Micropipeta

Diferentes tipos de micropipetas. Los ejemplares de la derecha son multicanales, de mltiples puntas.

La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir pequeosvolmenes de lquidos y permitir su manejo en las distintas tcnicas cientficas. Los volmenes captables por estos instrumentos varan segn el modelo: los ms habituales, denominados p20, p200 y p1000, admiten un mximo de 20, 200 y 1000 l, respectivamente. Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos lquidos sin tener que lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de plstico, que habitualmente son estriles. Existen varios tipos de puntas: por ejemplo, las amarillas para pipetear volmenes pequeos (por ejemplo, 10 l), y las azules para pipetear volmenes grandes (por ejemplo, 800 l). [editar]Tipos Existen micropipetas manuales, en las que el volumen a aspirar se fija girando un botn en su parte superior que est conectado a un sistema analgico de confirmacin de volumen, y automticas, en las cuales dicho sistema es digital. Hay micropipetas simples, que slo acogen una punta cada vez, y multicanales, que permiten incorporar mltiples puntas (por ejemplo, ocho), absorbiendo el mismo volumen en todas ellas. Actualmente, se reconocen fcilmente en el mercado dos de las mejores marcas que existen: Eppendorf y Nichiryo.

2.3. Uso correcto de las micropipetas.

Las micropipetas son dispositivos que permiten medir volmenes pequeos que van desde 1 l hasta 1 ml o ms. Al igual que las pipetas stas pueden ser para contener o para verter volmenes. Durante el curso utilizaremos micropipetas para verter, ya sea un volumen fijo o un volumen variable. En las de volumen variable, se puede seleccionar un volumen dentro de un rango de valores determinado. La micropipeta ms comnmente usada en los laboratorios de anlisis fue introducida por la compaa Eppendorf y este nombre se adopt de forma genrica para estos dispositivos, aunque hoy en da existen una gran cantidad de compaas y modelos similares que funcionan bajo un mismo principio de pistones para operar. Por lo tanto, es aconsejable consultar las instrucciones del fabricante sobre el empleo correcto de cada modelo. Sin embargo, todas ellas utilizan puntas o tips descartables plsticos que se ajustan al extremo de la micropipeta. En estas puntas de plstico es donde se deposita el lquido a medir.

Figura 3. Esquema general de las micropipetas marca BioRad a utilizar durante el curso. A1: botn pulsador, A2: tornillo del botn pulsador, B: rueda dentada de graduacin del volumen, C: cono de la pipeta, D: expulsor de punta y E: punta o tip descartable. Tomado del manual de manejo de micropipetas Biorad, BR/06/05

Para absorber el lquido, el pistn es presionado hasta una primera posicin, el tip es puesto en contacto con el lquido y luego, lentamente, se permite que el pistn vuelva a su posicin original. Este paso permite el llenado del tip con el 9 volumen correspondiente. El tip de plstico generalmente no se seca por fuera ya que se considera que su superficie no absorbe lquido. A continuacin se

describen las instrucciones especficas para los modelos de micropipetas que se utilizarn durante el curso (Figura 3). 1. Seleccin de la micropipeta a utilizar segn el volumen a dispensar. Para este paso, se aplican las mismas reglas que se utilizan para el manejo de las pipetas. El Cuadro 5 muestra los rangos de volmenes que se pueden pipetear con cada modelo de micropipeta de la marca Biorad, adems de los usos ms comunes. La mayora de la micropipetas indican en el botn pulsador el rango o volumen mximo que pueden pipetear. Para prevenir un dao en el mecanismo interno de la micropipeta recuerde nunca sobrepasar los volmenes mximos permitidos para cada micropipeta. Cuadro 5. Modelo, rango de volmenes y aplicaciones ms comunes de las micropipetas marca Biorad a utilizar durante el curso

