ALEXOPOULOS, C.J.; MIMS, C.W. & BLACKWELL, M. 1996. Introductory Mycology.

New York: John Wiley & Sons, Inc. 865p. (TRADUO LIVRE, USO INTERNO)

CAPTULO 2 Caractersticas dos fungos

Caractersticas gerais. Os fungos constituem um grupo de organismos heterotrficos, sem clorofila, mas que historicamente tem sido comparados s plantas. Eles parecem plantas simples, nas quais, com poucas excees, existem paredes celulares definitivas, so imveis (apesar de poucas espcies terem clulas reprodutivas mveis) e se reproduzem por meio de esporos 1. Todavia os fungos no possuem caules, razes ou folhas como as plantas superiores, e nem desenvolvem sistema vascular. Outra caracterstica que separa os fungos das plantas o fato de que o produto de armazenamento, um carbohidrato primrio, o glicognio, e no o amido. Os fungos so geralmente filementosos e multicelular, seus ncleos, apesar de pequenos, podem ser visualizados de forma relativamente fcil; e suas estruturas somticas, com poucas excees, exibem pouca diferenciao e praticamente no h diviso de trabalho. Um problema mais difcil que distinguir fungos de plantas distingui-los de outros organismos com a mesma forma de crescimento, e so suas caractersticas moleculares que tem ajudado nesse aspecto. Iremos focalizar as diferenas entre os fungos, tanto quanto definir os outros grupos (Reinos Protista e Stramenopila). Outra diferena entre os organismos tratados tradicionalmente como fungos e as plantas a terminologia usada para descrever suas estruturas e funes. Mas isso j esperado, j que os fungos evoluiram em seus prprios e surprendentes caminhos. Muito dos termos obsoletos foi eliminado, mas no todos. Os filamentos ou hifas constituem o soma (corpo) de um fungo, elongam por crescimento apical, mas a maior parte de um fungo potencialmente capaz de crescer, e um pequeno fragmento de quase toda parte do organismo, usualmente capaz de produzir um novo ponto de crescimento e comear um novo indivduo. Estruturas reprodutivas so diferenciadas das estuturas somticas e exibem uma variedade de formas, com base nas quais ns classificamos os fungos. Poucas espcies podem ser identificadas se seus estgios reprodutivos no estiverem presentes. Com pouquissimas excees, as partes somticas de um fungo parecem com a de outros. Este fato muito evidente no estudo dos fsseis fngicos. Os fungos so heterotrficos e exibem nutrio absortiva. Isto faz simplesmente com que eles no fixem carbono e que os nutrientes que entram em seus corpos, devam passar pela membrana plasmtica e

parede celular. Essa caracterstica tem levado alguns autores a descrever os fungos como organismos cujos estmagos so externos a seus corpos. No lugar de ingerir alimentos e ento diger-los, como os animais, os fungos primeiro devem liberar enzimas digestivas para o meio externo. Essas enzimas quebram molculas grandes e relativamente insolveis tais como carboidratos, protenas e lipdios em molculas menores e mais solveis para ento inger-las. gua livre deve estar presente como um meio para difuso de nutrientes solveis para dentro das clulas. Sem alguma gua livre, os fungos no podem realizar metabolismo normal. Como um grupo, os fungos exibem uma habilidade extraordinria para utilizar quase qualquer recurso de carbono como alimento. Diferentes espcies, todavia, tem diferentes requerimentos nutricionais (Griffin, 1994). Alguns so omnvoros e podem subsistir em virtualmente qualquer coisa que contenha matria orgnica. Os comuns mofo verde (Penicillium) e mofo preto (Aspergillus) com um pouco de umidade iro crescer em qualquer coisa, desde o queijo cheddar at sapatos de couro. Outros fungos so mais restritos em suas dietas; uns poucos parasitas obrigatrios No s requerem protoplasma vivo como alimento, mas tambm so altamente especializados a dadas espcies e mesmo a variedades de hospedeiros parasitados.
1. Esporo (Gr. spora =semente, esporo)

medida por quais enzimas digestivas ela capaz de produzir e liberar no meio. Aparte da disponibilidade de uma fonte de alimento apropriada, exemplos de outros fatores que influenciam o crescimento do fungo esto umidade, temperatura, pH e oxignio. Devido a tremenda diversidade que existe entre os fungos e a organizao de diferentes ambientes nos quais eles vivem, difcil fazer generalizaes sobre a importncia relativa de cada um dos fatores apontados acima. Enquanto alguns fungos vivem na gua, a maioria das espcies no cresce bem quando submergida em gua devido a baixa disponibilidade de oxignio. Todavia, as hifas de parede delgada que constituem o miclio de muitas espcies so suscetveis dissecao e requerem uma fonte mais ou menos contnua de gua para crescerem. Algumas espcies so capazes de crescer em gua salgada, e umas poucas formas osmoflicas podem crescer em substratos contendo altas concentraes de solutos. Tais fungos algumas vezes podem causar problemas em alimentos armazenados. Os fungos apresentam mtodos especiais para manter o potencial de gua baixo, para conservar gua. Algumas espcies produzem manitol e outros compostos para regulao osmtica. Quando se considera a temperatura, o timo para a maioria das espcies est entre 25 e 300 C com limites, inferior e superior de 10 e 400 C.
2. Substrato refere-se a substncia ou material no qual o fungo cresce.

Concluindo, o(s) substrato (s)2 que uma dada espcie pode usar como alimento est governado em grande

Entretanto, certas formas termoflicas tm seu timo acima de 400 C, e algumas podem crescer sob temperaturas altas em habitats compostos. Por outro lado h os fungos psicrfilos ou amadores de frio, capazes de crescer abaixo do ponto de congelamento da gua. Com relao temperatura e umidade, necessrio enfatizar que enquanto certas espcies de fungos esto equipadas para crescer sob condies extremas, virtualmente todas produzem algum tipo de esporo ou estrutura especializada de resistncia que assegura a sobrevivncia durante condies extremas. O pH timo que favorece o crescimento de diferentes tipos de fungos varia amplamente. Falando em geral, a maioria parece crescer melhor a nveis de pH de 4 - 7. Entretanto, devido a que os fungos digerem e consomem os materiais nos quais eles crescem e liberam produtos metablicos para o ambiente, eles alteram, algumas vezes, signicativamente os nveis de pH no microambientes prximos aos seus somas. A maioria dos fungos aerbica, apesar de que inmeras espcies incluindo, claro, as leveduras so capazes de existncia anaerbica facultativa. Uma poucas espcies de Chytridiomycota (Cap.4) so obrigatoriamente fermentativas e so incapazes de respirao oxidativa, mesmo com oxignio disponvel. Em fungos o produto final da respirao anaerbica, ou fermentao, pode ser o lcool etlico ou cido ltico. Em umas poucas espcies produzida uma mistura desses dois compostos. Enquanto a luz no requerida para o crescimento somtico dos

fungos, ela pode aumentar muito o crescimento em algumas e pode ser necessria para a induo de estruturas reprodutivas assexuais e sexuais. Em adio, a luz pode estar involvida na orientao de estruturas que levam esporos, e os esporos de inmeros tipos de fungos so liberados forosamente em direo luz. Contrariamente crena popular, os fungos no requerem escurido nem escuros pores e a luz pode ser requerida para produo de seus esporforos. Muitos fungos so claro, so saprbios (Gr. sapros =degradadores + bios =vida) e obtm seus alimentos por atacar matria orgnica morta. Por outro lado, um nmero considervel de espcies vive como parasitas (Gr. parasitos =comendo junto a outros) em plantas, animais ou em alguns casos mesmo outros fungos. A maioria dos fungos parasitas , entretanto, capazes de viver em matria orgnica morta, como mostra sua habilidade de crescer artificialmente em meios sintticos. Aquelas formas que tem resistido a todos nossos esforos para crescer em meios sintticos ou aquelas que so sempre parasticas na natureza so descritas como parasitas obrigatrios ou biotrfos. Aqueles capazes de crescer parasiticamente ou de viver saprobicamente em matria orgnica morta so, de acordo s circunstncias, referidos ou como parasitas facultativos ou como saprbios facultativos. Em adio aos fungos parasitas que so claramente nocivos aos seus hospedeiros, h vrias espcies que apresentam relaes mutualsticas com animais e ou plantas. Exemplos de relaes

