ELABORACION Y CARACTERIZAC ION DE FILMES BIODEGRADABLES ADICIONADOS CON EXTRACTO ETANOLICO DE PROPOLEO VERDE PREPARATION AND CHARACTERIZATION OF BIODEGRADABLE

FILM USING EXTRACTS OF GREEN PROPOLIS t Reyes, M. L. ; Salamanca, G.G. ; Bodini, R. ; Fvaro-Trindade, C.S. 2 2 Sobral, P.J.A. , Carvalho, R.A.
1 1 1 2 2

Grupo de Investigaciones Mellitopalinolgicas y Propiedades Fisicoqumicas de Alimentos Facultad de Ciencias Departamento de Qumica Universidad del Tolima. Barrio Santa Elena parta Alta A.A. 546 Ibagu. Tolima. Colombia Laboratorio de Tecnologa de Alimentos Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos Universidade de Sao Paulo. Pirassununga-SP. Brasil e-mail: lauramreyes@gmail.com RESUMEN
2

Los filmes biodegradables a base de macromolculas y plastificantes hidrofbicos son objeto de estudio por sus caractersticas de barrera al vapor de agua y oxgeno y su aplicacin como embalaje de alimentos. El objetivo de este trabajo esta relacionado con la elaboracin y caracterizacin de las propiedades fisicoqumicas de filmes a base de gelatina y plastificante hidrofbico (Citrato de acetiltributila), activados con extracto etanlico de propleo verde (EEP) y establecer la incidencia de ste con respecto a la humedad y solubilidad de los mismos como una estrategia para el desarrollo de nuevos empaques biodegradables de inters agroindustrial. Seis formulaciones fueron elaboradas a 5, 10, 20, 30 y 40% EEP y un blanco de referencia. Caracterizaciones se hicieron sobre propiedades mecnicas, parmetros cromticos, humedad, solubilidad y espectrofotometra de infrarrojo. El anlisis estadstico se realiz a travs de anlisis de varianza (ANOVA), estableciendo diferencias estadsticamente significativas entre los valores medios observados. El espesor promedio de los filmes fue de 0.0860.005 mm; se observ influencia directa de la adicin de EEP sobre el color, presentndose incremento en la intensidad del croma amarillo-azul 11.51.93 a 32.21.51 y rojo-verde -1.810.10 a -3.800.24, con descenso de la luminancia en relacin al incremento de EEP desde 93.70.92 a 87.00.18; la diferencia de color E respecto del patrn de calibracin ascendi desde 10.01.84 a 31.71.58. Los parmetros de tensin y elongacin presentan diferencias estadsticamente significativas entre los grupos de muestras. El contenido de humedad final y solubilidad de los filmes, estn en funcin del contenido de EEP adicionado. El espectro infrarrojo de los filmes presenta seales caractersticas del polmero formado, se revelan seales de grupo amidas, propios de la gelatinas Tipo A. El espectro del EEP revela seales propias de los componentes del propleo verde adicionado. Se plantean futuros trabajos para nuevos tipos de filmes. Palabras clave: Filmes hidrofbicos. Polmeros degradables. Propleo verde. Reologa ABSTRACT The biodegradable films based macromolecules and hydrophobic plasticizers are the subject of several studies for their barrier properties to water vapor and oxygen and their application as food wrapping. In this paper aspects of the preparation and physicochemical characterization of biodegradable films plasticized with citrate acetiltributila enriched with propolis ethanol extract of green (EEP). Six different formulations were prepared at 5, 10, 20, 30 and 40% and a reference white. Characterizations were made on mechanicals properties, color parameters, moisture, solubility and infrared spectrophotometry. The average thickness of the films was 0.086 0.005 mm, there was a direct influence of the addition of EEP on the color, performing increased intensity of the yellow-blue chroma 11.5 1.93 to 32.2 1.51 and red- green 1.81 0.10 to -3.80 0.24, with a decrease in luminance on the relation to the increase of EEP from 93.7 87.0 0.92 to 0.18, the color difference E for the calibration standard rose from 10.0 1.84 to 31.7 1.58. The parameters of stress, elongation statistically significant differences between groups of samples. The final moisture content and solubility is based on the content of ethanol extract of propolis added. The

