MATERIAL GENETICO

1. QUE ES LA GENETICA?
La gentica es la ciencia que estudia la variacin y la transmisin de rasgos o caractersticas de una generacin a la otra. En esta definicin, la palabra variacin se refiere a variacin gentica; esto significa, el rango de posibles valores para un rasgo cuando es influenciado por la herencia. La herencia es la transmisin de rasgos de los padres a la descendencia va el material gentico. Esta transmisin toma lugar en el momento de la fertilizacin en la reproduccin, cuando un espermatozoide de toro se une con el vulo de la vaca para producir un ternero con una composicin gentica nica. Solamente mellizos idnticos poseen la composicin gentica idntica debido a que ellos descienden de un solo vulo fertilizado que ha sido separado en dos embriones durante la primera fase del desarrollo.

2. GENOTIPO Y FENOTIPO
El genotipo de un animal representa el gen o grupo de genes responsable por un rasgo en particular. En un sentido ms general, el genotipo describe todo el grupo de genes que un individuo ha heredado. Como contraste, el fenotipo es el valor que toma un rasgo; en otras palabras, es lo que puede ser observado o medido. Por ejemplo, el fenotipo puede ser la produccin individual de leche de una vaca, el porcentaje de grasa en la leche o el puntaje de clasificacin por conformacin. Existe una diferencia importante entre genotipo y fenotipo. El genotipo es esencialmente una caracterstica fija del organismo; permanece constante a lo largo de la vida del animal y no es modificado por el medio ambiente. Cuando solamente uno o un par de genes son responsables por un rasgo, el genotipo permanece generalmente sin cambios a lo largo de la vida del animal (ejm. color de pelo). En este caso, el fenotipo otorga una buena indicacin de la composicin gentica del individuo. Aun as, para algunos rasgos, el fenotipo cambia constantemente a lo largo de la vida del individuo como respuesta a factores ambientales. En este caso, el fenotipo no es un indicador confiable del genotipo. Esto generalmente se presenta cuando muchos genes se encuentran involucrados en la expresin de un rasgo tal como produccin de leche. Como resultado, la produccin de leche de una vaca depende de: Produccin fenotpica de leche = G + E, donde: G es el mrito gentico de la vaca para produccin de leche (el efecto de los genes); E se refiere al efecto del manejo de la vaca y medio ambiente.

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3. EL MATERIAL GENETICO
El material gentico se encuentra localizado en el ncleo de cada clula del cuerpo. A excepcin de las clulas reproductoras (espermatozoides y vulos) y algunas otras excepciones (glbulos rojos sanguneos), las clulas contienen dos copias del material gentico completo del animal. Cuando la clula se divide, el material gentico se organiza en una serie de estructuras largas en forma de fibras llamadas cromosomas (Figura 1). En las clulas del cuerpo, cada cromosoma posee una contraparte que posee el mismo largo y forma (con la excepcin de los cromosomas que determinan el sexo) y contienen la informacin gentica del mismo rasgo. Estos dos cromosomas son miembros de un par de cromosomas, uno derivado del padre y otro de la madre. El nmero de pares de cromosomas es tpico de una especie y es generalmente abreviado con la letra "n". Por ejemplo, en humanos n=23, en cerdos n=19, en vacas n=30. Por lo tanto las clulas en el cuerpo humano, cerdos y vacas contienen 2n=46, 38 y 60 cromosomas, respectivamente. Los genes se encuentran localizados a lo largo de los cromosomas. Un gen es la unidad funcional bsica de la herencia; esto significa que contiene la informacin gentica que es responsable por la expresin de un rasgo en particular. El largo completo de un cromosoma puede dividirse en miles de estas unidades funcionales, cada una responsable de un rasgo en particular.

Figura 1: Cromosomas magnificados miles de veces Un gen se compone de cido desoxirribonucleico o ADN. La funcin del ADN es la de llevar la informacin necesaria para la sntesis de protenas. A medida que las protenas son sintetizadas y que el ADN se replica a s mismo, el nmero de clulas del cuerpo se incrementa (crecimiento) y las clulas pueden especializarse

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dentro de diferentes funciones especficas (desarrollo) en las que algunos genes se expresan otros no. Por ejemplo, las clulas de la piel (tejido especializado) contienen todo el material gentico necesario para recrear un individuo, pero los nicos genes especializados que se expresan en estas clulas son los responsables por la formacin y el color del pelo.

3.1 TRANSMISION DEL MATERIAL GENETICO

Macho y hembra Los testculos del toro y los ovarios de la vaca producen las clulas reproductoras por una serie de divisiones celulares que separan el nmero de cromosomas en una clula. El espermatozoide y el ovario contienen solamente un miembro del par de cromosomas. Por lo tanto, las clulas de la vaca y del toro contienen 60 cromosomas (2n = 60), pero el espermatozoide en el semen y el vulo en los ovarios contienen solamente 30 cromosomas (n=30, Figura 2). Los dos principios bsicos de la transmisin de un rasgo (ejm. sexo) son los siguientes (Figura 2): 1) Separacin de los pares de cromosomas durante la formacin de las clulas reproductoras; 2) Unin del espermatozoide con el vulo para crear una nueva clula con un conjunto nico de cromosomas.

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Figura 2: Los cromosomas son transmitidos por las clulas reproductoras que contienen solamente la mitad del nmero normal de cromosomas de la especie. El azar, en el momento de la fertilizacin, es el responsable de los rasgos especficos heredados por la descendencia (eje., gnero). Para 29 pares de cromosomas, ambos miembros son visualmente idnticos. De todas formas, para uno de los pares, un miembro es mucho ms largo; es llamado cromosoma X, y el miembro ms corto es llamado cromosoma Y. Todos los vulos llevan el cromosoma X, pero el espermatozoide puede llevar ya sea el cromosoma X o el Y. Durante la divisin celular para formar las clulas reproductoras, cada miembro del par de cromosomas va hacia una clula por separado. Como resultado, 50% de los espermatozoides llevarn el cromosoma X y el otro 50%, el cromosoma Y. Si por casualidad un espermatozoide que lleva el cromosoma Y fertiliza un vulo, la descendencia ser macho. Si la descendencia recibe dos cromosomas X, se desarrollar una hembra (Figura 2). Es importante darse cuenta que es imposible predecir el sexo de la descendencia al momento del apareamiento (inseminacin); aun as, podemos predecir que, en promedio, 50% de la descendencia sern machos y 50% hembras. Rasgos cualitativos Los rasgos cualitativos tienden a caer dentro de categoras discretas. Generalmente solo uno o unos pocos genes poseen un gran efecto sobre los rasgos cualitativos. El medio ambiente tiene generalmente un pequeo papel al influenciar la categora dentro de la que el animal cae. En este caso, el fenotipo de un animal refleja su genotipo. Ejemplos de rasgos cualitativos son: * Color de pelo; * Defectos hereditarios como enanismo; * Presencia o ausencia de cuernos; * Tipo sanguneo. Rasgos cuantitativos Los rasgos cuantitativos difieren de los cualitativos de dos formas importantes: 1) Se encuentran influenciados por muchos pares de genes; 2) La expresin fenotpica es influenciada ms fuertemente por el medio ambiente que en el caso de los rasgos cualitativos. Muchos de los rasgos de importancia econmica importante en el ganado lechero son cuantitativos: * Produccin de leche; * Composicin de la leche; * Conformacin (tambin llamado tipo); * Eficiencia de conversin de alimento;

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* Resistencia a enfermedades. La influencia combinada de muchos genes y el efecto del medio ambiente en los rasgos cuantitativos hacen que sea mucho ms difcil el determinar el genotipo exacto que en el caso de la mayora de los rasgos cualitativos. Algunas veces, el fenotipo del animal nos dice muy poco acerca de su genotipo. Por ejemplo, un registro de lactancia solamente dice una fraccin de la informacin acerca del mrito gentico de la vaca para produccin de leche. Qu hace que el genotipo de una vaca sea nico? Cuando se forman los vulos, ellos reciben uno de los dos miembros del par de cromosomas. Por lo tanto, un cromosoma en particular en un vulo puede ser el primer o el segundo miembro del par de cromosomas de los padres. Existen solamente dos tipos de vulos para un gen en particular. Si en lugar de un par de cromosomas, consideramos dos, cul es el nmero de diferentes vulos? En otras palabras, cul es el nmero total de combinaciones cromosmicas posibles? La situacin es la misma que la de arrojar dos monedas al mismo tiempo. El nmero de posibles combinaciones es: dos posibles valores para la primera moneda multiplicado por los dos posibles valores de la segunda = 2 x 2 = 22 = 4 diferentes posibilidades. El nmero de diferentes genotipos para un vulo es cuatro y la probabilidad de una combinacin en particular de cromosomas es de 1/4. Esto es tambin verdad para el nmero de posibles genotipos en las clulas reproductoras masculinas. Por lo tanto, cuando uno de cuatro posibles clases de espermatozoides fertiliza uno de cuatro posibles combinaciones de vulos el nmero de descendientes genticamente diferentes es 4 x 4 = 16 (eje., 22 x 22). Por lo tanto, las chances de que un genotipo en particular se presente en el recin nacido es 1/16. Cuando los 30 pares de cromosomas del ganado lechero se separan durante la formacin de las clulas reproductoras y luego se vuelven a unir en el momento de la fertilizacin, el nmero total de posibles combinaciones cromosmicas es 230 x 230 = 1.152.900.000.000.000.000, cada uno siendo nico. Con este nmero de posibilidades para cada apareamiento, es fcil entender por qu dos individuos no son iguales en una poblacin, aun cuando tengan el mismo padre.

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3.2 CONCEPTO ADN

cido desoxirribonucleico

Situacin del ADN dentro de una clula. El cido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN (y tambin DNA, del ingls DeoxyriboNucleic Acid), es un tipo de cido nucleico, una macromolcula que forma parte de todas las clulas. Contiene la informacin gentica usada en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus, siendo el responsable de su transmisin hereditaria. Desde el punto de vista qumico, el ADN es un polmero de nucletidos, es decir, un polinucletido. Un polmero es un compuesto formado por muchas unidades simples conectadas entre s, como si fuera un largo tren formado por vagones. En el ADN, cada vagn es un nucletido, y cada nucletido, a su vez, est formado por un azcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser adeninaA, timinaT, citosinaC o guaninaG) y un grupo fosfato que acta como enganche de cada vagn con el siguiente. Lo que distingue a un vagn (nucletido) de otro es, entonces, la base nitrogenada, y por ello la secuencia del ADN se especifica nombrando slo la secuencia de sus bases. La disposicin

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secuencial de estas cuatro bases a lo largo de la cadena (el ordenamiento de los cuatro tipos de vagones a lo largo de todo el tren) es la que codifica la informacin gentica: por ejemplo, una secuencia de ADN puede ser ATGCTAGATCGC... En los organismos vivos, el ADN se presenta como una doble cadena de nucletidos, en la que las dos hebras estn unidas entre s por unas conexiones denominadas puentes de hidrgeno. Para que la informacin que contiene el ADN pueda ser utilizada por la maquinaria celular, debe copiarse en primer lugar en unos trenes de nucletidos, ms cortos y con unas unidades diferentes, llamados ARN. Las molculas de ARN se copian exactamente del ADN mediante un proceso denominado transcripcin. Una vez procesadas en el ncleo celular, las molculas de ARN pueden salir al citoplasma para su utilizacin posterior. La informacin contenida en el ARN se interpreta usando el cdigo gentico, que especifica la secuencia de los aminocidos de las protenas, segn una correspondencia de un triplete de nucletidos (codn) para cada aminocido. Esto es, la informacin gentica (esencialmente: qu protenas se van a producir en cada momento del ciclo de vida de una clula) se halla codificada en las secuencias de nucletidos del ADN y debe traducirse para poder ser empleada. Tal traduccin se realiza empleando el cdigo gentico a modo de diccionario. El diccionario "secuencia de nucletido-secuencia de aminocidos" permite el ensamblado de largas cadenas de aminocidos (las protenas) en el citoplasma de la clula. Por ejemplo, en el caso de la secuencia de ADN indicada antes (ATGCTAGATCGC...), la ARN polimerasa utilizara como molde la cadena complementaria de dicha secuencia de ADN (que sera TAC-GAT-CTA-GCG-...) para transcribir una molcula de ARNm que se leera AUG-CUA-GAU-CGC-... ; el ARNm resultante, utilizando el cdigo gentico, se traducira como la secuencia de aminocidos metionina-leucina-cido asprtico-arginina-... Las secuencias de ADN que constituyen la unidad fundamental, fsica y funcional de la herencia se denominan genes. Cada gen contiene una parte que se transcribe a ARN y otra que se encarga de definir cundo y dnde deben expresarse. La informacin contenida en los genes (gentica) se emplea para generar ARN y protenas, que son los componentes bsicos de las clulas, los "ladrillos" que se utilizan para la construccin de los orgnulos celulares, entre otras funciones. Dentro de las clulas, el ADN est organizado en estructuras llamadas cromosomas que, durante el ciclo celular, se duplican antes de que la clula se divida. Los organismos eucariotas (por ejemplo, animales, plantas, y hongos) almacenan la inmensa mayora de su ADN dentro del ncleo celular y una mnima

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parte en los elementos celulares llamados mitocondrias, y en los plastos y los Centros Organizadores de Microtbulos o Centrolos, en caso de tenerlos; los organismos procariotas (bacterias y arqueas) lo almacenan en el citoplasma de la clula, y, por ltimo, los virus ADN lo hacen en el interior de la cpsida de naturaleza proteica. Existen multitud de protenas, como por ejemplo las histonas y los factores de transcripcin, que se unen al ADN dotndolo de una estructura tridimensional determinada y regulando su expresin. Los factores de transcripcin reconocen secuencias reguladoras del ADN y especifican la pauta de transcripcin de los genes. El material gentico completo de una dotacin cromosmica se denomina genoma y, con pequeas variaciones, es caracterstico de cada especie.

