuerdo con la invencin es el uorouracilo (5-FU).
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Adems de la reduccin de la citotoxicidad de anlogos de nuclesidos antineoplsticos, los derivados acilados de nuclesidos de pirimidina no metilados tambin son tiles para la reduccin de la toxicidad de agentes antineoplsticos que son depurados del cuerpo a travs de glucuronidacin. Agentes antineoplsticos que son eliminados mediante glucuronidacin incluyen, pero no se limitan a, epirrubicina y camptotecinas como irinotecn y topotecn. En este proceso, el cido glucurnico se une a compuestos txicos para facilitar su eliminacin. El cido uridindifosfoglucurnico (UDPGA) es necesario para la unin de cido glucurnico a otras molculas. La administracin de un derivado acilado de uridina o citidina incrementa los niveles celulares de UDPGA y de ese modo mejora la glucuronidacin de los compuestos txicos. En esta situacin, el derivado acilado de citidina o uridina se administra antes o al mismo tiempo que el agente antineoplstico. En una situacin clnica tpica, de 1 a 10 gramos de un derivado acilado de uridina se administran de una a cuatro veces antes de o durante la administracin del compuesto antineoplstico. Los compuestos se administran antes, durante y/o despus de la administracin de los agentes antineoplsticos o antivirales. Tpicamente, los compuestos se administran despus de una dosis de un agente para la quimioterapia del cncer, como un medio para rescatar tejidos normales despus de la administracin de una dosis antineoplstica ecaz del agente. El epitelio gastrointestinal es sensible a agentes para la quimioterapia del cncer como el uorouracilo. La mucositis, la estomatitis o la ulceracin de la mucosa gastrointestinal son efectos secundarios comunes de la quimioterapia del cncer, que dan como resultado molestias, diarrea, desequilibrios de electrolitos y prdida de peso. Los compuestos y las composiciones son tiles para prevenir o tratar el dao al tracto gastrointestinal (incluyendo la boca) provocado por agentes para la quimioterapia del cncer. Los compuestos y las composiciones se administran opcionalmente para este propsito como una solucin o suspensin en forma lquida (como un lavado bucal, como una composicin que ha de tragarse o como un enema), como una cpsula, gragea o tableta, como una solucin inyectable o como un supositorio. La administracin sistmica de los compuestos y las composiciones tambin reduce el dao a la mucosa gastrointestinal provocado por anlogos de nuclesidos anticancerosos o antivirales. La aplicacin tpica de los compuestos (por ejemplo al cuero cabelludo) de la invencin es til para prevenir la alopecia inducida por quimioterapia.
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Los derivados acilados de uridina son ventajosos para prevenir o tratar la toxicidad debida a uorouracilo o anlogos uorados relacionados de uridina (por ejemplo, uorouridina o profrmacos de la misma, uorodesoxiuridina o profrmacos de la misma, ftorafur, 5-desoxiuorouridina). Para la administracin oral, derivados acilados ventajosos de uridina son los substituidos con cidos grasos de cadena corta (especialmente acetato) o con carbiloxicarbonatos de cadena corta (por ejemplo, etoxicarbonatos). Los derivados acilados de citidina o desoxiuridina tambin son tiles para tratar la toxicidad debida a uorouracilo o anlogos de pirimidina uorados relacionados. En una situacin teraputica tpica, un paciente recibe una dosis de uorouracilo, como un solo agente de tratamiento o como parte de un rgimen que tambin implica la administracin de otros frmacos antineoplsticos como metotrexato, leucovorina, PALA o ciclofosfamida. De varias horas a un da (es decir, de 2 a 24 horas) despus de la administracin del 5-FU, el paciente recibe una dosis oral de 1 a 10 gramos de triacetiluridina. El paciente recibe dosis adicionales de TAU de un tamao similar cada de 6 a 8 horas durante el desarrollo de los 1 a 4 das siguientes. El paciente puede recibir dosis adicionales de 5-FU ms TAU sobre una base semanal o menos frecuentemente. Para el tratamiento del cncer en seres humanos, el 5FU se administra a menudo como una inyeccin en bolo semanal, durante un perodo de 6 semanas. La dosis tolerada mxima normal de 5FU en tal rgimen es de 500 a 600 mg/m2 . La administracin retardada (de 2 a 24 horas despus de 5FU) de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado permite el aumento a escala de la dosis de 5FU semanal hasta niveles mayores que 1,5 veces la dosis tolerada mxima normal (es decir, mayores que 900 mg/m2 , ventajosamente de 900 a 2000 mg/m2 , ms ventajosamente de 1000 a 1600 mg/m2 ). Un mtodo alternativo para el uso de 5FU en la clnica implica la inyeccin de dosis de 400 a 500 mg/m2 diariamente durante 4 5 das seguidos. Este rgimen de administracin se repite cada de 3 a 4 semanas. La administracin retardada de un derivado acilado de un nuclesido de piridina no metilado en este caso permite el aumento a escala similar de la dosis de 5FU hasta niveles al menos 1,5 veces mayores que las dosis toleradas normales, ventajosamente de 600 a 1000 mg/m2 , ms ventajosamente de 700 a 900 mg/m2 . En el caso de la administracin diaria de 5FU, la administracin retardada de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado se produce de 2 a 11 horas despus de cada dosis de 5 FU. Otro rgimen de dosicacin para el 5FU implica la infusin de una dosis total de 1800 a 2600 mg/m2 durante 24 horas repetida cada semana hasta una vez cada de 3 a 4 semanas. Cuando el 5FU se administra como una infusin (en comparacin con un bolo), se administran dosis acumulativas altas debido a la degradacin extensiva del 5FU. En el caso de una infusin de 5FU de 24 horas, un derivado acilado de un nuclesido de piridina no metilado se administra de 2 a 24 horas despus de la terminacin de la infusin de 5FU, permitiendo al aumento a escala de la dosis de 5FU en al menos 1,5 veces sobre las dosis toleradas normales, ventajosamente de 2800 a 4000 mg/m2 /24 horas. Un rgimen alternativo para el uso de 5FU de alta dosis con administracin retardada de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado es la administracin en bolo semanal de 5FU durante 3 semanas, seguida por una o ms semanas de descanso. Este rgimen permite la administracin de dosis de 5FU por semana superiores que el rgimen de 6 semanas descrito anteriormente. En un rgimen de 3 semanas que utiliza un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado para reducir la toxicidad de 5FU, son ventajosas dosis de 5FU en bolo en el intervalo de 1000 a 2400 mg/m2 .
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En todos los regmenes que implican el aumento a escala de la dosis de un anlogo de nuclesido antineoplstico con administracin retardada de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado, la dosis mxima del anlogo de nuclesido antineoplstico es la dosis que produce el grado de toxicidad clnicamente aceptable mximo al receptor.
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La respuesta clnica al 5FU es una funcin de la intensidad de la dosis semanal (Hryniuk y otros, Seminars in Oncology, 14 (N 4; Supl 4): 3-11 [1987]). El aumento a escala de la dosis de 5FU junto con la administracin retardada de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado incrementa la ecacia antitumoral del 5FU. Otros moduladores de la ecacia de 5FU que incluyen, pero no se limitan a, metotrexato, trimetrexato, ribsido de metilmercaptopurina, PALA, leucovorina, inhibidores del catabolismo de 5FU, levamisol, interfern o cisplatino, se administran oralmente junto con 5FU y un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado. Cuando se usan con 5FU junto con un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado, tales moduladores se administran en dosis y esquemas similares o idnticos a los determinados adecuados para su uso con 5FU en ausencia de la administracin retardada de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado. Algunos de tales moduladores tambin incrementan la toxicidad de 5FU y de ese modo reducen la dosis tolerada mxima que puede administrarse a los pacientes. Sin embargo, en estos casos, la administracin retardada de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado permite el aumento a escala de la dosis de 5FU hasta niveles mayores que 1,5 veces ms que los que podran tolerarse en ausencia de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado. De forma similar, la administracin retardada de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado permite el aumento a escala de la dosis tolerada mxima normal de otras piridinas uoradas, profrmacos de 5FU u otros anlogos de nuclesidos citotxicos. Existen diferencias individuales en la sensibilidad de los pacientes al 5FU. Sin embargo, en cualquier paciente individual, el uso de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado junto con 5FU permite el aumento a escala de la dosis de la pirimidina uorada hasta al menos 1,5 veces ms que la dosis tolerada mxima normal. La dosis tolerada mxima normal de 5FU para cualquier paciente individual se determina mediante la estimulacin con 5FU, mediante el juicio basado en la experiencia del mdico o mediante estimacin guiada por medidas de enzimas implicadas en la degradacin o el anabolismo de 5FU. El propio 5FU puede administrarse junto con un compuesto que inhibe la degradacin de 5FU por la enzima dihidropirimidina deshidrogenasa (DPD). La DPD es la enzima inicial en la degradacin del 5FU y se encuentra en altas concentraciones en el hgado. La inhibicin de esta enzima reduce la velocidad de depuracin de 5FU de la corriente sangunea mediante el hgado y otros tejidos y de ese modo permite la administracin oral de 5FU. La inhibicin de DPD tambin reduce la formacin de catabolitos de 5FU que podran contribuir a su toxicidad o que podran reducir su ecacia antitumoral. Ejemplos de inhibidores de DPD incluyen, pero no se limitan a, 5-etiniluracilo, bromoviniluracilo, uracilo, timina o benciloxibenciluracilo (BBU). En una modalidad de la invencin, el 5FU ha de administrarse junto con un inhibidor de la enzima DPD. En esta modalidad, un inhibidor de DPD se administra antes de, o al mismo tiempo que, un 5FU u otra pirimidina uorada citotxica. Un derivado acilado de uridina o citidina se administra de 2 a 24 horas despus del 5FU. La administracin retardada de un derivado acilado de uridina o citidina permite la administracin segura de dosis de 5FU superiores que las que normalmente se toleraran en conjunto, con una mejora consiguiente en la ecacia antitumoral. Los derivados acilados de uridina y, en segundo lugar, citidina tambin son ventajosos para el tratamiento o la prevencin de la toxicidad debida a cido N-fosfonoacetil-L-asprtico (PALA), pirazofurina, 6-azauridina, azaribina, triuorometil-2-desoxiuridina y 3-desazauridina. Para modular la toxicidad y la ecacia de frmacos antineoplsticos oralmente activos, particularmente pirimidina uorada oralmente activa o profrmacos de pirimidinas uoradas (tales como derivados de 5-desoxiuorouridina como tegafur (5-uoro-1-(tetrahidro-2-furfuril)uracilo), 5-desoxiuorouridina o derivados relacionados), los derivados acilados de nuclesidos de pirimidina no metilados pueden usarse de varios modos. En una modalidad de la invencin, el derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado ha de administrarse de varias horas a un da despus de una dosis de un profrmaco de uorouracilo tal como tegafur, de modo similar a la situacin con la administracin parenteral de uorouracilo descrita anteriormente. En este contexto, la administracin retardada del derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado da como resultado una toxicidad reducida de la pirimidina uorada hacia tejidos normales. En otra modalidad de la invencin, el derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado ha de administrarse al mismo tiempo que, o a menos de aproximadamente una hora de, el agente antineoplstico oralmente activo. El tegafur, un profrmaco de 5-uorouracilo oralmente activo, normalmente se administra clnicamente en una formulacin que contiene uracilo en una relacin molar de cuatro partes de uracilo a una parte de tegafur. En este contexto, el uracilo potencia la ecacia antitumoral del 5-uorouracilo producido mediante degradacin de tegafur (durante y despus de la absorcin desde el tracto intestinal hacia la corriente sangunea) compitiendo con el 5-uorouracilo con respecto a la enzima que rompe ambas molculas de pirimidina, dihidropirimidina deshidrogenasa. Sin embargo, el uracilo tambin potencia la toxicidad del 5-uorouracilo hacia tejidos normales, particularmente el intestino. El dao gastrointestinal es la principal toxicidad limitativa de la dosis de una mezcla de tegafur y uracilo. La coadministracin de tegafur (u otros anlogos de pirimidina antineoplsticos oralmente activos) con un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado da como resultado la potenciacin deseable de la toxicidad sistmica
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de, por ejemplo, 5-uorouracilo derivado de tegafur, sin potenciar su toxicidad hacia la mucosa intestinal tan drsticamente como lo hace el propio uracilo. El derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado y el anlogo de nuclesido antineoplstico oralmente activo se administran como se describe en las reivindicaciones. Para el 5uorouracilo y en dosicaciones y relaciones molares tpicamente usadas para la administracin de uracilo, vase, por ejemplo, la Patente de EE.UU. 4.328.229. Dosis superiores del agente antineoplstico oralmente activo tambin son posibles con el uso de los derivados acilados de la invencin en cuestin, segn se muestra en los Ejemplos 13 y 14 posteriormente. Los derivados acilados de desoxicitidina son ventajosos para tratar o prevenir la toxicidad debida a anlogos de nuclesidos antineoplsticos que son especcamente anlogos de citidina, por ejemplo arabinosilcitosina o profrmacos de la misma, ciclocitidina, 5-aza-2-desoxicitidina, arabinosil-5-azacitosina o 6-azacitidina. Para la administracin oral, derivados acilados ventajosos de desoxicitidina son los substituidos con cidos grasos de cadena corta, especialmente acetato. En una situacin clnica tpica que implica el uso de arabinosilcitosina o anlogos antineoplsticos relacionados de citidina, que se utilizan principalmente para el tratamiento de leucemias, el derivado o los derivados acilados de desoxicitidina se administran oralmente, en una dosis de 0,5 a 10 gramos, antes o despus de que se complete la administracin de una dosis de Ara-C, o simultneamente con la dosis de Ara-C. Dosis adicionales del derivado acilado de desoxicitidina se administran cada de 6 a 8 horas de 1 a 4 das. Las repeticiones de este rgimen de tratamiento se inician una vez a la semana o menos frecuentemente, dependiendo de la respuesta clnica. Se pretende que los agentes antineoplsticos se usen para tratar los tipos de tumores para los que se utilizan normalmente, por ejemplo Ara-C y sus anlogos de citidina relacionados son ecaces en leucemias, el uorouracilo y los anlogos de uridina uorados relacionados son tiles para tratar tumores del colon, el estmago, el pncreas, la mama y la cabeza y el cuello. De acuerdo con la invencin, los agentes antineoplsticos se administran en dosis superiores a las normales, en cuyo caso los derivados acilados de nuclesidos de pirimidina no metilados permiten una administracin ms segura de tales dosis teraputicamente agresivas superiores de los frmacos anticancerosos. Por otra parte, los incrementos en el ndice teraputico de los agentes anticancerosos resultantes del uso de los compuestos y las composiciones permiten el uso de agentes antineoplsticos particulares para tratar tumores para los que no son normalmente una terapia estndar, incluyendo, pero no limitados a, melanoma, prstata, carcinoma renal, carcinoma ovrico o cncer de pulmn. Un mtodo para identicar tipos de tumores o pacientes de cncer individuales con una alta probabilidad de respuesta a pirimidinas uoradas en alta dosis junto con un derivado acilado de nuclesidos de pirimidina no metilados implica la medida de la enzima cido graso sintetasa (FAS) en suero o en biopsias tumorales. La FAS se expresa altamente en muchos cnceres, donde puede tener un papel para proporcionar los lpidos necesarios para la divisin celular rpida (Kuhajda y otros, Proc. Nat. Acad. Sci. 91:6379-6383 [1994]). La FAS requiere un suministro de NADPH como un cofactor. Una fraccin substancial de NADPH utilizada para la sntesis de cidos nucleicos se regenera a partir de NADP a travs de la ruta de desviacin (shunt) de monofosfato de hexosa (desviacin de HMP) del metabolismo de la glucosa. La desviacin de HMP se activa mediante agotamiento de NADPH celular. Un producto de la generacin de NADPH a travs de la desviacin de HMP es la ribosa y diversos fosfatos de ribosa. Para que las clulas anabolicen rpidamente altas concentraciones de 5FU, es necesario un suministro de pirofosfato de fosforribosilo (PRPP) o 1-fosfato de ribosa (R-1-P), dependiendo de si el 5FU se convierte en monofosfato de uorouridina intracelular a travs de la enzima orotato fosforribosil transferasa o uridina fosforilasa, respectivamente. Los altos niveles de FAS en suero o biopsias tumorales son un marcador de tumores que estn produciendo activamente ribosa necesaria para el anabolismo ecaz del 5FU, y que son particularmente sensibles a altas dosis de 5FU. Tratamiento de Complicaciones Asociadas con la Infeccin Viral
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Los pacientes infectados con HIV, especialmente aquellos cuya infeccin ha progresado hasta el sndrome de inmunodeciencia adquirida (SIDA), sufren una variedad de sntomas y enfermedades que resultan de y, en algunos casos, exacerban adicionalmente un sistema inmunitario gravemente comprometido. A muchos de estos pacientes se les administran agentes quimioteraputicos antivirales, tales como AZT, que tambin tienen efectos perjudiciales sobre la funcin inmunitaria del cuerpo y sobre la hematopoyesis, disminuyendo adicionalmente la resistencia a infecciones de todos los tipos. La administracin de los compuestos -oralmente, intravenosamente o mediante inyeccin parenteraleleva los bajos conteos de clulas sanguneas debidos a agentes para quimioterapia antiviral, particularmente los que modican la sntesis, el metabolismo o la utilizacin de nucletidos, tales como AZT o didesoxicitidina. Debido a que la anemia y la mayor susceptibilidad a las infecciones son factores limitativos de la dosis y la velocidad en el tratamiento quimioteraputico de pacientes con SIDA, el tratamiento de los pacientes con estos compuestos reduce los efectos secundarios quimioteraputicos (y as mejora la calidad de vida) y, si es apropiado, permite que se emplee un rgimen quimioteraputico ms intensivo. La AZT y la didesoxicitidina producen efectos secundarios perjudiciales en tejidos distintos a la mdula sea, incluyendo el msculo y el sistema nervioso perifrico. Los compuestos y las composiciones descritas aqu tambin son tiles para tratar o prevenir tales efectos secundarios. Diversos anlogos de nuclesidos antivirales distintos a la AZT y la didesoxicitidina se usan para tratar infecciones virales, incluyendo, pero no limitadas a, HIV, herpes o hepatitis. Ejemplos de tales agentes incluyen 5-etil-2-desoxiuridina, 5-yodo-2-desoxiuridina, 5-bromo-2-desoxiuridina, 5-metilamino-2-desoxiuridina, 2,3-didesoxicitidin-2eno, 3-desoxicitidin-2-eno, 3-azido-2,3-desoxiuridina, arabinosiluracilo, didesoxiuridina, 2,3-didesoxi-3-uo21

