Trabajo final de análisis instrumental.

Christián Antonio Jiménez González

José Iván Martínez Zúñiga
Mario John Wong Roger

RESUMEN:

Metodos simples que rápidamente detectan inhibición de la nitrificación son

necesarios para hacer cumplir los programas de pretratamiento y evitar
trastornos. El objetivo de este estudio fue demostrar un método rápido para
medir la inhibición de la nitrificación mediante el uso de tasas de generación de
nitrato (NGR pro sus siglos en ingles), junto con detección UV directa de los
nitratos. Los NGRs se midieron con espectrofotometria UV a longitudes de
onda entre 225 y 240 nm, sin manipulación química, y se verificó contra la
cromatografía de iones. El método ha demostrado de manera rápida que puede
medir con precisión las concentraciones de nitrato después de corregir la
interferencia de nitrito. Se realizaron pruebas con cadmio, el hipoclorito y el 1-
cloro-24dintrobenzene (CDNB) para averiguar su capacidad de causar la
inhibición de la nitrificación con este método. Se encontró q el CDNB causa una
interferencia corregible con la prueba, mientras que el hipoclorito da una
interferencia corregible. Water Environ. Res., 79, 808 (2007).

INTRODUCCION

Nitrificación ha resultado ser uno de los más delicados procesos de tratamiento

de aguas residuales propensos a lo molesto de productos químicos industriales
(Blum y Speece, 1991; Kelly et al. 2004; Tomlinson et al., 1966; Wood et al.,
1981). Como la nitrificación se inhibe por choque imprevisto de las cargas
industriales influyentes, los aumentos en los efluentes vertidos de amoniaco y
el nitrógeno total se puede producir y provocar en una instalación de
tratamiento limites superior a los límites de descarga. Esto puede prestar a
fuertes multas y penas para la instalación y dejar el medio ambiente de las
aguas abajo susceptibles a la toxicidad de amoníaco. Evidentemente, es muy
importante tener acceso a métodos rápidos para la detección de inhibición de la
nitrificación para identificar las fuentes responsables de aguas residuales o
evitar lo molesto del proceso que tiene ante sí. Ocurra, si los métodos pueden
ser desplegados en sentido ascendente.

Actualmente inhibición de la nitrificación en las aguas residuales puede ser

determinado por varios métodos como medidas respirometricas de tasa de
absorción de oxígeno (Hu et al .. 2003; Tomlinson et al., 1966) y la tasa de
generación de nitrato (NGR) (Gernaey et al., 1997; Kelly et al. 2004: Neufeld et
al., 1986). Sólo la prueba de NGR proporciona una medida directa de la tasa de
nitrificación, ya que mide la tasa de producción de nitrato, un producto único de
Nitrificación. Sin embargo, un retroceso de utilizar NGR versus medidas
respírometricas es que la medición de los nitratos en las aguas residuales es
mucho tiempo y puede ser más difícil de realizar. La mayoría de los métodos
comúnmente aceptados para medir el nitrato incluyen métodos colorimétricos y
cromatografía de iones (APHA et al., 1998). Análisis de iones de cromatografia
puede ser lenta, y rara vez tienen utilidades de esta herramienta de fácil
acceso. Análisis colorimétrico de nitratos implica reducción catalítica de nitrato
a nitrito antes de detección que también es lento y genera residuos peligrosos.
Electrodos selectivos de iones de nitrato parecen ser mas útil, porque
proporcionan mediciones rápidas, lamentablemente, la derivación de
concentración puede ocurrir cuando se utilizan en las muestras de aguas
residuales, dando lugar a frecuentes sonda recalibración (Pedersen et al.,
2002). Otra tecnología que puede utilizarse para la detección de nitratos es
directa espectrofotometría UV sin manipulación química. Ultravioleta de
detección de nitratos no es una nueva técnica y se ha utilizado para controlar
rápidamente los nitratos en plena escala las instalaciones de tratamiento de
aguas residuales (Chevalier et al., 2002 Neu. 1995).

METODOLOGIA

Descripción de la fuente Licor mezclado y tratamiento de la muestra.