mutualsticas entre fungos e plantas incluem os lquens que so combinaes de fungos e algas verdes e/ou azuis (cianobactrias) e as micorrizas que ocorrem antre fungos e as razes da maioria das plantas. Como j observado, uma maravilhosa diversidade de outras espcies fngicas conhecidas como endfitos, tem sido registrada em troncos e folhas de plantas saudveis. Essas plantas muitas vezes no apresentam signos de que contenham fungos e devem ser beneficiadas por sua presena. Existe tambm uma variedade de fascinantes relaes entre os fungos e os animais. Como registrado no Cap. 1 isso particularmente verdadeiro com relao aos insetos. Em alguns casos os fungos vivem com ou dentro de animais hospedeiros sem causar qualquer dano bvio aos animais. Em outros casos fungos na verdade pegam em armadilhas e consomem animais microscpicos como alimento. Alguns dessas chamadas espcies predadoras produzem elaboradas estruturas que funcionam na captura de suas presas. Por outro lado foi visto no Cap. 1 que alguns tipos de insetos na verdade, mantm ou cultivam fungos e ento se alimentam nas estruturas produzidas pelos fungos. E claro, existem alguns fungos que so micoparasitas e at podem alimentar-se de parentes prximos atravs da produo de estruturas especializadas pelos seus talos. Como j registrado, o corpo do fungo ou talo, consiste tipicamente de hifas microscpicas, tubulares, similares a fios, que se ramificam em todas as direes, estendendo-se sobre ou dentro de qualquer

substrato que os fungos utilizem como alimento. Coletivamente essas estruturas fazem o corpo do fungo, que chamado de miclio. Todavia, nem todos fungos produzem miclios compostos de hifas. Muitas formas referidas comumente como leveduras1, existindo como clulas nicas que so capazes de se reproduzir rapidamente por gemao ou fisso. Algumas espcies de fungos podem existir tanto como hifas como leveduras e ento so ditas DIMRFICAS. O dimorfismo , por exemplo, comum em formas que causam enfermidades em humanos e em outros animais. Muitos desses organismos crescem como hifas fora de seus hospedeiros, mas assumem uma aparncia levuriforme dentro dos hospedeiros. Como ser visto mais tarde vrios fatores qumicos e fsicos influenciam muitas vezes a converso de hifas para leveduras e vice-versa.
1 Levedura um termo morfolgico e no se refere a qualquer grupo taxonmico em particular.

Uma hifa fngica est composta de uma delgada e translcida parede tubular cheia ou alinhada com uma camada de protoplasma variando em espessura. Quando examinada com o auxlio de microscpio ptico, evidente que as hifas de muitas espcies so interrompidas em alguns pontos por parties ou paredes transversais os septos. Em alguns os septos so produzidos a intervalos mais ou menos regulares ao longo do comprimento da hifa, dividindo-a em compartimentos individuais ou clulas que contm um, dois ou mais ncleos. As hifas desse tipo so denominadas septadas. Em outras

espcies os septos s esto presentes nas bases das estruturas reprodutivas e em pores velhas, altamente vacuoladas das hifas. Desde que pores dessas hifas em vigoroso crescimento no apresentam espaos regularmente septadas, elas so chamadas asseptadas ou no-septadas, algumas vezes o termo cenoctico tambm usada para descrev-las. Estudos ultraestruturais de uma variedade de diferentes tipos de fungos tem mostrado que os septos variam em sua construo. Alguns so simples e outros so complexos, todos os tipos parecem formar-se por crescimento centrpeto das paredes hifais para o centro. Em muitos casos, um septo totalmente desenvolvido possui um nico poro central atravs do qual os protoplastos dos compartimentos hifais subjacentes so contnuos. Essse tipo de poro algumas vezes est bloqueado ou ocludo por vrias estruturas (Markham, 1994), mas quando desobstrudo, usualmente grande o suficiente para permitir a passagem de vrias organelas incluindo at ncleos. Na maioria dos fungos complexos a parede do septo, prxima ao poro central, est aumentada ou inflada para formar uma estrutura em forma de barril. Esse tipo de septo referido como um septo doliporo (Cap. 16). Em muitos exemplos est presente no citoplasma uma estrutura membranosa chamada coifa do poro septal ou parentossomo, em ambos lados do septo doliporo. Dependendo das espcies envolvidas, o parentossomo pode ser perfurado ou imperfurado. Septos com mltiplos microporos ou canais parecidos com plasmodesmos tambm tem sido

registrados em poucos fungos que no esto relacionados proximamente uns aos outros (Powell, 1974; Powell & Gillette, 1987; Doubls & McLaughlin, 1991). Aceita-se que os aspectos dos septos so relativamente conservados do ponto de vista evolucionrio, e os dados da ultraestrutura septal figuram proeminentemente em vrios esquemas sistemticos (Doubls & McLaughlin, 1991; Wells, 1994). Como j foi apontado, cada hifa fngica est rodeada por uma parede celular definitiva. De acordo a Bartinicki-Garcia (1987), essa parede a estrutura que d aos fungos a maioria de seus aspectos exclusivos. A habilidade da parede para conter a presso de turgor com segurana parece ser a razo primordial para a sobrevivncia e evoluo dos fungos. Em adio a conter a presso de turgor, a parede celular tambm joga diversos outros papis na vida de um fungo (Peberdy, 1990). Por exemplo, a parede confere forma hifa, e atua como um filtro controlando em alguma medida, o que entra no protoplasto fngico, protege o protoplasto contra perigos ambientais e funciona no reconhecimento de eventos no s associados reproduo sexual, mas tambm com vrias interaes dos fun-gos com vegetais e plantas potencialmente simbiontes. Todavia ser visto que os diversos grupos discutidos nesse livro so hbeis para sobreviver sem estruturas somticas e sem paredes. Paredes fngicas e crescimento hifal apical. A parede celular fngica uma estrutura dinmica que est sujeita a mudana e modificaes em diferentes estdios na vida de um fungo (Peberdy, 1990). composta

basicamente de um componente esqueletal ou microfibrilar localizado no lado interno da parede e usualmente embebida em um material de matriz amorfo que se estende para a superfcie externa da parede. o componenete esqueletal consiste de materiais, altamente cristalinos, insolveis em gua que inclui glucanos1 e quitina2 enquanto a matriz consiste principalmente de polissacardeos que so na maioria solveis em gua. Esses ltimos polissacardeos incluem -glucanos e glicoprotenas. Componentes miscelaneos que podem estar presentes nas paredes celulares incluem lipdios, melaninas, polmeros de D-galactosamina e poliurondeos (Peberdy, 1990). Apesar de que existem registros dispersos da presena de celulose nas paredes de poucos fungos, crse que este composto geralmente est ausente da maioria dos fungos verdadeiros. Por outro lado, celulose um componenete caracterstico das paredes de Stramenopila, incluindo os Oomycota (Cap. 23) e em alguns fungos limosos dictiostlicos. Apesar de morfologicamente similares aos fungos verdadeiros, as espcies de Oomycota no tem relaes filogenticas prximas com os fungos verdadeiros. na verdade, a diferena nos polissacardeos de parede foi uma dos primeiras chaves que alertaram os miclogos para sua distino. Em anos recentes tem havido considervel interesse na qumica das paredes celulares fngicas. Muito do que correntemente conhecido sobre esse tpico pode ser encontrado em Bartinicki-Garcia, 1987; Peberdy, 1990; Wessels et al.,

