REVISTA DE BIOLOGIA E CINCIAS DA TERRA Volume 9 - Nmero 1 - 1 Semestre 2009

ISSN 1519-5228

Anatomia e histoqumica de folhas e razes de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don).

Santos, M.C.A.1; Freitas, S. de P.2; Aroucha, E.M.M.3; Santos, A.L.A.4. RESUMO O objetivo deste trabalho foi averiguar a anatomia e deteco de compostos secundrios em folhas e razes de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don). A amostra das regies nodais da parte superior da planta, e raiz secundria, passou por diferentes tratamentos com fixao usando corantes especficos. A lmina foliar em seces transversais foi classificada como anfiestomtica, com mesofilo dorsiventral. A raiz apresenta sistema vascular bastante desenvolvido com contorno aproximadamente circular e crtex regular. Verificou-se presena de alcalides, na raiz e lmina foliar, compostos fenlicos e pectina na lmina foliar. Palavras-chaves: compostos secondary, anfiestomtica, alcalides.

Anatomical and histochemical of leaves and roots of vinca (Catharanthus roseus (L.) G.Don).
ABSTRACT This work aimed to evaluate the anatomy and detection of composites secondary in leaves and roots of vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don). The samples of the nodes regions, superior part of the plant, and roots secondary, passed by different treatments as attachment by using coloring specific. The blade to foliate in seces transversals was classed as amphystomatic, with dorsiventral mesophyll. The root with vascular system developed with contour approximately to circulate and regular cortex. Alkaloids presence was verified, in the root and foliar blade, phenolic composites and pectin in the foliar blade. Keywords: Secondary composites, amphystomatic, alkaloids. 1 INTRODUO folhas e razes de vinca a presena de alcalides. J em trabalho realizado em vinca por Mahroug et al. 2007, tambm se detectou compostos metablicos secundrios (alcalides indol monoterpenide - vinblastina e vincristina), em vrias partes da planta, sendo usados na produo de medicamentos farmacuticos, com efeito, antitumoral. Para obter 1g de vinblastina necessria em mdia toneladas de folhas secas de Catharanthus roseus (Sottomayor et al. 2004). O conhecimento de aspectos anatmicos de plantas medicinais importante para o seu manejo adequado, j que permite localizar as suas estruturas secretoras, bem como definir, em alguns casos, o momento em que as glndulas 24

Vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don) (Apocynaceae), uma planta reconhecida pela importncia na medicina, pois rica em alcalides que apresentam ao anticancergena, antiglicmica e antitrmica. As espcies de Apocynaceae como a vinca a possuem importncia econmica e/ou medicinal devido presena de metablitos secundrios no ltex como, por exemplo, borracha e alcalides (Metcalfe & Chalk 1950, Yoder & Mahlberg 1976). Sabe-se, que o ltex possui funes de proteo contra herbvoros e microorganismos, e de selar ferimentos (Fahn 1990, Farrel et al. 1991). St-Pierre et al. (1999), observou em

esto em pleno desenvolvimento (Ming 1994, Akisue & Oliveira 1987). Os laticferos so um dos primeiros tipos celulares a se diferenciar; sua fase meristemtica muito breve e, enquanto a maioria dos tecidos ainda meristemtica, os laticferos j esto diferenciados e em fase secretora. (Yoder & Mahlberg 1976). A presena de laticferos em Apocynaceae tem importncia devido proteo conferida pelo ltex, que propicia o sucesso das espcies nos diversos ambientes, para plantas latescentes e resinferas, como proposto por Farrell et al. 1991. A capacidade de muitas plantas para sintetizar metablitos secundrios, como compostos fenlicos, alcalides e antocianina, est associada com sua disposio anatmica (Azevedo 1998). Os metablitos secundrios so expresses da individualidade qumica dos organismos, diferindo qualitativa e quantitativamente de espcie para espcie. A histoqumica das plantas permite detectar a presena desses metablitos, que podero ser quantificados, em funo da intensidade observada. Muitos desses compostos, como a antocianina, carotenides e leos essenciais podem influenciar na polinizao, na disperso de frutos e sementes e na simbiose radicular com bactrias enfatizam Martins et al. (1994); outros compostos apresentam funo de suporte estrutural para as plantas, como as ligninas (Mann 1987). O vermelho de rutnio utilizado em microscopia tica desde 1890 na colorao de pectinas, mucilagens e goma foi introduzida na microscopia eletrnica de transmisso e no estudo de clulas animais, para deteco citoqumica de poliosdios e mucopolissacardeos cidos (Luft 1971). Este trabalho tem por objetivo descrever a anatomia e detectar por meio da histoqumica a presena de alcalides na lmina foliar e raiz de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don), e detectar substncias pcticas e compostos fenlicos em folhas de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don). 2 MATERIAIS E MTODOS