Plenamente mezcla de licor de nitrificantes se obtuvo en la mañana de cada
experimento. Desde el Blacksburg-VPI instalación de tratamiento de aguas
residuales en Stroubles Creek. Virginia. Licor mezcla muestras fueron tomadas
directamente de la mezcla oxigenada cuencas y transportadas al laboratorio
dentro de 20 minutos. Las muestras de licor mezclado fueron gasificados,
mezclados magnéticamente , y continuamente alimentadas con una solución
sintética de aguas residuales, tal como está descrita anteriormente (Kelly et al.,
2004), para imitar el promedio de alimentación de carga en la Stroubles Creek
instalación y para mantener una constante composición de la biomasa para los
experimentos. El volumen total de la solución de alimentación utilizada fue
inferior al 2% del volumen de la mezcla, para reducir al mínimo los cambios en
las concentraciones de sólidos en suspensión a lo largo del experimento (8 a
10 horas). Esto fue confirmado por la medición de mezcla volátil de sólidos en
suspensión (MLVSS) a varias veces durante el experimento.

La generación de nitrato de ajuste mediante espectrofotometría UV:

Para determinar el NGR de la licor mezclado de comunidad nitrificantes, 200
ml de mezcla se añadió a cada una de las dos de 300 ml las botellas de
demanda bioquímica de oxígeno , para obtener mediciones duplicadas. Las
botellas se mezclaron magnéticamente y fueron aireadas continuamente por la
duración de la prueba NGR. Estos "reactores" de mezcla se enriquecieron con
20 mg / LN (NH4) 2SO4, de modo que la inicial NH4 +-N concentración está
por encima de la media de saturación constante (KNH) para la nitrificación
(normalmente 1 mg / LN [Grady et al. , 1999), para garantizar la medición de la
máxima NGR. Una vez que el amoníaco se añadió, de 10 mL se tomaron
muestras de cada botella cada 10 minutos durante 50 minutos. Las muestras
fueron centrifugadas durante 3 minutos a 3400Xg, para que sedimenten los
sólidos. El sobrenadante fue eliminado y se filtra a través de un 0,45-um filtro
de nitrocelulosa para su análisis. A Beckman DU 640 UV / Vis
espectrofotómetro (Beckman Coulter Inc, Fullerton, California) se utilizó para el
análisis de nitratos., Lecturas de absorbencia (cero contra el agua destilada)
fueron adoptadas en una sola longitud de onda óptima entre 225 y 240 nm,
decididos a ser la longitud de onda óptima basada en las lecturas de
absorbancia pico el día del experimento. Las lecturas de absorbancia se
compararon con una curva estándar, preparada como se describe a
continuación.
Las curvas de calibración de nitratos han sido desarrolladas por hacer
estandares de nitrato en mezcla filtrada a través de un 0.45 pm-filtro en el día
del experimento (O a 20 mg / L de nitratos es nuestro). Los estanderes se
hicieron en mezcla a fin de que las interferencias en la matriz sería común, y,
por tanto negado, entre las normas y las muestras. La concentración de nitratos
de referencia de la mezcla se midió mediante cromatografía de iones, como se
describe a continuación. Las cantidades conocidas en los estándares se
calcularon sumando el de cromatografía de iones de referencia medido la
concentración de nitratos en la cantidad conocida de los productos químicos
añadió. Estándares luego fueron medidos para la absorbancia de la radiación
ultravioleta, como se ha descrito anteriormente. Una parcela de concentración
de nitratos versus absorbancia arrojó una curva lineal estándar para que una
regresión lineal se realizó (mejor ajuste determinado por el análisis de mínimos
cuadrados, Sigma Plot 8,0 [Systat Software Inc, San José, California]), y las
concentraciones de nitrato en incógnitas son calculada a partir de las lecturas
de absorbancia.
Dado se encontró que el nitrito interfiere con la determinación de UV de nitrato,
se midieron las concentraciones de nitrito y se sustrayo de la UV-determinado
de nitrato de lecturas. Concentraciones de nitrito para cada una de las
muestras se determinó calorimetrically, según el método 4110 B de la norma
métodos (APHA et al., 1998), y analizados mediante el Beckman DU 640 UV /
Vis espectrofotómetro. Estas concentraciones se convertirá, entonces, lo
absorbancia de la elaboración de un nitrito UV curva estándar de la misma
manera que se describe a continuación, el nitrito. La absorbancia de la
radiación ultravioleta nitrito resultó ser lineal con Sigma Parcela 8,0 e
independiente de la concentración de nitratos. La absorbancia asociados con
nitrito se resta del total de las lecturas de absorbancia para cada muestra para
obtener una lectura de absorbancia de nitrato. El nitrato de lecturas de
absorbancia se convertirá, entonces, a las concentraciones de nitrato nirate
utilizando la curva estándar.