1990 e Ruiz-Herrera, 1992. Ser abordado mais sobre parede nos captulos subsequentes relacionados a grupos especficos de fungos. Para parafrasear Gooday & Gow (1990), a vida est no pice da hifa fngica. O que esta afirmao significa que os tubos germinativos fngicos (hifa que emerge de um esporo) e as hifas crescem quase exclusivamente em suas extremidades. O tipo de crescimento, difuso ou intercalar que comum em tecidos de vegetais, raro em fungos, e parece estar limitado a hifas envolvidas em elevar estruturas reprodutivas no ar para a disperso dos esporos (Wessels et al., 1990). J se sabe h muito tempo que as hifas crescem apicalmente, mas como exatamente ocorre esse crescimento no totalmente entendido ainda hoje.
1. O termo glucano em fungos est restrito a polissacardeos feitos somente ou parcialmente de molculas de glicose que esto unidas atravs de ligaes 1,3, -1,6, -1,3 ou -1,6. Os mais abundantes e mais intensamente estudados glucanos so os -glucanos que contm propores variveis de ligaes -1,3 e -1,6 (Ruiz-Herrera, 1992). 2. O termo quitina usualmente igualado com um -1,4 ligado a um homopolmero de N-acetilglucosamina ocorrendo em uma condio microscristalina (Wessels et al., 1990). Entretanto alguns autores usam o temo em um sentido geral para referir-se a vrios polmeros em fungos conhecidos coletivamente como glucosaminoglucanos. Esses variam em seus graus de acetilao desde completamente acetilados (quitina) at no completamente acetilado (quitosano).

A questo bsica que permanece sem resposta relaciona-se a como a parede celular exibe rigidez suficiente para manter a forma da hifa, enquanto suficientemente elstica para permitir rpido crescimento apical. Duas hipteses bsicas, ainda que contrastantes, tem sido propostas para explicar o crescimento da extremidade hifal e eles sero considerados brevemente a seguir. Quando estiver lendo o seguinte pargrafo, deixe claro sua mente, que o crescimento terminal da hifa um processo complicado e que numerosos artigos de reviso, captulos de livros e livros inteiros tm sido escritos sobre ele. Uma teoria do crescimento apical defendida por Wessels (1986, 1988) e geralmente referida como hiptese stready-state. A hiptese sugere que o pice hifal inerentemente visco-elstico e expansvel, e que a parede sintetizada de novo no pice consiste de uma mistura de quitina no cristalina e -glucano. Como um resultado de ligamentos cruzados dos polmeros da parede, a mistura viscoelstica desenvolve gradualmente rigidez. A segunda hiptese (BartinickiGarcia, 1973) sugere que a parede inteiramente rgida e que para ocorrer crescimento deve haver um permanente balano delicado entre a lisis da parede seguida pela sntese de polmeros da parede, e entre o rompimento e a emenda da parede. Em qualquer das duas hipteses, torna-se aparente que a regio subapical de uma hifa em crescimento produz a energia, enzimas, precursores de parede e membranas necessrias para o

crescimento do pice hifal. Nesse ponto h forte evidncia indicando que muito da matria-prima necessitada pelo pice hifal em crescimento so distribudas para o pice por vesculas rodeadas de membrana. Estudos no MEV tem mostrado que o pice de uma hifa em crescimento est abarrotado de vesculas, que caem em duas categorias (Bartinicki-Garcia, 1990). Inclui macrovesculas com dimetros maiores que 100nm e microvesculas com menos de 100nm de dimetro. Na maioria dos fungos verdadeiros essas vesculas so apertadamente agrupadas com algumas outras estruturas para formar uma nica e dinmica estrutura chamada Spitzenkrper. Essa estrutura foi observada por primeira vez em hifas coradas por Brunswik (1924) e mais tarde em hifas vivas por Girbardt (1957), que correlacionou a presena dessa estrutura no pice hifal com crescimento e sua posio com a direo de elongamento da hifa. Bartinick-Garcia et al. (1989) sugeriram que o Spitzenkrper atua como um centro de suprimento das vesculas envolvidas no crescimento apical e propuseram um novo modelo matemtico para explicar como a forma tubular de uma hifa fngica pode ser gerada por uma clula que cresce apicalmente. Alguma base para esse modelo tem vindo do trabalho feito no Laboratrio do Dr. C. E. Bracker da Univ. de Purdue. Usando um microscpio acoplado a um vdeo computador para estudar as extremidades hifais em crescimento de uma variedade de diferentes fungos, Lpez-Franco (1992) demonstrou que o Spitzenkrper uma estrutura pleomrfica e dinmica

que responde a uma variedade de diferentes estmulos. Baseado na forma, indice refrativo e distribuio dos componentes do Spitzenkrper, foram identificados seus padres ao nvel do microscpico ptico. As macrovesculas presentes nas extremidades hifais parecem ser vesculas secretoras que contem enzimas e polmeros pr-formados que so usados para formar a matriz amorfa da parede celular das hifas (Bartinicki-Garcia, 1990). Suspeita-se que esses polmeros so sintetizados durante o processo de diferenciao da endomembrana que envolve o retculo endoplasmtico e as cisternas de Golgi. Durante esse processo, o material de membrana do RE transformado para cisternas de Golgi por um processo de vesiculao. Vesculas secretoras contendo enzimas e polmeros da parede so ento liberadas das cisternas do Golgi e migram para o ativamente crescente pice hifal onde elas se fusionam com a memebrana plasmtica. As membranas das vesculas fusionadas contribuem com a membrana plasmtica, enquanto seus contedos so liberados no lado externo do citoplasma onde so usados na formao da parede. No modelo de Bartinick-Garcia (1973) para crescimento apical, esse mesmo tipo de vescula entregaria o plastizador que facilita a expanso da parede para fora, durante o crescimento apical. O exato papel que as microvesculas jogam no crescimento apical menos claro. At agora alguns pesquisadores acreditam que pelo menos algumas de-ssas delgadas vesculas esto envolvidas no movimento da enzima quitinasintetase atravs do citoplasma para

a membrana plasmtica do pice hifal onde ela cataliza a formao de microfibrilas do esqueleto de quitina da parede fngica. Se isso verdade, ento essas vesculas poderiam corresponder aos assim chamados quitossomos, encontrados em homogenatos de hifas. Os quitossomos so pequenas estruturas rodeadas de membrana que contem a maioria da quitina-sintetase presente em homogenatos fngicos. Foram descobertos pela primeira vez por Bracker et al. (1976), e so capazes de gerar microfibrilas de quitina in vitro quando incubados com substratos apropriados. Quitinasintetase ainda tem de ser demonstrada em microvesculas de hifas vivas. Em vez disso, a enzima parece estar localizada na membrana plasmtica, um fato que tem levado alguns pesquisadores a se perguntar se os quitossomos so estruturas reais (Cabid, 1987). Para concluir, a exata origem dos quitossomos incerta, apesar de que eles provavelmente sejam derivados do RE ou das cisternas de Golgi. De acordo com Bartinick-Garcia (1990), os quitossomos contem uma forma inativa ou zimognica de quitina sintetase que possivelmente ativada por proteases permitindo a fuso da membrana do quitossomo com a membrana plasmtica. Uma representao esquemtica est representada na figura anexa. Antes de abandonarmos o tpico dos Spitzenkrper e do crescimento de extremidade hifal, deveramos notar que Bourett & Howard (1991) tem localizado actina fngica na regio central dos Spitzenkrper, no fungo Magnaporthe grisea usando tcnicas de imunolocalizao ultraestrutural.

