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Un gen es una secuencia lineal organizada de nucletidos en la molcula de ADN (o ARN en el caso de algunos virus), que contiene la informacin necesaria para la sntesis de una macromolcula con funcin celular especfica, normalmente protenas, pero tambin ARNm, ARNr y ARNt.
Gentica
Es el campo de las ciencias biolgicas que trata de comprender cmo la herencia biolgica es transmitida de una generacin a la siguiente, y cmo se efecta el desarrollo de las caractersticas que controlan estos procesos.
La gentica es una rama de las ciencias biolgicas, cuyo objeto es el estudio de los patrones de herencia, del modo en que los rasgos y las caractersticas se transmiten de padres a hijos.
Los genes se forman de segmentos de ADN (cido desoxirribonucleico), la molcula que codifica la informacin gentica en las clulas. El ADN controla la estructura, la funcin y el comportamiento de las clulas y puede crear copias casi o exactas de s mismo.
Subdivisiones de la gentica
Clsica o mendeliana: Se preocupa del estudio de los cromosomas y los genes y de cmo se heredan de generacin en generacin. Cuantitativa, que analiza el impacto de mltiples genes sobre el fenotipo, muy especialmente cuando estos tienen efectos de pequea escala. Molecular: Estudia el ADN, su composicin y la manera en que se duplica. Asimismo, estudia la funcin de los genes desde el punto de vista molecular. de Poblaciones y evolutiva: Se preocupa del comportamiento de los genes en una poblacin y de cmo esto determina la evolucin de los organismos. del desarrollo: Se preocupa de cmo los genes controlan el desarrollo de los organismos.
De manera parecida a Mendel, Morgan se dedic a cruzar de manera sistemtica diferentes variedades de moscas del vinagre.
Morgan obtuvo evidencias de que los caracteres no eran heredados siempre de forma independiente tal y como haba postulado Mendel en su tercera ley. Supuso que al haber solo cuatro cromosomas diferentes, muchos genes deban estar ligados, es decir, deban compartir el mismo cromosoma y por ello mostrar una clara tendencia a transmitirse juntos a la descendencia. No obstante, las conclusiones realizadas por Mendel aos atrs, no dejaban de ser correctas para los genes no ligados. Solo la casualidad hizo que Mendel escogiese para los cruces de sus plantas caractersticas determinadas por genes situados en cromosomas distintos.
La ingeniera gentica puede definirse como "La manipulacin deliberada de la informacin gentica, con miras al anlisis gentico o al mejoramiento de una especie".
1953. Con el descubrimiento de la estructura del material gentico nace la biologa molecular. 1970. El comienzo de la manipulacin enzimtica del material gentico, y por consiguiente, la aparicin de la ingeniera gentica molecular, que constituye la ms reciente evolucin de la manipulacin gentica.
Mutaciones transicionales
Cuando un par de bases es sustituido por su alternativa del mismo tipo. Las dos bases pricas son adenina (A) y guanina (G), y las dos pirimdicas son citosina (C) y timina (T). La sustitucin de un par AT, por ejemplo, por un par GC, sera una transicin.
Mutaciones transversionales
Cuando un par de bases es sustituida por otra del otro tipo. Por ejemplo, la sustitucin del par AT por TA o por CG.
Mutaciones de corrimiento estructural, cuando se aaden o se quitan pares de nucletidos alterndose la longitud de la cadena. Si se aaden o quitan pares en un nmero que no sea mltiplo de tres (es decir si no se trata de un nmero exacto de codones), las consecuencias son especialmente graves, porque a partir de ese punto, y no slo en l, toda la informacin queda alterada. Hay dos casos:
Mutacin por prdida o delecin de nucletidos: En la secuencia de nucletidos se pierde uno y la cadena se acorta en una unidad.
Mutacin por insercin de nuevos nucletidos: Dentro de la secuencia del ADN se introducen nucletidos adicionales, interpuestos entre los que ya haba, alargndose correspondientemente la cadena.
Gato domstico (Felis silvestris catus) albino. El albinismo en este caso est asociado a una mutacin para la enzima tirosinasa.
