1- Esterilizacin: Con este tipo de procedimientos se obtiene lo que se llama una "desinfeccin total" ya que los sustratos de cultivo

se someten a temperaturas cercanas a los 120C durante 90 a 150 minutos para el caso del Shiitake (Lentinula edodes) y 40 a 60 minutos en el caso del Hongo Ostra

Foto 1: Sistemas de esterilizacin: a- (Izquierda) Autoclave de 1600 Lts. b- (Derecha) Esterilizando paja en agua hirviendo. (Pleurotus spp.). Para lograr esto, los sustratos son sometidos a presiones de vapor de 15 Lbs/cm2 al interior de Autoclaves como se muestra en la Foto 1a. Generalmente en la industria del Shiitake se utilizan Autoclaves de ms de 800 Lts de capacidad, por lo que los costos de instalacin de estos aparatos alcanzan los U$ 9.500,00 incluyendo una caldera que genere unos 200 KVH para alimentar esta Autoclave de vapor. A todas estas dificultades hay que sumar que el manejo de tales maquinarias requiere de personal entrenado y permisos o certificados especiales que pueden variar de un pas a otro. La gran ventaja de este sistema de tratamiento trmico es que se eliminan casi por completo todos los microorganismos que pueda tener el sustrato de cultivo, disminuyendo considerablemente los riesgos de contaminacin y las prdidas de sustrato durante la etapa de Incubacin. Para el cultivo del Hongo Ostra se puede conseguir una esterilizacin, tambin, hirviendo las pajas de cereales en agua durante 8 a 15 minutos (Foto 1b), sin embargo, estos procedimientos, a parte de ser muy engorrosos, barren con gran cantidad de nutrientes que quedan disueltos en el agua hervida dejando las pajas con muy poco valor nutritivo, producindose una considerable merma en la productividad final. 2- Pasteurizacin: Es un conjunto de procedimientos en los cuales los sustratos de cultivo son sometidos a temperaturas inferiores a los 100C y a presiones de vapor nunca superiores a la presin atmosfrica. El mejor ejemplo de este tipo de procedimientos es el que se realiza durante la Fase II del compostaje para la obtencin de sustratos en el cultivo del Champin de Pars (Agaricus spp.); durante algunos das el sustrato semifermentado es colocado al interior de tneles donde paulatinamente sube la temperatura eliminando gran cantidad de agentes contaminantes y permitiendo que aparezca una rica microflora termfila que transforma a este sustrato en un medio de crecimiento especfico para el Champin de Pars (por decirlo en forma muy resumida).

Durante la Pasteurizacin se eliminan los agentes contaminantes pero permanecen poblaciones activas de otros microorganismos que producen antagonismos con agentes patgenos y contribuyen a enriquecer nutritivamente los sustratos de cultivo. En los ltimos 8 aos se han desarrollado en Chile varios tipos de Tneles de Pasteurizacin con inyeccin de Vapor para procesar sustratos para el cultivo del Hongo Ostra y Shiitake (Foto 2) que han resultado ser ms econmicos y fciles de utilizar que las maquinarias para esterilizar (autoclaves), sin embargo, requieren de tiempos mayores de uso por lo que el fungicultor debe construir varios de ellos para que estos procedimientos no constituyan "cuellos de botella" en el cultivo. Para la pasteurizacin de pajas de cereales utilizadas en el cultivo del Hongo Ostra estas se deben ingresar al tnel a granel (sin envasar) despus de 2 das de humidificacin y se mantienen a 65C durante 3 horas y luego se eleva la temperatura a 85C durante 4 a 6 horas, las pajas son retiradas del tnel una vez que alcancen los 35C aproximadamente temperatura que se consigue despus de 5 a 6 horas de dejar de inyectar vapor al tnel. Varios estudios han demostrado que las pajas pasteurizadas tienen una mayor cantidad de nutrientes retenidos que se refleja, finalmente, en una mayor productividad. En el caso del Shiitake los sustratos son ingresados al Tnel envasados en bolsas termo-resistentes y se colocan medianamente distantes entre si (separadas cada 1 cm) para permitir un flujo expedito de vapor y para impedir que algunas bolsas no sean efectivamente pasteurizadas. Luego el tnel se mantiene a 85C durante 8 horas y se permite que la temperatura baje lentamente hasta los 40C que es cuando el tnel es abierto. Este sistema disminuye considerablemente la carga de agentes que pueden causar contaminaciones, sin embargo, slo se recomienda para sustratos con baja suplementacin, es decir que tienen una proporcin baja de aditivos orgnicos e inorgnicos nitrogenados y polisacridos o azcares simples. Para sustratos con alta suplementacin es recomendable esterilizar los sustratos en Autoclaves. 2 Foto 2 Tnel de Pasteurizacin de 2 mts con su caldera generadora de vapor