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rotimidina y (S)-1-(3-hidroxi-2-fosfonilmetoxipropil)citosina (HPMPC); vase adems WO 89/09603. Los compuestos se usan para tratar o prevenir efectos secundarios perjudiciales de estos y otros anlogos de nuclesidos antivirales relacionados.
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En el tratamiento o la prevencin de la toxicidad debida a quimioterapia antiviral, los compuestos y las composiciones se administran antes de, durante y/o despus de la administracin de los agentes antivirales. Regmenes de quimioterapia antiviral tpicos, especialmente para infecciones virales clnicas tales como infeccin por HIV, implican la administracin diaria (a menudo muchas veces al da) del agente o los agentes antivirales. Los compuestos se administran varas veces al da, diariamente o menos frecuentemente, dependiendo del efecto clnico observado. En todos los casos, los frmacos antivirales se administran tpicamente en sus regmenes normales para los tipos de infecciones virales para los que son clnicamente tiles. El tratamiento de pacientes que reciben anlogos de nuclesidos antivirales se realiza para permitir la administracin de dosis de agentes antivirales superiores que las que son normalmente toleradas o utilizadas. Para el tratamiento de la toxicidad debida a AZT, son tiles derivados acilados de cualquiera o todas de uridina, citidina o desoxicitidina. Particularmente ventajosos son los derivados acilados de desoxicitidina. Para la administracin oral, son ventajosos los derivados acilados de desoxicitidina, uridina y citidina substituidos con cidos grasos de cadena corta (particularmente acetato) o con carbiloxicarbonatos de cadena corta (por ejemplo, etoxicarbonato). En una situacin clnica tpica, un paciente recibe AZT de dos a cuatro veces al da y generalmente debe hacerlo indenidamente. Dosis de 1 a 10 gramos de derivados acilados de uridina, citidina o desoxicitidina (o mezclas de dos o los tres) se administran oralmente de una vez a la semana hasta aproximadamente cuatro veces al da, dependiendo de la respuesta clnica. Para el tratamiento o la prevencin de la toxicidad debida a didesoxicitidina, son ventajosos derivados acilados de desoxicitidina. Tratamiento de Complicaciones Asociadas con la Infeccin Malrica

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Los parsitos malricos, por ejemplo, Plasmodium yoelii o Plasmodium falciparum, dependen de las rutas de sntesis de novo para la biosntesis de nucletidos de pirimidina; las clulas de mamfero en general pueden utilizar rutas de novo o rutas salvajes, a travs de las cuales precursores de nucletidos avanzados tales como uridina o citidina se incorporan en conjuntos de nucletidos intracelulares. El 5-uoroorotato, un anlogo del precursor de nucletido de pirimidina cido ortico, es txico para los parsitos malricos que dependen de la biosntesis de pirimidina de novo. Otros inhibidores de la biosntesis de pirimidina de novo, tales como el PALA, la pirazofurina o la 6-azauridina, tambin son txicos de forma similar para los parsitos de la malaria. Los inhibidores de la biosntesis de pirimidina, incluyendo especialmente el uoroorotato, tambin son txicos para los mamferos. Sin embargo, la administracin de uridina a mamferos tratados con 5-uoroorotato (u otros inhibidores de la biosntesis de pirimidina) atena la toxicidad para el husped debido a lo ltimo sin deteriorar su actividad antimalrica. Los agentes oralmente activos que elevan los niveles de uridina en sangre son fuentes ventajosas de uridina en este contexto. Tales agentes incluyen los derivados acilados de uridina o citidina de la invencin. En el tratamiento de la malaria, se administra una dosis antimalrica ecaz de uoroorotato. Antes, despus o al mismo tiempo que la administracin de uoroorotato, se administra un derivado acilado de uridina o citidina (la triacetiluridina es particularmente ventajosa), en una dosis suciente para atenuar la toxicidad del uoroorotato. Dosis tpicas de un derivado de uridina o citidina acilado tal como triacetiluridina varan de 1 a 10 gramos, administrados tan a menudo como sea necesario para minimizar la toxicidad del uoroorotato, por ejemplo de una a cuatro veces al da. Las dosis de uoroorotato o uridina se repiten opcionalmente segn sea necesario para vencer la infeccin malrica y para reducir la toxicidad hacia el husped, respectivamente. E. Administracin y formulacin de compuestos y composiciones para usar en la invencin Los compuestos y las composiciones descritos aqu se administran oralmente, mediante inyeccin parenteral, intravenosamente, tpicamente o por otros medios, dependiendo del estado que se trate.

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La dosis y los esquemas de dosicacin ptimos para la triacetiluridina (u otros derivados acilados de uridina, citidina, desoxicitidina o desoxiuridina) son determinados fcilmente por un experto en la tcnica, controlando el efecto teraputico.
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Los compuestos y las composiciones se administran crnicamente o intermitentemente. Los compuestos y las composiciones se administran antes de, durante o despus de una exposicin a agentes para quimioterapia citorreductora o antiviral, dependiendo de las caractersticas de la toxicidad de los agentes para quimioterapia. Derivados acilados ventajosos de uridina, citidina, desoxicitidina o desoxiuridina para la administracin oral son los substituidos con cidos grasos de cadena corta (2-6 carbonos) sobre los grupos hidroxilo de sus anillos de ribosa o desoxirribosa. Tambin son ventajosos para la administracin oral nuclesidos de pirimidina substituidos en sus grupos hidroxilo con radicales hidrocarbiloxicarbonilo que contienen 3-7 tomos de carbono.
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Las dosicaciones para derivados acilados de uridina, citidina, desoxicitidina o desoxiuridina administrados oralmente varan tpicamente de 0,5 a 20 gramos al da, lo ms comnmente de 2 a 10 gramos al da.
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Los derivados acilados de uridina, citidina, desoxicitidina o desoxiuridina en polvo se administran oralmente en forma de cpsulas o tabletas, aunque las soluciones, las emulsiones o las suspensiones tambin son tiles para la administracin oral. Los compuestos se formulan opcionalmente en matrices biodegradables, bioerosionables u otras de liberacin gradual para la liberacin sostenida de los compuestos despus de la administracin oral o la implantacin subcutnea. En el caso de la inyeccin intravenosa o intramuscular, los compuestos se formulan opcionalmente en liposomas. Los compuestos farmacolgicamente activos opcionalmente se combinan con portadores farmacuticamente aceptables adecuados que comprenden excipientes y adyuvantes que facilitan el procesamiento de los compuestos activos. Estos se administran como tabletas, grageas, cpsulas y supositorios. Las composiciones se administran, por ejemplo, oralmente, rectalmente, vaginalmente o se liberan a travs del saco bucal de la boca, y opcionalmente se aplican en forma de solucin mediante inyeccin, oralmente o mediante administracin tpica. Las composiciones pueden contener de aproximadamente 0,1 a 99 por ciento, preferiblemente de aproximadamente 50 a 90 por ciento, del compuesto o los compuestos activos, junto con el excipiente o los excipientes. Para la administracin parenteral mediante inyeccin o infusin intravenosa, los compuestos activos se suspenden o disuelven en un medio acuoso tal como agua o solucin salina estril. Las soluciones o suspensiones inyectables contienen opcionalmente un agente tensioactivo tal como steres de polioxietilensorbitn, steres de sorbitn, teres de polioxietileno o agentes solubilizantes como propilenglicol o etanol. La solucin contiene tpicamente de 0,01 a 5% de los compuestos activos. Los compuestos activos opcionalmente se disuelven en aceite vegetal de calidad farmacutica para inyeccin intramuscular. Tales preparaciones contienen de aproximadamente 1% a 50% del compuesto o los compuestos activos en aceite. Excipientes adecuados incluyen cargas tales como azcares, por ejemplo lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol, preparaciones de celulosa y/o fosfatos clcicos, por ejemplo fosfato triclcico o hidrogenofosfato clcico, as como aglutinantes tales como pasta de almidn, usando, por ejemplo, almidn de maz, almidn de trigo, almidn de arroz o almidn de patata, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa sdica y/o polivinilpirrolidona. Los adyuvantes incluyen agentes reguladores del ujo y lubricantes, por ejemplo slice, talco, cido esterico o sales del mismo, tales como estearato magnsico o estearato clcico, y/o polietilenglicol. Los ncleos de gragea se proveen de revestimientos adecuados que, si se desea, son resistentes a los jugos gstricos. Para este propsito, se usan soluciones de azcar concentradas, que opcionalmente contienen goma arbiga, talco, polivinilpirrolidona, polietilenglicol y/o dixido de titanio, soluciones de laca y disolventes o mezclas de disolventes orgnicos adecuados. Para producir revestimientos resistentes a los jugos gstricos, se usan soluciones de preparaciones de celulosa adecuadas tales como ftalato de acetilcelulosa o ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa. Colorantes o pigmentos se aaden opcionalmente a las tabletas o los revestimientos de gragea, por ejemplo, para identicacin o para caracterizar diferentes dosis de compuesto. Las preparaciones farmacuticas para usar en la presente invencin se fabrican de una manera que es conocida de por s, por ejemplo, por medio de procedimientos de mezcladura, granulacin, elaboracin de grageas, disolucin o liolizacin convencionales. As, las preparaciones farmacuticas para uso oral se obtienen combinando el compuesto o los compuestos activos con excipientes slidos, opcionalmente triturando la mezcla resultante y procesando la mezcla de grnulos, despus de aadir adyuvantes adecuados, si se desea o es necesario para obtener tabletas o ncleos de gragea. Otras preparaciones farmacuticas que son tiles para el aporte oral incluyen cpsulas de ajuste a presin hechas de gelatina, as como cpsulas selladas blandas hechas de gelatina y un plasticante tal como glicerol o sorbitol. Las cpsulas de ajuste a presin contienen el compuesto o los compuestos activos en forma de grnulos que opcionalmente estn mezclados con cargas tales como lactosa, aglutinantes tales como almidones y/o lubricantes tales como talco o estearato magnsico y, opcionalmente, estabilizantes. En las cpsulas blandas, los compuestos activos se disuelven o suspenden preferiblemente en lquidos adecuados tales como cidos grasos, parana lquida o polietilenglicoles. Adems, se aaden opcionalmente estabilizantes. Formulaciones adecuadas para la administracin parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua, por ejemplo sales solubles en agua. Adems, se administran suspensiones de los compuestos activos segn sea apropiado en suspensiones para inyeccin oleosas. Disolventes o vehculos liplos adecuados incluyen aceites grasos, por ejemplo aceite de ssamo, o steres de cido graso sintticos, por ejemplo oleato de etilo o triglicridos. Las suspensiones acuosas para inyeccin incluyen opcionalmente substancias que incrementan la viscosidad de la suspensin que incluyen, por ejemplo, carboximetilcelulosa sdica, sorbitol y/o dextrano. La suspensin contiene opcionalmente estabilizantes.

