Prtica 1 Preparo de curvas analticas

Aline Miranda 0845051-0 Andreza Aparecida Longati 0845059-5 Jenene Lobo Bambirra 0845006-4 Victor Hugo Cangussu Cardoso 0845031-5

Relatrio apresentado como uma das exigncias da disciplina Anlise Instrumental professora Ana Maria de Oliveira.

Ouro Branco - MG Maro de 2011

Resumo: Os mtodos de calibrao usados nesse trabalho foram padro externo, padro interno e adio de padro, e o equipamento utilizado para se obter as respostas foi o espectofotmetro. Nesse trabalho o objetivo foi preparar curvas analticas pelos diferentes mtodos e comparar os resultados obtidos entre eles, e para isso fez-se os clculos das concentraes das amostras atravs da Lei de Beer. A soluo padro de permanganato de potssio foi preparada e em seguida vrias alquotas dessa soluo padro foram diludas em diferentes concentraes para preparar os padres do mtodo de padro externo; j no padro interno fez-se padres com a mesma concentrao que no padro externo porm foi adicionado uma soluo de dicromato de potssio; e no mtodo de adio de padro foram adicionados pequenos volumes de soluo de dicromato s amostras. Mediram-se as absorbncias e transmitncias das amostras dos padres e com esses dados conseguiu-se montar as curvas analticas de cada mtodo. As concentraes encontradas das amostras atravs do mtodo de padro externo, padro interno e adio de padro foram 0,21x10-5 mol.L-1; 21,04x10-5 mol.L-1 e 2,26x10-5 mol.L-1, respectivamente. O desvio de idealidade da Lei de Beer ocorreu devido as elevadas concentraes das solues de permanganato de potssio preparadas. 1. Introduo: Um espectrofotmetro um aparelho que faz passar um feixe de luz monocromtica atravs de uma soluo, e mede a quantidade de luz que foi absorvida por essa soluo (Figura 1). Usando um prisma o aparelho separa a luz em feixes com diferentes comprimentos de onda (tal como acontece no arco-ris com a separao das cores da luz branca). Pode-se assim fazer passar atravs da amostra um feixe de luz monocromtica (de um nico comprimento de onda, ou quase). O espectrofotmetro permite-nos saber que quantidade de luz absorvida a cada comprimento de onda [2].

Figura 1: Espectrofotmetro. Fonte: http://www.anaseca.uac.pt/pdf_bioquimica/introd_espectrof.pdf

Uma parte muito importante de todos os procedimentos analticos o processo de calibrao e padronizao. A calibrao determina a relao entre a resposta analtica e a concentrao do analito. Geralmente isso realizado pelo uso de padres qumicos [1]. A calibrao realizada obtendo-se o sinal de resposta (absorbncia, altura do pico, rea do pico) como uma funo da concentrao conhecida do analito. Uma curva de calibrao preparada colocando-se os dados em forma de grfico ou ajustando-os por meio de uma equao matemtica adequada, como a relao linear utilizada no mtodo dos mnimos quadrados. A prxima etapa a da previso, na qual o sinal de resposta obtido para a amostra usado para prever a concentrao desconhecida do analito, cd, a partir da curva de calibrao ou pela equao de melhor ajuste [1]. Dentre os mtodos usados para fazer curvas de calibrao destacam-se trs: padro externo, padro interno e adio de padro. De forma geral, no padro externo preparado padres com concentraes conhecidas, e calculadas as respectivas respostas, em seguida monta-se uma curva de calibrao que relaciona concentrao com a resposta, e a partir dessa curva faz-se um extrapolao para calcular a partir da resposta da amostra, a concentrao do analito. No mtodo de padro interno, adicionado amostra uma substncia com caractersticas semelhantes a do analito, com caractersticas e concentrao previamente conhecidos, e calcula-se ento a resposta dos padres internos e a partir delas, monta-se uma grfico, ou seja, curva de calibrao, e ento extrapola-se a resposta encontrada da amostra no grfico e determina-se a concentrao do analito de interesse na amostra. J o mtodo de adio de padro baseado em medidas de resposta em funo da adio de quantidades conhecidas do analito amostra, faz-se ento uma curva de calibrao da resposta pela quantidade de analito adicionada e a partir da resposta da amostra sabe-se a concentrao do analito na amostra. 2. Objetivos: Preparar curvas analticas por diferentes mtodos e comparar o resultado obtido entre eles.