3.3 HISTORIA
Friedrich Miescher, mdico suizo fallecido en 1895. El ADN fue aislado por vez primera durante el invierno de 1869 por el mdico suizo Friedrich Miescher mientras trabajaba en la Universidad de Tubinga. Miescher realizaba experimentos acerca de la composicin qumica del pus de vendas quirrgicas desechadas cuando not un precipitado de una sustancia desconocida que caracteriz qumicamente ms tarde Lo llam "nuclena", debido a que lo haba extrado a partir de ncleos celulares. Se necesitaron casi 70 aos de investigacin para poder identificar los componentes y la estructura de los cidos nucleicos. En 1919 Phoebus Levene identific que un nucletido est formado por una base, un azcar y un fosfato. Levene sugiri que el ADN formaba una estructura con forma de solenoide (muelle) con unidades de nucletidos unidos a travs de los grupos fosfato. En 1930 Levene y su maestro Albrecht Kossel probaron que la nuclena de Miescher es un cido desoxirribonucleico (ADN) formado por cuatro bases nitrogenadas (citosina (C), timina (T), adenina (A) y guanina (G)), el azcar desoxirribosa y un grupo fosfato, y que, en su estructura bsica, el nucletido est compuesto por un azcar unido a la base y al fosfato. Sin embargo, Levene pensaba que la cadena era corta y que las bases se repetan en un orden fijo.

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En 1937 William Astbury produjo el primer patrn de difraccin de rayos X que mostraba que el ADN tena una estructura regular.

Maclyn McCarty con Francis Crick y James D Watson. La funcin biolgica del ADN comenz a dilucidarse en 1928, con una serie bsica de experimentos de la gentica moderna realizados por Frederick Griffith, quien estaba trabajando con cepas "lisas" (S) o "rugosas" (R) de la bacteria Pneumococcus (causante de la neumona), segn la presencia (S) o no (R) de una cpsula azucarada que es la que confiere virulencia. La inyeccin de neumococos S vivos en ratones produce la muerte de stos, y Griffith observ que si inyectaba ratones con neumococos R vivos o con neumococos S muertos por calor, los ratones no moran. Sin embargo, si inyectaba a la vez neumococos R vivos y neumococos S muertos, los ratones moran, y en su sangre se podan aislar neumococos S vivos. Como las bacterias muertas no pudieron haberse multiplicado dentro del ratn, Griffith razon que deba producirse algn tipo de cambio o transformacin de un tipo bacteriano a otro por medio de una transferencia de alguna sustancia activa, que denomin "principio transformante". Esta sustancia proporcionaba la capacidad a los neumococos R de producir una cpsula azucarada y transformarse as en virulentas. En los siguientes 15 aos, estos experimentos iniciales fueron duplicados mezclando distintos tipos de cepas bacterianas muertas por el calor con otras vivas, tanto en ratones (in vivo) como en tubos de ensayo (in vitro). La bsqueda del factor transformante que era capaz de hacer virulentas a cepas que inicialmente no lo eran continu hasta 1944, ao en el cual Oswald Avery, Colin MacLeod y Maclyn McCarty realizaron un experimento hoy clsico. Estos investigadores extrajeron la fraccin activa (el factor transformante), y mediante anlisis qumicos, enzimticos y serolgicos, observaron que no contena protenas, ni lpidos no ligados, ni polisacridos activos, sino que estaba constituido principalmente por "una forma viscosa de cido desoxirribonucleico altamente polimerizado", es decir, ADN.

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El ADN extrado de las cepas bacterianas S muertas por el calor lo mezclaron "in vitro" con cepas R vivas: el resultado fue que se formaron colonias bacterianas S, por lo que se concluy inequvocamente que el factor o principio transformante era el ADN. A pesar de que la identificacin del ADN como principio transformante an tard varios aos en ser universalmente aceptada, este descubrimiento fue decisivo en el conocimiento de la base molecular de la herencia, y constituye el nacimiento de la gentica molecular. Finalmente, el papel exclusivo del ADN en la heredabilidad fue confirmado en 1952 mediante los experimentos de Alfred Hershey y Martha Chase, en los cuales comprobaron que el fago T2 transmita su informacin gentica en su ADN, pero no en su protena. En cuanto a la caracterizacin qumica de la molcula, en 1940 Chargaff realiz algunos experimentos que le sirvieron para establecer las proporciones de las bases nitrogenadas en el ADN. Descubri que las proporciones de purinas eran idnticas a las de pirimidinas; la "equimolecularidad" de las bases ([A]=[T], [G]=[C]) y que la cantidad de G+C en una determinada molcula de ADN no siempre es igual a la cantidad de A+T y puede variar desde el 36% al 70% del contenido total. Con esta informacin y junto con los datos de difraccin de rayos X proporcionados por Rosalind Franklin; James Watson y Francis Crick propusieron en 1953 el modelo de la doble hlice de ADN para representar la estructura tridimensional del polmero. En una serie de cinco artculos en el mismo nmero de Nature se public la evidencia experimental que apoyaba el modelo de Watson y Crick. De stos, el artculo de Franklin y Raymond Gosling fue la primera publicacin con datos de difraccin de rayos X que apoyaba el modelo de Watson y Crick, y en dicho nmero de Nature tambin apareca un artculo sobre la estructura del ADN de Maurice Wilkins y sus colaboradores. En 1962, despus de la muerte de Franklin, los cientficos Watson, Crick y Wilkins recibieron conjuntamente el Premio Nobel en Fisiologa o Medicina. Sin embargo, el debate contina sobre quin debera recibir crdito por el descubrimiento.

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3.4 PROPIEDADES FISICAS Y QUIMICAS

Estructura qumica del ADN: dos cadenas de nucletidos conectadas mediante puentes de hidrgeno, que aparecen como lneas punteadas. El ADN es un largo polmero formado por unidades repetitivas, los nucletidos.Una doble cadena de ADN mide de 22 a 26 angstroms (2,2 a 2,6 nanmetros) de ancho, y una unidad (un nucletido) mide 3,3 (0,33 nm) de largo.Aunque cada unidad individual que se repite es muy pequea, los polmeros de ADN pueden ser molculas enormes que contienen millones de nucletidos. Por ejemplo, el cromosoma humano ms largo, el cromosoma nmero 1, tiene aproximadamente 220 millones de pares de bases. En los organismos vivos, el ADN no suele existir como una molcula individual, sino como una pareja de molculas estrechamente asociadas. Las dos cadenas de ADN se enroscan sobre s mismas formando una especie de escalera de caracol, denominada doble hlice. El modelo de estructura en doble hlice fue propuesto en 1953 por James Watson y Francis Crick (el artculo Molecular

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Structure of Nucleic Acids: A Structure for Deoxyribose Nucleic Acid fue publicado el 25 de abril de 1953 en Nature). El xito de ste modelo radicaba en su consistencia con las propiedades fsicas y qumicas del ADN. El estudio mostraba adems que la complementariedad de bases poda ser relevante en su replicacin, y tambin la importancia de la secuencia de bases como portador de informacin gentica. Cada unidad que se repite, el nucletido, contiene un segmento de la estructura de soporte (azcar + fosfato), que mantiene la cadena unida, y una base, que interacciona con la otra cadena de ADN en la hlice. En general, una base ligada a un azcar se denomina nuclesido y una base ligada a un azcar y a uno o ms grupos fosfatos recibe el nombre de nucletido. Cuando muchos nucletidos se encuentran unidos, como ocurre en el ADN, el polmero resultante se denomina polinucletido.

3.4.1 COMPONENTES
Estructura de soporte: La estructura de soporte de una hebra de ADN est formada por unidades alternas de grupos fosfato y azcar. El azcar en el ADN es una pentosa, concretamente, la desoxirribosa.

cido fosfrico

Enlace fosfodister. El grupo fosfato une el carbono 5' del azcar de un nuclesido con el carbono 3' del siguiente.

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Su frmula qumica es H3PO4. Cada nucletido puede contener uno (monofosfato: AMP), dos (difosfato: ADP) o tres (trifosfato: ATP) grupos de cido fosfrico, aunque como monmeros constituyentes de los cidos nucleicos slo aparecen en forma de nuclesidos monofosfato.

Desoxirribosa
Es un monosacrido de 5 tomos de carbono (una pentosa) derivado de la ribosa, que forma parte de la estructura de nucletidos del ADN. Su frmula es C 5H10O4. Una de las principales diferencias entre el ADN y el ARN es el azcar, pues en el ARN la 2-desoxirribosa del ADN es reemplazada por una pentosa alternativa, la ribosa. Las molculas de azcar se unen entre s a travs de grupos fosfato, que forman enlaces fosfodister entre los tomos de carbono tercero (3, tres prima) y quinto (5, cinco prima) de dos anillos adyacentes de azcar. La formacin de enlaces asimtricos implica que cada hebra de ADN tiene una direccin. En una doble hlice, la direccin de los nucletidos en una hebra (3 5) es opuesta a la direccin en la otra hebra (5 3). Esta organizacin de las hebras de ADN se denomina antiparalela; son cadenas paralelas, pero con direcciones opuestas. De la misma manera, los extremos asimtricos de las hebras de ADN se denominan extremo 5 (cinco prima) y extremo 3 (tres prima) respectivamente.

Bases nitrogenadas
Las cuatro bases nitrogenadas mayoritarias que se encuentran en el ADN son la adenina (abreviado A), citosina (C), guanina (G) y timina (T). Cada una de estas cuatro bases est unida al armazn de azcar-fosfato a travs del azcar para formar el nucletido completo (base-azcar-fosfato). Las bases son compuestos heterocclicos y aromticos con dos o ms tomos de nitrgeno, y, dentro de las bases mayoritarias, se clasifican en dos grupos: las bases pricas o purinas (adenina y guanina), derivadas de la purina y formadas por dos anillos unidos entre s, y las bases pirimidnicas o pirimidinas (citosina y timina), derivadas de la pirimidina y con un solo anillo. En los cidos nucleicos existe una quinta base pirimidnica, denominada uracilo (U), que normalmente ocupa el lugar de la timina en el ARN y difiere de sta en que carece de un grupo metilo en su anillo. El uracilo no se encuentra habitualmente en el ADN, slo aparece raramente como un producto residual de la degradacin de la citosina por procesos de desaminacin oxidativa.

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Timina: 2, 4-dioxo, 5-metilpirimidina.

Timina
En el cdigo gentico se representa con la letra T. Es un derivado pirimidnico con un grupo oxo en las posiciones 2 y 4, y un grupo metil en la posicin 5. Forma el nuclesido timidina (siempre desoxitimidina ya que slo aparece en el ADN) y el nucletido timidilato o timidina monofosfato (dTMP). En el ADN, la timina siempre se empareja con la adenina de la cadena complementaria mediante 2 puentes de hidrgeno, T=A. Su frmula qumica es C5H6N2O2 y su nomenclatura 2, 4-dioxo, 5metilpirimidina.

Citosina: 2-oxo, 4-aminopirimidina.

Citosina
En el cdigo gentico se representa con la letra C. Es un derivado pirimidnico, con un grupo amino en posicin 4 y un grupo oxo en posicin 2. Forma el nuclesido citidina (desoxicitidina en el ADN) y el nucletido citidilato o (desoxi)citidina monofosfato (dCMP en el ADN, CMP en el ARN). La citosina siempre se empareja en el ADN con la guanina de la cadena complementaria mediante un triple enlace, CG. Su frmula qumica es C4H5N3O y su nomenclatura 2-oxo, 4 aminopirimidina. Su masa molecular es de 111,10 unidades de masa atmica. La citosina fue descubierta en 1894 cuando fue aislada en tejido del timo de carnero.

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Adenina: 6-aminopurina.

Adenina
En el cdigo gentico se representa con la letra A. Es un derivado de la purina con un grupo amino en la posicin 6. Forma el nuclesido adenosina (desoxiadenosina en el ADN) y el nucletido adenilato o (desoxi) adenosina monofosfato (dAMP, AMP). En el ADN siempre se empareja con la timina de la cadena complementaria mediante 2 puentes de hidrgeno, A=T. Su frmula qumica es C5H5N5 y su nomenclatura 6-aminopurina. La adenina, junto con la timina, fue descubierta en 1885 por el mdico alemn Albrecht Kossel.

Guanina: 6-oxo, 2-aminopurina.

Guanina
En el cdigo gentico se representa con la letra G. Es un derivado prico con un grupo oxo en la posicin 6 y un grupo amino en la posicin 2. Forma el nuclesido (desoxi) guanosina y el nucletido guanilato o (desoxi) guanosina monofosfato (dGMP, GMP). La guanina siempre se empareja en el ADN con la citosina de la cadena complementaria mediante tres enlaces de hidrgeno, GC. Su frmula qumica es C5H5N5O y su nomenclatura 6-oxo, 2-aminopurina.