Estes autores tambm encontraram actina em pequenos agregados de filamentos conhecidos como filassomos que sero descritos mais adiante. Fibrilas longas, delgadas e de superfcie similares as fmbrias de bactrias tem sido registradas em hifas de alguns fungos filamentosos, bem como em em certas formas unicelulares (Gardiner & Day, 1988). Essas estruturas tm cerca de 7nm de diametro e alcanam at 30 m de comprimento. Devido ao seu pequeno dimetro, elas so visveis unicamente a nvel ultraestrutural em amostras por sombreamento ou colorao negativa. Sabemos que as fimbrias fngicas esto compostas de protenas, mas sua funo exata desconhecida. Tem sido sugerido que elas atuam em uma variedade de reaes envolvendo a superfcie hifal. Fmbrias tm sido estudadas extensivamente em carves - fungos patgenos (Cap. 21) Tubos germinativos, hifas e mesmo esporos de alguns fungos so rodeados por uma matriz extracelular. Isso particularmente verdadeiro em certas espcies patgenas de plantas. Em alguns casos esse material tem mostrado ter propriedades adesivas (Kunoh et al., 1991). Por outro lado, a mucilagem que rodeia os esporos de alguns fungos protege-os de dessecao bem como dos efeitos txicos de compostos polifenlicos liberados pelos tecidos infectados de plantas (Nicholson & Moraes, 1980; Nicholson et al., 1989). essa mucilagem tambm contem substncias qumicas que inibem a germinao de esporos (Leite & Nicholson, 1992).

As hifas, e em alguns casos, os esporforos de uma variedade de fungos tambm podem ser decorados com cristais de oxalato de clcio. No caso de certas espcies habitantes da serapilheira, agregaes de cristais podem ser to densas, dando ao miclio uma aparncia crostosa e branca. Quando visualizados com MEV, os cristais fngicos muitas vezes so espetaculares (Arnott & Webb, 1983; Horner et el., 1983). Apesar da produo de cristais por fungos ser conhecida desde de Barry (1887), pouco conhecido sobre o desenvolvimento desas estruturas. Graustein et al. (1977) sugere que os cristais que muitas vezes incrustam hifas de Hysterangium crassum formam quando unidades de cido oxlico so excretadas com ons de clcio no meio ambiente. O cido oxlico tambm tem sido implicado na formao de cristais de oxalato de clcio nas hifas e tecidos de hospedeiros do fungo patognico Sclerotium rolfsii (Punja & Jenkins, 1984; Smith et al., 1986). Essa espcie, bem como algumas de suas mais prximas, conhecida por excretar grandes quantidades de cido oxlico durante a patognese. Por outro lado, alguns pesquisadores (Arnott & Webb, 1983; Whitney & Arnott, 1986) tem sugerido que a formao de cristais est sob controle do protoplasto fngico, como em plantas, e do evidncias convincentes que os cristais de algumas espcies desenvolvem-se dentro da camada externa da parede hifal. A exata funo dos cristais desconhecida. Whitney & Arnott (1986, 1988) sugeriram que os cristais poderiam estar envolvidos na regulao do clcio e tambm

funcionariam para dar resistncia s paredes de certas estruturas. possvel que eles possam proteger as hifas dos fungos contra a herbivoria de certos artrpodos. As hifas da maioria dos fungos tendem a passar desapercebidas na natureza porque elas usualmente so subterrneas ou esto dentro de materiais ou hospedeiros nos quais elas crescem. Todavia, as hifas de muitas espcies diferentes rotineiramente tornam-se organizadas para formar grandes estruturas que so facilmente visveis a olho nu. Isso inclui uma variedade de diferentes tipos de estruturas produtoras de esporos que sero discutidasmais tarde nos diferentse grupos de fungos. Dois exemplos so os estromas e os esclercios. Um estroma uma estutura somtica compacta, muito parecida com um colcho ou almofada em miniatura sobre ou dentro dos quais so usualmente formadas frutificaes. Os esclercios so corpos de resistncia, duros que sobrevivem a condies desfavorveis, tem vrias formas e tamanhos e podem permanecer dormentes por longos perodos de tempo e ento germinar quando retornarem as condies favorveis. Exemplos de ambos tipos de estruturas sero discutidos mais tarde. As hifas de algumas espcies de fungos so capazes de formar fios grossos chamados cordes miceliais ou rizomorfos Essas estruturas exibem uma grande variedade de formas (Cairney et al., 1989; Boddy, 1993). Em algumas espcies as hifas tornam-se consolidadas em fios sem muita diferenciao enquanto outras tem estruturas muito grossas como

cadaros, que exibem uma estrutura interna diferenciada e dominncia apical. Nestas ltimas estruturas, as hifas perdem suas individualidaes e formam tecidos complexos que exibem diviso de trabalho. O cadaro pode ter uma casca grossa e dura, com um pice que cresce, parecendo um pice radicular, e que pode ser confundido muitas vezes com razes pequenas. Rizomorfos desse tipo so resistentes a condies adversas e permanecem dormentes at a volta de condies favorveis. O crescimento ento retomado, e os rizomorfos podem alcanar grandes dimenses. Os rizomorfos tambm desempenham uma variedade de outras importantes funes para as espcies que os produzem, incluindo a descoberta e revelao de recursos (Cairney, 1991). Os nutrientes sequestrados por rizomorfos invasores so ento translocados, muitas vezes por longas distncias, para diferentes partes do miclio. Hifas de fungos patgenos de plantas crescendo dentro dos tecidos de seus hospedeiros exibem vrios padres de crescimento dependendo do tipo de patgeno envolvido (Mims, 1991). Basicamente, o fungo patognico de vegetais cai em uma das trs categorias. Pertotrfos, tambm conhecidos como necrotrfos, que usa enzimas e toxinas para matar as clulas hospedeiras no avano de suas hifas, e ento cresce entre ou dentro de clulas mortas e secas. Biotrfos, so ecologicamente parasitas obrigatrios e in vivo obtem nutrientes unicamente de clulas hospedeiras vivas. As hifas da maioria dos biotrfos crescem primariamente entre clulas hospedeiras e originam

ramificaes hifais especializadas que penetram a parede da clula hospedeira e ento invaginam a membrana plasmtica da clula hospedeira sem matar a clula, essas ramificaes so conhecidas como haustrios, e so responsveis pela captao de nutrientes do hospedeiro (Bushnell, 1972). Vrios tipos de haustrios tm sido demonstrados em diferentes grupos de fungos patognicos de vegetais, e exemplos selecionados aparecem em diversos momentos desse texto (Cap. 15 e 20). A terceira categoria so os hemibiotrfos, que inicialmente requerem clulas hospedeiras vivas mas em seguida causam a morte da clula no avano de suas hifas como os pertotrfos. Um exemplo bem conhecido Colletotrichum lindemuthianum, fungo da antracnose (OConnell & Bailey, 1991). Uns poucos como Cercosporidium personatum, mancha da folha de amendoim, produz haustrios. necessrio mencionar ainda os apressrios, que so estruturas especializadas para infectao, formadas nas extremidades de tubos germi-nativos ou hifas, no lado externo dos hospedeiros. Os apressrios aderem s superfcies dos hospedeiros e formam ganchos que entram no hospedeiro atravs dos estmatos ou penetrando diretamente a epiderme vegetal. Apressrios produzidos por fungos da ferrugem (Cap. 20) e por Magnaporthe grisea (rice blast fungi) (Howard et al., 1991a) tem sido mais extensivamente estudados. Esses apressrios podem ser estruturas muito interessantes, capazes de originar delgados ganchos de infeco que podem penetrar em superfcies artificiais incluindo