3. Materiais e Mtodos: 3.1. Materiais e Reagentes: Neste trabalho foram usados os seguintes equipamentos: balana analtica Bioprecisa FA-2104N; Espectofotmetro Biospectro SP 220; Pipeta automtica de 200 L Digipet. Os reagentes utilizados foram: Permanganato de potssio Reagentes Analticos Dinmica; Dicromato de potssio VETEC. A amostra utilizada foi o permanganato de potssio para uso adulto e peditrico FARMAX. As vidrarias usadas foram: pra; bqueres de 100 mL; piceta com gua destilada; basto de vidro; bales volumtricos de 100 mL; pipeta de Pasteur de 3,0 mL; balo volumtrico de 1 L; esptula; funil de vidro; pipeta graduada de 10 mL; cubetas padro de vidro com 1 cm de caminho ptico. 3.2. Procedimento experimental: 3.2.1. Preparo da amostra: Pesou-se 0,0820 g de permanganato de potssio para uso adulto e peditrico em um bquer de 100 mL, dissolveu-se com gua destilada e transferiu-se para um balo volumtrico de 1 L utilizando um funil. O bquer foi lavado vrias vezes com gua destilada, at que toda a amostra tivesse sido transferida para o balo e completou-se o volume com gua.

3.2.2. Padronizao externa:

Pesou-se 0,0920 g de permanganato de potssio em um bquer de 100 mL, dissolveu-se com gua destilada e transferiu-se para um balo volumtrico de 100 mL utilizando um funil. O bquer foi lavado vrias vezes com gua destilada at que toda a amostra tivesse sido transferida para o balo e completou-se o volume com gua. Em seguida, pipetou-se com uma pipeta graduada 10 mL da soluo, dissolveu-se a soluo com gua destilada, transferiu-se para um balo volumtrico de 100 mL com o auxlio

de um funil e completou-se o volume com gua destilada. Dessa forma, foi preparada uma soluo estoque de permanganato de potssio 0,0006 mol L-1. Em seguida, calcularam-se os volumes necessrios desta soluo para a preparao das solues padro com concentraes de 1,2 x 10-5 mol L-1, 2,4 x 10-5 mol L-1, 4,8 x 10-5 mol L-1, 7,2 x 10-5 mol L-1 e 1,2 x 10-4 mol L-1 em bales volumtricos de 100 mL. Utilizando uma pipeta graduada, adicionaram-se os volumes calculados de soluo estoque a cinco bales volumtricos de 100 mL e aferiu-se a soluo com gua. Utilizando a pipeta graduada, mediu-se 4,0 mL da soluo de permanganato de potssio para uso adulto e peditrico previamente preparada, transferiu-se para um balo volumtrico de 100 mL que foi completado com gua, diluindo a soluo. Em seguida, comparou-se visualmente esta soluo com as solues preparadas anteriormente e pela tonalidade, foi identificado qual foi a concentrao aproximada da amostra. No espectofotmetro, obteve-se a transmitncia e a absorbncia das solues padro; com estes valores uma curva analtica A x Concentrao foi montada. Por fim, leu-se no espectofotmetro a transmitncia e a absorbncia da amostra e a concentrao da amostra foi calculada.

3.2.3. Padronizao interna:

Pesou-se 0,0920 g de permanganato de potssio em um bquer de 100 mL, dissolveu-se com gua destilada e transferiu-se para um balo volumtrico de 100 mL utilizando um funil. O bquer foi lavado vrias vezes com gua destilada at que toda a amostra tivesse sido transferida para o balo e completou-se o volume com gua. Em seguida, pipetou-se com uma pipeta graduada 10 mL da soluo, dissolveu-se a soluo com gua destilada, transferiu-se para um balo volumtrico de 100 mL com o auxlio de um funil e completou-se o volume com gua destilada. Dessa forma, foi preparada uma soluo estoque de permanganato de potssio 0,0006 mol L-1. Em seguida, calcularam-se os volumes necessrios desta soluo para a preparao das solues padro com concentraes de 1,2 x 10-5 mol L-1, 2,4 x 10-5 mol L-1, 4,8 x 10-5 mol L-1, 7,2 x 10-5 mol L-1 e 1,2 x 10-4 mol L-1 em bales volumtricos de 100 mL. Utilizando uma pipeta graduada, adicionaram-se os volumes calculados de soluo estoque a cinco bales volumtricos de 100 mL e 4,0 mL de soluo de dicromato de potssio 0,0005 mol L-1, em cada balo, e aferiu-se a soluo com gua.