Mutaciones no sinnimas: Las sustituciones nucleotdicas que cambian un aminocido por otro. Mutaciones sinnimas: La mutacin altera la base situada en la tercera posicin del codn pero no causa sustitucin aminoacdica. Mutaciones neutras: La mutacin silenciosa se refiere a aquellas presentes en sitios no codificantes del genoma.
Mutaciones morfolgicas Afectan al fenotipo del individuo. Mutaciones letales Produce la muerte del individuo. Suelen ocurrir en genes esenciales, imprescindibles para la supervivencia. Por el dao producido en su mutacin muere. Mutaciones condicionales Son aquellas que slo presentan un fenotipo en ciertas condiciones determinadas, por ejemplo, de temperatura (mutaciones termosensibles y criosensibles).
Mutaciones bioqumicas Prdida o cambio de alguna funcin bioqumica, como una actividad enzimtica. Por ejemplo, los mutantes auxtrofos no pueden crecer en medio mnimo. Mutaciones de prdida de funcin Cuando desaparece alguna funcin. Suelen ser recesivas. Mutaciones de ganancia de funcin Una mutacin puede producir una nueva funcin al gen, generando un fenotipo nuevo. Si ese gen mantiene la funcin original, o si se trata de un gen duplicado, puede dar lugar a un primer paso en la evolucin.
Agentes qumicos:
Anlogos de bases de cidos nucleicos como la 5-bromouracilo. Alcaloides como la cafena. Agentes que atacan al ADN (formalina). cido nitroso. Agentes alquilantes como el gas mostaza. colorantes de acridina (proflavina, acridina). Carcingenos (benzopireno). sulfato de cobre, cido brico. cido frmico. colchicina. uretano. drogas como el LSD. nicotina. edulcorantes como el ciclamato. Perxidos como el agua oxigenada. Otros muchos ms.
Efectos Nocivos: Son especialmente peligrosas en los gametos, cigotos o clulas de un embrin del que pueden surgir individuos u rganos anmalos. Si afecta a clulas en continua divisin puede surgir un cncer, al alterar los oncogenes o los genes supresores. La mayora de las mutaciones son letales, pero tambin pueden producir numerosas enfermedades hereditarias, congnitas y enfermedades crnicas en el adulto. Muchos de los contaminantes ambientales son agentes mutagnicos que no slo afectan al ser humano sino tambin a los componentes biolgicos de los ecosistemas, provocando en muchos casos severos desequilibrios y daos permanentes.
Beneficos: Las mutaciones pueden inducir cambios que adaptan los seres vivos al medio ambiente. Una sustitucin de un nucletido en la secuencia del ADN puede pasar desapercibida, pero tambin puede producir alteraciones importantes en la funcin biolgica de una protena. Las mutaciones nuevas tienen mayor probabilidad de ser perjudiciales que beneficiosas en los organismos, y esto se debe a que son eventos aleatorios con respecto a la adaptacin, es decir, el que ocurra o no una mutacin particular es independiente de las consecuencias que puedan tener en sus portadores.
Mutaciones y polimorfismos
Las mutaciones pueden considerarse patolgicas o anormales, mientras que los polimorfismos son variaciones normales en la secuencia del ADN entre unos individuos a otros y que superan el uno por ciento en la poblacin, por lo que no puede considerarse patolgico. La mayora de los polimorfismos proceden de mutaciones silentes y de recombinaciones genticas. Para innovaciones biotecnolgicas, tambin se denomina ADN quimrico.
En la ingeniera gentica se busca el conocimiento de cada uno de los genes de un mapa gentico.
El ADN (cdigo en el organismo vivo) determina la naturaleza del organismo: una amiba, un rbol de pino, una vaca o un hombre.
A diferencia de los gemelos el mapa gentico de cada uno de nosotros es nico. Los defectos de los genes individuales pueden causar malfunciones en el metabolismo del cuerpo, y es el origen de muchas enfermedades genticas.
Hay bancos de datos que poseen la codificacin parcial de ms de la mitad de los genes humanos. Millones de nuevas entradas del cdigo gentico ingresan al banco pblico de genes del Centro Nacional de Informacin Biotecnolgica.