coberturas plsticas e membranas Mylar no biodegradveis (Howard et al., 1991b). Evidncias sugerem que esses apressrios so capazes de gerar presses de turgor enormes que providenciam a fora fsica necessria para penetrar superfcies artificiais sob condies de laboratrio, bem como folhas de arroz na natureza. Os apressrios fngicos podem assumir uma grande variedade de formas e podem ser transparentes ou estruturas escuras melanizadas, como no caso de M. grisea. Organelas fngicas. As hifas dos fungos contm quase invariavelmente grande nmero de ncleos. Em formas asseptadas, os ncleos geralmente parecem estar distribudos ao acaso atravs do citoplasma de uma hifa em crescimento ativo. Em formas septadas, os compartimentos individuais podem, dependendo da espcie considerada e da fase do ciclo de vida examinada, conter rotineiramente um, dois ou muitos ncleos. Algumas espcies possuem mecanismos especiais que garantem que somente dois ncleos geneticamente compatveis estejam presentes em cada compartimento de uma hifa. Os ncleos da maioria dos fungos so pequenos. Apesar de serem, geralmente, de forma esfrica a ovide, so estruturas extremamente plsticas que so capazes de esgueirar-se atravs de poros septais delgados, bem como atravs de estruturas estreitas nas extremidades, a partir das quais vrios tipos de esporos so produzidos. Os ncleos tambm tm uma tendncia a tornarem-se

delgados e alongados ou com forma de lgrima, quando se movem dentro dos tubos germinativos originados da germinao dos esporos. At poucos anos atrs a maioria dos estudos ao MO dos ncleos de fungos vinha envolvendo o uso de amostras mortas, fixadas e coradas com substncias tais como Giemsa, hematoxilina frrica, acetato-orcena e aceto-carmim (Gilbardt, 1978). mais recentemente, corantes fluorescentes incluindo DAPI (4, 6-diamidino-2fenilindole) e mitracina tem provado ser de grande valor no estudo dos ncleos (Heath, 1987). Avanos adicionais nas tcnicas ao MO e imagens de vdeo tem tornado possvel visualizar ncleos at em hifas vivas (Aist & Boyles, 1991a). O MET tem, claro, contribudo de forma importante tambm para o conhecimento dos ncleos. Esses estudos no s tem elucidado detalhes precisos das divises mitticas e meiticas em vrios grupos de fungos, bem como tem originado uma ordenao de caractersticas que podem ser significativos do ponto de vista filogentico (Heath, 1986). O principal aspecto a natureza das organelas associadas aos ncleos os corpos polares do fuso [SPBs (spindle pole bodies)]. Um SPB uma estrutura pequena, citoplasmtica, eletronicamente densa que est adjacente ao envoltrio nuclear na maioria dos fungos verdadeiros (Heath, 1981; 1986). Enquanto a composio qumica dos SPBs desconhecida, as evidncias indicam que essas estruturas funcionam como centros de organizao de microtbulos durante a meiose e a mitose. A morfologia dos SPBs varia,

dependendo do fungo examinado e a exata fase da diviso nuclear. Na interfase os SPBs parecem estruturas achatadas em forma de barra, discos multilamelares ou massas globulares a biglobulares. Durante a prfase o SPB duplica a si mesmo e em algumas espcies pode parecer como uma estrutura grande e espetacular. O SPB duplicado separa-se ento em duas metades idnticas que eventualmente ficam posicionadas nos polos opostos de um ncleo em diviso. Dependendo da espcie envolvida os SPBs podem permanecer fora do envoltrio nuclear durante e diviso nuclear ou inserirse froxa a fortemente em aberturas ou fenestras do envoltrio nuclear. Em algumas espcies cordes do RE podem formar coberturas parecidas a gorros sobre os SPBs. Os microtbulos que saem dos SPBs desenvolvem ento o aparato do fuso. Em algumas espcies os assim chamados microtbulos astrais tambm podem estender-se dos SPBs ao citoplasma em cada polo do ncleo em diviso. O comportamento dos SPBs durante a mitose e a meiose , com certeza, reminiscente daqueles dos centrolos. Espcies de fungos que produzem clulas flageladas no apresentam SPBs, possuindo em seu lugar um par de centrolos que esto associados com o envoltrio nuclear. Algumas vezes antes da diviso nuclear cada centrolo sofre replicao e um par de centrolos move-se ento para cada polo do fuso do ncleo. Microtbulos astrais e do fuso parecem inserir-se no material osmoflico que rodeia os centrolos. Maiores informaes em Aist & Boyler (1991b; 1991c).

Divises nucleares nos fungos so basicamente intranucleares. Por isso pensa-se que o volume do envoltrio nuclear permanece intacto at a telfase tardia, quando se rompe na regio interzonal e ento se refaz ao redor dos ncleos-filhos. Como mencionado acima, em anos recentes tem havido considervel interesse nos detalhes ultraestruturais da mitose e da meiose em fungos devido a seu valor como caractersticas filogenticas, inmeras espcies vm sendo estudadas quanto a meiose e mitose. Infelizmente no h um artigo de reviso recente a respeito do assunto. Os trabalhos de Fuller (1976) e Heath (1978) do uma boa idia da seqncia de eventos que ocorrem durante as divises nucleares, tanto em fungos verdadeiros, quanto em muitos outros discutidos nesse livro. O ncleo tpico de um fungo geralmente contm um nuclolo evidente que est muitas vezes posicionado centralmente. Dependendo da espcie considerada, o nuclolo pode seguir um dos trs caminhos durante a diviso (Heath, 1978): (1) pode persistir e sofrer eventualmente fisso; (2) pode dispersar-se e no ser visvel no ncleo em diviso ou (3) pode ser descartado no citoplasma como uma entidade intacta. Ainda no tpico do ncleo poderamos comentar que os cromossomos so pequenos e difceis de visualizar em preparaes (Boehm & McLaughlin, 1991). Como resultado a contagem direta de cromossomos difcil de fazer e a literatura est cheia de registros conflitantes relativos ao nmero cromossmico de vrias espcies.

Todavia uma nova tcnica de anlise do caritipo chamada PFGE (pulsedfield gel eletroforesis) tem provado ser extremamente valiosa para determinar o nmero cromossmico de fungos. Nessa tcnica, cromossomos em gel agarose so expostos a um campo eltrico pulstil, que faz com que eles se movam a diferentes velocidades dependendo de sua formas e tamanhos. Aps feita colorao com bromido de etidio e exposio a luz UV, os cromossomos podem ser vistos como bandas distintas, podendo ento ser contados. Mais informaes ver Skinner et al. (1991). Outra tcnica que tem sido usada para estabelecer caritipos corretos para alguns fungos envolve o uso de reconstrues ultraestuturais de complexos sinaptonmicos do ncleo no paquiteno (Boehm & McLaughlin, 1991, Boehm et al., 1992). Essas estruturas tripartidas so completamente distintivas e so formadas por cromossomos em sinapses meiticas. Essa tcnica de cariotipagem completamente tediosa e depende da habilidade do pesquisador encontrar complexos sinaptonmicos em ncleos no paquteno. Por outro lado, a mera presena de complexos sinaptonmicos em ncleos tem sido til para estabelecer o local no qual ocorre meiose no ciclo de vida de uma espcie em particular. Alm do ncleo a regio subapical de uma hifa em crescimento ativo contm as demais organelas tpicas de eucariontes. Graas ao MET, conhece-se muito sobre a morfologia dessas organelas. Com relao a isso se poderia ressaltar que um procedimento de

