INSTITUTO TECNOLGICO DE TEPIC

Departamento de Ingeniera qumica y bioqumica

ING DE BIORREACTORES INSTRUMENTACION Y CONTROL DEL BIORREACTOR. SENSORES QUMICOS

PROFESOR: Salvador Aguilar

ALUMNOS:
Agredano de la Garza Cindy Sacnithe Bravo Garnica Iris Paloma Coronado Partida Leonardo Daniel Sojo Aguiar Yocasta Irais

Fecha: 08 de Noviembre 2011.

Las protenas del

INSTRUMENTACION Y CONTROL DEL BIORREACTOR. SENSORES QUMICOS

El diseo de biorreactores es una tarea de ingeniera bastante compleja. Los microorganismos o clulas son capaces de realizar su funcin deseada con gran eficiencia bajo condiciones ptimas. Las condiciones ambientales de un biorreactor tales como flujo de gases (por ejemplo, oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono, etc.), temperatura, pH, oxgeno disuelto y velocidad de agitacin o circulacin, deben ser cuidadosamente monitoreadas y controladas. La mayora de los fabricantes industriales de biorreactores usan recipientes, sensores, controladores y un sistema de control interconectados para su funcionamiento en el sistema de biorreaccin. Sensor qumico Es un dispositivo que est formado por un sistema de reconocimiento y un transductor. El sistema de reconocimiento tambin se conoce con el nombre de receptor. Este receptor puede estar formado por membranas sensibles a gases o tambin puede estar formado por microorganismo, enzimas inmovilizadas. Cuando los sistemas de reconocimiento tienen caractersticas biolgicas se les llama biosensores, sino se les llama simplemente sensores qumicos.

DISEO E INSTRUMENTACIN DE BIORREACTORES

La instrumentacin y control de un biorreactor requiere de sensores que midan las variables de un proceso fermentativo, y sistemas que ajusten el equipo a un punto ptimo de operacin. Idealmente, los sensores deben de estar en lnea, para medir las propiedades fsicas del cultivo, estos sensores deben ser esterilizables para asegurar la asepsia del proceso. Sin embargo, no todas las mediciones pueden ser hechas en lnea, algunas medidas fuera de lnea, requieren de tomar muestras y analizarlas, lo cual consume tiempo y hace lenta la respuesta de control (biomasa, sustrato, metabolitos, etc.). Los sensores de propiedades fsicas pueden ser monitoreados continuamente, y son la temperatura, presin, poder de agitacin, velocidad de agitacin, viscosidad del medio, flujo y concentracin de gases y fluidos, espuma, volumen y masa. Los utilizados en el prototipo son de agitacin, temperatura y nivel de lquido.

Para la medicin de las propiedades qumicas se utilizan electrodos esterilizables al vapor, de pH, redox, oxgeno disuelto y CO2. El ms utilizado es el de pH, aunque no tiene utilidad para todas las fermentaciones, slo en las de tipo continuo donde se necesita mantener un valor estable de acidez o basicidad. Para ello, contamos con sensores de pH y oxgeno disuelto.

Cuadro 1. Instrumentos de medicin VARIABLE pH O2 disuelto CO2 disuelto O2 fase gaseosa CO2 fase gaseosa Anlisis de gases EQUIPO Electrodo de referencia de vidrio combinado. Electrodo polarogrfico. Electrodo. Anlisis paramagntico. Anlisis infrarrojo. Espectroscopia de masas.

Los biorreactores estn equipados con distintos instrumentos. Estos se utilizan para facilitar el registro y anlisis de variables de operacin y de parmetros especficos que sirven para mantener, dentro de ciertos intervalos de valores, las condiciones de operacin de la biorreaccin con fines de maximizar la productividad y garantizar el xito de la biorreaccin. La instrumentacin ha sido definida como una ventana al proceso y su objetivo es mantener al mnimo la diferencia entre el valor medido y un valor deseado. El control de un parmetro particular se lleva a cabo a travs de un sistema que consta de un sensor (o electrodo), un medidor y un controlador: el sensor es un dispositivo que transforma una magnitud de una propiedad que se quiere medir, en otra que facilita su medida. El medidor recibe la medida del valor de la propiedad que emite el sensor. El controlador compara dicha medida con un valor fijo. Del resultado de la comparacin, el controlador toma una decisin enviando una seal (generalmente elctrica) a algn dispositivo que ajustar el valor medido de la propiedad hasta el valor predeterminado o de control (set point). La seal implica usualmente la modificacin del estado de una vlvula, el encendido o apagado de una bomba dosificadora, la modificacin de la velocidad de giro de un motor de algn equipo, etc. Si, por ejemplo, se hace necesario el uso de una determinada fuerza para modificar el estado de una vlvula, se requerir de un transductor y de un actuador. El transductor es un dispositivo que convierte un tipo de energa en otro tipo de energa, mientras que los actuadores son dispositivos capaces de generar una fuerza a partir de energa elctrica, gaseosa o lquida. Existen tres tipos de actuadores: 1. Hidrulicos 2. Neumticos 3. Elctricos Los actuadores elctricos son usados para manejar aparatos electrnicos o mecatrnicos. Los hidrulicos se usan cuando lo que se necesita es potencia, mientras que los neumticos son simples posicionamientos.