Para determinar el NRG, las concentraciones de nitrato calculadas se trazó con

el tiempo para un determinado reactor. El pendiente de esta curva (mejor
ajuste determinado por el análisis de mínimos cuadrados, Sigma Plot 8.0) dio la
concentración de nitratos generado con el tiempo. Esto se normalizó a las
MLVSS concentración para dar la NRG, en miligramos de nitrógeno por minuto
por gramo MLVSS (mg-N/min-g MLVSS).

La determinación de inhibición de la nitrificación mediante la la tasa de

generación de nitrato
El método espectrofotométrico de UV se evaluó como
una base para la determinación de inhibición de la nitrificación usando las
siguientes tres diferentes inhibidores químicos: cadmio; de 1chloro-2, 4 -
dinitrobenzene (CDNB), y el hipoclorito. Reactores Inhibidos o
"conmocionados" fueron preparados por la adición de diferentes
concentraciones de los
químicos contaminantes para producir NRG inhibited. Reactores de Control,
para que no se ha añadido contaminante sirvieron de base para las
comparaciones. Pruebas de tasa de generación de nitrato fueron duplicadas,
según el método mencionado arriba. Ecuación 1 se uso para calcular el
porcentaje de inhibición causados por cada concentración de un contaminante
dar.

NGRcontrol − NGRinhibido
Percent inhibition = × 100
NGRcontrol

Procedimientos analíticos.:
Sólidos en suspensión de la mezcla (MLVSS) y MLVSS se medio en doble en
virtud de los artículos 2540 y 2540 D, E, de métodos estándar (APHA el al,
1998). Las muestras de nitrato y nitrito se analizaron mediante
espectrofotometría UV o bien, como se describe más arriba o cromatografía de
iones. Para el análisis de cromatografía de iones, se tomaron muestras de la
mezcla y se centrifugó a 3400xg durante 2 minutos. El sobrenadante fue filtrado
a través de un 0,45 - μ m filtro de nitrocelulosa y almacenados a 20 ° C durante
no más de 28 días antes de su análisis. De nitrato y nitrito se AS14 anión
cromatografía (Dionex, Sunnyvale, guardia de la columna. Muestras fueron
transportista en un eluyente de 3,5 μ M Na3CO3 y 1,0 mm NAHCO2