infrared spectrum of the films showing signs formed polymer characteristics show signs typical of amide group, characteristic of the gelatin type A. The spectrum of green propolis extract reveals signals characteristic of the components of green propolis added. Future consideration for other biofilms can be developed. Keywords: Film, Biodegradable, Hydrophobic, Propolis INTRODUCCIN Los filmes biodegradables constituyen una cobertura polimrica, la cual contribuye a la extensin de la vida til de un producto al reducir la migracin de humedad y solutos, el intercambio de gases, la respiracin y otras reacciones oxidativas. Los filmes comestibles y/o biodegradables son producidos por macromolculas, incluidas las protenas, que influencia directamente las caractersticas de los filmes (Oses et al, 2009; Carvalho, 2009), ya que poseen una limitada barrera al vapor de agua, por lo cual es difcil de utilizarlos (Carvalho & Grosso, 2006). El uso de protenas en la elaboracin de pelculas comestibles y biofilmes ha ganado especial inters en la industria de los alimentos debido no solo a sus propiedades, funcionales, tambin por su versatilidad y disponibilidad en la naturaleza. (Trachoo, 2003; Ozdemir, et al, 2008, Carvalho, 2009). Algunos ejemplos de protenas utilizadas actualmente en el estudio de embalajes biodegradables y/o comestibles es la gelatina (Sztuka & Kolodziejska, 2009; Prez-Mateos et al., 2009; Gmez-Estaca et al., 2009; Thomazine et al, 2005), protenas de msculo de peces (Sobral et al., 2005; Garca & Sobral, 2005); protenas miofibrilares de peces (Cuq et al., 1997; Monterrey-Quintero & Sobral, 1999), mezclas de aislado proteico de suero de leche y caseinato de sodio (Longares et al., 2005); aislado proteico de suero de leche (Oss et al., 2009; Talens & Krochta, 2005); protenas de semillas de algodn (Marqui et al., 1997); protenas de man (Jangchud & Chinnan, 1999); protenas solubles de msculo de peces (Sobral et al., 2005; Bourtoom et al., 2006); aislado proteico de semilla de girasol (Orliac et al., 2003), entre otros. El uso de plastificantes en los procesos de polimerizacin durante la elaboracin de biofilsmes, ameritan consideraciones, pues aumentan la flexibilidad y maleabilidad, aumentando el espacio libre entre las cadenas polimricas, provocando disminucin de las fuerzas intermoleculares a lo largo de la matriz (Sothornvit & Krochta, 2001). Las consideraciones anteriores, han motivado la elaboracin y caracterizacin de filmes a base de gelatina y plastificante hidrofbico, activados con extracto etanlico de propleo verde y su efecto sobre las propiedades fisicoqumicas finales. MATERIALES Y MTODOS En la elaboracin de los filmes biodegradables se utiliz: Gelatina Tipo A comercial (GELITA, Brasil Ltda.; Sao Paulo Brasil); Tributyl Oacetilcitrato al 98% (SigmaAldrich Chemistry) como plastificante; Alcohol etlico absoluto al 99,5% (Labsynth-Synth) como solvente; Lecitina de soja (Caramuro Alimentos S.A) y Extracto etanlico de propleo verde colectado en apiarios del estado de Sao Paulo-Brasil. Extracto etanlico de propleo (EEP): La obtencin del extracto se logro tras la separacin de las masas mecnicas y tras la adicin de 100 ml de etanol al 80% (v/v) sobre una masa de 30 g de propleo crudo. Los extractos se mantuvieron en refrigeracin hasta el momento de su aplicacin. Elaboracin de los filmes: Las pelculas fueron elaboradas luego de la hidratacin de la gelatina (30mn), solubilizacin de la misma a 55C por 30mn y adicin del plastificante. Finalmente se incorpor la fraccin etanlica de propleos, con seis niveles a 5, 10, 20, 30 y 40% del (EEP) y un blanco de referencia. Las matrices as elaboradas se dispusieron sobre placas de acrlico y sometidas a secado. Caracterizacin de los filmes: Se considero en todos los casos el espesor de los biofilmes elaborados y sus propiedades mecnicas, evaluadas como esfuerzo de traccin y perforacin (Sobral et al., 2001; Thomazine et al., 2005), mediante pruebas en un texturmetro TA.XT2.; adicionalmente se realizaron valoraciones cromticas (color y opacidad), humedad y solubilidade, conforme a las directrices de Gontard et al., 1993; Carvalho, 2009. Adicionalmente se realizaron evaluaciones espectrofotometrcas en el infrarrojo FT-IR (Perkin-Elmer Precisely), en el -1 rango de 650 a 4000cm (ara verificar la naturaleza de las pelculas elaboradas, conforme al estudio realizado por Stuart, 2004 en este tipo de matrices.

