Microscopio

Se llama microscopio al instrumento destinado a ampliar las imgenes de objetos u organismos muy pequeos. Constan de un sistema de iluminacin para poder visualizar el objeto y de un sistema de lentes para aumentar la imagen del mismo. El microscopio es un aparato frecuentemente utilizado en todas las secciones del laboratorio, para la observacin de clulas, microorganismos, cristales, reacciones inmunolgicas de aglutinacin etc. La invencin del microscopio fue realizada, hacia 1610, por Galileo segn los italianos, o por Jansen segn la opinin de los holandeses.

Clasificacin de los microscopios Segn las lentes utilizadas para ampliar la imagen:

Microscopios simples o lupas: son aquellos que solo tienen una lente para ampliar la imagen. Microscopios compuestos: son aquellos que tienen dos sistemas de lentes, para la ampliacin de la imagen (ocular y objetivo).

Segn la fuente de energa empleada:

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Microscopios pticos. Son aquellos que utilizan la luz para iluminar la imagen. Microscopio de campo luminoso. Microscopio de campo oscuro. Microscopio de contraste de fase. Microscopio de luz polarizada. Microscopio de interferencia. Microscopio de contraste diferencial interferencial Microscopio de fluorescencia Microscopios electrnicos. Son aquellos que emiten sobre el objeto un haz de electrones para ampliar la imagen.

Microscopio electrnico de transmisin. Microscopio electrnico de barrido. El microscopio que se utiliza habitualmente en el laboratorio de anlisis clnicos es el microscopio ptico.

Partes de un microscopio ptico Oculares Es la parte del microscopio a la que se acercan los ojos para la observacin. Su funcin es la de captar y ampliar
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la imagen formada en los objetivos. Los microscopios pueden ser monoculares, binoculares o triocular. En los microscopios modernos hay dos oculares (microscopios binoculares) que estn unidos mediante un mecanismo que permite ajustar la distancia interpupilar. Adems, uno de los oculares lleva un anillo de ajuste para poder enfocar con nitidez en caso de miopa. En los trioculares, el tercer ocular est preparado para que se acople sobre l una cmara de fotos o de vdeo. Existen tambin los llamados cabezales mltiples, que permiten observar a varias personas al mismo tiempo. Los oculares van marcados por los signos (5x, 10x, 16x), que indican el nmero de veces que aumenta la imagen que procede del objetivo. Los ms utilizados son los de 10x.

Oculares

Portaoculares Situado en el extremo superior del tubo. Sobre l estn colocados los oculares. Tubo
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Soporta los oculares y los objetivos, mantenindolos a la distancia justa para que la imagen se vea correctamente Brazo Es una columna perpendicular al pi. Puede ser arqueado o vertical y une el pi con el tubo. Es la zona por donde se debe coger el microscopio para transportarlo.

Objetivos Estn colocados en la parte inferior del tubo insertados en una pieza metlica denominada revolver el cual permite debido a su movimiento giratorio, colocar el objetivo necesario.

En su interior tienen un sistema de lentes de diferentes aumentos, que generan una imagen real e invertida. Los microscopios suelen tener tres o cuatro objetivos, siendo los ms frecuentes los de 4x, 10x, 40x y 100x. Siendo los primeros objetivos secos, es decir que entre el objetivo y la muestra hay aire. Y el de 100x es el objetivo de inmersin ya que entre l y la muestra hay que poner un
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lquido (aceite de inmersin), para evitar la refraccin de la luz, ya que el aceite tiene un ndice de refraccin similar al del vidrio. En la superficie de cada objetivo se indica la apertura numrica, y llevan un anillo coloreado que indica el nmero de aumentos (rojo 4x, amarillo 10x, azul 40x y blanco 100x).

Platina Es una placa horizontal que sale del brazo y sirve de soporte a la preparacin. Tiene un orificio en el centro que permite el paso de la luz procedente del condensador hasta la preparacin. El portaobjetos se sujeta sobre la platina con una pinza.