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En otra modalidad, los compuestos activos se formulan como parte de una locin cutnea para administracin tpica. Disolventes o vehculos liplos adecuados incluyen aceites grasos, por ejemplo aceite de ssamo o aceite de coco, o steres de cido graso sintticos, por ejemplo oleato de etilo o triglicridos.
5

En otra modalidad, los compuestos activos se formulan en vehculos adecuados para el tratamiento directo de la mucosa gastrointestinal. Ejemplos incluyen lavados bucales, lquidos (soluciones o suspensiones) que han de tragarse o uidos viscosos (por ejemplo, soluciones de metilcelulosa, carboximetilcelulosa, goma de xantano, etc.) que se administran oralmente o rectalmente. Otras preparaciones farmacuticas que se usan rectalmente, especialmente para el tratamiento del colon y el recto, incluyen, por ejemplo, supositorios que consisten en una combinacin de compuestos activos con una base para supositorios. Bases para supositorios adecuadas son, por ejemplo, triglicridos naturales o sintticos, hidrocarburos parafnicos, polietilenglicoles o alcanoles superiores. Adems, son tiles cpsulas rectales de gelatina que consisten en una combinacin de los compuestos activos con una base. Materiales de base incluyen, por ejemplo, triglicridos lquidos, polietilenglicoles o hidrocarburos parafnicos. F. Sntesis de los compuestos

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Los derivados acilados de nuclesidos de pirimidina no metilados se sintetizan haciendo reaccionar un nuclesido de pirimidina con un cido carboxlico activado. Un cido carboxlico activado es uno que se ha tratado con reactivos apropiados para hacer a su carbono del carboxilato ms susceptible al ataque nuclelo de lo que es el caso en el cido carboxlico original. Ejemplos de cidos carboxlicos activados tiles para la sntesis de los compuestos de la invencin son cloruros de cido, anhdridos de cido, steres de N-hidroxisuccinimida o cidos carboxlicos activados con BOP-DC. Los cidos carboxlicos estn alternativamente conectados a nuclesidos de pirimidina con reactivos de acoplamiento como diciclohexilcarbodiimida (DCC). Durante la preparacin de los compuestos acilados, cuando la fuente de cido del derivado de cido acilado tiene grupos que intereren con las reacciones de acilacin, por ejemplo, grupos hidroxilo o amino, estos grupos se bloquean con grupos protectores, por ejemplo, teres t-butildimetilsillicos o grupos t-BOC, respectivamente, antes de la preparacin del anhdrido. Por ejemplo, el cido lctico se convierte en cido 2-t-butildimetilsiloxipropinico con t-butildimetilclorosilano, seguido por hidrlisis del ster sillico resultante con base acuosa. El anhdrido se forma haciendo reaccionar el cido protegido con DCC. Con los aminocidos, se prepara el derivado de N-t-BOC o N-CBZ, usando tcnicas estndar, que se convierte a continuacin en el anhdrido con DCC. Con cidos que contienen ms de un grupo carboxilato (por ejemplo, cido succnico, fumrico o adpico) el anhdrido de cido del cido dicarboxlico deseado se hace reaccionar con un nuclesido de pirimidina en piridina o piridina ms dimetilformamida o dimetilacetamida. Los aminocidos se acoplan a los grupos amino exocclicos de la citosina y la desoxicitosina y a grupos hidroxilo en el resto de aldosa de nuclesidos de pirimidina, mediante mtodos estndar usando DCC en un disolvente adecuado, particularmente una mezcla de (i) cloruro de metileno y (ii) dimetilacetamida o dimetilformamida. Los derivados carbiloxicarbonlicos de nuclesidos de pirimidina no metilados se preparan haciendo reaccionar el nuclesido con el cloroformiato de carbilo apropiado en un disolvente tal como piridina o piridina ms dimetilformamida bajo condiciones anhidras. El disolvente se retira bajo vaco y el residuo se purica mediante cromatografa en columna. Ser obvio para el experto en la tcnica que pueden usarse otros mtodos de sntesis para preparar los compuestos tiles para la invencin.

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Los siguientes ejemplos 15 y 16 son ilustrativos, pero no limitativos de los mtodos de la presente invencin, los otros ejemplos son comparativos. Ejemplos

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Ejemplo 1 La administracin oral de triacetiluridina mitiga la toxicidad hematolgica del 5-uorouracilo. Propsito

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Este estudio se efectu para determinar si la administracin oral de TAU poda liberar a ratones de la toxicidad por 5-FU ms ecazmente que la administracin oral de la propia uridina. Se usaron la celularidad de la mdula sea y los conteos de clulas de sangre perifrica como un ndice de la toxicidad de 5-FU.
65

Mtodos A 45 ratones Balb/C hembra (20 gramos cada uno) se les administr 5-uorouracilo (150 mg/kg, i.p.) a las 12:00 de la noche el da inicial del experimento. Estos animales se dividieron a continuacin en cinco grupos: control (agua,
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p.o.), uridina oral a 400 mg/kg/dosis, uridina oral a 800 mg/kg/dosis, uridina parenteral (i.p.) a 400 mg/kg/dosis y TAU oral a 500 mg/kg/dosis.
5

Dos horas despus de la administracin de 5-FU, se comenzaron los tratamientos de liberacin con uridina o triacetiluridina. Los grupos reciban su tratamiento indicado a las 2:00 p.m., 4:00 p.m. y 6:00 p.m. el da de la administracin de 5-FU, y a las 9 a.m., 11:00 a.m., 1:00 p.m., 3:00 p.m. y 5:00 p.m. al da siguiente. Cada dosis de uridina o TAU se administr en 0,2 ml de agua mediante sonda o en 0,2 ml de solucin salina mediante inyeccin i.p., segn fuera apropiado. Siete das despus de la administracin de 5-FU, sangre (0,2-0,3 ml) de cinco ratones de cada grupo se recogi del seno suborbital en EDTA para el conteo de clulas sanguneas diferencial subsiguiente. Los ratones fueron sacricados mediante dislocacin cervical; los fmures se extirparon y sus contenidos de clulas se expelieron para el conteo; los bazos tambin se extirparon y se pesaron. Trece das despus de la administracin de 5-FU, los cuatro ratones restantes de cada grupo se sangraron, se sacricaron y sus bazos se extirparon. Resultados Da Siete

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La administracin de 5-FU daba como resultado disminuciones en los conteos de todos los tipos de clulas sanguneas examinados. Siete das despus de la administracin de 5-FU, los conteos de neutrlos, linfocitos y plaquetas en animales tratados con TAU oral eran signicativamente superiores que en animales de control (Tabla 1). Es particularmente notable que los conteos de leucocitos en los ratones que reciban TAU fueran superiores que en ratones que reciban una dosis equimolar de uridina mediante inyeccin intraperitoneal. Los conteos de clulas en los ratones que reciban TAU oral tambin eran superiores que en ratones que reciban uridina oralmente en dosis equimolares (400 mg/kg/dosis) o dos veces equimolares (800 mg/kg/dosis). Los conteos de plaquetas estaban dentro del intervalo normal (700-800 K/l) en los ratones que reciban TAU oral y uridina i.p. Eran inferiores a lo normal en los otros grupos y muy bajos en los ratones de control (Tabla 1).

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Los conteos de clulas de la mdula sea eran signicativamente mayores en los ratones tratados con TAU oralmente y con uridina parenteralmente que en cualquiera de los otros grupos (Tabla 2). Da Once
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De forma importante, los niveles de neutrlos y RBC eran superiores en el grupo que reciba TAU que en los otros grupos de tratamiento, incluyendo ratones que reciban una dosis equimolar de uridina mediante inyeccin intraperitoneal (Tabla 3).
40

El peso del bazo es un ndice de la actividad hematopoytica en ratones que se recuperan de dao en la mdula sea. Once das despus del 5-FU, el peso del bazo era signicativamente superior en ratones a los que se daba TAU oral en comparacin con los otros grupos de tratamiento; los bazos eran ms pequeos en el grupo de control (Tabla 4). Conclusin

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Los resultados de este estudio muestran que la administracin oral de TAU libera a los ratones de la toxicidad por 5-FU ms ecazmente que la administracin oral de la propia uridina equimolar y dos veces equimolar, y ms ecazmente que una dosis equimolar de uridina dada mediante inyeccin intraperitoneal.
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TABLA 1 Conteos de clulas sanguneas 7 das despus de 5-FU Glbulos blancos Control Urd 400 oral Urd 800 oral Urd 400 i.p. TAU 500 oral 3,4 0,1 4,4 0,5* 4,6 0,4* 4,6 0,4* 5,9 0,4* Neutrlos Linfocitos Plaquetas Glbulos rojos 8,05 0,11 7,66 0,12 8,24 0,26 8,06 0,05 8,27 0,16

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0,24 0,05 0,48 0,23 0,88 0,22* 0,83 0,24* 1,20 0,23**

3,18 0,07 3,01 0,77 3,76 0,27 3,80 0,30 4,72 0,36**

387 72 K/l 434 114 646 108 773 54** 723 57**

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Todas las unidades de conteo de clulas sanguneas son K/l, excepto los glbulos rojos, que son M/l * = mayor que el valor de control, p < 0,05 ** = mayor que el valor de control, p < 0,01
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TABLA 2 Conteos de clulas de la mdula y peso del bazo 7 despus de 5-FU
5

Conteos de clulas de la mdula Control Urd 400 oral Urd 800 oral Urd 400 i.p. TAU 500 oral 1,5 0,2 x 106 /fmur 1,6 0,2 x 106 2,9 0,9 x 106 5,0 0,7 x 106 ** 3,0 0,5 x 106 *

Peso del bazo 71 2,6 mg 74 2,4 74 6,4 78 5,5 78 3,5

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* = mayor que el valor de control, p < 0,05 ** = mayor que el valor de control, p < 0,01

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TABLA 3 Conteos de clulas sanguneas 11 das despus de 5-FU Glbulos blancos Control Urd 400 oral Urd 800 oral Urd 400 i.p. TAU 500 oral 5,2 0,3 4,6 0,5 4,9 0,4 5,1 0,5 5,4 0,5 Neutrlos Linfocitos Plaquetas Glbulos rojos 7,31 0,05 7,44 0,14 7,33 0,16 7,78 0,22 8,05 0,16**

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0,48 0,12 0,84 0,19 0,82 0,19 1,20 0,21* 1,89 0,12**

4,68 0,11 3,65 0,27 4,07 0,38 3,84 0,38 3,29 0,36

2280 193 1940 177 2127 143 1706 88 1446 160

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Todas las unidades de conteo de clulas sanguneas son K/l, excepto los glbulos rojos, que son M/l * = mayor que el valor de control, p < 0,05 ** = mayor que el valor de control, p < 0,01

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TABLA 4 Peso del bazo 11 das despus de 5-FU

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Peso del bazo Control Urd 400 oral Urd 800 oral Urd 400 i.p. TAU 500 oral * = mayor que el valor de control, p < 0,05 ** = mayor que el valor de control, p < 0,01 Ejemplo 2 76 7 mg 103 15 99 6* 104 6* 143 11**

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La TAU acelera la recuperacin hematopoytica en animales tratados con 5-FU de una manera dependiente de la dosis. Propsito
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El propsito de este experimento era conrmar y extender los hallazgos previos de que la TAU administrada oralmente acelera la recuperacin hematopoytica en ratones tratados con 5-uorouracilo (5-FU) y observar la relacin entre dosis crecientes de TAU y las respuestas del sistema hematopoytico de estos ratones tratados con 5-FU.
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Mtodos A setenta ratones Balb/c hembra que pesaban aproximadamente 20 gramos se les dio una inyeccin i.p. de 5-FU (150 mg/kg) a las 1:00 p.m. el da inicial del estudio. Estos animales se dividieron a continuacin en cinco grupos de tratamiento diferentes: control (agua) y TAU oral en dosis de 100, 250, 500 y 1.000 mg/kg/tratamiento. Los compuestos de prueba se dieron a continuacin a las 3:00, 5:00, 7:30 y 10:00 p.m. el da de la administracin del 5-FU; a las 9:00 a.m., 11:00 a.m. y 1:00, 3:00, 6:00 y 10:00 p.m. al da siguiente; y una administracin nal a las 11:00 a.m. dos das despus de la inyeccin simple de 5-FU. Cada tratamiento se dio oralmente en un volumen de 0,2 ml de agua (mediante sonda), excepto la dosis ms alta de TAU que se administr en 0,4 ml de agua. Los das 7 y 11 despus de la administracin de 5-FU, se recogi sangre (0,2-0,3 ml) de siete ratones de cada grupo mediante sangrado retroorbital en EDTA para el conteo de clulas sanguneas diferencial subsiguiente. Los ratones fueron sacricados mediante dislocacin cervical; sus fmures derechos se extirparon y los contenidos se expelieron para el conteo de clulas; y sus bazos se retiraron y pesaron.
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Resultados Da Siete
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Con dosis crecientes de TAU haba nmeros crecientes de clulas nucleadas en la mdula sea. Aunque el nmero de tales clulas en el grupo que reciba TAU 100 era aproximadamente igual al del grupo de control, las diferencias en la celularidad de la mdula sea eran signicativamente mayores en los grupos TAU 500 y TAU 1.000 en comparacin con los controles (Tabla 5). El tratamiento con TAU en dosis de 500 y 1.000 mg/kg/tratamiento daba como resultado conteos de glbulos blancos signicativamente mayores que los del grupo de control. Los conteos de neutrlos totales tambin parecan incrementarse de una manera dependiente de la dosis, alcanzando aproximadamente niveles tres veces superiores en el grupo TAU 1.000 en comparacin con los controles.

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En los grupos tanto TAU 500 como TAU 1.000, los conteos de linfocitos se elevaban signicativamente en comparacin con los del grupo de control.
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Los conteos de plaquetas se elevaban signicativamente en los grupos de TAU 250, 500 y 1.000. La curva de respuesta a la dosis pareca hacerse horizontal a aproximadamente 500 mg/kg/tratamiento (Tabla 6). TABLA 5

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Efecto de dosis crecientes de TAU sobre la hematopoyesis en ratones siete das despus de la administracin de 5FU. Todos los conteos de clulas sanguneas eran K/l

Mdula sea
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Glbulos blancos 2,46 0,13 2,47 0,04 2,76 0,20 4,06 0,14* 3,57 0,25*

Neutrlos 0,026 0,011 0,014 0,008 0,027 0,012 0,037 0,020 0,071 0,027

Linfocitos 2,43 0,13 2,46 0,04 2,71 0,20 3,99 0,015* 3,44 0,23*

50

Control TAU 100 TAU 250 TAU 500 TAU 1000

1,70 0,35 1,77 0,18 2,91 0,48 3,93 0,39* 4,42 0,34*

* indica diferente del control, p < 0,01

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TABLA 6 Efecto de dosis crecientes de TAU sobre glbulos rojos (GR) y plaquetas (PLT) en ratones siete das despus de la administracin de 5-FU
5

GR Control TAU 100 TAU 250 TAU 500 TAU 1000 ** indica diferente del control, p < 0,01 Da Once
20

PLT 308 52 440 46 601 46** 712 42** 715 35**

10

8,38 0,18 8,20 0,07 8,51 0,06 8,43 0,16 8,65 0,15

15

El peso del bazo se elevaba algo con cada dosis de TAU en comparacin con los controles, pero alcanzaba una signicacin estadstica solo en el grupo TAU 250 (104,2 3,5 mg frente a 79,7 3,1; p < 0,05). Los conteos de neutrlos totales eran signicativamente mayores que los valores de control en los grupos TAU 250, 500 y 1.000. Los conteos de glbulos rojos se incrementaban signicativamente en el grupo TAU 500 (8,72 0,18 x 106 por microlitro) y el grupo TAU 1000 (8,63 0,16 x 106 por microlitro) en comparacin con los controles (7,90 0,09 x 106 por microlitro). El hematocrito segua un patrn similar (Tabla 7).