As leituras das absorbncias e das transmitncias das solues estoque de permanganato de potssio e de dicromato de potssio foram feitas no espectrofotmetro separadamente. Com esses valores, construiu-se uma curva analtica de padronizao interna. Utilizando a pipeta graduada, adicionaram-se a um balo volumtrico de 100 mL, 4,0 mL das solues de permanganato de potssio para uso adulto e peditrico previamente preparada e 4,0 mL da soluo de dicromato de potssio 0,0005 mol L-1, em seguida, o balo foi completado com gua destilada. No espectofotmetro, obteve-se a transmitncia e a absorbncia desta soluo e determinou-se a concentrao da amostra.

3.2.4. Adio de padro:

Utilizando a pipeta graduada, mediu-se 4,0 mL da soluo de permanganato de potssio para uso adulto e peditrico previamente preparada, transferiu-se para um balo volumtrico de 100 mL que foi completado com gua, diluindo a soluo. Transferiu-se 5,0 mL desta soluo para um bquer, agitou-se e a absorbncia e a transmitncia foram lidas espectrofotmetro. Em seguida, pipetou-se mais 5,0 mL da soluo de

permanganato de potssio para uso adulto e peditrico previamente preparada, transferiu-se para um bquer e adicionou ao mesmo frasco 100 L de soluo estoque de permanganato de potssio 0,0006 mol L-1. A soluo foi agitada e depois leu-se a absorbncia e a transmitncia da mesma no espectrofotmetro. O procedimento foi repetido para os volumes de 150 L e 200 L de permanganato de potssio 0,0006 mol L-1 adicionados ao permanganato de potssio para uso adulto e peditrico previamente preparado. Por extrapolao da curva de adio de padro determinou-se a concentrao de permanganato de potssio na amostra. 4. Resultados e discusso:

4.1. Princpios da absoro de luz em relao espectrofotometria e quantificaao

A absoro da luz tanto maior quanto mais concentrada for a soluo por ela atravessada [2]. 6

A absoro tanto maior quanto maior for a distncia percorrida pelo feixe luminoso atravs da amostra [2].

Figura 2: Relao da concentrao com a luz absorvida por uma soluo e entre a distncia percorrida pelo feixe luminoso e a luz absorvida por uma soluo. Fonte: http://www.anaseca.uac.pt/pdf_bioquimica/introd_espectrof.pdf

4.2. Padronizao externa: Padres externos so utilizados para calibrar instrumentos e procedimentos quando no h efeitos de interferncia de componentes da matriz na soluo do analito. Uma srie desses padres externos contendo o analito em concentraes conhecidas preparada. Idealmente, trs ou mais dessas solues so usadas no processo de calibrao [1]. Porm nos experimentos as concentraes das solues foram diferentes das que deveriam ter sido preparadas na realidade. Isso ir ratificar o motivo pelo qual a concentrao encontrada da amostra foi to destoante do valor esperado. Para minimizar os erros, os volumes dos padres foram multiplicados por 9,89, pois a massa do permanganato de potssio tinha sido aproximadamente dez vezes maior que a que deveria ter sido pesada.

Com os valores adquiridos no espectrofotmetro, fez-se uma curva analtica relacionando a concentrao da soluo padro com a absorbncia. Os resultados esto apresentados na Tabela 1 e na Figura 3.