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Tambin existen otras bases nitrogenadas (las llamadas bases nitrogenadas minoritarias), derivadas de forma natural o sinttica de alguna otra base mayoritaria. Lo son por ejemplo la hipoxantina, relativamente abundante en el tRNA, o la cafena, ambas derivadas de la adenina; otras, como el aciclovir, derivadas de la guanina, son anlogos sintticos usados en terapia antiviral; otras, como una de las derivadas del uracilo, son antitumorales. Las bases nitrogenadas tienen una serie de caractersticas que les confieren unas propiedades determinadas. Una caracterstica importante es su carcter aromtico, consecuencia de la presencia en el anillo de dobles enlaces en posicin conjugada. Ello les confiere la capacidad de absorber luz en la zona ultravioleta del espectro en torno a los 260 nm, lo cual puede ser aprovechado para determinar el coeficiente de extincin del ADN y hallar la concentracin existente de los cidos nucleicos. Otra de sus caractersticas es que presentan tautomera o isomera de grupos funcionales debido a que un tomo de hidrgeno unido a otro tomo puede migrar a una posicin vecina; en las bases nitrogenadas se dan dos tipos de tautomeras: tautomera lactama-lactima, donde el hidrgeno migra del nitrgeno al oxgeno del grupo oxo (forma lactama) y viceversa (forma lactima), y tautomera imina-amina primaria, donde el hidrgeno puede estar formando el grupo amina (forma amina primaria) o migrar al nitrgeno adyacente (forma imina). La adenina slo puede presentar tautomera amina imina, la timina y el uracilo muestran tautomera doble lactama-lactima, y la guanina y citosina pueden presentar ambas. Por otro lado, y aunque se trate de molculas apolares, las bases nitrogenadas presentan suficiente carcter polar como para establecer puentes de hidrgeno, ya que tienen tomos muy electronegativos (nitrgeno y oxgeno) presentando carga parcial negativa, y tomos de hidrgeno con carga parcial positiva, de manera que se forman dipolos que permiten que se formen estos enlaces dbiles. Se estima que el genoma humano haploide tiene alrededor de 3.000 millones de pares de bases. Para indicar el tamao de las molculas de ADN se indica el nmero de pares de bases, y como derivados hay dos unidades de medida muy utilizadas, la kilobase (kb), que equivale a 1.000 pares de bases, y la megabase (Mb), que equivale a un milln de pares de bases.

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3.4.2 APAREAMIENTO DE BASES

Un par de bases CG con tres puentes de hidrgeno.

Un par A=T con dos puentes de hidrgeno. Los puentes de hidrgeno se muestran como lneas discontinuas. La dble hlice de ADN se mantiene estable mediante la formacin de puentes de hidrgeno entre las bases asociadas a cada una de las dos hebras. Para la formacin de un enlace de hidrgeno una de las bases debe presentar un "donador" de hidrgenos con un tomo de hidrgeno con carga parcial positiva (NH2 o -NH) y la otra base debe presentar un grupo "aceptor" de hidrgenos con un tomo cargado electronegativamente (C=O o N). Los puentes de hidrgeno son uniones ms dbiles que los tpicos enlaces qumicos covalentes, como los que conectan los tomos en cada hebra de ADN, pero ms fuertes que interacciones hidrfobas individuales, enlaces de Van der Waals, etc. Como los puentes de hidrgeno no son enlaces covalentes, pueden romperse y formarse de nuevo de forma relativamente sencilla. Por esta razn, las dos hebras de la doble hlice pueden separarse como una cremallera, bien por fuerza mecnica o por alta temperatura. La doble hlice se estabiliza adems por el efecto hidrofbico y el apilamiento, que no estn influenciados por la secuencia de bases del ADN. Cada tipo de base en una hebra forma un enlace nicamente con un tipo de base en la otra hebra, lo que se denomina "complementariedad de las bases". Segn esto, las purinas forman enlaces con las pirimidinas, de forma que A se enlaza slo con T, y C slo con G.

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La organizacin de dos nucletidos apareados a lo largo de la doble hlice se denomina apareamiento de bases. Este emparejamiento corresponde a la observacin ya realizada por Erwin Chargaff (1905-2002), que mostr que la cantidad de adenina era muy similar a la cantidad de timina, y que la cantidad de citosina era igual a la cantidad de guanina en el ADN. Como resultado de esta complementariedad, toda la informacin contenida en la secuencia de doble hebra de la hlice de ADN est duplicada en cada hebra, lo cual es fundamental durante el proceso de replicacin del ADN. En efecto, esta interaccin reversible y especfica entre pares de bases complementarias es crtica para todas las funciones del ADN en los organismos vivos. Como se ha indicado anteriormente, los dos tipos de pares de bases forman un nmero diferente de enlaces de hidrgeno: A=T forman dos puentes de hidrgeno, y CG forman tres puentes de hidrgeno (ver imgenes). El par de bases GC es por tanto ms fuerte que el par de bases AT. Como consecuencia, tanto el porcentaje de pares de bases GC como la longitud total de la doble hlice de ADN determinan la fuerza de la asociacin entre las dos hebras de ADN. Las dobles hlices largas de ADN con alto contenido en GC tienen hebras que interaccionan ms fuertemente que las dobles hlices cortas con alto contenido en AT.Por esta razn, las zonas de la doble hlice de ADN que necesitan separarse fcilmente tienden a tener un alto contenido en AT, como por ejemplo la secuencia TATAAT de la Caja de Pribnow de algunos promotores.En el laboratorio, la fuerza de esta interaccin puede medirse buscando la temperatura requerida para romper los puentes de hidrgeno, la temperatura de fusin (tambin denominado valor Tm, del ingls melting temperature). Cuando todas las pares de bases en una doble hlice se funden, las hebras se separan en solucin en dos hebras completamente independientes. Estas molculas de ADN de hebra simple no tienen una nica forma comn, sino que algunas conformaciones son ms estables que otras.

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Otros tipos de pares de bases

Par de bases A=T de tipo Watson-Crick. En azul el donador de hidrgenos y en rojo el aceptor.

Par de bases A=T de tipo Watson-Crick reverso. En azul el donador de hidrgenos y en rojo el aceptor. Ntese que la pirimidina ha sufrido un giro de 180 sobre el eje del carbono 6. Existen diferentes tipos de pares de bases que se pueden formar segn cmo se forman los puentes de hidrgeno. Los que encontramos en la doble hlice de ADN son los llamados pares de bases Watson-Crick, pero tambin existen otros posibles pares de bases, como los denominados Hoogsteen y Wobble u oscilante, que pueden aparecer en circunstancias particulares. Adems, para cada tipo existe a su vez el mismo par reverso, es decir, el que se da si se gira la base pirimidnica 180 sobre su eje.

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Watson-Crick (pares de bases de la doble hlice): los grupos de la base prica que intervienen en el enlace de hidrgeno son los que corresponden a las posiciones 1 y 6 (N aceptor y -NH2 donador si la purina es una A) y los grupos de la base pirimidnica los que se encuentran en las posiciones 3 y 4 (-NH donador y C=O aceptor si la pirimidina es una T). En el par de bases Watson-Crick reverso participaran los grupos de las posiciones 2 y 3 de la base pirimidnica. Hoogsteen: en este caso cambian los grupos de la base prica, que ofrece una cara diferente (posiciones 6 y 7) y que forman enlaces con los grupos de las pirimidinas de las posiciones 3 y 4 (como en Watson-Crick). Tambin puede haber Hoogsteen reversos. Con este tipo de enlace pueden unirse A=U (Hoogsteen y Hoogsteen reverso) y A=C (Hoogsteen reverso). Wobble u oscilante: este tipo de enlace permite que se unan guanina y citosina con un doble enlace (G=T). La base prica (G) forma enlace con los grupos de las posiciones 1 y 6 (como en Watson-Crick) y la pirimidina (T) con los grupos de las posiciones 2 y 3. Este tipo de enlace no funcionara con A=C, ya que quedaran enfrentados los 2 aceptores y los 2 donadores, y slo se podra dar en el caso inverso. Encontramos pares de bases de tipo oscilante en el ARN, durante el apareamiento de codn y anticodn. Con este tipo de enlace pueden unirse G=U (oscilante y oscilante reverso) y A=C (oscilante reverso). En total, en su forma tautomrica mayoritaria, existen 28 posibles pares de bases nitrogenadas: 10 posibles pares de bases purina-pirimidina (2 pares Watson-Crick y 2 Watson Crick reverso, 1 par Hoogsteen y 2 pares Hoogsteen reverso, 1 par oscilante y 2 pares oscilante reverso), 7 pares homo purina-purina (A=A, G=G), 4 pares A=G y 7 pares pirimidina-pirimidina. Esto sin contar con los pares de bases que pueden formarse si tambin tenemos en cuenta las otras formas tautomricas minoritarias de las bases nitrogenadas; stos, adems, pueden ser responsables de mutaciones puntuales por sustitucin de tipo transicin.

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3.4.3 ESTRUCTURA
El ADN es una molcula bicatenaria, es decir, est formada por dos cadenas dispuestas de forma antiparalela y con las bases nitrogenadas enfrentadas. En su estructura tridimensional, se distinguen distintos niveles: Estructura primaria Secuencia de nucletidos encadenados. Es en estas cadenas donde se encuentra la informacin gentica, y dado que el esqueleto es el mismo para todos, la diferencia de la informacin radica en la distinta secuencia de bases nitrogenadas. Esta secuencia presenta un cdigo, que determina una informacin u otra, segn el orden de las bases. Estructura secundaria Es una estructura en doble hlice. Permite explicar el almacenamiento de la informacin gentica y el mecanismo de duplicacin del ADN. Fue postulada por Watson y Crick, basndose en la difraccin de rayos X que haban realizado Franklin y Wilkins, y en la equivalencia de bases de Chargaff, segn la cual, la suma de adeninas ms guaninas es igual a la suma de timinas ms citosinas. Es una cadena doble, dextrgira o levgira, segn el tipo de ADN. Ambas cadenas son complementarias, pues la adenina y la guanina de una cadena se unen, respectivamente, a la timina y la citosina de la otra. Ambas cadenas son antiparalelas, pues el extremo 3 de una se enfrenta al extremo 5 de la homloga. Existen tres modelos de ADN. El ADN de tipo B es el ms abundante y es el descubierto por Watson y Crick. Estructura terciaria Se refiere a cmo se almacena el ADN en un espacio reducido, para formar los cromosomas. Vara segn se trate de organismos procariotas o eucariotas: En procariotas el ADN se pliega como una sper-hlice, generalmente en forma circular y asociada a una pequea cantidad de protenas. Lo mismo ocurre en orgnulos celulares como las mitocondrias y en los cloroplastos. En eucariotas, dado que la cantidad de ADN de cada cromosoma es muy grande, el empaquetamiento ha de ser ms complejo y compacto; para ello se necesita la presencia de protenas, como las histonas y otras protenas de naturaleza no histnica (en los espermatozoides estas protenas son las protaminas).

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Estructuras en doble hlice

De izquierda a derecha, las estructuras de ADN A, B y Z. El ADN existe en muchas conformaciones. Sin embargo, en organismos vivos slo se han observado las conformaciones ADN-A, ADN-B y ADN-Z. La conformacin que adopta el ADN depende de su secuencia, la cantidad y direccin de superenrollamiento que presenta, la presencia de modificaciones qumicas en las bases y las condiciones de la solucin, tales como la concentracin de iones de metales y poliaminas. De las tres conformaciones, la forma "B" es la ms comn en las condiciones existentes en las clulas. Las dos dobles hlices alternativas del ADN difieren en su geometra y dimensiones. La forma "A" es una espiral que gira hacia la derecha, ms amplia que la "B", con una hendidura menor superficial y ms amplia, y una hendidura mayor ms estrecha y profunda. La forma "A" ocurre en condiciones no fisiolgicas en formas deshidratadas de ADN, mientras que en la clula puede producirse en apareamientos hbridos de hebras ADN-ARN, adems de en complejos enzimaADN. Los segmentos de ADN en los que las bases han sido modificadas por metilacin pueden sufrir cambios conformacionales mayores y adoptar la forma "Z". En este caso, las hebras giran alrededor del eje de la hlice en una espiral que gira a mano izquierda, lo opuesto a la forma "B" ms frecuente. Estas estructuras poco frecuentes pueden ser reconocidas por protenas especficas que se unen a ADNZ y posiblemente estn implicadas en la regulacin de la transcripcin.

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Estructuras en cudruplex

Estructura de un ADN en cudruplex formada por repeticiones en los telmeros. La conformacin de la estructura de soporte del ADN difiere significativamente de la tpica estructura en hlice. En los extremos de los cromosomas lineales existen regiones especializadas de ADN denominadas telmeros. La funcin principal de estas regiones es permitir a la clula replicar los extremos cromosmicos utilizando la enzima telomerasa, puesto que las enzimas que replican el resto del ADN no pueden copiar los extremos 3' de los cromosomas. Estas terminaciones cromosmicas especializadas tambin protegen los extremos del ADN, y previenen que los sistemas de reparacin del ADN en la clula los procesen como ADN daado que debe ser corregido. En las clulas humanas, los telmeros son largas zonas de ADN de hebra sencilla que contienen algunos miles de repeticiones de una nica secuencia TTAGGG. Estas secuencias ricas en guanina pueden estabilizar los extremos cromosmicos mediante la formacin de estructuras de juegos apilados de unidades de cuatro bases, en lugar de los pares de bases encontrados normalmente en otras estructuras de ADN. En este caso, cuatro bases guanina forman unidades con superficie plana que se apilan una sobre otra, para formar una estructura cudruplex-G estable. Estas estructuras se estabilizan formando puentes de hidrgeno entre los extremos de las bases y la quelatacin de un metal inico en el centro de cada unidad de cuatro bases. Tambin se pueden formar otras estructuras, con el juego central de cuatro bases procedente, o bien de una hebra

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sencilla plegada alrededor de las bases, o bien de varias hebras paralelas diferentes, de forma que cada una contribuye una base a la estructura central. Adems de estas estructuras apiladas, los telmeros tambin forman largas estructuras en lazo, denominadas lazos telomricos o lazos-T (T-loops en ingls). En este caso, las hebras simples de ADN se enroscan sobre s mismas en un amplio crculo estabilizado por protenas que se unen a telmeros. En el extremo del lazo-T, el ADN telomrico de hebra sencilla se sujeta a una regin de ADN de doble hebra porque la hebra de ADN telomrico altera la doble hlice y se aparea a una de las dos hebras. Esta estructura de triple hebra se denomina lazo de desplazamiento o lazo-D (D-loop).