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TABLA 7 Efecto de dosis crecientes de TAU sobre el hematocrito (HCT) en ratones siete (7d) y once (11d) das despus de la administracin de 5-FU Control HCT (7d) HCT (11d) Conclusiones Los resultados de este experimento conrman y extienden los hallazgos previos de que el tratamiento de animales que reciben el agente quimioteraputico 5-FU con TAU invierte drsticamente los efectos perjudiciales del 5-FU sobre el sistema hematopoytico, y que lo hace de una manera dependiente de la dosis. Ejemplo 3 Los derivados acilados de uridina mitigan la toxicidad para la mdula sea del 5-uorouracilo.
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T100 37,77 0,37 36,80 0,88

T250 40,04 0,38 37,47 0,83

T500 39,50 0,61 41,16 0,88 p < 0,01

T1000 40,84 0,68 41,55 0,77 p < 0,001

38,50 0,88 36,94 0,51

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Propsito El propsito de este experimento era probar y comparar la ecacia de la uridina y los derivados de uridina para atenuar el dao al sistema hematopoytico de ratones provocado por el agente quimioteraputico 5-uorouracilo (5FU). Mtodos
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A noventa y ocho ratones Balb/C hembra que pesaban aproximadamente 20 gramos cada uno se les dio una inyeccin de 150 mg/kg de una vez (i.p.) de 5-FU a la 1 p.m. el da inicial del estudio. Estos animales se dividieron a continuacin en siete grupos: control (solucin salina), uridina (300 mg/kg/tratamiento), triacetiluridina (TAU; 450 mg/kg/tratamiento), benzoiluridina (BU; 428 mg/kg/tratamiento), etoxicarboniluridina (ECU; 389 mg/kg/tratamiento), octanoiluridina (OU; 455 mg/kg/tratamiento) y valeriluridina (VU; 403 mg/kg/tratamiento). Todas estas dosis son
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equimolares y se administraron en un volumen de 0,4 ml mediante inyeccin i.p. Los grupos se trataron a las 3:30, 6:00 y 8:30 p.m. el da inicial con sus agentes respectivos. Al da siguiente estos compuestos se administraron a las 9:30 a.m., 12:00 de la noche, 2:30 y 5:00 p.m. Un tratamiento nal se dio al da siguiente a las 10:00 a.m.
5

Los das siete y once despus de la administracin de 5-FU, se recogi sangre (0,2-0,3 ml) de siete ratones de cada grupo mediante sangrado retroorbital en EDTA para el conteo de clulas sanguneas diferencial subsiguiente. Los ratones fueron sacricados mediante dislocacin cervical; sus fmures derechos se extirparon y los contenidos se expelieron para el conteo de clulas; y sus bazos se retiraron y pesaron. Resultados Da Siete

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Incluso en este primer punto temporal cada uno de los derivados de uridina aceleraba uno o ms aspectos de la recuperacin hematopoytica despus del dao por 5-FU. As, el peso del bazo se elevaba en todos los grupos en comparacin con los controles de solucin salina. Estas diferencias alcanzaban signicacin estadstica (p < 0,05) en los grupos de uridina (80,4 7,8 mg), ECU (75,7 V 5,0 mg) y VU (69,1 V 1,7 mg) cuando se comparaban con los controles (62,7 1,8). La TAU incrementaba la celularidad de la mdula sea en 40% sobre los valores de control (4,50 0,77 X 103 por microlitro frente a 2,78 0,45 x 103 por microlitro, respectivamente). Los conteos de glbulos blancos se elevaban signicativamente en los grupos tanto tratado con ECU (7,26 0,31 x 103 por microlitro; p > 0,01) como tratado con VU (6,57 0,49 x 103 por microlitro; p < 0,05) en comparacin con los controles (4,60 0,70 x 103 por microlitro). Los conteos de plaquetas eran signicativamente mayores en los grupos tratados con uridina (785,3 57,5 x 103 por microlitro; p < 0,02), BU (829,6 x103 por microlitro; p < 0,01) y VU (825,7 26,7 x 103 por microlitro; p < 0,002) que los de los controles tratados con solucin salina (523,2 71,4 x 103 por microlitro).

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Haba una tendencia a conteos de neutrlos totales superiores en casi todos los grupos de tratamiento, pero slo VU (0,141 0,027 x 103 por microlitro) era realmente estadsticamente signicativamente mayor (p < 0,002) que los controles de solucin salina (0,013 0,009 x 103 por microlitro).
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Los conteos de linfocitos eran signicativamente mayores en el grupo tratado con ECU (7,19 0,32 x 103 por microlitro; p < 0,01) y VU (6,42 0,49 x 103 por microlitro) que en los controles tratados con solucin salina (4,59 0,70 x 103 por microlitro). A las dosis usadas en este experimento particular, la octanoiluridina, que tena la cadena de carbonos ms larga que cualquiera de los otros derivados, resultaba ser algo perjudicial. No haba sucientes animales procedentes de este grupo para proporcionar datos del da 11. Sin embargo, en estudios de optimizacin de la dosis (vase el Ejemplo 3A), la octanoiluridina administrada a una dosis inferior mostraba efectos muy beneciosos sobre la recuperacin hematopoytica despus de 5-FU. Da Once Virtualmente cada ndice de la funcin hematopoytica, incluyendo el peso del bazo, los conteos de glbulos blancos, los conteos de glbulos rojos, el hematocrito, los conteos de neutrlos y el conteo de linfocitos, se mejoraba signicativamente mediante el tratamiento con los derivados de uridina usados en este experimento (Tabla 8). Los pesos de los bazos se elevaban por encima de los de los controles (94,7 7,4) en todos los grupos de tratamiento, alcanzando una signicacin estadstica (p < 0,05) en los grupos de uridina (121,6 9,7), BU (126,9 12,3) y VU (139,4 8,0). Conclusiones

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Una amplia variedad de los derivados de uridina es ecaz para mitigar el dao provocado por la administracin del agente quimioteraputico 5-FU.
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TABLA 8 Efecto de la uridina y los derivados de uridina sobre la hematopoyesis en ratones once das despus de la administracin de 5-FU. Los conteos de glbulos blancos (GB), los conteos de neutrlos (Neut) y los conteos de linfocitos (lin) se expresan todos en K/l; los conteos de glbulos rojos (GR) en M/l GB
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GR 7,11 0,1 7,32 0,2 7,35 0,2 7,62 0,1** 7,65 0,2* 7,83 0,1**

% de HCT 32,97 0,4 34,67 0,09 35,01 1,2 36,887 0,6** 37,54 1,0** 38,31 0,08**

Neut 0,09 0,047 0,60 0,180** 0,55 0,164** 1,04 0,295** 0,66 0,166** 0,97 0,136**

Lin 3,3 0,7 4,6 0,4 5,6 0,4* 5,1 0,4* 4,8 0,5* 5,2 0,4*

15

Con Urd TAU BU ECU VU

3,37 0,68 5,20 0,47* 6,23 0,55** 6,20 0,49** 5,51 0,64* 6,31 0,42**

20

* indica diferente del control, p < 0,05 ** indica diferente del control, p < 0,01 Con = control; Urd = uridina; TAU = triacetiluridina; BU = benzoiluridina; ECU = etoxicarboniluridina; VU = valeriluridina Ejemplo 3A La octanoiluridina atena la toxicidad hematolgica de 5-FU. Propsito

25

30

El propsito de este experimento era probar la ecacia de la octanoiluridina (Oct-U) para mitigar los efectos txicos del 5-uorouracilo (5-FU) sobre la hematopoyesis. Mtodos

35

40

A catorce ratones hembra Balb/C que pesaban aproximadamente 20 gramos cada uno se les dio una inyeccin i.p. de 75 mg/kg de una vez de 5-FU a las 11:00 a.m. el da inicial del estudio. La mitad de estos animales se trat subsiguientemente con Oct-U (100 mg/kg/tratamiento, i.p.) mientras que la otra mitad (controles) se inyect con solucin salina siolgica. La administracin de Oct-U y solucin salina se produca a las 2:30, 4:30 y 7:00 p.m. el da inicial y a las 9:30 a.m., 12:00 de la noche, 2:30 y 5:00 p.m. al da siguiente. Un grupo adicional de siete ratones (basales) no reciba ni 5-FU ni tratamiento. Resultados

45

50

La administracin de 5-FU daba como resultado un dao estadsticamente signicativo al sistema hematopoytico, segn se mide mediante todos y cada uno de los ndices empleados en este estudio, incluyendo peso del bazo, celularidad de la mdula sea, conteo de GB, conteo de neutrlos totales, conteo de linfocitos, conteo de GR, porcentaje de hematocrito y conteo de plaquetas (Tablas 9 y 10). El tratamiento subsiguiente de ratones que reciban 5-FU con OctU daba como resultado una mejora substancial en todos y cada uno de estos parmetros de la funcin hematopoytica (Tabla 9 y 10). Conclusin El tratamiento de ratones que reciban 5-FU con octanoiluridina mitiga los efectos txicos del 5-FU sobre la hematopoyesis.

55

60

65

30

ES 2 257 721 T3
TABLA 9 Efecto de la octaoniluridina sobre la celularidad de la mdula sea y la mielopoyesis en ratones siete das despus de la administracin de 5-FU. Todos los conteos son en miles por microlitro
5

Mdula Basal Control Oct-U 8,96 0,32 4,16 0,40* 7,73 0,68**

GB 6,89 0,25 4,04 0,19* 5,96 0,47**

Neut 1,85 0,24 0,26 0,03* 1,19 0,22**

Lin 4,78 0,23 3,74 0,19* 4,62 0,29**

10

15

* indica p < 0,01 frente a los basales ** indica p < 0,01 frente a los controles TABLA 10

20

Efecto de la octanoiluridina sobre los glbulos rojos (GR), las plaquetas (PLT) y el peso del bazo en ratones siete das despus de la administracin de 5-FU GR (M/l) PLT (K/l) 897 21 963 13* 1243 59** Peso del bazo (mg) 83,6 1,7 75,4 2,4* 87,2 3,7**

25

Basal Control Oct-U

30

8,56 0,17 7,98 0,13* 8,13 0,14

* indica p < 0,05 frente al basal ** indica p < 0,05 frente al control Ejemplo 4 Niveles de uridina en plasma despus de la administracin de derivados acilados de uridina Mtodos

35

40

45

50

Los niveles de uridina en plasma se determinaron en ratones en diversos momentos (15 minutos, 30 minutos, 1 hora y 2 horas) despus de la administracin de los derivados acilados de uridina utilizados en el Ejemplo 3 para la atenuacin de la toxicidad provocada por 5-FU. Grupos de ratones (n = 3 por compuesto por punto temporal) reciban inyecciones intraperitoneales de uridina (300 mg/kg), triacetiluridina (TAU; 455 mg/kg/tratamiento), benzoiluridina (BU; 428 mg/kg/tratamiento), etoxicarboniluridina (ECU; 389 mg/kg/tratamiento), octaniluridina (OU; 455 mg/kg/tratamiento) y valeriluridina (VU; 403 mg/kg/tratamiento). Las dosis de los derivados acilados de uridina son el equivalente molar de 300 mg/kg de uridina. En los puntos temporales apropiados, se tomaron muestras de sangre (200 l) de los ratones a travs del seno retroorbital y se centrifugaron inmediatamente. Se desproteinizaron 75 l del plasma resultante con dos volmenes de metanol seguido por centrifugacin. El sobrenadante se lioliz y se reconstituy con tampn de fosfato potsico 50 mM, pH 6,0, y se analiz con respecto al contenido de uridina mediante HPLC en una columna en fase inversa (C18 ). La uridina se separ de otros componentes del plasma en tampn de fosfato potsico 50 mM, pH 6,0, con un gradiente de metanol (de 2% a 35% durante 15 minutos). La uridina se detect y se cuantic mediante absorbancia UV a 260 nM. Resultados La administracin de todos los derivados acilados de uridina probados daba como resultado niveles de uridina en plasma incrementados, segn se muestra en la Tabla 11. Los niveles de uridina en plasma en animales de control (ratones que no reciban derivados de uridina o citidina exgenos) eran 1,1 0,1 M.

55

60

65

31

ES 2 257 721 T3
TABLA 11 Concentracin de uridina en plasma en ratones despus de la administracin de derivados acilados de uridina
5

Tiempo Compuesto

15 min

30 min

1h

2h

Concentracin de uridina en plasma (M) 911 35 666 70 1160 45 1001 113 56 22 250 18 415 86 348 28 353 87 347 117 14 7,4 83 0,1 185 21 24,5 7,5 178 54 266 41 17 2,9 44 12 5,3 1,5 15,1 1,6 8,6 1,7 7,4 0,4 2,2 0,04 2,0 1,6

10

15

Uridina Triacetiluridina Benzoiluridina Valeriluridina Octanoiluridina Etoxicarboniluridina

20

La administracin de todos los derivados acilados de uridina da como resultado niveles de uridina en plasma elevados. Los derivados acilados proporcionan formacin sostenida de uridina a travs de desacilacin gradual. Esto puede no reejarse en los niveles de uridina en plasma, ya que la captacin celular de uridina puede retirar uridina de la circulacin a medida que se forma mediante la desacilacin de los derivados de uridina acilados. Es importante apuntar que los derivados de uridina acilados son generalmente superiores a una cantidad equimolar de uridina para atenuar la toxicidad debida a 5-FU (Tabla 8 en el Ejemplo 3). Ejemplo 5 ndice teraputico mejorado de 5-FU (I): liberacin de TAU con 5-FU solo en ratones que tienen tumores

25

30

Propsito El propsito de este experimento era determinar y comparar la capacidad de la uridina y la TAU para incrementar el ndice teraputico de 5-FU en un modelo de ratones que tienen tumores.

35

Mtodos Sesenta ratones hembra CD8F1 (BALB/C x DBA/8) con trasplantes de primera generacin de adenocarcinoma mamario espontneo CD8F1 se trataron con un rgimen de quimioterapia semanal que inclua una sola dosis de 5-FU (150 mg/kg) seguida por diversas estrategias de rescate. El tamao del tumor promedio era 157 mg al principio de la quimioterapia. El desarrollo de quimioterapia semanal se complet tres veces. Para evaluar las diversas terapias de rescate, los animales se dividieron en seis grupos de 10 animales cada uno como sigue:

40

45

50

1. 2. 3. 4. 5.

Solucin salina: 5-FU solo: 5-FU + vehculo: 5-FU + uridina i.p.: 5-FU + uridina oral: 5-FU + TAU oral:

55

6.
1 2

Solucin salina (sin 5-FU) 5-FU (150 mg/kg i.p.) 5-FU (150 mg/kg i.p.) + vehculo1 5-FU (150 mg/kg i.p.) + uridina (3.500 mg/kg i.p.) 5-FU (150 mg/kg i.p.) + uridina (5.000 mg/kg p.o.)2 5-FU (150 mg/kg i.p.) + TAU (7.582 mg/kg p.o.)2

emulsin de aceite-agua 1:1 + Tween-80 al 2,5% 7.582 mg de TAU y 5.000 mg de uridina son dosis equivalentes molares.

60

Resultados
65

Al nal de las tres semanas de quimioterapia, se compar la mortalidad de cada grupo y, cuando sobreviva un nmero suciente de animales, se compararon el peso corporal y el tamao del tumor. Los resultados se resumen como sigue en la Tabla 12:

32

ES 2 257 721 T3
TABLA 12 Efecto de la administracin combinada de 5-FU y TAU o uridina
5

Grupo 1. Solucin salina 2. 5-FU solo 3. 5-FU + vehculo 4. 5-FU + uridina i.p. 5. 5-FU + uridina oral 6. 5-FU + TAU oral * No signicativo debido a la alta mortalidad.