Resultados y discusión
La precisión y sesgo de este método fue determinado según “Estándar
Methods” sección 1040 B (APHA es al. 1998) usando 7 repeticiones de varios
diferentes soluciones estanderes. Para las pruebas de validación del método,
curvas estándares fueron desarrolladas 229 y 235 nm, que fueron las
longitudes de onda usadas para todas las pruebas. A 229 nm, la precision no
sobrepasó -0.3 mg N/L, ni para 7.1 o 26.1 mg N/L nitrato. Para la prueba de
235-nm, la precisión y sesgo para las dos concentraciones no sobrepasaron
0.10 y 0.09 mg N/L respectivamente. La precisión y sesgo mas bajo obtenido a
235 nm puede ser causado por un coeficiente de correlación elevado para los
datos ajustado a una recte lineal. La elevada concentración de a 235 nm
resultó por una absorbancia mas baja para una concentración de nitratos
dada, que significaba que el valor obtenido a 229 nm solo era linear hasta una
concentración de nitrato de aproximadamente 25 to 30 mg/L. Limites de
deteccion para determinación U.V. de nitrato en agua en agua residuales han
sido documentado anteriormente en un rango de 0.1 a 25 mg/L nitrato-N, pero
porque el matriz de agua residuales usado como solvente para los estándares
Determinación de longitud de onda óptima:
Utilizando un escaneado de la longitud de onda , la longitud de onda óptimas
para la detección de nitrato en aguas residuales resulto ser 229 nm.
Se realizaron escaneados por cada lectura de absorbancia I entre 200 nm y
300 nm utilizando filtrada (0,45 μ m-nitrocelulosa filtro) mezcla que se
enriqueció con concentraciones conocidas de nitrato. Las concentraciones de
nitratos para estos estándares se midieron también en la mezcla filtrada
mediante cromatografía de iones, de modo que la concentración exacta podría
ser conocida por los escaneos. Después de examinar los escaneados de
diversas mezcla de muestras y las concentraciones de nitrato, un óptimo rango
de longitud de onda de 225 a 240 nm se utilizó para examinar la linealidad de
nitrato de absorbancia. Las curvas estándares desarrolladas por varias
longitudes de onda entre 225 y 240 nm se compararon para (1) de bondad de
ajuste, medidos con los valores R2; (2) la capacidad de proporcionar
regresiones reproducible a lo largo de varios días con las normas recién
preparada, y (3) la capacidad de mantener un alto absorbancia y resolución de
nitrato (Figura 1). Al proporcionar el mejor partido a los criterios mencionados,
229 nm fue elegido como la longitud de onda a utilizar para la mayoría de
determinaciones de nitrato de UV. Todas las curvas de calibración para los
nitratos fueron desarrolladas utilizando esta longitud de onda, con las
excepciones que se mencionan a continuación.

Nitrito de interferencia. Nitrito en la mezcla da una interferencia corregible a las

mediciones de nitrato de radiación UV que se descubrió cuando la exactitud
de la UV método para la detección de nitrato se controlo mediante
cromatografía de iones. El chequeo reveló que el método UV sobre estimo la
concentración de nitratos de hasta un 40% cuando el nitrito-N estuvo presente
en concentraciones tan bajas como 2 mg / L (datos no presentados). Como
nitrito se mide también mediante espectrofotometría UV (Chevalier et al., 2002;
Ferree y Shannon, 2001; Thomas et al.; 1996), se llevaron a cabo
experimentos que demostraron que incluso bajas concentraciones de nitritos
siempre importante absorbancia dentro de la misma longitud de onda que se
midió nitrato (datos no presentados). Además, las mediciones de absorción
mostraron que el nitrito de absorbancia es lineal y aditivo en la misma longitud
de onda como los nitratos. Debido a estas propiedades, absorbancia de nitrito
se resta del total de las lecturas de absorbancia a dar la absorbancia neto
indicativo de sólo la concentración de nitratos. Después de corregir las lecturas
de absorbancia de nitrito, las comparaciones de mediciones de la radiación
ultravioleta a cromatografía de iones medida mostraron resultados muy
similares (tabla 1) indica que el nitrito corregido UV método proporciona
mediciones exactas de nitrato.