3.4.4 HENDIDURAS MAYOR Y MENOR

Animacin de la estructura de una seccin de ADN. Las bases se encuentran horizontalmente entre las dos hebras en espiral.

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Doble hlice: a) Dextrgira, b) Levgira La doble hlice es una espiral dextrgira, esto es, cada una de las cadenas de nucletidos gira a derechas; esto puede verificarse si nos fijamos, yendo de abajo a arriba, en la direccin que siguen los segmentos de las hebras que quedan en primer plano. Si las dos hebras giran a derechas se dice que la doble hlice es dextrgira, y si giran a izquierdas, levgira (esta forma puede aparecer en hlices alternativas debido a cambios conformacionales en el ADN). Pero en la conformacin ms comn que adopta el ADN, la doble hlice es dextrgira, girando cada par de bases respecto al anterior unos 36.

Cuando las dos hebras de ADN se enrollan una sobre la otra (sea a derechas o a izquierdas), se forman huecos o hendiduras entre una hebra y la otra, dejando expuestos los laterales de las bases nitrogenadas del interior . En la conformacin ms comn que adopta el ADN aparecen, como consecuencia de los ngulos formados entre los azcares de ambas cadenas de cada par de bases nitrogenadas, dos tipos de hendiduras alrededor de la superfcie de la doble hlice: una de ellas, la hendidura o surco mayor, que mide 22 (2,2 nm) de ancho, y la otra, la hendidura o surco menor, que mide 12 (1,2 nm) de ancho. Cada vuelta de hlice, que es cuando sta ha realizado un giro de 360 o lo que es lo mismo, de principio de hendidura mayor a final de hendidura menor, medir por tanto 34 , y en cada una de esas vueltas hay unos 10,5 pb.

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Hendiduras mayor y menor de la doble hlice. La anchura de la hendidura mayor implica que los extremos de las bases son ms accesibles en sta, de forma que la cantidad de grupos qumicos expuestos tambin es mayor lo cual facilita la diferenciacin entre los pares de bases A-T, TA, C-G, G-C. Como consecuencia de ello, tambin se ver facilitado el reconocimiento de secuencias de ADN por parte de diferentes protenas sin la necesidad de abrir la doble hlice. As, protenas como los factores de transcripcin que pueden unirse a secuencias especficas, frecuentemente contactan con los laterales de las bases expuestos en la hendidura mayor. Por el contrario, los grupos qumicos que quedan expuestos en la hendidura menor son similares, de forma que el reconocimiento de los pares de bases es ms difcil; por ello se dice que la hendidura mayor contiene ms informacin que la hendidura menor.

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3.4.5 SENTIDO Y ANTISENTIDO

Una secuencia de ADN se denomina "sentido" (en ingls, sense) si su secuencia es la misma que la secuencia de un ARN mensajero que se traduce en una protena. La secuencia de la hebra de ADN complementaria se denomina "antisentido" (antisense). En ambas hebras de ADN de la doble hlice pueden existir tanto secuencias sentido, que codifican ARNm, como antisentido, que no lo codifican. Es decir, las secuencias que codifican ARNm no estn todas presentes en una sola de las hebras, sino repartidas entre las dos hebras. Tanto en procariotas como en eucariotas se producen ARNs con secuencias antisentido, pero la funcin de esos ARNs no est completamente clara. Se ha propuesto que los ARNs antisentido estn implicados en la regulacin de la expresin gnica mediante apareamiento ARN-ARN: los ARNs antisentido se aparearan con los ARNm complementarios, bloqueando de esta forma su traduccin. En unas pocas secuencias de ADN en procariotas y eucariotas (este hecho es ms frecuente en plsmidos y virus), la distincin entre hebras sentido y antisentido es ms difusa, debido a que presentan genes superpuestos. En estos casos, algunas secuencias de ADN tienen una funcin doble, codificando una protena cuando se lee a lo largo de una hebra, y una segunda protena cuando se lee en la direccin contraria a lo largo de la otra hebra. En bacterias, esta superposicin puede estar involucrada en la regulacin de la transcripcin del gen, mientras que en virus los genes superpuestos aumentan la cantidad de informacin que puede codificarse en sus diminutos genomas.

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3.4.6 SUPERENROLLAMIENTO

Estructura de molculas de ADN lineales con los extremos fijos y superenrolladas. Por claridad, se ha omitido la estructura en hlice del ADN. El ADN puede retorcerse como una cuerda en un proceso que se denomina superenrollamiento del ADN (supercoiling, en ingls). Cuando el ADN est en un estado "relajado", una hebra normalmente gira alrededor del eje de la doble hlice una vez cada 10,4 pares de bases, pero si el ADN est retorcido las hebras pueden estar unidas ms estrechamente o ms relajadamente. Si el ADN est retorcido en la direccin de la hlice, se dice que el superenrollamiento es positivo, y las bases se mantienen juntas de forma ms estrecha. Si el ADN se retuerce en la direccin opuesta, el superenrollamiento se llama negativo, y las bases se alejan. En la naturaleza, la mayor parte del ADN tiene un ligero superenrollamiento negativo que es producido por enzimas denominadas topoisomerasas. Estas enzimas tambin son necesarias para liberar las fuerzas de torsin introducidas en las hebras de ADN durante procesos como la transcripcin y la replicacin.

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3.5 MODIFICACIONES QUIMICAS

citosina

5-metil-citosina

timina

Estructura de la citosina con y sin el grupo metilo. Tras la desaminacin, la 5-metil-citosina tiene la misma estructura que la timina.

3.5.1 MODIFICACIONES DE BASES

La expresin de los genes est influenciada por la forma en la que el ADN est empaquetado en cromosomas, en una estructura denominada cromatina. Las modificaciones de bases pueden estar implicadas en el empaquetamiento del ADN: las regiones que presentan una expresin gnica baja o nula normalmente contienen niveles altos de metilacin de las bases citosina. Por ejemplo, la metilacin de citosina produce 5-metil-citosina, que es importante para la inactivacin del cromosoma X. El nivel medio de metilacin vara entre organismos: el gusano Caenorhabditis elegans carece de metilacin de citosina, mientras que los vertebrados presentan un nivel alto - hasta 1% de su ADN contiene 5-metil-citosina. A pesar de la importancia de la 5-metil-citosina, sta puede desaminarse para generar una base timina. Las citosinas metiladas son por tanto particularmente sensibles a mutaciones. Otras modificaciones de bases incluyen la metilacin de adenina en bacterias y la glicosilacin de uracilo para producir la "base-J" en kinetoplastos.

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3.5.2 DAO DEL ADN

Benzopireno, el mayor mutgeno del tabaco, unido al ADN. El ADN puede resultar daado por muchos tipos de mutgenos, que cambian la secuencia del ADN: agentes alquilantes, adems de radiacin electromagntica de alta energa, como luz ultravioleta y rayos X. El tipo de dao producido en el ADN depende del tipo de mutgeno. Por ejemplo, la luz UV puede daar al ADN produciendo dmeros de timina, que se forman por ligamiento cruzado entre bases pirimidnicas. Por otro lado, oxidantes tales como radicales libres o el perxido de hidrgeno produce mltiples daos, incluyendo modificaciones de bases, sobre todo guanina, y roturas de doble hebra (double-strand breaks). En una clula humana cualquiera, alrededor de 500 bases sufren dao oxidativo cada da. De estas lesiones oxidativas, las ms peligrosas son las roturas de doble hebra, ya que son difciles de reparar y pueden producir mutaciones puntuales, inserciones y deleciones de la secuencia de ADN, as como translocaciones cromosmicas. Muchos mutgenos se posicionan entre dos pares de bases adyacentes, por lo que se denominan agentes intercalantes. La mayora de los agentes intercalantes son molculas aromticas y planas, como el bromuro de etidio, la daunomicina, la doxorubicina y la talidomida. Para que un agente intercalante pueda integrarse entre dos pares de bases, stas deben separarse, distorsionando las hebras de ADN y abriendo la doble hlice. Esto inhibe la transcripcin y la replicacin del ADN, causando toxicidad y mutaciones. Por ello, los agentes intercalantes del ADN son a menudo carcingenos: el benzopireno, las acridinas, la aflatoxina y el bromuro de etidio son ejemplos bien conocidos.

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Sin embargo, debido a su capacidad para inhibir la replicacin y la transcripcin del ADN, estas toxinas tambin se utilizan en quimioterapia para inhibir el rpido crecimiento de las clulas cancerosas. El dao en el ADN inicia una respuesta que activa diferentes mecanismos de reparacin que reconocen lesiones especficas en el ADN, que son reparadas en el momento para recuperar la secuencia original del ADN. Asimismo, el dao en el ADN provoca una parada en el ciclo celular, que conlleva la alteracin de numerosos procesos fisiolgicos, que a su vez implica sntesis, transporte y degradacin de protenas (vase tambin Checkpoint de daos en el ADN). Alternativamente, si el dao genmico es demasiado grande para que pueda ser reparado, los mecanismos de control inducirn la activacin de una serie de rutas celulares que culminarn en la muerte celular.

3.6 FUNCONES BIOLOGICAS

Las funciones biolgicas del ADN incluyen el almacenamiento de informacin (genes y genoma), la codificacin de protenas (transcripcin y traduccin) y su autoduplicacin (replicacin del ADN) para asegurar la transmisin de la informacin a las clulas hijas durante la divisin celular.

3.6.1 GENES Y GENOMA El ADN se puede considerar como un almacn cuyo contenido es la informacin (mensaje) necesaria para construir y sostener el organismo en el que reside, la cual se transmite de generacin en generacin. El conjunto de informacin que cumple esta funcin en un organismo dado se denomina genoma, y el ADN que lo constituye, ADN genmico. El ADN genmico (que se organiza en molculas de cromatina que a su vez se ensamblan en cromosomas) se encuentra en el ncleo celular de los eucariotas, adems de pequeas cantidades en las mitocondrias y cloroplastos. En procariotas, el ADN se encuentra en un cuerpo de forma irregular denominado nucleoide.

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El ADN CODIFICANTE

ARN polimerasa T7 (azul) produciendo un ARNm (verde) a partir de un molde de ADN (naranja). La informacin gentica de un genoma est contenida en los genes, y al conjunto de toda la informacin que corresponde a un organismo se le denomina su genotipo. Un gen es una unidad de herencia y es una regin de ADN que influye en una caracterstica particular de un organismo (como el color de los ojos, por ejemplo). Los genes contienen un "marco de lectura abierto" (open reading frame) que puede transcribirse, adems de secuencias reguladoras, tales como promotores y enhancers, que controlan la transcripcin del marco de lectura abierto. Desde este punto de vista, las obreras de este mecanismo son las protenas. Estas pueden ser estructurales, como las protenas de los msculos, cartlagos, pelo, etc., o funcionales, como la hemoglobina o las innumerables enzimas del organismo. La funcin principal de la herencia es la especificacin de las protenas, siendo el ADN una especie de plano o receta para producirlas. La mayor parte de las veces la modificacin del ADN provocar una disfuncin proteica que dar lugar a la aparicin de alguna enfermedad. Pero en determinadas ocasiones, las modificaciones podrn provocar cambios beneficiosos que darn lugar a individuos mejor adaptados a su entorno. Las aproximadamente treinta mil protenas diferentes en el cuerpo humano estn constituidas por veinte aminocidos diferentes, y una molcula de ADN debe especificar la secuencia en que se unen dichos aminocidos. En el proceso de elaborar una protena, el ADN de un gen se lee y se transcribe a ARN. Este ARN sirve como mensajero entre el ADN y la maquinaria que elaborar las protenas y por eso recibe el nombre de ARN mensajero o ARNm. El ARN

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mensajero sirve de molde a la maquinaria que elabora las protenas, para que ensamble los aminocidos en el orden preciso para armar la protena. El dogma central de la biologa molecular estableca que el flujo de actividad y de informacin era: ADN ARN protena. No obstante, en la actualidad ha quedado demostrado que este "dogma" debe ser ampliado, pues se han encontrado otros flujos de informacin: en algunos organismos (virus de ARN) la informacin fluye de ARN a ADN; este proceso se conoce como "transcripcin inversa o reversa", tambin llamada "retrotranscripcin". Adems, se sabe que existen secuencias de ADN que se transcriben a ARN y son funcionales como tales, sin llegar a traducirse nunca a protena: son los ARN no codificantes, como es el caso de los ARN interferentes. El ADN NO CODIFICANTE ("ADN BASURA") El ADN del genoma de un organismo puede dividirse conceptualmente en dos: el que codifica las protenas (los genes) y el que no codifica. En muchas especies, slo una pequea fraccin del genoma codifica protenas. Por ejemplo, slo alrededor del 1,5% del genoma humano consiste en exones que codifican protenas (20.000 a 25.000 genes), mientras que ms del 90% consiste en ADN no codificante. El ADN no codificante (tambin denominado ADN basura o junk DNA) corresponde a secuencias del genoma que no generan una protena (procedentes de transposiciones, duplicaciones, translocaciones y recombinaciones de virus, etc.), incluyendo los intrones. Hasta hace poco tiempo se pensaba que el ADN no codificante no tena utilidad alguna, pero estudios recientes indican que eso es inexacto. Entre otras funciones, se postula que el llamado "ADN basura" regula la expresin diferencial de los genes. Por ejemplo, algunas secuencias tienen afinidad hacia protenas especiales que tienen la capacidad de unirse al ADN (como los homeodominios, los complejos receptores de hormonas esteroides, etc.), con un papel importante en el control de los mecanismos de trascripcin y replicacin. Estas secuencias se llaman frecuentemente "secuencias reguladoras", y los investigadores suponen que slo se ha identificado una pequea fraccin de las que realmente existen. La presencia de tanto ADN no codificante en genomas eucariticos y las diferencias en tamao del genoma entre especies representan un misterio que es conocido como el "enigma del valor de C".Recientemente, un grupo de investigadores de la Universidad de Yale ha descubierto una secuencia de ADN no codificante que sera la responsable de que los seres humanos hayan desarrollado la capacidad de agarrar y/o manipular objetos o herramientas.