As plantas utilizadas foram coletadas em jardins residenciais no municpio de Campos dos Goytacazes-Rj. A identificao da espcie vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don),

confirmada pelo Herbrio do Departamento de Botnica da Universidade Estadual de Campina, com citao do material: BRASIL: Campos RJ-: Turf-Club, 07/03/2003, fl./fr., C. Aroucha s.n. (SP, UEC). E os ensaios anatmicos e histoqumicos conduzidos no Setor de Citologia Vegetal do Laboratrio de Biologia Celular e Tecidual do Centro de Biologia e Biocincias da Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro (UENF). As exsicatas foram constitudas dos ramos superiores das plantas. Os procedimentos, abaixo descritos, foram realizados em folhas coletadas do 2 e 3 n e raiz secundria a 3,0cm do pice, em perfeito estado de desenvolvimento fitossanitrio. Atravs dos testes anatmicos, os fragmentos de folhas foram lavados em tampo fosfato salina (PBS) e colocados em uma soluo 1:1 de cido ntrico 10% e xido crmico 10% (Jensen 1962). Em seguida foram dissociadas as faces, adaxial e abaxial, e sobre lminas corou-se com azul de metileno e seladas com glicerina 50% e observados os tipos de estmatos, o formato das clulas epidrmicas atravs do microscpio de luz (Axioplan, ZEISS). As amostras de fragmentos de lmina foliar e raiz foram fixadas, em temperatura ambiente, em soluo aquosa com paraformaldedo a 4,0%, glutaraldeido a 2,5% e tampo cacodilato de sdio 0,05M. Procedeu-se trs lavagens na lmina foliar, com intervalo de 30 minutos cada, em soluo tampo de cacodilato 0,05M, ps-fixadas, por uma hora, em soluo de tetrxido de smio a 1% e tampo cacodilato de sdio 0,05M. Aps trs lavagens de 30 minutos no mesmo tampo, realizou-se uma srie ascendente de desidratao cetnica (50%, 70%, 90%, e trs vezes 100%), por uma hora cada etapa (Johansen 1940). Aps infiltrao, com resina Epon (Epxi Poli-bed), a lmina foliar foi colocada em frma e desidratada em estufa a 60C por 48 horas, para a polimerizao e obteno de blocos. Utilizando ultramicrtomo (Reichert, ultracuts), foram retirados cortes semifinos a 0,70m de espessura, corados com azul de toluidina 1%. As lminas aps seladas com Entelan foram observadas em microscpio de luz (Axioplan, ZEISS). Por meio dos testes histoqumicos, foram feitos cortes transversais da folha e raiz in 25

natura, e em placa de petri, com reagentes de coloraes especficas, para evidenciar compostos secundrios em microscpio de luz (Axiophoto, ZEISS). Para a deteco de alcalides fez cortes na lmina foliar, utilizando o reativo de Dragendorff (Costa 1982), durante dois minutos seguiu-se com lavagem dos cortes em gua destilada. Novos cortes foram feitos em lminas foliares, para deteco de substncias pcticas, impregnando os cortes em vermelho de rutnio (Langeron 1949), em seguida foi observado em microscpio ptico. Em cortes feitos em laminas foliares e colocados em soluo aquosa a 10% de cloreto frrico e carbonato de sdio (Johansen 1940), foram detectados compostos fenlicos. 3 RESULTADO E DISCUSSO

(A) CE

(B) CE

EP EA

FIGURA 1 - Anatomia foliar de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don). Face abaxial (A): estmato anomocticos EA, clula epidrmica CE. Face adaxial (B): estmato paractico EP, clula epidrmica CE. 400x.