Inhibitoria compuestos de interferencias. Al someter a prueba la UV NRG

método utilizando compuestos inhibitorios CDNB causo una interferencia
corregible dentro del rango la longitud de onda. La interferencia medida de
CDNB se encontró cuando cadmio, cloro, y CDNB fueron examinados para
cada absorbancia en el rango ultravioleta utilizado para medir el nitrato de
completar antes de llevar a cabo pruebas de inhibición utilizando el método UV.
De los tres compuestos examinados, sólo CDNB absorbida en el rango de
longitud de onda utilizada para las mediciones de nitrato. este se esperaba,
como otros han utilizado spectrofotometira de UV para analizar la presencia,
tipo y concentración de compuestos aromáticos (Dixt y Ram, 1996; Touraud te
al., 1998). Aunque CDNB interferido en la medición de la longitud de onda,
nitrato de lecturas podría corregirse restando la absorbancia resultante de la
concentración añadida de CDNB. El único cambio para el método UV original
era que la longitud de onda óptima para una respuesta lineal de nitrato de
lecturas se pasó de 229 a 235 nm como un resultado de la absorbancia
adicionales causados por CDNB (datos no presentados). Esto demuestra que
otros compuestos orgánicos que absorben luz a un grado moderado en la
gama de análisis utilizados para medir el nitrato debe ser corregida, mediante
un protocolo similar. A pesar de hipoclorito de no interferir directamente con la
de determinación UV de nitrato, en los resultados medidos por cromatografía
de iones no se encontró una coincidencia . Toxinas que reaccionan con la
materia orgánica, como el cloro, son problemáticas para el método UV NRG
(datos no presentados). A partir de estos resultados, las técnicas de UV se
utiliza para medir la inhibición con el cadmio y el CDNB, pero el análisis de
cromatografía iónica, tuvo que ser utilizados para cloro.
Cuando el método se utiliza para indicar el efecto de un determinado flujo de
residuos en la nitrificación, la evaluación de los rectores de control que no
recibió el flujo de residuos permite al usuario corregir las interferencias de
cualquier embalado de la base matriz de aguas residuales utilizados como
diluyente. Por ejemplo, bajar las temperaturas, la reducción de la alcalinidad y
cambios de pH no causados por las toxinas que daría como resultado la
disminución de las tasas de nitrificación también se observa en el control de
reactores. Por otra parte la adición del flujo de residuos objeto de evaluación
para abióticos nitrato estandares (en lo sucesivo, los controles abióticos) le
permite a uno determinar si la matriz está generando un falso positivo
concentración de nitratos (posiblemente como consecuencia de un falso
negativo de inhibición de estimación).

El uso de UV para medidas de tasa de generación de nitrato.

Una vez que el método de UV para medir nitrato de NGR y detección de
inhibición fue confirmado, experimentos realizados usando cadmiun y CNDB
mostró que este método proporciona un método rápido y exacto para
determinar inhibición de nitrificación. Esto se puede ver en la figura 2 , la cual
muestra una curva de generación d e nitrato típico hecho para cadmium. Esta
figur muestra el resultado para licor mezclado de control sin cadmium y con
cadmium (30mg/L). Una curva típica de que fue desarrollada usando el método
de UV NGR para cadmium se ve en figura 3. Como muestra estos resultados
el método de UV NGR se puede usar para desarrollar curvas rápido para
estudio de inhibición y predicción.

Importancia del trabajo

Legislación que gobierna descargas de ammonia y nitrógeno evidentemente lo

hace importante tener métodos para detectar inhibición de nitrificación rápida y
exacta. Estos métodos discutidos aquí dan una respuesta rapida y exacta en
menos de 1.5 horas y usa instrumentación de análisis simples que se
encuentra en la mayoría de los laboratorios. Interferncia sde sustancias
organicas puede ser corregidos. Usando este metodos los operadores en
plantas de aguas residuales puede obtener la habilidad de reaccionar a
problemas de nitrficacion y tomar medidias para minimizar los effectos.

Créditos
Tliis trabajo se hizo en Virginia Tech (Blacksburg, Virginia), como paft de los
requisitos para degrce Richard T. Kelly II. Primar / financiación para este
proyecto fue proporcionada por el Agua Environnicnt Fundación de
Investigaciones (Alexandria, Virginia), proyecto Ol-CTS-2, y parcial furiding se
proporcionó a Richard T. Kelly piso a través de un Charles E. Via de becas.
También queremos dar las gracias a M. Garland, M: Haré, A. Romine, J.
Petruska, J. Smiley, Blacksburg y el saneamiento Áuthority personal por su
ayuda en la realización de este trabajo.
Subntittcd para mblication ¡¡O Marzo, 2005; reviscd manuscrito submined
Auquxt 31,2006: acccpícd para publicarían 25 de septiembre de
2006.
El deadliiie lo subntit Dixcuxsionx de ihis pcpcr i. <¡Octubre /.*>",
2007.

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