Modelo Rango de volumen (l) Uso ms comn BR10 0.5-10 Medida y transferencia de microvolmenes. Biologa molecular y ensayos enzimticos BR20 2-20 Medida y transferencia de soluciones acuosas en general, cidos y bases BR200 20-200 Igual a BR20 BR1000 100-1000 Igual a BR20 2. Debido a que la micropipeta tiene un rango de volumen ajustable, es necesario seleccionar el volumen a medir. Para ello se debe localizar el

indicador de volumen, compuesto de tres dgitos que se deben leer de arriba hacia abajo. En la parte ms baja del indicador hay una escala que permite el ajuste del volumen al ltimo dgito o decimal permitido segn el caso. En las micropipetas de 2 hasta 200 l, los dgitos negros indican microlitros y los dgitos rojos representan dcimas de microlitro. En el Cuadro 6 se muestran ejemplos de cmo debe lucir el indicador de volumen para medir diferentes volmenes. 3. Ajustar el volumen de la pipeta con el tornillo del botn pulsador (Figura 3, A2) o la rueda de graduacin del volumen (Figura 3, B), hasta llegar a 1/3 por encima del valor deseado. Luego, lentamente, girando el tornillo o la rueda, disminuir el ajuste hasta el valor deseado prestando atencin para no excederlo. Si se excede, es aconsejable repetir el procedimiento de ajuste. Siempre se debe ajustar el volumen deseado desde un volumen ms alto disminuyendo las indicaciones del indicador. 10 Cuadro 6. Disposicin de los dgitos en el indicador segn la micropipeta a usar.

Micropipeta con volumen mximo a dispensar*: 10 l 20 l 100 l 200 l 1000 l 0 1010 7 2727 5 (rojo) 5 (rojo) 5 5 5 Volumen a dispensar: 7.5 l 12.5 l 75 l 125 l 750 l * todos los dgitos deben aparecer en negro, excepto cuando se indique lo contrario en parntesis 4. Seleccionar la punta o tip plstico apropiado para la micropipeta: la punta debe ajustarse al cono de la micropipeta (Figura 3). Al insertar la punta en el

cuerpo de la pipeta hay que aplicar una fuerte presin con movimiento giratorio para asegurar la hermeticidad. Nunca usar la pipeta con lquidos sin la punta colocada. Es posible que la punta plstica se encuentre en una caja tambin plstica que facilita su uso. Si la punta no queda bien ajustada o no est en caja, deber ajustarse con la mano sin tocar la superficie que estar en contacto con la solucin a extraer. 5. Aspiracin: apretar el botn pulsador hasta el primer tope (Figura 4A) 6. Con la pipeta en posicin vertical, sumergir la punta entre 1 mm y 3 mm en la muestra. 7. Lentamente se aspira el lquido al relajar la presin del dedo sobre el botn pulsador (Figura 4B). Si este paso no se realiza con atencin, puede entrar aire en la punta y la cantidad de muestra aspirada no es la adecuada. 8. Esperar un segundo y retirar la punta del lquido. 9. Dosificacin: colocar la parte inferior de la punta contra la pared interior del recipiente donde se depositar el lquido, con un ngulo entre 10 o y 40 o . 10.Apretar el botn pulsador suavemente hasta el primer tope (Figura 4C) y esperar un segundo. 11.Apretar el botn pulsador hasta el segundo tope para vaciar el resto del lquido (Figura 4D). 12.Manteniendo apretado el botn pulsador en el segundo tope, retirar la pipeta deslizando la punta por la pared del recipiente. Soltar luego el botn pulsador (Figura 4E).

13.Expulsar la punta apretando el botn del expulsor (Figura 4F y Figura 3, D). 11 Figura 4. Posiciones de la micropipeta a la hora de medir un volumen especfico. A: Botn pulsador en el primer tope, B: la punta de la micropipeta es sumergida entre 1 mm y 3 mm en la muestra para luego liberar el botn pulsador suavemente hasta su posicin original, C: Forma correcta de dispensar el lquido medido en el recipiente correspondiente, D: Posicin de la micropipeta al apretar el botn pulsador hasta el segundo tope, E: Vuelta a la posicin inicial, F: Expulsin de la punta, la cual debe ser descartada en un recipiente apropiado. Tomado del manual de manejo de micropipetas Biorad, BR/06/05 Para no daar el sistema interno de pistones que posee la micropipeta: -el lquido nunca debe entrar en contacto con el cono de la micropipeta -nunca vuelque la micropipeta con la parte de arriba hacia abajo -nunca coloque la micropipeta en forma horizontal si la punta tiene lquido -nunca ajuste el volumen fuera del rango de la micropipeta