PRUEBAS BIOQUMICAS ENDOENZIMAS nombre LIA: Agar- HierroLisina

fundamento

reactivo purpura de bromocresol

color original violeta

siembra picadura sube el pH (k) descarboxiliza aa lisina baja produccin de cido = K/A fucsia/amarillo alta produccin de cido A/A sube el pH (+) picadura s/slido descarboxilacin anillo rojo superficie (+)

resultados baja el ph (R) desamina aa lisina agrietamiento en el agar (produccin de gas)

precipitado sulfato reductora (+)

TSI: agar tres azcares hierro

fermentacin de glucosa, galactosa, sacarosa. Produce H2SO4

glucosa

rojo

picadura, estra en la superficie

precipitado, sulfato reductora (+)

3 azcares ornitina MIO: movilidad indol ornitina reactivo de kovacs

rojo

baja el pH (-) desaminacin anillo amarillo superficie (-)

produccin de indl a partir de aa triptfano

MacConkey

tiene sales biliares y cristal violeta para inhibir gram(+) (selecciona gram -). rojo neutro, lactosa Selecciona bacterias que fermentan la (diferencia), sales biliares y glucosa, esta fermentacin disminuye cristal violeta (selectivo) el pH

rojo prpura

asa loop, por agotamiento en placa

bacterias rojas o rosadas (+)

fermentan la lactosa

Se detecta una respiracin anaerobia: la que utiliza nitrato como aceptor final de electrones. Los nitratos se reducen Reactivo A: cido sulfnico a nitritos y algunas bacterias reducen en scido actico, Reactivo Nitratos y Nitritos los nitritos a productos gaseosos ( N2 y B: alfa-naftilamina en cido N2O). Las enzimas responsables de actico ambas reducciones se denominan nitrato y nitrito reductasa, respectivamente.

tubos con campana de Durham. Medio lquido

se observa se hay gases en la campana

rojo (+), existen nitratos

si incoloro: se agrega granalla de zinc, ROJO (-), INCOLORO (+)

Catalasa

la funcin de la enzima catalasa es descomponer perxido de hidrgeno

perxido de hidrgeno

portaobjeto

burbujas de O2 (+), tiene catalasa

no burbujas, negativo

Pruebas IMVIC

indicadores biolgicos de contaminacin en agua y alimentos principalmente

Indol

determina si un MO es capaz de producir indol a partir de la enzima triptfanasa

Kovacs

asa loop

anillo rojo en la superficie (+), si se produce indol

anillo amarillo en la superficie (indol -)

conocer si el MO usa la va cido m ixta para degradar la glucosa. Productos: Rojo de Metilo (RM) cido actico, frmico, lctico, succnico)

Rojo de metilo

asa loop

VP

conocer si el MO usa la fermentacin butanodilica para degradar la glucosa. Deteccin de acetona

Rojo de metilo

asa loop

Lectura: 6-8 gotas de KOH

rosado (+)

caf/verde (-)

Citrato

conocer si el MO usa como nica fuente de carbono el citrato

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Verde

asa loop

azul (+)

verde (-)

EXOENZIMAS El almidn es una macromolcula que necesita una hidrlisis previa para ser usado por los MO. Se detecta la enzima amilasa que lo hidroliza en glucosa y restos de maltosa placa petri, Siembra en grilla

Almidn

agar nutritivo 1% almidn.

se agrega lugol ->

se forma un halo incoloro (+)

no se forma un halo (-), coloracin azul parda

Gelatina

Algunas protenas son muy grandes para entrar en la bacteria, por lo que deben ser degradadas a polipptidos, luego a a. La gelatina es un colgeno y agar nutritivo 1% gelatina se usa para medir esta capacidad del MO de producir enzimas de tipo proteoltico.

placa petri, Siembra en grilla

se agrga frazier (cloruro de mercurio, HCl, agua destilada) ->

se forma un halo incoloro (+)

precipitado blanco(-)