Tabela 1: Volumes da soluo padro, valores das absorbncias e transmitncias lidas no espectrofotmetro e dadas pela lei de Beer, no mtodo de padronizao externa.
Padro Externo Soluo padro de KMnO4 1 2 3 4 5 Amostra Concentrao (10-5 mol L-1) 1,2 2,4 4,8 7,2 12,0 |-0,21| = 0,21 Volume (mL) 2,00 4,00 8,00 12,0 20,0 100,0 Absorbncia em 525 nm 0,217 0,448 0,922 1,363 1,931 0,059 Transmitncia (%) Atravs do Espectrofotmetro 60,3 35,7 12,0 4,30 1,20 87,3 Atravs da Lei de Beer 60,7 35,6 12,0 4,34 1,17 87,3

Figura 3: Curva de calibrao da absorbncia versus a concentrao da soluo padro dada pelo mtodo de padronizao externa. A equao y = 0,160x + 0,0925 foi obtida pelo mtodo dos mnimos quadrados para a padronizao externa com o quadrado do coeficiente de correlao R2 = 0,9840.

Submetendo a amostra a analise no espectrofotmetro, obteve-se 0,059 para a absorbncia. Aplicando esse valor nesta equao, determinou-se a concentrao da amostra: y = 0,160x + 0,0925 0,059 = 0,160x + 0,0925 x = |-0,21| = 0,21 x 10-5 mol L-1 Dessa forma, a concentrao encontrada para a amostra foi 0,21 x 10-5 mol L-1. O mtodo de padronizao externa apresenta comportamento satisfatrio quando o analito no est sujeito a efeitos de matriz. Entretanto, por esse analito apresentar interferentes o mtodo no se mostrou eficiente. Atravs da Lei de Beer, pode-se calcular a transmitncia da soluo da amostra diluda adicionada da soluo estoque: A = - log T Para a 1 alquota, tem-se: 0,217 = - log T Logo, T = 0,607 = 60,7 % Ao compararmos esse valor com o obtido atravs do espectrofotmetro, 60,3 %, observou-se que houve pouca diferena, indicando uma concordncia entre os resultados e a lei de Beer. 4.3. Padronizao interna: Um padro interno uma espcie qumica ou fisicamente similar ao analito, que usada como referncia e pode ser adicionada a amostras, padres e brancos. Assim o sinal de resposta no aquele do prprio analito, mas sim da razo entre o sinal do analito e o da espcie de referncia. [1]. O mtodo do padro interno pode compensar certos tipos de erros se estes influenciam tanto o analito como a espcie de referncia na mesma proporo. Por exemplo, se a temperatura influencia ambos, o analito e a espcie de referncia, com a mesma intensidade, o uso da razo pode compensar as variaes na temperatura. Para a compensao ocorrer, deve-se escolher uma espcie de referncia que tenha propriedades qumicas e fsicas similares quelas do analito . Devido dificuldade de se encontrar um padro interno adequado, esse mtodo torna-se restrito. Entretanto, esse mtodo tem como principais finalidades: compensar efeitos de matriz, desvios decorrentes da preparao da amostra, alm de erros aleatrios e sistemticos [1]. 9

O K2Cr2O7 foi o padro interno utilizado, pois ele possui propriedades fsicoqumicas prximas a do analito. Dessa forma, ele interage com os interferentes da matriz e minimiza seus efeitos na resposta. A soluo de K2Cr2O7 estabelece o seguinte equilbrio [3]: Cr2O72-(aq) + H2O(aq) 2 CrO42-(aq) + 2 H+(aq) Visto que a gua levemente cida, com excesso de gua, o equilbrio foi deslocado para a direita de forma que o nion que prevaleceu em soluo foi o cromato (CrO42-), implicando no uso do comprimento de onda mximo desse nion (370 nm). Com os valores adquiridos no espectrofotmetro, fez-se uma curva analtica relacionando a concentrao do permanganato de potssio com a absorbncia da razo do permanganato com o dicromato de potssio. Tabela 2: Valores das absorbncias e transmitncias lidas no espectrofotmetro e dadas pela lei de Beer, no mtodo de padronizao interna.
Padro Interno
Concentrao Soluo padro de KMnO4 Absorbncia (10-5 mol L-1) KMnO4 1 2 3 4 5 Amostra 1,2 2,4 4,8 7,2 12,0 21,04 K2Cr2O7 50,0 50,0 50,0 50,0 50,0 50,0 KMnO4 em 525nm 0,283 0,530 1,037 1,398 1,979 0,059 K2Cr2O7 em 370nm 0,212 0,283 0,444 0,598 0,906 0,206 KMnO4/ K2Cr2O7 1,3349 1,8727 2,3355 2,3377 2,1843 0,28640 Transmitncia (%) Atravs do Espectrofotmetro KMnO4 52,1 29,5 9,2 4,0 1,0 87,1 K2Cr2O7 61,6 52,3 36,0 25,3 12,5 62,3 Atravs da Lei de Beer KMnO4 52,1 29,5 9,18 4,0 1,05 87,3 K2Cr2O7 61,4 52,1 36,0 25,2 12,4 62,2