La ingeniera gentica incluye un conjunto de tcnicas biotecnolgicas, entre las que destacan:
1. La tecnologa del ADN recombinante: con la que es posible aislar y
consigue aumentar el nmero de copias de un fragmento determinado de ADN, por lo tanto, con una mnima cantidad de muestra de ADN, se puede conseguir toda la que se necesite para un determinado estudio. aplicaciones prcticas y comerciales de la ingeniera gentica.
El ADN recombinante, o ADN recombinado, es una molcula de ADN formada por la unin de dos molculas heterlogas, es decir, de diferente origen.
El proceso consiste en tomar una molcula de ADN de un organismo, sea un virus, planta o una bacteria y en el laboratorio manipularla y ponerla de nuevo dentro de otro organismo. Esto se puede hacer para estudiar la expresin de un gen e incluso en algunos casos, para tratar una enfermedad gentica humana.
ADN recombinante natural, es el que se genera de manera biolgica dentro de los organismos, como por ejemplo, en la fecundacin del vulo por el espermatozoide. ADN recombinante sinttico, es el obtenido por los cientficos y usado en ingeniera gentica.
Como es posible detectar un gen concreto dentro del gran laberinto gentico y acusarlo de que es el culpable de una enfermedad concreta ?
Puesto que trabajar con la molcula de ADN entera es del todo imposible, el genetista necesita romperla en pedazos manejables. Pero no puede fracturar el ADN al azar, sino de forma inteligente, utilizando unas tijeras moleculares llamadas enzimas de restriccin -, que cortan el ADN por puntos muy concretos, los puntos de restriccin.
Gracias a estas tijeras se pueden obtener fragmentos de ADN con una longitud determinada, medida que difiere de un individuo a otro. Aqu es donde esta la clave de xito: en la diferencia. A estos fragmentos marcadores se los denomina Restriction Fragment Lenght Polymorphism o RFLP. Se trata del ltimo grito en biotecnologa.
Cada RFLP se corresponde con un punto exacto dentro del cromosoma del que se ha extrado.
La idea consiste en encontrar los RFLP que presenten un gran nmero de variaciones, para luego utilizarlos en el estudio de familias que padecen una determinada caracterstica gentica. De esta forma se puede desentraar si los miembros que padecen la enfermedad llevan consecuentemente una variante particular en sus fragmentos de restriccin.
Estas enzimas se aislaron en bacterias y se identifican con distintos nombres, siendo lo caracterstico de ellas estos dos principios:
Cada enzima de restriccin reconoce una secuencia especfica de nucletidos y corta en ese punto cada una de las cadenas de ADN.
Los extremos libres que quedan se llaman extremos pegajosos, porque pueden unirse a otros fragmentos de ADN que hayan sido cortados por la misma enzima de restriccin.
Los fragmentos obtenidos despus de la actuacin de las distintas enzimas de restriccin, se pueden separar por tamaos, es decir, segn el nmero de pares de nucletidos que llevan, mediante la tcnica de electroforesis y as estudiar los distintos trozos. Segn donde se encuentren las secuencias de reconocimiento, un gen determinado puede estar fragmentado en varios trozos, o bien un trozo puede contener varios genes, posibilidades que hay que confirmar.
de ADN circular, con un tamao menor que el del cromosoma. Se replican con independencia del cromosoma bacteriano ya que tienen su propio origen de replicacin.
insertar el gen deseado en un fragmento de ADN vrico. Posteriormente se ensamblarn las distintas partes del virus. As quedar el virus completo. En el siguiente paso se insertar este ADN por el proceso de la TRANSDUCCIN.
Genes de resistencia a antibiticos. Sirven para identificar bacterias que contienen el vector de clonacin, porque estas bacterias sern resistentes al antibitico del gen marcador. Genes de luminiscencia.. En este caso, la clula que contenga el gen que se quiere clonar, tendr la propiedad de emitir luz, ya que el marcador que se le incorpora determina que se exprese esa caracterstica. Este sistema se emplea cuando la clula hospedadora es una clula eucariota.