Mortalidad 3/10 9/10 10/10 1/10 0/10 1/10

Peso del Tumor Final Medio (mg) 7.391 * * 1.604 896 1.013

10

15

20

La mortalidad en el grupo que recibe solo solucin salina se deba al avance de la enfermedad, mientras que la mortalidad entre los grupos que reciban 5-FU pero no rescate se deba a la toxicidad del propio 5-FU. Conclusin

25

La TAU y la uridina son ecaces para rescatar a ratones que tienen tumores de los efectos txicos del 5-FU. Ambos agentes incrementan el ndice teraputico del 5-FU en ratones que tienen tumores, y permiten que se toleren dosis superiores del frmaco, con un incremento proporcionado en el efecto anticanceroso. Ejemplo 6

30

ndice teraputico mejorado de 5-FU (II): rescate con TAU con quimioterapia de combinacin en ratones que tienen tumores Propsito

35

El propsito de este experimento era determinar y comparar la capacidad de TAU y uridina para incrementar el ndice teraputico de 5-FU cuando se usa en combinacin con fosfonoacetil-L-aspartato (PALA), metotrexato (MTX) y leucovorina (LV), en un rgimen de dosicacin de frmacos que incrementa el potencial citotxico del 5-FU. Mtodos

40

Cuarenta ratones CD8F1 macho con tumores de mama espontneos CD8F1 trasplantados (peso del tumor inicial de 155 mg) se trataron semanalmente con el siguiente rgimen:
45

PALA--19 h--> MTX--2,5 h--> 5-FU--2 h--> LV--19 h--> LV 100 mg/kg 300 mg/kg 150 mg/kg 300 mg/kg 300 mg/kg Para evaluar y comparar la ecacia de TAU y uridina, los ratones se dividieron en cuatro grupos de 10 animales cada uno. 1. Control: 2. Uridina i.p.: 3. Uridina (oral): 4. TAU (oral):
1

50

55

Solucin salina Uridina (3.500 mg/kg) Uridina (4.000 mg/kg) TAU (6.066 mg/kg1 )

60

Equivalente molar de 4.000 mg/kg de uridina.

65

Solucin salina, uridina o TAU se administr cada ocho horas durante un total de 5 tratamientos partiendo de dos horas despus de cada dosis semanal de 5-FU. Este rgimen semanal se repiti durante tres semanas sucesivas. Una semana despus del tercer desarrollo de rgimen de quimioterapia, la mortalidad de cada grupo se determin y, cuando sobreviva un nmero suciente de animales, tambin se midieron el peso corporal y el peso del tumor.

33

ES 2 257 721 T3
Resultados TABLA 13
5

Efecto de la TAU sobre la mortalidad de ratones que tienen tumores que reciben quimioterapia combinada Grupo Mortalidad 10/10 0/10 5/10 1/10 Peso del Tumor Final Medio (mg) ** 110 ** 162

10

Control Uridina i.p. Uridina p.o. TAU p.o. ** No signicativo debido a la alta mortalidad

15

La mortalidad en el grupo de control se deba a la toxicidad de 5-FU. El peso de los tumores en los ratones no tratados en este punto temporal es como media aproximadamente 3.000 miligramos.
20

Conclusin La TAU y la uridina mejoran el ndice teraputico del 5-FU usado en esta combinacin de agentes clnicamente pertinente. La TAU oral era tan ecaz como la uridina administrada intraperitonealmente y ms ecaz que una dosis equimolar de uridina administrada oralmente. Ejemplo 7 La administracin oral de diacetildesoxicitidina atena la toxicidad hematopoytica de la arabinosilcitosina.

25

30

Propsito El propsito de este experimento era probar la ecacia de la diacetildesoxicitidina (DAdC) y la palmitoildesoxicitidina (PdC) para mitigar los efectos txicos del agente quimioteraputico arabinosilcitosina (Ara-C) sobre el sistema hematopoytico. Mtodos Veintin ratones hembra Balb/C que pesaban aproximadamente 20 gramos cada uno reciban una inyeccin intraperitoneal diaria de Ara-C (100 mg/kg) durante cinco das. Estos ratones se dividieron en tres grupos de tratamiento: administracin oral de agua (controles); administracin oral de DAdC (411 mg/kg/tratamiento); y administracin intraperitoneal de PdC (200 mg/kg/tratamiento en Tween 80 al 0,2%). Los ratones se trataron con agua, DAdC o PdC dos veces al da, a las 9 a.m. y las 6 p.m. El volumen de tratamiento en cada caso era 0,2 ml. Siete ratones adicionales no reciban Ara-C ni ningn tratamiento en absoluto (basales). Los das siete y once despus de la administracin de 5-FU, se recogi sangre (0,2-0,3 ml) de los siete ratones de cada grupo mediante sangrado retroorbital en EDTA para el conteo de clulas sanguneas diferencial subsiguiente. Los ratones fueron sacricados mediante dislocacin cervical y sus bazos se extirparon y se pesaron. Resultados La administracin de Ara-C daba como resultado pesos de los bazos, conteos de GB, conteos de neutrlos totales, conteos de linfocitos y conteos de plaquetas signicativamente reducidos en los ratones de control en comparacin con los ratones basales (Tabla 14). No se observaron efectos txicos de Ara-C sobre la eritropoyesis de por s (conteos de GR, hemoglobina y hematocrito). El tratamiento de ratones con DaDC oralmente y el tratamiento con PdC intraperitonealmente inverta signicativamente los efectos perjudiciales de Ara-C sobre la hematopoyesis. El peso del bazo, los conteos de GB, los conteos de neutrlos totales y los conteos de plaquetas eran todos signicativamente mayores que los de los ratones de control (Tabla 14). Conclusiones La administracin de DAdC o PdC a ratones que reciban Ara-C mitigan los efectos txicos de Ara-C sobre el sistema hematopoytico.

35

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55

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ES 2 257 721 T3
TABLA 14 El efecto del tratamiento con diacetildesoxicitidina (DAdC) o palmitoildesoxicitidina (PdC) sobre la hematopoyesis en ratones que reciben arabinosilcitosina (Ara-C) durante cinco das. El peso del bazo est en miligramos, los conteos de GB, neutrlos y plaquetas y se expresan como K/l Bazo
10

GB 8,66 0,53 3,60 0,55 5,00 ,42 5,20 0,35*

Neut 1,84 0,12 0,04 0,02 0,42 0,05** 1,22 0,27**

PLT 854 30 230 21 728 64** 327 30*

Basal Control DAdC PdC

93,0 2,5 37,1 1,3 87,8 3,5** 126,0 5,3**

15

* indica p < 0,05 frente al control ** indica p < 0,001 frente al control Ejemplo 8

20

La TAU administrada oralmente mitiga los efectos perjudiciales sobre el sistema hematopoytico del agente quimioteraputico antiviral azidotimidina (AZT) en agua de bebida. Propsito

25

El propsito de este experimento era probar la ecacia de triacetiluridina (TAU) administrada oralmente para atenuar el dao hematopoytico provocado por el agente quimioteraputico antiviral azidotimidina (AZT). Mtodos

30

35

Cuarenta y dos ratones hembra Balb/C, que pesaba cada uno aproximadamente 19 gramos, se dividieron en tres grupos diferentes de 14 animales cada uno. Los tres grupos eran: basal (sin AZT, sin tratamiento), control (AZT, agua) y TAU (AZT, TAU en 460 mg/kg/tratamiento). La AZT se administr a voluntad en el agua de bebida a una concentracin de 1,5 mg/ml a travs del desarrollo del experimento. El volumen de solucin de AZT consumido en todos los grupos de tratamiento era similar y era como media 2,25 ml por da por ratn, dando como resultado una dosis diaria de AZT de aproximadamente 170 mg/kg al da. Se administraron agua y TAU en un volumen de 0,2 ml tres veces al da durante las primeras 24 horas del estudio, y dos veces al da posteriormente. Todos los animales se pesaron el da que comenzaba el experimento, una vez a la semana e inmediatamente antes del sacricio. Despus de pesar a los ratones los das 24 y 35, se recogi sangre (0,2-0,3 ml) de siete ratones de cada grupo mediante sangrado retroorbital en EDTA para el conteo de clulas sanguneas diferencial subsiguiente, incluyendo reticulocitos. Los ratones fueron sacricados a continuacin mediante dislocacin cervical; sus fmures derechos se extirparon y los contenidos se expelieron para el conteo de clulas; y sus bazos se extirparon y se pesaron. Resultados Los pesos corporales de los ratones que reciban AZT sola eran signicativamente reducidos (17,55 0,57 gramos, p < 0,002) en comparacin con los de animales basales (19,78 0,38) el da 7, mientras que los pesos corporales de los ratones tratados con TAU (19,51 0,38) eran casi idnticos a los de los basales y signicativamente mayores (p < 0,005) que los de los controles en este mismo punto temporal. Esta tendencia tambin se observ el da 13, aunque no existan diferencias estadsticamente signicativas entre grupos. De nuevo, el da 24 de este experimento, los pesos corporales de los controles de AZT se disminuan estadsticamente en comparacin tanto con los basales (p < 0,001) como con los ratones tratados con TAU (p < 0,05). En este punto temporal los pesos corporales de los animales tratados con TAU tambin eran menores que los de los animales basales. Da 24 Los conteos de GR de los ratones que reciban solo AZT (8,49 0,16) eran signicativamente reducidos (p < 0,01) en comparacin con los basales (9,07 0,11). Los conteos de GR de los animales tratados con TAU (9,01 0,09) no eran signicativamente diferentes de los basales y eran signicativamente mayores (p < 0,02) que los de los controles. Los controles de neutrlos totales tambin estaban signicativamente reducidos (p < 0,02) en los ratones que reciban solo AZT (0,67 0,09) en comparacin con los basales (1,02 0,08). Los niveles de neutrlos en aquellos animales tratados con TAU (0,91 0,06) no eran signicativamente diferente de los basales y eran signicativamente mayores (p < 0,05) que los del grupo con solo AZT.

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ES 2 257 721 T3
Da 35 Se observaron efectos perjudiciales signicativos de la AZT virtualmente con cada uno de los parmetros empleados en este punto temporal. La celularidad de la mdula sea, los conteos de GB y los conteos de linfocitos se disminuan signicativamente como los conteos de GR, la hemoglobina y el hematocrito en comparacin con los de ratones basales (Tabla 15). El volumen celular medio, el hematocrito celular medio y los conteos de plaquetas de los ratones de control se elevaban signicativamente en comparacin con los de los ratones basales (Tabla 14). Todos estos parmetros indican un dao hematopoytico inducido por AZT. El tratamiento con TAU oral daba como resultado conteos de GB, hemoglobina y hematocrito signicativamente superiores en comparacin con los controles de AZT (Tabla 15), as como un volumen celular medio, un hematocrito celular medio y conteos de plaquetas signicativamente inferiores en comparacin con los valores de control (Tabla 16). Mientras que el nmero de reticulocitos se elevaba signicativamente en el grupo de control (0,256 x 106 por microlitro; p < 0,001) frente a los conteos basales (0,129 x 106 por microlitro), aquellos ratones tratados con TAU tenan niveles de reticulocitos signicativamente superiores (0,371 x 106 por microlitro) que tanto los basales (p < 0,001) como los controles (p < 0,01). Conclusiones A partir de estos datos est claro que la TAU administrada oralmente tiene efectos benecios en animales con dao hematopoytico inducido por AZT.
25

10

15

20

TABLA 15 La TAU mitiga los efectos perjudiciales de la AZT sobre la eritropoyesis en ratones. Los conteos de glbulos rojos (GR) estn en M/l, el hematocrito (HCT) se expresa como un porcentaje y la hemoglobina (HGB) es g/dl
30

GR Basal Control TAU 9,04 0,08 7,53 0,13 8,20 0,20**

HCT 42,52 0,34 39,29 0,59 41,26 0,62*

HGB 15,57 0,09 14,57 0,26 15,14 0,12*

35

40

* indica p < 0,05 frente al control ** indica p < 0,01 frente al control TABLA 16

45

La TAU atena el dao a las clulas inducido por AZT. Los conteos de plaquetas (PLT) estn en K/l, el volumen celular medio (MCV) estn en y el hematocrito celular medio (MCH) se mide en picogramos PLT MCV 47,03 016 52,16 0,37 50,41 0,48* MCH 17,23 0,13 19,37 0,20 18,49 0,28*

50

Basal Control TAU

736 24 903 18 809 0,06**

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* indica p < 0,05 frente al control ** indica p < 0,01 frente al control Ejemplo 9

60

La TAU administrada oralmente mitiga los efectos perjudiciales sobre el sistema hematopoytico de AZT administrada intraperitonealmente. Propsito
65

El propsito de este experimento era probar la ecacia de TAU administrada oralmente para invertir el dao hematopoytico provocado por la administracin parenteral de azidotimidina (AZT).
36

ES 2 257 721 T3
Mtodos Se dio AZT (100 mg/kg i.p.) tres veces al da a las 9 a.m., 4 p.m. y a las 10 p.m. a cincuenta y seis ratones Balb/C hembra que pesaban aproximadamente 19 gramos cada uno. Tres veces al da, a las 9 a.m., 4 p.m. y 10 p.m., los animales fueron tratados con agua (control) o TAU a dosis de 230, 460 920 mg/kg/tratamiento mediante intubacin oral. El volumen de tratamiento era 0,2 ml para los grupos de control y TAU 460, 0,1 ml para el grupo TAU 230 y 0,4 ml para el grupo TAU 920. A un grupo adicional de catorce ratones no se le dio AZT ni ningn tratamiento (basal). Todos los animales se pesaron el da en el que comenzaba el experimento, el da 6 y el da 13. Despus de pesar los ratones los das 6 y 13, se recogi sangre (0,2-0,3 ml) de siete ratones de cada grupo mediante sangrado retroorbital en EDTA para el conteo de clulas sanguneas diferencial subsiguiente, incluyendo reticulocitos. Los ratones se sacricaron a continuacin mediante dislocacin cervical; sus fmures derechos se extirparon y los contenidos se expelieron para el conteo de clulas; y sus bazos se extirparon y se pesaron. Resultados Da Seis
20

10

15

La celularidad de la mdula sea era signicativamente mayor (p < 0,05) en el grupo tratado con los 230 mg/kg de TAU (8,89 0,46) que en el grupo que reciba AZT sola (7,54 0,23). Los conteos de glbulos blancos eran 8,23 9,38 x 103 por microlitro en el grupo basal. La AZT reduca el conteo de GB hasta 6,8 0,66 x 103 por microlitro, pero cuando los ratones se trataban con TAU (920 mg/kg) adems de recibir AZT, los conteos de GB se restauraron hasta niveles basales (8,46 0,63 x 103 por microlitro). La administracin de AZT daba como resultado una cada en los niveles de GR de 9,14 0,10 x 106 por microlitro (basales) hasta 8,80 0,31 x 106 por microlitro (controles). No se observ tal disminucin en ratones que reciban TAU (460 mg/kg/tratamiento) y AZT (9,15 0,07 x 106 por microlitro).