Em cortes anatmicos, pode-se observar atravs da dissociao das epidermes de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don), h presena dos estmatos nas duas faces da lmina foliar, sendo assim classificada de anfiestomtica. Ambas as epidermes apresentam as clulas com paredes anticlinais levemente ondulados em formas e tamanhos variveis, com presena de estmatos do tipo anomocticos (Figura 1A) e paractico (Figura 1B), geralmente solitrios, acompanhados por 4-5 clulas anexas. Na face adaxial, foi observadas clulas de variados tamanhos e formato arredondado, enquanto que a face abaxial apresenta clulas de formato irregular, achatadas, de tamanhos variados. H presena de tricomas tectores nas duas faces, no entanto, os tricomas glandulares no foram observados com maior nitidez (Figura 2). Os tricomas podem ser glandulares, possuindo clulas especializadas para a produo e secreo de substncias qumicas, ou tectores Cutter (1986). Os tricomas so apndices epidrmicos com funo, geralmente, ecolgica, isto , de adaptao da planta ao meio, como defesa contra herbvoros e patgenos, atrao de insetos teis, como os polinizadores, repulso dos nocivos e reduo da perda de H2O pela transpirao e temperatura foliar (Werker & Fahn 1981).

Observa-se com freqncia a presena de tricomas tectores unisseriados, unicelulares ou bicelulares, agudos no pice e alguns levemente recurvados, possuindo ornamentao na sua superfcie (Figura 2). A distribuio desses tricoma mostrou-se varivel, pois a face abaxial apresenta tricomas tectores em maior nmero que o observado na face adaxial.

TT

TT

FIGURA 2. Anatomia foliar de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don). Face adaxial foliar: tricoma tector bicelular-TTB, face abaxial foliar: tricoma tector unicelular-TTU. 200x.

As seces transversais da lmina foliar apresentaram a face adaxial e abaxial uniestratificada, com clulas menores na face abaxial, apresentando mesfilo dorsiventral constitudo por parnquima palidico e lacunoso. O parnquima palidico esta voltado para face adaxial e parnquima lacunoso na face abaxial. O parnquima palidico constitudo por apenas uma camada de clulas palidicas longas, espaadas entre si, ricas em cloroplastos e dispostas perpendicularmente superfcie da lmina foliar, ocupando, aproximadamente, a metade da estrutura (Figura 3). O parnquima 26

lacunoso constitudo de clulas irregulares, apresentando quatro a cinco camadas de clula dispostas paralelamente superfcie das clulas epidrmicas, com um sistema amplo de espaos intercelulares (Figura 3) e neles se mantm o vapor de gua e o dixido de carbono (CO2) utilizvel na fotossntese. Portanto esta estruturao permite que uma grande superfcie das clulas entre em contato com o ar existente no interior da folha, possibilitando a utilizao do gs carbnico no processo fotossinttico (Damio Filho 1993).
CT FAD

camadas, com espaos intercelulares reduzidos at a regio da face abaxial (Figura 4).
A FAD

FL XL FL CA

FAB FIGURA 4. Anatomia foliar de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don). Nervura central da lmina foliar: colnquima angular CA, floema FL e xilema XL. Face adaxial FAD, e face abaxial FAB. 200x.

PP

PL CSE ET FAB

FIGURA 3. Anatomia foliar de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don). Mesfilo foliar: face abaxial FAB, cutcula CT, parnquima palidico PP, parnquima lacunoso PL, face adaxial FAD, estmato ET, cutcula CT, cmara subestomtica CSE, parnquima lacunoso PL (Seces transversais da lmina foliar). 200x.