Transduccin. Este mtodo consiste en introducir el ADN en la clula hospedadora mediante un virus, utilizando como vector de clonacin el genoma del virus.
Consiste en obtener fragmentos de diferentes tamaos y con estos fragmentos elaborar la estructura original como si se tratara de un rompecabezas.
El mtodo ms usado para la secuenciacin es el conocido como tcnica de terminacin de cadena de Sanger, la cual se ha perfeccionado conocindose actualmente como la tcnica del didesoxi.
Se denomina as por ser necesario los didesoxirribonucleti dos, que han perdido su grupo alcohol OH del carbono 3'. En la figura de abajo vemos un nucletido normal con el grupo alcohol en el carbono 3'.
Como los nucletidos se unen por este grupo OH del carbono 3', hay que pensar que si nos encontramos con un didesoxinucletido ser imposible que se una otro nucletido y la cadena terminar aqu. (Es necesario tener esto presente para comprender la tcnica del didesoxi)
Como la tcnica se basa en la sntesis de ADN, para hacer la reaccin de secuenciacin se necesita:
Como "molde" se utiliza una de las cadenas del fragmento de ADN que se va a secuenciar.
Como "cebador" para iniciar la sntesis, se necesita un corto oligonucletido complementario del extremo de la cadena.
Desoxinucletidos de las cuatro bases: dAMP, dTMP, dGMP, dCMP. Didesoxinucletidos de una base en cada una de las cuatro reacciones de secuenciacin.
Se produce un conjunto de cadenas dobles cuyas longitudes dependen de la situacin del didesoxinucletido incorporado. En el caso expuesto en el dibujo, esta reaccin de secuenciacin se hace con un didesoxi de ADENINA, lo que significa que cuando se incorpore esta Adenina no podr continuarse la polimerizacin de nuevos nucletidos, nos queda por tanto un pequeo fragmento de ADN que termina en la ADENINA, lo que nos dice que en el ADN original, en ese lugar estar el nucletido complementario que lleva TIMINA.
En el caso expuesto deducimos tres fragmentos con 5, 10 y 14 nucletidos (sin contar el cebador) en cuyos extremos tenemos ADENINA, nos permite interpretar que en el ADN original, en esas situaciones tendremos TIMINA.
Deben prepararse cuatro reacciones de secuenciacin, cada una con un didesoxi distinto . Los fragmentos resultantes se separan por tamao mediante electroforesis, se autorradiografan, y la sucesin de bandas de cada una de las cuatro reacciones, comparndolas entre s,dan la secuencia del ADN.
La reaccin es muy sencilla, necesita cantidades de ADN muy pequeas y slo se requiere un tubo de ensayo, reactivos, una fuente de calor y unas pequeas cadenas de nucletidos que actan como cebadores.
La potencialidad de esta tcnica es impresionante, a partir de una sola molcula de ADN, el PCR puede generar 100,000 millones de molculas idnticas en una tarde. El ADN puede proceder de una muestra de tejido de un hospital, de una gota de sangre o semen en la escena de un delito, o de un cerebro momificado.
Estudios evolutivos Mediante la PCR se pueden amplificar genes de organismos ya extinguidos, como del mamut, o restos antiguos humanos. Se pueden comparar estos genes con los genes semejantes de organismos actuales y poder reconstruir rboles filogenticos. El PCR tambin se ha utilizado para conseguir el mapa del genoma humano.
Huellas dactilares del ADN. La determinacin de las huellas dactilares genticas constituye una de las aplicaciones mas interesantes de la PCR. Mediante esta tcnica es posible comparar muestras diferentes de ADN para comprobar si pertenecen al mismo individuo o no, o si existe parentesco entre ellas. Esta tcnica se aplica actualmente en Medicina forense e investigaciones policiales, con el fin de identificar individuos a partir de muestras biolgicas, como sangre, semen, piel o cabellos. Tambin se utiliza en las pruebas de paternidad.
Mediante la ingeniera gentica han podido modificarse las caractersticas de gran cantidad de plantas para hacerlas ms tiles al hombre, son las llamadas plantas transgnicas. Las primeras plantas obtenidas mediante estas tcnicas fueron un tipo de tomates, en los que sus frutos tardan en madurar algunas semanas despus de haber sido cosechados.