RESULTADOS Y DISCUSIN Las pelculas elaboradas se presentan como alternativa potencial al impacto ambiental causado por el uso de polmeros con tazas reducidas de biodegradabilidad. El potencial se deriva de sus propiedades fisicomecnicas, principalmente las asociadas a la tensin y elongacin, que posibilitaran su uso para el embalaje y trasporte. El anlisis de varianza para la tensin y elongacin en cada uno de los filmes elaborados, muestra diferencias significativas entre los tratamientos con diferentes proporciones de propleo. La adicin de propleo en principio parece incidir en el comportamiento de los filmes, propiciando mayor adherencia entre los componentes dentro del material, la retencin de humedad igualmente puede explicar el comportamiento de las pelculas. La formulacin elaborada con extracto de propleo al 5% se presenta con una ligera resistencia a la tensin y mayor elongacin en relacin al blanco y las preparaciones al 30 y 40% de extracto; los resultados observados explican el comportamiento del modulo de elasticidad y la deformacin, que resulta menor en relacin a las otras formulaciones y al blanco no adicionado de propleo. En las figuras 1 y 2 se relacionan los perfiles de tensin, elongacin y mdulo de elasticidad en los seis tratamientos, asi como los valores medios de las pruebas de fuerza y deformacin que tambin revelan diferencias entre los tratamientos. Las pruebas de fuerza y deformacin igualmente presentan diferencias importantes entre los tratamientos. La retencin de molculas de agua y del solvente explicaran el comportamiento final de los filmes cuyo comportamiento y caractersticas hidrofbico queda marcado por los grupos polares, libres de los aminocidos que componen la estructura de la gelatina, pudiendo retener humedad y parte del solvente del etanol adicionado en el EEP

Elongacion (%)

Anlisis estadstico: La propiedades de los biofilmes se evaluaron por triplicado, las diferencias en las propiedades en cada una de las formulaciones se establecieron mediante un anlisis de varianza, estableciendo diferencias estadsticamente significativas entre los valores medios observados en cada uno de los tratamientos, adems se considero el test de rangos mltiples de Fisher. Se usaron los paquetes estadsticos Statgraphics Centurin XVI (Versin 16.1.02) y Minitab 15 (Versin 15.1.20.0).

72 70 68 66 64 62 60 Blanco EEP-05 EEP-10 EEP-30 EEP-40 Film

Tension (Mpa)

20.0 17.5 15.0 12.5 10.0 7.5 5.0 Blanco EEP-05 EEP-10 EEP-30 EEP-40 Film

17.5

17.0

M. E (Mpa/%)

16.5

16.0

15.5

15.0

C Figura 1. Valores medios de tensin (A), elongacin (B) y mdulo de elasticidad (C) en los filmes adicionados con propleo.
Film

Blanco

EEP-05

EEP-10

EEP-30

EEP-40

Al incrementar la concentracin de extracto desde 5 a 40% (p/p), se presenta un ligero efecto de solvatacin facilitado por las interacciones dipolo-dipolo de los componentes propios del propleo y las molculas de agua aportadas con el etanol utilizado como solvente. El promedio de la humedad en las muestras elaboradas sin propleo es del orden de 9.24 0.89, que es comparable al observado en el extracto al 20% de EEP (Tabla 1) y que es mas bajo que los valores observados en los tratamientos con un mayor contenido de extracto. Tabla 1. Valores medios de la humedad y solubilidad observados en filmes con propleo
Tratamiento Blanco EEP - 5 EEP - 1 0 EPP - 2 0 EEP - 3 0 EEP - 4 0 Humedad (%) 9.240.89 8.470.65b 11.00.50c 9.570.58 10.00.88 10.30.54 Solubilidad (%) 8.131.30 7.760.60 9.141.10b 8.871.40c 8.431.43c 5.851.11d