Los sensores pueden estar conectados directamente al biorreactor (en contacto directo con la masa lquida o slida de fermentacin), en cuyo caso se dice que estn en lnea, si no estn conectados directamente al biorreactor entonces se dice que estn fuera de lnea.

Debido a la naturaleza de la biorreaccin, se requiere que la gran mayora de los sensores en lnea renan, entre otros, los siguientes requisitos: i) que sean capaces de resistir el proceso trmico al que se somete el caldo de cultivo en el biorreactor (esterilizacin con calor hmedo); ii) que sean capaces de resistir las presiones de operacin; iii) que sean de fcil calibracin; iv) que muestren valores estables; v) que su mantenimiento sea fcil y econmico y vi) que tengan una adecuada vida media til. Estos sensores (en lnea), se utilizan, bsicamente, para medir propiedades fsicas o variables de operacin tales como temperatura, presin, intensidad de agitacin o velocidad de giro de los impulsores, velocidades de flujo de lquidos y gases, y para medir ciertas propiedades qumicas como pH, concentracin de oxgeno disuelto y gaseoso, concentracin de dixido de carbono disuelto y en el gas, concentracin de azcares disueltos, concentracin de algunos productos celulares, etc. Para conocer el estado de una variable de operacin o de un parmetro especfico con sensores fuera de lnea, se deber tomar aspticamente una muestra para que en ella se mida la propiedad. Por los tiempos y necesidades de los Bioprocesos, es fcil concluir que los sensores en lnea son mucho ms adecuados para controlar el valor de una propiedad en una biorreaccin.
MEDICIN Y CONTROL DE PH

El pH es una medida de la actividad de los iones hidronio (H+) en una disolucin acuosa y est definida por la siguiente ecuacin: pH = - log10 [H+] Para la medicin y control del valor de pH, se utiliza un electrodo de vidrio colocado, en forma asptica, en el biorreactor y que est directamente en contacto con el caldo de fermentacin. El electrodo, normalmente esterilizable, se conecta directamente a un medidor-controlador de pH, con el cual se puede establecer el valor de control (Set Point) o ajustar el valor de la lectura que proporcione el electrodo de medicin.

Un electrodo de pH consiste de dos celdas: un elemento sensor del pH y un elemento de referencia. El elemento sensor consiste de un alambre de plata cubierto con cloruro de plata inmerso en una solucin buffer (usualmente de pH 7), en un tubo sellado que termina con un fino bulbo de vidrio sensible al pH. El elemento de referencia consiste de otro alambre de plata cubierto con cloruro de plata inmerso en una solucin buffer saturada de cloruro de potasio y un diafragma poroso que comunica con la sustancia a la que se medir el pH. Dicho electrodo comnmente se construye como una sola unidad, con el sensor de referencia construido en una parte anular del elemento sensor, tal como puede apreciarse en la figura 1.

El mtodo se fundamenta en la existencia de una diferencia de potencial entre las dos caras de la membrana de vidrio, expuestas a disoluciones acuosas que difieren en su valor de pH. A temperatura constante, la magnitud de esta diferencia de potencial es directamente proporcional a la diferencia de pH entre dichas disoluciones.

Debido a que el electrodo de vidrio y los electrodos de referencia comerciales tienen un comportamiento imperfecto, es preciso calibrar el dispositivo de determinacin del pH con dos disoluciones patrn antes de usarlos en los biorreactores. Para ello, se sumergen los electrodos sucesivamente en dos disoluciones patrn con valor conocido denominados P1 y P2, a la misma temperatura que la disolucin problema y seleccionadas de forma que el valor de pH de la disolucin problema est comprendida entre los valores de pH P1 y P2. Como el valor del pH del caldo de fermentacin puede cambiar despus de ser esterilizado, por causas del drstico tratamiento trmico, se recomienda recalibrar el electrodo. Para esto, se hace necesario tomar aspticamente una muestra del caldo de fermentacin y medirle, con un medidor y un electrodo fuera de lnea, su valor de pH. En caso de que el valor que muestre el electrodo en lnea sea distinto del que marca el fuera de lnea, se ajustar el valor de aqul con el equipo de medicin empleado en el biorreactor. Una vez realizado todo lo anterior, se est en posibilidades de medir y controlar el valor del pH de una biorreaccin en un biorreactor. Si el valor medido del pH es diferente al valor del Set Point, entonces el controlador emitir una seal elctrica con la cual se podr activar alguna bomba para adicionar cido o lcali, dependiendo de la diferencia entre el valor medido y el Set Point.