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Figura 4: Curva de calibrao da absorbncia versus a concentrao da soluo padro dada pelo mtodo de padronizao interna. A equao y = 0,0650x + 1,6540 foi obtida pelo mtodo dos mnimos quadrados para a padronizao externa com o quadrado do coeficiente de correlao R2 = 0,4330. Observa-se nesta curva que o quadrado do coeficiente de correlao, R2 est relativamente baixo. Esse valor igual a 0,433 no aceitvel, pois sendo uma curva linear, esse coeficiente teria que ser o mais prximo possvel de 1, o que no foi observado [1]. Submetendo a amostra anlise no espectrofotmetro, obteve-se 0,2864 para a absorbncia, aps substituir esse valor na equao da curva, determinou-se a concentrao da amostra, 21,04 x 10-5 mol L-1. Como se trata da mesma amostra, esperava-se que as concentraes encontradas para as padronizaes interna e externa fossem prximas. Comparando-se os resultados obtidos observou-se que isso no ocorreu. A concentrao encontrada para a padronizao interna foi 21,04 x 10-5 mol L-1 e 0,21 x 10-5 mol L-1 para a padronizao externa, obtendo-se uma diferena da ordem de 102. A faixa dinmica linear de um mtodo analtico refere-se faixa de concentrao que pode ser determinada com uma curva de calibrao linear [1]. Ao analisar as concentraes encontradas, observou-se que esses valores encontraram-se fora da faixa dinmica linear, indicando que os mtodos de padronizao interna e externa no foram eficazes.

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Como a lei de Beer sofre desvios da linearidade em solues concentradas, as solues aqui apresentadas sofreram, portanto, esses desvios tendo em vista suas altas concentraes. O reflexo destes desvios da lei de Beer foi demonstrado nos grficos atravs do quadrado do coeficiente de correlao, uma vez que quanto mais prximo de um, melhor ser o resultado da curva analtica [4]. 4.3. Adio de padro: A adio de padro um mtodo que envolve a adio de um ou mais incrementos conhecidos de uma soluo padro em alquotas de amostra do mesmo tamanho. Cada soluo ento diluda num volume fixado antes de medir suas absorbncias. As medidas so feitas na amostra original e aps cada adio [1]. Com os valores adquiridos no espectrofotmetro, fez-se uma curva analtica relacionando a concentrao do analito adicionado com a absorbncia. Os resultados esto apresentados na Tabela 3 e na Figura 5. Tabela 3: Volumes das solues da amostra diluda e da estoque, valores das absorbncias e transmitncias lidas no espectrofotmetro e dadas pela lei de Beer, no mtodo adio de padro.
Adio de Padro Concentrao da Soluo estoque (10-5 mol L-1) 0 1,18 1,75 2,31 5 Volume (mL) Soluo amostra diluda Absorbncia em 525 nm Amostra diluda + soluo estoque 0,060 0,096 0,104 0,124 Transmitncia da soluo da amostra diluda + soluo estoque (%) Atravs do Espectrofotmetro 87,1 80,3 78,8 75,2 Atravs da Lei de Beer 87,1 80,2 78,7 75,2