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Por otro lado, algunas secuencias de ADN desempean un papel estructural en los cromosomas: los telmeros y centrmeros contienen pocos o ningn gen codificante de protenas, pero son importantes para estabilizar la estructura de los cromosomas. Algunos genes no codifican protenas, pero s se transcriben en ARN: ARN ribosmico, ARN de transferencia y ARN de interferencia (ARNi, que son ARN que bloquean la expresin de genes especficos). La estructura de intrones y exones de algunos genes (como los de inmunoglobulinas y protocadherinas) son importantes por permitir los cortes y empalmes alternativos del pre-ARN mensajero que hacen posible la sntesis de diferentes protenas a partir de un mismo gen (sin esta capacidad no existira el sistema inmune, por ejemplo). Algunas secuencias de ADN no codificante representan pseudogenes que tienen valor evolutivo, ya que permiten la creacin de nuevos genes con nuevas funciones. Otros ADN no codificantes proceden de la duplicacin de pequeas regiones del ADN; esto tiene mucha utilidad, ya que el rastreo de estas secuencias repetitivas permite estudios de filogenia.

3.6.2 TRANSCRIPCION Y TRADUCCION En un gen, la secuencia de nucletidos a lo largo de una hebra de ADN se transcribe a un ARN mensajero (ARNm) y esta secuencia a su vez se traduce a una protena que un organismo es capaz de sintetizar o "expresar" en uno o varios momentos de su vida, usando la informacin de dicha secuencia. La relacin entre la secuencia de nucletidos y la secuencia de aminocidos de la protena viene determinada por el cdigo gentico, que se utiliza durante el proceso de traduccin o sntesis de protenas. La unidad codificadora del cdigo gentico es un grupo de tres nucletidos (triplete), representado por las tres letras iniciales de las bases nitrogenadas (por ej., ACT, CAG, TTT). Los tripletes del ADN se transcriben en sus bases complementarias en el ARN mensajero, y en este caso los tripletes se denominan codones (para el ejemplo anterior, UGA, GUC, AAA). En el ribosoma cada codn del ARN mensajero interacciona con una molcula de ARN de transferencia (ARNt o tRNA) que contenga el triplete complementario, denominado anticodn. Cada ARNt porta el aminocido correspondiente al codn de acuerdo con el cdigo gentico, de modo que el ribosoma va uniendo los aminocidos para formar una nueva protena de acuerdo con las "instrucciones" de la secuencia del ARNm.

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Existen 64 codones posibles, por lo cual corresponde ms de uno para cada aminocido (por esta duplicidad de codones se dice que el cdigo gentico es un cdigo degenerado: no es unvoco); algunos codones indican la terminacin de la sntesis, el fin de la secuencia codificante; estos codones de terminacin o codones de parada son UAA, UGA y UAG (en ingls, nonsense codons o stop codons). 3.6.3 REPLICACION DEL ADN

Esquema representativo de la replicacin del ADN. La replicacin del ADN es el proceso por el cual se obtienen copias o rplicas idnticas de una molcula de ADN. La replicacin es fundamental para la transferencia de la informacin gentica de una generacin a la siguiente y, por ende, es la base de la herencia. El mecanismo consiste esencialmente en la separacin de las dos hebras de la doble hlice, las cuales sirven de molde para la posterior sntesis de cadenas complementarias a cada una de ellas. El resultado final son dos molculas idnticas a la original. Este tipo de replicacin se denomina semiconservativa debido a que cada una de las dos molculas resultantes de la duplicacin presenta una cadena procedente de la molcula madre y otra recin sintetizada.

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3.7 INTERACCIONES ADN-PROTEINA

Todas las funciones del ADN dependen de sus interacciones con protenas. Estas interacciones pueden ser inespecficas, o bien la protena puede unirse de forma especfica a una nica secuencia de ADN. Tambin pueden unirse enzimas, entre las cuales son particularmente importantes las polimerasas, que copian las secuencias de bases del ADN durante la transcripcin y la replicacin.

3.7.1 PROTEINAS QUE UNEN ADN

Interacciones inespecficas

Interaccin de ADN con histonas (en blanco, arriba). Los aminocidos bsicos de estas protenas (abajo a la izquierda, en azul) se unen a los grupos cidos de los fosfatos del ADN (abajo a la derecha, en rojo). Las protenas estructurales que se unen al ADN son ejemplos bien conocidos de interacciones inespecficas ADN-protenas. En los cromosomas, el ADN se encuentra formando complejos con protenas estructurales. Estas protenas organizan el ADN en una estructura compacta denominada cromatina. En eucariotas esta estructura implica la unin del ADN a un complejo formado por pequeas protenas bsicas denominadas histonas, mientras que en procariotas estn involucradas una gran variedad de protenas. Las histonas forman un

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complejo de forma cilndrica denominado nucleosoma, en torno al cual se enrollan casi dos vueltas de ADN de doble hlice. Estas interacciones inespecficas quedan determinadas por la existencia de residuos bsicos en las histonas, que forman enlaces inicos con el esqueleto de azcar-fosfato del ADN y, por tanto, son en gran parte independientes de la secuencia de bases. Estos aminocidos bsicos experimentan modificaciones qumicas de metilacin, fosforilacin y acetilacin, que alteran la fuerza de la interaccin entre el ADN y las histonas, haciendo al ADN ms o menos accesible a los factores de transcripcin y por tanto modificando la tasa de transcripcin. Otras protenas que se unen a ADN de manera inespecfica en la cromatina incluyen las protenas del grupo de alta movilidad (HMG, High Mobility Group) que se unen a ADN plegado o distorsionado. Estas protenas son importantes durante el plegamiento de los nucleosomas, organizndolos en estructuras ms complejas para constituir los cromosomas durante el proceso de condensacin cromosmica. Se ha propuesto que en este proceso tambin intervendran otras protenas, formando una especie de "andamio" sobre el cual se organiza la cromatina; los principales componentes de esta estructura seran la enzima topoisomerasa II (topoIIalpha) y la condensina 13S. Sin embargo, el papel estructural de la topoIIalpha en la organizacin de los cromosomas an es discutido, ya que otros grupos argumentan que esta enzima se intercambia rpidamente tanto en los brazos cromosmicos como en los cinetocoros durante la mitosis. Interacciones especficas Un grupo bien definido de protenas que unen ADN es el conformado por las protenas que se unen especficamente a ADN monocatenario o ADN de hebra sencilla (ssDNA). En humanos, la protena A de replicacin es la mejor conocida de su familia y acta en procesos en los que la doble hlice se separa, como la replicacin del ADN, la recombinacin o la reparacin del ADN. Estas protenas parecen estabilizar el ADN monocatenario, protegindolo para evitar que forme estructuras de tallo-lazo (stem-loop) o que sea degradado por nucleasas. El factor de transcripcin represor del fago lambda unido a su ADN diana mediante un motivo hlice-giro-hlice (helix-turn-helix).

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Sin embargo, otras protenas han evolucionado para unirse especficamente a secuencias particulares de ADN. La especificidad de la interaccin de las protenas con el ADN procede de los mltiples contactos con las bases de ADN, lo que les permite "leer" la secuencia del ADN. La mayora de esas interacciones con las bases ocurre en la hendidura mayor, donde las bases son ms accesibles. Las protenas especficas estudiadas con mayor detalle son las encargadas de regular la transcripcin, denominadas por ello factores de transcripcin. Cada factor de transcripcin se une a una secuencia concreta de ADN y activa o inhibe la transcripcin de los genes que presentan estas secuencias prximas a sus promotores. Los factores de transcripcin pueden efectuar esto de dos formas: En primer lugar, pueden unirse a la polimerasa de ARN responsable de la transcripcin, bien directamente o a travs de otras protenas mediadoras. De esta forma. Se estabiliza la unin entre la ARN polimerasa y el promotor, lo que permite el inicio de la transcripcin. En segundo lugar, los factores de transcripcin pueden unirse a enzimas que modifican las histonas del promotor, lo que altera la accesibilidad del molde de ADN a la ARN polimerasa. Como los ADN diana pueden encontrarse por todo el genoma del organismo, los cambios en la actividad de un tipo de factor de transcripcin pueden afectar a miles de genes. En consecuencia, estas protenas son frecuentemente las dianas de los procesos de transduccin de seales que controlan las respuestas a cambios ambientales o diferenciacin y desarrollo celular.

La enzima de restriccin EcoRV (verde) formando un complejo con su ADN diana.

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3.7.2 ENZIMAS QUE MODIFICAN EL ADN

Nucleasas y ligasas Las nucleasas son enzimas que cortan las hebras de ADN mediante la catlisis de la hidrlisis de los enlaces fosfodister. Las nucleasas que hidrolizan nucletidos a partir de los extremos de las hebras de ADN se denominan exonucleasas, mientras que las endonucleasas cortan en el interior de las hebras. Las nucleasas que se utilizan con mayor frecuencia en biologa molecular son las enzimas de restriccin, endonucleasas que cortan el ADN por determinadas secuencias especficas. Por ejemplo, la enzima EcoRV, que se muestra a la izquierda, reconoce la secuencia de 6 bases 5-GAT|ATC-3, y hace un corte en ambas hebras en la lnea vertical indicada, generando dos molculas de ADN con los extremos romos. Otras enzimas de restriccin generan sin embargo extremos cohesivos, ya que cortan de forma diferente las dos hebras de ADN. En la naturaleza, estas enzimas protegen a las bacterias contra las infecciones de fagos, al digerir el ADN de dicho fago cuando entra a travs de la pared bacteriana, actuando como un mecanismo de defensa. En biotecnologa, estas nucleasas especficas de la secuencias de ADN se utilizan en ingeniera gentica para clonar fragmentos de ADN y en la tcnica de huella gentica. Las enzimas denominadas ADN ligasas pueden reunir hebras de ADN cortadas o rotas. Las ligasas son particularmente importantes en la replicacin de la hebra que sufre replicacin discontinua en el ADN, ya que unen los fragmentos cortos de ADN generados en la horquilla de replicacin para formar una copia completa del molde de ADN. Tambin se utilizan en la reparacin del ADN y en procesos de recombinacin gentica. Topoisomerasas y helicasas Las topoisomerasas son enzimas que poseen a la vez actividad nucleasa y ligasa. Estas protenas varan la cantidad de ADN superenrollado. Algunas de estas enzimas funcionan cortando la hlice de ADN y permitiendo que una seccin rote, de manera que reducen el grado de superenrollamiento. Una vez hecho esto, la enzima vuelve a unir los fragmentos de ADN. Otros tipos de enzimas son capaces de cortar una hlice de ADN y luego pasar la segunda hebra de ADN a travs de la rotura, antes de reunir las hlices. Las topoisomerasas son necesarias para muchos procesos en los que interviene el ADN, como la replicacin del ADN y la transcripcin.

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Las helicasas son unas protenas que pertenecen al grupo de los motores moleculares. Utilizan energa qumica almacenada en los nuclesidos trifosfatos, fundamentalmente ATP, para romper puentes de hidrgeno entre bases y separar la doble hlice de ADN en hebras simples. Estas enzimas son esenciales para la mayora de los procesos en los que las enzimas necesitan acceder a las bases del ADN. Polimerasas Las polimerasas son enzimas que sintetizan cadenas de nucletidos a partir de nuclesidos trifosfatos. La secuencia de sus productos son copias de cadenas de polinucletidos existentes, que se denominan moldes. Estas enzimas funcionan aadiendo nucletidos al grupo hidroxilo en 3' del nucletido previo en una hebra de ADN. En consecuencia, todas las polimerasas funcionan en direccin 5 --> 3.[101] En los sitios activos de estas enzimas, el nuclesido trifosfato que se incorpora aparea su base con la correspondiente en el molde: esto permite que la polimerasa sintentice de forma precisa la hebra complementaria al molde. Las polimerasas se clasifican de acuerdo al tipo de molde que utilizan: En la replicacin del ADN, una ADN polimerasa dependiente de ADN realiza una copia de ADN a partir de una secuencia de ADN. La precisin es vital en este proceso, por lo que muchas de estas polimerasas tienen una actividad de verificacin de la lectura (proofreading). Mediante esta actividad, la polimerasa reconoce errores ocasionales en la reaccin de sntesis, debido a la falta de apareamiento entre el nucletido errneo y el molde, lo que genera un desacoplamiento (mismatch). Si se detecta un desacoplamiento, se activa una actividad exonucleasa en direccin 3 --> 5 y la base incorrecta se elimina. En la mayora de los organismos las ADN polimerasas funcionan en un gran complejo denominado replisoma, que contiene mltiples unidades accesorias, como helicasas. Las ADN polimerasas dependientes de ARN son una clase especializada de polimerasas que copian la secuencia de una hebra de ARN en ADN. Incluyen la transcriptasa inversa, que es una enzima viral implicada en la infeccin de clulas por retrovirus, y la telomerasa, que es necesaria para la replicacin de los telmeros. La telomerasa es una polimerasa inusual, porque contiene su propio molde de ARN como parte de su estructura. La transcripcin se lleva a cabo por una ARN polimerasa dependiente de ADN que copia la secuencia de una de las hebras de ADN en ARN. Para empezar a transcribir un gen, la ARN polimerasa se une a una secuencia del ADN denominada promotor, y separa las hebras del ADN. Entonces copia la secuencia del gen en un trnscrito de ARN mensajero hasta que alcanza una regin de ADN

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denomimada terminador, donde se detiene y se separa del ADN. Como ocurre con las ADN polimerasas dependientes de ADN en humanos, la ARN polimerasa II (la enzima que transcribe la mayora de los genes del genoma humano) funciona como un gran complejo multiproteico que contiene mltiples subunidades reguladoras y accesorias.