25

30

Da Trece Virtualmente para todos los parmetros empleados en este estudio, aquellos ratones a los que les daba AZT sola durante 13 das mostraban una evidencia estadsticamente signicativa de dao hematopoytico. As, los conteos de GB, los conteos de GR, la hemoglobina, el hematocrito, los conteos de reticulocitos, los conteos de neutrlos totales y los conteos de linfocitos estaban todos signicativamente disminuidos, mientras que el hematocrito celular medio y los conteos de plaquetas se elevaban estaban signicativamente. El tratamiento concomitante de ratones que reciban AZT con TAU (460 mg/kg/tratamiento) daba como resultado una mejora estadsticamente signicativa en todas y cada una de estas medidas (Tabla 17 y 18). Conclusiones El tratamiento concomitante de ratones con AZT y TAU mejora signicativamente la funcin hematopoytica. Esto es cierto para los ndices tanto de glbulos blancos como de glbulos rojos.
45

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TABLA 17
50

La TAU oral atena el dao inducido por AZT al sistema hematopoytico en ratones. Estos datos se obtuvieron el da 13 del estudio GB Neutro K/l 1,27 0,11 0,49* 0,07 0,62 0,03 Lin K/l 5,14 0,33 4,02* 0,27 6,06** 0,38 Plaquetas K/l 680 30 1025* 44 863** 26

55

Basal Control TAU

K/l 6,8 0,6 5,1* 0,28 7,0** 0,37

60

* diferente del grupo basal, p < 0,05 ** diferente del grupo de control, p < 0,05

65

37

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TABLA 18 La TAU oral atena el dao inducido por AZT al sistema eritropoytico en ratones. Estos datos se obtuvieron el da 13 del estudio
5

GR M/l 9,16 0,06 8,15* 0,07 8,58** 0,08

HGB G/dl 15,32 0,18 14,08* 0,13 14,54** 0,13

HCT % 43,18 0,54 38,90* 0,43 40,83** 0,37

Retic. M/l 0,298 0,028 0,086* 0,007 0,162** 0,014

10

Basal Control TAU

15

* diferente del grupo basal, p < 0,05 ** diferente del grupo de control, p < 0,05 Ejemplo 10

20

La administracin oral de diacetildesoxicitidina (DAdC) mitiga la toxicidad hematopoytica producida por AZT administrada intraperitonealmente en ratones DBA. Propsito

25

El propsito de este experimento era probar la ecacia de DAdC administrada oralmente para invertir el dao hematopoytico provocado por la administracin parenteral del agente quimioteraputico antiviral azidotimidina (AZT). Mtodos

30

35

Se dio AZT (100 mg/kg i.p.) tres veces al da a las 9 a.m., las 4 p.m. y a las 10 p.m. a veintiocho ratones DBA hembra que pesaban aproximadamente 20 gramos cada uno. Tres veces al da, a las 9 a.m., a las 4 p.m. y a las 10 p.m., los animales fueron tratados con agua (control) o DAdC (411 mg/kg/tratamiento) mediante intubacin oral. El volumen de tratamiento era 0,2 ml. A un grupo adicional de catorce ratones no se le dio AZT ni ningn tratamiento (basal). Durante los primeros pocos das de tratamiento un total de ocho ratones mora de accidentes que se producan durante la administracin oral del agua y la DAdC. Por lo tanto, el nmero de animales del grupo de control y el grupo de DAdC se reduca los das de sacricio como sigue: El da 6 haba cuatro ratones en el grupo de control y cinco en el grupo de DAdC; el da 13 haba siete en el grupo de control y tres en el grupo de DAdC. El nmero de animales basales era siete en ambos puntos temporales. Los das seis y trece se recogi sangre (0,2 - 0,3 ml) de los ratones de cada grupo mediante sangrado retroorbital en EDTA para el conteo de clulas sanguneas diferencial subsiguiente, incluyendo reticulocitos. Los animales se sacricaron a continuacin mediante dislocacin cervical; sus fmures derechos se extirparon y los contenidos se expelieron para el conteo celular; y sus bazos se extirparon y se pesaron. Resultados

40

45

50

Da Seis El da seis la administracin de AZT daba como resultado un dao hematopoytico signicativo, especialmente en aquellos ratones que no reciban DAdC (controles). As, los conteos de GB y linfocitos estaban signicativamente disminuidos en los controles en comparacin con los basales, como lo estaban los conteos de GB, la hemoglobina (HGB), el hematocrito (HCT) y los conteos de reticulocitos (Tabla 17). Los conteos de plaquetas se elevaban signicativamente en estos ratones de control. Los conteos de clulas de la mdula sea tambin se reducan 23% en el grupo de control en comparacin con los basales. En contraste, los ratones que reciban AZT pero tambin se trataban con DAdC solo tenan una ligera reduccin (2,5%) en la celularidad de la mdula sea y no eran estadsticamente diferentes de los basales. Los conteos de RBC, la HGB, el HCT y los conteos de reticulocitos en el grupo de DAdC no eran diferentes de los del grupo basal, pero eran signicativamente mayores que los del grupo de control (Tabla 19). Da Trece

55

60

65

Los ratones a los que se les daba AZT sola durante 13 das mostraba una evidencia estadsticamente signicativa de dao hematopoytico en casi todas las categoras en comparacin con los animales basales. El tratamiento concomitante de ratones con DAdC atenuaba o inverta notablemente el dao eritropoytico inducido por AZT (Tabla 20)
38

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como se observaba el da 6. Los conteos de plaquetas tambin se mejoraban signicativamente en ratones tratados con DAdC (769 32; p < 0,02) en comparacin con animales de control (950 34). Conclusiones
5

El tratamiento de ratones que reciban AZT con DAdC mejora signicativamente la funcin hematopoytica, especialmente la eritropoyesis.
10

TABLA 19 El efecto del tratamiento con diacetildesoxicitidina (DAdC) sobre la eritropoyesis en ratones que reciben AZT durante seis das

15

GR Basal Control DAdC 9,47 0,18 8,53 0,33* 9,49 0,32**

HGB 13,93 0,20 12,60 0,40* 13,96 0,40**

HCT 40,83 0,83 36,32 1,54* 40,84 1,35**

Reticulocitos 0,326 0,039 0,017 0,004* 0,205 0,075**

20

* indica diferente del basal, p < 0,05 ** indica diferente del control, p < 0,05
25

TABLA 20 El efecto del tratamiento con diacetildesoxicitidina (DAdC) sobre la eritropoyesis en ratones que reciben AZT durante trece das
30

GR Basal Control DAdC 9,95 0,13 8,51 0,05* 9,16 0,32**

HGB 14,83 0,19 13,06 0,07* 13,97 0,39**

HCT 42,86 0,41 37,21 0,13* 41,53 0,17**

Reticulocitos 0,637 0,044 0,365 0,022* 0,814 0,069**

35

40

* indica diferente del basal, p < 0,05 ** indica diferente del control, p < 0,05 Ejemplo 11

45

La diacetildesoxicitidina (DAdc) administrada oralmente o la tetrahidrouridina (THU) mitigan los efectos perjudiciales sobre el sistema hematopoytico de AZT administrada intraperitonealmente en ratones Balb/C. Propsito

50

El propsito de este experimento era probar la ecacia de DAdC administrada oralmente o THU administrada parenteralmente para invertir el dao hematopoytico provocado por la administracin parenteral del agente quimioteraputico antiviral azidotimidina (AZT). Mtodos

55

60

Se dio AZT (100 mg/kg i.p.) tres veces al da a las 9 a.m., las 4 p.m. y las 10 p.m. a veintin ratones Balb/C hembra que pesaban aproximadamente 20 gramos cada uno. Tres veces al da, a las 9 a.m., a las 4 p.m. y a las 10 p.m., siete animales fueron tratados con agua (control, p.o.) o DAdC (300 mg/kg/tratamiento, p.o.) o THU (12,5 mg/kg/tratamiento en Tween 80 al 0,2%, i.p.). El volumen de tratamiento era 0,2 ml. A un grupo de siete ratones no se le dio AZT ni ningn tratamiento (basal). El da trece se recogi sangre (0,2 - 0,3 ml) de los ratones de cada grupo mediante sangrado retroorbital en EDTA para el conteo de clulas sanguneas diferencial subsiguiente, incluyendo reticulocitos. Los animales se sacricaron a continuacin mediante dislocacin cervical; sus fmures derechos se extirparon y los contenidos se expelieron para el conteo de clulas; y sus bazos se extirparon y se pesaron.

65

39

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Resultados El tratamiento concomitante de ratones con DAdC atenuaba o inverta notablemente el dao eritropoytico inducido por AZT (Tabla 21). Los conteos de neutrlos totales tambin se mejoraban signicativamente en ratones tratados con DAdC (1,39 0,14; p < 0,01) en comparacin con animales de control (0,74 0,10). Los ratones a los que se les daba AZT que reciban tratamiento con THU mostraban mejoras signicativas en la mielopoyesis en comparacin con los controles as como en la eritropoyesis. Los conteos de glbulos blancos totales eran signicativamente mayores en el grupo de THU (6,06 0,35; p < 0,05) que en el grupo de control (4,73 0,36). Tambin se observaron diferencias signicativas (p < 0,05) comparando los conteos de neutrlos totales en el grupo tratado con THU (1,16 0,15) con los de los controles (0,74 0,10). Los conteos de linfocitos se mejoraban, pero las diferencias no alcanzaban signicacin estadstica en este experimento. Adems, los ndices de reticulocitos (porcentaje y M/l) eran signicativamente mayores (p < 0,05) en el grupo tratado con THU en comparacin con los del grupo de control. Conclusiones El tratamiento de ratones Balb/C que reciban AZT con DAdC o THU mejoraba signicativamente la funcin hematopoytica.
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10

15

TABLA 21
25

El efecto del tratamiento con diacetildesoxicitidina (DAdC) sobre la eritropoyesis en ratones Balb/C que reciben AZT durante trece das GR HGB 15,37 0,08 13,71 0,22* 14,97 0,15** HCT 41,01 0,52 35,96 0,46* 39,51 0,61** Reticulocitos 0,089 0,009 0,039 0,004* 0,059 0,006**

30

Basal Control DAdC

8,63 0,11 7,55 0,11* 8,26 0,13**

35

* indica diferente del basal, p < 0,05 ** indica diferente del control, p < 0,05 Ejemplo 12

40

Niveles de uridina en plasma despus de la administracin oral de uridina o triacetiluridina (TAU), con o sin dipiridamol Propsito

45

El propsito de este experimento era demostrar que la TAU es un agente oralmente activo ms ecaz para elevar los niveles de uridina en plasma que la propia uridina, y adems para demostrar el efecto del dipiridamol (DPM), un bloqueador de la captacin de nuclesidos que tambin tiene actividad antiviral, sobre los niveles de uridina en plasma despus de la administracin de TAU o uridina. Mtodos Ratones Balb/C hembra con un peso corporal de 200 gramos se dividieron en cuatro grupos de 8 animales cada uno:

50

55

60

1. Uridina (1000 mg/kg) p.o. 2. TAU (1500 mg/kg) p.o. 3. Uridina (1000 mg/kg) p.o. + DPM (25 mg/kg i.p.) 4. TAU (1500 mg/kg) p.o. + DPM (25 mg/kg i.p.) (1500 mg/kg de TAU es el equivalente molar de 1000 mg/kg de uridina) El dipiridamol se administr mediante inyeccin intraperitoneal 30 minutos antes de la uridina o la TAU. La uridina se administr oralmente mediante sonda como una solucin acuosa en un volumen de 0,4 ml.
40

65

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La TAU se administr mediante sonda en un vehculo de emulsin (aceite de maz/agua 1:1 con Tween 80 al 2,5%).
5

Dos ratones de cada grupo se sangraron desde el plexo suborbital en cada punto temporal: 0 (niveles de uridina basales antes de la administracin de TAU o uridina), 0,5, 1, 2 y 4 horas despus de la administracin de TAU o uridina. Las muestras de plasma (0,1 ml) se desproteinizaron mediante la adicin de 0,2 ml de metanol seguido por centrifugacin. Las muestras se liolizaron y a continuacin se reconstituyeron con tampn para HPLC (acetato amnico 100 mM, pH 6,5, para el ensayo subsiguiente de uridina mediante HPLC en fase inversa con deteccin de absorbancia UV (254 nm). Los puntos de datos son la media de dos muestras para cada punto temporal.

10

15

Resultados Despus de la administracin oral de uridina, la uridina en plasma alcanzaba concentraciones mximas de 6 micromolar. En contraste, la administracin oral de una dosis equimolar de TAU daba como resultado niveles de uridina en plasma mximos de 260 micromolar, demostrando as la ventaja notable de la TAU sobre la uridina como un medio oralmente activo para elevar niveles de uridina en plasma. El dipiridamol aumentaba adicionalmente (aproximadamente dos veces) la amplitud (niveles de uridina mximos de 460 micromolar) y la duracin de los niveles de uridina en sangre despus de la administracin oral de TAU.

20

25

El dipiridamol mejoraba de forma similar el mantenimiento del nivel de uridina en sangre despus de la uridina oral, aunque los niveles eran muy inferiores que en los ratones correspondientes que reciban TAU (niveles de uridina en plasma mximos de 20 micromolar). Estos resultados se resumen en la Tabla 22:

30

TABLA 22 Concentraciones de uridina en plasma despus de la administracin oral de uridina o TAU, con o sin dipiridamol
35

Niveles de uridina en plasma (M) despus de la administracin de TAU o uridina Tratamiento

40

0h 2 2 2 2

0,5 h 4 240 10 280

1h 6 260 20 460

2h 4 110 10 440

4h 2 12 4 32

45

Uridina TAU Uridina + DPM TAU + DPM Conclusiones

50

Los niveles de uridina en plasma despus de la administracin oral de TAU eran muy superiores que los que se observaban despus de la administracin oral de uridina. La TAU es as una fuente mucho mejor de uridina en plasma despus de la administracin oral que la propia uridina. El dipiridamol inhibe la captacin de uridina en algunos tipos de clulas y de ese modo mejora la amplitud y la duracin de las concentraciones de uridina en plasma despus de la administracin de TAU o uridina. Ejemplo 13 Modulacin de la toxicidad de tegafur oral con TAU y uracilo

55

60

Propsito El tegafur (5-uoro-1-(tetrahidro-2-furfuril)uracilo) es un profrmaco oralmente activo de 5-uorouracilo; se convierte enzimticamente en 5-FU durante y despus de la absorcin desde el tracto intestinal hacia la corriente sangunea. Para el tratamiento del cncer, el tegafur se administra tpicamente oralmente en una formulacin que tambin contiene uracilo, en una relacin molar 1:4 de tegafur a uracilo; el tegafur formulado con uracilo habitualmente se usa clnicamente en seres humanos. El uracilo potencia la actividad del 5-FU formado a partir de tegafur inhibiendo competitivamente la dihidrouracilo deshidrogenasa, una enzima que degrada el 5-FU.