En resumen ambos sistemas presentan ventajas y desventajas que son indicadas en la Figura 1. Todas estas consideraciones deben ser analizadas seriamente al momento de decidir que sistema se va a implementar, sin embargo, es lgico que un plantel pequeo que va a producir con baja tecnologa slo necesita habilitar un
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pasteurizador de 3 a 4 mts con una pequea caldera de 10 a 20 KVH. y al contrario, un plantel mayor con un flujo de produccin por sobre las 3 toneladas de producto fresco mensual es absolutamente inviable que trate sus sustratos por pasteurizacin ya que se requerira de por lo menos unas tres unidades o tneles
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de 4 mts para cubrir todas las necesidades. www.micotec

DEFINICIONES ESTERILIZACIN es el proceso de destruccin de toda vida microbiana. El trmino estril es absoluto; algo est estril o no lo est. DESINFECCIN es el proceso de destruccin de los agentes infecciosos. No es una esterilizacin. Un desinfectante es la leja, por ejemplo, que mata las formas vegetativas de los microorganismos, pero no necesariamente sus formas de resistencia o esporas. AGENTE ANTIMICROBIANO es un compuesto qumico que inhibe el crecimiento o mata a los microorganismos. Un agente microbiano puede ser antibacteriano (mata bacterias), un antifngico, un antivrico... esto es en cuanto a su espectro de accin. En cuanto a su actividad, puede ser:

Esttico: Inhibe el crecimiento del microorganismo, pero no lo mata. Ej. Bacteriostticos, fungiestticos. Cida: Destruye los microorganismos. Ej. Bactericida

ANTISPTICO procede de sepsis, que significa putrefaccin por desnaturalizacin de protenas. En una herida infectada crecen microorganismos y en ese momento comienza la sepsis. Cuando se extiende por todo el cuerpo, es grave, y la persona muere. Se llama septicemia. La persona se pudre. Un antisptico es un compuesto que evita la sepsis. Es un agente antimicrobiano con toxicidad baja que puede utilizarse sobre los tejidos o tpicamente, como el betadine. AGENTE QUIMIOTERPICO O QUIMIOTERAPUTICO es un agente antimicrobiano que por su baja toxicidad puede emplearse internamente. Hablamos de dos tipos de agentes quimioteraputicos:

Antibiticos. Son compuestos producidos por microorganismos que inhiben o matan a otros microorganismos. Ej. Penicilina De sntesis orgnica. Son productos qumicos sintetizados artificialmente. Ej. Ciprofloxacino

CONTROL DE MICROORGANISMOS MEDIANTE MTODOS FSICOS CALOR Cuando aumenta la temperatura por el lmite de supervivencia del microorganismo, se producen cambios en l y muere. Se pueden utilizar dos tipos de calor: CALOR HMEDO

Posee mayor poder de esterilizacin. Podemos aplicarlo mediante varios mtodos:

Vapor a presin. Utiliza el calor del vapor de agua sometido a presin. Es uno de los mtodos ms eficaces de esterilizacin. Se realiza en unos aparatos especiales denominados autoclaves, parecidos a una olla a presin.

La resistencia calienta el agua hasta 100. El vapor sale por el conducto al exterior. Cerramos la espita y se produce presin en el interior. El sistema contina calentndose hasta que se obtiene una atmsfera de presin. Se alcanzan los 120 durante 20 minutos y se produce la esterilizacin de cualquier objeto que haya en el interior.

Tindalizacin. Mtodo propuesto por Tyndall, que consiste en el tratamiento de un objeto a 100C durante 30 minutos 3 das. Es un mtodo de esterilizacin. Se utiliza para la esterilizacin de azcares que caramelizan por encima de 100. Se lleva a cabo en el autoclave. La diferencia es que la espita se mantiene abierta, por lo que no se genera presin en el interior, y por eso slo se consiguen 100; no ms.

CALOR SECO

Horno Pasteur. Es un horno elctroco donde se alcanzan temperaturas de 200C. Garantiza la esterilidad de cualquier objeto que permanezca de 2 a 3 horas a 160. Se esterilizan as aquellos objetos que se deterioran si son humedecidos, o objetos que no se mezclan con el agua, como esptulas, tubos de vidrio... Incineracin. Mtodo de esterilizacin empleado para esterilizar el asa de siembra. Tambin se usa para esterilizar materiales biolgicos (las ranas y ratas).