3.8 RECOMBIANCION GENETICA

Estructura de un intermedio en unin de Holliday en la recombinacin gentica. Las cuatro hebras de ADN separadas estn coloreadas en rojo, azul, verde y amarillo.

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La recombinacin implica la rotura y reunin de dos cromosomas homlogos (M y F) para producir dos cromosomas nuevos reorganizados (C1 y C2). Una hlice de ADN normalmente no interacciona con otros segmentos de ADN, y en las clulas humanas los diferentes cromosomas incluso ocupan reas separadas en el ncleo celular denominadas territorios cromosmicos. La separacin fsica de los diferentes cromosomas es importante para que el ADN mantenga su capacidad de funcionar como un almacn estable de informacin. Uno de los pocos momentos en los que los cromosomas interaccionan es durante el sobrecruzamiento cromosmico (chromosomal crossover), durante el cual se recombinan. El sobrecruzamiento cromosmico ocurre cuando dos hlices de ADN se rompen, se intercambian y se unen de nuevo. La recombinacin permite a los cromosomas intercambiar informacin gentica y produce nuevas combinaciones de genes, lo que aumenta la eficiencia de la seleccin natural y puede ser importante en la evolucin rpida de nuevas protenas. Durante la profase I de la meiosis, una vez que los cromosomas homlogos estn perfectamente apareados formando estructuras llamadas bivalentes, se produce el fenmeno de sobrecruzamiento o entrecruzamiento (crossing-over), en el cual las cromtidas homlogas no hermanas (procedentes del padre y de la madre) intercambian material gentico. La recombinacin gentica resultante hace aumentar en gran medida la variacin gentica entre la descendencia de progenitores que se reproducen por va sexual. La recombinacin gentica tambin puede estar implicada en la reparacin del ADN, en particular en la respuesta celular a las roturas de doble hebra (double-strand breaks). La forma ms frecuente de sobrecruzamiento cromosmico es la recombinacin homloga, en la que los dos cromosomas implicados comparten secuencias muy similares. La recombinacin no-homloga puede ser daina para las clulas, ya que puede producir translocaciones cromosmicas y anomalas genticas. La reaccin de recombinacin est catalizada por enzimas conocidas como recombinasas, tales como RAD51. El primer paso en el proceso de recombinacin es una rotura de doble hebra, causada bien por una endonucleasa o por dao en

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el ADN. Posteriormente, una serie de pasos catalizados en parte por la recombinasa, conducen a la unin de las dos hlices formando al menos una unin de Holliday, en la que un segmento de una hebra simple es anillado con la hebra complementaria en la otra hlice. La unin de Holliday es una estructura de unin tetrahdrica que puede moverse a lo largo del par de cromosomas, intercambiando una hebra por otra. La reaccin de recombinacin se detiene por el corte de la unin y la reunin de los segmentos de ADN liberados.

3.9 EVOLUCION DEL METABOLISMO DE ADN

El ADN contiene la informacin gentica que permite a la mayora de los organismos vivientes funcionar, crecer y reproducirse. Sin embargo, no est claro durante cunto tiempo ha ejercido esta funcin en los ~3000 millones de aos de la historia de la vida, ya que se ha propuesto que las formas de vida ms tempranas podran haber utilizado ARN como material gentico. El ARN podra haber funcionado como la parte central de un metabolismo primigenio, ya que puede transmitir informacin gentica y simultneamente actuar como catalizador formando parte de las ribozimas. Este antiguo Mundo de ARN donde los cidos nucleicos funcionaran como catalizadores y como almacenes de informacin gentica podra haber influido en la evolucin del cdigo gentico actual, basado en cuatro nucletidos. Esto se debera a que el nmero de bases nicas en un organismo es un compromiso entre un nmero pequeo de bases (lo que aumentara la precisin de la replicacin) y un nmero grande de bases (que a su vez aumentara la eficiencia cataltica de las ribozimas). Desgraciadamente, no disponemos de evidencia directa de los sistemas genticos ancestrales porque la recuperacin del ADN a partir de la mayor parte de los fsiles es imposible. Esto se debe a que el ADN es capaz de sobrevivir en el medio ambiente durante menos de un milln de aos, y luego empieza a degradarse lentamente en fragmentos de menor tamao en solucin. Algunas investigaciones pretenden que se ha obtenido ADN ms antiguo, por ejemplo un informe sobre el aislamiento de una bacteria viable a partir de un cristal salino de 250 millones de aos de antigedad, pero estos datos son controvertidos. Sin embargo, pueden utilizarse herramientas de evolucin molecular para inferir los genomas de organismos ancestrales a partir de organismos contemporneos. En muchos casos, estas inferencias son suficientemente fiables, de manera que una biomolcula codificada en un genoma ancestral puede resucitarse en el laboratorio para ser estudiada hoy. Una vez que la biomolcula ancestral se ha resucitado, sus propiedades pueden ofrecer inferencias sobre ambientes y estilos

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de vida primigenios. Este proceso se relaciona con el campo emergente de la paleogentica experimental. A pesar de todo, el proceso de trabajo hacia atrs desde el presente tiene limitaciones inherentes, razn por la cual otros investigadores tratan de elucidar el mecanismo evolutivo trabajando desde el origen de la Tierra en adelante. Dada suficiente informacin sobre la qumica en el cosmos, la manera en la que las sustancias csmicas podran haberse depositado en la Tierra, y las transformaciones que podran haber tenido lugar en la superficie terrestre primigenia, tal vez podramos ser capaces de aprender sobre los orgenes para desarrollar modelos de evolucin ulterior de la informacin gentica (vase tambin el artculo sobre el origen de la vida).

3.10 TECNICAS COMUNES

El conocimiento de la estructura del ADN ha permitido el desarrollo de multitud de herramientas tecnolgicas que explotan sus propiedades fisicoqumicas para analizar su implicacin en problemas concretos: por ejemplo, desde anlisis filogeeticos para detectar similitudes entre diferentes taxones, a la caracterizacin de la variabilidad individual de un paciente en su respuesta a un determinado frmaco, pasando por un enfoque global, a nivel genmico, de cualquier caracterstica especfica en un grupo de individuos de inters. [127] Podemos clasificar las metodologas de anlisis del ADN en aquellas que buscan su multiplicacin, ya in vivo, como la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), ya in vitro, como la clonacin, y aquellas que explotan las propiedades especficas de elementos concretos, o de genomas adecuadamente clonados. Es el caso de la secuenciacin de ADN y de la hibridacin con sondas especficas ("southern blot" y chips de ADN). Tecnologa del ADN recombinante La tecnologa del ADN recombinante, piedra angular de la ingeniera gentica, permite propagar grandes cantidades de un fragmento de ADN de inters, el cual se dice que ha sido clonado. Para ello, debe introducirse dicho fragmento en otro elemento de ADN, generalmente un plsmido, que posee en su secuencia los elementos necesarios para que la maquinaria celular de un hospedador, normalmente Escherichia coli, lo replique. De este modo, una vez transformada la cepa bacteriana, el fragmento de ADN clonado se reproduce cada vez que aquella se divide.

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Para clonar la secuencia de ADN de inters, se emplean enzimas como herramientas de corte y empalme del fragmento y del vector (el plsmido). Dichas enzimas corresponden a dos grupos: en primer lugar, las enzimas de restriccin, que poseen la capacidad de reconocer y cortar secuencias especficas; en segundo lugar, la ADN ligasa, que establece un enlace covalente entre extremos de ADN compatibles. Secuenciacin La secuenciacin del ADN consiste en dilucidar el orden de los nucletidos de un polmero de ADN de cualquier longitud, si bien suele dirigirse hacia la determinacin de genomas completos, debido a que las tcnicas actuales permiten realizar esta secuenciacin a gran velocidad, lo cual ha sido de gran importancia para proyectos de secuenciacin a gran escala como el Proyecto Genoma Humano. Otros proyectos relacionados, en ocasiones fruto de la colaboracin de cientficos a escala mundial, han establecido la secuencia completa del ADN de muchos genomas de animales, plantas y microorganismos. El mtodo de secuenciacin de Sanger ha sido el ms empleado durante el siglo XX. Se basa en la sntesis de ADN en presencia de didesoxinuclesidos, compuestos que, a diferencia de los desoxinuclesidos normales (dNTPs), carecen de un grupo hidroxilo en su extremo 3'. Aunque los didesoxinucletidos trifosfatados (ddNTPs) pueden incorporarse a la cadena en sntesis, la carencia de un extremo 3'-OH imposibilita la generacin de un nuevo enlace fosfodister con el nuclesido siguiente; por tanto, provocan la terminacin de la sntesis. Por esta razn, el mtodo de secuenciacin tambin se denomina de terminacin de cadena. La reaccin se realiza usualmente preparando un tubo con el ADN molde, la polimerasa, un cebador, dNTPs convencionales y una pequea cantidad de ddNTPs marcados fluorescentemente en su base nitrogenada. De este modo, el ddTTP puede ir marcado en azul, el ddATP en rojo, etc. Durante la polimerizacin, se van truncando las cadenas crecientes, al azar, en distintas posiciones. Por tanto, se produce una serie de productos de distinto tamao, coincidiendo la posicin de la terminacin debido a la incorporacin del ddNTP correspondiente. Una vez terminada la reaccin, es posible correr la mezcla en una electroforesis capilar (que resuelve todos los fragmentos segn su longitud) en la cual se lee la fluorescencia para cada posicin del polmero. En nuestro ejemplo, la lectura azul-rojo-azul-azul se traducira como TATT.

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Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) La reaccin en cadena de la polimerasa, habitualmente conocida como PCR por sus siglas en ingls, es una tcnica de biologa molecular descrita en 1986 por Kary Mullis, cuyo objetivo es obtener un gran nmero de copias de un fragmento de ADN dado, partiendo de una escasa cantidad de aqul. Para ello, se emplea una ADN polimerasa termoestable que, en presencia de una mezcla de los cuatro desoxinucletidos, un tampn de la fuerza inica adecuada y los cationes precisos para la actividad de la enzima, dos oligonucletidos (denominados cebadores) complementarios a parte de la secuencia (situados a distancia suficiente y en sentido antiparalelo) y bajo unas condiciones de temperatura adecuadas, moduladas por un aparato denominado termociclador, genera exponencialmente nuevos fragmentos de ADN semejantes al original y acotados por los dos cebadores. La PCR puede efectuarse como una tcnica de punto final, esto es, como una herramienta de generacin del ADN deseado, o como un mtodo continuo, en el que se evale dicha polimerizacin a tiempo real. Esta ltima variante es comn en la PCR cuantitativa. Southern blot El mtodo de hibridacin Southern o Southern blot (el nombre original en el idioma ingls) permite la deteccin de una secuencia de ADN en una muestra compleja o no del cido nucleico. Para ello, combina una separacin mediante masa y carga (efectuada mediante una electroforesis en gel) con una hibridacin con una sonda de cido nucleico marcada de algn modo (ya sea con radiactividad o con un compuesto qumico) que, tras varias reacciones, d lugar a la aparicin de una seal de color o fluorescencia. Dicha hibridacin se realiza tras la transferencia del ADN separado mediante la electroforesis a una membrana de filtro. Una tcnica semejante, pero en la cual no se produce la mencionada separacin electrofortica se denomina dot blot. El mtodo recibe su nombre en honor a su inventor, el bilogo ingls Edwin Southern. Por analoga al mtodo Southern, se han desarrollado tcnicas semejantes que permiten la deteccin de secuencias dadas de ARN (mtodo Northern, que emplea sondas de ARN o ADN marcadas) o de protenas especficas (tcnica Western, basada en el uso de anticuerpos).