MEDICIN Y CONTROL DEL OXIGENO DISUELTO

El oxgeno disuelto es muy importante para el desarrollo de una biorreaccin aerbica, por lo que su medicin y control es un parmetro importante para el desarrollo y produccin econmicamente rentable de bioproductos.

El oxgeno disuelto generalmente proviene del aire que es introducido en el fondo del caldo de biorreaccin. Una parte del oxgeno contenido en el aire se disuelve en el caldo y otra parte sale tal cual con el aire agotado. El oxgeno disuelto es el que utilizarn los microorganismos para vivir y para realizar el proceso de transformacin de la materia prima a producto. Por esta razn es importante distinguir entre oxgeno disuelto y oxgeno en el gas.

La medicin del oxgeno disuelto se realiza de forma amperomtrica, por la reduccin del oxgeno en la superficie del ctodo y la formacin de cloruro de plata en el nodo. Una solucin electroltica une al nodo establecindose un voltaje de polarizacin entre ellos. Cuando un fluido que contiene oxgeno disuelto se pone en contacto con el electrodo, el oxgeno difunde a travs de una membrana semipermeable establecindose la siguiente reaccin:

Ctodo: nodo:

O2 + 2H2O + 4e4Ag + 4Cl-

4OH4AgCl + 4e-

El resultado es una corriente elctrica que es proporcional a la actividad del oxgeno disuelto o presin parcial de oxgeno disuelto.

En el comercio especializado existen distintos tipos de electrodos y de medidores controladores de oxgeno disuelto que los usuarios podrn elegir.

El control del oxgeno disuelto en una biorreaccin ocurre a travs de la modificacin del flujo de gas (aire u oxgeno puro) o de la intensidad de agitacin del caldo de cultivo.
MEDIDORES DE MAGNITUDES FISICOQUIMICAS PH

Corrientemente la medicin de PH en los fermentadores se realiza por medio de sondas ingold (Ch-8902Urdorf -Zurich) se trata de electrodos combinados (medicin-referencia) de vidrio, que pueden soportar presin y esterilizacin. Algunos de ellos estn montados en un dispositivo que lleva una vlvula de la bola y una cmara de esterilizacin. As es posible retirar la sonda aislando totalmente el fermentador. Esto permite, en caso de fallas, reemplazar la sonda sin comprender la asepsia de la fermentacin.

POTENCIAL RED-OX

Los procesos microbianos se acompaan siempre de reacciones de oxidoreduccion. Es mediante este tipo de reacciones que los microorganismos obtienen la energa qumica que necesitan para realizar la sntesis de sus constituyentes y para reproducirse. Es particularmente interesante en el caso de los procesos microbianos no aerobios, medir el potencial red-ox del medio. Esta medida se hace aplicando la ley de Nernst con la ayuda de sondas presurizables y esterilizables, de metales nobles, tales como el platino. La seal de salida en mili volts (=500 mV 1,000mV) da una informacin global interesante, pero difcil de aprovechar en la regulacin por ejemplo dada la complejidad del medio y de las numerosas reacciones producidas por el microbio. Complementariamente el potencial RED-OX del medio, la determinacin por fluorometria, del potencial RED-OX intracelular proporciona interesante enseanza sobre la actividad celular misma. En efecto esa actividad est ligada al estado de xido reduccin de las enzimas respiratorias. La enzima reducida NADH fluoresce, emitiendo una luz de longitud de onda 660 nm cuando es irradiada a 340nm.La forma oxidada no produce tal fenmeno (Harrison y Hanes 1972). Raramente se hace esta medicin dado el precio del aparato que se necesita. Adems las burbujas de gas y la partcula en suspensin en el medio de fermentacin perturban estos fenmenos.