La clula vegetal posee una rgida pared celular, lo primero que hay que hacer es obtener protoplastos Los protoplastos son clulas desprovistas de pared celular, que se consigue empleando enzimas que destruyen la lmina media y desorganizan la parte de celulosa.
Entre las tcnicas indirectas cabe destacar la transformacin de clulas mediada por Agrobacterium tumefaciens. Esta bacteria puede considerarse como el primer ingeniero gentico, por su particular biologa.
Entre las tcnicas directas, se pueden citar la electroporacin, microinyeccin, liposomas y mtodos qumicos.
PLANTAS TRANSGNICAS Entre los principales caracteres que se han transferido a vegetales o se han ensayado en su transfeccin, merecen destacarse:
Resistencia a herbicidas, a insectos y a enfermedades microbianas.
Ya se dispone de semillas de algodn, que son insensibles a herbicidas. Para la resistencia a los insectos se utilizan cepas de Bacillus thuringiensis que producen una toxina (toxina - Bt) daina para las larvas de muchos insectos, de modo que no pueden desarrollarse sobre las plantas transgnicas con este gen. Respecto a los virus se ha demostrado que las plantas transgnicas con el gen de la proteina de la cpsida de un virus, son resistentes a la invasin de dicho virus.
La transgnesis se puede definir como la introduccin de ADN extrao en un genoma, de modo que se mantenga estable de forma hereditaria y afecte a todas las clulas en los organismos multicelulares.
Generalmente, en animales, el ADN extrao, llamado transgen, se introduce en zigotos, y los embriones que hayan integrado el ADN extrao en su genoma, previamente a la primera divisin , producirn un organismo transgnico; de modo que el transgn pasar a las siguientes generaciones a travs de la linea germinal (gametos).
Estas clulas se toman del interior de la blstula en desarrollo y se pasan a un medio donde se tratan con distintos productos con lo que se conseguir que las clulas no se diferencien, y se mantiene su estado embrionario.
El ganado transgnico que se emplea para producir proteinas terapeticas, debe contener en el ADN extrao de sus clulas, adems del gen codificante de la proteina, una secuencia o promotor que haga que se exprese dicho gen en unas determinadas clulas solamente. Por ejemplo, si se quiere que la proteina se produzca junto con la leche, el transgn se fusiona con una secuencia reguladora de una proteina de la leche, con lo que la proteina slo se formar en las clulas de glndulas mamarias.
la insulina humana, la hormona del crecimiento, interferones, la obtencin de nuevas vacunas o la clonacin de animales.
El gen para la insulina, que por lo general slo se encuentra en los animales superiores, se puede ahora introducir en clulas bacterianas mediante un plsmido o vector. Despus la bacteria puede reproducirse en grandes cantidades constituyendo una fuente abundante de la llamada insulina recombinante a un precio relativamente bajo. La produccin de insulina recombinante no depende del, en ocasiones, variable suministro de tejido pancretico animal.
El aumento de la resistencia de los cultivos a enfermedades, la produccin de compuestos farmacuticos en la leche de los animales, la elaboracin de vacunas, y la alteracin de las caractersticas del ganado.
Enfermedades y Genes
Con la ayuda de las sondas genticas, los mdicos ya pueden rastrear el ADN en busca de genes defectuosos, responsables de una infinidad de males. Parte de estos genes han sido desenmascarados, aislados y clonados.
Hemofilia: Deficiencia del proceso normal de coagulacin sangunea. Est causada por la ausencia de una protena coagulante. El gen fue aislado y clonado en 1984.
Alcoholismo: En marzo de 1990, investigadores de Utah, EE.UU., anunciaban que un gen localizado en el cromosoma 11 podra estar implicado en el desarrollo de este mal.
Corea de Huntington: Trastornos neurolgicos, como prdida de memoria y movimientos incontrolados. El gen se halla en el cromosoma 4.
Anemia Falciforme: Mal causado por la fabricacin de hemoglobina defectuosa, incapaz de transportar el oxgeno en la sangre. El gen mutante fue aislado en 1980.