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Chips de ADN Microarray con 37.500 oligonucletidos especficos. Arriba a la izquierda se puede apreciar una regin ampliada del chip. Los chips de ADN son colecciones de oligonucletidos de ADN complementario dispuestos en hileras fijadas sobre un soporte, frecuentemente de cristal. Se utilizan para el estudio de mutaciones de genes conocidos o para monitorizar la expresin gnica de una preparacin de ARN

3.11 APLICACIONES
Ingeniera gentica La investigacin sobre el ADN tiene un impacto significativo, especialmente en el mbito de la medicina, pero tambin en agricultura y ganadera (donde los objetivos son los mismos que con las tcnicas tradicionales que el hombre lleva utilizando desde hace milenios - la domesticacin, la seleccin y los cruces dirigidos - para obtener variedades de animales y plantas ms productivos). La moderna biologa y bioqumica hacen uso intensivo de la tecnologa del ADN recombinante, introduciendo genes de inters en organismos, con el objetivo de expresar una protena recombinante concreta, que puede ser: Aislada para su uso posterior: por ejemplo, se pueden transformar microorganismos para convertirlos en autnticas fbricas que producen grandes cantidades de sustancias tiles, como insulina o vacunas, que posteriormente se aslan y se utilizan teraputicamente. Necesaria para reemplazar la expresin de un gen endgeno daado que ha dado lugar a una patologa, lo que permitira el restablecimiento de la actividad de la protena perdida y eventualmente la recuperacin del estado fisiolgico normal, no patolgico. Este es el objetivo de la terapia gnica, uno de los campos en los que se est trabajando activamente en medicina, analizando ventajas e inconvenientes de diferentes sistemas de administracin del gen (virales y no virales) y los mecanismos de seleccin del punto de integracin de los elementos genticos (distintos para los virus y los transposones) en el genoma diana. En este caso, antes de plantearse la posibilidad de realizar una terapia gnica en una determinada patologa, es fundamental comprender el impacto del gen de inters en el desarrollo de dicha patologa, para lo cual es necesario el desarrollo

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de un modelo animal, eliminando o modificando dicho gen en un animal de laboratorio, mediante la tcnica knockout. Slo en el caso de que los resultados en el modelo animal sean satisfactorios se procedera a analizar la posibilidad de restablecer el gen daado mediante terapia gnica. utilizada para enriquecer un alimento: por ejemplo, la composicin de la leche (una importante fuente de protenas para el consumo humano y animal) puede modificarse mediante transgnesis, aadiendo genes exgenos y desactivando genes endgenos para mejorar su valor nutricional, reducir infecciones en las glndulas mamarias, proporcionar a los consumidores protenas antipatgenas y preparar protenas recombinantes para su uso farmacutico. til para mejorar la resistencia del organismo transformado: por ejemplo en plantas se pueden introducir genes que confieren resistencia a patgenos (virus, insectos, hongos), as como a agentes estresantes abiticos (salinidad, sequedad, metales pesados). Medicina forense Los mdicos forenses pueden utilizar el ADN presente en la sangre, el semen, la piel, la saliva o el pelo en la escena de un crimen para identificar al responsable. Esta tcnica se denomina huella gentica, o tambin "perfil de ADN". Al realizar la huella gentica, se compara la longitud de secciones altamente variables de ADN repetitivo, como los microsatlites, entre personas diferentes. Este mtodo es frecuentemente muy fiable para identificar a un criminal. Sin embargo, la identificacin puede complicarse si la escena est contaminada con ADN de personas diferentesLa tcnica de la huella gentica fue desarrollada en 1984 por el genetista britnico Sir Alec Jeffreys, y fue utilizada por primera vez en medicina forense para condenar a Colin Pitchfork en los asesinatos de Narborough (UK) en 1983 y 1986. Se puede requerir a las personas acusadas de ciertos tipos de crmenes que proporcionen una muestra de ADN para introducirlos en una base de datos. Esto ha facilitado la labor de los investigadores en la resolucin de casos antiguos, donde slo se obtuvo una muestra de ADN de la escena del crimen, en algunos casos permitiendo exonerar a un convicto. La huella gentica tambin puede utilizarse para identificar vctimas de accidentes en masa, o para realizar pruebas de consanguinidad.

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Bioinformtica La bioinformtica implica la manipulacin, bsqueda y extraccin de informacin de los datos de la secuencia del ADN. El desarrollo de las tcnicas para almacenar y buscar secuencias de ADN ha generado avances en el desarrollo de software de los ordenadores, para muchas aplicaciones, especialmente algoritmos de bsqueda de frases, aprendizaje automtico y teoras de bases de datos.[151] La bsqueda de frases o algoritmos de coincidencias, que buscan la ocurrencia de una secuencia de letras dentro de una secuencia de letras mayor, se desarroll para buscar secuencias especficas de nucletidos.En otras aplicaciones como editores de textos, incluso algoritmos simples pueden funcionar, pero las secuencias de ADN pueden generar que estos algoritmos presenten un comportamiento de casi-el-peor-caso, debido al bajo nmero de caracteres. El problema relacionado del alineamiento de secuencias persigue identificar secuencias homlogas y localizar mutaciones especficas que las diferencian. Estas tcnicas, fundamentalmente el alineamiento mltiple de secuencias, se utilizan al estudiar las relaciones filogenticas y la funcin de las protenas. Las colecciones de datos que representan secuencias de ADN del tamao de un genoma, tales como las producidas por el Proyecto Genoma Humano, son difciles de usar sin anotaciones, que marcan la localizacin de los genes y los elementos reguladores en cada cromosoma. Las regiones de ADN que tienen patrones asociados con genes que codifican protenas o ARN pueden identificarse por algoritmos de localizacin de genes, lo que permite a los investigadores predecir la presencia de productos gnicos especficos en un organismo incluso antes de que haya sido aislado experimentalmente.

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Nanotecnologa de ADN La estructura de ADN de la izquierda (mostrada de forma esquemtica) se auto-ensambla en la estructura visualizada por microscopa de fuerza atmica a la derecha. La nanotecnologa de ADN es el campo que busca disear estructuras a nanoescala utilizando las propiedades de reconocimiento molecular de las molculas de ADN. Imagen de Strong, 2004. Plantilla:Doi-inline La nanotecnologa de ADN utiliza las propiedades nicas de reconocimiento molecular del ADN y otros cidos nucleicos para crear complejos ramificados autoensamblados con propiedades tiles. En este caso, el ADN se utiliza como un material estructural, ms que como un portador de informacin biolgica. Esto ha conducido a la creacin de lminas peridicas de dos dimensiones (ambas basadas en azulejos, as como usando el mtodo de ADN origami), adems de estructuras en tres dimensiones con forma de poliedros.

Historia y antropologa A lo largo del tiempo, el ADN almacena mutaciones que se heredan y, por tanto, contiene informacin histrica, de manera que comparando secuencias de ADN, los genetistas pueden inferir la historia evolutiva de los organismos, su filogenia. La investigacin filogentica es una herramienta fundamental en biologa evolutiva. Si se comparan las secuencias de ADN dentro de una especie, los genetistas de poblaciones pueden conocer la historia de poblaciones particulares. Esto se puede utilizar en una amplia variedad de estudios, desde ecologa hasta antropologa.

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3.12 DIFERENCIA DEL MATERIAL GENETICO EN CELULAS PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

Uno de los avances ms considerables de la Biologa ha sido el descubrimiento de las profundas diferencias entre los organismos celulares y acelulares (virus) y a nivel celular las diferencias entre clulas con y sin ncleo. Los trminos Procariotas y Eucariota se deben a E. Chatton y se empezaron a usar a principios de 1950. La principal diferencia radica en que en los Procariotas el material gentico no est separado del citoplasma y los Eucariotas presentan el material gentico est organizado en cromosomas rodeados por una membrana que los separa del citoplasma.
PROCARIOTAS ADN localizado en una regin: Nucleoide, no rodeada por una membrana. Clulas pequeas 1-10 m EUCARIOTAS Ncleo rodeado por una membrana. Material gentico fragmentado en cromosomas formados por ADN y protenas. Por lo general clulas grandes, (10-100 m), Algunos son microbios, la mayora son organismos grandes.

Divisin celular directa, principalmente por fisin binaria. No hay centrolos, huso Divisin celular por mitosis, presenta huso mittico, o alguna mittico ni microtbulos. forma de ordenacin de microtbulos. Sistemas sexuales escasos, si existe intercambio sexual se da por transferencia de un donador a un receptor. Escasas formas multicelulares Ausencia de desarrollo de tejidos Formas anaerobias estrictas, facultativas, microareroflicas y aerobias Sistemas sexuales frecuentes. Alternancia de fases haploides y diploides mediante Meiosis y Fecundacin

Los organismos multicelulares muestran desarrollo de tejidos Casi exclusivamente aerobias

Ausencia de mitocondrias: las enzimas para la oxidacin de molculas orgnicas Las enzimas estn en las mitocondrias estn ligadas a las membranas Flagelos simples formados por la protena flagelina En especies fotosintticas, las enzimas necesarias estn ligadas a las membranas. Existencia de fotosntesis aerobia y anaerobia, con productos finales como azufre, sulfato y Oxgeno Flagelos compuestos, (9+2) formados por tubulina y otras protenas Las enzimas para la fotosntesis se empaquetan en los cloroplastos.

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3.13 CONCEPTO DE ARN

ARN mensajero. El cido ribonucleico (ARN o RNA, de RiboNucleic Acid, su nombre en ingls) es un cido nucleico formado por una cadena de ribonucletidos. Est presente tanto en las clulas procariotas como en las eucariotas, y es el nico material gentico de ciertos virus (virus ARN). El ARN celular es lineal y de hebra sencilla, pero en el genoma de algunos virus es de doble hebra. En los organismos celulares desempea diversas funciones. Es la molcula que dirige las etapas intermedias de la sntesis proteica; el ADN no puede actuar solo, y se vale del ARN para transferir esta informacin vital durante la sntesis de protenas (produccin de las protenas que necesita la clula para sus actividades y su desarrollo). Varios tipos de ARN regulan la expresin gnica, mientras que otros tienen actividad cataltica. El ARN es, pues, mucho ms verstil que el ADN.

3.13.1 DESCUBRIMIENTO E HISTORIA

Estructura qumica de un ribo nucletido. Los cidos nucleicos fueron descubiertos en 1868 por Friedrich Miescher, que los llam nuclena ya que los aisl del ncleo celular.1 Ms tarde, se comprob que las clulas procariotas, que carecen de ncleo, tambin contenan cidos nucleicos. El papel del ARN en la sntesis de protenas fue sospechado en 1939. Severo Ochoa gan el Premio Nobel de Medicina en 1959 tras descubrir cmo se sintetizaba el ARN. En 1965 Robert W. Holley hall la secuencia de 77 nucletidos de un ARN de transferencia de una levadura,4 con lo que obtuvo el Premio Nobel de Medicina en 1968. En 1967, Carl Woese comprob las propiedades catalticas de algunos ARN y sugiri que las primeras formas de vida usaron ARN como portador de la informacin gentica tanto como catalizador de sus reacciones metablicas (hiptesis del mundo de ARN). En 1976, Walter Fiers y sus colaboradores

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determinaron la secuencia completa del ARN del genoma de un virus ARN (bacterifago MS2). En 1990 se descubri en Petunia que genes introducidos pueden silenciar genes similares de la misma planta, lo que condujo al descubrimiento del ARN interferente.8 9 Aproximadamente al mismo tiempo se hallaron los micro ARN, pequeas molculas de 22 nucletidos que tenan algn papel en el desarrollo de Caenorhabditis elegans.10 El deescubrimiento de ARN que regulan la expresin gnica ha permitido el desarrollo de medicamentos hechos de ARN, como los ARN pequeos de interferencia que silencian genes.

3.13.2 ESTRUCTURA QUIMICA

Comparativa entre ARN y ADN. Como el ADN, el ARN est formado por una cadena de monmeros repetitivos llamados nucletidos. Los nucletidos se unen uno tras otro mediante enlaces fosfodister cargados negativamente. Cada nucletido uno est formado por una molcula de monosacrido de cinco carbonos (pentosa) llamada ribosa (desoxirribosa en el ADN), un grupo fosfato, y uno de cuatro posibles compuestos nitrogenados llamados bases: adenina, guanina, uracilo (timina en el ADN) y citosina.

Comparacin entre el ARN y el ADN ARN Pentosa Purinas Ribosa ADN Desoxirribosa

Adenina y Guanina Adenina y Guanina

Pirimidinas Citosina y Uracilo Citosina y Timina

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Los carbonos de la ribosa se numeran de 1' a 5' en sentido horario. La base nitrogenada se une al carbono 1'; el grupo fosfato se une al carbono 5' y al carbono 3' de la ribosa del siguiente nucletido. El fosfato tiene una carga negativa a pH fisiolgico lo que confiere al ARN carcter polianinico. Las bases pricas (adenina y guanina) pueden formar puentes de hidrgeno con las pirimidnicas (uracilo y citosina) segn el esquema C=G y A=U. Adems, son posibles otras interacciones, como el apilamiento de bases o tetrabucles con apareamientos G=A. Muchos ARN contienen adems de los nucletidos habituales, nucletidos modificados, que se originan por transformacin de los nucletidos tpicos; son carcatersticos de los ARN de transferencia (ARNt) y el ARN ribosmico (ARNr); tambin se encuentran nucletidos metilados en el ARN mensajero eucaritico.

3.13.3 ESTRUCTURA SECUNDARIA

Apareamiento de bases complementarias en un ARN de hebra nica. A diferencia del ADN, las molculas de ARN son de cadena simple y no suelen formar dobles hlices extensas. No obstante, s se pliega como resultado de la presencia de regiones cortas con apareamiento intermolecular de bases, es decir, pares de bases formados por secuencias complementarias ms o menos distantes dentro de la misma hebra. El ARNt posee aproximadamente el 60% de bases apareadas en cuatro brazos con estructura de doble hlice. Una importante caracterstica estructural del ARN que lo distingue del ADN es la presencia de un grupo hidroxil en posicin 2' de la ribosa, que causa que las dobles hlices de ARN adopten una conformacin A, en vez de la conformacin B que es la ms comn en el ADN. Esta hlice A tiene un surco mayor muy profundo y estrecho y un surco menor amplio y superficial.Una segunda consecuencia de la presencia de dicho hidroxilo es que los enlaces fosfodister del ARN de las regiones en que no se forma doble hlice son ms susceptibles de hidrlisis qumica que los del ADN; los enlaces fosfodister del ARN se hidrolizan rpidamente en disolucin alcalina, mientras que los enlaces del ADN son estables. La vida media de las molculas de ARN es mucho ms corta que las del ADN, de unos minutos en algunos ARN bacterianos o de unos das en los ARNt humanos.