Alquota

Soluo estoque 0 0,100 0,150 0,200

1 2 3 4

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Figura 5: Curva de calibrao da absorbncia versus a concentrao de analito adicionado, no mtodo de adio de padro. Ao analisar a tabela, observou-se que os valores de transmitncia obtidos atravs do espectrofotmetro e da lei de Beer no apresentaram diferena significativa, demonstrando que a lei foi obedecida. A equao y = 0,0269x 0,0608 foi obtida pelo mtodo dos mnimos quadrados para a adio de padro com o quadrado do coeficiente de correlao R2 = 0,9866. Dessa forma, com y = 0 tem-se o valor da concentrao da amostra pura como sendo 2,26 x 10-5 mol L-1. Uma vantagem de utilizar a adio de padro a compensao de efeitos de matriz que causam relevante interferncia ao resultado, visto que todas as amostras analisadas foram submetidas s mesmas condies. Alm disso, a medida do branco evita que espcies estranhas contribuam para a resposta analtica. Entretanto, o mtodo apresenta a desvantagem do tempo extra requerido para se fazer as adies e medidas alm de exigir um volume maior da amostra [1]. Ao compararmos os trs mtodos, observou-se que a melhor curva analtica para obter a concentrao da amostra de permanganato de potssio uso adulto e peditrico foi para o mtodo de adio de padro, pois o melhor quadrado do coeficiente de correlao encontrado foi para ele. Alm disso, as concentraes da amostra encontradas para os demais mtodos estavam fora da faixa dinmica linear dos mesmos. Ao compararmos os valores de transmitncia obtidos atravs do

espectrofotmetro e atravs da lei de Beer nos trs mtodos analisados, percebeu-se que a diferena entre os valores encontrados para a concentrao da amostra foi mnima, mostrando uma concordncia entre esses resultados e a lei de Beer.

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Outro fator relevante para as determinaes das concentraes obtidas so os erros cometidos durante os trs procedimentos experimentais. Um deles foi o erro sistemtico do tipo pessoal cometido no momento da pesagem, visto que a soluo estoque de permanganato de potssio preparada foi cerca de dez vezes maior que o que deveria ser. Outro foi devido variabilidade das pipetagens, tendo em vista que pesagens, contagens e demais atividades experimentais relacionadas, devem ser realizadas por um nico indivduo, do inicio ao fim, j que erros podem ser cometidos involuntariamente e essa metodologia costuma diminuir tal variabilidade. O que no ocorreu neste caso, pois cada componente do grupo realizou uma tarefa [4]. Assim sendo, diversos fatores podem ter levado a essa variao, sendo que a habilidade dos componentes na quantificao dos reagentes e alquotas os que provavelmente tiveram maior efeito. O tempo gasto para se fazer leitura no pode ser descartado, visto que o permanganato de potssio pode ionizar-se, dissociar-se ou at mesmo associar-se em soluo, variando sua concentrao na amostra. Outra possibilidade est na qualidade das cubetas para leitura, o uso destas quando opacas, interfere grandiosamente nas leituras [4]. 5. Concluso Atravs dos experimentos realizados, obtivemos que as concentraes das amostras atravs do mtodo de padro externo, padro interno e adio de padro foram 0,21x10-5 mol.L-1; 21,04x10-5 mol.L-1 e 2,26x10-5 mol.L-1, respectivamente. As diferenas nas concentraes encontradas em cada mtodo podem ser explicadas pelos desvios de idealidade da Lei de Beer que ocorreram devido s elevadas concentraes das solues de permanganato de potssio preparadas. O mtodo da adio de padro foi o mtodo mais eficiente dentro os estudados nesta prtica, pois este sofre menos interferncia de matriz. Prova disso que o quadrado do coeficiente de correlao na adio de padro o que mais se aproxima de um. 6. Referncias Bibliogrficas: [1] SKOOG, D.A.; WEST, D.M.; HOLLER, F.J.; CROUCH, S.R. Fundamentos de Qumica Analtica. 8a Edio, So Paulo: Thomson, 2007. 999 p. [2] http://www.anaseca.uac.pt/pdf_bioquimica/introd_espectrof.pdf . Acesso em:

26/03/2011. 14

[3] HARRIS, C.D. Anlise Qumica Quantitativa. 6 edio, Rio de Janeiro: Editora LTC, 2005. 876 p. [4] SOUSA, R. A. Estratgias para a determinao de minoxidil. 103 p. Dissertao (Mestrado em Qumica) Universidade Federal de So Carlos, So Carlos, 2006.

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