OXGENO DISUELTO

Sensores oxigeno disuelto

Este es un parmetro muy importante en todos los procesos microbiolgicos aerobios. Permite evaluar las capacidades de transferencia de oxigeno del biorreactor y permite regular de continuo la cantidad de oxigeno adecuada a las necesidades del cultivo, modificando el gasto del gas de oxigenacin. Lee y tsao (1979) han descrito detalladamente las bases y las formas de funcionamiento asi como las caractersticas de los diferentes electrodos de oxgeno disuelto. Se dispone de 2 tipos de electrodos, ambos provistos de membrana permeable al oxigeno: Los electrodos polarograficos (amperometricos) (ingold) constituidos por un nodo de platino, en tanto que el ctodo esta hecho de un anillo de plata/oxido de plata. El electrolito es un gel de metilcelulosa que contiene KCl. Los dos electrodos estn alimentados por una tensin constante continua. La reduccin del oxigeno en el ctodo modifica la intensidad de la corriente del circuito as constituido, proporcionalmente a la cantidad presente. Este tipo de electrodo se puede esterilizar en el fermentador o un autoclave. La duracin de su vida es siempre relativamente baja, siendo posible cambiar la cabeza, independiente del resto del electrodo. Los electrodos galvnicos (potenciometricos) (biolafitte-78300 poissy) no necesitan ser puestos bajo tensin ya que la reduccin del oxigeno se efecta en el ctodo. Es donde estn los sistemas autoalimentados. El ctodo est constituido por un metal noble como oro, platino o plata. El nodo es de zinc, plomo o cadmio. A diferencia de las sondas polarograficas, el electrolito en el caso de las sondas galvnicas no participa en la reaccin. Por el contrario, el nodo es oxidado poco a poco. La reduccin del oxgeno en el ctodo provoca, en este caso, una modificacin de la tensin entre los dos electrodos. Cualquiera que sea el tipo de sonda, la seal es amplificada antes de ser utilizada. El sensor de oxgeno disuelto galvnico utiliza una membrana rugosa del Teflon de 5 milipulgadas para resistir abrasiones y los rasgones mecnicos. La membrana sirve como barrera permitir que el oxgeno molecular difunda en la clula de la reaccin donde se reduce, produciendo una pequea corriente que sea proporcional a la concentracin del oxgeno.

EL ANLISIS DEL GAS

El anlisis del gas que sale del biorreactor asociado a la determinacin de su gasto y a la del oxgeno disuelto, permite deducir datos muy tiles sobre la fisiologa del cultivo, tales como el cociente respiratorio (CO 2 rechazado/O2 consumido), o aun sobre las capacidades de transferencia de oxgeno en el biorreactor mediante la aplicacin del balance gaseoso. La compaa Schlumberger(91302 massy) ha propuesto analizadores de gas bien adaptados al caso de los biorreactores. La determinacin de CO2 se basa en la propiedad de este gas que se absorbe las radiaciones infrarrojas. En cuanto al oxigeno para dosificarlo se utilizan propiedades paramagnticas. Se puede utilizar una sonda de oxigeno instalada en la canalizacin de salida del gas y medir la presin parcial del oxigeno. Aun no se dispone de una sonda para medir el CO 2 gaseoso, pero su desarrollo est casi terminado.
LOS SUBSTRATOS Y LOS METABOLITOS

Para seguir con precisin el desarrollo de una fermentacin es necesario realizar mayor nmero de determinaciones. As es interesante conocer cmo evoluciona la concentracin del substrato. Con frecuencia se tiene el recurso de efectuar una determinacin qumica sobre una muestra que se toma con cierta periodicidad. Este mtodo no es del todo conveniente, tiene el riesgo de provocar contaminaciones al tomar las muestras. Se ha pensado en la forma de reducir al mnimo sus desventajas. Por ejemplo se instala una vlvula de membrana y una proteccin de vapor sobre la canalizacin. Cuando esto es posible se prefiere efectuar determinaciones automticamente y de continuo. Se ha llegado tambin a emplear auto analizadores para dosificar de continuo la glucosa, por ejemplo en un medio de fermentacin. Generalmente el mtodo de dosificacin que se efecta usado una reaccin colorida; la respuesta no es instantnea, hay que esperar cierto tiempo necesario para que la reaccin se efectu, lo que origina un desfasamiento. Esto no es grave, si ese tiempo es corto, dada la relativa lentitud de los procesos microbianos. Si se cuenta con los resultados de las determinaciones se puede intervenir en el proceso. Se pueden acoplar a las fermentaciones tcnicas precisas, de gran resolucin, tales como la cromatografa en fase gaseosa o liquida aun la espectrometra de masas. Al generalizarse el uso de sus reguladores se permitir en los prximos aos reducir la dilatacin en la respuesta y tener, en tiempo real, en forma precisa los diferentes parmetros caractersticos del sistema. El principio de estos electrodos se basa con frecuencia en la falta de una reaccin electroqumica especfica del

compuesto cuya dosificacin se busca. La selectividad se puede obtener de modo fsico con la ayuda de una membrana semipermeable o de forma qumica gracias a los reactivos que se utilizan.