fixao relativamente novo a freeze substitution tem provado ser extremamente til na elucidao de detalhes ultraestruturais em fungos. Desde que Howard & Aist (1979) demonstraram que melhoraram a preservao em extremidades hifais de Fusarium com a substituio a frio, essa tcnica tem produzido bons resultados para hifas, bem como para certos tipos de esporos de vrios fungos. Infelizmente a tcnica ainda no funciona bem para amostras que sejam maiores que poucos micrometros de dimetro. Mais informaes em Hock (1986), Howard & ODonnell (1987) e em Aldrich & Todd - Eds (1986). parte do ncleo talvez a mais conspcua organela fngica seja a mitocndria. As mitocndrias so numerosas nas hifas, e quando visualizadas ao MO so apenas visveis como estruturas parecidas a fios delgados ou varetas. Ao nvel ultraestrutural elas so estruturas eletronicamente densas orientadas mais ou menos paralelamente ao eixo longitudinal de uma hifa. Mitocndrias ramificadas ou lobadas so comuns em fungos, assim como formas filamentosas extremamente longas. As cristas das mitocndrias em fungos verdadeiros so estruturas achatadas, como placas. Isto contrasta com as cristas tubulares encontradas nas mitocndrias de muitos outros organismos, incluindo Oomycota. Outros componentes citoplasmticos dos fungos incluem ribossomos, RE, vacolos, corpos lipdicos, partculas armazenadoras de glicognio, microcorpos, Golgi, filassomos, corpos multivesiculares (MVBs), microtbulos e microfilamentos que compoem o citoesqueleto fngico. Estruturas

esfricas conhecidas como corpos de Woronin esto presentes em certos tipos de fungos e esto associadas tipicamente aos poros septais. Em comparao com o Golgi da maioria dos eucariontes, incluindo Oomycota, o dos fungos verdadeiros morfologicamente simples. Consta de um nico elemento de cisterna, ao invs das vrias cisternas diferenciadas em face distal e proximal dos demais. Devido simplicidade, algumas vezes essas estruturas so referidas como equivalentes ao Golgi - dictiossomos para alguns autores (Sewall et al., 1989). Entretanto a funo parece ser a mesma, o empacotamento e a remessa de materiais em vesculas que despreendem-se das margens das cisternas, ex.: macrovesculas. Os filassomos e os MVBs citados acima so estruturas pouco conhecidas. Os filassomos foram registrados em hifas por Hoch & Howard (1980). Parecem vesculas delgadas que so revestidas por denso material filamentoso. So numerosos nas extremidades hifais em crescimento ativo, onde so caracteristicamente encontrados em estreita associao com a membrana plasmtica, tambm so encontrados prximos a septos em formao. Sua funo desconhecida, sabe-se que contem actina (Bourett & Howard, 1991). A funo dos MVBs tambm desconhecida. Essas estruturas podem ser vistas por substituio fria ou fixao convencional, so corpos parecidos com vacolos pequenos, que contem muitas vesculas pequenas. Usualmente parecem estar distribudos ao acaso no citoplasma de hifas e esporos, tambem existem registros de MVBs em estreita associao aos SPBs nos

ncleos em diviso (swann & Mims, 1991). H muito interesse sobre o citoesqueleto fngico, que de acordo com Bartinick-Garcia (1990), um componente-chave para o crescimento apical e na morfognese. As principais protenas que compem o citoesqueleto so tubulina e actina, que esto geralmente presentes em organismos eucariticos (Roberson, 1992). Ambas foram localizadas atravs de MO e ME, utilizando mtodos especficos como anticorpos e falotoxinas que se ligam a protenas. No caso do ME, partculas de ouro so ligadas s amostras, e para o MO utilizaram-se fluorocromos. Parece que a maioria da actina das hifas est localizada em placas perifricas, brilhantemente fluorescentes, nos extremos hifais. Essas placas parecem corresponder aos filossomos comentados no pargrafo anterior. Microfilamentos parecem estar compostos de actina tambm, e tem sido observados em associao com microtbulos, SPBs e septos em desenvolvimento. Por outro lado a tubulina est nos microtbulos, que so numerosos em hifas em alongamento e esto orientados tipicamente paralelos ao eixo longitudinal de uma hifa. Vacolos so componentes comuns do citoplasma fngico. Nos extremos das hifas em crescimento ativo os vacolos so, na maioria, estruturas pequenas de forma variada com contedo fino a medianamente granular. H evidncias que sugerem que esses tipos de vacolos so parte do sistema lisossomal (Hoch & Howard, 1980). Partes velhas das hifas podem conter vacolos grandes, localizados centralmente, podendo

preencher todo dimetro da hifa. Nesse caso o ncleo e outras organelas so encontradas em uma fina camada de citoplasma, que fica restrita a zona imediatamente adjacente membrana plasmtica na periferia da hifa. Lomassomos so estruturas membranosas que tm sido observadas entre a membrana plasmtica e a parede hifal em diversos fungos. So comuns em amostras preparadas com protocolos de fixao tradicionais. Quando se utiliza a substituio a frio, diversos pesquisadores no os tem localizado, pressupondo-se ento que so artefatos de fixao pelo menos em hifas jovens em crescimento ativo.

Reproduo e esporos. Reproduo a formao de novos indivduos com todas as caractersticas tpicas da espcie. Reconhecem-se dois tipos gerais: assexual e sexual. A reproduo assexual algumas vezes chamada de reproduo somtica no envolve cariogamia (fuso dos ncleos) e meiose.No h envolvimento de clulas sexuais ou rgos sexuais. Por outro lado, a sexual est caracterizada pela unio dos ncleos, seguida de maiose. O significado da sexual que resulta em uma alta taxa de recombinao e na formao de novos gentipos. Isso habilita o fungo a adaptar-se prontamente a uma ampla variao de condies ambientais. Nos fungos verdadeiros podem ou no estar envolvidas clulas e gos sexuais. Informao adicional ver Elliot (1994). Na formao de rgos reprodutivos, sexuais ou assexuais, o talo inteiro pode ser convertido em um ou mais estruturas reprodutivas, assim sendo as fases reprodutivas e somticas no ocorrem juntas no mesmo indivduo, os fungos que seguem esse padro so chamados holocrpicos. Na maioria dos fungos, entretanto, os rgos reprodutivos originam-se em uma certa poro do talo, enquanto o reto continua suas atividades somticas normais, os fungos que pertencem a essa categoria so chamados de eucrpicos. As formas holocrpicas so nesse aspecto menos diferenciadas que as eucrpicas. Tipicamente, os fungos reproduzem-se sexual e assexualmente, no necessariamente ao mesmo tempo. Em geral, a reproduo assexual mais importante para a colonizao da espcie porque resulta na produo

de um grande nmero de indivduos e particularmente, desde que o ciclo assexual repetido diversas vezes durante uma estao, enquanto o ciclo sexual de muitos fungos pode produzir-se uma nica vez durante o ano. O fato de que muitas espcies possam ser encontradas em um estdio ou em outro complica a identificao dos fungos, sendo que muitas vezes impossvel predizer se o estdio presente ir produzir um outro estdio. Por exemplo, dois isolados com estdios assexuais morfologicamente idnticos podem ter estdios sexuais totalmente diferentes ou vice-versa. Uma situaao muito frequente ainda do fungo em estdio assexual, mas estdio sexual desconhecido. Aparentemente tambm muitos fungos no apresentam estdios reprodutivos assexuais. Devido a natureza pleomrfica 1 dos fungos, a terminologia usada para descrever os estdios nos ciclos de vida se tornou confusa. Hennebert & Weresub (1977) propuseram um sistema nominativo que amplamente aceito. Teleomorfo usado para descrever o estdio sexual, enquanto anamorfo usado para o est dio assexual. O termo holomorfo usado para descrever o fungo em todas suas facetas, formas e potencialidades, mesmo que ele se reproduza por um ou outro mtodo. Mais recentemente tem sido proposto substituir estes termos por fungo meiosprico (teleomorfo) e mitosprico (anamorfo) ver Reynolds & Taylor, 1993 e Korf & Hennebert (1993). Algumas vezes a reproduo assexual definida como produo no-sexual de clulas reprodutivas especializadas tais como esporos.