Carro Es un dispositivo con un sistema de cremallera, que permite desplazar la preparacin con los dos tornillos de desplazamiento a lo largo y ancho de la platina para facilitar el estudio de las distintas partes de la misma. El carro tiene incorporadas dos escalas tipo nonius, una longitudinal y otra transversal, que permite establecer la posicin exacta de cualquier punto de la preparacin. De esta forma podemos volver a ella cuando nos interesa. Condensador Es un sistema de lentes situadas bajo la platina, cuya funcin es concentrar la luz procedente de la fuente de iluminacin, sobre la muestra situada en la platina. Dispone de un tornillo que permite acercarlo o alejarlo de la platina, segn el objetivo utilizado.

Diafragma Es un dispositivo en el interior del condensador, que regula la anchura del haz de rayos que llega al objetivo. El haz de rayos tiene que tener el mismo dimetro que el objetivo con el que se trabaja. Si el haz que sale del condensador no llena el dimetro del objetivo, disminuye el poder resolutivo de este, si es mayor se producen reflexiones de luz que disminuyen la calidad de la imagen. El diafragma, tipo iris, tiene una palanca que sirve para abrirlo o cerrarlo. Fuente de iluminacin Los microscopios antiguos utilizaban como fuente de iluminosa la luz natural, y posean un espejo para recogerla y dirigirla hacia el portaobjetos donde se encuentra la muestra. Actualmente la fuente de iluminacin es una bombilla halgena incorporada al microscopio, generalmente en su pi. Los rayos de luz procedentes de la bombilla se dirigen hacia arriba mediante un espejo, pasan a travs del condensador y llegan al objeto de estudio.

La intensidad de luz se puede regular con un dispositivo que se incorpora en el pi del microscopio generalmente cerca del interruptor. Pi Sirve como base del microscopio y tiene el peso suficiente para dar estabilidad al aparato. Los microscopios antiguos tenan forma de herradura o de trpode, pero en la actualidad suele ser una plataforma rectangular en cuyo interior est toda la instalacin elctrica, para el perfecto funcionamiento del microscopio. Tornillo macromtrico. Tambin llamado de enfoque o avance rpido. Mueve la platina hacia arriba y hacia abajo, acercando o separando la preparacin al objetivo Tornillo micromtrico Tambin llamado de enfoque o de ajuste fino. Permite enfocar con precisin, ya que mueve la platina hacia arriba o hacia abajo muy lentamente. Los tornillos suelen llevar una palanca que sirve para bloquear la platina a una determinada altura.

Tornillo macromtrico Tornillo micromtrico

Propiedades pticas de un microscopio Aumento total Es el nmero de veces que se ve aumentada la imagen. Es la funcin del objetivo y el ocular, ya que el aumento total se calcula multiplicando el poder de ampliacin de ambas lentes. Por ejemplo si se utiliza un ocular de 10x y un objetivo de 40x, el aumento total es de 400 aumentos. Poder de resolucin Es la mnima distancia a la que pueden estar dos puntos que se siguen viendo separados. Cuanto menor sea la distancia a la que se siguen viendo separados, mayor ser el poder de resolucin. Profundidad de foco O profundidad de campo, es el espesor mximo de muestra que aparece enfocado a la vez. Depende de la

apertura numrica y es inversamente proporcional a ella, al contrario que el poder de resolucin Apertura numrica Se calcula multiplicando el ndice de refraccin del medio que hay entre la muestra y la lente (IR) por el seno del ngulo () formado por el eje ptico del objetivo y el rayo de luz ms oblicuo que entra en el mismo. Es lo que determina que el objetivo de inmersin tenga ms poder de resolucin que los objetivos secos, ya que el ndice de refraccin del aire es 1 y el del aceite utilizado es de 1,5. Contraste Es la propiedad que permite distinguir los elementos presentes en el campo. Viene determinado por la distinta capacidad de absorcin de luz de cada uno de los elementos. Puede aumentarse mediante tinciones o con diafragmas especiales. Campo Es el rea de la muestra que el observador ve a travs del ocular, depende de los aumentos del objetivo utilizado. A menor aumento, mayor campo. Manejo del microscopio Para la correcta observacin de las muestras en el microscopio, hay que proceder del siguiente modo:

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1. Ajustar el asiento a una altura que permita observar a travs de los oculares con comodidad. 2. Ajustar los oculares a la distancia interpupilar con lo que tendremos que ver un solo campo al mirar por los dos oculares. 3. Colocar el microscopio siempre en el mismo sitio, para evitar transportes en los que podra daarse. A poder ser, en una mesa en la que no se produzcan vibraciones, ya que estas impediran la visin correcta de la muestra. 4. No hay que tocar nunca las lentes con la mano. 5. Para girar el revlver no hacerlo cogiendo de los objetivos. 6. Elegir el objetivo adecuado. Generalmente las observaciones comienzan con el objetivo de pequeo aumento, para una visin global de la preparacin y despus se pasa a los de mayor aumento para una observacin ms detallada. 7. Colocar el condensador y el diafragma en la posicin adecuada. Para objetivos de pequeo aumento el condensador debe estar en la parte ms alejada de la preparacin y el diafragma parcialmente cerrado. Cuando se emplean objetivos de inmersin el condensador se sita en la parte ms cercana a la preparacin y el diafragma abierto. Para los objetivos intermedios se utilizan posiciones intermedias del condensador y diafragma. 8. Colocar el portaobjetos con la preparacin en la platina, centrndolo debajo del objetivo. 9. Enchufar la fuente de alimentacin. 10. Preparar el enfoque, sin mirar por el ocular y con ayuda del tornillo macromtrico, se aproxima la preparacin lo mximo posible al objetivo de menor
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aumento, sin llegar a contactar, despus se va pasando al de mayor aumento, quedando la muestra prcticamente enfocada. En caso del objetivo de inmersin, se pone una gota de aceite encima de la preparacin y se aproxima esta hasta que el objetivo toque el aceite y est apunto de tocar el cristal. 11. Enfocar mirando a travs del ocular, girando el tornillo macromtrico, separando la preparacin, hasta que aparezca la imagen. Cuando la imagen est localizada se afina el enfoque con el tornillo micromtrico. 12. El ajuste personal de los oculares se realiza una vez que la muestra est enfocada. Para ello se cierra el ojo izquierdo y se ajusta el enfoque del ojo derecho con el tornillo micromtrico, despus se cierra el ojo derecho y se ajusta el enfoque del ojo izquierdo con el anillo de ajuste del ocular, por ltimo se mira con los dos ojos y se termina de enfocar con el micromtrico. 13. Cuando se utiliza el objetivo de inmersin se debe colocar entre la preparacin y el objetivo una gota de aceite de inmersin. Para lo cual se gira el revlver dejndolo en una posicin intermedia entre el objetivo de 100x y el de 40x, y se pone una pequea gota de aceite. 14. Para observar las distintas partes de la preparacin se mueve esta con ayuda del carro. Para no repetir los campos observados, la preparacin se mueve siguiendo un orden.

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15. A

terminar el trabajo con el microscopio, apagar la fuente de iluminacin, limpiar los objetivos con papel de filtro o papel de ptica, pasndolo en un solo sentido y con suavidad. Si se ha utilizado aceite de inmersin limpiar enseguida con papel, si se ha secado el aceite, limpiar con una mezcla de alcohol y ter en una proporcin 3:1, o con xilol, pero este tipo de productos hay que manejarlos con cuidado, pues pueden terminar daando las lentes y su sujecin. 16. Por ltimo tenemos que dejar la platina vaca y baja, el objetivo de menor aumento en posicin de trabajo. El cable enrollado alrededor del brazo o columna y la funda puesta para evitar el polvo

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