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3.13.4 ESTRUCTURA TERCIARIA

Estructura terciaria de un ARNt La estructura terciaria del ARN es el resultado del apilamiento de bases y de los enlaces por puente de hidrgeno entre diferentes partes de la molcula. Los ARNt son un buen ejemplo; en disolucin, estn plegados en forma de "L" compacta estabilizada por apareamientos de Watson y Crick convencionales (A=U, C=G) y por interacciones de bases entre dos o ms nucletidos, como tripletes de bases; las bases pueden donar tomos de hidrgeno para unirse al esqueleto fosfodister; el OH del carbono 2' de la ribosa es tambin un importante dador y aceptor de hidrgenos.

3.13.5 BIOSINTESIS
La biosntesis de ARN est catalizada normalmente por la enzima ARN polimerasa que usa una hebra de ADN como molde, proceso conocido con el nombre de transcripcin. Por tanto, todos los ARN celulares provienen de copias de genes presentes en el ADN. La transcripcin comienza con el reconocimiento por parte de la enzima de un promotor, una secuencia caracterstica de nucletidos en el ADN situada antes del segmento que va a transcribirse; la doble hlice del ADN es abierta por la actividad helicasa de la propia enzima. A continuacin, la ARN polimerasa progresa a lo largo de la hebra de ADN en sentido 3' 5', sintetizando una molcula complementaria de ARN; este proceso se conoce como elongacin, y el crecimiento de la molcula de ARN se produce en sentido 5' 3'. La secuencia de nucletidos del ADN determina tambin dnde acaba la sntesis del ARN, gracias a que posee secuencias caractersticas que la ARN polimerasa reconoce como seales de terminacin. Tras la transcripcin, la mayora de los ARN son modificados por enzimas. Por ejemplo, al pre-ARN mensajero eucariota recin transcrito se le aade un nucletido de guanina modificado en el extremo 5', que se conoce "capucha" o "caperuza", y una larga secuencia de nucletidos de adenina en el extremo 3' (cola poli-A); posteriormente se le eliminan los intrones (segmentos no codificantes) en un proceso conocido como splicing.

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En virus, hay tambin varias ARN polimerasas ARN-dependientes que usan ARN como molde para la sntesis de nuevas molculas de ARN. Por ejemplo, varios virus ARN, como los poliovirus, usan este tipo de enzimas para replicar su genoma.

3.13.6 TIPOS DE ARN

El ARN mensajero (ARNm) es el tipo de ARN que lleva la informacin del ADN a los ribosomas, el lugar de la sntesis de protenas. La secuencia de nucletidos del ARNm determina la secuencia de aminocidos de la protena. Por ello, el ARNm es denominado ARN codificante. No obstante, muchos ARN no codifican protenas, y reciben el nombre de ARN no codificantes; se originan a partir de genes propios (genes ARN), o son los intrones rechazados durante el proceso de splicing. Son ARN no codificantes el ARN de transferencia (ARNt) y el ARN ribosmico (ARNr), que son elementos fundamentales en el proceso de traduccin, y diversos tipos de ARN reguladores. Ciertos ARN no codificantes, denominados ribozimas, son capaces de catalizar reacciones qumicas como cortar y unir otras molculas de ARN,o formar enlaces peptdicos entre aminocidos en el ribosoma durante la sntesis de protenas. ARN implicados en la sntesis de protenas Ribosoma 50S mostrando el ARNr (amarillo), las protenas (azul) y el centro activo, la adenina 2486 (rojo). ARN mensajero. El ARN mensajero (ARNm o RNAm) lleva la informacin sobre la secuencia de aminocidos de la protena desde el ADN, lugar en que est inscrita, hasta el ribosoma, lugar en que se sintetizan las protenas de la clula. Es, por tanto, una molcula intermediaria entre el ADN y la protena y el apelativo de "mensajero" es del todo descriptivo. En eucariotas, el ARNm se sintetiza en el nucleoplasma del ncleo celular y de all accede al citosol, donde se hallan los ribosomas, a travs de los poros de la envoltura nuclear. ARN de transferencia. Los ARN de transferencia (ARNt o tRNA) son cortos polmeros de unos 80 nucletidos que transfiere un aminocido especfico al polipptido en crecimiento; se unen a lugares especficos del ribosoma durante la traduccin. Tienen un sitio especfico para la fijacin

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del aminocido (extremo 3') y un anticodn formado por un triplete de nucletidos que se une al codn complementario del ARNm mediante puentes de hidrgeno. ARN ribosmico. El ARN ribosmico (ARNr o RNAr) se halla combinado con protenas para formar los ribosomas, donde representa unas 2/3 partes de los mismos. En procariotas, la subunidad mayor del ribosoma contiene dos molculas de ARNr y la subunidad menor, una. En los eucariotas, la subunidad mayor contiene tres molculas de ARNr y la menor, una. En ambos casos, sobre el armazn constituido por los ARNr se asocian protenas especficas. El ARNr es muy abundante y representa el 80% del ARN hallado en el citoplasma de las clulas eucariotas. Los ARN ribosmicos son el componente cataltico de los ribosomas; se encargan de crear los enlaces peptdicos entre los aminocidos del polipptido en formacin durante la sntesis de protenas; actan, pues, como ribozimas. ARN reguladores Muchos tipos de ARN regulan la expresin gnica gracias a que son complementarios de regiones especficas del ARNm o de genes del ADN. ARN de interferencia. Los ARN interferentes (ARNi o iRNA) son molculas de ARN que suprimen la expresin de genes especficos mediante mecanismos conocidos globalmente como ribointerferencia o interferencia por ARN. Los ARN interferentes son molculas pequeas (de 20 a 25 nuclotidos) que se generan por fragmentacin de precursores ms largos. Se pueden clasificar en tres grandes grupos: Micro ARN. Los micro ARN (miARN o RNAmi) son cadenas cortas de 21 22 nucletidos hallados en clulas eucariotas que se generan a partir de precursores especficos codificados en el genoma. Al transcribirse, se pliegan en horquillas intramoleculares y luego se unen a enzimas formando un complejo efector que puede bloquear la traduccin del ARNm o acelerar su degradacin comenzando por la eliminacin enzimtica de la cola poli A. ARN interferente pequeo. Los ARN interferentes pequeo (ARNip o siARN), formados por 20-25 nucletidos, se producen con frecuencia por rotura de ARN virales, pero pueden ser tambin de origen endgeno. Tras la transcripcin se ensambla en un complejo proteico denominado RISC (RNA-induced silencing complex) que identifica el ARNm complementario que es cortado en dos mitades que son degradadas por la maquinaria celular, bloquean as la expresin del gen.

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ARN asociados a Piwi. Los ARN asociados a Piwi son cadenas de 29-30 nucletidos, propias de animales; se generan a partir de precursores largos monocatenarios, en un proceso que es independiente de Drosha y Dicer. Estos ARN pequeos se asocian con una subfamilia de las protenas "Argonauta" denominada protenas Piwi. Son activas las clulas de la lnea germinal; se cree que son un sistema defensivo contra los transposones y que juegan algn papel en la gametognesis. ARN antisentido. Un ARN antisentido es la hebra complementaria (no codificadora) de un hebra ARNm (codificadora). La mayora inhiben genes, pero unos pocos activan la transcripcin. El ARN antisentido se aparea con su ARNm complementario formando una molcula de doble hebra que no puede traducirse y es degradada enzimticamente. La introduccin de un transgen codificante para un ARNm antisentido es una tcnica usada para bloquear la expresin de un gen de inters. Un mARN antisentido marcado radioactivamente puede usarse para mostrar el nivel de transcripcin de genes en varios tipos de clulas. Algunos tipos estructurales antisentidos son experimentales, ya que se usan como terapia antisentido. ARN largo no codificante. Muchos ARN largos no codificantes (ARNnc largo o long ncARN) regulan la expresin gnica en eucariotas; uno de ellos es el Xist que recubre uno de los dos cromosomas X en las hembras de los mamferos inactivndolo (corpsculo de Barr). Riboswitch. Un riboswitch es una regin del ARNm al cual pueden unirse pequeas molculas sealizadoras que afectan la actividad del gen. Por tanto, un ARNm que contenga un riboswitch est directamente implicado en la regulacin de su propia actividad que depende de la presencia o ausencia de la molcula sealizadora. Tales riboswitchs se hallan en la regin no traducida 5' (5'-UTR), situada antes del codn de inicio (AUG), y/o en la regin no traducida 3' (3'-UTR), tambin llamada secuancia de arrastre, situada entre el codn de terminacin (UAG, UAA o UGA) y la cola poli A.

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3.13.7 ARN CON ACTIVIDAD CATALITICA

Transformacin de uridina en pseudouridina, una modificacin comn del ARN. Ribozimas. El ARN puede actuar como biocatalizador. Ciertos ARN se asocian a protenas formando ribonucleoprotenas y se ha comprobado que es la subunidad de ARN la que lleva a cabo las reacciones catalticas; estos ARN realizan las reacciones in vitro en ausencia de protena. Se conocen cinco tipos de ribozimas; tres de ellos llevan a cabo reacciones de automodificacin, como eliminacin de intrones o autocorte, mientras que los otros (ribonucleasa P y ARN ribosmico) actan sobre substratos distintos. As, la ribonucleasa P corta un ARN precursor en molculas de ARNt, mientras que el ARN ribosmico realiza el enlace peptdico durante la sntesis proteica ribosomal. Espliceosoma. Los intrones son separados del pre-ARNm durante el proceso conocido como splicing por los espliceosomas, que contienen numerosos ARN pequeos nucleares (ARNpn o snRNA). En otros casos, los propios intrones actan como ribozimas y se separan a s mismos de los exones. ARN pequeo nucleolar. Los ARN pequeos nucleolares (ARNpno o snoRNA), hallados en el nuclolo y en los cuerpos de Cajal, dirigen la modificacin de nucletidos de otros ARN; el proceso consiste en transformar alguna de las cuatro bases nitrogenadas tpicas (A, C, U, G) en otras. Los ARNpno se asocian con enzimas y los guan aparendose con secuencias especficas del ARN al que modificarn. Los ARNr y los ARNt contienen muchos nucletidos modificados.

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3.13.8 ARN MITOCONDRIAL

La mitocondrias tiene su propio aparato de sntesis proteica, que incluye ARNr (en los ribosomas), ARNt y ARNm. Los ARN mitocondriales (ARNmt o mtARN) representan el 4% del ARN celular total. Son transcritos por una ARN polimerasa mitocondrial especfica.

3.13.9 GENOMAS DEL ARN

El ADN es la molcula portadora de la informacin gentica en todos los organismos celulares, pero, al igual que el ADN, el ARN puede guardar informacin gentica. Los virus ARN carecen por completo de ADN y su genoma est formado por ARN, el cual codifica las protenas del virus, como las de la cpside y algunos enzimas. Dichos enzimas realizan la replicacin del genoma vrico. Los viroides son otro tipo de patgenos que consisten exclusivamente en una molcula de ARN que no codifica ninguna protena y que es replicado por la maquinaria de la clula hospedadora.

3.13.10 HIPOTESIS DEL MUNDO DE ARN

La hiptesis del mundo de ARN propone que el ARN fue la primera forma de vida en la Tierra, desarrollando posteriormente una membrana celular a su alrededor y convirtindose as en la primera clula. Se basa en la comprobacin de que el ARN puede contener informacin gentica, de un modo anlogo a como lo hace el ADN, y que algunos tipos son capaces de llevar a cabo reacciones metablicas, como autocorte o formacin de enlaces peptdicos. Durante aos se especul en qu fue primero, el ADN o las enzimas, ya que las enzimas se sintetizan a partir del ADN y la sntesis de ADN es llevada a cabo por enzimas. Si se supone que las primeras formas de vida usaron el ARN tanto para almacenar su informacin gentica como realizar su metabolismo, se supera este escollo. Experimentos con los ribozimas bsicos, como el ARN viral Q-beta, han demostrado que las estructuras de ARN autorreplicantes sencillas pueden resistir incluso a fuertes presiones selectivas (como los terminadores de cadena de quiralidad opuesta).

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CONCLUSIONES

El ADN lleva la informacin necesaria para dirigir la sntesis de protenas y la replicacin. La replicacin es el conjunto de reacciones por medio de las cuales el ADN se copia a s mismo cada vez que una clula o un virus se reproduce y transmite a la descendencia la informacin que contiene. En casi todos los organismos celulares el ADN est organizado en forma de cromosomas, situados en el ncleo de la clula. Cada molcula de ADN est constituida por dos cadenas o bandas formadas por un elevado nmero de compuestos qumicos llamados nucletidos. El material gentico se emplea para guardar la informacin gentica de una forma de vida orgnica. El ARN y el ADN son macromolculas compuestas de nucletidos, de los cuales hay cuatro en cada molcula. Las secuencias de ADN que constituyen la unidad fundamental, fsica y funcional de la herencia se denominan genes. Dentro de las clulas, el ADN est organizado en estructuras llamadas cromosomas que, durante el ciclo celular, se duplican antes de que la clula se divida. La sntesis proteica comienza con la separacin de la molcula de ADN en sus dos hebras. En un proceso llamado transcripcin, una parte de la hebra paralela acta como plantilla para formar una nueva cadena que se llama ARN mensajero o ARNm. Varias pruebas sugieren que el ARN fue el primer material gentico.

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BIBLIOGRAFIA

http://www.mitareanet.com/colaboraciones/ADNyARN.htm http://es.wikipedia.org/wiki/Material_genetico/ADNyARN.htm" http://www.biologia.edu.ar/biodiversidad/proca-eucariotas.htm

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