UNIVERCIDADE FEDERAL DE ALAGOAS CENTRO DE TECNOLOGIA ENGENHARIA QUMICA

CONTAGEM DE COLNIAS

JOS AUGUSTO DE MOURA NEVES

MACEI-AL 2011

JOS AUGUSTO DE MOURA NEVES

CONTAGEM DE COLNIAS

Trabalho elaborado para fins de avaliao parcial da disciplina microbiologia industrial do Curso de Engenharia Qumica da Universidade Federal do Estado de Alagoas.

Professora: RENATA ALMEIDA

Macei-AL 2011

1. OBJETIVO O experimento realizado tem por objetivo determinar a contaminao do material analisado por microorganismos, bem como contabilizar as clulas viveis, atravs da contagem das colnias formadas pelos microorganismos. 2. INTRODUO O crescimento microbiano est ligado ao crescimento populacional de clulas e no ao aumento do tamanho das clulas. O crescimento populacional definido como o aumento do nmero, ou da massa microbiana. O tempo de gerao o intervalo de tempo necessrio para que uma clula se duplique, o mesmo varivel para os diferentes organismos, podendo ser de 10 a 20 minutos at dias. O tempo de gerao em muitos dos organismos conhecidos varia de 1 a 3 horas. Porm o tempo de gerao no fixo ele depende de vrios fatores como: Genticos, nutricionais, fisiolgico da cultura. O crescimento dos microrganismos afetado principalmente pelas condies fsicas e qumicas do ambiente no qual esto. Estas condies podem influir positivamente ou negativamente de acordo com o microrganismo em questo. Como exemplo podemos citar a temperatura que um dos principais fatores ambientais que influem o crescimento dos microorganismos, a maioria deste vivem em uma faixa de 20c 50c, que a temperatura do meio em que vivemos. Outro fator fsico importante o pH. Os ambientes naturais tem uma faixa de pH de 5 a 9, o que comporta o crescimento de diferentes tipos de microrganismos. A maioria dos microrganismos cresce melhor perto da neutralidade (pH 6,5 7,5). A Presso osmtica um fator de grande importncia, principalmente a partir do maior conhecimento sobre as Archaea. Os fatores qumicos so os fatores que vo fornecer os nutrientes necessrios para o desenvolvimento dos microorganismos so eles: gua, fontes de carbono, fontes de nitrognio, minerais, oxignio, e os fatores orgnicos.

Meio De Cultura o material nutriente preparado no laboratrio para o crescimento de microrganismos. Contagem de viveis: Procedimento tambm conhecido como contagem em placa, que estima o nmero de clulas viveis (isto , capazes de se reproduzir) em uma amostra. Esta metodologia envolve a coleta de alquotas de uma cultura microbiana em diferentes tempos de crescimento, as quais so ento inoculadas em meio slido. Aps a incubao dos meios, geralmente por uma noite, o nmero de colnias contado. Como uma colnia normalmente originada a partir de um organismo, o total de colnias que se desenvolvem no meio corresponde ao nmero de clulas viveis presentes na alquota analisada. Esta tcnica deve sempre realizada empregando-se vrias diluies (10 0 a 104 clulas) das amostras. A contagem de viveis pode ser feita pela semeadura em superfcie ou em profundidade ("pour plate"). Geralmente o volume a ser inoculado no deve ultrapassar 0,1 mL, para evitar a confluncia das colnias. Se a tcnica de semeadura em profundidade for utilizada, pode-se inocular de 0,1 a 1,0 mL de clulas. Esta tcnica precisa quando: O nmero de colnias (ou placas de lise, no caso de partculas virais) contadas situa-se entre 30 e 300; As condies culturais e ambientais esto adequadas para os microrganismos analisados. Este tipo de contagem est sujeito a grandes erros (agregados, duas clulas prximas, originando uma colnia), que podem ser minimizados pela realizao de triplicatas para cada diluio. Esta metodologia amplamente utilizada, exibindo elevada sensibilidade, detectando baixos nmeros de clulas e permitindo tambm a contagem de diferentes tipos de microrganismos. Pode-se empregar meios seletivos (meios que favorecem o crescimento de um determinado tipo ou grupo de organismo); Tambm podem ser usadas membranas filtrantes, onde os lquidos so filtrados e as membranas colocadas diretamente sobre os meios de cultura.

3 MATERIAL Placas de petri com meio de cultura. 4 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

4.1 Preparao das placas. 4.1.1 Identificar as placas, no fundo, com: data, operador, controle ou teste. 4.1.2 Despejar 20 ml de meio de cultura nas placas. 4.1.3 Esperar esfriar. 4.1.4 Testar a gua do laboratrio, usando placas de Petri contendo meio slido nutritivo para a revelao dos microrganismos a detectar. 5 RESULTADOS EXPERIMENTAIS

Foram montadas duas placas petri contendo meio slido nutritivo, uma para controle, e a outra foi contaminada com gua da torneira do laboratrio, e foi dado um tempo de incubao de 120 horas exposta a temperatura ambiente. Aps o tempo de incubao foi constatado que a placa de controle estava contaminada, pois apresentava varias colnias de bactrias, j a placa de teste alem das colnias de bactrias apresentadas no controle, apresentou duas grandes colnias de fungos. 6 CONCLUSO A contaminao da placa controle indica que o meio slido nutritivo estava contaminado, por este motivo podemos descartar as colnias que foram percebidas semelhantes no teste e no controle. As duas colnias de fungos que foram percebidas no teste no significa que existiam duas clulas viveis de fungos, mas apenas que a amostra estava contaminada, porque o tempo de incubao foi muito prolongado, e com isso varias colnias podem ter se unido formando um grande colnia. Pelos motivos expostos a nica concluso que podemos chegar que a amostra estava contaminada por fungos.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Madigan et al., Brock Biology of Microorganisms, 2003 Brock, T. D. Biology of Microorganisms. Prentice-Hall, Inc., New Jersey, ISBN 0-13520875-0. Lehninger, A. L.; Nelson, D. L.; Cox, M. M. Princpios de Bioqumica. 3rd ed., Sarvier editora, So Paulo, 2002, 975p. Stanier, R. Y.; Ingraham, J. L.; Wheelis, M. L. et. al. The Microbial World, 5th ed., Prentice-Hall, Englewood Cliffs, New Jersey, USA, 1986. Berg, J.M.; Tymoczko, J. L.; Stryer, L. Bioqumica, 5th ed. Guanabara Koogan S.A., Rio de Janeiro, 2002.