65

41

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Despus de la administracin de altas dosis de tegafur + uracilo, los ratones pierden una cantidad substancial de peso corporal, indicando toxicidad gastrointestinal. Despus de la administracin oral, se cree que el uracilo potencia la toxicidad local de 5-FU formado en las clulas intestinales durante el paso de tegafur hacia la corriente sangunea. Por lo tanto, es deseable utilizar con el tegafur, u otros profrmacos oralmente activos de 5-FU, un agente que inhiba la descomposicin de 5-FU (o potencie de otro modo su actividad) principalmente en la circulacin (despus de la absorcin) en vez de localmente en el intestino. La triacetiluridina (TAU), como otros derivados acilados de uridina y citidina de la invencin, se convierte en uridina y uracilo durante y despus de la absorcin en la corriente sangunea; cuando estn presentes al mismo tiempo que el 5-FU, tanto la uridina como el uracilo son capaces de potenciar la citotoxicidad del 5-FU. Por lo tanto, se determinaba la citotoxicidad de tegafur + uracilo oral frente a tegafur + TAU. Los conteos de clulas sanguneas se utilizaron como un ndice de la citotoxicidad de 5-FU en la circulacin (y por extensin de la potencia antitumoral). La prdida de peso corporal se us como un ndice de la toxicidad gastrointestinal. Mtodos Tres grupos de ratones reciban tegafur mediante intubacin oral en una dosis de 400 mg/kg por ratn. El peso corporal inicial de los ratones en cada grupo era 19,0 0,6 gramos. Uno de estos grupos tambin reciba uracilo en una relacin molar de 4:1 con respecto a la dosis de tegafur, y otro grupo reciba TAU, tambin en una relacin molar 4:1 con respecto a tegafur. Los pesos corporales se vericaron. Seis das despus de la administracin de tegafur, se tomaron muestras de sangre para los conteos de clulas diferenciales. Resultados
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40

El tegafur solo en una dosis de 400 mg/kg produca una cada signicativa en los nmeros de neutrlos, pero no afectaba signicativamente a los conteos de plaquetas; el peso corporal se reduca solo ligeramente (7%) en comparacin con animales no tratados (basales). El tegafur ms el uracilo producan una cada ms intensa en los conteos de neutrlos que el tegafur solo, y tambin reducan los conteos de plaquetas y provocaban una prdida substancial (29%) de peso corporal. El tegafur ms la TAU producan cambios en el conteo de clulas sanguneas similares a los encontrados despus de tegafur ms uracilo, pero no provocaban un cambio en el peso corporal. Los conteos de clulas sanguneas encontrados despus de la administracin oral de tegafur + TAU o tegafur + uracilo son similares a los observados despus de una dosis teraputicamente ecaz de 5-uorouracilo (por ejemplo, 150 mg/kg) administrada sistmicamente. Sin embargo, la prdida de peso provocada por tegafur + uracilo es inaceptable en el contexto de la quimioterapia del cncer. La excelente citotoxicidad sistmica de tegafur + TAU orales (mejor que tegafur solo y al menos equivalente a tegafur + uracilo) y la ausencia de una prdida en el peso corporal (especialmente en contraste con la notable prdida de peso en animales que reciban tegafur + TAU) indican que la TAU es til para potenciar la citotoxicidad sistmica (y por lo tanto la potencia antitumoral) de profrmacos de uorouracilo oralmente activos sin un incremento proporcional en la toxicidad gastrointestinal. La combinacin de un profrmaco de uorouracilo oralmente activo con un derivado de nuclesido de pirimidina no metilado acilado permite por lo tanto un mejor aporte oral de cantidades teraputicamente ecaces del importante frmaco antineoplstico uorouracilo que el obtenido con mtodos y composiciones actuales. TABLA 23

45

Uracilo frente a TAU para aumentar la citotoxicidad del tegafur Peso corporal (gramos) Basal Tegafur-400 Tegafur-400 + Uracilo FT-400 + TAU 19.6 0.5 18.2 0.7 14.0 0.3* 19.8 0.4 Neutrlos (K/l) 2.60 0.510 0.40 0.085* 0.02 0.002* 0.02 0.003* Plaquetas (K/l) 984 25 956 30 448 31* 334 33*

50

55

* Diferente de los valores basales, p < 0,01

60

Todos los frmacos se administraron oralmente en una sola dosis. Las muestras de sangre se tomaron para los conteos de clulas seis das despus de la administracin de frmaco; los pesos corporales tambin se registraron en este momento.
65

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Ejemplo 14 Ecacia antitumoral de tegafur y TAU frente a tegafur y uracilo
5

Propsito El tegafur (FT) es un profrmaco oralmente activo de uorouracilo. El uracilo, en una relacin molar ptima de 4:1, potencia la ecacia antitumoral del FT. La toxicidad limitativa de la dosis de la combinacin FT-uracilo es daina para la mucosa intestinal. Dosis crecientes de FT-uracilo tambin dan como resultado dao hematopoytico.

10

El propsito del presente estudio era comparar la ecacia antitumoral del FT en combinacin con uracilo o triacetiluridina (TAU) en ratas que tienen el carcinosarcoma Walker 256. La cuestin esencial tratada en este experimento era si FT + TAU inhibe o no el crecimiento tumoral, as como FT + uracilo, mientras que provoquen menos toxicidad intestinal (cambios de peso corporal). Tambin se determin y se compar el dao a las clulas sanguneas.
15

Mtodos Animales
20

Ratas Sprague-Dawley macho con un peso corporal inicial de aproximadamente 120 gramos. Tumores

25

Fluido de ascitis reunido que contena clulas Walker 256 en una densidad de 2,47 x 108 clulas/mililitro se recogi de tres ratas donantes. Una parte alcuota que contena 4,94 x 107 clulas se inyect subcutneamente en el costado derecho de cada rata en el estudio de ecacia antitumoral. Esto daba como resultado la formacin de tumores subcutneos slidos. Tratamiento

30

35

Se administr FT en dosis de 40, 60 y 80 mg/kg/da en una relacin molar 1:4 con uracilo o TAU. El vehculo usado era hidroxipropilmetilcelulosa al 1%. El tratamiento se inici (da 1) cinco das despus de la implantacin del tumor. Se administraron vehculo y vehculo ms frmaco oralmente mediante sonda cada da durante siete das (da 1 a 7) en un volumen de 1,2 mililitros por 100 gramos de peso corporal. El tamao del tumor se midi in situ el da 8. El da 10 se obtuvieron muestras de sangre y, despus del sacricio de los animales, se determinaron el tamao y el peso del tumor. Grupos de tratamiento

40

1. Vehculo (control) 2. FT 40 mg/kg + uracilo 3. FT 60 mg/kg + uracilo

45

4. FT 80 mg/kg + uracilo 5. FT 40 mg/kg + TAU

50

6. FT 60 mg/kg + TAU 7. FT 80 mg/kg + TAU n = 7 animales/grupo

55

Medidas Se determinaron los pesos corporales antes del tratamiento los das 1, 3, 5 y 7. El da 10 los animales se pesaron antes del muestreo y el sacricio. Los pesos corporales se expresan como el porcentaje de cambio de peso corporal durante el desarrollo del experimento. El tamao del tumor se calcul in situ el da 8 y el volumen del tumor se calcul a continuacin usando la siguiente frmula:
65

60

longitud x anchura2 2
43

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Despus del sacricio el da 10, el tumor se expuso, el tamao se midi in situ y el volumen del tumor se calcul usando la frmula anterior. El tumor se extirp a continuacin y se determin el peso del tumor. Los datos del tumor tambin se expresan como % de T/C. % de T/C es:
5

tamao medio del tumor en ratas tratadas con frmaco x 100 tamao medio del tumor en ratas de control Se determinaron conteos de clulas sanguneas completos con diferencial usando muestras de sangre obtenidas mediante puncin cardiaca inmediatamente antes del sacricio el da 10. Resultados Los efectos FT + uracilo y FT + TAU sobre los tumores y sobre los pesos corporales que se determinaron el da 8 se resumen en la Tabla 24. Los datos muestran que FT + TAU tiene mayor ecacia antitumoral y conserva el peso corporal mejor que dosis equivalentes de FT + uracilo a cualquier dosis de FT. Por ejemplo, a la dosis 60 de FT, el volumen del tumor y el porcentaje de T/C para el grupo tratado con FT + TAU son menos de la mitad que los del grupo tratado con uracilo. A ese mismo nivel de dosis (FT 60) el cambio en el peso corporal es 52,1% en el grupo de FT + TAU en comparacin con 7,8% en el grupo de FT-uracilo. Dosis superiores de FT son ms ecaces que dosis inferiores para prevenir el crecimiento del tumor. Los datos de peso del tumor y corporal obtenidos el da 10 se presentan en la Tabla 25. Los valores tumorales -porcentaje de T/C, volumen del tumor y peso del tumor- son signicativamente inferiores y las ganancias de peso corporal signicativamente mayores en las ratas tratadas con FT-TAU que en las tratadas con FT-uracilo.

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15

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30

Los efectos hematopoyticos del tratamiento con FT se registran en la Tabla 26. Los conteos de plaquetas se conservan a todos los niveles de dosis de FT en los animales tratados con FT-TAU, mientras que caen precipitadamente con dosis crecientes de FT en los grupos de FT-uracilo. Los conteos de glbulos blancos totales y los linfocitos tambin se mantienen mejor en los grupos de FT-TAU a las dosis superiores ms ecaces de FT. A la dosis FT-40, los conteos de neutrlos estn menos intensamente atenuados en el grupo de FT-TAU que en el grupo de FT-uracilo equivalente. De hecho, a cada nivel de dosis de FT-TAU, los conteos de neutrlos son aproximadamente dos veces los observados en el grupo de FT-uracilo correspondientes. Los resultados de este experimento indican que el uso de TAU oral en combinacin con FT tiene ventajas signicativas sobre la combinacin de FT-uracilo. FT-TAU tiene ms actividad antitumoral que dosis equivalentes de FTuracilo mientras que provoca menos dao intestinal y hematopoytico. TABLA 24

35

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Efectos antitumorales de FT con uracilo o TAU en ratas que tienen carcinosarcoma Walker 256: Da 8 Cambio de grupo Volumen del tumor (mm3 SE) 3098 372 1651 135 1051 123 848 124 1244 209 1006 114 557 49 T/C (%) 100,0 53,3 30,8 27,4 40,2 32,5 18,0 Peso corporal (%) 100,0 51,0 -1,7 -26,0 78,0 52,0 23,7

45

50

Control FT 40 + Uracilo FT 60 + Uracilo FT 80 + Uracilo FT 40 + TAU FT 60 + TAU FT 80 + TAU

55

Dosis de FT = mg/kg/da durante 7 das FT/Uracilo = relacin molar 1:4 FT/TAU = relacin molar 1:4

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TABLA 25 Efectos antitumorales de FT con uracilo o TAU en ratas que tienen carcinosarcoma Walker 256: Da 10
5

Cambio de grupo Control FT 40 + Uracilo FT 60 + Uracilo FT 80 + Uracilo FT 40 + TAU FT 60 + TAU FT 80 + TAU

Volumen del tumor (mm3 SE) 4,16 0,55 3,62 0,35 2,80 0,28 1,50 0,58 2,14 0,31 2,18 0,42 1,77 0,25

T/C (%) 100,0 87,0 67,3 36,1 51,4 52,4 42,5

Peso corporal (%) 100,0 62,2 39,0 -7,5 93,2 58,9 30,3

10

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Dosis de FT = mg/kg/da durante 7 das FT/Uracilo = relacin molar 1:4 FT/TAU = relacin molar 1:4 TABLA 26

25

Conteos de clulas sanguneas despus de FT + uracilo y FT + TAU: Da 10 GB Neutrlos 1,84 0,24 0,68 0,18 0,27 0,11 0,14 0,12 0,91 0,21 0,27 0,05 0,12 0,07 Linfocitos 9,09 0,8 8,5 1,5 5,6 1,0 4,3 1,1 7,0 0,8 5,0 0,9 5,4 0,7 Plaquetas 844 44 866 117 602 147 171 49 913 117 830 83 534 136

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35

Control FT 40 + Uracilo FT 60 + Uracilo FT 80 + Uracilo FT 40 + TAU FT 60 + TAU FT 80 + TAU

11,80 0,8 9,7 1,8 5,9 1,1 3,6 1,0 8,2 0,9 5,3 0,9 5,6 0,8

40

Todas las unidades de conteo de clulas sanguneas son K/l Dosis de FT = mg/kg/da durante 7 das FT/Uracilo = relacin molar 1:4 FT/TAU = relacin molar 1:4 Ejemplo 15 El aumento a escala de la dosis de 5FU con triacetiluridina retardada mejora la ecacia en cncer de colon mrido

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50

El tumor mrido Colon 26 es un carcinoma de colon que es relativamente resistente a 5FU. Dosis toleradas mximas de 5FU solo o 5FU ms leucovorina frenan el crecimiento de Colon 26 pero no producen regresiones de tumores establecidos y nalmente no previenen la muerte relacionada con tumores del animal husped. Ratones

55

Se usaron en todos los experimentos ratones Balb/C hembra de aproximadamente 8 semanas de edad y que pesaban aproximadamente 20 gramos. La dosis tolerada mxima de 5FU en estos ratones en un esquema de un bolo tres veces por semana es 100 mg/kg. Tumores

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Se obtuvo Colon 26 de the Frederick Cancer Research and Development Center y se mantuvo mediante trasplante en serie como un tumor slido subcutneo. Para estudios sobre la ecacia antitumoral, 0,3 ml de un tejido preparado como masa blanda namente dividido (brei) al 5% se inyectaron subcutneamente en el costado izquierdo. La longitud y el tamao del tumor se determinaron con un calibre de nonio y el volumen del tumor se estim de acuerdo con la frmula: Volumen = L (mm) x W2 (mm2 )/2.
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Los tumores se dejaron crecer durante 10 das hasta un tamao de 100 a 200 mm2 y los ratones se clasicaron a continuacin en grupos de 10 ratones que contenan cada uno distribuciones aproximadamente iguales de tamao del tumor. Los volmenes de los tumores se midieron al menos semanalmente durante los tratamientos; los pesos corporales se registraron en los mismos momentos. Los ratones reciban tres dosis en bolo semanales de 5FU (con o sin TAU) y la evaluacin nal del tamao del tumor y el peso corporal se registr siete das despus de la ltima dosis de 5FU. Frmacos El 5-uorouracilo se disolvi en solucin salina y se administr mediante inyeccin intraperitoneal en un volumen de 0,2 ml.

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Se suspendi TAU en hidroxipropilmetilcelulosa al 0,75% con un homogeneizador de tejidos a una concentracin de 200 mg/ml. La TAU se administr en cinco dosis administradas cada 8 horas, comenzando 2 horas despus de la administracin de 5FU. Dosis de 5FU-respuesta: Efecto del aumento a escala de la dosis de 5FU con rescate con TAU en carcinoma colorrectal avanzado en ratones Grupo Volumen del Tumor (mm3 ) 3406 263 1503 267 691 256 19 15 12 10 Peso Corporal (% de cambio) -5% -7% -1 +2% -1% Muertos Regresiones* RP 3 10 4 10 0 10 0 10 0 10 --1 10 9 10 10 10 RC ---4 10 8 10

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A. Control (sin 5FU) B. 5FU 100 mg/kg C. 5FU 150 mg/kg + TAU D. 5FU 175 mg/kg + TAU E. 5FU 200 mg/kg + TAU

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* RP = Respuesta Parcial; > 50% de disminucin en el tamao del tumor (incluye RC) * RC = Respuesta Completa; sin tumor detectable Tumor: carcinoma Colon 26, tamao inicial 198 14 mm3 5FU; inyeccin i.p., 3 veces por semana TAU: 4000 mg/kg p.o. x 5 a intervalos de 8 h, comenzando 2 horas despus del 5FU Evaluacin: 7 das despus de la ltima dosis de 5FU Anlisis

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Existe una fuerte mejora en la ecacia antitumoral cuando la dosis de 5FU se eleva hasta 175 mg/kg/semana. La evaluacin adicional hasta 200 mg/kg incrementa la incidencia de respuestas completas. Es importante apuntar que se obtena una alta incidencia de regresiones sin toxicidad signicativa segn se meda mediante la prdida de peso corporal. El 5FU a la dosis tolerada mxima normal (100 mg/kg) no produca regresiones y solo inhiba el crecimiento del tumor en aproximadamente 50%. El tiempo de vida de los animales tratados con 5FU a 175 200 mg/kg se prolongaba substancialmente. Todos los animales de los grupos A y B moran de avance del tumor dentro de los 40 das despus del trasplante del tumor. Los animales de los grupos D y E estaban vivos y manteniendo pesos corporales normales incluso despus de 50 das. Las regresiones completas, segn se determinaba por ausencia de tejido tumoral palpable, eran duraderas; los tumores no recrecan en estos animales durante un perodo de observacin subsiguiente de ms de 90 das. Ejemplo 16 Tratamiento de melanoma B16 con 5-uorouracilo y triacetiluridina en dosis altas

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Ratones Se usaron en este experimento ratones C57BL/6 hembra de aproximadamente 8 semanas de edad y que pesaban aproximadamente 20 gramos. La dosis tolerada mxima de 5FU en estos ratones sobre un esquema de tres bolos por semana es 100 mg/kg.