PASTEURIZACIN Es un tratamiento trmico que elimina los microorganismos patgenos de alimentos como la leche, el zumo y derivados. No es un mtodo de esterilizacin, ya que garantiza la destruccin de los microorganismos patgenos, pero no de los microorganismos que no son patgenos; estn presentes en los alimentos pasteurizados. Hay dos mtodos de pasteurizacin de la leche:

A 62.8 C durante 30 minutos A 71.7 C durante 15 segundos

Entre los microorganismos patgenos ms importantes y ms resistentes destacan Mycobacterium tuberculosis y Coxiella buinetti. La leche pasteurizada contiene microorganismos no patgenos. Debe ser mantenida en refrigeracin (4C) para retrasar el crecimiento de los microorganismos existentes. UHT: ULTRA HIGH TEMPERATURE Se lleva la leche a 148.9C durante 1-2 segundos. S es un tratamiento de esterilizacin. Se puede conservar a T ambiente durante mucho tiempo. Ej. Pascual. ESTERILIZACIN POR FILTRACIN Hay determinados agentes que son termolbiles; para esterilizar estos agentes se emplea la filtracin. Suelen ser soluciones de enzimas, antibiticos... FILTROS DE MEMBRANA

Son steres de celulosa constituidos por una matriz, acetato de celulosa, por ejemplo, con poros de un determinado dimetro. Eligiendo un poro de 0.45-0.22 eliminamos las bacterias que pueda haber en estas soluciones. Los virus no los podemos eliminar por este mtodo, pero eso no es un problema, ya que siempre van unidos a clulas. Para filtrar el lquido, lo sometemos a presin, con una jeringa si se trata de un volumn pequeo, o con un quitasato si el volumen es mayor. FILTROS HEPA HEPA: Aire particulado de alta eficacia. Son filtros de vidrio empleados para esterilizar el aire que penetra en habitaciones especiales como quirfanos, etc. Tambin se emplean en cmaras de flujo laminar aparatos con forma cbica (urna). Tienen una superficie donde se hacen las operaciones microbiolgicas. El aire que penetra en la cmara pasa por los filtros HEPA, de manera que la superficie queda estril. ESTERILIZACIN POR RADIACIONES De las radiaciones electromagnticas empleamos dos tipos para la esterilizacin en Microbiologa: Radiacin ionizante y radiacin ultravioleta. RADIACIN IONIZANTE Son los rayos X y los . Tienen mucha energa y poder de penetracin. Ionizan molculas. Aplicados a clulas, ionizan molculas de las clulas, y stas mueren. Forman radicales alcohol, hidroxilo, perxidos que oxidan cualquier material y daan el ADN. Los rayos X no se suelen utilizar porque son caros, pero s los , y se obtienen fcilmente a partir del cobalto (60Co). Se emplean en procesos de enlatado y esterilizacin de material quirrgico (bistur, gasas...) Estos mtodos deben practicarse en zonas especiales y las personas que los realicen deben ir protegidas y pasar ciertos controles. RADIACIN ULTRAVIOLETA El mximo de absorcin de los cidos nucleicos es a 265 nm. La luz UV provoca dmeros de pirimidina en el DNA y si no se reparan, la clula muere. La luz UV tiene poca energa y bajo poder de penetracin; no se considera un esterilizante. Se emplea para disminuir la poblacin microbiana en superficies de quirfanos, produccin de frmacos, campanas de flujo laminar... CONTROL DE MICROORGANISMOS MEDIANTE AGENTES QUMICOS ALCOHOLES Disuelven lpidos, tienen accin detergente... El ms empleado es el etanol (70-90%). Se emplea como antisptico de piel y heridas, y como desinfectante de objetos como termmetros bucales, etc. ALGENOS Y DERIVADOS

Yodo. Es el que tiene mayor capacidad germicida de todos. Se emplea en forma de tintura de yodo en agua o alcohol. Es el betadine, antisptico de heridas y piel. Tiene capacidad antimicrobiana, antivrica y antifngica. Cloro. Desinfectante de agua de piscinas, de agua potable.. En forma de hipoclorito sdico se emplea como desinfectante en el hogar, en restaurantes... Perxido de hidrgeno. El agua oxigenada oxida las clulas y las destruye. Se emplea como antisptico de la piel. Ozono. Es muy oxidante, se emplea como desinfectante de aguas potables.

Glutaldehido y formaldehido. Son esterilizantes. Destruyen formas vegetativas de bacterias, hongos y virus. Se emplean al 2-4% en solucin acuosa. Se usan para esterilizar material ptico (en clnica, para esterilizar endoscopios). El formaldehido se emplea ms como fumigante. Sus vapores destruyen esporas presentes en conducciones de aires contaminados. Quimioesterilizadores gaseosos. Muchos de los utensilios que se emplean en clnica y en laboratorio estn hechos de plsticos modernos como el polipropileno (jeringas, viales, recipientes para muestras de sangre y orina...) No se pueden esterilizar por calor, porque se derretiran. Se utilizan quimioesterilizadores gaseosos, que son grandes recipientes o habitaciones cerradas hermticamente por donde se hacen pasar gases esterilizantes (xido de etileno, -propiolactona) que aseguran la esterilizacin de los materiales