Pleomorfismo refere-se a ocorrncia de duas ou mais formas estruturais durante o ciclo de vida do organismo. Uma definio ampla tambm inclui qualquer mtodo de propagao de novos indivduos, tais como a simples diviso de um organismo unicelular em clulasfilhas ou de um talo multicelular em inmeros fragmentos cada um dos quais cresce em um novo indivduo. Esse conceito mais amplo de reproduo assexual ser o utilizado nesse livro. De acordo com esse conceito, os mtodos de reproduo assexual comumente encontrados em fungos podem ser sumarizados como segue: (1) fragmentao do soma, cada fragmento crescendo em um novo indivduo; (2) fisso de clulas somticas em clulas-filhas; (3) gemao de clulas somticas ou esporos, cada gema produzindo um novo indivduo e (4) produo de esporos mitticos, cada esporo germinando usualmente para formar um tubo germinativo que cresce em um miclio. O termo disporo til algumas vezes para referir-se a quaisquer desses propgulos bem como aos esporos produzidos na reproduo sexual. Alguns fungos empregam a fragmentao das hifas como um meio normal de propagao. Fragmentao pode ocorrer acidentalmente pelo desgarramento do miclio atravs de foras externas. Sob condies favorveis tais partculas de miclio originaro um novo indivduo. Muitas vezes em laboratrio emprega-se a fragmentao micelial ao transferir-se pores de culturas fngicas, crescendo em meio artificial, para meio fresco e ento comeando uma nova colnia. Por outro lado, hifas de

algumas espcies rotineiramente quebram-se em suas clulas componentes, comportando-se ento como esporos. Esses esporos so conhecidos como artrsporos ou condios tlicos. Se as clulas ficam envolvidas por uma grossa parede antes de separarem-se das hifas, eles so muitas vezes chamados de clamidsporos. Fisso, a simples separao de uma clula a outra em duas clulas-filhas por constrio e formao de parede celular, caracterstica de inmeras formas incluindo leveduras. Brotamento, por outro lado, envolve a produo de um pequeno broto (pequeno crescimento externo) a partir de uma clula parental. Quando o broto formado, o ncleo da clula parental divide-se mitoticamente e um ncleo-filho migra para o broto. O broto aumenta em tamanho enquanto ainda est aderido a clula que o originou e eventualmente cai e forma um novo indivduo. Cadeias de brotos formando um pequeno miclio so produzidas algumas vezes, e denominam-se pseudomiclio. O brotamento ocorre na maioria das leveduras, mas ocorre tambm em muitos outros fungos, naqueles que so dimrficos em certas fases de seu ciclo de vida ou sob certas condies de crescimento. O mtodo mais comum de reproduo assexual em fungos por meio de esporos. Eles variam morfologicamente muito. Podem ter paredes delgadas ou grossas e variar em cor de hialinos (=transparente) at verde, amarelo, laranja, vermelho e marrom a preto; em tamano de pequenos a grandes; e na forma podem ser globosos, ovais, oblongos, filiformes, inclusive helicoidais; o

nmero de clulas varia de uma a muitas (uni-, bi-, tri-, tetra- at multicelulares); na disposio das clulas; e na forma em que eles so produzidos. Alguns se desenvolvem diretamente de uma hifa simples enquanto outros surgem de estruturas mais elaboradas. Os esporos podem nascer de ou em esporforos especializados que variam de microscpicos at aqueles que excedem diversos ps de dimetro e s vezes pesam vrias libras. Esta infinita variedade, de esporos e as formas pelas quais eles so formados, torna o estudo dos fungos particularmente fascinante. Com relao a isso, os recentes avanos em microscopia eletrnica tem tornado possvel para ns obter belas e informativas imagens dos esporos e suas diminutas superfcies sem o uso de produtos qumicos para fixar as amostras (Read, 1991). Ainda que alguns fungos produzam s um tipo de esporo, outros produzem at quatro tipos. Os esporos fngicos produzidos assexuadamente originam-se em esporngios e so chamados esporangisporos ou so produzidos nas extremidades ou lados de hifas de diversas maneiras e so ento denominados condios. Os vrios tipos de condios - e eles so muitos, sero discutidos em conexo com as espcies que os produzem. Um esporngio uma estrutura em forma de saco, na qual todo o contedo ser convertido, atravs de clavagem, em um ou mais, usualmente muitos, esporos. Os esporangisporos de aproximadamente todos os fungos verdadeiros so imveis e so chamados aplansporos. Todavia, esporangisporos mveis chamados

plansporos ou zosporos so produzidos em um Phyllum (Chytridiomycota) dos fungos verdadeiros. Esses esporos usualmente so equipados com um nico flagelo liso. O flageloest aderido a poro posterior do esporo e dividido em duas partes. A poro proximal muito mais longa do que a poro distal ou terminal, que usualmente muito curta e flexvel. Os microtbulos formando o axonema 9 + 2 do flagelo esto aderidos a um centrolo modificado, referido como quinetossomo ou corpo basal, que por sua vez est conectado no citoplasma do plansporo por vrios filamentos e microtbulos. A reproduo sexual em fungos, como em outros organismos vivos, envolve a unio de dois ncleos compatveis. O processo de reproduo sexual consiste de trs fases distintas. A primeira delas, chamada plasmogamia, a unio de dois protoplastos levando o ncleo. A fuso dos dois ncleos postos juntos pela plasmogamia chamada cariogamia e constitui a segunda fase do processo sexual. A cariogamia ocorre quase imediatamente em algumas espcies, enquanto que em outras esses dois eventos so saparados no tempo e no espao, com a plasmogamia resultando em miclios binucleados, com um ncleo de cada parental. Este par denominado dicrio. Esses ncleos no se fusionam at mais tarde no ciclo de vida. Enquanto isso, durante o crescimento e diviso celular dos compartimentos binucleados das hifas, a condio dicaritica perpetuada de compartimento a compartimento por diviso simultnea (diviso

conjugada) dos dois ncleos de cada compartimento e pela separao dos ncleos-filhos resultantes em dois novos compartimentos. A fuso nuclear (cariogamia) que eventualmente ocorre em todos os fungos que se reproduzem sexualmente, cedo ou tarde seguida por meiose, com a reduo do nmero cromossmico ao estado haplide e constui-se na terceira fase do processo sexual. A reproduo sexual na maioria dos fungos envolve a formao de esporos especializados. Quatro tipos aos quais tm sido dados nomes especiais so: osporos, zigsporos, ascsporos e basidisporos. Aqui necessrio enfatizar que quase todos os fungos verdadeiros existem na condio haplide ou dicaritica, com a fase diplide sendo representada somente pelo zigoto. Umas poucas espcies de Chytridiomycota, discutidas no Cap. 4, exibem, todavia, uma alternncia de geraes com a fase haplide alternando com a fase diplide. Ao contrrio, em Oomycota o ncleo diplide ocorre atravs da maioria do ciclo vital. Tambm, o ciclo nuclear em fungos nem sempre to claro como pode parecer das afirmaes anteriores. Em muitos exemplos, os diferentes isolamentos de uma espcie em particular podem diferir levemente no nmero cromossmico. Isto parece ser especialmente verdadeiro para certas espcies patognicas de plantas. Adicionalmente, ncleos do mesmo ou diferentes gentipos podem coexistir lado a lado no mesmo miclio e no mesmo compartimento hifal. Todas as clulas no necessariamente tm o mesmo