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Tumores Se obtuvo melanoma B16 mrido de the Frederick Cancer Research Foundation y se mantuvo mediante trasplante en serie como un tumor slido subcutneo. Para estudios sobre la ecacia antitumoral, 0,3 ml de un tejido preparado como masa blanda namente dividido se inyectaron subcutneamente en el costado izquierdo. La longitud y la anchura del tumor se determinaron con un calibre de nonio y el volumen del tumor se estim de acuerdo con la frmula: Volumen = L (mm) x W2 (mm2 )/2.
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15

Los tumores se dejaron crecer durante 10 das hasta un tamao de aproximadamente 300 mm2 y los ratones se clasicaron a continuacin en grupos de 8 ratones cada uno que contenan distribuciones aproximadamente iguales de tamao del tumor. Los volmenes de los tumores se midieron al menos semanalmente durante los tratamientos; los pesos corporales se registraron en los mismos momentos. Los ratones reciban tres dosis en bolo semanales de 5FU (con o sin TAU) y la evaluacin nal del tamao del tumor y el peso corporal se registr siete das despus de la ltima dosis de 5FU. Frmacos

20

El 5-uorouracilo se disolvi en solucin salina y se administr mediante inyeccin intraperitoneal en un volumen de 0,4 ml. La TAU se suspendi en hidroxipropilmetilcelulosa al 0,75% con un homogeneizador de tejidos a una concentracin de 200 mg/ml. La TAU se administr en cinco dosis dadas una vez cada 8 horas, empezando 2 horas despus de la administracin de 5FU. Efecto del aumento a escala de la dosis de 5FU con rescate de TAU sobre el crecimiento y las metstasis de melanoma B16

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Grupo

Peso del Tumor (g) 5,8 1,1 4,7 1,4 0,9 0,3

Ratones con metstasis 100% 86% 12%

Metstasis por pulmn 1,9 5,6 0,38

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Control (sin 5FU) 5FU 100 mg/kg (MTD) 5FU 225 mg/kg + TAU

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Tumor: melanoma B16 s.c., tamao inicial 344 58 mg Anlisis

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El melanoma B16, como los melanomas humanos en general, es relativamente resistente a la quimioterapia. El 5FU a la dosis tolerada mxima normal de 100 mg/kg tiene poco efecto sobre el crecimiento del tumor y las metstasis espontneas al pulmn. El aumento a escala de la dosis semanal de 5FU hasta 225 mg/kg con administracin retardada de TAU para reducir la toxicidad del 5FU daba como resultado una inhibicin signicativa del crecimiento del tumor y una fuente reduccin en metstasis espontneas a los pulmones. Puesto que los melanomas normalmente no son sensibles al uorouracilo, la observacin de que se obtena una actividad signicativa con un aumento a escala de la dosis de 5FU y TAU sugiere que este enfoque puede ser ecaz en tipos de tumores para los que el 5FU normalmente no es un frmaco de eleccin. Ejemplo 17

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La triacetiluridina mejora la actividad teraputica de 5FU oral administrado con un inhibidor de la degradacin de 5FU.
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La biodisponibilidad de 5-uorouracilo (5FU) administrado oralmente es baja y variable debido a la degradacin de 5FU por la encima dihidropirimidina deshidrogenasa (DPD). La administracin de un inhibidor de esta enzima permite la administracin oral de 5FU (Baccanari y otros, Proc. Nat. Acad. Sci. 90:11064-11068, 1994). Puesto que los derivados acilados de nuclesidos de pirimidina no metilados son activos despus de la administracin oral, su uso con 5FU oral da como resultado una mejora en la ecacia y el ndice teraputico. Un tratamiento completamente oral para algunos tipos de cncer presenta ventajas en trminos de gastos hospitalarios y comodidad. Un n de la administracin oral de 5FU junto con un inhibidor de DPD es proporcionar una exposicin a 5FU similar a una infusin intravenosa continua. Esto implica la administracin diaria (o ms frecuente) de 5FU ms un inhibidor de DPD. Alternativamente, dosis superiores de 5FU se dan menos frecuentemente, por ejemplo semanalmente.
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El siguiente experimento se dise para determinar el efecto de 5FU en alta dosis oral semanal con administracin oral retardada de TAU sobre la ecacia antitumoral. Se us 5-etiniluracilo, un inhibidor irreversible potente de DPD, para permitir la administracin oral de 5FU.
5

Ratones Ratones Balb/C hembra de aproximadamente 8 semanas de edad y que pesaban aproximadamente 20 gramos.

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Se obtuvo Colon 26 de the Frederick Cancer Research Foundation y se mantuvo mediante trasplante en serie como un tumor slido subcutneo. Para estudios sobre la ecacia antitumoral, 0,3 ml de un tejido preparado como masa blanda namente dividido al 5% se inyectaron subcutneamente en el costado izquierdo. La longitud y el tamao de los tumores se determinaron con un calibre de nonio y el volumen de los tumores se estim de acuerdo con la frmula: Volumen = L (mm) x W2 (mm2 )/2. Los tumores se dejaron crecer durante 10 das hasta un tamao de 100 a 200 mm2 y los ratones se clasicaron a continuacin en grupos de 10 ratones cada uno que contenan distribuciones aproximadamente iguales del tamao del tumor. Los volmenes de los tumores se midieron al menos semanalmente durante los tratamientos; los pesos corporales se registraron en los mismos momentos. Los ratones reciban tres dosis en bolo semanales de 5FU (con o sin TAU) y la evaluacin nal del tamao del tumor y el peso corporal se registr siete das despus de la ltima dosis de 5FU. Frmacos

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Se disolvi 5-etiniluracilo en solucin salina y se administr oralmente a los ratones en un volumen de 0,2 ml una hora antes del 5FU. Se disolvi 5-uorouracilo en solucin salina y se administr oralmente mediante sonda en un volumen de 0,2 ml.

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Se suspendi TAU en hidroxipropilmetilcelulosa al 0,75% con un homogeneizador de tejidos a una concentracin de 200 mg/ml. La TAU se administr en cinco dosis administradas cada 8 horas, empezando 2 horas despus de la administracin de 5FU. Aumento a escala de la dosis de 5FU con rescate con TAU retardado: 5FU oral con 5-etiniluracilo Grupo Volumen del Tumor (mm3 ) 1230 154 319 79 15 11 924 98 Peso Corporal (% de cambio) -14 -6 -3 -7 Regresiones* RC 0/10 0/10 4/10 0/10 RP 0/10 2/10 5/10 0/10

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Control EU + 5FU 20 mg/kg 2 veces por semana EU + 5FU 50 mg/kg + TAU 2 veces por semana EU + 5FU 2 mg/kg 9 veces diarias

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Tumor: carcinoma Colon 26, tamao inicial 82 9 mm3 EU + 5FU; 5-etiniluracilo (EU) 2 mg/kg p.o. 1 h antes del 5FU TAU: 4000 mg/kg p.o. x 5 a intervalos de 8 h, comenzando 2 horas despus del 5FU Evaluacin: 14 das despus de la primera dosis de tratamiento (24 das despus de la implantacin del tumor) Regresiones: RC = Regresin completa; RP = regresin parcial (> 50%) La administracin retardada de TAU oral permita un aumento a escala de la dosis de 5FU junto con un inhibidor de la degradacin de 5FU. La dosis tolerada mxima de 5FU se reduce en presencia de un inhibidor de DPD, puesto que se inhibe la depuracin de 5FU. Normalmente, ms de 90% de una dosis administrada de 5FU es degrado por DPD en lugar de incorporarse en los conjuntos de nucletidos celulares. Por lo tanto, la inhibicin de la degradacin de 5FU tiene el potencial de incrementar fuertemente la toxicidad de 5FU. La dosis tolerada mxima aproximada de 5FU oral en ratones pretratados con 5-etiniluracilo es 20 mg/kg en un esquema de 3 veces por semana. La administracin retardada de TAU permita un aumento a escala de la dosis de 5FU hasta 50 mg/kg/semana con una mejora consiguiente en la ecacia antitumoral. La administracin diaria de una dosis inferior de 5FU (2 mg/kg al da durante 9 das), que se aproxima a una infusin continua de 5FU, era menos ecaz para inhibir el crecimiento tumoral que un esquema semanal de administracin de 5FU.
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Ejemplo 18 Sntesis de etoxicarboniluridina
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A una solucin enfriada con hielo de 0,5 gramos (1,76 milimoles) de 2,3-isopropilidenuridina en 10 ml de piridina se aadieron gota a gota con agitacin 2,64 milimoles (1,5 equivalentes) de cloroformiato de etilo. La reaccin se dej calentar hasta temperatura ambiente (25C) y se agit durante la noche (18 horas), punto en el cual la TLC (cloroformo/metanol 9:1) mostraba la conversin completa del material de partida en un solo producto. El disolvente se retir mediante evaporacin giratoria bajo alto vaco, dando un jarabe beige claro que se llev a la etapa de desproteccin subsiguiente. El jarabe se disolvi en 15 ml de cido frmico al 50% y se calent a 60-70C durante 2 horas, punto en el cual la TLC mostraba una retirada cuantitativa del grupo isopropilideno. Se retiraban agua y cido frmico mediante evaporacin bajo alto vaco, dando un jarabe beige claro-rosa que se aplic a una columna de gel de slice y se eluy con cloroformo/metanol 95:5. Las fracciones que contenan el producto se recogieron, se reunieron y se evaporaron, dando un producto vtreo ligeramente rosa.

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REIVINDICACIONES 1. Uso de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado para la fabricacin de un medicamento para la prevencin o la reduccin de los efectos txicos de la terapia citorreductora, en donde dicho medicamento ha de administrarse en una terapia que comprende: (a) administrar 5-uorouracilo (5-FU) a un ser humano en una dosis de 1000-1600 mg/m2 del ser humano; y
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(b) administrar una cantidad farmacuticamente ecaz de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado. 2. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicha etapa de administracin (a) comprende administrar un bolo de 5-uorouracilo y dicha etapa de administracin (b) comprende administrar de 2 a 24 horas despus de la etapa (a) de 1 a 10 gramos de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado, en donde las etapas (a) y (b) se repiten 3-6 veces. 3. Uso de acuerdo con la reivindicacin 2, en el que el intervalo de tiempo entre cada repeticin de la etapa (a) es de 4 a 14 das.

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4. Uso de acuerdo con la reivindicacin 2, en el que dicha etapa de administracin (a) comprende administrar un bolo de 5-uorouracilo diariamente durante de 4 a 5 das consecutivos y dicha etapa de administracin (b) comprende administrar de 2 a 12 horas despus de cada etapa (a) de 1 a 10 gramos de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado. 5. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicho derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado es un derivado acilado de uridina o citidina. 6. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicho derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado es un derivado acilado de uridina, citidina, desoxicitidina o desoxiuridina. 7. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicho derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado es triacetiluridina.

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8. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicho derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado es etoxicarboniluridina. 9. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicho derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado es triacetilcitidina.

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10. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicho derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado es diacetildesoxicitidina. 11. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicho derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado es un derivado acilado de desoxicitidina. 12. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicho derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado es un derivado acilado de uridina, desoxiuridina o citidina y dicha etapa de administracin (b) tambin incluye administrar un inhibidor de uridina fosforilasa.

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13. Uso de acuerdo con la reivindicacin 12, en el que dicho inhibidor de uridina fosforilasa se selecciona del grupo que consiste en bencilaciclouridina, benciloxibencilaciclouridina, aminometilbencilaciclouridina, aminometilbenciloxibencilaciclouridina, hidroximetilbencilaciclouridina, hidroximetilbenciloxibencilaciclouridina, 2,2-anhidro-5etiluridina, barbiturato de 5-bencilo, barbiturato de 5-benciloxibencilo, barbiturato de 5-benciloxibencil-1-[(1-hidroxi-2-etoxi)metilo], barbiturato de 5-benciloxibencilacetil-1-[(1-hidroxi-2-etoxi)metilo] y acetilaciclobarbiturato de 5metoxibencilo. 14. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicho derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado es un derivado acilado de citidina o desoxicitidina y dicha etapa de administracin (b) tambin incluye administrar un inhibidor de citidina desaminasa. 15. Uso de acuerdo con la reivindicacin 14, en el que dicho inhibidor de citidina desaminasa se selecciona del grupo que consiste en tetrahidrouridina o tetrahidro-2-desoxiuridina.

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16. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicho derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado es un derivado acilado de uridina, citidina o desoxicitidina y dicha etapa de administracin (b) tambin incluye administrar un inhibidor del transporte de nuclesidos.

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17. Uso de acuerdo con la reivindicacin 16, en el que dicho inhibidor del transporte de nuclesidos se selecciona del grupo que consiste en dilazep, dipiridamol, probenecid, lidoazina o nitrobenciltioinosina.
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18. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en la que dicha etapa de administracin (b) tambin incluye administrar un agente que mejora la hematopoyesis. 19. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicha etapa de administracin (b) tambin incluye administrar un compuesto capaz de mejorar la captacin y la fosforilacin de nuclesidos en las clulas.

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20. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicha etapa de administracin (a) tambin incluye administrar AZT. 21. Uso de acuerdo con la reivindicacin 1, en el que dicho 5-FU se administra junto con un modulador bioqumico de la ecacia del 5-uorouracilo.

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22. Uso de acuerdo con la reivindicacin 21, en el que dicho modulador es un inhibidor de la biosntesis de purina, un antifolato, un inhibidor de la biosntesis de pirimidina o un inhibidor de la degradacin de 5-uorouracilo.
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23. Uso de acuerdo con la reivindicacin 22, en el que dicho inhibidor de la biosntesis de purina es ribsido de metilmercaptopurina. 24. Uso de acuerdo con la reivindicacin 22, en el que dicho antifolato es metotrexato o trimetrexato.

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25. Uso de acuerdo con la reivindicacin 22, en el que dicho inhibidor de la biosntesis de pirimidina es PALA, brequinar, acivicina o 6-azauridina. 26. Uso de acuerdo con la reivindicacin 22, en el que dicho inhibidor de la degradacin de 5-uorouracilo es un inhibidor de la enzima dihidropirimidina deshidrogenasa.

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27. Uso de acuerdo con la reivindicacin 26, en el que dicho inhibidor de dihidropirimidina deshidrogenasa es 5etiniluracilo, bromoviniluracilo, CDHP, uracilo, timina, timidina o benciloxibenciluracilo. 28. Uso de acuerdo con cualquier reivindicacin precedente, en el que dicho medicamento es para la prevencin o la reduccin de los efectos txicos de la terapia del cncer.

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29. Uso de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado para la fabricacin de un medicamento para tratar el cncer, en el que dicho medicamento ha de administrarse en un tratamiento que comprende: (a) administrar un inhibidor de la enzima dihidropirimidina deshidrogenasa;
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(b) administrar 5-uorouracilo (5-FU) a un ser humano en una dosis de 1000-1600 mg/m2 del ser humano; y (c) administrar una cantidad farmacuticamente ecaz de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado.
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30. Uso de acuerdo con la reivindicacin 29, en el que dicho inhibidor de dihidropirimidina deshidrogenasa es 5etiniluracilo, bromoviniluracilo, cianodihidropiridina, uracilo, timina, timidina o benciloxibenciluracilo.
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31. Uso de acuerdo con la reivindicacin 29, en el que dicha etapa de administracin (a) tiene lugar antes de o al mismo tiempo que dicha etapa de administracin (b). 32. Uso de 5-uorouracilo (5-FU) en una dosis de 1000-1600 mg/m2 de un ser humano para la fabricacin de un medicamento para la terapia citorreductora de un ser humano, en el que dicho medicamento ha de administrarse antes, durante y/o despus de la administracin de una cantidad farmacuticamente ecaz de un derivado acilado de un nuclesido de pirimidina no metilado.

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