A especializao do parnquima palidico, que determina maior eficincia fotossinttica, deve-se no s a um maior nmero de cloroplastos nas clulas, como tambm a um sistema bem desenvolvido de espaos intercelulares, que permitem um rpido intercmbio gasoso. A relao entre a superfcie interna da folha, superfcie celular que est em contato com o ar, e a superfcie externa, que se encontra diretamente exposta ao meio, tem fundamental importncia ecolgica (Fahn 1978). Em ambas as superfcies das clulas epidrmicas, h uma cutcula delgada revestindo-as, e apresenta, na regio da nervura das clulas, formato arredondado e tamanho mais uniforme. A nervura central apresenta um colnquima do tipo anguloso na regio subepidrmica composto por cerca de seis

Atravs de cortes transversais da raiz, observou-se a presena de periderme, composta por trs a cinco camadas de clulas estreitas e compactas, resultantes da atividade do felognio, no sendo possvel delimitar o sber, felognio e feloderma. O xilema secundrio contm elementos de vasos com tamanhos irregulares, podendo-se observar placas de perfurao compostas e clulas parenquimticas com paredes espessadas, dispersas entre esses. Foi observada a presena de laticferos no xilema secundrio. Observam-se o floema, externamente ao xilema, composto de fibras e clulas parenquimticas pequenas estreitas e dispostas de modo compacto (Figura 5A e 5B). Alguns autores (St-Pierre et al. 1999, Samanani & Facchini 2006), demonstraram em vinca que a rota biossinttica de vinblastina ocorre em clulas epidrmicas de folha, caules jovens, que se localizam em clulas laticferos e idioblastos. A raiz apresenta contorno aproximadamente circular (Figura 5A e 5B), com floema externo mais desenvolvido que o interno, mostrando todos os seus elementos (elementos ou tubos crivados, clulas companheiras e parnquima). O crtex demonstra desenvolvimento regular, clulas com paredes espessadas irregulares tanto na forma quanto no tamanho.

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A LC

B EV LC FL XL XL C

PC

CX

FL

PD

PC EP

escuro decorrente da reao positiva com o reagente de Dragendorff (Figura 6A), e tambm na raiz pode-se observar a presena de alcalides por meio da colorao castanhos escuros (Figura 6B). De acordo com Schnepf (1974), toda clula secretora, pois muitos compostos podem ser transportados e secretados pelas clulas, tais como acares, hormnios, compostos nitrogenados e sais.
A B

FIGURA 5. Anatomia foliar e radicular de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don). Corte transversal da raiz em estrutura secundria (A): periciclo PC, periderme PD, crtex CX; Floema secundrio FL, xilema primrio XL. 100x. Corte transversal da raiz em estrutura secundria (B): xilema secundrio XL, laticferos LC, cmbio vascular C, elementos vasos EV, floema secundrio FL, periciclo PC, epiderme EP. 200x.

O cilindro central composto por diversas camadas de clulas, formado pelo cmbio vascular, tecidos vasculares secundrios e o xilema primrio, no centro do rgo, com presena de clulas laticferas (Figura 5B). Pacheco (1980) evidenciou em raiz de vinca, fibras no lignificadas isoladas ou em grupos no periciclo. O mesmo observou no sistema vascular, presena de plastdios. Estes tm funo de reserva e geralmente ocorrem no crtex, sistema vascular e parnquima medular (Esa 1974). Segundo Roth (1976), o cmbio vascular produz os tecidos vasculares, xilema para o centro e floema para a periferia. A regio cambial diferenciada na frente de cada um dos trs plos, do protoxilema formou os raios medulares. A raiz da vinca apresenta na regio cambial, raios medulares do tipo tetrarca (Figura 5B). As razes de dicotiledneas se apresentam comumente como diarcas, triarcas, tetrarcas ou pentarcas, enquanto nas monocotiledneas so quase sempre poliarcas. O crescimento secundrio de razes pode ocorrer em dicotiledneas herbceas. Entretanto, o montante do crescimento varia nas diferentes espcies, assim como variam a composio histolgica dos tecidos e os caracteres de constituio da periderme enfatiza (Esa 1985). Atravs dos testes histoqumicos evidenciou-se a presena de alcalides nas clulas do mesfilo devido colorao castanho

FIGURA 6. Deteco histoqumica. Corte transversal da lmina foliar (A) e da raiz (B) de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don): colorao castanha escura ( ) indicando presena de alcalides. 200x.