El anlisis de varianza indica que existen diferencias significativas sobre el parmetro en evaluacin (Pv < 0.05). Este comportamiento en principio puede ser atribuido al efecto de los

componentes hidroflicos del extracto, que se potencializa por el efecto de la gelatina. En relacin a la solubilidad, se percibe un ligero incremento desde el blanco a la formulacin que contiene 30% de EEP y son comparables entre s; sin embargo en la formulacin EPP-40 se presenta una solubilidad que marca una diferencia importante con respecto a las anteriores (5.851.11).
32

Tabla 2. Valores medios de las propiedades cromticas observadas en filmes con propleos

30
Fuerza (N)

28

26

24

22 Blanco EEP-05 EEP-10 EEP-20 EEP-30 EEP-40 Film

3.0

2.5
Deformacin (%)

2.0

1.5

1.0 Film B Figura 2. Comportamiento de los parmetros de fuerza (A) y deformacin (B) en filmes enriquecidos con propleo. Blanco EEP-05 EEP-10 EEP-20 EEP-30 EEP-40

El estudio de los espectros de infrarrojo FT-IR, permiten caracterizar la estructura final de los filmes, se distinguen las bandas intensas entre -1 -1 1700 y 1600cm y entre 1600 y 1500cm , que son conocidas respectivamente como bandas asociadas a la mida I (C=O) y amida II (C-N) y deformacin angular de la unin N-H, correspondiente a los grupos peptdicos. La -1 amida III, con bandas entre 1200 y 1400 cm , constituye componentes del tramo C-N y N-H en el plano de flexin de las vibraciones del grupo amida, y absorciones debidas a las vibraciones de los grupos C-H2 de la glicina y de la prolina, constituyentes de la gelatina Tipo A. Estas mismas asignaciones coinciden con los trabajos de (Carvalho, 2009; Mantsch & Chapman, 1996). Tomando como referencia el estudio de la composicin de propleo verde (Funari et al., 2007), los principales constituyentes del extracto quedan representados en el respectivo espectro IR CONCLUSIONES En relacin a las propiedades fsico-mecnicas de filmes biodegradables enriquecidos con EEP se evidencio que la elongacin aumenta directamente con el contenido de humedad final de las muestras; caso contrario presenta la tensin, ya que al incrementarse el contenido de agua de la muestras despus del acondicionamiento, el material se hace mas frgil y la fuerza de tensin inferior. la adicin de propleo causa cambios en el color en proporcin a la cantidad usada. Las tcnicas de espectroscopia contribuyen a la caracterizacin de los filmes elaborados. El trabajo realizado contribuye al estudio y desarrollo de muevas matrices y a su caracterizacin fisicoqumica. REFERENCIAS
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En relacin a los parmetros cromticos (Tabla 2), la adicin de EEP, como se esperaba, causa disminucin en los valores de luminancia L, desde 93.70.92 a 87.00.18; los valores medios de las muestras de los filmes asociados a los parmetros cromaticidad (a*) y (b*) estn dados por los compuestos que proviene de la especie Baccharis dracunculifolia (Bankova, 2005). En el propoleo los componentes reportados como matoritarios cido -cumrico, acetofenona, diterpenos, lignanos, flavonoides, cido clorognico, cido cafeico, cido felrico, cido trans-cinmico, kaempferol, isofakuranetina, kaemperida y artepilina C serian los responsables del comporyamiento y variabilidad de los parmetros de color y al gunas de las propiedades mecnicas; con el incremento en la concentracin del EEP, se aumenta la intensidad de las tonalidades amarillo y verde en la misma proporcin favoreciendo la luminancia (L) y el Croma.

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