CONTROL DE pH (potencial de hidrgeno) El sistema controla el pH del medio de cultivo; que es generada por los productos de desecho y el metabolismo propio del cultivo celular o microorganismos. Un sistema de control de acidez consta de:

Dos subsistemas mecnicos servo controlados

Sistema Dispensador de cido: que consta de Filtro microporo en lnea Manguera flexible resistente al cido Bomba peristltica Dispensador asptico de cido (HCl)

Sistema Dispensador de lcali: que consta de

Dispensador asptico de lcali (NaOH); Filtro microporo en lnea Manguera flexible resistente al lcali Bomba peristltica

Las mangueras flexibles se deben conectar al sistema (birreactor) mediante un tubo de adicin de reactivo para cada una de ellas.

Un sistema de control formado por:

Controlador de pH: ordena y regula la accin del motor que controla a las bombas peristlticas que suministran el cido y el lcali.

Un sistema de medicin: formado por:

Sensor de pH: sonda o probeta electroqumica que mide la acidez y dice al controlador de pH, la situacin del medio.

pH ptimo: toda clula y microorganismo poseen un rango de acidez (pH) dentro del cual, es posible su crecimiento con normalidad; dentro de ese rango, existe un pH ptimo en el cual el crecimiento es mximo y muy bien definido.

SISTEMA DE DIFUSIN DE OXGENO DISUELTO

Debe optimizar al mximo la transferencia de oxgeno disuelto al medio lquido. El sistema consta de dos partes mecnicas: boquilla y difusor de aire; una parte de medicin: sensor de oxgeno disuelto y una de control: controlador de oxgeno disuelto. Difusor de aire: los cultivos aerbicos requieren que la corriente de aire estril se difunda en la forma de miles de pequeas burbujas, desde el difusor de aire, hacia el volumen del lquido; esta accin se realiza mediante un plato o domo cilndrico de acero inoxidable finamente perforado. Alternativamente y si el sistema es pequeo o mediano en escala, se puede utilizar un difusor de material cermico poroso el cual, tiene la ventaja de que, provee una cama ms fina de burbujas (de menor dimetro) y mayor rea de transferencia (volumen de burbujas). Control y regulacin del flujo de aire: las membranas que filtran el aire tienen un punto de burbuja y un flujo mximo por encima del cual, se rompen; por eso, se debe regular el flujo de aire y controlar la presin en la lnea de aire. La forma ms econmica de hacerlo es manualmente, con un manmetro para presin. Existe

tambin la versin digital, ms costosa, pero que, controla de forma automtica el flujo de aire y la presin, segn se escoja

Control y medicin del oxgeno disuelto (OD): adems de regular el flujo y la presin del aire en la lnea o tubera, se debe controlar el valor y la concentracin del oxgeno disuelto (OD) dentro del medio lquido; variable que puede medirse en dos formas (parmetros)

a) Oxgeno disuelto (OD): es la concentracin de oxgeno disuelto requerido para la reduccin qumica de un equivalente en iones sulfito (de sodio) a la cantidad de materia orgnica presente en el medio lquido que se debe oxidar. b) Demanda bioqumica oxgeno (DBO): es la taza de oxidacin biolgica o demanda bioqumica de oxgeno disuelto requerida por el microorganismo o clula en cultivo para oxidar la materia orgnica presente en el medio lquido.

Una probeta o electrodo OD es un sensor que mide la concentracin de oxgeno disuelto en el medio lquido. Similarmente, una probeta o electrodo BOD mide la concentracin de oxgeno disuelto en el medio lquido en equilibrio con el gas. ) En ambos casos, el material de su construccin debe ser acero inoxidable y su especificacin es por la longitud de inmersin (H) y dimetro (D) de la probeta.

BIBLIOGRAFIA SCRIBAN, Bioingeniera, cap 5. pag 232,237 http://www.medigraphic.com/pdfs/inge/ib-2003/ib031h.pdf http://www.biblioteca.upibi.ipn.mx/Archivos/Material%20Didactico/Manual%20de %20pr%C3%A1cticas%20del%20laboratorio%20de%20biorreactores2.pdf http://es.scribd.com/doc/31787823/Biorreactor-de-tanque-agitado-Morgan-GVasquez-2010# http://www.directindustry.es/prod/quantum/aparatos-de-medicion-de-oxigenodisuelto-do-14006-26498.html http://es.scribd.com/doc/56374285/118/Sensores-quimicos