Foi verificada aps aplicao do reagente vermelho de rutnio, a presena de substncias pcticas nas paredes das clulas epidrmicas e na clula basal dos tricoma tectores, resultando em colorao rosa (Figura 7). A partir dos testes histoqumicos, h evidncias de compostos fenlicos em diferentes tecidos da folha, observados, tambm, no mesfilo, devido colorao verdeazulada escura (Figura 8). Os compostos fenlicos so grupos heterogneos de substncias presentes, em quase todos vegetais, no vacolo, citoplasma ou impregnados parede celular (Esa 1985 & Fahn 1979). Tais compostos esto relacionados proteo da planta quanto ao dessecamento, ataque de animais, entre outros; embora ainda haja dvidas quanto totalidade de suas funes.

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presena de laticferos no xilema secundrio. A presena de alcalides foi observada na raiz e na lmina foliar, verificando-se a ocorrncia de substncias pcticas nas paredes das clulas epidrmicas, bem como evidncia da presena de compostos fenlicos nas epidermes da lmina foliar. AGRADECIMENTOS A UENF, pela concesso da bolsa e recursos para a execuo deste trabalho. Agradecemos Dr. Maura Cunha e da estagiria Tarsila pelo auxlio no processamento do material no laboratrio de Botnica da UENF, Dr. Edna Maria Mendes Aroucha pelas sugestes e crticas do texto final e pela reviso do abstract. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS AKISUE, G. OLIVEIRA, F. Farmacobotnica. So Paulo: Pharmakon, v.1, 1987. 263p. AZEVEDO, A. P. SILVA de. Contribuio ao estudo anatmico histoqumico da espcie Datura suaveolens Humb et Bompl. Ex. WILLD. Comparando o perfil fitoqumico de amostras coletada nos meses de maro e junho. 1998. 67f. Monografia (Trabalho de Graduao em Farmcia) - Universidade Federal do Maranho, So Lus, 1998. COSTA, A. F. Farmacognosia. 2.ed. Lisboa: Fundao Calouste Gulbenkian, v.3, 1982. 1032p. CUTTER, E. G. 1986. Anatomia vegetal. Parte II. rgos experimentos e interpretao. So Paulo: Roca, 336p. DAMIO FILHO, C. F. Morfologia Vegetal. 1.ed., v.2000. Jaboticabal: FUNEP/UNESP, 1993. 243p. ESA, K. Anatomia vegetal. 3. ed. Barcelona: Omega, 1985. 779p. ESA, K. Anatomia das plantas com sementes. Traduo: Berta Lange de Morretes. So Paulo: Ed. da Universidade de So Paulo, 1974. 231p.

FIGURA 7. Deteco histoqumica. Corte transversal da lmina foliar de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don): colorao rosa ( ) indica presena de pectina. 100x.

FIGURA 8. Deteco histoqumica. Corte transversal da lmina foliar de vinca (Catharanthus roseus (L.) G. Don): colorao verde-azulada escura ( ) indicando a presena de compostos fenlicos. 100x.

CONCLUSO

Concluindo, a lmina foliar anfiestomtica, em ambas as faces h presena de aprecivel nmero de estmato do tipo anomocticos e paractico, apresentando cutcula delgada revestindo-as, alm de tricoma tectores unisseriados, unicelulares ou bicelulares. O mesfilo dorsiventral constitudo por parnquima palidico e lacunoso, a nervura central apresenta um colnquima do tipo angular, um parnquima bastante desenvolvido e feixe vascular com organizao do tipo colateral. A raiz apresenta sistema vascular bastante desenvolvido, e o contorno desta aproximadamente circular, com floema externo mais desenvolvido que o interno. A raiz da vinca apresenta na regio cambial, raios medulares do tipo tetrarca. Observou-se a

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[1] Licenciada em Biologia, Mestre em Produo Vegetal. Rua Hugo Correia Paes, Cond. Arte Vida, Edf. Bilro, Apt. 605 Gruta de Lourdes Macei AL. Cep: 57050-730 Macei - AL, Brasil. E-mail: celiaroucha@yahoo.com.br. [2] Engenheiro Agrnomo, Doutor, Professor Associado, Departamento de Fitotecnia/UENF, RJ, Brasil. [3] Engenheiro Agrnomo, Doutor, Professora Adjunto, UFERSA, Mossor, RN, Brasil. [4] - Engenheiro Agrnomo, Doutor, Professor do Instituto Federal de Alagoas Campus Satuba, Rua 17 de Agosto, s/n Bairro: Zona Rural CEP: 57120-000. Satuba - AL

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