nmero de ncleos ou as mesmas classes de ncleos, nem mesmo a mesma proporo de cada classe em uma mistura de ncleos. Este fenmeno da existncia de diferentes classes de ncleos em um mesmo indivduo chamado heterocariose, e os indivduos que a exibem, heterocariticos. Dependendo das espcies envolvidas, a condio heterocaritica pode ocorrer pelo menos por um perodo de tempo indefinido ou tanto at que ocorra a cariogamia. Em indivduos heterocariticos cada ncleo independente de todos os demais, mas a estrutura e comportamento do indivduo parecem ser controlado pelos tipos de genes contidos nele e a proporo de cada tipo, sem considerar se eles esto separados em diferentes ncleos ou no. A heterocariose pode ser originada nos fungos de 4 formas: a) pela germinao de um esporo heterocaritico, que originar um soma heterocaritico; b) pela introduo de ncleos geneticamente diferentes em um miclio homocaritico (um soma em que todos os ncleos so similares); c) pela mutao em uma estrutura homocaritica, multinucleada, e a sobrevivncia subsequente, multiplicao e disperso de ncleos mutantes entre os ncleos do tipo selvagem; d) pela fuso de alguns ncleos em um homocrio haplide e a sobrevivncia subsequente, multiplicao e disperso dos ncleos diplides entre os haplides. Enquanto a heterocariose geralmente um pr-requisito para reproduo sexual, nem todas fuses de hifas so de natureza sexual. Os

denominados heterocrios vegetativos so formados algumas vezes entre culturas da mesma espcie. Enquanto a incompatibilidade vegetativa pode ser governada pelos denominados genes mating-type envolvidos na reproduo sexual, muitos fungos tm conjuntos especiais de genes envolvidos no controle da fuso hifal. Como observado por Leslie (1993) em um recente artigo de reviso, os sistemas de incompatibilidade vegetativa em fungos basicamente funciona para restringir a transferncia de componentes citoplasmticos e ncleos durante a fase de crescimento. Ainda que, as hifas de culturas vegetativamente incompatveis possam, muitas vezes, ser capazes de fusionar-se, uma reao letal ou assassina ocorre imediatamente o que resulta na morte das clulas heteocariticas. Este tipo de reao antagonstica chamado fenmeno de barreira e forma a base para sinalizar incompatibilidade vegetativa e assignar culturas de certos grupos de compatibilidade vegetativa. Muitas vezes a regio de interao entre duas colnias rigorosamente definida e pode ser detectada a olho nu em agar e especialmente em madeira, onde linhas zonais (zone lines) so evidentes. De acordo com Rayner (1991) possivelmente o mais importante desafio encarado pelo miclio fngico encontrar o miclio de uma mesma espcie ou de espcies relacionadas. Informao adicional pode ser encontrada neste autor. Antes de discutirmos os mtodos empregados por fungos para realizar reproduo sexual necessrio aprender algo sobre os

rgos envolvidos. Algumas espcies produzem rgos masculinos e femininos distinguveis em cada talo. Essas espcies so hermafroditas ou monicas. Um nico talo de uma espcie hermafrodita pode reproduzir-se sexualmente por si s se ele for autocompatvel. Outras espcies consistem de talos masculinos e femininos, uns s produzindo rgos masculinos e outros femininos. Estas espcies so chamadas diicas. Um nico talo de uma espcie diica no pode reproduzir-se por si s. Os rgos sexuais dos fungos so geralmente chamados de gametngios. Eles podem formar diferentes clulas sexuais chamadas gametas ou podem simplesmente conter ncleos que so gametas funcionais. Utilizamos os termos isogametngio e isogametas respectivamente, para designar gametngios e gametas que so morfologicamente indistinguveis; e usamos heterogametngio e heterogametas para designar gametngios masculinos e femininos e seus gametas que so morfologicamente diferentes. Neste caso o gametngio masculino denoinado anterdio e o feminino chamado oognio ou ascognio dependendo do grupo fngico considerado. Deve-se dizer que um grande nmero de fungos no apresenta rgos sexuais diferenciados, e hifas e ncleos so funcionalmente os gametngios e gametas. Compatibilidade sexual. Agora necessrio dizer algo sobre a compatibilidade sexual em fungos. uma tarefa difcil discutir este tpico em um texto introdutrio. Deveramos

entender isto como um comeo que ir permitir-nos constituir s o limite mais tnue e as aproximar-nos do contedo de forma bem simples. Apesar de que a compatibilidade est certamente relacionada ao sexo porque, de certa forma, ela governa a reproduo sexual, ela no deveria ser confundida com sexo. H, por exemplo, muitissimos fungos que produzem rgos sexuais masculinos e femininos facilmente distinguveis no mesmo talo, mas nos quais, contudo, os indivduos1 so sexualmente auto-estreis porque seus rgos masculinos so incompatveis com seus rgos femininos e no ocorre ento a plasmogamia. Muitos outros fungos no produzem, de forma alguma, rgos sexuais diferenciados. Desde que no podemos distinguir seu sexo, nos referimos a seus tipo de apareamento (mating type). Devido a que pensamos em dois sexos, podemos surpreender-nos ao encontrar que muitos Basidiomycota e Myxomycota tm tipos de apareamento alelo-mltiplos em seus locus para tipo de apareamento. Para uma discusso mais detalhada ver Griffin (1994).
1. um indivduo definido como um talo que foi originado de um nico esporo

Baseados no sexo, a maioria dos fungos pode ser classificada em 3 categorias: A. Hermafroditas (monicos), nos quais cada talo leva rgos masculinos e femininos que podem ou no ser compatveis; B. Diicos, nos quais alguns talos levam s rgos masculinos e outros s femininos (muito poucos fungos diicos tem sido descobertos);

C. Sexualmente indiferenciados, nos quais so produzidas estruturas funcionalmente sexuais, sendo morfologicamente indistinguveis como masculinas e femininas (a vasta maioria dos fungos cai nesta categoria). Com base na compatibilidade, os grupos acima podem cair em um ou outro dos seguintes trs grupos: 1. Fungos homotlicos. Aqueles nos quais todos os talos so sexualmente autofrteis e podem, por isso, reproduzir-se sexualmente por si mesmo, sem ajuda de um outro talo. Obviamente nenhum fungo diico pode ser homotlico. Os fungos desta categoria no exibem tipo de apareamento e no tem fecundao cruzada. 2. Fungos heterotlicos. Aqueles nos quais todos os talos so sexualmente auto-estreis, indiferente se so ou no hermafroditas, e requerem a ajuda de um outro talo compatvel de um tipo de apareamento diferente para reproduo sexual. Estes fungos apresentam fecundao cruzada. 3. Fungos secundariamente homotlicos. Em alguns fungos heterotlicos ocorre um interessante mecanismo durante a formao dos esporos, por meio do qual, dois ncleos de tipo de apareamento oposto so regularmente incorporados em cada esporo ou pelo menos em alguns esporos. Tubos germinativos originados destes esporos so ento auto-frteis e comportam-se como se fossem homotlicos, quando naverdade so realmente heterotlicos. Esta condio tem sido denominada tambm de homotalismo secundrio ou pseudohomotalismo (Perkins, 1991).

Fungos heterotlicos pertencem a um ou outro de seguintes dois grupos gerais. Um grupo inclui espcies nas quais o apareamento controlado por um par de loci. Este tipo de heterotalismo tem sido referido como heterotalismo unifatorial ou bipolar (Cap. 7). Em outro grupo o apareamento controlado por mais que um par de loci localizados em diferentes cromossomos. Porque inicialmente somente dois pares de genes foram inicialmente detectados, este tipo de heterotalismo foi chamado heterotalismo bifatorial ou tetrapolar. Todavia, como ser discutido no Cap. 16, esses termos no so realmente apropriados desde que tem sido demonstrado que loci

mltiplos controlam o apareamento. Finalmente necessitamos mencionar que em culturas de laboratrio alguns fungos no passam por um ciclo sexual verdadeiro como foi definido aqui, mas eles obtem os benefcios da recombinao atravs do processo conhecido como parassexualidade. Neste processo ocorre a plasmogamia, cariogamia e haploidizao (no envolve meiose verdadeira), mas no em especficos pontos do talo ou ciclo de vida. O ciclo parassexual ser discutido detalhadamente no Cap. 7. Os ciclos sexual e parassexual no so mutuamente exclusivos, e alguns fungos que se reproduzem sexualmente, tambm exibem parassexualidade.